رابطہ:jerry.he@wecistanche.com

Mi Young Ahn1*، Ban Ji Kim1، Ha Jeong Kim1، Jae Sam Hwang1، Yi-Sook Jung2 اور Kun-Koo Park3

Cistanche ایک عمر مخالف اثر ہے

خلاصہ

پس منظر: اس مطالعے کا مقصد اس کا جائزہ لینا تھا۔مخالف عمرایک نئے تیار کردہ حشرات سے ماخوذ مرکب، گوبر کی چقندر گلائکوسامینوگلیکن (GAG) کا اثر، جو پرانے SD چوہوں کو ان کی خوراک کے حصے کے طور پر 1 ماہ تک دی جاتی ہے۔ کیڑے GAG انتظامیہ کا تعلق آکسیڈیٹیو نقصان، ہیپاٹو سیلولر بائیو مارکر کی سطح، پروٹین کاربونیل مواد، اور میلونڈیالڈہائڈ کی حراستی میں کمی سے پایا گیا تھا۔ دیمخالف عمر- گوبر کی چقندر GAG کے مالیکیولر جینیاتی طریقہ کار کو ابھی تک پوری طرح سے واضح نہیں کیا گیا ہے۔

نتائج: Catharsius molossus (گوبر کی ایک قسم) GAG (CaG) کے قبضے میںمخالف عمرسرگرمیاں اس نے creatinine kinase کے سیرم کی سطح کو کم کیا، aortic vasorelaxant کی سرگرمیاں اور cardioprotective actions، اور علاج شدہ چوہوں میں گلوکوز کی سطح کو معمول پر رکھا۔ مائیکرو رے تجزیہ چوہے کے 30 K cDNA کلون سیٹ سرنی کے ساتھ انجام دیا گیا تاکہ 14-ماہ پرانے SD چوہوں کے جین ایکسپریشن پروفائلز کی شناخت کی جاسکے جن کا علاج ایک 1- سے زیادہ گوبر بیٹل گلائکوسامینوگلیکن 5 ملی گرام/کلوگرام (CaG5) سے کیا گیا تھا۔ ماہ کی مدت، جو اس کی تحقیقات کے لیے کی گئی تھی۔مخالف عمربمبس اگنیٹس (ایک قسم کی بھومبلی) کوئین جی اے جی 5 ملی گرام/کلوگرام (آئی کیو جی5) یا کونڈروٹین سلفیٹ 10 ملی گرام/کلوگرام کے مقابلے میں اثر۔ CaG5 اور IQG5 نے سوزش کے اثرات کو نشان زد کیا تھا، جو مفت فیٹی ایسڈ، یورک ایسڈ، sGPT، IL-1 بیٹا، اور CK قدروں کو روکتے ہیں۔ اس کے علاوہ، anticoagulant اور antithrombotic اثرات دیکھے گئے: CaG سے علاج شدہ چوہے کے پلازما میں فیکٹر 1 (fibrinogen) کی ارتکاز میں اضافہ ہوا۔ CaG5-علاج شدہ چوہوں کے گروپ نے، کنٹرول کے مقابلے میں، 131 جینوں کی اپ گریجولیشن ظاہر کی، بشمول lipocalin 2 (Lbp) اور ایک serine peptidase inhibitor، Kaszal type3 (Spink3)، اور 64 downregulated genes، بشمول lysyl oxidase (Lox) )، serine dehydratese (sds)، اور retinol saturase (Retsat)۔

نتیجہ: ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ گوبر کی چقندر گلائکوسامینوگلیکن بوڑھے چوہوں کے لیے ایک مددگار علاج ہو سکتا ہے، جو کہ عمر بڑھنے کے لیے علاج کے بائیو میٹریل کے طور پر اس کی صلاحیت کو ظاہر کرتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: اینٹی ایجنگ اثر، گوبر کی چقندر (کیتھرسیئس مولوسس)، بی اگنیٹس کی ملکہ، گلائکوسامینوگلیکن

پس منظر

فعال غذاؤں یا منشیات کے طور پر، طاقتور فعال اجزاء کی تطہیر، نکالنے، اور شناخت کے ذریعے استعمال کیا جاتا ہے۔ چین میں پائے جانے والے گوبر کے چقندر Catharsius molossus کے نچوڑوں نے زیادہ چکنائی والی خوراک کھلانے والے چوہوں پر فبرینولیٹک سرگرمی اور اینٹی آکسیڈیٹیو اور اینٹی ہائپرگلیسیمیک اثرات ظاہر کیے ہیں [9، 10]۔ خون میں پروٹین کاربونیل مواد اور جگر کے بافتوں کے میلونڈیلڈہائڈ کی ارتکاز میں ایک 1-ماہ کے عرصے کے دوران گوبر کے ایتھنول یا ایسیٹون کے عرق کے ساتھ علاج کیا گیا، کنٹرولز [10] کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوا۔ حال ہی میں، ایک کورین گوبر بیٹل پیپٹائڈ، LLCIALRKK-NH2، جو Copris tripartitus Coprisin سے ماخوذ ایک 9-میر پیپٹائڈ ہے، E. کولی کے خلاف جراثیم کش سرگرمی کرتا ہے اور DNA کو شدید نقصان پہنچاتا ہے۔ ، جو اپوپٹوسس جیسی موت کو اکساتا ہے [11]۔ ایک ایپی کلچرل پروڈکٹ، B. ignitus کوئین (BIQ) الکحل کا عرق ایس ڈی چوہوں میں سوزش کے علاج کے لیے ٹیسٹ کیے جانے والے تمام بھمبری عرقوں میں سب سے زیادہ ممکنہ افادیت رکھتا ہے، کیونکہ اس نے پنجوں کے ورم کو نمایاں طور پر کم کیا ہے [12]۔ لہذا، ہم نے C. molossus یا B. ignitus queens کی سب سے زیادہ قابل حصول تعداد سے اخذ کردہ GAGs تیار کیےمخالف عمرخواص عمر بڑھنے میں ایک جاندار کی جسمانی صلاحیت میں ترقی پذیر کمی شامل ہوتی ہے، اور یہ پورے نظام کی سطح پر جمع تبدیلیوں اور عدم استحکام سے ظاہر ہوتا ہے [13]۔ عمر بڑھنے کا تعلق ایک امتیازی جین کے اظہار کے پیٹرن سے بھی ہے جو میٹابولک اور بایو سنتھیٹک جینوں کے درمیان تناؤ کے ردعمل میں کمی کی نشاندہی کرتا ہے [14]۔ خاص طور پر، ویسرل ایڈیپوز ٹشو میں عمر یا موٹاپے سے متعلق اضافہ عام طور پر کم درجے کی دائمی سوزش کے ساتھ ہوتا ہے، جس کو مختلف میٹابولک بیماریوں کی وجہ قرار دیا گیا ہے جن میں کینسر، دل کی بیماریاں، اور سب سے نمایاں طور پر قسم کی سوزش ہوتی ہے۔ دو ذیابیطس [15]. یہ کیڑے GAGs کو تیزی سے ترقی پذیر میدان میں ٹشو انجینئرنگ اور بائیو میٹریلز کو نئے علاج کے طور پر استعمال کرنے کے امکان کے ساتھ استعمال کیا جا سکتا ہے [16]۔

اس مطالعے میں، ہم رپورٹ کرتے ہیں کہ گوبر کے چقندر اور BIQ سے GAG ظاہر ہوتا ہے۔مخالف عمرخصوصیات اور، اس طرح، یہ مرکبات کے طور پر استعمال کے لئے عظیم وعدے رکھتے ہیںمخالف عمرایجنٹس نیز، ہم عمر بڑھنے کے نقصان دہ پہلوؤں کو کم کرنے میں C. molossus dung beetle glycosaminoglycan کی ممکنہ قدر کا مظاہرہ کرتے ہیں، جیسا کہ 1 ماہ تک علاج کے بعد سیرم اور 14-ماہ کے SD چوہوں کے جین اظہار کے نمونوں میں ماپا جاتا ہے۔

