ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے علاج میں Cistanche Deserticola کے مالیکیولر میکانزم کا تجزیہ

خلاصہ: ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ (SCI) مرکزی اعصابی نظام کی ایک مہلک چوٹ ہے، اور اس وقت مرمت کا کوئی موثر طریقہ نہیں ہے۔ Cistanche.

deserticola deserticola اقتباس ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کا علاج کر سکتا ہے، لیکن کارروائی کا طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے. SCI کے علاج میں Cistanche deserticola deserticola کے مالیکیولر میکانزم کو دریافت کرنے کے لیے نیٹ ورک فارماکولوجی اور Macromolecular ڈاکنگ ٹیکنالوجی کا استعمال کریں۔ Cistanche deserticola deserticola کے فعال اجزاء اور اہداف کی پیشین گوئی چائنیز میڈیسن سسٹمز فارماکولوجی ڈیٹا بیس اور تجزیہ پلیٹ فارم (TCMSP) نے کی ہے۔ SCI سے متعلق اہداف GeneCards، Drug Bank PharmGkb، اور OMIM ڈیٹا بیس سے ہیں، انٹرسیکشن اہداف Venny2.1 کے ذریعے حاصل کیے گئے تھے۔{2}}۔ پروٹین انٹریکشن (پی پی آئی) نیٹ ورک سٹرنگ ڈیٹا بیس اور سائٹوسکیپ سافٹ ویئر کے ذریعے تیار کیا گیا تھا۔ اگلا، بائیو کنڈکٹر پلیٹ فارم کا استعمال کرتے ہوئے کے ای جی جی پاتھ وے کا تجزیہ کیا گیا۔ آٹوڈاک وینا کا استعمال کرتے ہوئے میکومولیکولر ڈاکنگ کی گئی۔ اسکریننگ کے معیار کی بنیاد پر، 6 فعال اجزاء، اور 85 ممکنہ ہدف والے جینز Cistanche deserticola سے حاصل کیے گئے تھے۔ ایک آن لائن ڈیٹا بیس کے ذریعے، 6737 SCI سے متعلقہ اہداف اور Cistanche deserticola deserticola اور SCI کے 74 انٹرسیکشن اہداف حاصل کیے گئے۔ فعال اجزاء کے ہدف کے نیٹ ورک میں، - Glutosterol، Quercetin، اور Arachidonic ایسڈ اہم فعال اجزاء ہیں۔ PPI نیٹ ورک میں، HIF1A، FOS، AR، RELA، EGFR، اور CCD1 بنیادی اہداف ہیں۔ KEGG تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ SCI کے علاج کے لیے Cistanche deserticola کے اہم راستے میں PI3K-Akt، TNF، اور MAPK سگنلنگ راستے شامل ہیں۔ Macromolecular ڈاکنگ میں، Cistanche deserticola کا فعال مرکب Quercetin بنیادی ہدف کے ساتھ اچھا تعلق رکھتا ہے۔ آخر میں، وٹرو تجرباتی تصدیق سے پتہ چلتا ہے کہ SCI پر Cistanche deserticola deserticola کا علاج بنیادی طور پر اس کے فعال جزو Quercetin کے ذریعے سوزش اور آکسیڈیشن کو روکتا ہے، اس طرح SCI کے مائیکرو ماحولیات کو بہتر بناتا ہے، یہ Cistanche deserticola کے مزید طبی استعمال کے لیے ایک نیا خیال فراہم کرتا ہے۔ ایس سی آئی کا علاج

Cistanche-Tonifying گردے کے اثرات

گردے کی بیماری کی مصنوعات کے لیے Cistanche دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

مطلوبہ الفاظ: ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ؛ Cistanche deserticola; سالماتی میکانزم؛ نیٹ ورک فارماکولوجی؛ اشتعال انگیز ردعمل؛ آکسیکرن ردعمل

ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ (SCI) مرکزی اعصابی نظام کا ایک جان لیوا زخم ہے۔ مرکزی اعصابی نظام کی مرمت کی محدود صلاحیت کی وجہ سے، دنیا بھر میں SCI کے 27 ملین سے زیادہ مریض اس وقت موٹر اور حسی عوارض کے ساتھ جدوجہد کر رہے ہیں [1]۔ ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے بعد پیچیدہ پیتھولوجیکل تبدیلیاں ہوتی ہیں، جس میں بقایا نیوران کی تعداد اور مسلسل سوزش کے رد عمل اکثر حتمی تشخیص کا تعین کرتے ہیں۔ بنیادی صدمے کے بعد، مقامی خون بہنے سے سوزش والے خلیات واسو ایکٹیو پیپٹائڈس اور سائٹوکائنز ریڑھ کی ہڈی میں بہہ جاتے ہیں۔ پروپوپٹوٹک سگنلنگ پاتھ ویز کی ایکٹیویشن، سیل پارگمیبلٹی میں تبدیلیاں، اور اسکیمک نقصان بڑی تعداد میں فنکشنل نیورونز کے نقصان اور ڈیمیلینیشن کا باعث بنتے ہیں، جو ریڑھ کی ہڈی کے مقامی مائیکرو ماحولیات کو مکمل طور پر تباہ کر دیتے ہیں [2]۔ عروقی تباہی کے بعد خارج ہونے والے سوزشی خلیے سوزش والی سائٹوکائنز تیار کرتے ہیں، جیسے TNF- اور IL-1، یہ سائٹوکائنز ذیلی مرحلے [3] کے بعد زخمی ہونے والے حصے میں سوزش کا کردار ادا کرتی رہتی ہیں۔ چوٹ لگنے کے بعد سوزش کی وجہ سے شروع ہونے والے رد عمل کا ایک سلسلہ، خون ریڑھ کی ہڈی کی رکاوٹ کی تباہی کے ساتھ، آہستہ آہستہ ریڑھ کی ہڈی کی سوجن اور مزید مکینیکل کمپریشن کو بڑھاتا ہے، جو بعد میں ریڑھ کی ہڈی کی ثانوی چوٹ کا باعث بنے گا [4]۔ لہذا، مقامی چوٹ کے بعد، زخمی ریڑھ کی ہڈی کی مرمت کو فروغ دینے کے لیے مائیکرو ماحولیات کو ایڈجسٹ کرنا ایس سی آئی کے علاج کی کلید ہے۔

cistanche tubulosa-Tonifying kidney کے فوائد

روایتی چینی ادویات کو ریڑھ کی ہڈی کے مائکرو ماحولیات کے استحکام کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ Cistanche deserticola Herba "صحرائی ginseng" کے طور پر جانا جاتا ہے. Cistanche deserticola کے فارماسولوجیکل اثرات کی ایک وسیع رینج ہے، جو آزاد ریڈیکل سرگرمی کو کم کر سکتی ہے، Lipid peroxidation، anti-tumor، anti-inflammatory اور دیگر اثرات کو روک سکتی ہے، اور بہت سی بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال کی جا سکتی ہے۔ تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche deserticola SCI [5-6] پر علاج کے اثرات رکھتا ہے۔ تاہم، SCI کے علاج میں Cistanche deserticola کا طریقہ کار زیادہ واضح نہیں ہے۔

فارماکولوجی کی جدید تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ روایتی چینی ادویات میں بیماریوں کے علاج میں پیچیدہ میکانزم اور کثیر جہتی تعاملات ہیں۔ نیٹ ورک فارماکولوجی SCI کے علاج میں روایتی چینی ادویات کے ممکنہ طریقہ کار کو "ڈرگ ایکٹیو انگریڈینٹ ٹارگٹ ڈیزیز" نیٹ ورک بنا کر واضح کر سکتی ہے [7]۔ نیٹ ورک فارماکولوجی اور میکرومولیکولر ڈاکنگ ٹکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے، سوزش اور آکسیڈیشن کو روکنے، مائیکرو ماحولیات کے توازن کو منظم کرنے، اور SCI کے علاج میں Cistanche deserticola ایکٹو جزو Quercetin کے ممکنہ طریقہ کار کو دریافت کریں، اس طرح ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے لیے ایک نئی علاج معالجہ فراہم کی جاتی ہے۔

ریگستانی رہنے والا cistanche-Tonifying گردہ

1 مواد اور طریقے

1.1 ڈیٹا بیس اور سافٹ ویئر

استعمال شدہ ڈیٹا بیس اور سافٹ ویئر ٹیبل 1 میں دکھایا گیا ہے۔

جدول 1 ڈیٹا بیس اور سافٹ ویئر

1.2 موثر فعال اجزاء اور Cistanche deserticola deserticola کے ہدف کی پیش گوئی

Cistanche deserticola کے فعال اجزاء اور اہداف حوالہ کے ذریعہ حاصل کیے گئے تھے [8]

1.3 بیماری کے اہداف کی اسکریننگ

کلیدی لفظ "غیر جانبدار بنیادی چوٹ" کے ساتھ، DrugBank، PharmaGkb، GeneCards، اور OMIM ڈیٹا بیس سے اہداف جمع کریں، ڈپلیکیٹ اہداف کو ہٹائیں، اور Venny 2.1 کے ساتھ منشیات کے اہداف اور بیماری کے اہداف کو اسکرین کریں۔{2}} کے لیے Cistanche deserticola کے ممکنہ اہداف حاصل کرنے کے لیے ایس سی آئی کا علاج

1.4 "چینی ادویات - فعال اجزاء - ہدف - بیماری" کا نیٹ ورک ڈایاگرام بنائیں

ممکنہ اہداف کو آپس میں جوڑنا Cytoscape سافٹ ویئر میں درآمد کیا جاتا ہے تاکہ "چینی ادویات - فعال اجزاء - اہداف - امراض" کا نیٹ ورک ڈایاگرام بنایا جا سکے۔

