ہلدی کی مختلف اقسام کی اینٹی ٹائروسینیز کی خصوصیات اور کرکوما اماڈا سے فعال مرکبات کو الگ کرنا

جیسمین اکٹر 1 ● محمد ظہور الاسلام 1,2 ● محمد امزاد حسین 1 ● کنساکو تکارا1

1 فیکلٹی آف ایگریکلچر، یونیورسٹی آف دی ریوکیوس، اوکیناوا، جاپان

2 شعبہ فارماکولوجی، فیکلٹی آف ویٹرنری سائنس، بنگلہ دیش زرعی یونیورسٹی، میمن سنگھ، بنگلہ دیش

مزید معلومات کے لیے:Scotty.Wang@wecistanche.com

خلاصہ

ہلدی کو روایتی طور پر برصغیر پاک و ہند میں کچھ مذہبی اور ثقافتی مواقع میں جلد کے کاسمیٹک کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے چار Curcuma spp. کی ٹائروسینیز روکنے والی خصوصیات کا موازنہ کیا، یعنی C. xanthorrhiza، C. aromatic، C. amada، اور C. zedoaria. سیلیکا جیل کالم اور اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے ٹائروسینیز انحیبیٹرز کی بائیوسے گائیڈڈ آئسولیشن اور پیوریفیکیشن۔ مرکبات کی ساختی شناخت 1 H NMR، 13C کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔

NMR، اور مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس سپیکٹرومیٹری۔ C. اماڈا نے 53.4 ug/mL کے IC50 کے ساتھ، سب سے زیادہ ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی دکھائی۔ لہذا، یہ tyrosinase inhibitors کے الگ تھلگ اور صاف کرنے کے لئے منتخب کیا گیا تھا. پیوریفائیڈ مرکبات زیڈرون (1)، فرانوڈینون (2)، 1،5-ایپوکسی-3-ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائی ہائیڈروکسی-5-میتھوکسیفینیل){ {13}}(4-ہائیڈروکسی فینائل) ہیپٹینز (3)، 3،5-ڈائی ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائیڈروکسی فینائل)-7-({{22) }}ہائیڈروکسی-3-میتھوکسی فینائل) ہیپٹینز (4) اور 1،5- ایپوکسی 3-ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائی ہائیڈروکسی-5-میتھوکسی فینائل) -7-(4-ہائیڈروکسی-3-میتھوکسیفینائل) ہیپٹینز (5)۔ مشروم کے لیے IC50 قدریں۔اینٹی ٹائروسینیزمرکبات 1، 2، 3، 4، اور 5 کی سرگرمیاں بالترتیب 108.2، 89.2، 92.3، 21.7، اور 41.3 µM تھیں۔ یہ مرکبات انٹرا سیلولر ٹائروسینیز کی سرگرمی کو بھی روکتے ہیں، اس طرح B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانین کی ترکیب کو کم کرتے ہیں۔ کمپاؤنڈ 4 نے نمایاں طور پر مضبوط دکھایااینٹی ٹائروسینیزarbutin کے مقابلے میں سرگرمی (ایک مثبت کنٹرول منشیات). کمپاؤنڈ 5 اور arbutin کے درمیان ٹائروسینیز روکنے والے اثر میں کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا۔ ہمارے نتائج پرزور مشورہ دیتے ہیں کہ C. Amanda melanogenesis کو روکنے کے لیے قدرتی tyrosinase inhibitors کا ایک امید افزا ذریعہ ہے اور اسے سفید کرنے والے کاسمیٹک کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

کلیدی لفظ: Curcuma amada ● فعال مرکبات ● NMR ● اینٹی ٹائروسینیز ● اینٹی میلانوجینک

