A Homozygous Dab1−// چوہوں کے گردے اور پیشاب کی نالی کی آٹوسومل ریسیسیو پیدائشی بے ضابطگیوں کی ایک ممکنہ نئی وجہ ہے۔
Feb 28, 2022
تعارف
یوٹیری اتپریورتی چوہے، جو Dab1 جین میں ایک تبدیلی کے خود بخود حصول کے ذریعے حاصل کیے گئے ہیں، مرکزی اعصابی نظام [1,2] میں ہسٹولوجیکل اسامانیتاوں کو ظاہر کرتے ہیں، جو کہ ریلر (ریلین//) چوہوں سے بہت مشابہت رکھتے ہیں، تجویز کرتے ہیں کہ ریلین اور ڈی اے بی 1 کا تعلق ایک ہی سگنلنگ پاتھ وے [1-4]۔ ریلین/ڈی اے بی 1 کے راستے میں ہونے والی خرابیوں کو مختلف نفسیاتی عوارض [5–7] سے وابستہ بتایا گیا ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ مرکزی اعصابی نظام کے علاوہ، ڈی اے بی 1 اور ریلین پروٹین کی موجودگی کی تصدیق پیریفرل نروس سسٹم اور کچھ بیرونی ٹشوز میں بھی ہوئی ہے۔ ڈی اے بی 1 کی موجودگی ماؤس پوڈوکیٹس [8] اور انسانی جنین میں پائی گئی ہے۔گردے[9] جب کہ ماؤس اور انسانی جنین کی نشوونما کے دوران ریلین اظہار کی اطلاع دی گئی ہے، نیز بالغ ماؤس [9-11] میں خون کی نالیوں کے ساتھ ساتھ کچھ اینڈوتھیلیل خلیوں میں بھی۔ کینونیکل ریلین/ڈی اے بی 1 کا راستہ مختلف بہاو پروٹین کو متحرک کر سکتا ہے، بشمول NOTCH2 ریسیپٹرز، جو سیل کی قسمت کے فیصلوں اور دورانیے میں تفریق میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔گردہترقی [12-14]۔ NOTCH2 ریسیپٹرز کی ضرورت ہوتی ہے کہ وہ قربت کی نلیاں اور پوڈوکیٹس [13] تشکیل دے، لیکن ایک بار جب نیفران کی پختگی ہو جائے تو یہ راستہ زیادہ تر خاموش ہو جاتا ہے [15]۔ شدید حالات میںگردے کی بیماریوں,NOTCH2 کا بڑھتا ہوا اظہار ممکنہ طور پر تخلیق نو میں اہم کردار ادا کر سکتا ہے، جبکہ پائیدار اظہار کا تعلق بنیادی طور پر انٹرسٹیشل فائبروسس اور گلوومیرولوسکلروسیس [15] سے ہوتا ہے۔ NOTCH سگنلنگ کو ڈاؤن ریگولیشن آٹوفجی کو بہت حد تک کم کر سکتا ہے اور ترقی کے دوران پوڈوسیٹ تفریق کی خرابی کا سبب بن سکتا ہے [16]۔
نتیجتاً، غیر فعال پوڈوسائٹس گلوومیرولر بیماری میں ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں، خاص طور پر انسانی idiopathic nephrotic syndrome [17,18] اور minimal change nephrotic syndrome (MCNS) [19] میں۔ لہذا، آٹوفیجی عام جسمانی حالات میں سیلولر ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھتی ہے، جبکہ پیتھولوجیکل حالات میں، یہ آٹوفیجک موت میں ترقی کر سکتی ہے [20]۔ ایک وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والا آٹوفگی بائیو مارکر LC3B ہے، جو آٹوفاگوسومل جھلیوں کا ساختی پروٹین ہے [21]۔ آٹوفیجی اور اپوپٹوسس کے درمیان پیچیدہ کراسسٹالک بھی سیل کے مائیکرو ماحولیات کے ردعمل کے طور پر ہومیوسٹٹک توازن کو برقرار رکھنے میں معاون ہے۔ یہ مشہور ہے کہ اپوپٹوٹک واقعات کے دوران تعداد میں اضافہ ہوتا ہے۔گردہترقی [22] اور پختگی ختم ہونے کے بعد بہت کم ہو جاتی ہے، سوائے ان حالات کےگردوں کی چوٹ[23]۔ بلاشبہ، اپوپٹوس ایک پیچیدہ طریقہ کار ہے جو کئی راستوں کے باہمی تعامل کے ذریعے منظم ہوتا ہے لیکن زیادہ تر کیسپیس 3 (CASP3) کے ایکٹیویشن کے ساتھ مکمل ہو جاتا ہے، جس کا ایکٹیویشن اپوپٹوسس کا پتہ لگانے کے لیے اکثر استعمال ہونے والے مارکر میں سے ایک ہے [23]۔
اس رپورٹ میں، ہمارا مقصد یہ تجزیہ کرنا تھا کہ کس طرح Dab1 جین فنکشنل خاموشی کے اثرات کو متاثر کرتا ہے۔گردہمورفولوجی اور ریلین، NOTCH2، LC3B، اور بعد از پیدائش کے چوہوں میں کلیویڈ CASP3 پروٹین کا اظہار اور لوکلائزیشنگردے. ہم فرض کرتے ہیں کہ ان پروٹینوں کا اظہار بعد از پیدائش ماؤس میں ہوتا ہے۔گردہ،اور ان کا فنکشنل انٹرپلے ان کی ساخت اور فنکشن کو برقرار رکھنے میں معاون ہے۔ اس کے علاوہ، جیسا کہ جنین انسان کے دوران DAB1 کی موجودگی کی تصدیق کی گئی ہے۔گردہترقی [9]، یہ خیال کیا جا سکتا ہے کہ اس کا غیر فعال ہونا پیدائشی بے ضابطگیوں کے وسیع میدان عمل میں خرابی کا باعث بن سکتا ہے۔گردہاور پیشاب کی نالی (CAKUT)۔
مطلوبہ الفاظ:yotari گردے کی تقریب؛ بعد از پیدائش گردے کی نشوونما؛ امیونوفل فلوروسینس سٹیننگ؛ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی
CISTANCHE کڈنی/رینل فنکشن کو بہتر کرے گا۔
مواد اور طریقے