1.5 پی پی آئی نیٹ ورک کی تعمیر

پی پی آئی نیٹ ورک سٹرنگ ڈیٹا بیس اور سائٹوسکیپ سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا ہے۔ اس عمل کے دوران، ممکنہ تقاطع کے اہداف کو سٹرنگ ڈیٹا بیس میں پروٹین کے تعاملات حاصل کرنے کے لیے داخل کیا جاتا ہے۔ Cytoscape سافٹ ویئر PPI نیٹ ورک کے تعاملات کو ظاہر کر سکتا ہے اور ڈگری کی قدروں کی بنیاد پر بنیادی اہداف حاصل کر سکتا ہے۔

1.6 KEGG راستے کی افزودگی کا تجزیہ

بائیو کنڈکٹر پلیٹ فارم (http://bioconductor.org/biocLite.R) کا استعمال کرتے ہوئے KEGG پاتھ وے کا تجزیہ ہدف جینز پر کیا گیا۔ پی کے نازک موڑ پر<0.05, corresponding bar charts were drawn.

Cistanche پاؤڈر - Tonifying گردے

1.7 میکرو مالیکولر ڈاکنگ

Cistanche deserticola کے بنیادی ہدف اور ایکٹو اجزاء کو منتخب کریں، اور Macromolecular docking analysis کے لیے Autodock Vina کا استعمال کریں۔ بائنڈنگ انرجی (وابستگی) جتنی چھوٹی ہوگی، بنیادی پروٹین اور فعال جزو کے درمیان تعامل اتنا ہی مستحکم ہوگا۔

1.8 سیلولر سطح پر سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کی توثیق

1.8.1 سیل کی سطح پر سوزش مخالف سرگرمی کی تصدیق: (1) PC12 خلیات (شنگھائی میں چینی اکیڈمی آف سائنسز کے سیل بینک سے خریدے گئے)، Quercetin (Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd. سے خریدے گئے)، ثقافت کا ذریعہ ایک مکمل میڈیم ہے (90 فیصد ڈی ایم ای ایم میڈیم پلس 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم پلس 1 فیصد ڈبل اینٹی باڈی)، کلچر بوتل میں PC12 سیلز انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 5 فیصد CO2 سنترپتی نمی کے ساتھ کلچر ہوتے ہیں، اور تجربے میں استعمال ہونے والے خلیات لوگاریتھمک نمو کے مرحلے میں ہیں (2) ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی پی سی 12 سیل کی چوٹ پر کوئرسیٹن کا اثر: خلیوں کو 96 اچھی پلیٹوں (5 × 104/mL) میں کلچر کیا گیا تھا۔ تجربے کو تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: کنٹرول گروپ (بغیر کسی علاج کے) اور ماڈل گروپ (5 μG/mL، LPS) اور Quercetin گروپ (LPS پلس Quercetin، جس میں Quercetin کا ​​ارتکاز 5، 25، اور 50 تھا۔ بالترتیب μ Quercetin گروپ: 2 گھنٹے کے لیے مختلف ارتکاز کے Quercetin کے ساتھ پہلے سے علاج کیا جاتا ہے؛ پھر ماڈل گروپ کو 5 μG/mL، LPS میں شامل کیا جاتا ہے، Quercetin گروپ نے 5 μG/mL شامل کیا، LPS 6 گھنٹے تک انکیوبیٹ ہوتا رہا؛ پرانی ثقافت کو ترک کر دیں۔ CCK-8 ری ایجنٹ کے ساتھ اسے درمیانے درجے پر لگائیں۔ انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے اس کے جذب (OD490 قدر) کی پیمائش کریں۔ سیل کی بقا کی شرح کا حساب لگائیں۔ بقا کی شرح=(OD تجرباتی گروپ OD خالی گروپ)/( OD کنٹرول گروپ OD خالی گروپ) × 100 فیصد (3) متعلقہ آکسیڈیشن انڈیکیٹرز کا پتہ لگانے کے لیے ELISA طریقہ: مذکورہ طریقہ کے مطابق پروسیسنگ کے بعد، ہر ارتکاز کے لیے تین متوازی گروپ بنائے گئے تھے۔ کاشت کے 24 گھنٹے کے بعد، ہر گروپ کا سپرنٹنٹ خلیات کو جمع کیا گیا تھا، اور ELISA طریقہ (ہدایات کے مطابق) سپرنٹنٹ میں IL-6 اور TNF کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا- IL-8 کے مواد کا پتہ لگائیں۔