Cاینٹی ٹائروسینیز کے لیے Cistanche کو چاٹیں۔

تعارف

میلانین بالوں اور جلد میں سیاہ روغن ہے اور یہ UV تابکاری سے جلد کی حفاظت کے لیے ضروری ہے۔ روغن میلانوسائٹ خلیوں کے ذریعہ تیار کیا جاتا ہے ، جو ڈرمیس کی بنیادی تہہ میں ایک جسمانی عمل کے ذریعے موجود ہوتا ہے جسے میلانوجینیسیس کہتے ہیں۔ تاہم، میلانین کی غیر معمولی پیداوار جلد کے امراض کا سبب بنتی ہے جیسے فریکلز، میلاسما، لینٹائنز، عمر کے دھبے، ایفیلائیڈز، اور سوزش کے بعد ہائپر پگمنٹیشن [1]۔ کھانے کی صنعت میں، پھلوں اور سبزیوں کی ہائپر پگمنٹیشن غذائیت کے معیار اور مارکیٹ ویلیو کے نمایاں نقصانات کا باعث بنتی ہے [2]۔ میلانوجینیسیس کو ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک کر کنٹرول کیا جا سکتا ہے، جو کہ ستنداریوں، پودوں، مائکروجنزموں اور کوکیوں میں میلانین کی ترکیب کے لیے شرح کو محدود کرنے والا انزائم ہے [3]۔ لہذا، ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روکنا ہائپر پگمنٹیشن کو روکتا ہے اور جلد کی سفیدی کا باعث بنتا ہے۔ یہ سبزیوں اور کھانے کی ناپسندیدہ بھوری رنگت کو کنٹرول کرکے سبزیوں اور پھلوں کے معیار کو بھی کنٹرول کرتا ہے۔ جلد کو روشن کرنے والے زیادہ تر ایجنٹس، جیسے ہائیڈروکوئنون، ایزیلک ایسڈ، کوجک ایسڈ، اور آربوٹین قوی ٹائروسینیز روکنے والے ہیں۔ تاہم، ان کے مختلف ناپسندیدہ اثرات ہیں جیسے سائٹوٹوکسیٹی، اوکرونوسس، وٹیلگو، جلن، جلد کا چھلکا، اور لالی [4]۔ مزید برآں، کوجک ایسڈ اور -اربوٹین ناقص فارمولیشن استحکام اور جلد میں داخل ہونے کی صلاحیت، اور ویوو میں کم افادیت کا مظاہرہ کرتے ہیں [5]۔ کچھ نامیاتی اور غیر نامیاتی مرکری نمکیات میں میلانجینک مخالف اثرات ہوتے ہیں اور جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹوں میں استعمال ہوتے ہیں۔ تاہم، جلد کے جذب کے ذریعے، مرکری مرکبات زہریلے اثرات کا سبب بن سکتے ہیں جیسے کہ جلد کی رنگت، گردے کو نقصان، الرجک رد عمل، اور داغ [6]۔ اس طرح، کم زہریلے اور زیادہ موثر ٹائروسینیز انحیبیٹرز کی تحقیقات کی ضرورت ہے۔ ہلدی (خاندان: Zingiberaceae؛ genus: Curcuma)، ایک روایتی دواؤں کا پودا جو بنیادی طور پر ایشیا اور افریقہ کے اشنکٹبندیی اور ذیلی اشنکٹبندیی علاقوں میں اگتا ہے، فارماسولوجیکل افعال کا ایک وسیع میدان ہے۔ یہ روایتی طور پر برصغیر پاک و ہند میں ہزاروں سالوں سے قبل از ازدواجی رسومات میں جلد کو روشن کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا رہا ہے۔ خیال کیا جاتا ہے کہ ہلدی چہرے کے بالوں کی نشوونما، مہاسوں اور جلد کی عمر کو کم کرکے جلد کی رنگت کو بہتر بناتی ہے [7، 8]۔ لہذا، ہلدی کے ساتھ اضافی جلد کی دیکھ بھال کی مصنوعات مارکیٹ میں تجارتی طور پر دستیاب ہیں [9]۔ مختلف کیمیائی اور فارماسولوجیکل خصوصیات کے ساتھ ہلدی کی 70 سے زیادہ انواع/اقسام کی نشاندہی کی گئی ہے۔ تاہم، ہلدی کی مختلف اقسام کی اینٹی میلانوجینک خصوصیات اور ہلدی میں موجود ممکنہ فعال اجزاء کے بارے میں سائنسی معلومات کا فقدان ہے۔ Curcuminoids اہم فعال مرکبات ہیں جو ہلدی کی زیادہ تر حیاتیاتی سرگرمیوں کے لیے ذمہ دار ہیں۔ Curcuminoids کاسمیسیوٹیکلز میں بطور ایک صلاحیت ہے۔اینٹی آکسیڈینٹ, غیر سوزشی،اور جلد کو روشن کرنے والا ایجنٹ [7، 8]۔ تاہم، ایک پچھلی تحقیق میں، ہم نے ہلدی میں curcuminoid مواد میں اہم تغیرات پایا، اور کچھ پرجاتیوں (C. amada، C. zedoaria) میں بھی curcumin شامل نہیں تھا [10]۔ ہم نے اینٹی فنگل کی بھی اطلاع دی،اینٹی آکسیڈینٹ، اور ہلدی کی مختلف انواع اور اقسام کی vasodilatory سرگرمیاں [10-13]۔ لہذا، اس مطالعے کا مقصد ہلدی کی مختلف اقسام کے اثرات کا جائزہ لینا تھا، یعنی C. xanthorrhiza، C. aromatica، C. amada، اور C. zedoaria، tyrosinase enzyme پر اور مخصوص کیمیائی مرکبات کی نشاندہی کرنا جو اس کے لیے ذمہ دار ہیں۔اینٹی ٹائروسینیزسرگرمی ہم نے B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانین کی ترکیب پر ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی اور خالص فعال مرکبات کے اینٹی میلانوجینک اثرات کا بھی جائزہ لیا۔

نتائج اور مباحثہ

ہلدی کی چار مختلف اقسام میں سے، C. amada کے MeOH نچوڑ نے 53.4 ± 2.7 کی IC50 ویلیو کے ساتھ زیادہ سے زیادہ مشروم ٹائروسینیز انحیبیٹری اثر دکھایا، اس کے بعد C. xanthorrhiza، C. aromatic، اور C. zedoaria (تصویر 1a)۔ Curcumin ہلدی (Curcuma longa) کا سب سے بڑا فعال جزو ہے اور اس میں بہت سی حیاتیاتی سرگرمیاں ہوتی ہیں، جن میں اینٹی کینسر، اینٹی سوزش، اینٹی بیکٹیریل، اینٹی فنگل اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں شامل ہیں۔ اس نے arbutin اور kojic acid [14] کے مقابلے میں 75-گنا زیادہ طاقتور اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی ظاہر کی۔ تاہم، ایک پچھلی تحقیق میں، ہم نے اطلاع دی تھی کہ ہلدی کی مختلف اقسام میں کرکومین کے مواد میں نمایاں تغیرات تھے [10]۔

C. xanthorrhiza اور C. aromatic میں Curcumin موجود تھا لیکن C. zedoaria اور C. amada [10] میں موجود نہیں تھا۔ اس تحقیق کے دلچسپ نتائج یہ ہیں کہ، کرکومین کے بغیر، C. amada نے مضبوط ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی دکھائی۔ یہ نتیجہ ظاہر کرتا ہے کہ C. amada کے کچھ فعال مرکبات ہونے چاہئیں جو اس کے مضبوط اینٹی ٹائروسینیز اثر سے منسوب ہیں۔ C. xanthorrhiza اور C. aromatica کی اینٹی tyrosinase سرگرمی ان کے curcumin کے مواد کی وجہ سے ہو سکتی ہے۔ تاہم، ہم دوسرے مرکبات کی موجودگی کے امکان کو رد نہیں کر سکتے۔ C. amada کے MeOH نچوڑ کو پانی، n-hexane، اور EtOAc کے ساتھ تقسیم کیا گیا تھا۔ ان تین حصوں میں سے، EtOAc نے پانی اور n-hexane (تصویر 1b) کے مقابلے میں نمایاں طور پر مضبوط روک تھام کا اثر دکھایا۔ لہذا، EtOAc حصہ مزید تقسیم کے لیے لیا گیا تھا۔ چھ حصوں کی اینٹی ٹائروسینیز سرگرمیاں [n-hexane:EtOAc; 100:0 (F1), 80:20 (F2), 60:40 (F3), 40:60 (F4), 20:80 (F5), اور 0:100 (F6)] حاصل کیا C. amada کے EtOAc حصے سے موازنہ کیا گیا۔ ان چھ حصوں میں، F6 اور F3 نے دوسروں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی دکھائی (تصویر 1c)۔ پھر فرکشن F3 اور F6 سے پانچ مرکبات کے کیمیائی ڈھانچے کو ان کے 1 H NMR اور 13C NMR سپیکٹرا کے مطابق شناخت کیا گیا۔ چوٹی کے اعداد و شمار مندرجہ ذیل تھے:

