ایک IL-12-کی بنیاد پر نانوسائٹوکائن اعلیٰ درجے کی کولڈ ٹیومر کو ختم کرنے کے لیے سوزش کے اسپیٹیٹیمپورل کنٹرول کے ذریعے کینسر سے بچاؤ کی قوت مدافعت کو محفوظ بناتی ہے۔

امیونولوجیکل طور پر کولڈ ٹیومر کا علاج امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز (ICIs) کے لیے ایک بڑا چیلنج ہے۔ Interleukin 12 (IL-12) مضبوط اینٹیٹیمر قوت مدافعت قائم کرکے کولڈ ٹیومر کے خلاف ICIs کو متحرک کر سکتا ہے۔ تاہم، اس کے زہریلے پن اور مدافعتی سگنلوں کا مقابلہ کرنے کی نظامی شمولیت نے ترجمہ میں رکاوٹ ڈالی ہے۔ یہاں، IL-12 سرگرمی کو نینو سائٹوکائن پیدا کرکے مدافعتی ردعمل میں مداخلت کے محرک کے بغیر افادیت کو بحفاظت بڑھانے کے لیے spatiotemporally کنٹرول کیا جاتا ہے جو جسمانی pH پر غیر فعال رہتا ہے لیکن تیزابی ٹیومر pH پر اپنی پوری سرگرمی کو جاری کرتا ہے۔ IL-12-کی بنیاد پر نینو سائٹوکائن (Nano-IL-12) IL-12 کو ٹیومر کے ٹشوز میں جمع اور جاری کرتا ہے، مقامی اینٹیٹیمورل سوزش کو نکالتا ہے، جبکہ نظامی مدافعتی ردعمل کو روکتا ہے، مدافعتی ردعمل کو روکتا ہے، اور بار بار نس کے استعمال کے بعد بھی منفی زہریلا۔ نینو-IL-12-سوزش کا ثالثی spatiotemporal کنٹرول اعلی کینسر مخالف افادیت کا اشارہ کرتا ہے اور ICIs کے ساتھ ہم آہنگی کرتا ہے تاکہ ٹیومر مائکرو ماحولیات کو گہرائی سے سوجن اور ICI مزاحم بنیادی اور میٹاسٹیٹک ٹیومر کو مکمل طور پر ختم کر سکے۔ یہ حکمت عملی محفوظ اور زیادہ موثر مدافعتی علاج کی طرف ایک امید افزا نقطہ نظر ہو سکتی ہے۔

cistanche tubulosa-antitumor کے فوائد

1. تعارف

امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز (ICIs)، جیسے کہ اینٹی PD-1 (nivolumab) اور اینٹی CTLA- 4 (ipilimumab) اینٹی باڈیز نے کینسر کے علاج میں انقلاب برپا کیا ہے۔[1,2] تاہم، ایک بڑی تعداد مریض اب بھی ان علاج سے فائدہ نہیں اٹھاتے۔ اس طرح کی کمی کا ردعمل کولڈ ٹیومر فینوٹائپ کے ساتھ منسلک کیا گیا ہے جو ICIs کے لیے غیر حساس ہے۔ ] اس طرح، ایجنٹوں کی فوری ضرورت ہے کہ وہ ٹیومر کو سرد فینوٹائپ سے ایک سوجن (گرم) فینوٹائپ میں منتقل کریں جس میں ICIs کی افادیت کو بڑھانے اور علاج کی زمین کی تزئین کی توسیع کی طرف زیادہ T-cell infiltration ہو۔ Interleukin-12 (IL-12)، جو کہ سب سے مضبوط proinflammatory cytokines میں سے ہے، میں اینٹیٹیمر قوت مدافعت کو بڑھانے اور ICI مزاحمت پر قابو پانے کی اعلیٰ صلاحیت ہے۔[8–10] تاہم، IL-12 کی حوصلہ افزائی شدید مدافعتی سے متعلق منفی واقعات (irAEs) جب نظامی طور پر انجکشن لگائے جاتے ہیں۔ سیسٹیمیٹک ایکسپوزر کو کم کرکے اور ٹیومر سلیکٹیوٹی کو بڑھا کر IL-12 کی حفاظت کو بہتر بنانے کے لیے سخت تحقیقات کر رہے ہیں۔ دوسری طرف، IL-12 اب بھی سوزش کی spatiotemporal حرکیات سے متعلق اہم خرابیاں پیش کرتا ہے جو اس کی افادیت کو کمزور کرنے والے مدافعتی رد عمل کا باعث بنتے ہیں۔ مریضوں میں اینٹی سوزش انٹرلییوکن-10 (IL-10) کا نظامی پھیلاؤ، جس نے اینٹی ٹیومر کی افادیت کو محدود کر دیا ہے۔ }} ثالثی سوزش اثر کرنے والے افعال کو زیادہ سے زیادہ بڑھا سکتی ہے اور مضبوط اینٹیٹیمر قوت مدافعت کو متحرک کر سکتی ہے، جبکہ مدافعتی ردعمل میں مداخلت سے گریز کرتی ہے۔ بدقسمتی سے، مذکورہ پروٹین انجینئرڈ سسٹمز کے لیے اشتعال انگیز حرکیات کو پوری طرح سے سمجھا نہیں گیا ہے، اور ثانوی ردعمل کا مقابلہ کرنے کے ساتھ ان کی وابستگی کو واضح کرنا باقی ہے۔ اس کے ساتھ، ہم نے مقامی IL-12 کو بائیو کمپیٹیبل پولیمر کے ساتھ سمیٹ کر اس کی سرگرمی پر spatiotemporal کنٹرول حاصل کر کے محرک کے لیے جواب دینے والی نانوسکلڈ سائٹوکائنز (نینو سائٹوکائنز) تیار کیں۔ IL-12-کی بنیاد پر نینو سائٹوکائنز (Nano-IL-12) کو مکمل طور پر فعال IL-12 کو تیزابی انٹراٹومورل pH کو محسوس کرنے کے بعد نکالنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا، کیونکہ تیزابیت کینسر کی علامت ہے[23] اور امیونوسوپریشن کے ساتھ منسلک ہے۔ Nano-IL-12 کی فارماکوکینیٹکس، حفاظت، اور افادیت کا جائزہ کولڈ میلانوما اور چھاتی کے کینسر کے مورائن ماڈلز میں کیا گیا۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ نینو آئی ایل-12 ٹیومر کے ؤتکوں میں IL-12 کی نمائش کی شدت اور دورانیے کو بڑھا کر ٹیومر کے ؤتکوں میں ایک مسلسل سوزشی رد عمل پیدا کرتا ہے جبکہ صحت مند بافتوں میں مدافعتی خلیوں کے ساتھ تعامل سے گریز کرتا ہے ہدف مدافعتی ردعمل. اس طرح، نینو-IL-12 نے مؤثر طریقے سے ثانوی رد عمل کا مقابلہ کرنے والے ثانوی رد عمل کو نظامی اور اندرونی طور پر روک دیا، ان خوراکوں میں افادیت ظاہر کرتا ہے جو مقامی IL سے 10-گنا کم ہیں-12۔ Nano-IL-12 کی بڑھی ہوئی اینٹی ٹیومر قوت مدافعت کو محفوظ طریقے سے ICIs کے ساتھ ہم آہنگ کیا گیا تاکہ ٹیومر مائیکرو ماحولیات (TME) کو شدید طور پر سوجن کیا جا سکے، جس کے نتیجے میں میلانوما کے ICI-مزاحم ماڈلز میں مکمل ردعمل (CR) اور ٹرپل- کے بنیادی اور پھیپھڑوں کے میٹاسٹیسیس کا باعث بنے۔ منفی چھاتی کا کینسر (TNBC)۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