1.8.2 سیلولر سطح پر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی توثیق: (1) 5 × سیل کی کثافت 104 سیلز/ایم ایل کو کاشت کے لیے 96 کنویں پلیٹوں میں ٹیکہ لگائیں۔ تجربے کو تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: کنٹرول گروپ (بغیر کسی علاج کے) اور ماڈل گروپ (500 خلیات) μ Mol/L H2O2) اور Quercetin گروپ (H2O2 پلس Quercetin، جہاں Quercetin کا ​​ارتکاز بالترتیب 5، 12.5 اور 25 ہے۔ μ Mol/L)۔ ماڈل گروپ میں 500 کا اضافہ کریں μ Mol/L H2O2، Quercetin گروپ کو 2h کے لیے مختلف ارتکاز کے Quercetin کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا، اور 500 μ Mol/L H2O2، اور آخری Quercetin گروپس مختلف ارتکاز کے ساتھ 6 گھنٹے تک ثقافت میں شامل رہے۔ پرانے کلچر میڈیم کو ضائع کریں، انکیوبیشن کے لیے MTS ریجنٹ (شنگھائی زی بائیولوجیکل سے خریدا گیا) شامل کریں، اور OD کا تعین کرنے کے لیے 490 nm پر جاذبیت کی قدر کی پیمائش کے لیے انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کا استعمال کریں۔ سیل کی بقا کی شرح کا حساب لگائیں۔ بقا کی شرح=(OD تجرباتی گروپ OD خالی گروپ)/(OD کنٹرول گروپ OD خالی گروپ) × 100 فیصد (2) متعلقہ آکسیکرن اشارے کا پتہ لگانے کے لیے ELISA طریقہ: مذکورہ طریقہ کے مطابق پروسیسنگ کے بعد، تین متوازی گروپس تھے ہر ارتکاز کے لیے ترتیب دیں۔ سیل کلچر کے 24 گھنٹوں کے بعد، سپرنٹنٹ میں SOD، MDA، اور ROS کے مواد کی پیمائش کی گئی۔ ROS لیول کا پتہ ایلابسائنس پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، MDA لیول کا پتہ MDA پرکھ کٹ (Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.) کا استعمال کرتے ہوئے، اور SOD لیول کا پتہ ہدایات کے مطابق Abcam assay kit کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

Cistanche اقتباس پاؤڈر-Tonifying گردے

2 نتائج

2.1 Cistanche deserticola deserticola میں موثر فعال اجزاء اور اہداف کی اسکریننگ

TCMSP ڈیٹا بیس میں Cistanche deserticola deserticola کے تمام موثر فعال اجزاء اور متعلقہ اہداف کی اسکریننگ کے ذریعے، 75 فعال اجزاء اور 85 اہداف پائے گئے۔ اسکریننگ کے معیار کے طور پر OB 30 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر اور DL 0.18 سے بڑا یا اس کے برابر، کل 6 فعال اجزاء حاصل کیے گئے۔ تفصیلات کے لیے جدول 2 دیکھیں۔

جدول 2 SCI کے علاج میں cistanches herba کے اہم فعال اجزاء

تصویر.1 SCI کے علاج میں cistanches herba کے ممکنہ اہداف کی شناخت

تصویر 2 روایتی چینی طب کی بیماری کے ہدف کا نقشہ

تصویر 3 روایتی چینی طب کے اجزاء کی بیماری ریگولیشن نیٹ ورک کو نشانہ بناتی ہے۔

تصویر 4 سیستانچ ہربا تھراپی پی پی آئی نیٹ ورک ڈایاگرام میں ایس سی آئی کے بنیادی اہداف

2.2 وین ڈایاگرام بنائیں

بیماری کے ڈیٹا بیس کا استعمال کرتے ہوئے، ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ سے متعلق 6737 بیماری کے ہدف والے جینوں کی جانچ کی گئی، اور وین ڈایاگرام (شکل 1) تیار کیا گیا۔ آخر کار Cistanche deserticola deserticola سے حاصل کیے گئے چھ موثر فعال اجزاء سے مطابقت رکھنے والے ہدف کے جینوں کو ایک دوسرے سے ملایا گیا، اور 74 عام جین کے اہداف حاصل کیے گئے۔ وین ڈایاگرام Venny2.1 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا، جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔

2.3 "چینی ادویات - فعال اجزاء - اہداف - بیماریوں" کا نیٹ ورک بنائیں

سائٹوسکیپ کا استعمال 74 عام اہداف کا تجزیہ کرنے اور "چائنیز میڈیسن ایکٹیو انگریڈینٹ ٹارگٹ ڈیزیز" (شکل 3) کا ایک انٹرایکشن نیٹ ورک بنانے کے لیے کیا گیا، جس میں 168 کناروں اور 81 نوڈس شامل ہیں۔ نیٹ ورک ڈایاگرام سے یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ Quercetin 68 اہداف سے منسلک ہے، - Glutosterol 15 اہداف سے منسلک ہے، threazinolide 3 اہداف سے منسلک ہے، Arachidonic acid 2 اہداف سے منسلک ہے، اور Liriodendron Chinese resin phenol B dimethyl ether سے منسلک ہے۔ 1 ہدف، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola کے تمام چھ فعال اجزاء بیماری کے اہداف پر کام کر سکتے ہیں، جن میں سے Quercetin بیماری سے سب سے زیادہ قریبی تعلق رکھتا ہے اور نیٹ ورک ڈایاگرام میں بنیادی حیثیت رکھتا ہے۔