مرکب 1:

بے رنگ سوئی کی شکل کا کرسٹل؛ UV λmax: nm 234, 285. ESI-MS ( جمع ) m/z: 247.3 [M جمع H] جمع , 229.4 [M جمع H-H2O] جمع۔ 1 H-NMR (CD3OD): δ 7.22 (1H, s, H-12), 5.59 (1H, br d, J=12 Hz, H{{20}) , 3.99 (1H, s, H-5), 3.85 (1H, d, J=16 Hz, H-9a), 3.69 (1H, d, J=16 Hz, H-9b), 2.57 (1H, dddd, J=13, 13, 12, 4 Hz, H-2a), 2.26 (1H, m, H{{46) }}a)، 2.20 (1H, m, H{{50}}b), 2.09 (3H, s, H-13), 1.57 (3H, s, H-15), 1.32 (1H, ddd, J=13, 13, 4 Hz, H-3b), 1.28 (3H, s, H-14)۔ 13C-NMR (CD3OD): δ 194.2(C-6) 160.2(C-8), 139.7(C12), 132.8 (C-1), 132.0(C-10 , 124.3(C-11), 123.0(C-7), 67.8(C-5), 65.2(C-4), 42.5(C-9 )، 39.0(C-3)، 25.4(C-2)، 15.7 (C-15)، 15.4(C-14)، 10.7(C-13 ) (ضمنی اعداد و شمار)۔ لٹریچر [15، 16] میں رپورٹ کیے گئے اعداد و شمار کے ساتھ ان اعداد و شمار کے موازنہ سے، مادہ کی شناخت زیڈرون (تصویر 2) کے طور پر کی گئی تھی۔ یہ ایک سیسکیٹرپین ہے، اس سے پہلے C. amada اور C. zedoaria سے الگ تھلگ تھا اور اس کے ینالجیسک، اینٹی سوزش، اینٹی فنگل اور سائٹوٹوکسک اثرات کی اطلاع دی گئی ہے [12, 17-20]۔

مرکب 2:

بے رنگ تیل؛ UV λmax: nm 243, 280۔ ESIMS ( جمع ) m/z: 231۔{83}} [M جمع H] جمع، 223.3 [M جمع H-H2O] جمع۔ 1 H-NMR (CD3OD): δ 7.16 (1H, s, H-12), 5.83 (1H, s, H-5), 5.21 (1H, dd, J=12 Hz , 5 Hz, H-1), 3.73 (1H, d, J=16 Hz, H-9a), 3.63 (1H, d, J=16 Hz, H -9b), 2.45 (1H, ddd, J=15 Hz, 11 Hz, 4 Hz, H-3a), 2.31 (1H, m, H-2a , 2.20 (1H, dddd, J=12 Hz, 12 Hz, 12 Hz, 4 Hz, H-2b), 2.06 (3H, s, H{{57} })، 1.92 (3H, s, H-14), 1.89 (1H, m, H-3b), 1.25 (3H, s, H-15)۔ 13C-NMR (CD3OD): δ 191.8 (C-6), 158.6 (C-8), 147.6 (C-4), 140.0 (C-12), 136.1 ( C-10), 133.3 (C-5), 132.0 (C-1), 124.6 (C-11), 123.1 (C-7), 42.4 ( C-9), 41.4 (C-3), 27.3 (C-2), 19.3 (C-14), 15.9 (C-2), 9.9 ( C-13) (ضمنی ڈیٹا)۔ ان اعداد و شمار کے ان اعداد و شمار کے موازنہ سے جو لٹریچر میں رپورٹ کیے گئے ہیں [21]، مادہ کو فرانوڈینون (تصویر 2) کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ یہ لنڈرا پلچریما (نیز) بینتھ سے الگ تھلگ تھا۔ سابق ہک. f [22]، Curcuma zedoaria [19]، Curcuma amada [12] اور Curcuma wenyujin [23]۔ یہ ایک furanosesquiterpenoid ہے جو اینٹی فنگل [12]، اینٹی سوزش [19]، اینٹی کینسر [24]، اینٹی بیکٹیریل اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں [22] ظاہر کرتا ہے۔

مرکب 3:

زرد تیل؛ UV λ زیادہ سے زیادہ: nm 275۔ ESIMS ( جمع ) m/z: 383.3 [M جمع Na] جمع , 361.3 [M جمع H] جمع , 343.2 [M جمع H-H2O] جمع۔ 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.99 (2H, dd, J=9, 2 Hz, H-2´´, -6´´), 6.67 (2H, d, J=9 Hz, H-3´´, -5´´), 6.52 (2H, s, H-2´, -6´), 4.63 (1H , br b, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.89 (1H, m, H-5), 3.85 ( 3H, s, 5´-OCH3), 2.63 (2H, m, H-7), 1.82 (1H, m, H-2a), 1.78 (1H, m, H{{6{ {107}}}a), 1.73 (1H, m, H-2b), 1.69 (1H, m, H-4a), 1.68 (1H, m, H{{72} }b)، 1.53 (1H, m, H-4b)۔ 13C-NMR (CD3OD): δ 156.3 (C-4´´)، 149.5 (C-5´)، 146.4 (C-3´)، 134.5 (C-4 ´)، 134.44 (C-1´)، 134.41 (C{{97}´´)، 130.4 (C{100}}´´، -6´´)، 116.1 (C{ ( C-5), 65.6 (C3), 56.6 (5´-OCH3), 41.1 (C-2), 39.5 (C-4), 39.2 (C-6) 31.8 (C-7) (ضمنی ڈیٹا)۔ لٹریچر میں رپورٹ کردہ اعداد و شمار کے ساتھ ان اعداد و شمار کے موازنہ سے [25]، مادہ کی شناخت 1،5-ایپوکسی-3-ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائی ہائیڈروکسی{ {145}} methoxyphenyl)-7-(4-hydroxyphenyl) heptanes (تصویر 2)۔ یہ Zingiber officinale کے rhizomes سے الگ تھلگ تھا، اور ان کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کا مطالعہ کیا گیا تھا [25]۔