2. نتائج

2.1 Nano-IL-12 مکمل طور پر فعال سائٹوکائن کو جاری کرنے کے لیے انٹراٹومورل پی ایچ کو محسوس کرتا ہے۔

Nano-IL-12 کی تعمیر کے لیے، ہم نے رپورٹ شدہ طریقہ[27] (سکیم S1، امدادی معلومات). پولیمر میں pLL بلاک میں امینو گروپس کا نصف حصہ CDM کے ساتھ امائیڈ لنکیج (اعداد و شمار S1–S3، معاون معلومات) کے ذریعے جڑا ہوا ہے۔ Nano-IL{{10}} نامیاتی سالوینٹس کے اضافے کے بغیر صرف پولیمر کو سائٹوکائن کے ساتھ پانی کے حالات میں ملا کر بنتے ہیں (شکل 1a)۔ پولیمر میں امینو گروپ پروٹین میں کاربو آکسیلیٹ موئیٹیز کے ساتھ آئن کمپلیکس بناتے ہیں، جبکہ سی ڈی ایم گروپ IL-12 کے ساتھ ساتھ پولیمر اسٹرینڈز میں پی ایچ حساس امائڈ بانڈز بنانے کے لیے امینو گروپس کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتے ہیں۔ نانوسائٹوکائنز میں IL-12 کی انکیپسولیشن کی کارکردگی تقریباً 80% ہونے کا تعین کیا گیا تھا، جیسا کہ HPLC نے Alexa Fluor 647 (A647) کی چوٹیوں کے علاقوں کا موازنہ کرکے ماپا ہے - لیبل والے مفت IL-12 اور IL-12 نانوائٹوکائن (شکل 1b) میں بھری ہوئی ہے۔ غیر فلوروسینس لیبل والے IL-12 کی صورت میں، ELISA پیمائش کے ذریعے encapsulation کی کارکردگی کی توثیق کی گئی تھی، کیونکہ ELISA طریقہ صرف رد عمل والے مرکب میں غیر منسلک فری IL-12 کا پتہ لگا سکتا ہے کیونکہ نینو کی پولیمر کوٹنگ -IL-12 ڈٹیکشن اینٹی باڈی کے ساتھ بھری ہوئی IL-12 کی شناخت کو روکتا ہے۔ اس طرح، غیر منقطع IL-12 بمقابلہ کُل IL-12 فیڈ کے تناسب کا حساب لگا کر، انکیپسولیشن کی کارکردگی کو بھی تقریباً 80% (فگر S4a، معاون معلومات) کا تعین کیا گیا، جس کے نتائج کے مطابق HPLC پیمائش۔ NanoIL-12 کو مفت IL-12 اور نسبتاً چھوٹے پولیمر-IL-12 کنجوگیٹس (فگر S4b، معاون معلومات) کو ہٹانے کے لیے سینٹرفیوگل فلٹریشن کے ذریعے پاک کیا گیا تھا۔ تزکیہ کی تصدیق HPLC (شکل 1b، لوئر پینل) سے ہوئی۔ نینو-IL-12 پر پولیمرک شیلڈ کی تشکیل کی تصدیق ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (TEM) اور ڈائنامک لائٹ سکیٹرنگ (DLS) سے ہوئی۔ TEM میں، IL-12-نانو آئی ایل کا بھرا ہوا کور-12 پولیمر کے pLL بلاک سے تشکیل پاتا ہے اور IL-12 کو uranyl acetate[28] سے داغ دیا گیا تھا اور یکساں سیاہ نقطوں کے طور پر دیکھا گیا تھا۔ اوسط قطر 23.2 ± 4 nm (شکل 1c,d)۔ DLS کے ذریعے، Nano-IL-12 کا ہائیڈروڈینامک قطر 42 ± 2 nm (شکل 1e) ناپا گیا۔ TEM اور DLS کے ذریعہ ماپنے والے سائز کا موازنہ کرکے، ہم حساب لگا سکتے ہیں کہ ان ذرات میں PEG شیل کی موٹائی تقریباً 10 nm ہے۔ یہ نتیجہ ایک گھنے PEGylation کی طرف اشارہ کرتا ہے، جو فارماکوکائنیٹکس کو بہتر بنانے کے لیے مفید ہوگا۔[29] مزید برآں، A647-لیبل والے Nano-IL-12 کے فلوروسینس کوریلیشن سپیکٹروسکوپی (FCS) اسٹڈیز نے مفت A647-لیبل والے IL-12 سے زیادہ مالیکیولر وزن والے ایسوسی ایٹس کی تشکیل کی تصدیق کی۔ (ٹیبل S1، معاون معلومات) A647-لیبل والے IL-12 اور A647-لیبل والے نینو-IL-12 نمونوں کی FCS پیمائش میں فی مالیکیول کی تعداد کا موازنہ کرکے، ہم نے تعین کیا کہ ہر نینو-IL{ {67}} میں اوسطاً تقریباً 1.5 IL-12 مالیکیول ہوتے ہیں۔ اس کے علاوہ، Nano-IL-12 کا سطحی چارج غیر جانبدار (ٹیبل S2، معاون معلومات) کے قریب پایا گیا، یہ تجویز کرتا ہے کہ پولیمر منفی چارج شدہ IL-12 کو بچا رہا ہے۔ CDM moieties اور پرائمری امائنز کے درمیان بننے والے Nano-IL-12 میں امائیڈ بانڈز کو پی ایچ حساس بتایا جاتا ہے۔[30] اس طرح، نینو-IL-12 سے توقع کی جاتی ہے کہ وہ تیزابیت والی حالتوں میں الگ ہو جائیں تاکہ انکیپسلیٹڈ سائٹوکائن کو جاری کیا جا سکے۔ ہم نے سب سے پہلے نینو-IL-12 کی pH-حساسیت کی مختلف pH اقدار پر FCS پیمائش کے ذریعے pH 4.5 سے 8.5 تک کی اسکریننگ کی تاکہ نینو-IL-12 کی تبدیلی سے انحراف کی کیفیت کو ظاہر کیا جا سکے۔ بازی گتانک ذرّات کے مالیکیولر وزن میں کمی کے مساوی ڈفیوژن گتانک میں اضافہ، پی ایچ 7.0 سے کم تیزابیت والی حالتوں میں دیکھا جا سکتا ہے، جو تجویز کرتا ہے کہ نینو-آئی ایل-12 جسمانی پی ایچ پر مستحکم ہیں، لیکن ان کا نقصان ہو سکتا ہے۔ تیزابیت والے ماحول کے ساتھ انٹراٹومورل گھاووں میں سالمیت[23,31] (شکل 1f)۔ اگلا، ہم نے FCS پیمائش کے ذریعے فزیولوجیکل pH 7.4 اور intratumoral pH 6.5 پر Nano-IL-12 کے انحطاط حرکیات کی چھان بین کی۔ FCS پیمائش Nano-IL-12 اور جاری کردہ IL-12 کے پھیلاؤ کے گتانکوں کے درست تشخیص کی اجازت دیتی ہے۔ نئے نتیجہ نے نینو-IL{107}} تیزی سے پی ایچ 6.5 پر سالمیت کو کھو دیا، اور 4 گھنٹے انکیوبیشن کے بعد نمونے کا پھیلاؤ گتانک مفت IL{110}} کی قدر تک پہنچ گیا، جو نینو-IL کی مکمل ایکٹیویشن کی تجویز کرتا ہے۔ ایسی شرائط کے تحت -12۔ مزید برآں، pH 7.4 پر، Nano-IL-12 مستحکم تھے (شکل 1g)، کئی دنوں کے بعد بھی اپنے پھیلاؤ کے گتانک کو برقرار رکھتے ہوئے (فگر S4c، معاون معلومات)۔ یہ مشاہدات انٹراٹومورل pH حالات میں Nano-IL-12 کے منتخب ایکٹیویشن اور جسمانی حالات میں استحکام کی حمایت کرتے ہیں۔ چونکہ IL-12 splenocytes سے IFN-𝛾 کے اخراج کو متحرک کر سکتا ہے،[32] نینو-IL-12 کی بایو ایکٹیویٹی پر پولیمر شیلڈنگ/ڈی-شیلڈنگ کے اثر کو وٹرو میں اسپلینوسائٹ پرکھ کے ذریعے جانچا گیا ( شکل 1h)۔ Nano-IL-12 نے IFN- 𝛾 کی نچلی سطح کو مورائن اسپلینوسائٹس سے پیدا کیا، جو پولیمر انکیپسولیشن کے ذریعے IL-12 بائیو ایکٹیویٹی کی رکاوٹ کو ظاہر کرتا ہے۔ دوسری طرف، تیزاب میں پری انکیوبیشن (pH 6.5) کے ذریعے چالو ہونے والی Nano-IL-12 نے مقامی IL-12 کی طرح کی بایو ایکٹیویٹی ظاہر کی، جو فعال نینو-IL کی تجویز کرتی ہے-12 سائٹوکائن کی حیاتیاتی سرگرمی کو مکمل طور پر بازیافت کر سکتے ہیں۔

شکل 1. Nano-IL-12 intratumoral pH پر مکمل طور پر فعال سائٹوکائن کو جاری کرنے کے لیے متحرک ہوتا ہے۔ a) IL-12-کی بنیاد پر nanocytokine (Nano-IL- 12) کی تشکیل اور ساخت۔ نینو-IL-12 کو صرف IL-12 کے ساتھ پولیمر ملا کر پانی کی حالتوں میں خود کو جمع کیا جاتا ہے۔ اسمبلی پی ایچ حساس امائڈ بانڈز اور الیکٹرو اسٹاٹک تعاملات سے چلتی ہے۔ b) مفت IL-12 پروٹین، PEG-pLL(CDM) + IL-12 مرکب، اور پیوریفائیڈ Nano-IL-12 کے HPLC نتائج۔ IL-12 پروٹین پر A647 کا لیبل لگا ہوا ہے۔ c) پیوریفائیڈ Nano-IL-12 کی نمائندہ TEM تصویر ذرات کی بنیادی ساخت کو واضح طور پر دکھاتی ہے۔ d) TEM امیجز سے ماپے گئے پارٹیکل کور قطر کی تقسیم۔ n=100 ذرات شمار کیے گئے۔ e) نینو-IL-12 کے ہائیڈروڈینامک قطر کی تقسیم جس کی پیمائش DLS کے ذریعے کی جاتی ہے۔ f) pH پر منحصر Nano-IL-12 disassociation جس کی FCS پیمائش نینو-IL-12 کے ذریعہ ظاہر کی گئی ہے جو 24 گھنٹے کے لئے مختلف pH کے تحت انکیوبیٹڈ ہے۔ 5.3 × 107 cm2 s−1 پر نقطے والی لکیر مفت IL-12 کے پھیلاؤ کے گتانک کا حوالہ دیتی ہے۔ جی) نینو-IL-12 کا IL-12 ریلیز پروفائل FCS طریقہ سے ماپا جاتا ہے۔ 1.2 × 107 cm2 s−1 اور 5.3 × 107 cm2 s−1 پر نقطے والی لکیریں بالترتیب برقرار Nano-IL-12 اور جاری کردہ مفت IL-12 کے پھیلاؤ کے گتانک کا حوالہ دیتی ہیں۔ h) IFN-𝛾 نینو-IL-12، فعال Nano-IL-12، اور مقامی IL-12 کے ساتھ علاج شدہ مورین اسپلینوسائٹس کے ذریعہ سراو۔ IFN-𝛾 کی پیمائش ELISA کے ذریعے کی گئی۔ ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ f اور g کے لیے، n=3 متوازی پیمائش۔ h، n=5 متوازی پیمائش کے لیے۔

Nano-IL-12 کو بطور دوا ترجمہ کرنے کے لیے فارمولیشن کا تحفظ اور استحکام بھی اہم ہے۔ لہٰذا، ہم نے نینو-IL-12 کا لائوفائیلائزڈ ورژن تیار کیا جو ٹریہلوز کو کرائیو پروٹیکٹنٹ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ہے۔[33] دوبارہ تشکیل شدہ Nano-IL-12 نے کارگو کے رساو کے بغیر، تازہ نینو-IL-12 کے ساتھ موازنہ سائز اور سطحی چارج دکھایا، اور مشترکہ پی ایچ حساسیت اور وٹرو IFN-𝛾 حوصلہ افزائی کی صلاحیت (شکل S4d–g اور ٹیبل S2، معاون معلومات)۔ یہ نتائج ایک قابل عمل Nano-IL-12 ہم منصب کے طور پر لائو فلائزڈ فارمولیشن کی حمایت کرتے ہیں۔

شکل 2. نینو-آئی ایل-12 فارماکوکائنیٹکس اور اینٹی ٹیومر افادیت کو بہتر بناتا ہے۔ a) 10 ug A647-لیبل والے IL-12 یا Nano-IL-12 (سرخ رنگ) کے iv انجیکشن کے بعد چوہوں کی کان کی جلد کی IVCLSM تصاویر۔ اسکیل بار=50 μm۔ انجیکشن (Vmax) کے فوراً بعد ٹیشو ایریا (سفید بکس) میں فلوروسینس کی شدت کو 5 گھنٹہ پر مقدار میں درست کیا گیا اور اسے نارمل کر دیا گیا۔ b) 10 ug IL-12 کے iv انجیکشن کے بعد مفت IL-12 اور Nano-IL-12 کے خون کی گردش پروفائلز یا ELISA کے ذریعہ متعین کردہ مساوی Nano-IL-12۔ نیز، خون میں Nano-IL-12 سے جاری کردہ IL-12 کا ارتکاز بنایا گیا ہے (ڈیٹا کو اوسط ± SD، n=5 چوہوں فی گروپ کے طور پر دکھایا گیا ہے)۔ c) B16F10 میلانوما ٹیومر کی IVIS تصویر 10 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 کے 24 گھنٹے بعد iv انجیکشن کو A647 کے ساتھ لیبل کیا گیا ہے۔ d) 4T1 TNBC ٹیومر میں IL-12 کی سطح کی مقدار 24- پر اور 48 گھنٹے بعد iv انجیکشن 10 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 بذریعہ ELISA ( ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر دکھایا گیا ہے؛ n=3 چوہوں فی گروپ؛ p قدروں کا حساب یک طرفہ ANOVA کے ذریعے کیا جاتا ہے)۔ e) 10 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL{ کے ایک واحد iv انجیکشن کی اینٹی ٹیومر سرگرمی (انجیکشن کے دن تیر (B16F10 ماڈل کے لئے 8 دن اور 4T1 ماڈل کے لئے 7 دن)) سے ظاہر ہوتے ہیں۔ {51}}۔ B16F10 میلانوما کے نتائج اوپری پینل میں دکھائے گئے ہیں اور 4T1 TNBC کے نتائج نچلے پینل میں دکھائے گئے ہیں۔ ٹیومر کی ترقی کے انفرادی منحنی خطوط بائیں پینلز میں دکھائے گئے ہیں۔ درمیانی پینلز میں ٹیومر کے حجم کے اوسط منحنی خطوط دکھائے جاتے ہیں، اور بقا کے منحنی خطوط دائیں پینل میں دکھائے جاتے ہیں (ڈیٹا کو اوسط ± SEM؛ n=5 چوہوں فی گروپ کے طور پر دکھایا جاتا ہے، p قدروں کا حساب لاگ رینک تجزیہ کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ )۔

2.2 نینو-IL-12 IL-12 فارماکوکائنیٹکس کو بہتر بناتا ہے اور ٹیومر میں اینٹیٹیمر اثرات کو ممکنہ طور پر فعال کرتا ہے