2.4 کلیدی ٹارگٹ پروٹین انٹرایکشن (PPI) نیٹ ورک اور بنیادی اہداف حاصل کرنا

پی پی آئی نیٹ ورک 74 نوڈس اور 108 کناروں پر مشتمل ہے، جس کی اوسط نوڈ ڈگری 2.92 ہے (شکل 4a)۔ پہلے چھ اہداف کی ڈگری کی اقدار کو بار چارٹ (شکل 4b) کے ذریعے دکھایا گیا ہے۔ ان میں، FOS، EGFR، RELA، AR، CCD1، اور HIF1A کی ڈگری کی قدریں بالترتیب 26، 22، 22، 18، 18، اور 18 ہیں، جنہیں بنیادی ہدف سمجھا جاتا ہے۔ Cistanche deserticola ان کے ذریعے SCI کے تحفظ میں اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔

2.5 KEGG راستے کی افزودگی کا تجزیہ

KEGG پاتھ وے کے افزودگی کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ 74 ممکنہ کلیدی اہداف کے ذریعے 124 راستے افزودہ کیے گئے تھے، جن میں کیمیکل کارسنوجنیسیس ریسیپٹر ایکٹیویشن، TNF-1 سگنلنگ پاتھ وے، PI3K-Akt سگنلنگ پاتھ وے، اور MAPK سگنلنگ پاتھ وے شامل ہیں۔ abscissa جینوں کی تعداد ہے اور ordinate راستے کا نام ہے، جیسا کہ شکل 5 میں دکھایا گیا ہے۔ یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ Cistanche deserticola متعدد راستوں کے ذریعے متعدد حیاتیاتی عمل کے ضابطے میں حصہ لے کر ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے علاج میں ایک کردار ادا کرتا ہے۔ .

2.6 ڈرگ کمپوزیشن کور ٹارگٹ میکرومولکولر ڈاکنگ

Cistanche deserticola میں بنیادی جزو Quercetin کو بالترتیب FOS، CCND1، HIF1A، EGFR، RELA، اور AR کے ساتھ میکرومولکولر ڈاکنگ کرنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ quercetin کا ​​3D ڈھانچہ اور بنیادی ہدف پروٹین کا ڈھانچہ Macromolecular ڈاکنگ کے لیے AutoDock 4.2.6 سافٹ ویئر میں درآمد کیا گیا تھا۔ مالیکیولر وابستگی جدول 3 میں دکھائی گئی ہے اور ڈاکنگ کا ڈھانچہ شکل 6 میں دکھایا گیا ہے۔ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ نمائندہ کمپاؤنڈ Quercetin ہدف کے ساتھ اچھی ڈاکنگ سرگرمی رکھتا ہے۔ AR Quercetin (-38.22 kJ/mol) کے پابند ہونے میں سب سے زیادہ مستحکم ہے، دوسرا EGFR (-34.44 kJ/mol) ہے۔ اس بات کی تصدیق کی گئی ہے کہ Quercetin کو ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے علاج میں ایک فعال جزو کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

2.7 سیلولر سطح پر سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کی توثیق۔

2.7.1 H2O2 کے ذریعے زخمی ہونے والے PC12 خلیوں کی عملداری پر Quercetin کا ​​اثر: کنٹرول گروپ کے مقابلے، H2O2 مداخلت ماڈل گروپ میں خلیات کی بقا کی شرح 50 فیصد تک کم ہو گئی (###P<0.001); Compared with the model group, the cell survival rate after adding Quercetin gradually increased with the increase of Quercetin concentration, and Quercetin 50 μ The survival rate of the mol/L group reached the highest, with a statistically significant difference (* * * P<0.001), as shown in Figure 7a.

2.7.2 MDA اور ROS کے مواد پر Quercetin کے اثرات اور H2O2 سے زخمی ہونے والے PC12 سیلز میں SOD کی سرگرمی: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں SOD کی سرگرمی کم ہوئی، اور MDA اور ROS کے مواد میں اضافہ ہوا، شماریاتی اہمیت کے ساتھ (P<0.001); In the Quercetin group, different concentrations of Quercetin could improve the expression of SOD, ROS, and MDA in injured PC12 cells, with a statistically significant difference (* P<0.05, * * P<0.01, * * * P<0.001) in a concentration-dependent manner (Figure 7b-d).

2.7.3 Quercetin نے LPS-حوصلہ افزائی PC12 خلیات کی بقا کی شرح کو بہتر بنایا: کنٹرول گروپ کے مقابلے، ماڈل گروپ میں LPS-حوصلہ افزائی PC12 خلیوں کی بقا کی شرح تقریباً 50 فیصد تک کم ہو گئی (### P<0.001); Compared with the model group, the Quercetin group improved the survival rate of PC12 cells induced by LPS (* P<0.05, * * P<0.01, * * * P<0.001) in a dose-dependent manner (Fig. 8a).