مرکب 4:

چپچپا شربت؛ UV λ زیادہ سے زیادہ: nm 281۔ ESIMS ( جمع ) m/z: 385.3 [M جمع Na] جمع , 363.3 [M جمع H] جمع , 345.2 [M جمع H-H2O] جمع۔ 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.75 (1H, d, J=2 Hz, H-2´), 6.68 (1H, d, J=8 Hz, H{{21} }}´)، 6.64 (1H, J=8 Hz, H-5´´), 6.61 (1H, J=2 Hz, H-2´´), 6.60 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´), 6.49 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´´), 3.80 (3H, s, 3´-OCH3), 3.73 (2H, m, H-3, -5), 2.64-2.47 (4H, m, H{{59) }}a, -1b, -7a, -7b), 1.71-1.65 (4H, m, H-2a, {{ 68}b, -6a, -6b), 1.61 (2H, m, H-4a, -4b) 13C-NMR (CD3OD): δ 148.8 (C-3´)، 146.1 (C-3´´)، 145.4 (C-4´)، 144.2 (C-4 ´´)، 135.24 (C{{93}´ یا C-1´´)، 135.22 (C{{97}´ یا C{{98}´´)، 121.8 (C{101 }}´)، 120.6 (C-6´´)، 116.5 (C{{107}´´)، 116.3 (C-5´´)، 116.1 (C-5´) )، 113.2 (C-2´)، 70.94 (C-3 یا C-5)، 70.92 (C-3 یا C-5)، 56.4 (3) ´-OCH3)، 44.9 (C-4)، 40.8 (C-2، -6)، 32.3 (C-1)، 32.1 (C-7) (ضمنی اعداد و شمار) لٹریچر [26, 27] میں رپورٹ کردہ اعداد و شمار کے ساتھ ان اعداد و شمار کے موازنہ سے، مادہ کی شناخت تیل 3،5-ڈائی ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائی ہائیڈروکسی فینائل){{150 }} (4-ہائیڈروکسی-3-میتھوکسی فینائل) ہیپٹینز (تصویر 2)۔ اسے Tacca chantrieri [26] اور Curcumalonga L. [27] کے rhizomes سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ وہ diarylheptanoids ہیں جو سائٹوٹوکسک [26] اور اینٹی ٹیومر [27] سرگرمیوں کی نمائش کرتے ہیں۔

مرکب 5:

بے رنگ تیل؛ UV λ زیادہ سے زیادہ nm: 279. ESI-MS ( جمع ) m/z: 413.3 [M پلس Na] جمع، 391.3 [M جمع H] جمع، 373.3 [M جمع HH2O] جمع۔ 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.76 (1H, s, H-2´´), 6.67 (1H, d, J=8 Hz, H{{20}} ´´), 6.21 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´), 6.53 (2H, s, H-2´, -6´´ , 4.63 (1H, br d, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.83 (3H, s, 5´-OCH3) ، 3.78 (3H, s, 3-OCH3), 2.65 (2H, m, H-7), 1.84 (1H, m, H-2a), 1.79 (1H, m, H-6a), 1.74 (1H, m, H-2b), 1.69 (1H, m, H-4a), 1,68 (1H, m, H{{ 75}b)، 1.53 (1H, m, H-4b)۔ 13C-NMR (CD3OD): δ 149.5 (C-5´)، 148.8 (C-3´´)، 146.4 (C-3´)، 145.4 (C-4 ´´)، 135.3 (C-1´)، 135.2 (C{{100}´´)، 134.4 (C-4´)، 121.9 (C-6´´)، 116.1 (C-5´´)، 113.4 (C-2´´)، 108.0 (C-2´)، 102.7 (C-6´)، 75.2 (C{ {121}}، 72.5 (C-5)، 65.6 (C-3)، 56.6 (5´-OCH3)، 56.3 (3´´-OCH3)، 41.2 (C{{140} })، 39.4 (C-4)، 39.3 (C-6)، 32.2 (C-7) (ضمنی ڈیٹا)۔ لٹریچر [20] میں رپورٹ کردہ اعداد و شمار کے ساتھ ان اعداد و شمار کے موازنہ سے، مادہ کی شناخت 1،5-ایپوکسی-3-ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائی ہائیڈروکسی{ {157}}methoxyphenyl)- 7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) heptanes (تصویر 2) اور ان کی حیاتیاتی سرگرمی کے بارے میں کوئی معلومات نہیں ہے۔ ہم نے مرکبات 3، 4، اور 5 کو پہلی بار C. amada سے الگ کیا۔ تمام مرکبات نے مشروم ٹائروسینیز کے خلاف روکنے والی سرگرمی دکھائی

پانچ مرکبات، یعنی زیڈرون، فرانوڈینون، 1،5-ایپوکسی-3-ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈائیڈروکسی-5-میتھوکسیفینائل)- 7-( 4-ہائیڈروکسی فینائل) ہیپٹنز، 3،5-ڈائی ہائیڈروکسی-1-(3،4-ڈشی ہائیڈروکسی فینائل)-7-(4-ہائیڈروکسی-3- methoxyphenyl) ہیپٹینز اور 1،5-epoxy-3-hydroxy-1-(3,4-dihydroxy-5-methoxyphenyl)- 7-(4- hydroxy-3-methoxyphenyl) heptanes، F3 اور F6 سے الگ تھلگ تھے۔ الگ تھلگ مرکبات نے ارتکاز پر منحصر انداز میں اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی دکھائی۔ پانچ مرکبات میں سے، کمپاؤنڈ 4 نے arbutin کے مقابلے میں نمایاں طور پر مضبوط اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی ظاہر کی۔ کمپاؤنڈ 5 اور arbutin (تصویر 3) کے درمیان اینٹی ٹائروسینیز اثرات میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ سیلولر عملداری پر الگ تھلگ مرکب کے اثرات کا مطالعہ B16F10 مورین میلانوما خلیوں پر کیا گیا۔ خلیوں کا علاج 48 گھنٹے تک کمپاؤنڈ کی 50، 100، 200، اور 400 μM حراستی کے ساتھ کیا گیا۔ الگ تھلگ مرکبات نے 200 μM تک سائٹوٹوکسک اثرات نہیں دکھائے، تاہم، تقریباً پچاس فیصد سیلولر اموات 400 μM حراستی (تصویر 4) میں تمام معاملات میں دیکھی گئیں۔ اس طرح، 200 μM تک ارتکاز کو ان کے انٹرا سیلولر اینٹی ٹائروسینیز اور اینٹی میلانوجینک اثرات کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا۔