نمونے کا مجموعہDab1 null روایتی اتپریورتیوں کے طور پر، ہم نے yotari (Dab1/ ) چوہوں کا استعمال کیا جس کی وضاحت ہول ایٹ ال نے کی ہے۔ [24]۔ چوہوں کی جین ٹائپنگ کے لیے استعمال ہونے والے پی سی آر پرائمر یوٹاری تھے: جی سی سی سی ٹی ٹی سی اے جی سی اے ٹی سی اے سی سی اے ٹی جی سی ٹی اور سی اے جی ٹی جی اے جی ٹی سی اے ٹی ٹی جی ٹی جی ٹی جی اے جی ٹی ٹی سی سی، جنگلی قسم کی Dab1 لوکس: GCCCTTCAGCATCACCATGCT اور CCTTGTTTCTTTTGCTTTAA-5۔ C57BL/6 N چوہوں کو پالی کاربونیٹ کے معیاری پنجروں میں گروپ بنایا گیا تھا (جس میں ہر ایک جین ٹائپ میں سے کم از کم ایک بھی شامل تھا) درجہ حرارت پر قابو پانے والے (23 ± 2 ◦C) کمرے میں 12 گھنٹے کی روشنی کے ساتھ کھانے اور پانی تک رسائی کے ساتھ تاریک سائیکل. پیدائش کے بعد کے دنوں 4، 11 اور 14 (P4، P11، اور P14) پر، چوہوں کو پینٹو باربیٹل کے ساتھ گہرائی سے بے ہوشی کی گئی اور فاسفیٹ بفر نمکین (PBS، pH 7.2) اور 4 فیصد پیرافارملڈ (پی ایف اے ایف اے) کے ساتھ 10 منٹ کے لیے ٹرانسکارڈیلی طور پر پرفیوز کیا گیا۔ ) 0.1 M PBS میں۔گردےروایتی ہسٹولوجیکل تجزیہ (hematoxylin–eosin (H&E)، امیونو ہسٹو کیمیکل اور امیونوفل فلوروسینس سٹیننگ) کے لیے راتوں رات 0.1 M PBS میں 4 فیصد PFA کے ساتھ ہٹا کر فکس کر دیا گیا اور 2 فیصد PFA پلس 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائڈ (GA) میں الیکٹران خوردبین کے امتحان کے لیے فکسیشن کے بعد، ٹشو کو مزید ہسٹولوجیکل امتحان کے لیے تیار کیا گیا، جیسا کہ ہم نے پہلے بیان کیا ہے [25,26]۔
امیونوفل فلوروسینس اور امیونوپیرو آکسیڈیس سٹیننگڈیپرافیفائنائزیشن اور ری ہائیڈریشن کے بعد، حصوں کو پانی کے اسٹیمر میں 0.01 M سائٹریٹ بفر (pH 6.0) میں 20 منٹ کے لیے گرم کیا گیا اور، بعد میں، کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کر دیا گیا۔ غیر مخصوص داغ کو خارج کرنے کے لیے بلاکنگ بفر (ab 64226، Abcam، Cambridge, UK) کو 30 منٹ کے لیے لاگو کیا گیا تھا۔ اس کے بعد حصوں کو پرائمری اینٹی باڈیز (ٹیبل 1) کے ساتھ راتوں رات نمی والے چیمبر میں انکیوبیٹ کیا گیا۔ پی بی ایس میں دھونے کے بعد، سیکنڈری اینٹی باڈیز (ٹیبل 1) کو ایک گھنٹے کے لیے لگایا گیا اور دوبارہ پی بی ایس میں دھویا گیا۔ پھر، نیوکلی کو 2 منٹ کے لیے 4060 -diamidino-2-phenylindole (DAPI) سے داغ دیا گیا، PBS میں دھویا گیا، اور ڈھک گیا۔ ہم نے preadsorption ٹیسٹ کیا تاکہ ہر بنیادی اینٹی باڈی کو متعلقہ پیپٹائڈ کے ساتھ استعمال کیا جائے اور ان کے امتزاج کو حصوں پر لاگو کیا جائے۔ نتائج نے کوئی اینٹی باڈی داغ نہیں دکھایا۔ اس کے علاوہ، ثانوی اینٹی باڈیز کی غیر مخصوص پابندی کی سطح کا تعین کرنے کے لیے پرائمری اینٹی باڈی کو چھوڑنے کے ساتھ کنٹرول کیے گئے۔
امیونوپیرو آکسیڈیز سٹیننگ کے لیے، خرگوش پولی کلونل اینٹی CASP3 (1:100 dilutions, ab13847, Abcam, Cambridge, UK) کو 0.1 کے ساتھ سیکشن کے علاج کے بعد ایک گھنٹہ کے لیے نمی والے چیمبر میں ایک بنیادی اینٹی باڈی کے طور پر لگایا گیا تھا۔ فیصد H2O2۔ پی بی ایس میں دھونے کے بعد، ثانوی کھوج لنک اور اسٹریپٹاویڈن پیرو آکسیڈیس کا استعمال کرتے ہوئے انجام دی گئی، ہر ایک کو پندرہ منٹ کے لیے (ڈاکو سائٹومیشن، CA 93013 USA، LOT 03477) اور diaminobenzidine (Dako, CA 93013 USA, LOT) کو احتیاط سے 96513 سے زیادہ پس منظر کو کنٹرول کرنے سے گریز کیا گیا۔ نیوکلی کو ہیماتوکسیلین سے داغ دیا گیا تھا، 10 منٹ تک نلکے کے پانی میں دھویا گیا تھا، ایتھنول سلوشنز کی چڑھتی ہوئی سیریز میں مختصر طور پر پانی کی کمی ہوئی تھی، اور ڈھک گئے تھے۔
ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (TEM) کے لیے ٹشو کی تیاری0.1 M PBS میں 2 فیصد PFA اور 2.5 فیصد GA کے مرکب کے ساتھ 2 گھنٹے کے لیے فکسیشن کے بعد، نمونوں کو PBS سے دھویا گیا اور 2 گھنٹے کے لیے 2 فیصد اوسمیم ٹیٹرو آکسائیڈ کے آبی محلول میں پوسٹ فکس کیا گیا۔ تمام نمونے پی بی ایس میں دو بار دھوئے گئے، ایتھنول کے چڑھتے ہوئے درجات میں پانی کی کمی اور ایپون 812 (TAAB لیبارٹریز کے آلات، ریڈنگ، یوکے) میں سرایت کر گئے۔ سیریل سیکشنز (موٹائی میں 70 این ایم) کو الٹرا کٹ یو سی ٹی الٹرا مائیکروٹوم (لائیکا مائیکرو سسٹم، ویٹزلر، جرمنی) پر کاٹا گیا تھا اور 1 فیصد یورینیل ایسیٹیٹ اور لیڈ سائٹریٹ سے داغ دیا گیا تھا۔
