وٹرو 2 میں بوائین آوسیٹس پر یورولیتھن اے کا اینٹی ایجنگ اثر

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

2.8 شماریاتی تجزیہ

ایمبریو پروڈکشن اور کوالٹی سیشنز کے ڈیٹا کا تجزیہ SAS (Statistical Analysis Systems, SAS Inst., Inc., Cary, NC, USA) سے Proc Glimmix کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، بائنری ڈسٹری بیوشن اور لاگٹ کو بطور لنک فنکشنز استعمال کرتے ہوئے۔ عام لکیری مخلوط ماڈل میں علاج (UA خوراکیں، عمر بڑھنے کا اثر، اور خواتین کی عمر، اور ان کا تعامل) ایک مقررہ اثر کے طور پر شامل ہے اور ایک بے ترتیب اثر کے طور پر نقل کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، ہر علاج کے ذرائع کا حساب لگایا گیا، اور گروپوں کے درمیان موازنہ PDIFF ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ JC-1 ڈیٹا، mRNA ٹرانسکرپٹ لیولز، اور mt-DNA کاپیوں کی تعداد کا تجزیہ SAS کے Proc مکسڈ کا استعمال کرتے ہوئے ایک ماڈل کے ساتھ کیا گیا جس میں علاج (UA اثر، عمر بڑھنے کا اثر، اور/یا خواتین کی عمر، اور ان کا تعامل) ایک مقررہ اثر کے طور پر. سیشن کو بے ترتیب اثر سمجھا جاتا تھا۔ کروموسومل کنفیگریشنز کے ڈیٹا کا موازنہ فشر ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے گروپوں کے درمیان 2 x 2 ہنگامی جدول میں کیا گیا۔ نتائج کے تجزیے کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا جب p<>

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

3. نتائج

3.1۔پچھلا پرکھ—خوراک جوابی مطالعہ

میچوریشن میڈیم کے ساتھ تکمیل شدہ UA کے خوراک جوابی مطالعہ کے دوران مشاہدہ شدہ oocyte میچوریشن کی حیثیت کو شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ اس ضمیمہ نے oocytes کے جوہری پختگی کے مراحل کو نمایاں طور پر متاثر کیا۔ 50 UA گروپ (38.9±0.5 فیصد) نے کنٹرول (10.8±{{) کے مقابلے AI/TI فیز اسٹیٹس میں oocytes کی زیادہ شرح کا انکشاف کیا۔ 15}}.5 فیصد ,P=0۔{16}}3)اور 10 UA(0۔{33}}±0۔{{ 45} فیصد ,p=0۔{66}}006) گروپس۔ اس مرحلے میں، 25 UA (17.2±0.5 فیصد ,p=0.05) گروپ میں ایک اعلی شرح 10 UA گروپ کی بھی شناخت کی گئی۔ مزید برآں، 50 UA گروپ اور 1 UA(14.3±2.0 فیصد ,p=0.08) کے درمیان ایک رجحان پایا گیا۔سب سے زیادہ خوراک نے بھی نقصان دہ اثر دکھایا، جس سے میٹا فیز-II میں درجہ بندی شدہ oocytes کی تعداد کم ہو گئی۔ (MII) مرحلہ (50 UA, 44.4 ±2.0 فیصد) جب کنٹرول کے مقابلے میں 53}}.01)، 10 UA(89.3±6.5 فیصد،p=0.002) اور 25UA(82.8±9.0 فیصد ,p=0.01) گروپس۔بقیہ کے درمیان کوئی فرق نہیں دیکھا گیا۔ oocyte کی پختگی کے مراحل۔ GV اور CCl پختگی کے مراحل کو شکل 1 میں نہیں دکھایا گیا تھا، کیونکہ ان زمروں میں کسی oocytes کا اندازہ نہیں لگایا گیا تھا۔

خوراک کے جواب کے ٹیسٹ نے UA کے ارتکاز کا کلیویج اور ہیچڈ ایمبریو ریٹ پر کوئی خاص اثر نہیں دکھایا۔ تاہم، دن 7 میں پیدا ہونے والے جنین کی شرح UA کے مختلف ارتکاز سے متاثر تھی۔ 50 UA گروپ (7.2±2.7 فیصد) میں 1 UA (28.5±4.8 فیصد ,p=0.004)، 10 UA(20.4±4.0 فیصد) کے مقابلے دن 7 میں جنین کی شرح کم تھی۔ , p=0.03) اور 25 UA(18.5±4.7 فیصد ,p=0.05) گروپس۔ اگرچہ کنٹرول اور 50 UA گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا، ایک رجحان (p=0.06) کی نشاندہی کی گئی۔ مزید برآں، کنٹرول کے مقابلے میں 1 UA خوراک کی تکمیل کے بعد 7ویں دن جنین کی شرحیں (p =0.07) زیادہ ہوتی ہیں۔ مزید برآں، 1 UA گروپ نے کنٹرول (34.6 فیصد، n=10) اور 10 UA (26.8) کے مقابلے میں بہترین/اچھے ایمبریو کوالٹی (گریڈ 1 ایمبریو کا 68.9 فیصد، n=20) کی تعداد کو دوگنا کر دیا۔ فیصد، n=10۔ گریڈ 1 کے ایمبریو کی کم تعداد زیادہ خوراک کے ساتھ حاصل کی گئی: 25UAgroup (15.4 فیصد، n=4) اور 50UA (35.4 فیصد، n=3)۔ مذکورہ بالا نتائج کی بنیاد پر، 1 uM UA کو درج ذیل مطالعات میں آگے بڑھنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔

3.2۔تجربہ 1——بوڑھے اور جسمانی طور پر پختہ آکسیٹس کی اوسائٹ کا معیار اور نشوونما کی صلاحیت

3.2.1۔جوہری پختگی

ہم نے پریپبرٹل اور بالغ خواتین سے جمع شدہ عمر رسیدہ اور جسمانی طور پر پختہ آوسیٹس کی کروموسومل پختگی کی حیثیت پر UA ضمیمہ کے اثر کی تحقیقات کی۔ UA اثر سے آزادانہ طور پر، oocyte کی عمر اور خواتین کی عمر نے پختگی پر ایک اہم نقصان دہ اثر ڈالا۔ MII مرحلے کی اونچی شرحوں کی نشاندہی کنٹرول oocytes میں بوڑھوں کے مقابلے میں کی گئی تھی (22h=93.2±5.4 فیصد بمقابلہ 30h=77.6±4.1 فیصد، p {{11} }}۔{21}}2)۔ مزید برآں، AI/TI مرحلے (22h=3.4±0.5 فیصد بمقابلہ 30h =17.9±0.6 فیصد،p=0.01 اور پری بلوبرٹل=21.1±1.1 فیصد بمقابلہ بالغ=6.8±0.7 فیصد p =0.03) مزید برآں، IVM کے 30 گھنٹے کے بعد انحطاط شدہ oocytes کی زیادہ تعداد کی شناخت 22h کے بعد کے مقابلے میں کی گئی تھی (7.1 ±1.39 فیصد بمقابلہ 4.1±0.89 فیصد ,p =0.02) . خواتین کی عمر اور UA ضمیمہ نے انحطاط شدہ oocytes کی تعداد میں مداخلت نہیں کی (p 0.05)۔

دونوں میں وٹرو ایجنگ اور میچوریشن میڈیم کے لیے UA ضمیمہ نے پریپبرٹل اور بالغ خواتین میں oocytes کی کروموسومل ترتیب کو نمایاں طور پر متاثر کیا (p<0.05, figure="" 2).="" on="" the="" al/ti="" phase="" of="" the="" maturation="" status,="" higher="" rates="" of="" oocytes="" were="" found="" in="" this="" stage="" in="" the="" control="" aged="" 30="" h="" prepubertal="" group="" (46.7±0.5%)="" when="" compared="" to="" control="" prepubertal="" (0.0±0.0%,p="0.05)" and="" ua="" aged="" 30h="" prepubertal="" (0.0="" ±0.0%,p="0.02),and" both="" adult="" control="" (5.6±0.5%,p="0.01" and="" ua="" adult,0.0±0.0%,="" p="0.0002)and" control="" aged="" 30h="" adult="" (9.1±10%,p="0.02)groups." a="" trend="" was="" also="" identified="" between="" ua="" adults="" and="" ua="" aged="" 30="" h="" adult="" (p="">

مکمل جوہری پختگی کے مساوی MII مرحلے کے بارے میں، گروپوں کے درمیان اہم اختلافات بھی پائے گئے (شکل 2)۔ MII اسٹیج پر oocytes کی کم شرحیں 30 h prepubertal (53.3±20 فیصد) کنٹرول پری پیوبرٹل (10{{2{) کے مقابلے میں کنٹرول میں پائی گئیں۔ ±1.5 فیصد ±10.5 فیصد ,p=0.0002) اور 30 ​​بالغ (86.0±5.5 فیصد p =0.056) گروپس کو کنٹرول کریں۔ مزید برآں، UA بالغ گروپ نے UA کے مقابلے میں پختہ oocytes (MII) کی زیادہ شرح ظاہر کی جس کی عمر 30 h بالغ (76.2±11.3 فیصد،p=0.01)، 30h بالغ (86) کی عمر کو کنٹرول کرتی ہے۔ 0±5.5 فیصد ,p=0.08) اور کنٹرول بالغ (83.3±4.5 فیصد ,p=0.057)۔

oocyte کی پختگی کے باقی مراحل کے درمیان کوئی فرق نہیں دیکھا گیا۔flavonoidsخلاصہ طور پر، UA ضمیمہ عمر بڑھنے کے عمل میں جمع ہونے والے oocytes میں وٹرو پختگی کی ترقی میں بہتر ہوا، خاص طور پر پری بلوبرٹل خواتین میں۔ اس طرح UA کے ایک اہم اینٹی ایجنگ اثر کی نشاندہی کی گئی۔

3.2.2.Mitochondrial Membrane Potential

خواتین کی عمر کے oocytes میں mitochondrial dysfunction کی شمولیت اور UA اور زچگی کی عمر کے اثر کا تجزیہ کرنے کے لیے، mitochondrial membrane potential (MMP) کا مختلف گروپوں کے oocytes میں اندازہ کیا گیا۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

خواتین کی عمر اور UA اثرات سے آزادانہ طور پر، oocyte کی عمر بڑھنے کا MMP پر ایک اہم نقصان دہ اثر پڑا جس کا اندازہ ماپا سرخ اور سبز فلوروسینس کے تناسب کے طور پر کیا گیا (22 h کا تناسب =0.54±1.8 فیصد بمقابلہ 30hratio{{6} }.47±1.5 فیصد ,p=0.002)۔