الگ تھلگ مرکبات کی اینٹی میلانوجینک اور اینٹی ٹائروسینیز سرگرمیوں کا تعین کرنے کے لیے، B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانین مواد اور ٹائروسینیز کی سرگرمی پر ان کے اثرات کا جائزہ لیا گیا۔ جیسا کہ جدول 1 میں دکھایا گیا ہے، ہمارے الگ تھلگ مرکبات خوراک پر منحصر انٹرا سیلولر میلانین مواد اور ٹائروسینیز سرگرمی کو روکتے ہیں۔ کمپاؤنڈ 4 میلانین اور ٹائروسینیز روکنے والے اثرات دونوں میں مثبت کنٹرول ڈرگ arbutin کے مقابلے میں نمایاں طور پر مضبوط تھا۔ کمپاؤنڈ 5 اور arbutin کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا۔ چونکہ سیلولر ٹائروسینیز میلانین کی پیداوار کو بڑھاتا ہے، ٹائروسینیز کی سرگرمی میں کمی اینٹی میلانوجینک ایجنٹوں کی نشوونما کے لیے ایک موثر حکمت عملی ہے۔ اس کے لیے، ہم نے B16F10 میلانوما خلیوں میں انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی اور میلانوجینیسیس کی روک تھام کی خصوصیات کا جائزہ لیا۔ مشروم ٹائروسینیز کی روک تھام کی سرگرمی کے نتائج کی طرح، الگ تھلگ مرکبات خوراک پر منحصر انداز میں انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی اور میلانوجینیسیس کو روکتے ہیں۔ الگ تھلگ مرکبات کے اینٹی ٹائروسینیز اثرات کے نتیجے میں ان کی اینٹی میلانوجینک خصوصیات ہیں۔ ان مرکبات کی اینٹی ٹائروسینیز اور اینٹی میلانوجینک سرگرمی کی ترتیب کمپاؤنڈ 4 > arbutin > 5 > 2 > 3 > 1 تھی۔ کمپاؤنڈ 4 کی حسابی IC50 قدر arbutin کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی۔ مرکب 4 کی تاثیر 19- سے 5-گنا دیگر چار مرکبات سے زیادہ تھی۔ کمپاؤنڈ 5 نے بھی مضبوط اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی دکھائی جو اربوٹین کے ساتھ موازنہ تھی۔ ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ مرکبات 4 اور 5 کو ممکنہ قدرتی ٹائروسینیز روکنے والے اور جلد کو سفید کرنے والے کاسمیٹکس کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کو میلانین کی زیادہ پیداوار کے بنیادی میکانزم میں شامل ہونے کی تجویز دی گئی ہے [28]۔ لہذا، جلد کی خرابیوں کی ایک وسیع رینج میں اینٹی آکسیڈینٹ کردار کی تحقیقات کی گئی ہیں، بشمول فوٹو کارسینوجینیسیس یا میلانوما [9]۔ ہم اور دوسروں نے پہلے C. amada [13, 29] کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کی اطلاع دی تھی جو الگ تھلگ مرکبات کے antimelanogenic اثرات کے لیے ذمہ دار ہو سکتی ہیں۔ اس مطالعہ میں، ہم نے انٹرا سیلولر میلانین کی ترکیب اور ٹائروسینیز کی سرگرمی پر الگ تھلگ مرکبات کے روکنے والے اثرات کا پتہ لگایا جو -MSH کے ذریعہ حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ اس طرح، ہمارے الگ تھلگ مرکبات کو فنکشنل کاسمیٹکس میں ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے تاکہ جلد کو سفید کرنے کا موثر علاج تیار کیا جا سکے۔

نتیجہ

ہم پرزور مشورہ دیتے ہیں کہ C. amada ایک موثر ٹائروسینیز روکنے والے کے طور پر اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔ C. amada اور اس کے بایو ایکٹیو مرکبات کاسمیٹک انڈسٹری میں قدرتی سفید کرنے والے ایجنٹوں کے طور پر، فوڈ انڈسٹری میں اینٹی براؤننگ ایجنٹ کے طور پر، اور طبی میدان میں ہائپر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ اس کے باوجود، جانوروں کے ماڈلز میں الگ تھلگ مرکبات کے اینٹی میلانوجینک اثرات کی تحقیقات کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔

مواد اور طریقے

کیمیکل

مشروم اور اربوٹین سے ٹائروسینیز سگما – ایلڈرچ کیمیکل کمپنی (سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) سے خریدے گئے تھے۔ L-Tyrosine کا تعلق Wako pure کیمیکل انڈسٹریز لمیٹڈ (Osaka, Japan) سے تھا۔ میتھانول (MeOH)، ethyl acetate (EtOAc)، اور n-hexane Nacalai Tesque (کیوٹو، جاپان) سے خریدے گئے تھے۔ سلیکا جیل (63–200 μm، کانٹو کیمیکل کمپنی ٹوکیو، جاپان) اور MeOH-d4 (CD3OD، Merck KGaA، جرمنی) خریدے گئے تھے۔