طریقے

مواد

کیڑے glycosaminoglycan کی تیاری

خشک C. molossus چین کے مقامی بازار میں خریدا گیا تھا۔ bumble bee (Bombus ignitus کی ملکہ) کو زرعی حیاتیات کے شعبہ، نیشنل اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنس، جنوبی کوریا میں پالا گیا اور اسے منجمد کر کے خشک کیا گیا۔ کونڈروٹین سلفیٹ اور تمام ریجنٹس سگما ایلڈرچ (سینٹ لوئس، ایم او، امریکہ) سے فراہم کیے گئے تھے۔

ہر ایک کلو گرام (1 کلو) خشک کیڑے کو الٹراسونیفکیشن (برانسن، کولوراڈو، MI، USA) کے ذریعے 30 منٹ تک بھگو کر تین بار ایتھنول کے ساتھ نکالا گیا۔ الکحل کے نچوڑ سے الگ ہونے والی باقیات کو دو بار ایسیٹون کی 2 جلدوں کے ساتھ ڈیفاٹ کیا گیا تھا۔ تقریباً 200 گرام خشک، ڈیفیٹڈ اور pulverized پاؤڈر کو 2 L کے 0.05 M سوڈیم کاربونیٹ بفر (pH 9) میں معطل کیا گیا تھا۔ 28 ملی لیٹر (1.4 فیصد) الکلیس (سگما الڈرچ، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) شامل کرنے کے بعد معطلی کو 60 ڈگری پر 48 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ عمل انہضام کے مرکب کو 4 ڈگری پر ٹھنڈا کیا گیا، اور ٹرائکلورواسیٹک ایسڈ کو 5 فیصد کی حتمی حراستی میں شامل کیا گیا۔ نمونے کو ملایا گیا، اسے 1 گھنٹہ تک کھڑے رہنے کی اجازت دی گئی، اور پھر 8000 × g (ہانیل سائنس انڈسٹریل، انچیون، جنوبی کوریا) پر 30 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ ایتھنول میں 5 فیصد پوٹاشیم ایسیٹیٹ کی تین جلدیں سپرنٹنٹ کے ایک حجم میں شامل کی گئیں۔ اختلاط کے بعد، معطلی کو رات بھر 4 ڈگری پر محفوظ کیا گیا اور پھر سینٹرفیوج کیا گیا۔ 20 جی کی مقدار کو 0.2 M NaCl کے 40 ملی لیٹر میں تحلیل کیا گیا اور سینٹری فیوج کیا گیا۔ Cetylpyridinium chloride (5% ) کو سپرنٹنٹ کے حجم سے 0.2 گنا میں شامل کیا گیا تھا، اور precipitate کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے جمع کیا گیا تھا۔ 2.5 M NaCl کے 20 ملی لیٹر میں پرسیپیٹیٹ کو تحلیل کیا گیا تھا۔ ایتھنول کی پانچ جلدیں شامل کی گئیں ، اور سنٹرفیوگریشن کے ذریعہ پریزیٹیٹ کو الگ کردیا گیا۔ پانی میں تحلیل کیا گیا تھا اور 100 مقداروں کے پانی کے خلاف ڈائلائز کیا گیا تھا [17]، اور ڈائیلائزڈ کروڈ گلائکوسامینوگلیکان کو تقریباً 1.1 جی سی اے جی، 4.89 جی آئی کیو جی پاؤڈر کے طور پر حاصل کرنے کے لیے منجمد کر دیا گیا تھا۔ کروڈ GAG کو DEAE Sephadex A-25 جیل کرومیٹوگرافی کالم (40 x 1.2 سینٹی میٹر) پر 50 ایم ایم فاسفیٹ بفر (پی ایچ 7.4) کے ساتھ ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ 20 ملی لیٹر فی گھنٹہ کی بہاؤ کی شرح پر فاسفیٹ بفر میں 0 سے 2.5 M NaCl تک لکیری سوڈیم کلورائڈ گریڈینٹ کا استعمال کرتے ہوئے حصوں کو الگ کیا گیا تھا، اور ڈائیلائزڈ گلائکن کو خالص GAG میں منجمد خشک کیا گیا تھا۔

جانور

Sprague Dawley (SD) چوہے (نر)، 8- ماہ کی عمر میں، Samtako Co. Ltd. (Osan, Korea) سے فراہم کیے گئے تھے۔ تمام طریقہ کار لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے NIH کے رہنما خطوط کے مطابق تھے۔ تمام تجربات کو نیشنل اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنس، RDA، جنوبی کوریا (NAAS1503) کی لیبارٹری اینیملز کی اخلاقی کمیٹی نے منظور کیا اور جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال (انفرادی رہائش) کے لیے قومی رہنما اصولوں پر عمل کیا۔ چوہوں کو 6 ماہ تک عام پالنے کے حالات (23 ± 2 ڈگری سینٹی گریڈ، 55 ± 10 فیصد نمی اور 12 گھنٹہ روشنی/ تاریک سائیکل) کے مطابق بنایا گیا اور انہیں ایک عام خوراک کھلائی گئی (D10001، AIN-76ایک چوہا خوراک، تحقیق ڈائیٹ انکارپوریشن، نیو برنسوک، این جے، یو ایس اے) اور واٹر ایڈ لیبٹم۔ 14-ماہ پرانے چوہوں کو 10 چوہوں کے 4 علاج گروپوں میں الگ کیا گیا تھا اور وزن میں مماثلت (680.2 ± 9.20 گرام) کے مطابق تقسیم کیا گیا تھا۔ علاج روزانہ پی بی ایس میں دیا جاتا تھا اور ہر ایک کو انٹراپریٹونی طور پر دیا جاتا تھا۔

گروپ کنٹرول تھے، 5 mg/kg CaG (CaG5)، 5 mg/kg IQG (IQG5)، اور 10 mg/kg CS (CS10) (Sigma Aldrich Co., USA)، دیے گئے۔ ہر گروپ کو معمول کی خوراک (AIN-76ایک چوہا خوراک، ریسرچ ڈائیٹ) اور 1 ماہ کے لیے نمونہ علاج پر رکھا گیا تھا (اسکیم 1)۔

ایڈیپوز ٹشوز کا وزن

پیٹ اور ایپیڈیڈیمل چربی سے جسم کے وزن کے تناسب کا تعین کیا گیا تھا۔ پیمائش 1- مہینے کے علاج کی مدت کے اختتام پر قربانی کے بعد کی گئی تھی۔

اڈیپوسائٹ کثافت

ایکسائزڈ اعضاء اور ایڈیپوز ٹشو کو 10 فیصد غیر جانبدار فارملین مقرر کیا گیا تھا۔ پیرافین کو سرایت کرنے کے بعد، ان پر ہیماتوکسیلین اور ایوسین، اور ٹولیوڈین بلیو O سے داغ دیا گیا تھا، جس کا ہلکی مائکروسکوپی (Leica CTR6000، Hesse، Germany) کے ذریعے معائنہ کیا گیا، اور ان کی تصویر کشی کی گئی۔ ایڈیپوسائٹ کثافت (خلیات / ایم ایم 2) کا تعین ٹولوائڈائن بلیو او اسٹین (اصل میگنیفیکیشن، x400) کے ذریعہ علاج شدہ اور کنٹرول ٹشو میں کیا گیا تھا۔

خون کے نمونے اور خون، پلازما، ایک سیرم پرکھ

CON, CaG5, IQG5, CS10 (n =10) نامی چار گروپوں پر، علاج کے 1 مہینے کے بعد، خون (~5 ملی لیٹر) کو کولہوں کی وینا کاوا سے ہلکے CO2 سانس کے تحت جمع کیا گیا اور سیرم کیمسٹری کی پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا۔ جن پیرامیٹرز کی جانچ کی گئی ان میں فاسفولیپڈ، ہائیلورونک ایسڈ، فری فیٹی ایسڈ، البومین، الکلائن فاسفیٹیس (ALP)، گلوٹامک آکسالواسیٹک ٹرانسامینیز (جی او ٹی)، گلوٹامک پائرووک ٹرانسامینیز (جی پی ٹی)، لییکٹک ڈیہائیڈروجنیز (ایل ڈی ایچ)، سی کے (کریٹینیس) کل کولیسٹرول ٹرائگلیسرائڈ، ایچ ڈی ایل کولیسٹرول، ایل ڈی ایل کولیسٹرول، کریٹینائن، بلڈ یوریا نائٹروجن (BUN)، کل پروٹین، یورک ایسڈ، اور سی-ری ایکٹیو پروٹین (CRP)۔ تمام پیرامیٹرز کا اندازہ آٹو اینالائزر (ہٹاچی 7060 آٹومیٹک کلینیکل اینالائزر، ٹوکیو) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