خواتین کی عمر، عمر بڑھنے کا اثر، اور پختگی کے دوران UA کے ساتھ اضافی کا مجموعہ (p{{0}}۔{{10}}07) نے MMP کو متاثر کیا۔ (شکل 3)۔ جیسا کہ شکل 3 میں مشاہدہ کیا گیا ہے، MMP کی اعلی شرحیں UA prepubertal (تناسب=0.55±0.04) اور UA بالغ (تناسب=0.63±0.04) گروپوں میں حاصل کی گئی تھیں جہاں oocytes 22h کے لیے پختہ ہوئے تھے۔ ، بالترتیب 30 گھنٹہ بالغ (تناسب {23}}.45±0.03،p=0.03 اور p=0.0003، بالترتیب) گروپس۔hesperidin استعمال کرتا ہےمزید برآں، JC{{0}} مجموعی/monomers کے تناسب میں نمایاں اضافہ، جو MMP میں نمایاں اضافہ کی نشاندہی کرتا ہے، UA بالغ گروپ میں اس وقت دیکھا گیا جب کنٹرول بالغ (تناسب =0.47) کے مقابلے میں ±0۔ 03)، 30 گھنٹے کی عمر کے بالغوں کو کنٹرول کریں }}.001)گروپز۔ UA prepubertal، اور UA عمر 30 h prepubertal (p=0.07) کے درمیان بھی ایک رجحان کی نشاندہی کی گئی۔

خلاصہ طور پر، UA نے جسمانی پختگی کے دوران MMP کو بہتر کیا لیکن وہ پریپبرٹل اور بالغ oocytes دونوں میں عمر بڑھنے کے منفی اثر پر قابو پانے کے قابل نہیں تھا۔

3.2.3.ایمبریونک ڈیولپمنٹ

جنین کی نشوونما کی صلاحیت کا اندازہ کلیویج، ڈی 7، اور ہیچڈ ایمبریو ریٹ کے ذریعے کیا گیا، جو مختلف علاج (عمر رسیدگی اور UA سپلیمینٹیشن) کے ساتھ حاصل کیا گیا جو بالغ ہونے کے دوران پری بلوبرٹل اور بالغ خواتین کے COCs پر لاگو ہوتا ہے۔ خواتین کی عمر اور UA اثرات سے آزادانہ طور پر، oocyte کی عمر بڑھنے کا کلیویج (22h=79.5±1.7 فیصد بمقابلہ 30h=68.6±2.0 فیصد، p=0.0001)اور D7embryo کی شرح (22h=18.6±1.9 فیصد

بمقابلہ 30h=12.1±1.7 فیصد ,p=0۔{15}}1۔ D7 ایمبریو ریٹ کو بہتر بنانے کے لیے UA سپلیمنٹیشن بھی دکھایا گیا تھا (کنٹرول{ {8}}.1±1.5 فیصد بمقابلہ UA=20.0±2.0 فیصد ,p=0.0009)۔

خواتین کی عمر، بڑھاپے کے اثرات، اور پختگی کے دوران UA کے ساتھ ضمیمہ کے امتزاج نے نمایاں طور پر (p {{0}}۔{{30}}1) جنین کی نشوونما کو متاثر کیا، یعنی کلیویج اور D7 ایمبریو ریٹ (ٹیبل 2)۔ کلیویج کی زیادہ شرح اس وقت حاصل کی گئی جب بالغوں کے oocytes UA سپلیمنٹیشن کے ساتھ یا اس کے بغیر 22 گھنٹے تک پختہ ہو گئے (کنٹرول بالغ=1.4±3.2 فیصد اور UA بالغ=80۔ 9±3.4 فیصد ) اور پری پیوبرٹل oocytes 22 گھنٹے کے لیے UA سپلیمنٹیشن (UA prepubertal=80.6±3.2 فیصد) کے ساتھ پختہ ہو گئے، UA کے مقابلے میں 30بالغ (66.5±4.2 فیصد، p سے کم یا 0.01 کے برابر)، 30hprepubertal (66.9±3.9 فیصد،p 0.02 سے کم یا اس کے برابر) اور UA عمر 30h prepubertal (67.2±4.0 فیصد، p 0.01 سے کم یا اس کے برابر) گروپس (ٹیبل 2) پر قابو پالیں۔ ایک رجحان (p=0.09) کو کنٹرول بالغ اور 30 ​​گھنٹے کی عمر کے بالغ گروپوں کے درمیان بھی شناخت کیا گیا تھا۔

Another parameter that was significantly (p=0.01) influenced by the combination of the female age, the supplementation with UA, and COCs aging was the rate of embryos produced at day 7(Table 2). Exceptions were made for the UA prepubertal and UA 30 h prepubertal groups, the UA adult group presented the highest rates of the embryo at day7 (26.8±4.3%,p≤0.05). Moreover, lower D7 embryo rates were produced from aged oocytes from both adult and prepubertal females without the supplementation of UA (control aged 30hprepubertal=7.7±2.6% and control aged 30h adult=7.7±2.6%)compared to those that were supplemented with UA, respectively (UA aged 30 h prepubertal=18.9±4.0%,p=0.03 and UA aged 30 h adult=15.9±4.0%,p=0.09). The supplementation of UA to the maturation medium did not significantly (p>0.05) گریڈ 1,2 اور 3 کے تیار کردہ ایمبریو کے معیار کی شرحوں کو متاثر کرتا ہے، نہ ہی عمر بڑھنے کا اثر ہوتا ہے یا تمام مطالعہ شدہ اثرات ایک ساتھ ہوتے ہیں (ٹیبل 3)۔ تاہم، بہترین/اچھی کوالٹی کے ایمبریو کی تعداد جو اس وقت تیار کی گئی تھیں جب UA کو 22 گھنٹے تک پختہ ہونے والے oocytes کے ساتھ ملایا گیا تھا (ٹیبل 3)۔