پودوں کی تیاری ، گاد 24.3 فیصد، مٹی 32.8 فیصد، پی ایچ 7.4، NO{{10}N 0.07 فیصد، NH4-N 0.08 فیصد، P 4.6 ng/g، K 42.9 ng/g) پر سب ٹراپیکل فیلڈ سائنس سینٹر، ریوکیوس یونیورسٹی، اوکیناوا، جاپان۔ کاشت کی مدت کے دوران اوسط ماہانہ درجہ حرارت، نمی، اور بارش بالترتیب 17–29 ڈگری، 61–83 فیصد، اور 22–369 ملی میٹر تھی۔ کھاد اور آبپاشی سمیت عام زرعی طریقوں کو فراہم کیا گیا۔ جب پرجاتیوں کی تمام ٹہنیاں مکمل طور پر مرجھا جاتی تھیں تو ریزوم کی کٹائی کی جاتی تھی۔ ریزوم کو دھویا، کاٹا اور گرم ہوا کے تندور میں 50 ڈگری پر 72 گھنٹے تک خشک کیا گیا۔

نمونے نکالنا

مختلف ہلدی پاؤڈر (300 گرام) کو کمرے کے درجہ حرارت (25 ڈگری) اور ماحولیاتی دباؤ پر MeOH (3 L) میں تحلیل کرکے اور ہوا کے ذریعہ آکسیکرن کو روکنے اور سورج کی روشنی سے بچانے کے لیے مسلسل مقناطیسی ہلچل کے ساتھ دو دن تک رکھا گیا۔ سالوینٹس میں حل پذیر مرکبات کو فلٹر پیپر (نمبر 2، ایڈوانٹیک، ٹوکیو روشی کیشا لمیٹڈ، ٹوکیو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے فلٹر کیا گیا تھا۔ استعمال شدہ پلانٹ کے مواد میں تازہ سالوینٹس (MeOH) شامل کیے گئے اور اس عمل کو تین بار دہرایا گیا۔ پودوں کے مرکبات پر مشتمل فلٹر شدہ محلولوں کو روٹری ایوپوریٹر کے ذریعے 40 ڈگری پر کم دباؤ میں خشک کیا گیا تھا۔ تجرباتی تجزیوں کے لیے تمام نچوڑ کی پیداوار کو 4 ڈگری پر ریفریجریٹر میں رکھا گیا تھا۔

ٹائروسینیز روکنا پرکھ

ٹائروسینیز کی روک تھام کی سرگرمی کا تعین پچھلے طریقہ [30] کے مطابق کیا گیا تھا، ٹائروسین سبسٹریٹ پر ٹائروسینیز انزائم کے عمل سے تیار کردہ DOPA کروم کے ارتکاز کی پیمائش۔ مختصراً، مختلف ارتکاز (25، 50، اور 100 µg/mL) حاصل کرنے کے لیے ٹیسٹ کے نمونے کو 80 فیصد MeOH میں تحلیل کیا گیا۔ 96-کنویں کی پلیٹ کو مندرجہ ذیل ترتیب میں ترتیب دیا گیا تھا: فاسفیٹ بفر کا 120 μL (20 mM، pH 6.8)، نمونے کا 20 μL، اور مشروم ٹائروسینیز کا 20 μL (500 U/mL 20 mM فاسفیٹ میں بفر)۔ 25 ڈگری پر 15 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، رد عمل کا آغاز 20 μL 0.85 mM L-tyrosine محلول شامل کرکے کیا گیا اور پھر اسے 25 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ٹائروسینیز کی سرگرمی کا تعین مائکروپلیٹ ریڈر (بائیوٹیک پاور ویو XS2 سپیکٹرو فوٹومیٹر) کا استعمال کرتے ہوئے 470 nm پر جاذبیت کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا۔ Arbutin کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا، جبکہ 80 فیصد MeOH کو منفی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ٹائروسینیز کی روک تھام کا فیصد اس طرح شمار کیا گیا تھا:

جہاں C منفی کنٹرول کا جاذب ہے، B خالی کا جاذب ہے، اور S ٹیسٹ کے نمونے کا جاذب ہے۔

کرکوما اماڈا کے خام عرق سے بایو ایکٹیو مرکبات کو الگ کرنا

ہلدی کے چار عرقوں کے نتائج پر غور کرتے ہوئے، C. amada نے دوسروں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی دکھائی۔ لہذا، C. اماڈا کے خام نچوڑ سے فعال مرکبات کی بایواسے گائیڈڈ پیوریفیکیشن کی گئی۔ اینٹی ٹائروسینیز مرکبات کی شناخت کے لیے، C. اماڈا کے خام عرق سے فریکشنیشن کیا گیا جیسا کہ تصویر 5 میں بیان کیا گیا ہے۔ خام عرق کو ڈسٹل واٹر سے ملایا گیا اور پھر n-hexane سے نکالا گیا، اس کے بعد EtOAc۔ ہر سالوینٹس اور خام عرق کے حل کی مساوی مقداروں کو پھر علیحدگی کے فنل میں 3 منٹ تک ہلا کر ملایا گیا۔ تمام حصوں کو 40 ڈگری پر روٹری ایوپوریٹر کے ذریعہ خشک ہونے پر مرکوز کیا گیا تھا۔ ان تینوں حصوں کی اینٹی ٹائروسینیز سرگرمیاں مذکورہ طریقہ کار کے مطابق طے کی گئیں۔ جیسا کہ EtOAc فریکشن نے سب سے زیادہ اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی ظاہر کی، اسے بائیو ایکٹیو کمپاؤنڈ کو الگ تھلگ اور صاف کرنے کے لیے منتخب کیا گیا۔ فعال EtOAc حصہ خشک ہونے کے لیے بخارات بنا ہوا تھا اور اسے سیلیکا جیل (75 جی) کالم (30 × 3 سینٹی میٹر) پر کرومیٹوگرافی کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ n-hexane اور EtOAc کا استعمال کرتے ہوئے EtOAc [100:0 (F1)، 80:20 (F2)، 60:40 (F3)، 40:60 (F4)، 20:80 (F5) ، اور 0:100 (F6)]۔ ان چھ حصوں کی اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی مندرجہ بالا طریقہ کار کے مطابق کی گئی تھی، اور زیادہ تر سرگرمیاں F3 اور F6 میں پائی گئیں۔ فریکشنز F3 اور F6 کو C18 ریورسڈ فیز HPLC (COSMOSIL 5C18-AR-II؛ Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan) کے ذریعے 2.5 mL کے بہاؤ کی شرح کے ساتھ موبائل فیز کے طور پر پانی اور acetonitrile سے لیس کیا گیا تھا۔ min−1، 280 nm پر پتہ چلا۔