اینٹی کوگولنٹ سرگرمی کا پتہ لگانے کے لئے خون کے نمونے لینے اور پلازما پرکھ

1-ماہ کے علاج کے بعد، تقریباً 4 ملی لیٹر پلازما کو پوسٹریئر وینا کاوا سے ہلکے CO2 سانس کے تحت اکٹھا کیا گیا اور سینٹری فیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو جمنے کے وقت کو اینٹی کوگولنٹ ایکٹیویٹی ٹیسٹ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا: گرین کراس لیب کے مینوئل کے مطابق مذکورہ بالا آٹومیٹک کلینیکل اینالائزر کا استعمال کرتے ہوئے ایکٹیویٹڈ پارشل تھرومبوپلاسٹن ٹائم (APTT)، تھرومبن ٹائم، پروتھرومبن ٹائم، اور فیکٹر 1 (فبرینوجن) کو فبرینولیٹک سرگرمی پرکھ کے طور پر استعمال کیا گیا۔

آکسیڈیٹیو لپڈ نقصان

چوہوں کے ہیپاٹائٹس میں آکسیڈیٹیو لپڈ نقصان کا تعین کرنے کے لیے، میلونڈیالڈہائڈ (MDA) کی سطح کو 535 nm [18] پر تھیوباربیٹورک ایسڈ ری ایکٹیو مادہ (TBARS) پر مشتمل رنگ کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے لپڈ پیرو آکسیڈیشن پرکھ سے ماپا گیا۔

آکسیڈیٹیو پروٹین کو نقصان

لیور ہوموجنیٹ سپرنٹنٹس اور خون، جو سینٹرفیوگریشن کے بعد حاصل کیا گیا تھا، کاربونیل مواد کے تعین کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ خون میں پروٹین کاربونیل مواد کی پیمائش کرکے پروٹین آکسیڈیٹیو تناؤ کا اندازہ کیا گیا۔ OxiSelect™ پروٹین کاربونیل ELISA کٹ (Cell Biolabs, Inc., San Diego, CA, USA) کے لیے مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق کاربونیل کے مواد کا تعین انزائم سے منسلک امیونواسے کے ساتھ کیا گیا تھا۔ CAT سرگرمی (U/mg پروٹین) کی پیمائش H2O2 کی CAT کی ثالثی کی بنیاد پر کی گئی [19]۔

آکسیڈیٹیو انزائم کا پتہ لگانے کے لئے جگر کی ہوموجنیٹ تیاری

CON, CaG5, IQG5, CS10 نامی تقریباً چار گروپس، جگر کے ٹشوز کو برف پر ایک 10-فولڈ والیوم لیسیز بفر PRO-PREP™ پروٹین نکالنے والے محلول (iNtRON, Busan, Korea) میں ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ سینٹرفیوگریشن (800 جی، 10 منٹ) کے بعد جگر کے ہوموجنیٹ کے سپرنٹنٹ کو کیٹالیس، گلوٹاتھیون پیرو آکسیڈیز، گلوٹاتھیون ایس-ٹرانسفیریز اور سپر آکسائیڈ کے لیے پرکھا گیا۔

پرکھ کے دستی (OxiSelect™ ELISA kit, Cell BioLabs, Inc., San Diego, CA, USA) کے مطابق سرگرمی کو ختم کریں۔

سائٹوکائن IL-1، IL-6 اور IL-10 پرکھ

CON، CaG5، IQG5، CS10 نامی چار گروپوں پر، IL- 1 یا IL − 6 یا IL − 10 کی سطح کیڑوں کے GAG سے علاج شدہ چوہے کے سیرم میں کمرشل ایلیسا کٹس (کوانٹی کائن، آر اینڈ ڈی سسٹمز، انکارپوریشن) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ , Minneapolis, MN, USA) کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق۔

آر این اے کی تیاری اور مقداری ریئل ٹائم پی سی آر تجزیہ

کل RNA کو TRIzol reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے جگر سے الگ تھلگ کیا گیا تھا، اور RNA کی حراستی اور پاکیزگی کو UV/Vis spectrophotometer (Beckman Coulter Co., Miami, FL, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ تکمیلی ڈی این اے (سی ڈی این اے) کو کل آر این اے کے 1 جی سے اعلی صلاحیت والی سی ڈی این اے ریورس ٹرانسکرپشن کٹ (ایمرشام بایوسینس کمپنی، پسکاٹاوے، این جے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ترکیب کیا گیا تھا۔ مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق 7500 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم (دونوں اپلائیڈ بایو سسٹم سے) کا استعمال کرتے ہوئے پاور SYBR گرین ماسٹر مکس کے ساتھ ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) ایمپلیفیکیشن کیا گیا۔ ٹارگٹ جین ٹرانسکرپٹس کا پتہ لگانے کے لیے، ہم نے بیکن ڈیزائنر سافٹ ویئر (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے خاص طور پر آگے اور ریورس اولیگونوکلیوٹائڈ پرائمر ڈیزائن کیے ہیں۔ پرائمر کی ترتیب سکیم 2 میں درج ہیں۔ سائیکلنگ تھریشولڈ طریقہ کے مطابق ہدف mRNA کے رشتہ دار اظہار کو اہل بنانے کے لیے اندرونی کنٹرول کے طور پر glyceraldehyde 3- phosphate dehydrogenase (GAPDH) کا استعمال کرتے ہوئے ہدف کے mRNA کی سطح کو معمول بنایا گیا تھا۔ تمام نمونوں کا سہ رخی میں تجزیہ کیا گیا۔

سیل کی مرمت کے طریقہ کار اور GAPDH داخلی معیار (اسکیم 2) میں شامل جینوں کو بڑھاوا دینے کے لیے پرائمر ترتیب۔

ڈی این اے مائیکرو رے طریقہ کار

ہسٹوپیتھولوجی تجزیہ کے بعد، جگر کے نمونوں پر مائکرو رے ہائبرڈائزیشن کی گئی [20]۔ کل آر این اے کو کیجین آرنیسی مڈی کٹ (کیجین، والنسیا، سی اے، امریکہ) کا استعمال کرتے ہوئے جگر کے ٹشو سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ ایک FairPlay™ مائیکرو رے لیبلنگ کٹ (Stratagene, La Jolla, CA, USA) کا استعمال کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق کیا گیا تھا۔ لیبل لگا ڈی این اے ایک مائیکرو رے چپ پر لوڈ کیا گیا تھا۔ ایک ہائبرڈائزیشن چیمبر کو مائیکرو رے چپ، Rat Genome 230 2.0 Array (Affymetrix Inc.، Santa Clara, USA) کے ساتھ جمع کیا گیا اور رات بھر پانی کے غسل میں 60 ڈگری پر ڈوبا گیا۔ مائکرو رے چپ کو واش بفر I، واش بفر II میں دھویا گیا اور پھر بفر III کو 5 یا 15 منٹ تک دھویا گیا۔ سلائیڈ کو 15 منٹ کے لیے 500 گرام پر سینٹرفیوگ کرکے خشک کیا گیا اور BMS Array Scanner کے ساتھ اسکین کیا گیا، Cy3 اور Cy5 چینلز کا استعمال کرتے ہوئے درستگی Array Worx eBiochip ریڈر (BioRad, Dallas, TX, USA) لگایا گیا [21]۔