Nano-IL-12 میں encapsulation IL-12 کے فارماکوکینیٹکس کو بہتر بنا سکتا ہے۔ انٹراوینس (iv) انجیکشن پر Nano-IL-12 کی گردش کو دیکھنے کے لیے، Vivo confocal لیزر اسکیننگ مائیکروسکوپی (IVCLSM) میں A647-IL-12-کی بنیاد پر Nano-IL کو ٹریک کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ -12 دم کی رگ سے انجیکشن کے بعد ماؤس ایئرلوبس کے برتنوں میں۔ مفت IL-12 نے انجیکشن کے بعد اسراف کو دکھایا (شکل 2a)، جس کی نشاندہی ٹشو انٹرسٹیٹیم میں فلوروسینس کی بڑھتی ہوئی شدت سے ہوتی ہے۔ اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ IL-12 (75 kDa) سے موازنہ کرنے والے میکرو مالیکیولز، جیسے 70 kDa dextran اور albumin (65 kDa)، جلد تک محدود رسائی ظاہر کرتے ہیں، [34] IL-12 کا رساو وریدوں سے خون کی گردش کے دوران IL-12 کے عدم استحکام کا پتہ چلتا ہے۔ درحقیقت، پچھلے مطالعات نے سیرم میں موجود انزائمز کے ذریعے IL-12 کے پروٹولیسس کی نشاندہی کی ہے۔ }} کا لیبل لگا IL-12 ماؤس پلازما میں سائز کے اخراج کرومیٹوگرافی (SEC) کے ذریعے جانچا گیا۔ ماؤس پلازما کے ساتھ انکیوبیشن پر، ہم نے پایا کہ IL-12 چھوٹے مالیکیولر وزن والے ٹکڑوں میں بدل گیا ہے (شکل S5، معاون معلومات)، خون میں IL-12 کے عدم استحکام کی تصدیق کرتا ہے۔ دوسری طرف، Nano-IL-12 نے جلد میں کم سے کم رساو دکھایا، جو خون کی گردش میں ان کے استحکام کو ظاہر کرتا ہے۔ ELISA پرکھ سے ماپا گیا مقداری سرکولیشن پروفائل اس بات کی تصدیق کرتا ہے کہ مجموعی طور پر Nano-IL-12 میں مفت IL-12 (شکل 2b) سے زیادہ گردش ہے۔ دریں اثنا، چالو نینو-IL-12 کی سطح، جس کا تعین جاری کردہ IL-12 کے ذریعے کیا گیا تھا، خون میں انتہائی محدود تھا، جو نظامی نظام کے دوران نینو-IL-12 کے vivo استحکام کی نشاندہی کرتا ہے۔ گردش، جو نظاماتی ضمنی اثرات کو کم کرنے میں مدد کرتا ہے۔ دل، تلی، پھیپھڑوں اور گردوں میں Nano-IL-12 کا جمع ہونا مفت IL-12 کی طرح تھا جو انتظامیہ کے بعد 24 اور 48 گھنٹے دونوں میں تھا، جبکہ جگر میں، جمع Nano-IL-12 24 گھنٹے پر مفت IL-12 سے زیادہ تھا، لیکن 48 گھنٹے پر موازنہ کیا جا سکتا تھا (فگر S6، معاون معلومات)۔ نینو-IL-12 نے انجیکشن کے بعد 24 گھنٹے پر مفت IL-12 (شکل 2c) کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ ٹیومر جمع ہونا ظاہر کیا۔ مزید برآں، جبکہ ٹیومر سے مفت IL-12 کو انجیکشن کے بعد 48 گھنٹے پر صاف کیا گیا تھا، Nano-IL-12 کا ارتکاز زیادہ رہا (مفت IL سے تقریباً 4-گنا زیادہ{{59} }) (شکل 2d)، تجویز کرتا ہے کہ نینو-IL-12 نے ٹیومر کے اندر IL-12 کے ارتکاز کے منحنی خطوط (AUC) کے نیچے کے علاقے کو بڑھایا۔ ٹیومر میں بلند جمع اور قابل عمل ایکٹیویشن کے مطابق، نینو-IL-12 نے ذیلی B16F10 میلانوما اور آرتھوٹوپک 4T1 ٹرپل-منفی بریسٹ کینسر (TNBC) ماڈلز (Figure) میں مفت IL-12 کے مقابلے میں بہتر اینٹیٹیمورل افادیت ظاہر کی۔ 2e)۔ دونوں ماڈلز میں، 10 ug IL-12 کے مساوی پر Nano-IL-12 کا صرف ایک iv انجیکشن IL-12 کے مقابلے ٹیومر کی نشوونما کو نمایاں طور پر بہتر بنانے کا باعث بنا، جس کی وجہ سے زندہ رہنے کا وقت زیادہ ہوتا ہے۔ . خاص طور پر، 4T1 TNBC ماڈل میں، جو کہ ICI علاج کے خلاف مضبوط مدافعتی دباؤ اور مزاحمت کے لیے بدنام ہے،[37] Nano-IL-12 کے ساتھ علاج کے نتیجے میں واضح طور پر اہم علاج کا اثر ہوا، جبکہ مفت IL{{83} } ٹیومر کی نشوونما کے خلاف بیکار تھا۔

2.3 نینو-IL-12 اسپیٹیوٹیمپوریلی طور پر سوزش کے ردعمل کو کنٹرول کرتا ہے۔

Nano-IL-12 اور مفت IL-12 کے حیاتیاتی اثرات کے درمیان فرق کی مزید چھان بین کرنے کے لیے، علاج سے پیدا ہونے والے سوزش کے ردعمل کی سطح کا اندازہ سائٹوکائن کے ردعمل سے دونوں جگہوں سے کیا گیا، یعنی ، خون اور صحت مند اعضاء، اور ٹیومر میں (آرتھوٹوپک 4T1 ماڈل)۔ IL-12 کی چار ڈاؤن اسٹریم سائٹوکائنز، یعنی IFN-𝛾، ٹیومر نیکروسس فیکٹر-𝛼 (TNF-𝛼)، انٹرلییوکن{{10} (IL-6)، اور انٹرلییوکن -10 (IL-10) کو سوزش کے ردعمل کے اشارے کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔ ان میں، IFN-𝛾، TNF- 𝛼، اور IL-6 IL-12،[20,38] کے اینٹیٹیمورل اثر سے وابستہ اہم proinflammatory cytokines ہیں جبکہ IL{{20} }} ایک اینٹی سوزش والی سائٹوکائن ہے، جو کہ IL-12 محرک کا مخالف منفی تاثرات ہے۔ 3، اور سوزش کے ردعمل کو روزانہ 1 ہفتہ تک ٹریک کیا جاتا تھا۔ اس تجرباتی ترتیب نے ہمیں spatiotemporal سوزش کے ردعمل پر سنگل انجیکشن اور بار بار خوراک دونوں کے اثرات کا تعین کرنے کی اجازت دی۔ دن 0 پر مفت IL-12 کا پہلا انجیکشن خون اور اعضاء میں چار سائٹوکائنز کے اخراج کا باعث بنا، جس میں پلازما کی حراستی کی چوٹی دن 2 (شکل 3a–e،g) پر دیکھی گئی، جو کہ مضبوط بند ہونے کی نشاندہی کرتی ہے۔ IL-12 کے مدافعتی سے متعلق منفی واقعات (irAEs) کے ساتھ وابستہ ہدف کی سوزش۔ خون اور صحت مند اعضاء میں مفت IL-12، غیر ہدف سوزش کے ردعمل کے ضابطے کی نشاندہی کرتا ہے۔ تیسرے دن مفت IL-12 کے دوسرے انجیکشن نے پھر سے IFN-𝛾، TNF-𝛼، اور IL-6 کے سراو کو متحرک کیا۔ تاہم، IFN-𝛾 اور TNF-𝛼 کی چوٹی کی سطحیں جو 5 دن پر مشاہدہ کی گئی تھیں، پہلے IL-12 انجیکشن کے بعد دن 2 پر مشاہدہ کیے گئے مقابلے میں واضح طور پر کم تھیں۔ مزید برآں، مفت IL-12 کے دوسرے انجیکشن نے پلازما، اعضاء اور ٹیومر میں سوزش مخالف IL-10 کی سطح کو بے حد بڑھا دیا، جس کا تعلق Th1 خلیات کے نظامی ہائپر ایکسپینشن سے ہوتا ہے۔ ایک ریگولیٹری مرحلہ[40] بار بار IL-12 کے علاج سے پیدا ہونے والے اس طرح کے امتیازی ردعمل کی انسانی طبی آزمائشوں میں تصدیق ہوئی ہے، اور یہ IL-12 کے حیاتیاتی اثرات کو کم کرنے میں معاون ہے، بشمول اینٹیٹیمورل طاقت۔[20] IL-12 کے برعکس، Nano-IL-12 کے دوسرے انجیکشن نے خون اور اعضاء میں IL-10 کی رطوبت کو بڑھا نہیں دیا۔ نیز، خون اور صحت مند بافتوں میں سوزش والی سائٹوکائنز کا ارتکاز مفت IL-12 کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ Nano-IL-12 نہ صرف نظامی سوزش کے ردعمل کو کم کر سکتا ہے بلکہ بار بار IL-12 کی انتظامیہ کی حدود کو بھی دور کر سکتا ہے، جس نے انسدادِ سوزش کے ردعمل کو جنم دیا۔ ٹیومر میں، Nano-IL-12 کے ایک واحد iv شاٹ نے سوزش IFN-𝛾، TNF-𝛼 اور IL-6 کی پیداوار کو بڑھایا، جس سے مفت IL{{77} کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ انٹراٹومورل ارتکاز حاصل ہوا۔ } علاج (شکل 3f، جی)۔ دریں اثنا، نینو-IL-12 کے علاج نے ٹیومر میں مفت IL-12 کے مقابلے میں کم سوزش والی IL-10 کی حوصلہ افزائی کی، انسداد سوزش ردعمل کے آغاز سے گریز کیا۔ مزید برآں، نینو-IL-12 کے دوسرے انجیکشن پر، ٹیومر میں سوزش والی سائٹوکائنز کی اعلیٰ سطح کو برقرار رکھا گیا تھا، جبکہ انٹراٹومورل IL-10 کا ارتکاز کم رکھا گیا تھا۔ IFN-𝛾، TNF-𝛼، اور IL-6 کی یہ اپ گریجولیشن اور ٹیومر میں IL-10 کی کمی نینو-IL-12 کی اعلی اور پائیدار انٹراٹیمورل لیولز، اور سپورٹ کے ساتھ تعلق رکھتی ہے۔ Nano-IL-12 کے لیے ایک بلند اشتعال انگیز ردعمل، جو کہ اینٹیٹیمورل افادیت کو بڑھانے کے لیے اہم ہے۔[41]

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا Nano-IL-12 سوزش کے اسپیٹیو ٹیمپورل کنٹرول کے ذریعے افادیت کو بہتر بنا سکتا ہے، ہم نے شکل 2e کا تجربہ دہرایا، لیکن اس بار ہم نے چوہوں کا علاج 10- گنا کم خوراک کے ساتھ کیا، یعنی، 1 ug IL-12 کے مساوی، بار بار خوراک کے شیڈول کا استعمال کرتے ہوئے جو مفت IL- 12 کے لیے مدافعتی ردعمل کو متحرک کرتا ہے۔ اس بار بار چلنے والے کم خوراک کے علاج کے تحت، نینو-IL-12 نے 4T1 TNBC ٹیومر (Figure 3h) میں IL-12 کے مقابلے میں ٹیومر مخالف افادیت کو واضح طور پر بڑھایا، جس کے نتیجے میں ٹیومر کی نشوونما سست ہوتی ہے اور طویل عرصے تک بقا ہوتی ہے۔ دوسری طرف، IL-12 کے مفت علاج نے چھ بار شدید انجیکشن لگانے کے بعد بھی نہ ہونے کے برابر افادیت ظاہر کی، جس کی وجہ اینٹی سوزش سائٹوکائنز جیسے IL-10 کے پھیلاؤ کو قرار دیا جا سکتا ہے۔ یہ نتائج نینو-آئی ایل- 12 کی صلاحیت کی حمایت کرتے ہیں تاکہ اسپیٹیٹیمپوری طور پر سوزش کو کنٹرول کر کے اینٹی ٹیومر افادیت کو ممکن بنایا جا سکے۔ اشتعال انگیز ردعمل کا کنٹرول بھی حفاظت میں اضافہ کا باعث بنا۔ ہم نے دن 0 اور 3 کو دو انجیکشن کے بعد IL{{20}} اور Nano-IL-12 کے زہریلے ہونے کا تعین کرنے کے لیے ایک ہسٹولوجیکل تشخیص اور خون کا تجزیہ کیا (شکل S7a,c، معاون معلومات) . نتائج نے نینو-IL-12 کے مفت IL-12 کے مقابلے میں جگر، گردے، اور لبلبہ میں زہریلا پن نمایاں طور پر کم ظاہر کیا۔ اس کے علاوہ، علاج کے دوران جسم کے وزن میں تبدیلیوں کو زہریلا کے پیرامیٹر کے طور پر ٹریک کیا گیا تھا. Nano-IL-12 کا علاج کرنے والے جانوروں کا علاج کے دوران تھوڑا وزن بڑھ گیا، جبکہ مفت IL حاصل کرنے والے چوہوں کو وزن میں کمی کا سامنا کرنا پڑا (Figure S7b، معاون معلومات)۔ اس طرح، یہ مشاہدات بتاتے ہیں کہ نینو-IL- 12 ٹیومر میں سوزش کے ردعمل کو ترجیحی طور پر فروغ دے سکتا ہے تاکہ اینٹیٹیمورل افادیت کو بڑھایا جا سکے جبکہ صحت مند بافتوں میں زہریلے پن کو کم کرنے اور انسداد سوزش کے رد عمل کو کم کرنے کے لیے غیر ہدفی اثرات کو محدود کر سکے۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2.4 نینو-IL-12 کا علاج TME میں اینٹیٹیمورل امیون سیل کی دراندازی کا باعث بنتا ہے۔