2.7.4 Quercetin نے LPS کی طرف سے حوصلہ افزائی کرنے والے PC12 خلیوں کی سوزش کی سطح کو کم کیا: ماڈل گروپ میں کنٹرول گروپ، IL-6، IL-8، اور TNF کے مقابلے میں- مواد میں اضافہ ہوا، اور اختلافات تھے شماریاتی لحاظ سے اہم (# # # P<0.001); Compared with the model group, Quercetin reduced the inflammatory level of PC12 cells induced by LPS, including IL-6, IL-8, and TNF- α (* P<0.05, * * P<0.01, * * * P<0.001), and in a concentration dose-dependent manner (Figure 8b-d).

Fig.5 KEGG افزودگی تجزیہ کا بلبلہ خاکہ

جدول 3 مالیکیولر ڈاکنگ کی وابستگی

تصویر 6. پیشین گوئی شدہ ٹارگٹ پروٹین کے پابند مرکب پاؤنڈز کے مالیکیولر ماڈل

تصویر 7 سیلولر سطح پر سوزش مخالف سرگرمی کی توثیق

تصویر 8 سیلولر سطح پر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی توثیق

3 بحث

ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ (SCI) موٹر فنکشن اور حسی فنکشن کے نقصان کا باعث بن سکتی ہے۔ فی الحال، مغربی ادویات بنیادی طور پر ادویات، سیل ٹرانسپلانٹیشن، ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز، ٹشو انجینئرنگ، سیل ری پروگرامنگ، اور بحالی پر مرکوز ہیں۔ مثال کے طور پر، methylprednisolone کا بنیادی کردار ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے بعد neuroinflammation کو منظم کرنا ہے، جس سے بعض علاج کے اثرات حاصل ہو سکتے ہیں۔ تاہم، خوراک سے متعلق ضمنی اثرات کی وجہ سے، ایس سی آئی کے علاج کے لیے زیادہ خوراک والے ایم پی کا استعمال متنازعہ ہے [9]، ایس سی آئی کے روگجنن کو تلاش کرنا اور محفوظ اور مؤثر علاج کی دوائیاں تلاش کرنا ایک فوری مسئلہ ہے جس پر توجہ دینے کے لیے پیچیدہ پیتھولوجیکل تبدیلیاں ہیں۔ ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے بعد. ایس سی آئی کے مؤثر علاج کی بنیادی مشکل مائکرو ماحولیات کو روکنا ہے۔ شدید آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش ریڑھ کی ہڈی کے مائکرو ماحولیات کے استحکام میں مداخلت کرے گی۔ لہذا، مقامی مائکرو ماحولیات ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے علاج کی کلید ہے۔ اس وقت، ممکنہ دوائیں جو تباہ شدہ مائیکرو ماحولیات کو منظم کرتی ہیں اور نیورو پروٹیکشن کو فروغ دیتی ہیں زیادہ سے زیادہ توجہ مبذول کر رہی ہیں۔ تجربات سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche deserticola SCI کا علاج کر سکتا ہے، تاہم، کارروائی کا طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے۔ SCI کے علاج میں Cistanche deserticola کے طریقہ کار کو مزید دریافت کرنے اور طبی علاج کے لیے مزید شواہد فراہم کرنے کے لیے، Cistanche deserticola کے اہم فعال اجزاء اور اہداف اور SCI کے علاج میں Cistanche deserticola کے ممکنہ سگنل راستوں کی پیشین گوئی نیٹ ورک فارماکولوجی کے ذریعے کی گئی، اور آخر کار اس کی تصدیق کی گئی۔ میکرو مالیکولر ڈاکنگ اور ان وٹرو تجربات کے ذریعے فعال اجزاء کے ٹارگٹ نیٹ ورک ڈایاگرام میں، Quercetin - Glutosterol اور Arachidonic acid نیٹ ورک ڈایاگرام کے مرکز میں ہیں، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ وہ SCI کے علاج میں Cistanche deserticola deserticola کے اہم اجزاء ہیں۔ ان میں سے، Quercetin ایک قسم کا flavonoid ہے۔ فارماسولوجیکل اسٹڈیز سے پتہ چلتا ہے کہ Quercetin میں مختلف قسم کی فارماسولوجیکل سرگرمیاں ہوتی ہیں، جن میں اینٹی ٹیومر، اینٹی سوزش، اینٹی آکسیڈینٹ وغیرہ شامل ہیں [10]۔ کیونکہ یہ ایک موثر فری ریڈیکل سکیوینجر (اینٹی آکسیڈینٹ) ہے، Quercetin آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش کی وجہ سے ہونے والی بیماریوں کا علاج کر سکتا ہے - Glutosterol کا تعلق phytosterol سے ہے، جو خون کی چربی کو کم کرنے، سوزش کے خلاف، اینٹی آکسیڈینٹ اور مدافعتی ضابطے کے اثرات رکھتا ہے [11]۔ آرکیڈونک ایسڈ ایک پولی ان سیچوریٹڈ فیٹی ایسڈ ہے۔ مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ اراکیڈونک ایسڈ میں سوزش کے اثرات ہوتے ہیں، اور ذیابیطس، قلبی امراض اور کینسر کی روک تھام میں ایک خاص اہم کردار رکھتے ہیں [12] مختصراً، Quercetin - Glutosterol اور Arachidonic acid Cistanche deserticola deserticola کی بنیادی فارماکوڈینامک بنیاد ہو سکتی ہے۔ SCI PPI نیٹ ورک کے علاج سے پتہ چلتا ہے کہ EGFR، CCND1، HIF1A، FOS، RELA، اور AR SCI کے علاج کے لیے Cistanche deserticola deserticola کے ہدف ہو سکتے ہیں۔ ایپیڈرمل گروتھ فیکٹر ریسیپٹر (ای جی ایف آر) ایک ٹرانس میبرن گلائکوپروٹین ہے اور ٹائروسین کناز ریسیپٹرز کے ایرب بی فیملی کے چار ممبروں میں سے ایک ہے۔ ڈیویندر ایٹ ال نے پایا کہ ایک نیا ای جی ایف آر روکنے والا PI3K اکٹ پاتھ وے [13] کے ذریعے سوزش مخالف کردار ادا کرسکتا ہے۔