الگ تھلگ چوہے کے دل کا تجزیہ

350 ± 50 گرام وزنی نر Sprague-Dawley چوہوں کو pentobarbital (100 mg/kg) سے بے ہوشی کی گئی۔ دم کی رگ کو ہیپرین (1000 U/kg) کے ساتھ انجکشن لگایا گیا تھا، اور پھر ٹریچیا کو انٹیوبیٹ کیا گیا تھا۔ جبکہ چوہوں کو میکانکی طور پر چوہا وینٹی لیٹر (ماڈل 7025؛ یوگو بیسائل، کومریو-واریس، اٹلی) کے ساتھ ہوا میں رکھا گیا تھا، ان کے دلوں کو ریٹروگریڈ aortic کینولیشن کے ذریعے آکسیجن میں ترمیم شدہ کربس-ہنسیلیٹ بائک کاربونیٹ بفر کے ساتھ سیچو کیا گیا تھا۔ اس کے بعد دلوں کو ایکسائز کیا گیا اور لینجنڈورف اپریٹس (Hugo Sachs Electronik, March-Hugstetten, Germany) میں منتقل کر دیا گیا، جہاں انہیں 75 mmHg کے مستقل پرفیوژن پریشر پر آکسیجن والے ترمیم شدہ Krebs-Henseleit بائی کاربونیٹ بفر کے ساتھ پرفیوز کیا گیا۔ ایک پانی سے بھرا لیٹیکس وینٹریکل پلمونری رگ کے ذریعے متعارف کرایا گیا تھا اور بائیں ویںٹرکولر پریشر (LVP) کی پیمائش کرنے کے لیے اسے Isotec پریشر ٹرانسڈیوسر (Hugo Sachs Electronik) سے جوڑا گیا تھا۔ دلوں کو 15 منٹ تک متوازن رہنے کی اجازت دی گئی، اس وقت بائیں ویںٹرکولر اینڈ ڈائیسٹولک پریشر (EDP) کو 10 mmHg پر ایڈجسٹ کیا گیا تھا، اور اس غبارے کا حجم پورے تجربے میں برقرار رکھا گیا تھا۔ پھر، بیس لائن کنٹریکٹائل فنکشن، دل کی شرح، اور کورونری بہاؤ (ایکسٹرا کارپوریل برقی مقناطیسی بہاؤ تحقیقات؛ نارکو بائیو سسٹم، ہیوسٹن،

TX، USA) کی پیمائش کی گئی۔ کارڈیک کنٹریکٹائل فنکشن کا حساب LVEDP کو LV چوٹی سسٹولک پریشر (LVSP) سے گھٹا کر لگایا گیا، جس سے ترقی یافتہ دباؤ (LVDP) حاصل ہوا۔ 1 گھنٹے کے توازن کے بعد، فینی لیفرین 1 μM کے ذریعے سکڑاؤ پیدا ہونے سے 10 منٹ قبل aortic رِنگز کا علاج گاڑی (سلین) یا CaG (10 ug/ml، 100 ug/ml) سے کیا گیا۔ اس کے بعد، اینڈوتھیلیم پر منحصر نرمی کو ایسٹیلکولین (0.1–100 μM) [22] کے ذریعے متاثر کیا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

مطالعہ کیے گئے تمام پیرامیٹرز کے ذرائع اور معیاری غلطی کا تعین ہر گروپ کے لیے انووا ٹیسٹ کے ذریعے کیا گیا تھا۔ کنٹرول اور علاج شدہ گروپوں کے درمیان اہم فرق کا تعین کرنے کے لیے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ کیا گیا۔ ایک پی ویلیو<0.05 was="" considered="">

نتائج

جسمانی وزن اور چربی میں تبدیلیاں

علاج کے گروپوں کے درمیان جسمانی وزن میں کوئی خاص فرق نہیں تھا (تصویر 1)۔ 1-ماہ کی انتظامیہ کی مدت کے دوران، بوڑھے نر چوہوں کے جسمانی وزن کنٹرول اور CaG-، IQG-، اور CS-علاج شدہ گروپس میں موازنہ تھے۔ اوسط ہفتہ وار جسمانی وزن تصویر 2a میں پیش کیا گیا ہے: CON, 685.16 ± 9.14 g; CaG5، 659.54 ± 14.21 g; IQG5, 646.50 ± 11.56 g, اور CS10, 662.93 ± 7.82 g پیٹ کی چربی کی اوسط مقدار IQG5 اور CS10 گروپوں میں کنٹرول کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوئی تھی: کنٹرول کے لیے 21.84 ± 7.46 g؛ CaG5 کے لیے 20.66 ± 8.47 جی؛ IQG5 کے لیے 16.56 ± 5.97 g (IQG5 بمقابلہ CON، p <0.05)؛ اور="" cs10="" کے="" لیے="" 16.93="" ±="" 5.17="" g="" (cs10="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05) (تصویر="" 2a)۔="" epididymidal="" چربی="" بھی="" iqg5="" اور="" cs10="" گروپوں="" میں="" کنٹرول="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" ہوئی="" تھی:="" کنٹرول="" کے="" لیے="" 10.38="" ±="" 2.58="" g؛="" 8.19="" ±="" 4۔{64}}="" g="" برائے="" cag5؛="" 7۔{67}}="" ±="" 1.35="" جی="" iqg5="" کے="">

(IQG5 بمقابلہ CON، p < 0۔{9}}5);="" اور="" cs10="" کے="" لیے="" 8.56="" ±="" 2.53="" g="" (cs10="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05) (تصویر="">

اڈیپوسائٹ کثافت

HFD میں GAG کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہے کے جگر کے ٹشوز کی adipocyte density [نمبر سیلز/ایریا (mm2)]، جیسا کہ toluidine blue O سٹیننگ کے ذریعے اندازہ کیا گیا ہے، CaG5 (3300 ± 1.73)، IQG5 (45) سے کم کیا گیا تھا۔ . ± 5.29) (تصویر 2b)۔

بلڈ پریشر اور دل کی شرح میں تبدیلی

5 mg/kg CaG-، IQG-، یا CS سے علاج شدہ گروپس اور کنٹرول گروپ (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) کے درمیان بلڈ پریشر (سسٹولک بلڈ پریشر یا دل کی شرح) میں کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا۔

ہیماتولوجی اور خون کی کیمسٹری

تجربے کے اختتام پر جانچے گئے ہیماتولوجیکل پیرامیٹرز کے سلسلے میں علاج اور کنٹرول گروپس کے درمیان خوراک پر منحصر کچھ تبدیلیاں دیکھی گئیں۔ CaG5-علاج شدہ گروپ میں APTT (sec.) میں 27.5 فیصد اضافہ ہوا: CON, 35.68 ± 5.68; CaG5، 45.49 ± 10.91; IQG5، 29.93 ± 3.57; CS10، 36.83 ± 23.95 (تصویر 3)۔ تھرومبن کا وقت (سیکنڈ) درج ذیل تھا: CON, 40.18 ± 2.04; CaG5، 42.13 ± 3.23; IQG5، 36.15 ± 6.67; CS10، 45.02 ± 21.89۔ CaG5-علاج شدہ گروپ: CON, 429.33 ± 142.22; CaG5, 698.29 ± 120.28 (CaG5 بمقابلہ CON, p <0.05); iqg5،="" 627.14="" ±="" 160.67;="" cs10,="" 790۔{67}}="" ±="" 274.22="" (cs10="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05)۔ پروتھرومبن="" کا="" وقت="" (سیکنڈ)="" درج="" ذیل="" تھا:="" con،="" 62۔{74}}="" ±="" 47.30;="" cag5،="" 52.71="" ±="" 4.96;="" iqg5،="" 52.14="" ±="" 5.58;="" cs10،="" 55۔{89}}="" ±="">