3.3۔تجربہ 2

3.3.1.جین ایکسپریشن لیولز

Nrf2 سگنلنگ پاتھ وے پر UA اثر اور زچگی کی عمر کے اثر و رسوخ کا مطالعہ کرنے کے لیے، RT-qPCR کے ذریعے GCs کلچر میں NFE2L2 اور NQO1 جین کے اظہار کی سطحوں کے تجزیے کا اندازہ لگایا گیا۔ دیگر مطالعہ شدہ عوامل سے آزادانہ طور پر، خواتین کی عمر نے NFE2L2 جین کے اظہار کو نمایاں طور پر متاثر کیا، جو کہ پری پیوبرٹل خواتین (mRNA لیولز prepubertal=0) سے GCs میں NFE2L2 ٹرانسکرپٹس کے اعلیٰ درجے سے ظاہر ہوتا ہے۔{11}}0015 ±0.0012 فیصد بمقابلہ بالغ=0.00011±0.0012،p=0.048)۔

The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly(p>0.05) NFE2L2، NQOl اور mt-ND5 جینوں کے جین اظہار کی سطح کو متاثر کرتا ہے۔ شکل 4 ان جینوں کے اظہار کی سطح کی نمائندگی کرتا ہے جو UA سے علاج شدہ پری پبرٹل اور بالغ GCs دونوں میں متعلقہ کنٹرول کے ساتھ معمول پر لائے گئے تھے۔

3.3.2.mt-DNA کاپی نمبر

Analysis of mt-ND5 DNA content in GC culture from prepubertal and adult cows was assessed by qPCR. The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly (p>0.05) mt-ND5 جین کے کاپی نمبر کو متاثر کرتا ہے۔کھوئی ہوئی سلطنتFigure5 اس جین کے کاپی نمبر کی نمائندگی کرتا ہے جس کو متعلقہ کنٹرولز کے ساتھ معمول بنایا گیا ہے، دونوں UA سے علاج شدہ prepubertal اور بالغ GCs میں۔

4. بحث

پچھلی دہائیوں میں، مویشیوں میں اے آر ٹی کی درخواست کی بڑھتی ہوئی مانگ دیکھی گئی ہے [8,46,47]۔ مزید برآں، زچگی کی عمر سے منسلک تاخیر سے بچہ پیدا کرنا اب خواتین کو ART [5] کا سہارا لینے پر مجبور کرنے کا بنیادی عنصر بن گیا ہے۔ Oocyte کوالٹی ایک کامیاب تصور کے وقوع پذیر ہونے کے لیے اہم ہے، اور مادہ گیمیٹ کی عمر بڑھنا ART کی کامیابی کے لیے ایک اہم تشویش ہے۔ اس میدان میں بڑھتی ہوئی ترقی کے باوجود، لاگو ٹیکنالوجیز ابھی تک زرخیزی کو بحال کرنے کے قابل نہیں ہیں، حیاتیاتی گھڑی کو پلٹ رہی ہیں [7]۔ موجودہ کام میں، مویشیوں کے oocytes میں عمر سے منسلک بانجھ پن کے مطالعہ کے لیے ایک ماڈل تیار کیا گیا تھا۔ انسانی حمل، follicular اور endocrine کے واقعات[48,49] میں مماثلت کی وجہ سے، یہ ماڈل انسانی تحقیق کے لیے بھی مفید ہو سکتا ہے، اخلاقی اور جسمانی پابندیوں سے گریز کرتے ہوئے جو انسانی oocytes میں ان مطالعات کو روکتی ہیں۔ عمر رسیدہ خواتین گیمیٹس کے لیے ہمارا ماڈل تولیدی بڑھاپے اور زرخیزی کی خرابی سے منسلک مختلف مسائل کا مطالعہ کرنے کے لیے بہت موثر اور موزوں ثابت ہوا، جو اس وقت دنیا کے سب سے اہم چیلنجوں میں سے ایک ہے۔ مزید برآں، نئے آنے والے اینٹی آکسیڈینٹ علاج کی تلاش جس میں خواتین گیمیٹ کی عمر بڑھنے سے پیدا ہونے والی بانجھ پن کو روکنے کی صلاحیت رکھتی ہے، جیسا کہ موجودہ کام میں مطالعہ کیا گیا ہے، اتنی ہی اہمیت کی حامل ہے۔