F3 سے تین چوٹیاں 9.55، 13.66، اور 16.47 منٹ، اور F6 سے چار چوٹیاں 11.56، 12.20، 12.75، اور 15 پر ختم ہوئیں۔{48}}3 منٹ بے رنگ سفید مادے کے طور پر، جن میں سے F3 اور 11.56، 12.75 اور 15 سے 9.55 اور 16.47 منٹ پر پانچ چوٹی کے حصوں میں سرگرمی کا پتہ چلا۔{63}}F6 (تصویر 5) سے 3 منٹ (ضمنی ڈیٹا)۔ الگ تھلگ مرکبات (~10 ملی گرام) کو MeOH-d4 میں تحلیل کیا گیا اور پھر اسپیکٹرل تجزیہ کا نشانہ بنایا گیا۔ جوہری مقناطیسی گونج (NMR) سپیکٹرا کو کمرے کے درجہ حرارت پر BRUKER NMR سپیکٹرو میٹر (500 MHz 1 H اور 125 MHz 13C) پر ریکارڈ کیا گیا۔ کیمیائی شفٹوں (δ) کو اندرونی معیار کے طور پر tetramethylsilane (TMS) کی نسبت پرزہ فی ملین (ppm) کے طور پر ریکارڈ کیا گیا۔ ماس سپیکٹرو میٹری کے تجربات واٹر ماس سپیکٹرو میٹر پر الیکٹرو سپرے آئنائزیشن (ESI − MS) پروب کا استعمال کرتے ہوئے درج ذیل آلات کی شرائط کے تحت کیے گئے: کالم: COSMOSIL 5C18-AR-II، (2 × 150) ملی میٹر۔ سالوینٹ A: پانی (0.1 فیصد فارمک ایسڈ)، سالوینٹ B: ایسٹونیٹرائل، بہاؤ کی شرح: 4 ملی لیٹر/منٹ، انجیکشن والیوم: 100 µL، رن ٹائم: 35 منٹ، F3 کے لیے ٹائم پروگرام: 75 فیصد B (0 منٹ) → 75 فیصد B (20 منٹ) → 100 فیصد B (20.1 منٹ) → 100 فیصد B (27 منٹ) → 75 فیصد B (27.1 منٹ) → 75 فیصد B (35 منٹ)۔ F6 کے لیے ٹائم پروگرام: 45 فیصد B (0 منٹ) → 45 فیصد B (14 منٹ) → 100 فیصد B (14.1 منٹ) → 100 فیصد B (20 منٹ) → 45 فیصد B (20.1 منٹ) → 45 فیصد B (25 منٹ) منٹ)۔ پمپ موڈ: بائنری گریڈینٹ۔ اوون کی تفصیلات: CTO-20AC، درجہ حرارت 40 ڈگری۔ ایم ایس آئنائزیشن موڈ: ای ایس (پلس)، کیپلیری وولٹیج: 4.0 کے وی، کون وولٹیج: 20 وی، سورس ٹمپریچر: 120 ڈگری، ڈیسولیشن ٹمپریچر: 350 ڈگری، کون گیس فلو: 100 ایل/ ایچ، ڈیسولیشن گیس فلو: 800 ایل /h (ضمنی ڈیٹا)۔

الگ تھلگ مرکبات کی اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی

الگ تھلگ مرکبات کو MeOH میں 5، 10، 30، 50، 100، اور 200 μM کی تعداد میں ہر مرکب کے لیے تحلیل کیا گیا تھا۔ اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی کا تعین پہلے بیان کردہ طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

الگ تھلگ مرکبات کے ذریعہ ٹائروسینیز اور میلانوجینس کی انٹرا سیلولر روکنا

سیل کلچر

B16F10 میلانوما خلیات Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagle's Medium (DMEM) میں 10 فیصد ہیٹ ان ایکٹیویٹڈ فیٹل بووائن سیرم (FBS) اور 1 فیصد پینسلن (10,000 U/mL)/سٹریپٹومائسن (100 ug/mL) کے ساتھ مکمل کیے گئے تھے۔ 5 فیصد CO2 پر مشتمل مرطوب ماحول میں 37 ڈگری پر۔

سیل کی عملداری

B16F10 خلیات کو 5 × 104 خلیات کی کثافت پر ایک 96-کنویں پلیٹ میں چڑھایا گیا تھا۔ 24 گھنٹے کے بعد، خلیات کو الگ تھلگ کمپاؤنڈ کے مختلف ارتکاز کا سامنا کرنا پڑا اور 37 ڈگری پر اضافی 48 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، سیل کی عملداری کا تعین MTS پرکھ کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ایم ٹی ایس حل کے بیس مائیکرو لیٹر شامل کیے گئے اور 60 منٹ تک انکیوبیٹ کیے گئے۔ انکیوبیشن کے بعد، خلیوں کی جاذبیت کا تعین مائکروپلیٹ ریڈر (بینچ مارک پلس) کا استعمال کرتے ہوئے 490 nm پر کیا گیا تھا۔

الگ تھلگ مرکبات کی اینٹی ٹائروسینیز اور اینٹی میلانوجینک سرگرمیاں

سیلولر میلانین مواد کا تعین اور ٹائروسینیز ایکٹیویٹی اسسیس کیے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا [31]، معمولی ترمیم کے ساتھ۔ B16F10 میلانوما خلیات کو 5 × 104 خلیات کی کثافت پر کنویں کی پلیٹ میں چڑھایا گیا تھا۔ 24 گھنٹے کے بعد، خلیات کو الگ تھلگ کمپاؤنڈ یا اربوٹین کے مختلف ارتکاز کا سامنا کرنا پڑا۔ 1 گھنٹے کے بعد، 100 nM -melanocyte-stimulating hormone (-MSH) شامل کیا گیا، اور خلیات کو 37 ڈگری پر اضافی 48 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔ اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی کے مطالعہ کے لیے، خلیات کو پھر آئس کولڈ فاسفیٹ بفر سے دھویا گیا اور فاسفیٹ بفر (pH 6.8) کے ساتھ لیس کیا گیا جس میں 1 فیصد Triton-X (90 μL/well) تھا۔ پلیٹوں کو −80 ڈگری پر 30 منٹ کے لیے منجمد کر دیا گیا تھا۔ پگھلنے اور مکس کرنے کے بعد، ہر کنویں میں 10 μL 1 فیصد L-DOPA شامل کیا گیا۔ 2 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیشن کے بعد، جذب 490 nm پر ناپا گیا۔ میلانین مواد پرکھ کے لیے، خلیات کو دو بار فاسفیٹ بفر سے دھویا گیا اور پھر 10 فیصد DMSO پر مشتمل NaOH (1 N) کے 100 μL میں تحلیل کیا گیا۔ نمونے 80 ڈگری پر 1 گھنٹہ کے لیے لگائے گئے اور میلانین کو گھلنشیل کرنے کے لیے ملایا گیا۔ مخلوط ہوموجنیٹ کی نظری کثافت 490 nm پر ماپا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