IL-12 کو T سیل محرک کرنے والے عنصر کے طور پر بھی جانا جاتا ہے، کیونکہ یہ T خلیات کی نشوونما اور کام کو متحرک کر سکتا ہے تاکہ اینٹیٹیمورل مدافعتی ردعمل کو شروع کیا جا سکے۔ اس طرح، ہم نے بار بار Nano-IL-12 علاج کے بعد ٹیومر میں CD8+ خلیوں کی دراندازی کا جائزہ لیا۔ B16F10 میلانوما کے فلو سائٹو میٹری تجزیہ نے 1 ug IL-12 مساوی/انجیکشن پر مفت IL-12 یا Nano-IL-12 کے دو iv انجیکشنوں کے ذریعے علاج کیا ظاہر کیا کہ نینو-IL{{13} } نے مفت IL-12 (شکل 4a) کے مقابلے ٹیومر میں CD8+ T خلیات کی دراندازی کو نمایاں طور پر بڑھایا۔ 4T1 TNBC ٹیومر والے ماؤس میں مدافعتی خلیوں کی کمی کا تجربہ کر کے، ہم نے نینو-IL-12 کے علاج کے ردعمل میں مختلف مدافعتی خلیوں کی آبادی کے تعاون کی چھان بین کی۔ نینو-IL-12 کو 7، 9، 11، 13 اور 15 دن (1 ug IL-12 مساوی/انجیکشن) کو پانچ بار iv انجیکشن لگایا گیا تھا۔ مزید یہ کہ چوہوں کو CD4+، CD8+ کو ختم کرنے کے لیے 6، 8 اور 10 دنوں کو اینٹی CD4، anti-CD8، یا anti-asiago GM1 اینٹی باڈیز کے ساتھ intraperitoneally (ip) انجکشن لگایا گیا تھا۔ بالترتیب NK خلیات۔ نتائج نے ظاہر کیا کہ CD8+ سائٹوٹوکسک T خلیات، CD4+ T خلیات، اور NK خلیات نے نینو-IL-12 کی علاج کی افادیت میں نمایاں کمی کی ہے، جیسا کہ ٹیومر کی تیز رفتار نشوونما سے ظاہر ہوتا ہے۔ اور صرف Nano-IL-12 علاج حاصل کرنے والے چوہوں کے مقابلے میں ختم شدہ گروپوں میں بقا میں کمی (شکل 4b)۔ یہ نتیجہ IL-12 کے حیاتیاتی فعل سے مطابقت رکھتا ہے، جس میں CD8 T خلیات[42] اور NK خلیات کی سائٹوٹوکسک سرگرمی کو بڑھانا، [43] اور T مددگار (Th) خلیات میں بے ہودہ T خلیات کی تفریق میں ثالثی شامل ہے۔ [44]

مزید برآں، کمی کے تجربے کے نتیجے میں اینٹی ٹیومر سرگرمی کی مختلف تخفیف کی کارکردگی نینو-IL-12 کی افادیت پر ہر خلیے کی آبادی کی مطابقت بتاتی ہے، جس میں CD8+ سائٹوٹوکسک T خلیات سب سے اہم حصہ ہیں۔ . 4T1 TNBC ٹیومر حصوں کے امیونو ہسٹو کیمسٹری تجزیہ نے ٹیومر میں دراندازی کرنے والے اثر کرنے والے خلیوں کی مقامی تقسیم کا انکشاف کیا (شکل 4c)۔ اگرچہ مفت IL-12 نے ٹیومر میں CD8+ سائٹوٹوکسک T خلیات اور Tbet+ (Th1) خلیات کی موجودگی کو بہتر نہیں بنایا، Nano-IL-12 نے دونوں خلیوں کی گہرائی میں زیادہ دراندازی کو فروغ دیا۔ ٹیومر کے علاقوں. اس کے علاوہ، CD8+ سیلز میں گرانزیم B کے اپ گریجولیشن نے نانو آئی ایل-12 علاج کے بعد سائٹوٹوکسک ٹی سیلز کی ایک اعلیٰ ایکٹیویشن لیول تجویز کی (شکل 4d)۔ مزید یہ کہ، ہم نے مشاہدہ کیا کہ نینو-IL-12 کے علاج نے ٹیومر میں PD-L1 اظہار کو PBS اور مفت IL{{20}} کے ساتھ علاج کیے جانے والے ٹیومر کے مقابلے میں بلند کیا۔ یہ بڑھتی ہوئی PD-L1 کی سطح نینو-IL-12 کے ذریعہ زیادہ ٹیومر IFN-𝛾 کی وجہ سے ہو سکتی ہے، جس کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ ٹیومر کے ٹشووں میں PD-L1 کے اظہار کو تحریک دیتا ہے، [45] مدافعتی دباؤ کے طریقہ کار کے طور پر کام کرتا ہے۔ lymphocyte دراندازی کے خلاف مزاحمت کرنے کے لئے. یہ انٹراٹیمورل PD-L1 اپ گریجولیشن نینو-IL-12 کی اینٹی ٹیومر افادیت کو اینٹی PD-1 یا اینٹی PD-L1 ICIs کے ساتھ ملا کر اسے ہم آہنگ کرنے کی صلاحیت کی تجویز کرتا ہے۔ مندرجہ بالا مشاہدے کی بنیاد پر، ہم نے نینو-IL-12 کے اثر کی ایک مونو تھراپی کے طور پر اور TME (شکل 4e) پر اینٹی پی ڈی-1 اینٹی باڈیز کے ساتھ مل کر تحقیق کی۔ یہ تجربہ 4T1 خلیوں سے تیار کردہ آرتھوٹوپک TNBC ٹیومر میں کیا گیا تھا جو ہیماگلوٹینن (4T1-HA) کا اظہار کرتے ہیں کیونکہ ہیماگلوٹینن ایک اچھی طرح سے متعین امیونوجن ہے، جو ماؤس ماڈل میں اینٹیجن مخصوص سائٹوٹوکسک T-lymphocyte ردعمل پیدا کر سکتا ہے۔[46 ,47] چوہوں کا دو بار 10 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 کے ساتھ دن 0 اور 3 پر علاج کیا گیا، اور مجموعہ تھراپی کے لیے، چوہوں کو بیک وقت 100 ug اینٹی PD کے دو بار انجیکشن لگائے گئے۔ -1 اینٹی باڈی۔ 7 ویں دن، ٹیومر کے نمونے فلو سائٹوومیٹری کے لیے لیے گئے تھے۔

نتائج نے اس بات کی تصدیق کی کہ نینو-IL-12 کے علاج نے IL-12 کے مقابلے ٹیومر میں لیوکوائٹس (CD45+) کی زیادہ دراندازی کی حوصلہ افزائی کی۔ اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز کے ساتھ Nano-IL-12 کے امتزاج نے ٹیومر میں اعلیٰ CD45+ خلیات کو بھی پیش کیا۔ لیوکوائٹس میں، لمفائیڈ سیلز اور ٹی سیلز کو Nano-IL-12 اور Nano-IL- 12/anti-PD-1اینٹی باڈی کے امتزاج کے ذریعے اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ Nano-IL-12 علاج کے نتیجے میں NK سیل کی آبادی میں معمولی تبدیلی آئی لیکن مفت IL-12 کے مقابلے T سیل ذیلی گروپ میں نمایاں تبدیلیاں آئیں۔ خاص طور پر، 4T1-HA ٹیومر میں CD8+ T خلیات کی دراندازی واضح طور پر Nano-IL-12 کے ذریعے مفت IL-12 سے بڑھ گئی تھی۔ مزید برآں، HA-tetramer+ T خلیات، جو کہ اینٹیجن مخصوص T خلیات سے مطابقت رکھتے ہیں، نینو-IL-12 کے علاوہ اینٹی PD- 1 اینٹی باڈی کے امتزاج میں نمایاں طور پر بڑھے ہیں، جو ایک انکولی قوت مدافعت کو فروغ دینے کا مشورہ دیتے ہیں۔ Nano-IL-12 اور ICIs کی ہم آہنگی کے ذریعے ردعمل۔ عمومی CD4+ T خلیات نے NanoIL-12 علاج شدہ گروپوں میں اپ گریجولیشن ظاہر کیا۔ ٹیومر میں CD4+ T خلیات کی ذیلی آبادی کو مزید واضح کرنے کے لیے، ہم نے ریگولیٹری ٹی سیلز (Tregs) کی چھان بین کے لیے اینٹی Foxp3 کے ساتھ خلیات کو داغ دیا۔ جبکہ اینٹی PD-1 مونو تھراپی نے 4T1- HA ٹیومر ماڈل میں Tregs پر کوئی دباو نہیں دکھایا، Nano-IL-12 پلس اینٹی PD-1 کا مجموعہ ڈرامائی طور پر Tregs کو ختم کر دیا. مزید یہ کہ، نینو-IL-12 علاج شدہ ٹیومر مفت IL-12 سے زیادہ Th خلیات پیش کرتے ہیں۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ نینو-IL-12 کے علاج نے فلٹریشن میں اینٹی ٹیومر مدافعتی خلیوں کو بڑھایا اور مدافعتی TME پر قابو پانے کے لیے اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز کے ساتھ ہم آہنگی پیدا کی۔

شکل 3. نینو-IL-12 نے اشتعال انگیز ردعمل کو وقتی طور پر کنٹرول کیا۔ 1 }} ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 دن 0 اور 3 پر دو بار۔ سائٹوکائن کی سطحوں کی پیمائش ELISA کے ذریعے کی گئی۔ دو انجیکشن کے بعد چوٹی کی قدریں (IFN-𝛾، TNF-𝛼، اور IL-10 کے لیے دن 2 اور 5؛ IL-6 کے لیے دن 2 اور 6) کو بار گراف کے طور پر دیکھا جاتا ہے۔ دائیں پینل. b–f) 10 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 دن 0 اور 3 کو دو بار 4T1-برداشت کرنے والے چوہوں کے اعضاء اور ٹیومر میں سائٹوکائن کی سطح۔ ٹشوز کو جمع کرنے کے لیے دن 2 اور 5 کو قربان کیا گیا۔ (ڈیٹا کو اوسط ± SD؛ n=6 چوہوں فی گروپ کے طور پر دکھایا گیا ہے؛ p کی قدروں کا حساب بغیر جوڑا بنائے گئے t-ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے۔) g) خون، اعضاء، اور ٹیومر میں سائٹوکائن کی سطح کے ہیٹ میپس اوسط قدروں سے Z سکور میں تبدیل h) 1 ug IL-12 یا مساوی Nano-IL-12 کے بار بار iv انجیکشن کی اینٹی ٹیومر سرگرمی (دن 7, 9, 11, 13, 15 اور 25 کو انجکشن لگایا گیا, تیروں سے اشارہ کیا گیا) مورین TNBC کے خلاف۔ انفرادی ٹیومر کی ترقی کے منحنی خطوط بائیں پینل میں دکھائے گئے ہیں۔ اوسط ٹیومر والیوم کے منحنی خطوط مرکزی پینل میں دکھائے گئے ہیں، اور بقا کے منحنی خطوط دائیں پینل میں دکھائے گئے ہیں (ڈیٹا کو اوسط ± SEM؛ n=6 چوہوں فی گروپ کے طور پر دکھایا گیا ہے، p اقدار کا حساب لاگ رینک کے تجزیہ کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ )۔