ڈیٹا کا حصول اور تجزیہیہ تجزیہ DP71 ڈیجیٹل کیمرہ (Olympus) سے لیس ایپیفل فلوروسینس مائکروسکوپ (Olympus BX51، Tokyo, Japan) کے ساتھ کیا گیا، JEM 1400 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (JEOL، Tokyo, Japan) جو 80 kV پر چلتا ہے اور JEOL- چارج کے ساتھ تصویر کشی کی گئی۔ کپلڈ ڈیوائس (CCD) کیمرہ سسٹم (ایڈوانسڈ مائیکروسکوپی ٹیکنیکس، ڈینورس، ایم اے، یو ایس اے) اور آخر میں، ایک روشن فیفیلڈ مائکروسکوپ (BX40، اولمپس، ٹوکیو، جاپان)۔ تمام تجزیہ کردہ تصاویر پر امیج جے سافٹ ویئر اور ایڈوب فوٹوشاپ (ایڈوب، سان ہوزے، CA، USA) کے ساتھ کارروائی کی گئی۔ فی جانچ شدہ گروپ، ہم نے تین سے چار جانور استعمال کیے ہیں۔ سب اکٹھا کیا گیا۔گردے5 µm موٹی حصوں، اور زیادہ سے زیادہ میں کاٹا گیا تھا۔گردہ length determined by using these samples was reported. Mean proximal convoluted tubules (PCT), distal convoluted tubules (DCT) and glomeruli diameters were determined by averaging 100 structure diameters per analyzed sample. As nephron segments have irregular shapes, we took the largest diameter of every examined segment as representative. The staining intensity was semiquantitatively evaluated at four degrees: the absence of any reactivity (( ), mild reactivity (+), moderate reactivity (++), and strong reactivity (+++) (Table 2). The number of DAB1, reelin, NOTCH2, LC3B, and cleaved CASP3 immunoreactive cells was counted and expressed as a percentage of total cells. For each sample, we analyzed twenty PCT, DCT, and G at ×40 objective magnifification. We averaged the number of positive cells per group. Any level of nuclear, cytoplasmic, or membrane staining was regarded as positive. Three investigators analyzed the images independently. Interrater agreement was tested with interclass correlation analysis, which yielded a coeffificient >0.75، بہترین معاہدے کی نشاندہی کرتا ہے [27]۔
شماریاتی تجزیہایک دو دم والا ٹی ٹیسٹ پی سی ٹی، ڈی سی ٹی اور جی کے درمیان اوسط قطر میں فرق کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا جو جنگلی قسم کے اور یوتاری جانوروں کے درمیان تھا۔ قطر کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر پیش کیا گیا تھا۔ اہمیت کی سطح p < 0="" پر="" سیٹ="" کی="" گئی="" تھی۔{6}}5۔="" ٹوکی="" کے="" متعدد="" موازنہ="" ٹیسٹ="" کے="" بعد="" ایک="" دو="" طرفہ="" anova="" ٹیسٹ="" pct،="" dct،="" اور="" glomeruli="" کے="" درمیان="" مثبت="" خلیات="" کے="" فیصد="" میں="" فرق="" کو="" ہمہ="" وقتی="" پوائنٹس="" پر="" جانچنے="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا۔="" مثبت="" خلیوں="" کی="" فیصد="" کو="" وسط="" (sem)="" کی="" اوسط="" ±="" معیاری="" غلطی="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" گیا="" تھا۔="" اہمیت="" کی="" سطح="" p=""><0.05 پر="" رکھی="" گئی="" تھی۔="" تجزیہ="" گراف="" پیڈ="" سافٹ="" ویئر="" (گراف="" پیڈ="" سافٹ="" ویئر،="" لا="" جولا،="" ca،="" usa)="" میں="" کیا="" گیا="">
نتائج
Hematoxylin-Eosin سٹیننگ (H&E) اور گردے کے قطر کی پیمائشکے مڈ سیگیٹل حصوں کا ایچ اینڈ ای داغگردےتمام جانچ شدہ ٹائم پوائنٹس پر چھوٹے کو نمایاں کرتا ہے۔گردہجنگلی قسم کے مقابلے یوٹاری چوہوں کی فینوٹائپ (شکل 1a)۔ 4P پر مطلبگردہیوتاری جانوروں کا قطر 75 µm کے مقابلے میں 55 µm کے قریب تھا۔ اس کے علاوہ، یہ فرق بعد کے وقت کے پوائنٹس پر نمایاں تھا جس کی وجہ سے کی سست نمو تھی۔گردےکی ترقی پسند ترقی کے مقابلے yotari میںگردےجنگلی قسم کے جانوروں میں۔ اس بات کا تعین کرنے کے لئے کہ آیا مجموعی طور پر کمی واقع ہوئی ہے۔گردہسائز نیفران طبقہ کے سائز میں کمی کی وجہ سے ہوا، ہم نے فی گروپ PCT، DCT اور G کے قطر کا اوسط لیا۔ درحقیقت، جنگلی قسم (شکل 1b، p < 0.05)="" کے="" مقابلے="" yotari="" گروپ="" میں="" اوسط="" قطر="" g،="" pct="" اور="" dct="" میں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" ہے۔="" مزید="" برآں،="" h&e="" سٹیننگ="" سے="" پتلی="" پرانتستا="">گردوںیوتاری جانوروں میں شرونی کی توسیع اور 14P پر قدرے پھیلا ہوا DCT۔ glomerular میچوریشن کی بنیادی ساخت اور پیٹرن دونوں جانچے گئے جانوروں کے گروپوں میں ایک جیسے ہیں۔