سیرم بائیو کیمسٹری

IQG- اور CS-علاج شدہ گروپس (ٹیبل 1) کے سیرا میں، فاسفولیپڈ کی سطح (mg/dL) بوڑھے چوہوں میں 1 ماہ کے بعد کنٹرول سیرا کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی: CON, 271.78 ± 91.74; CaG5، 233.67 ± 71۔{13}}; IQG5، 173.2 ± 32۔{20}2 (IQG5 بمقابلہ CON، p < 0.05);="" cs10،="" 259.7="" ±="" 57.27="" (cs10="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05)۔ مفت="" فیٹی="" ایسڈ="" کی="" سطح="" (μeq/l)="" میں="" کمی="" آئی:="" con,="" 686.78="" ±="" 104.67;="" cag5،="" 431.33="" ±="" 66.22="" (cag5="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05)؛ iqg5،="" 405.6="" ±="" 63.39="" (iqg5="" بمقابلہ="" con،=""><0.05); cs10,="" 566.9="" ±="" 115.38="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). also,="" serum="" gpt="" (alt)="" levels="" (iu/l)="" in="" the="" cag-="" and="" iqg-="" treated="" groups="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" control="" group="" in="" aged="" rats:="" con,="" 76.33="" ±="" 40.21;="" cag5,="" 36.78="" ±="" 8.0="" iu/l;="" iqg5,="" 43.22="" ±="" 13.86="" (iqg5="" vs.="" con,p="" <="" 0.05);="" cs10,="" 53.44="" ±="" 11.36="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). fur-="" thermore,="" the="" mean="" creatinine="" phosphokinase="" (ck="" u/l)="" level="" in="" the="" cag-treated="" group="" was="" lower="" than="" that="" in="">

بوڑھے چوہوں میں کنٹرول گروپ: CON, 125.78 ± 91.66; CaG5، 1{{10}}2.89 ± 65.73 (CaG5 بمقابلہ CON، p < 0.05);="" iqg5،="" 91.22="" ±="" 24.74;="" cs10،="" 131.2="" ±="" 62.56۔="" عمر="" رسیدہ="" چوہوں="" میں="" اوسط="" سیرم="" گلوکوز="" (mg/dl)="" میں="" نمایاں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" تھی="" (ہر="" گروپ="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05): con,="" 435.11="" ±="" 105.42;="" cag5،="" 304.0="" ±="" 44.44;="" iqg5،="" 275.9="" ±="" 43.18;="" cs10،="" 317.8="" ±="">

IQG سے علاج شدہ گروپ میں اوسط کل کولیسٹرول لیول (mg/dl) بوڑھے چوہوں کے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں کم تھا، اور یہ فرق بھی اہم تھا: CON, 212.67 ± 92.82; CaG5، 181.44 ± 68.4; IQG5، 124.1 ± 23.6 (IQG5 بمقابلہ CON، p < 0.05);="" cs10،="" 198.9="" ±="">

اس کے علاوہ، ٹرائگلیسرائڈ کی سطح (mg/dL) درج ذیل تھی: CON, 207.89 ± 101.95; CaG5، 136.22 ± 61.6; IQG5، 103.3 ± 35.59 (IQG5 بمقابلہ CON، p < 0۔{59}}5);="" cs10،="" 183.4="" ±="" 104.74۔="" ldl="" کولیسٹرول="" (mg/dl)="" کی="" سطح="" کم="" ہوئی:="" con,="" 74.67="" ±="" 44.91;="" cag5،="" 69.0="" ±="" 31.3;="" iqg5,="" 41.44="" ±="" 10.14="" (iqg5="" بمقابلہ="" con,="" p=""><0.05); cs10،="" 65.22="" ±="" 18.52۔="" کنٹرول="" (ہر="" گروپ="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05): con,="" 10.9="" ±="" 2.26;="" cag5،="" 8.12="" ±="" 1.48;="" iqg5،="" 6.49="" ±="" 0.89;="" cs10،="" 8.14="" ±="" 2.17،="" جدول="">

آکسیڈیٹیو نقصان میں کمی

مالونڈیالڈہائڈ (MDA، nmol/ml) ہر GAG علاج کے 1 مہینے کے بعد پرکھا گیا [CON, 252.9 ± 13.1; CaG5، 175.1 ± 5.8 (30.32 فیصد کمی)۔ ہر GAG اور chondroitin سلفیٹ کے علاج نے ہیپاٹائٹس میں لپڈ پیرو آکسیڈیشن کو کم کیا (تصویر 4a)۔ خون میں پروٹین کاربونیل کی حراستی بالترتیب GaG5، IQG5 اور CS10 میں 68.52 فیصد، 36.89 فیصد اور 53.70 فیصد کے تناسب سے کم ہوئی (تصویر 4b)۔ لیکن، ہر GAG میں ہیپاٹوسیٹ کاربونیئل مواد (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) میں کنٹرول کے مقابلے میں کوئی شماریاتی فرق نہیں تھا۔

آکسیڈیٹیو انزائم (کیٹالیس، جی پی ایکس، جی ایس ٹی، ایس او ڈی) کی مقدار

GAG علاج کے 1 ماہ بعد ہیپاٹوسائٹس میں Catalase سرگرمی (mg protein/min) درج ذیل تھی: CON, 17.72 ± 2.81; CaG5، 19.87 ± 3.88; IQG5، 17.22 ± 4.55; CS10، 19.23 ± 3.55۔ تمام CaG سے علاج شدہ hepatocyte گروپوں میں Catalase کی سرگرمی میں اضافہ ہوا۔ سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD) ایک فری ریڈیکل (سپر آکسائیڈ) سکیوینجنگ انزائم ہے۔ SOD سرگرمی (nmol/min/ml) علاج کے گروپوں میں کنٹرول کے مقابلے میں بڑھی: کنٹرول، 381.44 ± 85.32؛ CaG5، 400.56 ± 60.62; IQG5، 386.72 ± 69.22; CS10، 513.05 ± 60.07۔ علاج (CaG5 بمقابلہ CON، p <0.05)، اور="" گلوٹاتھیون="" ایس-ٹرانسفراز="" سرگرمی="" (nmol/min/ml)="" کے="" ذریعے="" cag="" سے="" علاج="" شدہ="" ہیپاٹوسیٹ="" گروپ="" میں="" گلوٹاتھیون="" پیرو="" آکسیڈیز="" سرگرمی="" (یونٹ/ملی="" گرام="" پروٹین)="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا۔="" کنٹرول="" گروپ="" (cag5="" بمقابلہ="" con،="" p=""><0.05) (ٹیبل="" 2)="" کے="" مقابلے="" cag="" گروپ="" میں="" بھی="" نمایاں="" اضافہ="" ہوا="">

سائٹوکائن IL-1 اور IL-10 کی پیداوار

IL-10 کی سطحوں میں اضافہ CaG سے علاج شدہ گروپ میں دیکھا گیا۔ سیرم میں IL-1 (ρg/ml) کی سطح 1 تک کم ہو گئی تھی۔

جدول 1 عمر رسیدہ چوہوں کے سیرولوجیکل نتائج جو 1 ماہ تک CaG یا IQG کے ساتھ علاج کیے گئے تھے۔

CaG یا IQG علاج کا مہینہ، جو مرکبات کی سوزش کے خلاف کارروائیوں کا مظاہرہ کرتا ہے: کنٹرول، 251.3 ± 70.7؛ CaG5، 102.9 ± 9.5; IQG5، 110.4 ± 5.2; CS10, 110.4 ± 10.1 (ہر گروپ بمقابلہ CON، p <0.05)۔ چوہوں="" میں="" cag="" علاج="" کے="" 1="" ماہ="" بعد="" il-10="" سرگرمی="" (ρg/ml)="" میں="" اضافہ="" ہوا:="" con,="" 34.9="" ±="" 11.5;="" cag5،="" 67.4="" ±="" 13.3="" (cag5="" بمقابلہ="" con،=""><0.05); iqg5,="" 55.5="" ±="" 24.7;="" cs10,="" 28.0="" ±="" 3.8="" (fig.="" 5).="" the="" il-10="" levels="" in="" the="" cs10="" group,="" was="" statistically="" different="" from="" that="" in="" the="" con="" group="" (cs10="" vs.="" con,p=""><>

مقداری ریئل ٹائم پی سی آر تجزیہ کے ذریعہ جین کا اظہار

The data represented that PCR cycle required number (Ct value) when the concentration of PCR amplicon are equilibrated by sample amplicon. Median CT values of 5 sample's represented, but there was no difference from the control group (Ct vale >2۔{1}}) استعمال شدہ پرائمر ترتیب پر (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔

ڈی این اے مائیکرو رے

ماؤس 28 K cDNA کلون سرنی کا استعمال کرتے ہوئے مائیکرو رے تجزیہ CaG، IQG، اور CS سے علاج شدہ 15- ماہ پرانے SD چوہے کے جگر میں جین ایکسپریشن پروفائلز کی شناخت کرنے کے لیے، اور ممکنہ کے بارے میں معلومات فراہم کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔مخالف عمرمارکر

کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، CaG5 گروپ نے 118 جینز میں 2- سے 4-گنا اضافہ، 11 جینز میں 4- 8-گنا اضافہ، اور 8-گنا سے زیادہ 2 جینوں میں اضافہ بقیہ ~30،000 جینوں کے اظہار کی سطح ایک جیسی رہی۔ ساٹھ جینوں کو 2- سے 4- گنا تک ریگولیٹ کیا گیا تھا، اور 4 نے 4- سے 8-گنا کمی ظاہر کی تھی۔

کنٹرول گروپ کے مقابلے میں IQG5 گروپ میں، 162 جینز 2- سے 4- گنا بڑھے، 10 جینز 4- سے 8- گنا بڑھے، اور 3 جینز بڑھے 8- گنا سے زیادہ۔ دوسری طرف، 66 کو 2- سے 4- گنا اور 7 کو 4- سے 8- گنا تک کم کیا گیا۔

ٹیبل 2 بوڑھے چوہے کے جگر میں گوبر کی چقندر گلائکوسامینوگلیکان کی اینٹی آکسیڈینٹ انزائم سرگرمیاں

کنٹرول گروپ کے مقابلے میں CS10 گروپ میں 63 جینز کو 2- سے 4- گنا تک بڑھایا گیا، 2 جینوں کو 4- سے 8- گنا تک بڑھایا گیا، اور 2 جینز کو اپ ریگولیٹ کیا گیا۔ 8- گنا سے زیادہ۔ اڑتیس جینز کو 2- سے 4- گنا تک کم کیا گیا، 4 کو 4- سے 8- گنا تک کم کیا گیا، اور 4 کو 8- گنا سے زیادہ کم کیا گیا۔

جب کنٹرول گروپ سے موازنہ کیا جائے تو، Lipocalin2 (Lcn2) جین میں تقریباً 10-CaG میں5- گنا، IQ5 گروپ میں 46-گنا، اور {{6} کا اضافہ ہوا۔ CS10 گروپ میں فولڈ کریں۔ CaG5-علاج شدہ چوہوں کے جگر کے ٹشوز میں، lysil oxidase (Lox) کو 0.13 کے تناسب سے کم کیا گیا، یعنی جین کے اظہار میں کمی واقع ہوئی۔ CaG5 علاج شدہ چوہا گروپ نے، کنٹرول کے مقابلے میں، ظاہر کیا کہ 131 جینز بشمول لیپوکالن 2، اولیگوساکرائڈ بائنڈنگ پروٹین (Lbp)، اور سیرین پیپٹائڈیس انحیبیٹر، کازال ٹائپ 3 (اسپنک 3) کو اپریگولیٹ کیا گیا تھا (ٹیبل 3) اور 64 جینز بشمول لائسلوکسیڈا، سیرین ڈیہائیڈریٹیس (ایس ڈی ایس) اور ریٹینول سیچوریٹ (ریٹریٹ) کو نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا (ٹیبل 4)۔ CaG5-علاج شدہ گروپ نے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، 131 جینوں کے اپ ریگولیشن کی نمائش کی، جس میں لیپوکالن 2، اولیگوساکرائڈ بائنڈنگ پروٹین (Lbp)، اور سیرین پیپٹائڈیس انحیبیٹر کازال ٹائپ 3 (اسپنک3) (ٹیبل 3) شامل ہیں۔ ) اور 64 جینوں کی تنزلی، بشمول لائسل آکسیڈیس (لوکس)، سیرین ڈیہائیڈریٹیس (ایس ڈی ایس)، اور ریٹینول سیچوریٹ (ریٹسیٹ) (ٹیبل 4)۔ یہ اعداد و شمار lipocalin 2 اور adipokines کی طرف اشارہ کرتے ہیں، جیسا کہ اپ ریگولیٹڈ جینز، اور lysyl oxidase (heparanase سے متعلق)، ایک کم ریگولیٹڈ جین کے طور پر، ممکنہ علاج کے نشانات کے طور پر جو عمر بڑھنے اور موٹاپے کے خلاف کام کرتے ہیں۔

CaG کی خصوصیت

GaG کے امینو، تیزابی، اور غیر جانبدار مونو سیکرائڈز کی ترکیبیں GC-MS (ٹیبل 5) کے ذریعے طے کی گئیں۔ CaG کے بنیادی امینو مونوساکرائیڈز مندرجہ ذیل ترتیب میں ہیں: D-glucosaminic acid > N-acetyl-galactosamine > N-acetyl-D-gactosaminitol > galactosamine HCl > galactosaminic acid > galactosamine > glucuronic acid۔ اس کے علاوہ، CaG میں پائے جانے والے غیر جانبدار مونوساکرائڈز بنیادی طور پر - گلوکوز اور مینیٹول ہیں، جبکہ معمولی میں arabinose اور rhamnose شامل ہیں۔

کارڈیو پروٹیکشن کے اشارے

اس تجربے میں، ہم نے سی اے جی کے براہ راست اثر کو مزاحمتی شریانوں پر وٹرو میں انکیوبیٹڈ فینائلفرین-حوصلہ افزائی سنکچن اور ایسٹیلکولین-حوصلہ افزائی نرمی کے ساتھ استعمال کرتے ہوئے نمایاں کیا۔ CaG کا اندازہ کارڈیو پروٹیکٹو ایجنٹ کے طور پر کیا گیا تھا۔ CaG میں ارتکاز ردعمل کا منحنی خطوط اس کے مقابلے میں نیچے کی طرف منتقل کر دیا گیا تھا جو کہ کنٹرول (صرف پی بی ایس) علاج کے بعد دیکھا گیا تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ دل کی تحریک ارتکاز پر منحصر طریقے سے ہوئی ہے (تصویر 6)۔

بحث

عمر بڑھنا کسی جاندار کی جسمانی و منطقی صلاحیت میں مسلسل کمی کا ایک عمل ہے، جو پورے نظام کی سطح پر جمع تبدیلیوں اور عدم استحکام سے ظاہر ہوتا ہے [13]۔ Glycosaminoglycan کے بارے میں خیال کیا جاتا ہے کہ وہ کارٹلیج، ہڈی، ڈسکس، جلد [23]، عروقی نظام [8] وغیرہ کی تباہی کو روک کر بڑھاپے کے مضر اثرات کو کم کرتا ہے۔ فی الحال قائم شدہ بائیو کمپیٹیبل اور بلڈ کمپیٹیبل میں سے ایک سمجھا جاتا ہے۔

بائیو میٹریلز جو کہ زبردست ساخت اور املاک کے رشتے کی پیش کش کرتے ہیں جیسے اینٹی چپکنے والی اور اینٹی مائکروبیل خصوصیات کے ساتھ چائٹوسن میں ترمیم شدہ پولی یوریتھین گرافٹس پر ہیپرین اموبیلائزیشن [24]۔ آج کل، درجہ حرارت پر قابو پانے کی آمد نے بڑے پیمانے پر کیڑے پالنے کے نظام کا ڈیزائن ممکن بنا دیا ہے۔ لہذا، glycosaminoglycan

الکحل کے عرق کی باقیات کے طور پر کیڑے پرانتستا سے حاصل کیا جاسکتا ہے۔ گوبر کے چقندر اور B. ignitus Queenز سے حاصل ہونے والی ایسی خام دوائیوں کا مطالعہ ان کے فعال اجزاء کی نشاندہی کرنے یا ان کے عرق کو انسانی استعمال کے لیے محفوظ بنانے کی کوشش میں کیا گیا ہے۔ گوبر کی چقندر C. molossus کو N-acetyl-dopamine dimers، molossusamide AC (1-3) پیدا کرنے کے لیے پاک کیا گیا تھا