لی وغیرہ۔ نے ظاہر کیا کہ EGFR اینٹی باڈی فنکشنلائزڈ کولیجن اسکافولڈ ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کی مرمت کے لیے اعصابی پیشگی خلیوں کے فرق کو فروغ دے سکتا ہے [14]۔ سیل سائکلن D1 سیل سائیکل کا کلیدی ریگولیٹر ہے۔ اس کا حیاتیاتی فعل بیرونی نمو کے عوامل، سگنل کی نقل و حمل اور سیل سائیکل ریگولیشن، اور سیل کے پھیلاؤ، تفریق، اور اپوپٹوسس کو منظم کرنے میں مضمر ہے [15] وانگ ایٹ ال۔ پتہ چلا کہ بون میرو mesenchymal اسٹیم سیلز کا استعمال کرتے ہوئے CyclinD1 کی ایپی جینیٹک خاموشی چوہوں میں ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کی مرمت کو تیز کر سکتی ہے [16]۔ Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) آکسیجن کی سپلائی میں تبدیلیوں کے لیے سیل کی موافقت میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے اور یہ جین کے اظہار کو تبدیل کرنے اور میٹابولک تبدیلیوں کے ذریعے ہائپوکسک ماحول کے مطابق ڈھالنے کے لیے ایک ٹرانسکرپشن عنصر کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ ] HIF-1 اور پروٹین وون ہپل لنڈاؤ (pVHL) Proline hydroxylase (PHD) اور HIF (FIH) کو روکنے والا عنصر ایک سخت اور منظم ریگولیٹری نیٹ ورک تشکیل دیتے ہیں۔ لہذا، EGFR، CCND1، اور HIF1A SCI کے خلاف Cistanche deserticola deserticola کے تحفظ میں اہم کردار ادا کر سکتے ہیں KEGG پاتھ وے نیٹ ورک کے تجزیے میں، کلیدی اہداف بنیادی طور پر کیمیائی سرطان پیدا کرنے والے رسیپٹر ایکٹیویشن، TNF، PI3K-Akt، HIF{{14} میں شامل ہیں۔ }}، p53، اور MAPK سگنلنگ پاتھ ویز۔ یہ تجویز کرتا ہے کہ SCI کے علاج میں Cistanche deserticola کا طریقہ کار ان سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ راستوں سے متعلق ہو سکتا ہے۔ Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) serine Threonine kinases ہیں، جو سیل کے پھیلاؤ، تفریق، بقا، موت، اور تبدیلی جیسی متعدد سیل سرگرمیوں سے متعلق انٹرا سیلولر سگنل کی منتقلی میں ثالثی کرتے ہیں [21] Luo et al. پتہ چلا کہ asiaticoside antioxidant اور anti-inflammatory اثرات کے ذریعے ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے اثرات کو کم کرتا ہے، نیز p38-MAPK میکانزم کو روکتا ہے [22]۔ PI3K/Akt سگنلنگ پاتھ وے فی الحال ایک سگنلنگ پاتھ وے کے طور پر پہچانا جاتا ہے جو سیل کی سرگرمی اور پھیلاؤ کی صلاحیت کو کنٹرول کرتا ہے۔ وانگ چونیان نے پایا کہ ریڑھ کی ہڈی میں چوٹ لگنے والے چوہوں میں مقامی اینٹی آکسیڈینٹ تناؤ پر کم فریکوئنسی پلسڈ الیکٹرو میگنیٹک فیلڈز (LPEMFs) کی مرمت کا اثر PI3K/Akt سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے سے گہرا تعلق ہے [23] Shultz et al. نے دکھایا ہے کہ مائنوسائکلائن ہائیڈروکلورائیڈ p38 Mitogen-activated protein kinase (MAPK) اور Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt سگنلنگ پاتھ ویز کو ریگولیٹ کرتی ہے اور میٹرکس میٹالوپروٹینیس (MMPs) کو روکتی ہے جو اس کے اینٹی جوڑ میکانزم کے ذریعے متعدد سیکنڈری انجری کو نشانہ بناتی ہے۔ سوزش، اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی اپوپٹوٹک خصوصیات [21]۔