TEM مائیکرو فوٹوگرافس پر مبنی وضاحتی ہسٹولوجیکل تجزیہمائیکرو فوٹوگرافس پر TEM کے ذریعہ حاصل کردہ، جنگلی قسم کے چوہوں کے گلومیرولی نے فلٹریشن رکاوٹ کے تمام حصوں کی مخصوص شکل ظاہر کی، جو عام طور پر تیار اور قابل شناخت تھے (شکل 2a)۔ پوڈوکیٹس، پوڈوسائٹ فٹ کے عمل اور پیڈیکلز، فلٹریشن سلِٹس، گلوومیریلر بیسمنٹ میمبرینز، اور فینیسٹریٹڈ اینڈوتھیلیم کے ساتھ کیپلیری لیمن آسانی سے پہچانے جا سکتے تھے (شکل 2a)۔ دوسری طرف، yotari چوہوں کے glomeruli میں، پاؤں کے عمل کو ختم کرنے کے ساتھ ترقی پسند پوڈوسیٹ نقصان اور فلٹریشن سلٹس کی کمی دیکھی جا سکتی ہے (شکل 2b–d)۔ یہ انتہائی ساختی تبدیلیاں سب میں دیکھی گئیں۔گردےجانچ پڑتال کی گئی اور زیادہ تر جانچ شدہ گلوومیرولی کو شامل کیا۔ جنگلی قسم کے جانوروں (شکل 2e –h) کے مقابلے یوٹری چوہوں کے PCT یا DCT میں کوئی غیر معمولی چیزیں نہیں دیکھی گئیں۔ پی سی ٹی میں، سیل انٹرفیس کی وضاحت خراب طریقے سے کی گئی تھی کیونکہ سیل جھلیوں کی بے قاعدگی اور ان کے پڑوسیوں کے ساتھ سیل انٹرڈیجٹیشن۔ سائٹوپلازم وافر تھا، جس میں اچھی طرح سے ممتاز نیوکلی، لمبا مائٹوکونڈریا، بیسل انفولڈنگز، اور مائیکرویلی کے درمیان بہت سے نلی نما گڑھے تھے، جو apical جھلی پر برش کی سرحد بناتے تھے۔ اعلی میگنیفیکیشن نے PCT اپکلا خلیوں کی apical سطح کا انکشاف کیا جس میں برش کی سرحد اور ہمسایہ نلی نما اپکلا خلیوں (شکل 2e، f) کے لومینل سیل کی سرحدوں کے درمیان سخت جنکشن بنانے کے لئے لمبی مائکروویلی پر مشتمل ہے۔ دوسری طرف، DCT اپکلا خلیوں کی apical سطح میں کچھ مختصر مائکروویلی اور متعدد ویسیکلز (شکل 2g، h) موجود ہیں۔
شکل 2. ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپ (TEM) جنگلی قسم اور یوٹاری کی مائیکرو فوٹوگرافسگردے.جنگلی قسم کے جانوروں کے گلومیرولی (a) نے کیپلیری (C) کے fenestrated endothelium (E) کے ساتھ، تہہ خانے کی جھلی (BM)، پیڈیکلز (PE) کے ساتھ پوڈوکیٹس (P)، اور فلٹریشن سلٹ (FS) کے ساتھ عام طور پر تیار شدہ فلٹریشن رکاوٹ دکھائی۔ )۔ میںگردےیوتاری جانوروں میں، پیڈیکلز کا پھٹ جانا اور فلٹریشن سلٹس کی کمی کو دیکھا جا سکتا ہے (نمہ، b–d)۔ جنگلی قسم کے جانوروں (e–h) کے مقابلے یوتاری چوہوں کے قربت والی کنولیوٹڈ نلیاں (PCT) یا ڈسٹل کنولیوٹڈ نلیاں (DCT) میں کوئی اسامانیتا نہیں دیکھی گئی۔ پی سی ٹی میں، سائٹوپلازم وافر تھا، جس میں اچھی طرح سے ممتاز نیوکلی (N)، لمبا مائٹوکونڈریا (M)، بیسل انفولڈنگز (BI)، اور مائیکرویلی کے درمیان بہت سے نلی نما گڑھے (TP) تھے، جس میں برش بارڈر (BB) بنتا تھا۔ apical membrane (e,f) اعلی میگنیفیکیشن نے PCT اپکلا خلیوں کی apical سطح کا انکشاف کیا جس میں برش بارڈر اور ہمسایہ نلی نما اپکلا خلیوں (e،f) کے لومینل سیل بارڈرز کے درمیان برش بارڈر اور ٹائٹ جنکشن (TJ) کی تشکیل ہوتی ہے۔ دوسری طرف، DCT اپکلا خلیوں کی apical سطح جس میں چند مختصر مائکروویلی اور متعدد vesicles (g،h) ہوتے ہیں۔ امیجز (a–d) اور insets (e–h) میں اسکیل بار 1 µm ہے۔ امیجز میں اسکیل بار (e–h) 2 µm ہے۔
ریلن اور ڈی اے بی 1 کی لوکلائزیشن اور لوکلائزیشنتمام مشاہدہ شدہ وقت کے پوائنٹس (p < 0۔{5}}5،="" شکل="" 3a)="" پر="" تمام="" جانچ="" شدہ="" جانوروں="" کے="" گلوومیرولی="" اور="" ڈی="" سی="" ٹی="" میں="" ہلکے="" سے="" اعتدال="" پسند="" رد="" عمل="" (ٹیبل="" 2)="" کے="" ساتھ="" ریلن="" کا="" کمزور="" اظہار="" کیا="" گیا="" تھا۔="" صرف="" یوتاری="" چوہوں="" کے="" پی="" سی="" ٹی="" میں="" مثبت="" خلیوں="" کا="" فیصد="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" سے="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا="" (p=""><0.05، شکل="" 3a)۔="" گلوومیرولر="" خلیوں="" میں،="" داغ="" کی="" لوکلائزیشن="" perinuclear="" تھی،="" جبکہ="" pct="" اور="" dct="" میں،="" یہ="" پورے="" سائٹوپلازم="" میں="" بکھری="" ہوئی="" تھی="" (شکل="" اے،="">
igure 4. بعد از پیدائش yotari کے امیونو فلوروسینس سٹیننگگردےریلن مارکر (a) اور بعد از پیدائش جنگلی قسم کے ڈبل امیونو فلوروسینس داغ کے ساتھگردےDAB1 اور ریلین مارکر (b) کے ساتھ۔ (a، b) نیوکلیئر DNA DAPI سٹیننگ DAB1 کے ساتھ ضم ہو گیا ہے، اور ریلین امیونو فلوروسینس کو متوازی (ضم) میں دکھایا گیا ہے۔ مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس P4، P11، P14 تھے۔ glomeruli (G)، قربت کے کنولوٹیڈ ٹیوبلس (PCT) اور ڈسٹل کنولوٹیڈ ٹیوبلس (DCT) میں جانچ شدہ مارکروں کا اظہار تیروں سے نشان زد ہے، جبکہ ستارے ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (a) میں ریلین کے اظہار کی نشاندہی کر رہے ہیں۔ انسرٹس تصویر میں سب سے نمایاں اظہار دکھاتے ہیں۔ ڈی اے پی آئی جوہری داغوں سے ڈی اے بی 1 اور ریلین کی ناقص اجتماعیت کا انکشاف ہوا، زیادہ تر ڈی سی ٹی (تیر کے نشان) میں۔ اسکیل بار 20 µm ہے اور تمام تصاویر سے مراد ہے۔