شکل 4. نینو-IL-12 کا اینٹی ٹیومر اثر TME میں انفیکٹر سیلز کی بڑھتی ہوئی دراندازی سے پیدا ہوتا ہے۔ a) نینو-IL-12 علاج کے بعد میلانوما میں CTLs کی دراندازی کا بہاؤ سائٹومیٹری تجزیہ۔ چوہوں کو دن 0 کو B16F10 سیلوں سے ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ IL-12 (1 ug) یا مساوی Nano-IL-12 دن 8 اور 11 کو دو بار iv انجیکشن لگائے گئے تھے۔ ٹیومر کے نمونے جمع کیے گئے اور دن 15 پر تجزیہ کیا گیا (ڈیٹا اوسط ± SD کے طور پر دکھایا گیا ہے؛ n {{ 16}} چوہے فی گروپ؛ p-values ​​کا حساب یک طرفہ ANOVA کے ذریعے کیا گیا تھا)۔ ب) CD4+، CD8+ اور NK خلیات کے ختم ہونے پر Nano-IL-12 کی اینٹی ٹیومر سرگرمی۔ چوہوں والے 4T1 ٹیومر کو نینو-IL-12 (1 ug IL-12 مساوی) کے ساتھ 7، 9، 11، 13 اور 15 دنوں میں انجکشن لگایا گیا تھا۔ مزید برآں، چوہوں کو اینٹی CD4 انجیکشن لگایا گیا تھا۔ 6، 8 اور 10 دنوں میں اینٹی سی ڈی 8، اور اینٹی ایشیاگو جی ایم 1 اینٹی باڈیز۔ ٹیومر کی نشوونما کے منحنی خطوط (ڈیٹا اوسط ± SEM کے طور پر دکھایا گیا ہے) اور بقا کے منحنی خطوط ریکارڈ کیے گئے (n=6 چوہے فی گروپ، p اقدار لاگ رینک کے تجزیہ کے ذریعے شمار کیا جاتا ہے)۔ c) 4T1 ٹیومر سیکشنز کی IHC تصاویر۔ چوہوں والے 4T1 TNBC ٹیومر (اوسط ٹیومر کا حجم: 200 mm3) کو دو بار iv پی بی ایس، 10 ug IL-12، یا مساوی Nano-IL-12 کے ساتھ 0 اور 3 دن لگایا گیا تھا۔ ساتویں دن، ٹیومر جمع کرنے کے لیے چوہوں کی قربانی دی گئی۔ ٹیومر میں CD8+، Tbet، یا PD-L1+ سیلز پیلے رنگ میں نظر آتے ہیں۔ سیل نیوکلی کو ہوچسٹ (نیلے) سے داغ دیا گیا تھا۔ اسکیل بار=1 ملی میٹر۔ d) 4T1 ٹیومر سیکشنز میں Granzyme B (سبز) اور CD8 (سرخ) کی امیونوسٹیننگ۔ سیل نیوکلی کو ہوچسٹ (نیلے) سے داغ دیا گیا تھا۔ پیلے رنگ کے پکسلز ایکٹیویٹڈ CD8+ T سیلز کی نشاندہی کرتے ہیں۔ اسکیل بار=100 μm۔ e) پی بی ایس، اینٹی پی ڈی1 اینٹی باڈیز، آئی ایل-12، نینو-آئی ایل-12، آئی ایل-12 پلس اینٹی کے ساتھ علاج کیے جانے والے 4T1-HA ٹیومر میں لیمفائیڈ سیلز کی دراندازی کا تجزیہ PD1 اینٹی باڈیز اور Nano-IL-12 علاوہ PD1 اینٹی باڈیز۔ IL-12 اور Nano-IL-12 کو 10 ug دن 7 اور 9 پوسٹینوکولیشن پر iv انجیکشن لگایا گیا تھا۔ اینٹی PD-1 کو 100 ug دن 8 اور 10 پوسٹینوکولیشن پر ip انجیکشن لگایا گیا تھا۔ 17 ویں دن، چوہوں کی قربانی دی گئی، اور فلو سائٹومیٹری پیمائش کے لیے ٹیومر کو ہم آہنگ کیا گیا (ڈیٹا کو اوسط ± SD، n=5 نمونے فی گروپ کے طور پر دکھایا گیا ہے، p اقدار کا حساب یک طرفہ ANOVA کے ذریعے کیا جاتا ہے)۔

2.5 نینو-IL-12 علاج TME کو نقل کی سطح سے ICI ردعمل کو ممکنہ طور پر فعال کرتا ہے۔

اس کے بعد ہم نے ٹرانسکرپٹوم تجزیہ کے ذریعے جین کے اظہار کی سطح سے علاج کے بعد 4T1-HA ٹیومر کے TME کو چالو کرنے کی تحقیقات کی۔ ٹیومر ٹشوز سے نکالے گئے کل RNA نمونوں کی ترتیب PBS، اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز، IL-12، Nano-IL-12، اور سائٹوکائنز کے امتزاج کے ساتھ علاج کے بعد کی گئی۔ آئی سی آئیز عالمی جین کے اظہار کے ہیٹ میپ نے واضح طور پر نینو-IL-12 حاصل کرنے والے ٹیومر میں مختلف جین پروفائلز اور اینٹی PD کے ساتھ نینو-IL-12 کے امتزاج کی نشاندہی کی ہے- 1 (شکل S11، معاون معلومات )۔ Nano-IL-12 علاج کے ذریعے متاثرہ حیاتیاتی عمل کی وضاحت کرنے کے لیے، ہم نے ہر گروپ میں مختلف جینز کا تجزیہ کیا اور اپریگولیٹڈ اور نیچے ریگولیٹڈ جینز (شکل 5a،b) پر افزودگی کا تجزیہ کیا۔ GOBP اور KEGG دونوں تجزیہ سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ، IL-12 اور PBS کے مقابلے میں، نینو-IL-12 کے علاج نے مختلف اثر کرنے والے مدافعتی خلیات جیسے T سیل کے پھیلاؤ، تفریق، اور فنکشنل ایکٹیویشن کے محرک کو واضح طور پر بڑھا دیا ہے۔ پھیلاؤ، T خلیوں کا Th خلیات میں فرق، اور T سیل ایکٹیویشن اور T سیل ریسیپٹر سگنلنگ پاتھ وے۔ مزید برآں، PD-L1 اظہار اور PD-1 چیک پوائنٹ پاتھ وے سے متعلق جینز کو بھی نینو-IL-12 کے علاج پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ یہ نتائج فلو سائٹومیٹری اور امیونو ہسٹولوجی اسٹڈیز میں مشاہدہ کردہ ٹی سیلز کے لیے NanoIL-12 کے مضبوط محرک کی حمایت کرتے ہیں۔ ایک ہی وقت میں، دوسرے مدافعتی خلیوں سے منسلک جین، جیسے مونوکیٹس اور NK خلیات، نینو-IL-12 علاج سے مثبت طور پر متاثر ہوئے۔ نیز، سائٹوکائن ردعمل اور دیگر مدافعتی عمل، جیسے اینٹیجن پریزنٹیشن، کو نینو-IL-12 علاج سے الگ کر دیا گیا تھا۔ دوسری طرف، Nano-IL-12 نے سیل ڈویژن سے وابستہ راستوں کو کم کر دیا، یہ تجویز کرتا ہے کہ علاج ٹیومر کے خلیوں کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے (فگر S11، معاون معلومات)۔ یہ نتائج نینو-IL-12 کے فوائد کی نشاندہی کرتے ہیں جو کہ intratumoral امیونٹی کے پیدائشی اور انکولی بازو دونوں کو چالو کرتے ہیں۔

امتزاج کے علاج کے بارے میں مزید تحقیقات سے یہ بات سامنے آئی کہ نینو-IL-12 پلس اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز کے امتزاج کے علاج نے IL-12 پلس اینٹی PD{{6} کے مقابلے انٹراٹیمورل قوت مدافعت کو بڑھایا۔ } اینٹی باڈیز یا اینٹی PD-1 مونو تھراپی دونوں پیدائشی اور انکولی مدافعتی راستوں کو متحرک کرکے (شکل 5b اور شکل S11c، معاون معلومات)۔ متاثر کن طور پر، NanoIL-12 پلس اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز کے امتزاج کے نتیجے میں مائٹوسس کے ساتھ منسلک راستوں پر مضبوط روک تھام ہوئی، اس امتزاج کا اندازہ لگاتے ہوئے ٹیومر کے خلیات کے خلاف دراندازی کرنے والے انفیکٹر سیلز کی ایک مضبوط ہلاکت کی سرگرمی کو درمیان میں لایا جا سکتا ہے۔ RNA-seq کے نتائج کی بنیاد پر، ہم نے ٹیومر میں دراندازی کرنے والے مدافعتی خلیوں (شکل 5c، d) کی آبادی کا بھی تجزیہ کیا۔ بہاؤ سائٹومیٹری کے نتیجے کی طرح، نینو-IL-12 علاج شدہ گروپس نے CD8+ T خلیات کی بہتر دراندازی ظاہر کی۔ مزید برآں، نتائج نے monocytes اور granulocytes کے اپ گریجولیشن کا بھی انکشاف کیا، جس سے ٹیومر میں بڑھی ہوئی سوزش کی تصدیق ہوتی ہے کہ قوت مدافعت کے بڑھے ہوئے راستوں سے۔ ان نتائج نے تصدیق کی کہ Nano-IL-12 ٹیومر کے خلاف ایک مضبوط مدافعتی ردعمل قائم کرتا ہے اور اینٹی PD-1 کے ساتھ ملاپ اس عمل کو مضبوط بنا سکتا ہے۔

شکل 5. نینو-IL-12 کا علاج TME میں قوت مدافعت کو بڑھاتا ہے تاکہ PD1 اینٹی باڈیز کو ممکن بنایا جا سکے۔ a) نینو-IL-12 بمقابلہ IL-12 اور Nano-IL-12 + اینٹی PD-1 بمقابلہ IL{{12} } اینٹی PD-1۔ پلاٹ 4T1-HA ٹیومر کے RNA-seq تجزیہ سے حاصل کیے گئے تھے جن کا مختلف علاج کے ذریعے علاج کیا گیا تھا: 10 ug IL-12 اور مساوی Nano-IL-12 iv کو 7 اور 9 دن پوسٹینوکولیشن پر لگایا گیا تھا۔ . اینٹی PD-1 کو 100 ug دن 8 اور 10 پوسٹینوکولیشن پر ip انجیکشن لگایا گیا تھا۔ 17 ویں دن ٹیومر کے نمونے جمع کرنے کے لیے چوہوں کی قربانی دی گئی۔ b) افزودگی کا تجزیہ a c) RNA-seq کے ذریعہ طے شدہ TME میں سیل کی آبادی کا ہیٹ میپ۔ اعداد و شمار کی منصوبہ بندی کے لیے آبادیوں کو Z-اسکور میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ d) سیل کی آبادی کے ہسٹوگرامس جو متعدد موازنہوں میں نمایاں فرق دکھا رہے ہیں (ڈیٹا اوسط ± SD کے طور پر دکھایا گیا ہے؛ PBS گروپ کے لیے، n=5 نمونے؛ دوسرے گروپوں کے لیے، n=4 نمونے فی گروپ؛ p اقدار یکطرفہ ANOVA کے ذریعے شمار کیا جاتا ہے)۔

2.6۔ Nano-IL-12 بنیادی اور میٹاسٹیٹک ٹیومر کو مؤثر طریقے سے ختم کرنے کے لیے ICIs کے ساتھ ہم آہنگی کرتا ہے۔