ٹیومر نیکروسس فیکٹر (TNF) سیل اپوپٹوسس، سوزش اور استثنیٰ کا اہم ثالث ہے۔ TNF اشتعال انگیز ردعمل میں ثالثی کر سکتا ہے اور مدافعتی فعل کو منظم کر سکتا ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ TNF اور TNF ریسیپٹر-1 (TNF-R1) کے درمیان تعامل سگنل کی منتقلی کے متعدد راستوں کو متحرک کرتا ہے، بشمول سوزش سے متعلق NF-κB اور MAPK سگنلنگ راستے [22]۔ اب تک، TNF پاتھ وے میں زیادہ تر شرکاء کی بائیو کیمیکل اور جینیاتی ذرائع سے تصدیق کی گئی ہے، اس طرح نئی نسل کی سوزش مخالف ادویات کی نشوونما کے لیے ممکنہ منشیات کے اہداف کا ایک بھرپور ذریعہ فراہم کیا گیا ہے۔ ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے بعد پیچیدہ پیتھولوجیکل تبدیلیاں ہوتی ہیں، اور ثانوی چوٹ کے طریقہ کار میں ایک سے زیادہ راستے شامل ہوتے ہیں، جو ایک دوسرے کے ساتھ بات چیت بھی کر سکتے ہیں، جیسا کہ ایک بڑے جالی دار ڈھانچے کی طرح ہے۔ کسی ایک راستے یا سگنلنگ مالیکیول کا مطالعہ کرنا معنی خیز نہیں ہے، لہذا، روایتی چینی طب کا نیٹ ورک فارماکولوجی راستوں کے درمیان تعلق سے شروع ہوتا ہے، ان کے باہمی تعلق کا مطالعہ کرتا ہے، اور طبی علاج کے لیے نئے اہداف فراہم کرتا ہے۔

حوالہ جات

1. Li LM، Zhang M، Mu JF، et al. ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے مؤثر علاج کے لیے ایک چپکنے والے ہائیڈروجیل میں متحرک انسانی mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ exosomes کی ٹرانسپلانٹیشن[J]۔ نینو لیٹ، 2020، 20(6): 4 298-4 305۔

2. Choo AM، Liu J، Lam CK، et al. Contusion، dislocation، اور distraction: ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے الگ میکانزم میں بنیادی نکسیر اور جھلی کی پارگمیتا[J]۔ جرنل آف نیورو سرجری، 2007، 6: 255-266۔

3. Pineau I، Lacroix S. زخمی ماؤس ریڑھ کی ہڈی میں پروینفلامیٹری سائٹوکائن کی ترکیب: ملٹی فاسک ایکسپریشن پیٹرن اور اس میں شامل خلیوں کی اقسام کی شناخت[J]۔ جے کمپ نیورول، 2007، 500: 267-285۔

4. Zhang H، Xiang Z، Duan X، et al. ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ [J] پر Cistanche deserticola نچوڑ سے oligosaccharides کے اینٹی ٹیومر اور سوزش کے اثرات۔ بین الاقوامی جرنل آف بائیولوجیکل میکرومولیکولس، 2018، 15(124): 360-367۔

5. Hao DC، Xiao P G. نیٹ ورک فارماکولوجی: روایتی چینی طب کے لیے ایک گلابی پتھر[J]۔ Drug Dev Res, 2014, 75: 299-312.

6. Fehlings MG, Cho N. Methylprednisolone شدید ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے علاج کے لیے: Counterpoint[J]۔ معاصر نیورو سرجری، 2015، 37(14): 1-6۔

7. Li Y، Yao JY، Han CY، et al. Quercetin، سوزش اور استثنی [J]. غذائی اجزاء، 2016، 8: 167-181۔

8. رشید K. Beta-sitosterol کی دواؤں کی خصوصیات: ایک جائزہ مضمون[J]۔ بین الاقوامی جرنل آف سائنس ایجادات آج، 2020، 9(4): 208-212۔

9. تلیما ایچ، روڈی ای آئی۔ آرکیڈونک ایسڈ: جسمانی کردار اور ممکنہ صحت کے فوائد: ایک جائزہ[جے]۔ جرنل آف ایڈوانسڈ ریسرچ، 2018، 11: 33-41۔

10. دیویندر ایس، عتری کے بی، کور جی آر، وغیرہ۔ EGFR inhibitors پر جائزہ: اہم اپ ڈیٹس[J]۔ میڈیسنل کیمسٹری میں چھوٹے جائزے، 2016، 16(14): 1 134-1 166۔

11. Li XR، Xiao ZF، Han J، et al. ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کی مرمت کے لیے EGFR اینٹی باڈی فنکشنلائزڈ کولیجن اسکافولڈز کا استعمال کرتے ہوئے نیورل پروجینیٹر سیلز کے نیورونل تفریق کا فروغ[J]۔ بایومیٹریلز، 2013، 34(21): 5 107-5 116۔