P4 پر جنگلی قسم کے جانوروں کے گلوومیرولی اور PCT میں DAB1 کا تقریباً کوئی مدافعتی رد عمل نہیں تھا، جبکہ ہلکے رد عمل والے مثبت خلیات کی فیصد (ٹیبل 2) P11 اور P14 (p < 0.05)="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" بڑھی="" ہے۔="" شکل="" 3b)۔="" ڈی="" سی="" ٹی="" میں="" ،="" ڈی="" اے="" بی="" 1="" کا="" اظہار="" زیادہ="" تر="" سیل="" جھلیوں="" کے="" apical="" اور="" پس="" منظر="" والے="" حصوں="" میں="" کیا="" گیا="" تھا="" (شکل="" 4b)="" مضبوط="" رد="" عمل="" (ٹیبل="" 2)="" کے="" ساتھ۔="" مثبت="" خلیوں="" کا="" فیصد="" پچھلے="" ڈھانچے="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا،="" تقریباً="" 60="" فیصد="" (شکل="" 3b)،="" خاص="" طور="" پر="" میکولا="" ڈینسا="" (شکل="" 4b)="" میں۔="" p14="" (تیر="" کا="" نشان،="" شکل="" 4b)="" میں="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" ڈی="" سی="" ٹی="" کے="" علاوہ="" ڈی="" اے="" بی="" 1="" اور="" ریلین="" کا="" تقریبا="" کوئی="" اجتماعی="" عمل="" نہیں="" تھا۔="" بائیو="" مالیکیولز="" 2021،="" 11،="" 609="" 8="" از="" 14="" شکل="" 4.="" بعد="" از="" پیدائش="" یوٹاری="" کا="" امیونوفل="" فلوروسینس="">گردےریلین مارکر (a) اور بعد از پیدائش جنگلی قسم کے ڈبل امیونوفل فلوروسینس داغ کے ساتھگردےDAB1 اور ریلین مارکر (b) کے ساتھ۔ (a، b) نیوکلیئر DNA DAPI سٹیننگ DAB1 کے ساتھ ضم ہو گیا ہے، اور ریلین امیونوفل فلوروسینس کو متوازی (ضم) میں دکھایا گیا ہے۔ مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس P4، P11، P14 تھے۔ glomeruli (G)، قربت کے کنولوٹیڈ ٹیوبلز (PCT) اور ڈسٹل کنولوٹڈ ٹیوبلز (DCT) میں جانچ شدہ مارکروں کا اظہار تیروں سے نشان زد ہے، جبکہ ستارے ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (a) میں ریلین کے اظہار کی نشاندہی کر رہے ہیں۔ انسرٹس تصویر میں سب سے نمایاں اظہار دکھاتے ہیں۔ ڈی اے پی آئی جوہری داغوں سے ڈی اے بی 1 اور ریلین کی ناقص اجتماعیت کا انکشاف ہوا، زیادہ تر ڈی سی ٹی (تیر کے نشان) میں۔ اسکیل بار 20 µm ہے اور تمام تصاویر سے مراد ہے۔ P4 پر جنگلی قسم کے جانوروں کے گلوومیرولی اور پی سی ٹی میں ڈی اے بی 1 کی تقریباً کوئی مدافعتی رد عمل نہیں تھی، جبکہ ہلکے رد عمل والے مثبت خلیوں کی فیصد (ٹیبل 2) میں P11 اور P14 (p <0.05، شکل="" 3b)="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="" ہے۔="" ڈی="" سی="" ٹی="" میں="" ،="" ڈی="" اے="" بی="" 1="" کا="" اظہار="" زیادہ="" تر="" سیل="" جھلیوں="" کے="" apical="" اور="" پس="" منظر="" والے="" حصوں="" میں="" کیا="" گیا="" تھا="" (شکل="" 4b)="" مضبوط="" رد="" عمل="" (ٹیبل="" 2)="" کے="" ساتھ۔="" مثبت="" خلیوں="" کی="" فیصد="" گزشتہ="" ڈھانچے="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھی،="" تقریباً="" 60="" فیصد="" (شکل="" 3b)،="" خاص="" طور="" پر="" میکولا="" ڈینسا="" (شکل="" 4b)="" میں۔="" p14="" پر="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" ڈی="" سی="" ٹی="" کے="" علاوہ="" ڈی="" اے="" بی="" 1="" اور="" ریلین="" کا="" کوئی="" اجتماعی="" عمل="" نہیں="" تھا="" (تیر="" کا="" نشان،="" شکل="">
NOTCH2 اور LC3B کے مقامی اور وقتی اظہار کے پیٹرنزNOTCH{{0}}مثبت خلیات کا فیصد تمام مشاہدہ شدہ وقت کے پوائنٹس پر دونوں جانوروں کے جین ٹائپ کے گلومیرولی میں 20 فیصد سے کم تھا۔ صرف P14 فیصد پر مثبت خلیوں کا تناسب جنگلی قسم کے جانوروں (p <0.05، شکل="" 3c)="" کے="" مقابلے="" یوٹاری="" جانوروں="" کے="" گلومیرولی="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا۔="" داغ="" کی="" شدت="" ہلکی="" سے="" اعتدال="" پسند="" تھی="" (ٹیبل="" 2)="" ،="" زیادہ="" تر="" پیرینوکلیئر="" طور="" پر="" واقع="" ہے="" (شکل="" 5a="" –="" f)۔="" pct="" اور="" dct="" دونوں="" جانوروں="" کے="" جینی="" ٹائپ="" میں="" مثبت="" خلیات="" کا="" فیصد="" وقت="" کے="" ساتھ="" ساتھ="" بڑھتا="" گیا۔