پیش کردہ نتائج نے پہلی بار ART کے نتائج میں UA کے فائدہ مند اثر کی اطلاع دی۔ UA ایک فوڈ میٹابولائٹ ہے جو عمر سے متعلق غیر فعال مائٹوکونڈریا کے جمع ہونے کو روکنے کی صلاحیت رکھتا ہے جس کی وجہ سے ان کی مائٹوفجی اور خلیوں کی طویل عمر ہوتی ہے [28]۔ چونکہ UA کا پہلے کبھی بوائین ری پروڈکشن میں تجربہ نہیں کیا گیا تھا، اس لیے مختلف سیل لائنوں میں کامیابی کے ساتھ استعمال کی جانے والی خوراکیں اس کے انسداد کینسر، اینٹی سوزش اور عمر بڑھنے کے اثرات کو ظاہر کرتی ہیں [28,35,39]۔ ہمارے مطالعے میں، پچھلی خوراک- جوابی جانچ کی گئی اور 1 uM UA کی حراستی کو واضح طور پر سب سے زیادہ امید افزا کے طور پر شناخت کیا گیا۔ مزید برآں، زیادہ مقدار میں ایک نقصان دہ اثر کا مظاہرہ کیا گیا، خاص طور پر 50 uM UA خوراک پر، جو MII تک جوہری پختگی کی ترقی کو نقصان پہنچاتا ہے۔ یہ اثر جنین کی نشوونما کی خرابی پر ظاہر ہوتا ہے۔ اس کے مطابق، لیو اور ساتھیوں (2019) نے 50 uM کے UA ارتکاز میں، سیل کی قابل عملیت اور انسانی سنسنی جلد کے فائبرو بلاسٹس کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر کم کیا ہے۔ انہوں نے کہا کہ UA کی زیادہ مقداریں سیل کی عملداری کو کم کرنے کا باعث بنتی ہیں G/M سیل سائیکل میں گرفتار ہونے والے خلیوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے [35]۔ اس کے برعکس، دیگر خوراکوں کے مقابلے میں 1 uM UA کی تکمیل کے بعد دن 7 میں جنین کی اعلی شرحیں پیدا ہوئیں۔ خواتین کی تولید میں UA کے عمل کے ممکنہ میکانزم کو مزید دریافت کرنے کے لیے، oocyte کی عمر بڑھنے کے دوران اور مختلف عمروں والی خواتین کو oocyte عطیہ دہندگان کے طور پر استعمال کرنے کے دوران ایک مطالعہ نافذ کیا گیا تھا۔ یاماموٹو اور ساتھی کارکنوں (2010) نے پرانی گایوں کی فرٹلائجیشن کی شرح میں عمر سے وابستہ کمی کی اطلاع دی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہ oocytes پختگی کے دوران پہلی مییوٹک تقسیم کو دوبارہ شروع کرنے کا زیادہ خطرہ رکھتے تھے اور اکثر پہلے ہی oocyte کے مجموعہ میں مییوٹک میچوریشن شروع کر چکے تھے [50] ان اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ بڑی عمر کی گایوں کے آوسیٹس میں تیز رفتار جوہری پختگی کی ترقی ہوتی ہے اور کم oocyte قابلیت [51] کی وجہ سے نوجوان خواتین سے oocytes کے مقابلے میں تیزی سے MII مرحلے تک پہنچ جاتی ہے۔ اسی مناسبت سے، ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ خواتین کے عطیہ دہندگان کی عمر اور oocyte کی عمر بڑھنے کا عمل پختگی کی ترقی کے دوران oocytes کی کروموسومل ترتیب کو نمایاں طور پر متاثر کرتا ہے۔ درحقیقت، پری بلوبرٹل گایوں کے oocytes نے تاخیر کے مراحل کی زیادہ شرح ظاہر کی، جیسے کہ Al/TI مراحل (prepubertal=21.1 فیصد بمقابلہ بالغ =6.8 فیصد)، جوہری کی سست ترقی کو ظاہر کرتا ہے۔ پختگی، جو سوٹو ہیراس اور ساتھیوں (2018) کے ذریعہ تجویز کردہ کم oocyte قابلیت کی وجہ سے ہوسکتی ہے۔ عمر رسیدہ oocytes oocytes کی کم شرح بھی پیش کرتے ہیں جو 30 گھنٹے کی مدت (7.6 فیصد) کے دوران جسمانی مدت (93.2 فیصد) کے مقابلے میں MII مرحلے تک پہنچ چکے ہیں۔ مزید برآں، جسمانی پختگی کے عمل کے دوران UA علاج کے ساتھ ایک مثبت اثر کی نشاندہی کی گئی ہے، اور قبل از عمر اور بالغ خواتین دونوں میں بڑھاپے کے مخالف اثرات بھی۔

ہمارے نتائج سے اتفاق کرتے ہوئے، ایک مطالعہ نے ثابت کیا ہے کہ ان اوئٹرو میچوریشن کے دوران میلاٹونن کی تکمیل بوائین COCs میں مییووسس کی بحالی کو متحرک کر سکتی ہے، جب کہ ہارمونز کے بغیر کلچر شدہ کنٹرول آوسیٹس میں مییووسس کی بحالی کی شرح کم ہوتی ہے [52]۔ اس کے برعکس، دیگر اینٹی آکسیڈینٹ ایجنٹوں، جیسے کہ quercetin، وٹامن C یا resveratrol کے ساتھ ضمیمہ نے جوہری پختگی کی شرح پر کوئی اثر نہیں دکھایا، یہاں تک کہ جب ROS کی سطح میں کمی یا اینٹی آکسیڈینٹ انزیمیٹک سطحوں میں اضافہ دیکھا گیا [53,54]۔مائکرونائزڈ پیوریفائیڈ فلاوونائڈ فریکشن 1000 ملی گرام استعمال کرتا ہے۔اس کے برعکس، ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UA عمر رسیدہ بالغ اور پری بلوبرٹل خواتین دونوں میں عمر رسیدہ اثرات سے oocytes کو بچا سکتا ہے، جو کم قابلیت پیش کرتے ہیں، پختگی کی شرح کو بہتر بناتے ہیں۔