ICIs کے ساتھ ہم آہنگی کے لیے Nano-IL-12 کی علاج کی صلاحیت کی چھان بین کرنے کے لیے، چوہوں میں آرتھوٹوپک پرائمری TNBC ٹیومر 4T1 خلیوں کو میمری فیٹ پیڈ پر ٹیکہ لگا کر قائم کیے گئے تھے۔ چوہوں کا علاج Nano-IL-12 کے ساتھ مختلف خوراک کے نظام الاوقات اور ICIs کے ساتھ امتزاج کے نمونوں پر کیا گیا تاکہ متعلقہ علاج کی اینٹیٹیمورل افادیت کو جانچا جا سکے۔ ہم نے پایا کہ کم خوراک (1 ug IL-12 مساوی/انجیکشن) کے تحت بھی، Nano-IL-12 کے ساتھ بار بار ہونے والے علاج نے ایک مونو تھراپی کے طور پر بنیادی TNBC ٹیومر کے خلاف ایک واضح اینٹی ٹیومر سرگرمی کا مظاہرہ کیا، جیسا کہ ٹیومر کی ترقی کی شرح کو دبانے اور طویل عرصے تک بقا کے ذریعہ دکھایا گیا ہے (شکل S12، معاون معلومات)۔ تاہم، اس خوراک کے تحت مفت IL-12 علاج نے کوئی اثر نہیں دکھایا، یہاں تک کہ جب اینٹی PD-1 تھراپی کے ساتھ ملایا جائے۔ Nano-IL- 12 کے ساتھ اینٹی PD-1 کے امتزاج نے افادیت میں مزید اضافہ کیا، اور CR حاصل ہوا۔ اس کے بعد ہم نے ایک اعلی نینو-IL-12 خوراک (10 ug IL-12 مساوی/انجیکشن) کا مطالعہ کیا اور علاج کو پورا کرنے کے لیے اسے ICI کاک ٹیلز (اینٹی پی ڈی-1 اور اینٹی CTLA4 اینٹی باڈیز) کے ساتھ ملایا۔ ممکنہ، استعداد. خاص طور پر، اس خوراک پر، ICIs کے ساتھ Nano-IL-12 کے امتزاج تھراپی نے ٹیومر کی نشوونما کو روک دیا اور ٹیومر کو مکمل طور پر ختم کر دیا (شکل 6a)، اس علاج کے گروپ میں تمام چوہوں نے CR دکھایا۔ مزید برآں، علاج شدہ چوہوں نے 4T1 خلیات کے ساتھ ٹیومر کے دوبارہ چیلنج کے خلاف مزاحمت کا مظاہرہ کیا، نینو-IL-12 اور ICIs کے امتزاج تھراپی کے ساتھ علاج سے ایک مضبوط مدافعتی یادداشت کے وجود کی حمایت کی۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

ٹی این بی سی کو ایک جارحانہ ٹیومر کے طور پر جانا جاتا ہے جس میں دور دراز کے میٹاسٹیسیس کی اعلی شرح ہوتی ہے۔ پرائمری آرتھوٹوپک 4T1 ٹیومر کے ریسیکشن کے ذریعے ایک خود بخود میٹاسٹیٹک TNBC ماڈل قائم کیا گیا تھا، جو متعدد اعضاء، خاص طور پر پھیپھڑوں میں میٹاسٹیسیس کی نشوونما کا باعث بنے گا۔[50] اس ماڈل میں، ICIs کے ساتھ Nano-IL-12 کے امتزاج کے علاج سے بھی تسلی بخش نتائج سامنے آئے، جس نے پھیپھڑوں کے میٹاسٹیسیس (شکل 6b) کی ترقی کو روکا اور تمام علاج شدہ چوہوں میں CR کا باعث بنے۔ مزید برآں، 4T1 خلیات کے iv انجیکشن کے ساتھ دوبارہ چیلنج کرنے پر، زیادہ تر علاج شدہ چوہوں نے مضبوط مزاحمت کا مظاہرہ کیا، جو نینو-IL-12 اور ICIs کے امتزاج سے مؤثر مدافعتی یادداشت کی نشاندہی کرتا ہے۔ TNBC کے علاوہ، ہم نے ایک بنیادی B16F10 میلانوما ماڈل (Figure S13، معاون معلومات) میں ICI کے ساتھ مل کر Nano-IL-12 کا بھی تجربہ کیا۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ نینو-IL-12 (10 ug IL-12 مساوی/انجیکشن) کا امتزاج اینٹی PD-1 اینٹی باڈی کے ساتھ گروپ کے 6 میں سے 4 چوہوں میں CR کا باعث بنا۔ ، اور علاج شدہ چوہوں نے B16F10 خلیوں کے ساتھ دوبارہ چیلنج کے خلاف مزاحمت کا مظاہرہ کیا ، جو ایک مضبوط امیونولوجیکل میموری کی تجویز کرتا ہے۔

3. بحث

ہم نے حساس nanocytokines (Nano-IL-12) کا استعمال کرتے ہوئے ایک ٹیومر کو فعال کرنے کے قابل IL-12 حکمت عملی تیار کی ہے جو IL-12 کی بایو ایکٹیویٹی کو pH 7.4 پر خاموش کر سکتی ہے، لیکن مکمل طور پر فعال سائٹوکائن کو دوبارہ حاصل کر سکتی ہے۔ انٹراٹومورل پی ایچ۔ سیسٹیمیٹک انجیکشن کے بعد، Nano-IL-12 خون کے دھارے میں مستحکم طور پر گردش کرتا ہے، غیر پیتھولوجیکل سائٹس میں مدافعتی ردعمل اور IRAEs کے واقعات کو کم کرتا ہے، یہاں تک کہ بار بار لگانے کے بعد بھی۔ دوسری طرف، ٹیومر میں Nano-IL-12 کا زیادہ جمع ہونا اور فعال ہونا ICIs کے ساتھ افادیت اور ہم آہنگی میں نمایاں اضافہ کا باعث بنتا ہے، کولڈ ٹیومر ماڈلز میں CR حاصل کرنا جو ICIs کے خلاف مزاحم ہیں، اور ایک ٹھوس علاج کے بعد مدافعتی میموری.

نینو-IL-12 نے سوزش والی سائٹوکائنز کی مضبوط رطوبت کو نکال کر، انفیکٹر سیلز کی بڑھتی ہوئی دراندازی، اور مدافعتی خلیوں کی موجودگی میں کمی کے ذریعے TME کو گہرائی سے فعال کیا۔ مزید برآں، Nano-IL-12 نے ٹیومر سیلز میں PD-L1 کی سطح کو بڑھا دیا، جو اینٹی PD-1 اینٹی باڈیز کی سرگرمی کو فروغ دے سکتا ہے۔ ٹی ایم ای میں نینو-آئی ایل کی وجہ سے ہونے والی تبدیلیوں نے اینٹی پی ڈی-1 اینٹی باڈیز کے ساتھ تعاون کیا تاکہ اینٹیجن پریزنٹیشن، انفیکٹر سیلز کی بڑھتی ہوئی موجودگی اور ان کی سرگرمی کو مضبوط بنانے کے ذریعے کینسر کی قوت مدافعت کو متحرک کیا جا سکے۔ مدافعتی خلیوں کے تعامل کو فروغ دینا۔ طبی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ اینٹی PD1/anti-PD-L1 چوکی ناکہ بندی PD-L1-مثبت TNBC مریضوں میں زیادہ تعداد میں رسپانس ریٹ رکھتی ہے جس میں ٹیومر میں گھسنے والی لیمفوسائٹس کی زیادہ تعداد ہوتی ہے۔[51,52] تاہم، TNBC کے خلاف ایک مونو تھراپی کے طور پر مدافعتی چوکی ناکہ بندی کی مجموعی کارکردگی تسلی بخش نہیں تھی [53,54] عام طور پر کم اظہار اور TNBC کے نمایاں طور پر متضاد TME کی وجہ سے (Nab-Paclitaxel) کو میٹاسٹیٹک TNBC مریضوں میں منظور کیا گیا ہے، جو صرف TNBC مریضوں کے ایک چھوٹے سے حصے میں بقا کا ایک معمولی فائدہ دیتا ہے۔[57] اس طرح، نینو-IL-12 کی مدافعتی TME کو اوور رائیڈ کرنے اور TNBC کے PD-L1 اظہار کو فروغ دینے کی صلاحیت چوکی ناکہ بندی کے ردعمل کی شرح کو بڑھانے کے لیے ایک مضبوط متبادل فراہم کر سکتی ہے۔ Nano-IL-12 کی بہتر حفاظت بھی علاج کے استعمال کے لیے ایک اہم فائدہ ہے۔ پچھلے طبی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ نظامی طور پر انجیکشن IL-12 مضبوط ہیماتولوجک اور جگر کے زہریلے اثرات پیدا کرتا ہے۔ } کا علاج۔ اس طرح، ہم Nano-IL- 12 کو 10 ug IL-12 فی ماؤس پر کئی بار انجیکشن کرنے میں کامیاب ہوئے، یعنی تقریباً 500 ug kg-1، جو کہ تقریباً {{52} }انسانوں میں IL-12 کی زیادہ سے زیادہ برداشت شدہ خوراک (MTD) سے گنا زیادہ، یعنی 500 ng kg-1۔ [61] سیسٹیمیٹک IL-12 تھراپی کا ایک اور اہم ضمنی اثر جو کلینیکل اسٹڈیز میں دیکھا گیا ہے وہ ہے IL-12 کی دوسری انتظامیہ کے بعد انکولی اینٹی سوزش ردعمل کا آغاز، جو افادیت میں کمی کا باعث بنتا ہے۔ [20,21] اس طرح کے رجحان کا تعلق سوزش مخالف IL-10 کی زیادہ پیداوار، اور IFN-𝛾، TNF-𝛼، اور IL{{ کی طرح سوزش کے حامی سائٹوکائنز کے زوال سے متعلق منفی تاثرات کے طریقہ کار سے ہے۔ 67}}۔ اینٹیٹیمر اثرات. خاص طور پر، Nano-IL-12 کے ساتھ علاج نے ٹیومر میں IL-10 ارتکاز میں اضافہ نہیں کیا، IFN-𝛾، TNF-𝛼، اور IL-6 کی اعلی انٹراٹومورل سطح کو برقرار رکھا۔

تصویر 6. نینو-IL-12 چھاتی کے ٹیومر کو ختم کرنے کے لیے امیون چیک پوائنٹ انحیبیٹرز کے ساتھ ہم آہنگی پیدا کرتا ہے۔ آرتھوٹروپک اور میٹاسٹیٹک TNBC دونوں ماڈلز میں، چوہوں کو PBS، IL-12 + ICIs (اینٹی CTLA4 اور اینٹی PD-1)، اور Nano-IL-12 + ICIs علاج (خوراک) حاصل کرنے کے لیے گروپ کیا گیا تھا۔ اور علاج کا شیڈول بالترتیب اوپری پینلز میں اسکیم میں دکھایا گیا تھا)۔ a) Nano-IL-12 اور ICIs کا امتزاج علاج تمام چوہوں میں آرتھوٹوپک ٹیومر کے مکمل خاتمے کا باعث بنا۔ انفرادی ٹیومر کی ترقی کے منحنی خطوط بائیں پینل میں دکھائے گئے ہیں۔ ٹیومر کا اوسط حجم اور بقا کے منحنی خطوط اوپری دائیں پینل میں دکھائے گئے ہیں۔ علاج شدہ چوہوں نے ممری کو 4T1 خلیات کے ساتھ دوبارہ چیلنج انجیکشن کے خلاف مضبوط دفاع دکھایا، علاج شدہ چوہوں (نیچے دائیں پینل) پر ٹیومر کی نشوونما کے بغیر۔ ب) نینو-IL-12 اور ICIs کی امتزاج تھراپی نے میٹاسٹیٹک ٹیومر کے بڑھنے کے خلاف مضبوط روک تھام ظاہر کی۔ علاج کے بعد (23 دن)، نینو-IL-12 + ICIs کے امتزاج تھراپی کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں کے پھیپھڑوں نے واضح طور پر کم میٹاسٹیسیس دکھایا، جو نمائندہ تصاویر (سبز تیر: میکروسکوپک میٹاسٹیسیس) اور ہسٹولوجیکل تشخیص (اسکیل بار {{21}) کے ذریعہ دکھایا گیا ہے۔ }} μm) بائیں پینل میں پیش کیا گیا۔ Nano-IL-12 + ICIs کے امتزاج کی تھراپی نے بالآخر علاج کیے گئے تمام چوہوں میں مکمل ردعمل کا باعث بنا، جیسا کہ بقا کے منحنی خطوط (اوپری دائیں پینل) سے ظاہر ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، علاج کرنے والے چوہوں نے 4T1 خلیات (نیچے دائیں پینل) کے انجیکشن کے ذریعہ ٹیومر کے دوبارہ چیلنج کے خلاف مضبوط دفاع کا مظاہرہ کیا۔ (ڈیٹا اوسط ± SEM کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ n=6 چوہوں فی گروپ؛ p اقدار کا حساب لاگ رینک کے تجزیہ کے ذریعے کیا جاتا ہے)۔