COX-1 اور COX-2 روکنے والی سرگرمی [25]؛ chitosan [26] ; میلانین [27]؛ اور سیرین پروٹیز [9، 28]۔ ایک بومبل بی (Bombus ignitus) کے عرق میں شہد کی مکھی کے زہر سیرین پروٹیز [29]، پیروکسیریڈوکسینز [30]، اور پیپٹائڈوگلیکن ریکگنیشن پروٹین (PGRP-S) [31] پر مشتمل دکھایا گیا تھا۔

بڑھاپے کو روکنے یا اس میں تاخیر کرنے کی حکمت عملیوں میں ڈی این اے، پروٹینز اور لپڈس کو آکسیڈیٹیو سیلولر نقصان کی مرمت کے لیے اینٹی آکسیڈنٹس کا استعمال شامل ہے، نیز اسٹیم سیل میں ثالثی ٹشو کی تخلیق نو اور جین تھراپی [32]۔ ہیپاٹوسائٹ لپڈ آکسیڈیٹیو تناؤ کی حالتوں میں لپڈ آکسیڈیٹیو نقصان مارکر کے طور پر، CaG علاج کے ذریعہ میلونڈیالڈہائڈ کو کم کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، خون میں کاربونیل مواد، خاص طور پر نیوٹروفیل، سی اے جی کے علاج سے کم ہوا اور سیلولر آکسیڈیٹیو پروٹین کو پہنچنے والے نقصان کی مرمت کا مظاہرہ کیا۔

C. molossus اور B. ignitus queens سے Glycosaminoglycans بنیادی طور پر D-glucosaminic acid پر مشتمل ہوتا ہے بطور امیڈک مونوساکرائیڈ اور N-acetyl-galactosaminitol بطور امینو

monosaccharide، غیر جانبدار monosaccharides کے طور پر -گلوکوز اور D-mannitol کے ساتھ. اس طرح، مرکب سیل جھلی کے رسیپٹرز تک رسائی حاصل کر سکتا ہے اور توانائی کے تحول کو تبدیل کر کے عمر سے متعلقہ بیماریوں کی وجوہات کو روک سکتا ہے۔ Glycosami-noglycans جوڑنے والے ٹشوز [23]، ٹوٹے ہوئے کارٹلیج، ڈسکس، ہڈیوں اور گلائکوپروٹینز کو سالماتی سطح پر مرمت کر سکتے ہیں، GAG پروٹینوں کے درمیان ایک بانڈ بناتا ہے [9]۔ اس تجربے میں استعمال کیے گئے چوہے پرانے تھے اور ان کا وزن تقریباً 680 گرام تھا، لہٰذا، جسمانی وزن میں کمی لانا آسان نہیں تھا، لیکن ہم نے چربی کے وزن اور ایڈیپوسائٹ کی تعداد میں کمی دیکھی۔ جیسا کہ زیادہ تر گلائکوسامینوگلائیکانز کے ساتھ، CaG اور IQG نے سوزش سے متعلق پیرامیٹرز کی سیرم کی سطح میں کمی لائی: فری فیٹی ایسڈ، AST (SGPT)، کریٹینائن کناز (دل کے کام سے متعلق)، گلوکوز، یورک ایسڈ، اور ہائپرگلیسیمیا سے متعلق سطحیں: کولیسٹرول، کل، ٹرائگلیسرائیڈ، ایل ڈی ایل کولیسٹرول، وغیرہ۔ علاج شدہ گروپوں کے مفت فیٹی ایسڈ کی سطح (متعلقہ فیٹی لیور) میں شماریاتی طور پر نمایاں کمی واقع ہوئی، CaG گروپ میں 36.7 فیصد اور IQG گروپ میں 40.94 فیصد۔ اس کے علاوہ، sGPT کی سطح (جگر کے متعلقہ فعل) میں نمایاں کمی واقع ہوئی، CaG گروپ میں 51.58 فیصد اور IQG گروپ میں 43.38 فیصد۔

ڈی این اے مائیکرو رے تجزیہ سے تیار کردہ ڈیٹا نے اس کی حمایت کی۔مخالف عمرIQG کا اثر، 14-ماہ پرانے SD چوہوں میں جین ایکسپریشن پروفائلز میں معنی خیز تبدیلیوں کے ساتھ 1-ماہ کے علاج کی مدت کے بعد مشاہدہ کیا گیا۔ CaG5-علاج شدہ چوہوں میں، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، 131 جینوں میں اضافہ ہوا، جس میں lipocalin 2 [33]، lipo-saccharide بائنڈنگ پروٹین (Lbp) [34]، اور سیرین پیپٹائڈیس انحیبیٹر، Kazal شامل ہیں۔ type3 (Spink3) [35] اور 64 جینوں میں کمی واقع ہوتی ہے، بشمول lysyl oxidase (Lox) [36]، serine dehydratese (sds) [37]، اور retinol saturase (Retsat) [38]۔ ڈیٹا لیپوکلن 2 اور اڈیپوکائنز کی طرف اشارہ کرتا ہے، جو اپ ریگولیٹڈ تھے، اور لائسائل آکسیڈیس (ہیپرانیز سے متعلق)، جو کہ ممکنہ علاج کے مارکر کے طور پر نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا۔مخالف عمرموٹے جانوروں میں اثرات

موجودہ مطالعہ نے 1 ماہ تک CaG یا IQG کے ساتھ علاج کے بعد بوڑھے چوہوں میں جین ایکسپریشن پروفائلز میں معنی خیز تبدیلیوں کا مشاہدہ کیا۔ lipocalin-2 کے جین ایکسپریشن، جو کہ انسولین کے خلاف مزاحمت [39] میں شامل ایک اڈیپوکائن ہے اور لپڈ بائنڈنگ خوشحالی کے ساتھ ایک خفیہ پروٹین ہے، تقریباً 10 گنا بڑھا تھا۔ یہ ایک مائیکرو رے مطالعہ کے ساتھ متفق ہے جس میں بتایا گیا ہے کہ سویابین کا استعمال اینڈوجینس امائلائیڈ چیپیرون، لیپوکلین قسم کے پروسٹاگلینڈن ڈی 2 سنتھیس (Ptgds) میں اضافے کا سبب بنتا ہے، جس سے امائلائیڈ کو دبانا پڑتا ہے- اور علمی خرابی کی روک تھام ہوتی ہے [4{{ 22}}]۔ Lipopolysaccharide (LPS) بائنڈنگ پروٹین (LBP)، مائکروبیل ٹرانسلوکیشن کا ایک سروگیٹ مارکر، کم جسمانی فعل اور بڑھتی ہوئی سوزش سے وابستہ ہے [41]۔ عام عمر بڑھنے کا عمل انسانوں میں خون کے جمنے کے نظام کو بدل دیتا ہے۔ قدرتی اینٹی کوگولنٹ، بشمول اینٹی تھرومبن III، ہیپرین کوفیکٹر II، پروٹین سی، پروٹین ایس، اور ٹشو فیکٹر پاتھ وے انابیٹر، خون کے جمنے کے نظام کے رد عمل کو تبدیل کر سکتے ہیں [42]۔ اس مطالعہ میں، CaG (162.6 فیصد)، IQG (146.0 فیصد)، اور CS10 (184.0 فیصد) میں فیکٹر I (فائبرینوجن) میں نمایاں اضافہ ہوا ہے - جب کنٹرول، PBS-علاج شدہ گروپ کے مقابلے میں علاج شدہ گروپس۔ نیز، ہمارے ڈی این اے مائیکرو رے ڈیٹا میں ایل بی پی (ایل پی ایس بائنڈنگ پروٹین) کی سطح کو بڑھا دیا گیا، جس سے یہ تجویز کیا گیا کہ ہیپرین (جی اے جی) ایل بی پی سے منسلک ہے، ایل پی ایس کو سی ڈی 14 میں منتقل کرنے میں سہولت فراہم کرتا ہے، اور ایل پی ایس کی ثالثی سے پیریفرل بلڈ مونوکیٹس کی ایکٹیویشن کو بڑھاتا ہے، جس کے نتیجے میں anticoagulant سرگرمی [43]. اس تجربے میں ایک ٹرپسن انہیبیٹر، سیرین پروٹیز انحیبیٹر کازل ٹائپ 3 (اسپنک 3) کو اپ گریڈ کیا گیا تھا، جو پیراکرائن ماڈیولیشن کے لیے ایک کردار کی نشاندہی کرتا ہے۔ یہ ایمبریو ایمپلانٹیشن میں بھی شامل ہے [44]۔ چونکہ اسپنک 3 ایک اہم سیرین پروٹیز روکنے والا ہے، اس کا اپ ریگولیشن ایک اہم اینڈوجینس سائٹو پروٹیکٹو میکانزم کی عکاسی کرسکتا ہے جو مزید چوٹ کو روکے گا [45]۔ لائسائل آکسیڈیس کی کمی اس بات کی نشاندہی کر سکتی ہے کہ ہیپرین (جی اے جی) جو لائسائل آکسیڈیس کو پہلے سے بنی ہوئی فائبروں سے سخت پابند کرنے سے روکتی ہے شاید ہی متاثر ہوئی ہو [46]۔ اس تجربے میں نظر آنے والے ریٹینول سیچوریٹ کی کمی قابل ذکر ہے، کیونکہ ریٹینول سیچوریٹ ایڈیپوجینیسیس کو فروغ دیتا ہے اور موٹاپے میں اس کو کم کیا جاتا ہے [47]۔ ایک مفروضے کے مطابق، ایڈیپوز ٹشو کثافت، ایک ناول بائیو مارکر جو بوڑھے بالغوں میں موت کے خطرے کی پیش گوئی کرتا ہے جو کہ سوزش سے متعلق نہیں لگتا ہے [48]، مزید برآں، CaG نے ایڈیپوز کثافت کو نمایاں طور پر کم کر دیا ہے جو ایک طاقتور کا وعدہ کرتا ہے۔مخالف عمرایجنٹ