oocyte کے معیار کو متاثر کرنے والے خراب زرخیزی کے نتائج میں اہم کردار ادا کرنے والوں میں سے ایک کا تعلق مائٹوکونڈریل افعال سے ہے، جو زچگی کے بعد کی عمر اور بیضوی عمر کے بعد [21,55] کے ساتھ سمجھوتہ کرتے ہیں۔ ایم ایم پی کا مختلف ماڈلز میں وسیع پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے، جس سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ بیضہ دانی اور زچگی کی عمر کے بعد عمر رسیدہ گیمیٹس، مائٹوکونڈریل فنکشن کے نقصان کو دلاتے ہیں [56]۔ اس کے نتیجے میں، ایم ایم پی کا نقصان oocyte اور جنین کی نشوونما پر منفی طور پر ظاہر ہوا [26,57]۔ ان نتائج کے مطابق، ہماری تحقیق میں، پری پیوبرٹل اور بالغ دونوں گایوں کے بوڑھے oocytes میں MMP کا تناسب کم پایا گیا۔ مزید برآں، کلچر میڈیم کے لیے UA کی تکمیل نے پریپبرٹل اور بالغ oocytes کے MMP میں اضافہ کیا جو 22 گھنٹے کے لیے پختہ ہو گئے، جو کہ زیادہ کلیویج کی شرحوں میں گونج اٹھے۔ یہ اعداد و شمار لیانگ اور ساتھی کارکنوں (2017) کے ذریعہ پائے گئے نتائج سے متفق ہیں جنہوں نے ایم ایم پی میں اضافہ دیکھا جب بوائین آوسیٹس کو 22 گھنٹے [26] کے لئے میلاٹونن کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا۔ تاہم، ہم نے UA کے ساتھ ضمیمہ شدہ عمر رسیدہ oocytes میں MMP میں کمی کی بھی نشاندہی کی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ UA MMP میں عمر بڑھنے کے منفی اثر کو ریورس کرنے کے قابل نہیں ہوسکتا ہے۔ اینٹی آکسیڈینٹ مرکبات کے ساتھ عمر رسیدہ oocytes کی تکمیل کے بعد MMP کے بارے میں متضاد نتائج دیکھے گئے ہیں۔ درحقیقت، کئی مصنفین نے melatonin [26] اور laminarin [21] کے ساتھ تکمیل کے بعد oocytes پر MMP کی زیادہ سطح کی اطلاع دی ہے جبکہ دوسروں نے اس کے برعکس مشاہدہ کیا ہے، L-carnitine [58] اور melatonin [38] کے ساتھ علاج کیے جانے والے بوڑھے oocytes میں MMP میں کمی واقع ہوئی ہے۔ مزید برآں، Ryu اور ساتھیوں (2016) نے UA [28] کے ساتھ مہذب چوہوں کے myoblasts میں MMP میں کمی ظاہر کی۔ ہمارے نتائج کے بارے میں، oocyte mitochondria میں UA کے عمل کے طریقہ کار کے علم کو گہرا کرنے اور عمر رسیدہ اور جسمانی طور پر پختہ oocytes پر شناخت شدہ تفریق اثرات کی وضاحت کرنے کے لیے مزید مطالعات پر توجہ دی جانی چاہیے۔

oocytes کے اندرونی معیار کو بعد میں برانن کی نشوونما کے اہم عامل کے طور پر بڑے پیمانے پر رپورٹ کیا گیا ہے۔ جمع شدہ شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ کئی سیلولر اور سالماتی اسامانیتایاں وٹرو میچوریشن کے دورانیے کے ساتھ ساتھ اویوو پوسٹ بیضوی عمر کے دوران ہوتی ہیں [57]۔ مزید برآں، یہ اسامانیتا جنین کی پیداوار [52] پر oocyte کے معیار پر متعلقہ اثرات مرتب کر سکتی ہے۔ یہ ظاہر کرنے کے لیے کہ UA ایک اینٹی ایجنگ کمپاؤنڈ کے طور پر کام کر سکتا ہے اور oocyte کے معیار کو بہتر بنا سکتا ہے، oocyte کی عمر میں تاخیر کرتا ہے، ہم نے وٹرو فرٹیلائزیشن کے بعد بوڑھے oocytes کی نشوونما کی صلاحیت کی چھان بین کی۔ ہمارے مطالعے میں، کلیویج اور دن 7 جنین کی پیداوار کی شرحوں پر گیمیٹ کی عمر بڑھنے کا ایک اہم (p 0.01 سے کم یا اس کے برابر) نقصان دہ اثر دیکھا گیا۔ اس کے مطابق، کئی مصنفین نے کہا کہ بوڑھی خواتین کی تولیدی صلاحیتوں میں عمر سے وابستہ کمی ہوتی ہے، جو زرخیزی کی کم شرح اور جنین کے خراب معیار سے ظاہر ہوتی ہے [44,55]۔ دوسری طرف، بوڑھے oocytes کو بچانے کے لیے دوسرے اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیولز کی جانچ کرنے والے پچھلے مطالعات میں وٹرو میچوریشن کے دوران ان مرکبات میں سے کچھ کے فائدہ مند اثرات کی اطلاع دی گئی ہے جو مختلف پرجاتیوں، جیسے مویشی [58]، سور 38] اور چوہے [6]۔ مثال کے طور پر، L-carnitine کا تجربہ بوائین عمر کے oocytes پر کیا گیا تھا اور حاصل شدہ کلیویج کی شرحوں میں کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا۔ تاہم، بلاسٹوسسٹ مرحلے میں تیار ہونے والے زائگوٹس کی شرح میں نمایاں اضافے کی نشاندہی کی گئی، ایل کارنیٹائن کے بغیر عمر رسیدہ آوسیٹس کے مقابلے میں اگرچہ UA-عمر کے oocytes کی کلیویج کی شرحیں قابو پانے والی عمر کے oocytes سے نمایاں طور پر مختلف نہیں تھیں، UA-عمر کے oocytes میں قبل از کم عمر اور بالغ خواتین دونوں سے D7 ایمبریو ریٹ کی نشاندہی کی گئی۔ ان نتائج نے نشاندہی کی کہ UA کا مخالف عمر رسیدہ اثر پہلے مختلف سیل ثقافتوں میں شناخت کیا گیا تھا [28,35] oocytes اور ایمبریو کے لیے درست ہے۔ Oocyte عمر رسیدہ ایک کثیر الجہتی عمل ہے جو جنین کی نشوونما کو متاثر کرتا ہے، اور عمر رسیدہ oocytes کی نشوونما کی صلاحیت کو بحال کرنا ایک اہم مقصد ہے جو موجودہ مطالعہ میں حاصل کیا گیا تھا۔