="" p14="" پر،="" مثبت="" خلیوں="" کا="" فیصد="" pct="" اور="" yotari="" جانوروں="" کے="" dct="" میں="" pct="" اور="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" dct="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا="" (p=""><0.05، شکل="" 3c)۔="" تمام="" مشاہدہ="" شدہ="" ٹائم="" پوائنٹس="" پر="" سگنل="" کی="" شدت="" ہلکی="" سے="" اعتدال="" پسند="" تھی="" (ٹیبل="" 2)="" اور="" پورے="" سائٹوپلازم="" میں="" بکھری="" ہوئی="" تھی="" (شکل="" 5a="" –="" f)۔="" تصویر="" 5.="" بعد="" از="" پیدائش="" جنگلی="" قسم="" اور="" یوتاری="" کا="" امیونو="" فلوروسینس="">گردےNOTCH2 اور LC3B مارکر کے ساتھ اور کلیویڈ کیسپیس3 (CASP3) مارکر کے ساتھ immunoperoxidase سٹیننگ۔ (a–f) نیوکلیئر DNA DAPI سٹیننگ کو NOTCH2 اور LC3B کے ساتھ ملا دیا گیا ہے۔ مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس P4، P11، P14 تھے۔ glomeruli (G)، proximal convoluted tubules (PCT) اور distal convoluted tubules (DCT) میں NOTCH2 اور LC3B مارکر کا اظہار تیروں سے نشان زد ہے۔ خاص طور پر مضبوط LC3B رد عمل کو بوسیدہ گلوومیرولی کے بوومین کیپسول میں دیکھا جا سکتا ہے۔ انسرٹس تصویر میں سب سے نمایاں اظہار دکھاتے ہیں۔ CASP3 کا تمام مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس میں ناقص اظہار کیا گیا۔ واحد اہم اظہار P14 (تیر) پر یوٹیری چوہوں کے گلوومیرولی میں تھا۔ اسکیل بار 20 µm ہے اور تمام تصاویر سے مراد ہے۔ بایو مالیکیولز 2021، 11، 609 9 از 14 3.4۔ NOTCH2 اور LC3B کے مقامی اور وقتی اظہار کے نمونے NOTCH2-مثبت خلیات کا فیصد تمام مشاہدہ شدہ وقت کے مقامات پر دونوں جانوروں کے جین ٹائپ کے گلومیرولی میں 20 فیصد سے کم تھا۔ صرف P14 فیصد پر مثبت خلیوں کا تناسب جنگلی قسم کے جانوروں (p <0.05، شکل="" 3c)="" کے="" مقابلے="" یوتاری="" جانوروں="" کے="" گلوومیرولی="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا۔="" داغ="" کی="" شدت="" ہلکی="" سے="" اعتدال="" پسند="" تھی="" (ٹیبل="" 2)="" ،="" زیادہ="" تر="" پیرینوکلیئر="" طور="" پر="" واقع="" ہے="" (شکل="" 5a="" –="" f)۔="" pct="" اور="" dct="" دونوں="" جانوروں="" کے="" جینی="" ٹائپ="" میں="" مثبت="" خلیات="" کا="" فیصد="" وقت="" کے="" ساتھ="" ساتھ="" بڑھتا="" گیا۔="" p14="" پر،="" مثبت="" خلیوں="" کا="" فیصد="" pct="" اور="" dct="" میں="" yotari="" جانوروں="" کے="" pct="" اور="" dct="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا="" (p=""><0.05، شکل="" 3c)۔="" تمام="" مشاہدہ="" شدہ="" ٹائم="" پوائنٹس="" پر="" سگنل="" کی="" شدت="" ہلکی="" سے="" اعتدال="" پسند="" تھی="" (ٹیبل="" 2)="" اور="" پورے="" سائٹوپلازم="" میں="" بکھری="" ہوئی="" تھی="" (شکل="" 5a="" –="">
تصویر 5. بعد از پیدائش جنگلی قسم اور یوٹیری کا امیونوفل فلوروسینس سٹیننگگردےNOTCH2 اور LC3B مارکر کے ساتھ اور کلیویڈ کیسپیس3 (CASP3) مارکر کے ساتھ immunoperoxidase سٹیننگ۔ (a–f) نیوکلیئر DNA DAPI سٹیننگ کو NOTCH2 اور LC3B کے ساتھ ملا دیا گیا ہے۔ مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس P4، P11، P14 تھے۔ glomeruli (G)، proximal convoluted tubules (PCT) اور distal convoluted tubules (DCT) میں NOTCH2 اور LC3B مارکر کا اظہار تیروں سے نشان زد ہے۔ خاص طور پر مضبوط LC3B رد عمل کو بوسیدہ گلوومیرولی کے بوومین کیپسول میں دیکھا جا سکتا ہے۔ انسرٹس تصویر میں سب سے نمایاں اظہار دکھاتے ہیں۔ CASP3 کا تمام مشاہدہ شدہ ٹائم پوائنٹس میں ناقص اظہار کیا گیا۔ واحد اہم اظہار P14 (تیر) پر یوٹیری چوہوں کے گلومیرولی میں تھا۔ اسکیل بار 20 µm ہے اور تمام تصاویر سے مراد ہے۔
دونوں جانوروں کے جینی ٹائپ کے گلومیرولی اور ڈی سی ٹی میں، وقت کے ساتھ ساتھ LC3B-مثبت خلیوں کا فیصد بڑھتا گیا (p < 0۔{8}}5،="" شکل="" 3d)۔="" p11="" اور="" p14="" میں،="" مثبت="" خلیات="" کا="" فیصد="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" گلوومیرولی="" (p="">< 0.05،="" شکل="" 3d)="" کے="" مقابلے="" yotari="" جانوروں="" کے="" گلومیرولی="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" تھا۔="" یوٹاری="" جانوروں="" کے="" گلوومیرولی="" میں="" داغ="" کی="" شدت="" زیادہ="" تر="" اعتدال="" سے="" مضبوط="" تھی="" (ٹیبل="" 2)="" جو="" پیرینوکلیئر="" اور="" نیوکلیئر="" اسپیس="" (شکل="" 5a–f)="" میں="" واقع="" تھی،="" تمام="" مشاہدہ="" شدہ="" وقت="" کے="" مقامات="" پر،="" جبکہ="" جنگلی="" قسم="" کے="" چوہوں="" کے="" گلومیرولی="" میں،="" شدت="" تھی="" زیادہ="" تر="" اعتدال="" پسند="" (ٹیبل="" 2)۔="" یوتاری="" اور="" جنگلی="" قسم="" کے="" جانوروں="" کے="" پی="" سی="" ٹی="" میں="" تمام="" مشاہدہ="" شدہ="" ٹائم="" پوائنٹس="" (پی=""><0.05، شکل="" 3d)="" پر="" تقریباً="" 20="" فیصد="" مثبت="" خلیات="" ہوتے="">