نتائج

گوبر کی چقندر گلائکوسامینوگلیکن نے سیرم میں کولیسٹرول اور ٹرائگلیسرائیڈ کی سطح کو کم کیا، ایڈیپوز ٹشو کے وزن میں کمی اور فری فیٹی ایسڈ، جی پی ٹی، گلوکوز، اور یورک ایسڈ کے سیرم کی سطح کو معمول پر لانے، اور جمنے کے وقت کو طول دیا جو خون کے جمع ہونے اور لپڈ کو روکتا ہے۔ عروقی اینڈوتھیلیل رکاوٹوں میں جمع ہونا جو گردشی نظام میں ہومیوسٹاسس میں حصہ ڈالتے ہیں۔ سیرم میں IL{{0}} (pg/ml) CaG یا IQG علاج کے 1 مہینے تک کم ہو گیا تھا، جو سوزش مخالف کارروائی کا مظاہرہ کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، جگر کے حفاظتی جین لیپوکلین کو بہت زیادہ (10-گنا) اپ گریڈ کیا گیا تھا اور CaG سے علاج شدہ چوہوں میں lysyl oxidase کو کم کیا گیا تھا (01-fold)۔ کیڑوں سے حاصل کردہ CaG ہو سکتا ہے a

ممالیہ جانوروں کے ذرائع سے ہیپرین اور دیگر GAGs کے لیے محفوظ متبادل، کیونکہ کیڑے کے ذرائع سور جیسے جانوروں سے متعدی وائرس کی منتقلی کے امکانات کو کم کرتے ہیں۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ CaG اور BIQ صرف قدرتی نہیں ہوسکتے ہیں۔مخالف عمرایجنٹ بلکہ فعال غذائیں بھی ہوں، جو کہ چائٹوسن اور مستقبل کے بائیو میٹیریلز کی طرح ہماری روزمرہ کی زندگی میں اہم کردار ادا کرتی ہیں۔

مخففات

ALP: الکلائن فاسفیٹیس؛ ALT (GPT): گلوٹامیٹ پائروویٹ ٹرانسامینیز؛ اے پی ٹی ٹی: چالو جزوی تھروموبلاسٹن کا وقت؛ AST(GOT): گلوٹامیٹ آکسالواسیٹیٹ ٹرانسامینیز؛ BUN: خون یوریا نائٹروجن؛ CaG 5: گوبر کی چقندر (Catharsius molossus) glycosaminoglycan 5 mg/kg؛ سی کے: کریٹینائن فاسفوکنیز؛ CON: کنٹرول گروپ؛ CRP: C-reactive پروٹین؛

CS10: کونڈروٹین سلفیٹ (10 ملی گرام/کلوگرام)؛ GAG: Glycosaminoglycan؛ جی جی ٹی: - گلوٹامل ٹرانسفراز؛ H. Chol: ہائی کولیسٹرول؛ IQG5: Bombus ignitus کی ملکہ (bumblebee کی ایک قسم) glycosaminoglycan 5 mg/kg؛ l.Chol: کم کولیسٹرول؛ LDH: لییکٹیٹ ڈیہائیڈروجنیز؛ پی ٹی: پروتھرومبن ٹائم؛ T. Chol: کل کولیسٹرول؛ ٹی جی: ٹرائگلیسرائیڈ

اعترافات

مصنفین نیشنل اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنس برائے مالیاتی (RDA, PJ011853) اور تکنیکی مدد کو تسلیم کرتے ہیں۔

فنڈنگ

اس کام کو دیہی ترقی کی انتظامیہ کے بنیادی تحقیقی منصوبے PJ011853 کی مدد حاصل تھی۔

ڈیٹا اور مواد کی دستیابی

تمام ڈیٹا جرنل پورٹلز پر جمع شدہ مخطوطہ میں دستیاب ہے۔ اس جمع کرانے کے ساتھ ساتھ کسی دوسری معاون فائلوں/ڈیٹا کی ضرورت نہیں ہے۔

مسابقتی مفادات

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کی کوئی مسابقتی دلچسپی نہیں ہے۔

مصنفین کی شراکتیں۔

MY نے زیادہ تر تجربات کیے، مخطوطہ تیار کیا: مطالعہ کا تصور کیا، اس کے ڈیزائن اور کوآرڈینیشن میں حصہ لیا، ڈیٹا اکٹھا کیا اور تجزیہ کیا، اور مخطوطہ تیار کیا۔ بی جے نے جانوروں کے مطالعے کیے، آکسیڈیٹیو سے متعلق انزائم پرکھ میں حصہ لیا۔ HJ نے cytokine Assays کئے۔ جے ایس نے جینیاتی ترتیب کی سیدھ میں حصہ لیا۔ کے کے نے ڈی این اے مائیکرو رے میں حصہ لیا۔ وائی ​​ایس نے مزاحمتی شریانوں کے ردعمل کا ویوو مطالعہ کیا۔ تمام مصنفین نے حتمی مخطوطہ کو پڑھا اور منظور کیا۔

اشاعت کے لیے رضامندی۔

اس مخطوطہ میں کسی بھی فرد کا ڈیٹا کسی بھی شکل میں نہیں ہے۔

اخلاقیات کی منظوری

جانوروں سے متعلق مطالعات کو نیشنل اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنس، RDA، جنوبی کوریا (NAAS1503) کی لیبارٹری اینیملز ایتھیکل کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

مخطوطات کی رپورٹنگ مطالعات میں انسانی شرکاء، انسانی ڈیٹا یا انسانی ٹشوز شامل نہیں تھے۔

پبلیشر کا نوٹ

Springer Nature شائع شدہ نقشوں اور ادارہ جاتی وابستگیوں میں دائرہ اختیار کے دعووں کے حوالے سے غیر جانبدار رہتا ہے۔

مصنف کی تفصیلات

1محکمہ زرعی حیاتیات، نیشنل اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنس، رورل ڈیولپمنٹ ایڈمنسٹریشن (RDA)، وانجو-گن 55365، جنوبی کوریا۔ 2 کالج آف فارمیسی، اجو یونیورسٹی، سوون 442-749، جنوبی کوریا۔ 3 فارماکوجینیچپس انکارپوریٹڈ، چنچیون 200-160، جنوبی کوریا۔