مزید برآں، ہم نے جنین کے معیار پر عمر سے متعلق بگاڑ میں UA کے روکنے والے کردار کا بھی جائزہ لیا۔ اگرچہ اس مطالعے میں جنین کے معیار کی شرحوں میں کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا، لیکن UA کے ساتھ ضمیمہ شدہ oocytes نے علاج نہ کیے جانے والے جنینوں کے مقابلے منتقلی قابل جنین کی تعداد میں اضافہ کیا۔ ایک پچھلی تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ L-carnitine کا علاج ROS کی سطح میں کمی اور glutathione کی اعلی سطح کے ساتھ ساتھ دیگر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز [58] کے ذریعے بوائین آوسیٹس سے پیدا ہونے والے ایمبریو کے معیار کو بہتر بنا سکتا ہے۔ ان نتائج اور ہمارے درمیان فرق جنین کے معیار کا اندازہ لگانے کے لیے مختلف تکنیکوں کی وجہ سے ہو سکتا ہے۔ جنین کے معیار کی مورفولوجیکل تشخیص ایک ساپیکش طریقہ ہے جو مبصر کے تجربے پر منحصر ہے۔ مستقبل میں، جنین کے معیار کا درست اندازہ لگانے کے لیے دیگر تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے مزید مطالعات پر توجہ دی جانی چاہیے۔

یہ وسیع پیمانے پر جانا جاتا ہے کہ آکسیڈیٹیو تناؤ زرخیزی میں عمر سے وابستہ کمی میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کم oocyte کی پختگی کی کارکردگی، اور oocyte کے معیار کے بگاڑ میں اہم کردار ادا کرنے والوں میں سے ایک ہے، جس کے نتیجے میں جنین کی نشوونما کو نقصان پہنچتا ہے [11]۔ اعلی معیار کے oocytes کی مناسب نشوونما کے لئے گیمیٹ اور سومٹک خلیوں کے درمیان انٹر سیلولر مواصلت بہت ضروری ہے۔ عمر رسیدہ بیضہ دانی کے مائیکرو ماحولیات میں تبدیلیوں کی اطلاع دی گئی ہے، جیسا کہ اینٹی آکسیڈینٹ انزیمیٹک سرگرمی میں کمی جس کی وجہ سے ROS کی صفائی کی کارکردگی خراب ہو جاتی ہے۔otflavonoidمزید برآں، نوجوان اور بڑی عمر کی خواتین کے جی سیز میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں اور زچگی کی عمر [2,13] سے وابستہ جینوں میں فرق ظاہر کیا گیا ہے۔ اس طرح، یہ بہت اہمیت کا حامل ہے کہ میکانزم آکسیڈیٹیو تناؤ کا انتظام کرتے ہیں تاکہ oocytes کو بڑھاپے سے بچایا جا سکے اور بانجھ پن کے مسائل پر قابو پایا جا سکے۔ Nrf2-کیپل پاتھ وے کا وسیع پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے کیونکہ اس کی صلاحیت آکسیڈیٹیو تناؤ کے نقصان دہ اثرات سے نمٹنے اور اینٹی آکسیڈینٹ کی خصوصیات کو استعمال کرتی ہے [60]بوائین GCs میں Nrf2 سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن کا مزید مطالعہ کرنے کے لیے، ہم نے اس کا جائزہ لیا۔ NFE2L2 کی mRNA اظہار کی سطح اور اس کے بہاو اینٹی آکسیڈینٹ (NQO1)۔ ہمارے نتائج نے NFE2L2 ٹرانسکرپٹس کی سطح پر خواتین کی عمر کا نمایاں اثر دکھایا، جو عمر کے ساتھ کم ہوتا جاتا ہے۔ درحقیقت، بالغوں کے مقابلے میں prepubertal گایوں میں زیادہ mRNA اظہار کی سطح دیکھی گئی۔ یہ پچھلے مطالعات کے ساتھ متفق ہے جس میں بچے پیدا کرنے والے نوجوان چوہوں اور 22 اور 49 سال کی خواتین کے ڈمبگرنتی ؤتکوں پر Nrf2 پروٹین اور mRNA کی اعلی سطح کی اطلاع دی گئی تھی، جب کہ بوڑھے چوہوں اور خواتین میں کم اظہار پایا گیا تھا۔ یہ تجویز کیا گیا تھا کہ Nrf2 کے اظہار میں کمی بڑی عمر کی خواتین کی تولیدی صلاحیت میں کمی میں ملوث ہو سکتی ہے اور اس کے کنٹرول سے رحم کی عمر میں تاخیر میں اہم مضمرات ہو سکتے ہیں[15,61]۔ مزید برآں، اکینو اور ساتھی کارکنوں (2019) نے ظاہر کیا کہ ڈائمتھائل فومریٹ کے انتظام کے ذریعے Nrf2-کیپل پاتھ وے کو چالو کرنا ROS کی سطح کو کم کر سکتا ہے اور تاخیر سے بانجھ پن کا باعث بن سکتا ہے [18]۔ سنسنی خیز انسانی جلد کے فائبرو بلاسٹس میں ROS کو کم کرنے میں UA کے اثر سے متعلق اسی طرح کے نتائج کی اطلاع ملی۔ جب ان خلیوں کا UA سے علاج کیا گیا تو، Nrf2 ٹارگٹڈ جینز، جیسے SOD1، NQ01، GCLCand HMOX1 کے mRNA اظہار میں نمایاں اضافہ رپورٹ ہوا۔ ہمارے مطالعے میں، ہم نے مشاہدہ کیا کہ GCs میں NFE2L2 اور NQO1 جینز کے اظہار کی سطح UA سپلیمنٹیشن سے نمایاں طور پر متاثر نہیں ہوئی تھی۔ تاہم، ROS میں کمی اور اس کے نتیجے میں پیدا ہونے والے بلاسٹوسسٹ کی بہتری کی تصدیق کے لیے مزید مطالعات پر توجہ دی جانی چاہیے، نیز بوڑھے oocytes پر مذکورہ بالا جینوں کے mRNA اظہار پر UA اثر۔