Cleaved CASP-3 اظہارمیں فعال CASP-3 کا تقریباً کوئی اظہار نہیں تھا۔گردےتمام مشاہدہ شدہ وقت کے مقامات پر جنگلی قسم کے جانوروں کا۔ yotari چوہوں کے PCT اور DCT میں، کئی انفرادی خلیے CASP-3-مثبت تھے (شکل 3e)۔ P14 (شکل 5e) میں صرف یوٹیری گردے کے گلوومیرولی میں، مثبت خلیوں کی فیصد میں نمایاں اضافہ ہواگردےجنگلی قسم کے چوہوں کی (p < 0.05، شکل 3e)۔
بحث
گردہمورفوگنیسیس اور ڈیولپمنٹ پیچیدہ عمل ہیں جو بڑی تعداد میں جینوں کے باہمی تعامل کے ذریعے بالکل مربوط ہیں۔ کی پیدائشی بے ضابطگیوںگردہاور پیشاب کی نالی (CAKUT) سب سے عام پیدائشی نقص ہے جو اس طرح کے تمام نقائص کا 23 فیصد بنتا ہے اور اختتامی مرحلے کی سب سے بڑی وجہ کی نمائندگی کرتا ہے۔گردوں کی بیماریبچوں میں [28,29]۔ واحد جین کی خرابی CAKUT کا بنیادی ذریعہ ہو سکتی ہے، اور اب تک، CAKUT [30] کی وجہ کے طور پر 20 سے زیادہ جینوں میں تبدیلی کی نشاندہی کی گئی ہے۔ جیسا کہ ہمارے پچھلے کام نے عام جنین انسان کے دوران DAB1 کا زبردست اظہار دکھایاگردہترقی [9]، ہم نے فرض کیا کہ ڈی اے بی 1 ممالیہ کے دوران ایک اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔گردہترقی اپنے مفروضے کو ثابت کرنے کے لیے، ہم نے تحقیق کی۔گردہڈیب 1 ناک آؤٹ چوہوں میں ریلین، NOTCH2، LC3B، اور ایکٹیویٹڈ CASP3 پروٹین کے مورفولوجی اور اظہار کے نمونے۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے درد کو بہتر کرے گا۔
یوتاری چوہوں کے ذریعے سیکشن کرناگردےایک پتلا پرانتستا اور نمایاں طور پر چھوٹا مطلب ظاہر کیا۔گردہاور جنگلی قسم کے جانوروں کے مقابلے PCT، DCT اور G قطر۔ میں کمیگردہناکافی نیفران انڈومنٹ کی وجہ سے سائز کے طور پر جانا جاتا ہےگردوںہائپوپلاسیا، سب سے زیادہ عام CAKUT عوارض میں سے ایک، جو بالغوں میں شروع ہونے والے ہائی بلڈ پریشر اور گردے کی دائمی بیماری کی پیش گوئی کرتا ہے [31]۔ اس کے علاوہ، ٹی ای ایم کے ساتھ پکڑے گئے مائیکرو فوٹوگرافس سے یہ بات سامنے آئی کہ یوٹیری چوہوں نے پاؤں کے عمل کو ختم کرنے اور فلٹریشن سلٹس کی کمی کے ساتھ نمایاں پوڈو سائیٹ نقصان کو ظاہر کیا۔ چوٹ لگنے کے بعد، پوڈوسائٹس کو افزائش کے عمل سے گزرنا پڑتا ہے جس میں وہ اپنی ساخت کھو دیتے ہیں، جس کی وجہ سے ان کے فلٹریشن بیریئر فنکشن میں کمی واقع ہوتی ہے [32]۔ نیفروٹک سنڈروم کی تمام شکلوں کے ساتھ ساتھ فوکل سیگمنٹل گلوومیرولوسکلروسیس (FSGS) کی خصوصیات پوڈوسیٹ کی ساخت یا فنکشن میں نقائص سے ہوتی ہیں [33]۔
ہمارے موجودہ مطالعے نے ڈی سی ٹی کے سیل جھلیوں کے apical اور پس منظر کے حصوں میں DAB1 کا سب سے زیادہ اظہار دکھایا، جبکہ REELIN زیادہ تر PCT کے پورے سائٹوپلازم میں بکھرا ہوا تھا۔ تفتیشی ٹائم پوائنٹس پر، یوٹاری چوہوں کی ٹیوبلی میں کوئی مورفولوجیکل تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں، لیکن ٹیوبلوانٹرسٹیشل کمپارٹمنٹس میں ڈی اے بی 1 کے کردار کو واضح کرنے کے لیے مزید تفتیش ضروری ہے۔ DAB1 اور REELIN پروٹینوں کا کبھی کبھار اجتماعی ہونا تھا، زیادہ تر DCT میں۔ یہ نتائج جنین انسان کے دوران ان دو پروٹینوں کے اظہار کے بارے میں ہمارے پچھلے کام کی پیروی کر رہے ہیں۔گردہترقی [9]۔ یہ تجویز کرسکتا ہے کہ ڈی اے بی 1 اور ریلین انسان اور ماؤس میں ایک جیسے کردار رکھتے ہیں۔گردےنیچے کی طرف جانے والے کچھ راستوں کو چالو کر کے، جیسے Crk، MAPK اور PI3K/Akt/mTOR سگنلنگ جھرنوں [34–36]۔ ہمارے اعداد و شمار نے یوٹیری چوہوں کے گلومیرولی میں ریلن کے اظہار میں اضافہ کا بھی انکشاف کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ پچھلے مطالعے سے معلوم ہوا ہے کہ گلوومیرولی میں ڈی اے بی 1 فاسفوریلیشن اور ریلن کے اظہار میں اضافہ Ang II سے متاثرہ چوہوں میں ہائی بلڈ پریشر، پروٹینوریا، اور پوڈوسیٹ کی چوٹ کے ساتھ ہوتا ہے [10]۔