چونکہ IL-12 کو سب سے زیادہ طاقتور امیونوسٹیمولیٹری سائٹوکائنز میں شمار کیا جاتا ہے، اس لیے IL-12-کی حوصلہ افزائی زہریلا کو کم کرنے اور اس کی تاثیر کو ممکن بنانے کے لیے کئی طریقوں کا شدت سے جائزہ لیا جا رہا ہے۔ براہ راست انٹراٹومورل انجیکشن کا استعمال کرنے والی حکمت عملی، جیسے کہ IL-12 اور ملحقہ،[62] اور پلاسمڈ DNA[63] یا میسنجر RNA[64] انکوڈنگ IL-12 پر مبنی فارمولیشن، سیٹو میں سائٹوکائن پیدا کرنے کے لیے، کر سکتے ہیں۔ علاج کے اشاریہ کو زیادہ سے زیادہ بنائیں۔ تاہم، مقامی انتظامیہ کو کلینک میں کئی پابندیوں کا سامنا کرنا پڑ سکتا ہے، جس میں ٹیومر کی غیر انجیکشن جگہوں پر بڑھتے ہوئے علاج، [65] آپریٹر پر منحصر افادیت، [66] ٹیومر میں انجکشن کی گئی ادویات کی غیر مساوی تقسیم، [67] اور رساو کی حوصلہ افزائی آف ٹارگٹنگ ڈیلیوری۔ مزید برآں، دور دراز کے میٹاسٹیسیس کے خلاف انٹراٹیمورلی انجیکشن فارمولیشنز کی اینٹی کینسر سرگرمی بڑی حد تک ایک abscopal اثر کی متغیر افادیت پر انحصار کرتی ہے، جس نے کلینیکل اسٹڈیز [70-72] میں کم وقوع پذیری کی شرح ظاہر کی ہے اور ممکن ہے کہ وہ مدافعتی سگنلز پر قابو پانے کے قابل نہ ہوں۔ میٹاسٹیسیس میں [73] سیسٹیمیٹک انٹراوینس انجیکشن کے ذریعے نانو-IL-12 کا بحفاظت انتظام کرنے کا امکان، جو کہ ایک معیاری طبی طریقہ کار ہے، پیشین گوئی کے قابل فارماکوکینیٹکس کی اجازت دے سکتا ہے اور خون کی فراہمی کے ذریعے تمام ٹیومر سائٹس تک رسائی کی صلاحیت رکھتا ہے۔ IL-12-کی بنیاد پر Fc-فیوژن پروٹین[14] اور امیونو سائیٹوکائنز[11–13] بھی NanoIL-12 کے ساتھ ان فوائد کا اشتراک کرتے ہیں۔ تاہم، ان مرکبات میں IL-12 جزو نظامی طور پر فعال ہے، جو حفاظتی خدشات کو جنم دیتا ہے۔ مثال کے طور پر، IL-12 کے طویل گردش کرنے والے فیوژن پروٹینوں نے سیرم IFN-𝛾[74,75] کی اعلی سطح ظاہر کی ہے اور IL-12 مدافعتی سائٹوکائنز نے ہدف سے باہر کی جگہوں پر جمع ہونے کو دکھایا ہے۔[76, 77] Nano-IL-12 کی اسپیٹیو ٹیمپورل ایکٹیویشن کو کنٹرول کرنے کی صلاحیت ٹیومر کو نشانہ بنانے میں مخصوصیت کے ساتھ ایک محفوظ اور مضبوط حکمت عملی فراہم کر سکتی ہے۔

cistanche tubulosa-antitumor کے فوائد

ہمارے موجودہ مطالعے کی ایک حد یہ ہے کہ نینو-IL-12 ماؤس IL-12 پر مبنی ہے۔ اس بات کو مدنظر رکھتے ہوئے کہ ماؤس IL-12 اور انسانی IL-12 کے درمیان ہم آہنگی تقریباً 60–70% ہے، سرگرمی کے ساتھ انسانی IL-12-کی بنیاد پر نانو سائیٹوکائن کی تشکیل کا تعین کرنے کے لیے مزید مطالعات ضروری ہوں گی۔ حفاظتی پروفائلز جو ماؤس پر مبنی نظام سے موازنہ کر سکتے ہیں۔ خوش آئند بات یہ ہے کہ ابتدائی ٹیسٹوں سے معلوم ہوا ہے کہ ہمارے مطالعے میں استعمال ہونے والے پولیمر انسانی IL-12 کو بھی اسی طرح کی pH حساسیت کے ساتھ ڈھال سکتے ہیں۔ مزید برآں، جیسا کہ پولیمر کو ٹھیک ٹھیک انجنیئر کیا جا سکتا ہے، اس لیے انسانی استعمال کے لیے موزوں spatiotemporal پروفائلز کے ساتھ انسانی IL{10}} پر مبنی نظام تیار کرنا ممکن ہو گا۔ آخر میں، Nano-IL-12 نے بحیثیت نینو سائٹوکائنز نے سیسٹیمیٹک انتظامیہ پر IL-12 سرگرمی کا موثر اسپیٹیو ٹیمپورل کنٹرول حاصل کیا، جس سے پرائمری اور میٹاسٹیٹک کولڈ ٹیومر میں تسلی بخش حفاظت اور علاج کے نتائج حاصل کرنے کے لیے انٹراٹیمورل امیونٹی کے درست محرک کو یقینی بنایا گیا۔ ماڈلز، چوکی ناکہ بندی کے ساتھ ہم آہنگی پیدا کرنا۔ چونکہ Nano-IL-12 کو جمع کرنے کے لیے استعمال ہونے والے پولیمر مختلف مالیکیولر وزن اور سطحی چارج کے ساتھ پروٹین کی ایک وسیع رینج کو سمیٹنے کے لیے انجنیئر کیے جا سکتے ہیں، اس لیے سسٹم میں وسیع تر ایپلیکیشن کے امکانات ہیں، جیسے کہ دیگر علاجاتی سائٹوکائنز کو انکیپسول کرنا یا یہاں تک کہ سائٹوکائن کاک ٹیلز۔ مزید یہ کہ، پی ایچ کے علاوہ دیگر محرکات کو محسوس کرنے کے لیے پولیمرک نظام کو مزید انجنیئر کیا جا سکتا ہے، [78] نینو سائٹوکائنز کو مختلف ٹیومر مائکرو ماحولیات کو نشانہ بنانے کے لیے ڈیزائن کیا جا سکتا ہے۔ آخر میں، ملازم پولیمر اور نینو سائٹوکائنز کی ترجمہی صلاحیت پر غور کرتے ہوئے، یہ حکمت عملی کینسر کے امیونو تھراپی کے مستقبل کے لیے وعدہ رکھتی ہے۔

حوالہ جات

[1] اے جے کورمن، ایس سی گیریٹ تھامسن، این لونبرگ، نیٹ۔ Rev. Drug Discovery 2021, 21, 509.

[2] اے رباس، جے ڈی ولچوک، سائنس 2018، 359، 1350۔

[3] A. Haslam, V. Prasad, JAMA Network Open 2019, 2, e192535.

[4] پی شرما، بی اے صدیقی، ایس آنندھن، ایس ایس یادو، ایس کے سبودھی، جے گاو، ایس گوسوامی، جے پی ایلیسن، کینسر ڈسکوری 2021، 11، 838۔

[5] JD مارٹن، H. Cabral، T. Stylianopoulos، RK Jain، Nat. Rev. Clin. اونکول۔ 2020، 17، 251۔

[6] CM Fares, EM Van Allen, CG Drake, JP Allison, S. HuLieskovan, Am. Soc کلین اونکول۔ تعلیم کتاب 2019، 39، 147۔

[7] K. Chamoto, R. Hatae, T. Honjo, Int. جے کلین اونکول۔ 2020، 25، 790۔

[8] KG Nguyen, MR Vrabel, SM Mantooth, JJ Hopkins, ES Wagner, TA Gabaldon, DA Zaharoff, Front. امیونول۔ 2020، 11، 2510۔

[9] EA Chiocca, AB Gelb, CC Chen, G. Rao, DA Reardon, PY Wen, WL Bi, P. Peruzzi, C. Amidei, D. Triggs, L. Seften, G. Park, J. Grant, K Truman, JY Buck, N. Hadar, N. Demars, J. Miao, T. Estupinan, J. Loewy, K. Chadha, J. Tringali, L. Cooper, R. V Lukas, Neuro-oncology 2021, 24, 951.

[10] B. Mirlekar، Y. Pylayeva-Gupta، Cancers 2021, 13, 167.

[11] A. Mansurov, J. Ishihara, P. Hosseinchi, L. Potin, TM Marchell, A. Ishihara, J.-MM Williford, AT Alpar, MM Raczy, LT Gray, MA Swartz, JA Hubbell, Nat. بایومیڈ انج. 2020، 4، 531۔

[12] N. Pasche، D. Neri، Drug Discovery Today 2012, 17, 583.

[13] J. Strauss, CR Heery, JW Kim, C. Jochems, RN Donahue, AS Montgomery, S. McMahon, E. Lamping, JL Marte, RA Madan, M. Bilusic, MR Silver, E. Bertotti, J. شلوم، جے ایل گلی، کلین۔ کینسر ریس 2019، 25، 99۔

[14] K. Jung, JH Ha, JE Kim, JA Kim, YJ Kim, CH Kim, YS Kim, OncoImmunology 2018, 7, e1438800.

[15] A. Mansurov, P. Hosseinchi, K. Chang, AL Lauterbach, LT Gray, AT Alpar, E. Budina, AJ Slezak, S. Kang, S. Cao, A. Solanki, S. Gomes, J.- ایم۔ ولیفورڈ، ایم اے سوارٹز، جے ایل مینڈوزا، جے ایشیہارا، جے اے ہبل، نیٹ۔ بایومیڈ انج. 2022، 6، 819۔

[16] ایچ ڈی چانگ، اے ریڈبرچ، ماہر ریورینڈ کلین۔ امیونول۔ 2014، 3، 709۔

[17] H. Chang, A. Radbruch, D. Rheumaforschungszentrum, Ann. NY Acad. سائنس 2007، 1109، 40۔

[18] S. Tugues, SH Burkhard, I. Ohs, M. Vrohlings, K. Nussbaum, J. Vom Berg, P. Kulig, B. Becher, Cell Death Differ. 2014، 22، 237۔

[19] C. Asselin-Paturel, M. Isabelle Vergnon, B. Hamid Echchakir, M. Guillaume Dorothé, M. Sé vrine Blesson, M. Franç oise Gay, B. Fathia Mami-Chouaib, S. Choaiib, Cancer 2001, 91، 113۔

[20] JEA Portielje, CHJ Lamers, WHJ Kruit, A. Sparreboom, RLH Bolhuis, G. Stoter, C. Huber, JW Gratama, Clin. کینسر ریس 2003، 9، 76۔

[21] جے پی لیونارڈ، ایم ایل شرمین، جی ایل فشر، ایل جے بکانن، جی لارسن، ایم بی اٹکنز، جے اے سوسمین، جے پی ڈچر، این جے ووگلزانگ، جے ایل ریان، بلڈ 1997، 90، 2541۔

[22] E. Bajetta, M. Del Vecchio, R. Mortarini, R. Nadeau, A. Rakhit, L. Rimassa, C. Fowst, A. Borri, A. Anichini, G. Parmiani, Clin. کینسر ریس 1998، 4، 75۔

[23] C. Corbet, O. Feron, Nat. Rev. Cancer 2017, 17, 577. [24] M. Bellone, A. Calcinotto, P. Filipazzi, A. De Milito, S. Fais, L. Rivoltini, Oncoimmunology 2013, 2, e22058.

[25] S. Damgaci, A. Ibrahim-Hashim, PM Enriquez-Navas, S. PilonThomas, A. Guvenis, RJ Gillies, Immunology 2018, 154, 354.