mitochondrial DNA (mt-DNA) [25,57] کو پہنچنے والے نقصان کے علاوہ، mitochondrial gene expression میں خلل بھی عمر کے ساتھ mitochondrial dysfunction میں حصہ ڈالتا ہے۔ ژانگ اور ساتھیوں (2019) نے اطلاع دی ہے کہ OXPHOS میں شامل کچھ جینز، یعنی mt-ND2، mt-ND3، mt-ND4، mt-ND4L، اور mt-ND5، بوڑھے چوہوں سے oocytes کے GV مرحلے میں نمایاں طور پر کم ہو گئے تھے، نوجوان چوہوں کے مقابلے میں[62]۔ ہمارے مطالعے میں، mt-ND5 mRNA اظہار میں، prepubertal اور بالغ گایوں سے حاصل کردہ GCs کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا۔ مزید یہ کہ، ہم نے mt-DNA کاپی نمبر کا بھی اندازہ کیا، کیونکہ GCs میں mt-DNA کا مواد oocyte کے معیار اور جنین کی نشوونما کے ساتھ مثبت طور پر وابستہ رہا ہے [63,64]۔ اگرچہ ہمارے مطالعے میں پریپبرٹل اور بالغ گایوں کے GCs میں mt-DNA کاپی نمبر کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا، یا جب UA کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے، تو ہم نے غیر علاج شدہ گروہوں کے مقابلے میں، بلاسٹوسسٹ مرحلے میں تیار ہونے والے oocytes کی ایک بڑی تعداد کا مشاہدہ کیا۔ مزید برآں، Ryu اور ساتھی کارکنوں (2016) نے اطلاع دی کہ Mt-DNA مواد اور سانس کے احاطے سے پروٹین کی سطح UA[28] کے ساتھ اضافی چوہوں کے میوبلاسٹس میں تبدیل نہیں ہوئی۔ خواتین کی زرخیزی کو بہتر بنانے میں UA کے عمل کے طریقہ کار کو ظاہر کرنے کے لیے مزید مطالعات کی جانی چاہیے۔

5. نتائج

اس مطالعہ میں حاصل کردہ نتائج نے اس کی نشوونما کی صلاحیت پر oocyte کی عمر بڑھنے کے نقصان دہ اثر کی تصدیق کی۔ مزید یہ کہ عمر رسیدہ خواتین کے گیمیٹس کے لیے ہمارا ماڈل تولیدی عمر اور اس کے نتیجے میں زرخیزی کی خرابی سے وابستہ مختلف مسائل کا مطالعہ کرنے کے لیے بہت موثر اور مفید ثابت ہوا۔ مزید برآں، عمر رسیدہ oocytes کی پختگی کے عمل کے دوران UA کی تکمیل نے پختگی کی شرح کو بہتر بنایا اور جنین پیدا ہوئے۔ لہذا، پہلی بار عمر رسیدہ گیمیٹس کو بچانے میں UA کے اینٹی ایجنگ اثر کی نشاندہی کی گئی تھی، جس سے بلاسٹوسسٹ کی نشوونما میں بہتری آتی ہے، جو وصول کنندہ خواتین میں منتقلی کے لیے ایمبریو کی بڑھتی ہوئی تعداد کا باعث بنتی ہے۔ جسمانی پختگی، MMP، اور برانن کی نشوونما پر UA کے مثبت اثر کی بھی نشاندہی کی گئی۔ آخر میں، UA کا علاج گیمیٹ کی عمر کو روکنے یا اس میں تاخیر کرنے کے لیے ایک نیا علاج کا طریقہ فراہم کرتا ہے، اور ART میں بعد میں بلاسٹوسسٹ کی تشکیل اور زرخیزی کے نتائج کو بہتر بناتا ہے۔

یہ مضمون اینیملز 2021، 11، 2048 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/ani11072048 https://www.mdpi.com/journal/animals