اس کے علاوہ، امیونو فلوروسینس سٹیننگ نے P14 yotari چوہوں کے glomeruli میں NOTCH2 ریسیپٹرز کے بڑھتے ہوئے اظہار کا انکشاف کیا۔ یہ بات مشہور ہے کہ نیفران کی پختگی حاصل کرنے کے بعد NOTCH2 اظہار کو کم کر دیا جاتا ہے، سوائے ان حالات کےگردوں کی چوٹیں،جیسے ذیابیطس نیفروپیتھی اور ایف ایس جی ایس [15,37]۔ Adriamycin-حوصلہ افزائی نیفروٹک سنڈروم والے چوہوں نے بھی فعال NOTCH2 کے بڑھتے ہوئے اظہار کو دکھایا، جو fifibrosis کو بہتر بناتا ہے [38]۔ تفتیشی وقت کے نکات پر، ہم نے فائبروسس میں اضافہ نہیں دیکھا، لیکن یہ بعد از پیدائش یوٹاری میں ظاہر کردہ NOTCH2 کے صحیح کردار کو واضح کرنا باقی ہے۔گردےبعد کے مراحل میں fifibrotic تبدیلیاں واقع ہوتی ہیں یا نہیں اس بارے میں مزید مشاہدہ ضروری ہوگا۔ تاہم، پہلے سے ہی کچھ ایسے نتائج موجود ہیں جو تجویز کرتے ہیں کہ بڑھتی ہوئی NOTCH2 ایکٹیویشن کا قلیل مدتی اثر زخمی پوڈوسیٹس کے لیے بقا کے مضبوط فائدے سے وابستہ ہے، جو طویل مدتی ماڈلز میں کھو جاتا ہے، جیسے ذیابیطس نیفروپیتھی [39]۔
P11 اور P14 yotari چوہوں کے گلومیرولی میں اعلی LC3B اظہار نے شاید پوڈوکیٹس میں آٹوفاگوسومز کے جمع ہونے کی عکاسی کی۔ واضح طور پر ظاہر کرنے کے لئے کہ آٹوفجی کو تیز کیا گیا تھا۔ LC3-II اور LC3-I پروٹین ایکسپریشنز کے تناسب کا تجزیہ کرنا ضروری ہے۔ عام حالات میں، نارمل کے لیے آٹوفیجی ضروری ہے۔گردے کی تقریب[40]، خاص طور پر پوڈوسائٹس میں۔ سیل کی تقسیم اور تبدیلی کے لیے اس کی محدود صلاحیت کی وجہ سے، وہ آٹوفجی کی اعلیٰ سطح کی نمائش کرتے ہیں [41]۔ ان نتائج کے باوجود، ایل سی 3 بی اظہار میں بلندی کئی گلوومیریولر بیماریوں [42–44] میں رپورٹ کی گئی ہے، بنیادی طور پر پیروں کے عمل کی افزائش اور نیفروٹک سنڈروم کی نشوونما کے ساتھ، جیسا کہ پروینن ریسیپٹر کنڈیشنل ناک آؤٹ چوہوں [45,46] میں دیکھا گیا ہے۔ یہ تمام مطالعات پیتھولوجیکل حالات میں بہتر آٹوفیجی کے حفاظتی کردار کی تجویز کرتے ہیں، جس کی مزید تائید ایڈریامائسن-حوصلہ افزائی نیفروپیتھی کے نتائج سے ہوتی ہے، جہاں پوڈوسیٹ چوٹ [43] سے بچانے کے لیے آٹوفیجی کو چالو کیا جاتا ہے، نیز عمر پر منحصر گلوومیرولر بیماری میں جہاں یہ تاخیر کرتا ہے۔ کی ترقی پسند فنکشنل کمیگردے کی تقریب[40]۔ انسان کا تجزیہگردہبایپسیوں نے کئی گلوومیریولر بیماریوں میں پاؤں کے عمل کی افزائش کے ساتھ منسلک آٹوفجی میں اضافے کے ثبوت بھی دکھائے، بشمول کم سے کم تبدیلی نیفروٹک سنڈروم (MCNS)، جو idiopathic nephrotic syndrome [19] کی سب سے عام وجوہات میں سے ایک ہے۔ ذیابیطس nephropathy اور lipopolysaccharide-حوصلہ افزائی شدید کے حالات میںگردے کی چوٹ،PI3K/AKT/mTOR پاتھ وے کی روک تھام کے ذریعے کچھ علاج کے ساتھ آٹوفیجی کو بڑھانا گردے کے کام کو بہتر بناتا ہے [47,48]۔ یہ تمام نتائج اس بات پر دلالت کرتے ہیں کہ تناؤ کے موافقت کے لیے آٹوفجی کا ایک ناگزیر سائٹو پروٹیکٹو کردار ہے۔گردے کی چوٹ، اور اس کی ماڈیولیشن ایک امید افزا علاج کی حکمت عملی ہو سکتی ہے، حالانکہ، بعض حالات میں، آٹوفجی بھی نقصان دہ ہو سکتی ہے اور خلیوں کی موت میں ترقی کر سکتی ہے۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کی خرابی کو بہتر کرے گا۔
آٹوفیجی میں بلندی کے علاوہ، P14 یوٹیری چوہوں کے گلومیرولی میں بھی اپوپٹوس کی بڑھتی ہوئی سطح دیکھی جا سکتی ہے۔ آٹوفیجی عام طور پر اپوپٹوس کو روکتی ہے، لیکن مخصوص پیتھولوجیکل حالات میں، یہ اپوپٹوسس کو بڑھا کر اور فروغ دے کر سیل کی بقا پر بھی الٹا اثر ڈال سکتا ہے [42]۔ پیدائش کے بعد، apoptosisگردےکی شرائط کے علاوہ، بہت کم ہےگردے کی چوٹ،جیسے idiopathic nephrotic syndrome جہاں بیماری کی نشوونما میں حصہ ڈالتا ہے [23]۔ کی آٹوسومل ریسیسیو پیدائشی بے ضابطگیوں کی ممکنہ نئی وجہگردہاور پیشاب کی نالی. تاہم، DAB1 کے دوران اہم کردارگردہترقی غیر واضح رہتی ہے. اس کے علاوہ، ان چوہوں نے پیروں کے عمل کی غیر معمولیات اور گلومیرولی میں ریلین، NOTCH2، LC3B اور کلیئڈ CASP3 پروٹین کی بڑھتی ہوئی سطح کو ظاہر کیا جو گلومیریولر چوٹوں کا باعث بن سکتا ہے، جیسے نیفروٹک سنڈروم، جو ہائپوپلاسیا کے ساتھ تعلق میں، موت کی ممکنہ وجہ ہو سکتا ہے۔ دودھ چھڑانے کی مدت کے دوران ان جانوروں میں سے۔ اس مفروضے کی تصدیق کرنے کے لیے، بلڈ پریشر اور کلینک-لیبارٹری کے دیگر پیرامیٹرز، جیسے سیرم کریٹینائن، البومن، اور پروٹین کی سطحوں سے متعلق اضافی معلومات فراہم کرنا ضروری ہے۔