[26] J. Liu, H. Cabral, B. Song, I. Aoki, Z. Chen, N. Nishiyama, Y. Huang, K. Kataoka, P. Mi, ACS Nano 2021, 15, 13526.

[27] A. Tao, GLo Huang, K. Igarashi, T. Hong, S. Liao, F. Stellacci, Y. Matsumoto, T. Yamasoba, K. Kataoka, H. Cabral, Macromol. بائیوسی 2020، 20، 1900161۔

[28] Y. Mochida, H. Cabral, Y. Miura, F. Albertini, S. Fukushima, K. Osada, N. Nishiyama, K. Kataoka, ACS Nano 2014, 8, 6724.

[29] جے ایس سک، کیو سو، این کم، جے ہینس، ایل ایم اینسائن، ایڈو۔ ڈرگ ڈیلیوری Rev. 2016, 99, 28.

[30] CY Sun, Y. Liu, JZ Du, ZT Cao, CF Xu, J. Wang, Angew. Chem.، int. ایڈ۔ 2016، 55، 1010۔

[31] اے ابراہیم ہاشم، وی ایسٹریلا، کینسر میٹاسٹیسیس Rev. 2019، 38، 149۔

[32] G. Trinchieri, F. Gerosa, J. Leukocyte Biol. 1996، 59، 505۔

[33] T. Starciuc, B. Malfait, F. Danede, L. Paccou, Y. Guinet, NT Correia, A. Hedoux, J. Pharm. سائنس 2020، 109، 496۔

[34] G. Egawa, S. Nakamizo, Y. Natsuaki, H. Doi, Y. Miyachi, K. Kabashima, Stem Cells Int. 2013، 3، 1932۔

[35] ایس جینتی، بی پی کوپولو، کے جی نگوین، ایس جی اسمتھ، بی کے فیلبر، ٹی کے ایس کمار، ڈی اے ظہروف، اسٹیم سیلز انٹ۔ 2017، 7، 5360۔

[36] MP Hwuang, RJ Fecek, T. Qin, WJ Storkus, Y. Wang, J. کنٹرولڈ ریلیز 2019, 318, 270۔

[37] Q. Wang, Y. Wang, J. Ding, C. Wang, X. Zhou, W. Gao, H. Huang, F. Shao, Z. Liu, Nature 2020, 579, 421.

[38] جی ترنچیری، انو۔ Rev. Immunol. 1995، 13، 251۔

[39] L. Meyaard, E. Hovenkamp, ​​SA Otto, F. Miedema, J. Immunol. 1996، 156، 2776۔

[40] A. Cope, GLe Friec, J. Cardone, C. Kemper, Trends Immunol. 2011، 32، 278۔

[41] SP Kerkar, RS Goldszmid, P. Muranski, D. Chinnasamy, Z. Yu, RN Reger, AJ Leonardi, RA Morgan, E. Wang, FM Marincola, G. Trinchieri, SA Rosenberg, NP Restifo, J. Clin . سرمایہ کاری کریں۔ 2011، 121، 4746۔

[42] W. Lasek, R. Zago˙zd˙zon, M. Jakobisiak, Cancer Immunol. امیونودر۔ 2014، 63، 419۔

[43] C. Zhang, J. Zhang, J. Niu, Z. Zhou, J. Zhang, Z. Tian, ​​Hum. امیونول۔ 2008، 69، 490۔

[44] NG Jacobson, SJ Szabo, RM Weber-Nordt, Z. Zhong, RD Schreiber, JE Darnell, KM Murphy, J. Exp. میڈ. 1995، 181، 1755۔

[45] K. Mimura, JL Teh, H. Okayama, K. Shiraishi, LF Kua, V. Koh, DT Smoot, H. Ashktorab, T. Oike, Y. Suzuki, Z. Fazreen, BR Asuncion, A. Shabbir , WP Yong, J. So, R. Soong, K. Kono, Cancer Sci. 2018، 109، 43۔

[46] T. Watanabe, S. Watanabe, G. Neumann, H. Kida, Y. Kawaoka, J. Virol. 2002، 76، 767۔

[47] AS Bergot, A. Durgeau, B. Levacher, BM Colombo, JL Cohen, D. Klatzmann, Cancer Gene Ther. 2010، 17، 645۔

[48] ​​R. Dent, M. Trudeau, KI Prichard, WM Hanna, HK Kahn, CA Sawka, LA Lickley, E. Rawlinson, P. Sun, SA Narod, Clin. کینسر ریس 2007، 13، 4429۔

[49] BG Haffty, Q. Yang, M. Reiss, T. Kearney, SA Higgins, J. Weidhaas, L. Harris, W. Hait, D. Toppmeyer, J. Clin. اونکول۔ 2006، 24، 5652۔

[50] AV Paschall, K. Liu, J. Visualized Exp. 2016، 2016، 54040۔

[51] اے ماررا، جی وائل، جی کریگلیانو، بی ایم سی میڈ۔ 2019، 17، 90۔

[52] R. Thomas, G. Al Khadairi, J. Decock, Front. اونکول۔ 2021، 10، 3464۔

[53] S. Adams, P. Schmid, HS Rugo, EP Winer, D. Loirat, A. Awada, DW Cescon, H. Iwata, M. Campone, R. Nanda, R. Hui, G. Curigliano, D. ٹاپمیئر، جے او شاگنیسی، ایس لوئی، ایس پالچ شیمون، اے آر ٹین، ڈی کارڈ، جے ژاؤ، وی کارانزا، جے کورٹیس، این۔ اونکول۔ 2019، 30، 397۔

[54] LY Dirix, I. Takacs, G. Jerusalem, P. Nikolinakos, HT Arkenau, A. Forero-Torres, R. Boccia, ME Lippman, R. Somer, M. Smakal, LA Emens, B. Hrinczenko, W ایڈن فیلڈ، جے گرٹلر، اے وون ہیڈبریک، ایچ جے گروٹ، کے چن، ای پی ہیملٹن، بریسٹ کینسر ریس۔ علاج کریں۔ 2018، 167، 671۔

[55] EA Mittendorf, AV Philips, F. Meric-Bernstam, N. Qiao, Y. Wu, S. Harrington, X. Su, Y. Wang, AM Gonzalez-Angulo, A. Akcakanat, A. Chawla, M. Curran, P. Hwu, P. شرما, JK Litton, JJ Molldrem, G. Alatrash, Cancer Immunol. Res. 2014، 2، 361۔

[56] MT Barrett, E. Lenkiewicz, S. Malasi, A. Basu, JH Yearley, L. Annamalai, AE McCullough, HE Kosiorek, P. Narang, MA Wilson Sayres, M. Chen, KS Anderson, BA Pockaj, Breast کینسر ریس 2018، 20,71۔

[57] P. Schmid, S. Adams, HS Rugo, A. Schneeweiss, CH Barrios, H. Iwata, V. Diéras, R. Hegg, S.-A. آئی ایم، جی ایس رائٹ، وی ہینسل، ایل مولینرو، ایس وائی چوئی، آر فنکے، اے حسین، ای پی وائنر، ایس لوئی، ایل اے ایمنس، این اینگل۔ جے میڈ 2018، 379، 2108۔

[58] MK Gately, U. Gubler, MJ Brunda, RR Nadeau, TD Anderson, JM Lipman, U. Sarmiento, Ther. امیونول۔ 1994، 1، 187۔

[59] UM Sarmiento, JH Riley, PA Knaack, JM Lipman, JM Becker, MK Gately, R. Chizzonite, TD Anderson, Lab. سرمایہ کاری کریں۔ 1994، 71، 862۔

[60] VM Eng, BD Car, B. Schnyder, M. Lorenz, S. Lugli, M. Aguet, TD Anderson, B. Ryffel, VFJ Quesniaux, J. Exp. میڈ. 1995، 181، 1893۔

[61] JA Gollob, KG Veenstra, RA Parker, JW Mier, DF McDermott, D. Clancy, L. Tutin, H. Koon, MB Atkins, J. Clin. اونکول۔ 2003، 21، 2564۔

[62] Y. اگروال، LE ملنگ، JYH Chang، L. Santollani، A. Sheen، EA Lutz، A. Tabet، J. Stinson، K. Ni، KA Rodrigues، TJ Moyer، MB Melo، DJ Irvine، KD Wittrup ، نیٹ۔ بایومیڈ انج. 2022، 6، 129۔

[63] ایم ایل لوکاس، ایل ہیلر، ڈی کوپولا، آر ہیلر، مول۔ وہاں 2002، 5، 668۔

[64] SL Hewitt, D. Bailey, J. Zielinski, A. Apte, F. Musenge, R. Karp, S. Burke, F. Garcon, A. Mishra, S. Gurumurthy, A. Watkins, K. Arnold, J. Moynihan, E. Clancy-Thompson, K. Mulgrew, G. Adjei, K. Deschler, D. Potz, G. Moody, DA Leinster, S. Novick, M. Sulikowski, C. Bagnall, P. Martin, JM Lapointe, H. Si, C. Morehouse, M. Sedic, RW Wilkinson, R. Herbst, et al., Clin. کینسر ریس 2020، 26، 6284۔

[65] RS Riley, CH June, R. Langer, MJ Mitchell, Nat. Rev. Drug Discovery 2019, 18, 175.

[66] I. Melero, E. Castanon, M. Alvarez, S. Champiat, A. Marabelle, Nat. Rev. Clin. اونکول۔ 2021، 18، 558۔

[67] ایل ایم وین، جے ٹی وو، ڈی ایچ کرن، کینسر ریس۔ 2003، 63، 1317۔

[68] J. Hong, C.-O. یون، بی ایم سی بائیو میڈ۔ انج. 2019، 1، 17۔

[69] A. Mukhopadhyay, J. Wright, S. Shirley, DA Canton, C. Burkart, RJ Connolly, JS Campbell, RH Pierce, Gene Ther. 2018، 26، 1۔

[70] MA Postow, MK Callahan, CA Barker, Y. Yamada, J. Yuan, S. Kitano, Z. Mu, T. Rasalan, M. Adamow, E. Ritter, C. Sedrak, AA Jungbluth, R. Chua ، AS یانگ، R.-A. Roman, S. Rosner, B. Benson, JP Allison, AM Lesokhin, S. Gnjatic, JD Wolchok, N. Engl. جے میڈ 2012، 366، 925۔

[71] EF Stamell، JD Wolchok، S. Gnjatic، NY Lee، I. Brownell، Int. جے ریڈیٹ۔ Oncol.، Biol.، Phys. 2013، 85، 293۔

[72] ای بی گولڈن، ایس ڈیماریا، پی بی شیف، اے چاچووا، ایس سی فارمینٹی، کینسر امیونول۔ Res. 2013، 1، 365۔

[73] TY Seiwert، AP Kiess، J. Clin. اونکول۔ 2021، 39، 1۔

[74] E. Gutierrez, M. Bigelow, C. LaCroix, P. Kirby, L. Markowitz, M. Naill, S. O'Neil, PA Hull, J. Engelhardt, J.-M. Cuillerott, A. Cheung, A. Grinberg, N. Wagtmann, Cancer Res. 2021، 81، 1714

[75] R. ورما، K. لیو، C. Bonzon، R. راشد، N. Rodriguez، N. Hassanzadeh-Kiabi، C. Ardila، SY Chu، US Muchhal، JR Desjarlais، MJ Bernett، Cancer Res. 2020، 80، 5549۔

[76] جے شریفی، ایل اے خولی، پی ہو، ایس کنگ، اے ایل ایپسٹین، ہائبرڈ ہائبرڈومکس 2001، 20، 305۔

[77] C. Halin, S. Rondini, F. Nilsson, A. Berndt, H. Kosmehl, L. Zardi, D. Neri, Nat. بائیو ٹیکنالوجی 2002، 20، 264۔

[78] S. Mura, J. Nicolas, P. Couvreur, Nat. میٹر 2013، 12، 991۔

[79] E. Becht, NA Giraldo, L. Lacroix, B. Buttard, N. Elarouci, F. Petitprez, J. Selves, P. Laurent-Puig, C. Sautès-Fridman, WH Fridman, A. de Reyniès, جینوم بائیول۔ 2016، 17، 218