نتائج کا اظہار اوسط ± SEM کے طور پر کیا جاتا ہے۔ دونوں ذرائع کے درمیان شماریاتی فرق کا اندازہ طالب علم کے ٹی ٹیسٹ سے کیا گیا۔ بونفرونی ٹیسٹ کے بعد تغیر کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے متعدد موازنہ کیے گئے۔ P < 0.05="" میں="" اختلافات="" کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

یہ ہماری اینٹی تھکاوٹ کی مصنوعات ہے! مزید معلومات کے لیے تصویر پر کلک کریں!

حوالہ جات

1. سولانو ایف، بریگنٹی ایس، پیکارڈو ایم، غنیم جی ایچ۔ ہائپوپگمنٹڈ ایجنٹس: حیاتیاتی، کیمیائی اور طبی پہلوؤں پر ایک تازہ ترین جائزہ۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2006؛ 19:550-71۔

2. Loizzo MR، Tundis R، Menichini F. قدرتی اور مصنوعی ٹائروسینیز انابیٹرز بطور اینٹی براؤننگ ایجنٹ: ایک اپ ڈیٹ۔ Compr Rev Food Sci Food Saf. 2012؛ 11:378-98۔

3. Lin YS، Chen HJ، Huang JP، Lee PC، Tsai CR، Hsu TF، et al. وٹی کے ونیفیرا پتوں کے عرق کا استعمال کرتے ہوئے ٹائروسینیز کی روک تھام کی سرگرمی کے حرکیات۔ Biomed Res Int. 2017:5232680۔

4. Manini P, Napolitano A, Westerhof W, Riley PA, d' Ischia M. جلد کو depigmenting agent monobenzone کے tyrosinase-catalyzed oxidation سے پیدا ہونے والا ایک رد عمل آرتھو کوئینون: خود جوڑے اور thiol-conjugation کے رد عمل اور ممکنہ اثرات کے لیے۔ زہریلا کیم ریس ٹوکسیکول۔ 2009؛ 13:1398–405۔

5. Couteau C, Coiffard L. جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹوں کا جائزہ: ادویات اور کاسمیٹک مصنوعات۔ کاسمیٹکس۔ 2016؛ 3:27۔

6. الصالح اول، شنواری این، الدوش اول، بلیڈو جی، العمودی ایم، خوگالی ایف۔ البینو اور پگمنٹڈ چوہوں کے مختلف ٹشوز میں مرکری کی سطح کا موازنہ جن کا علاج دو مختلف برانڈز کی مرکری جلد کو روشن کرنے والی کریموں سے کیا گیا ہے۔ بائیو میٹلز: انٹ جے رول میٹ آئنز بائیول، بائیو کیم، میڈ۔ 2004؛ 17:167-75۔

7. گوپی ناتھ ایچ، کارتیکیان کے ہلدی: ایک مصالحہ جات، کاسمیٹک اور علاج۔ انڈین جے ڈرمیٹول وینیرول لیپرول۔ 2018؛ 84:16-21۔

8. وان اے آر، برنم اے، سیوامانی آر کے۔ جلد کی صحت پر ہلدی (کرکوما لونگا) کے اثرات: طبی ثبوت کا ایک منظم جائزہ۔ Phytother Res. 2016؛ 30:1243–64۔

9. بالیگا ایم ایس، کٹیار ایس کے۔ منتخب غذائی نباتات کے ذریعہ فوٹو کارسینوجنیسیس کی کیموپریوینشن۔ فوٹو کیم فوٹو بائیو سائنس۔ 2006؛ 5:243–53۔

10. اختر جے، حسین ایم اے، سانو اے، تکارا کے، اسلام ایم زیڈ، ہو ڈی ایکس۔ Fusarium Solani Sensu Lato کے خلاف مختلف پرجاتیوں اور ہلدی (Curcuma spp.) کی اینٹی فنگل سرگرمی۔ فارم کیم جے 2018؛ 52:292–7۔

11. اکٹر جے، اسلام ایم زیڈ، حسین ایم اے، کاوباٹا ایس، تکارا کے، نگوین ایچ، وغیرہ۔ انڈوتھیلیم سے آزاد اور کیلشیم چینل پر منحصر پورسین دماغی شریان کی مختلف پرجاتیوں اور ہلدی کے تناؤ سے نرمی۔ J Tradit Complement Med 2018؛ 9:297–303۔

12. اکٹر جے، تکارا کے، اسلام ایم زیڈ، حسین ایم اے، سانو اے، ہو ڈی ایکس۔ کرکوما امڈا سے اینٹی فنگل مرکبات کی تنہائی اور ساختی وضاحت۔ ایشین پی اے سی جے ٹراپ میڈ۔ 2019؛ 12:123-9۔

13. اکٹر جے، حسین ایم اے، تکارا کے، اسلام ایم زیڈ، ہو ڈی ایکس۔ ہلدی کی مختلف انواع اور اقسام کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی (Curcuma spp): فعال مرکبات کو الگ کرنا۔ کمپ بائیو کیم فزیول سی ٹوکسیکول فارم۔ 2019؛ 215:9-17۔

14. Khunlad P، Tundulawessa Y، Supasiri T، Chutrtong W. Tyrosinase ہلدی کے پاؤڈر سے curcuminoids کی روک تھام کی سرگرمی (Curcuma longa Linn.) جے ایس ڈبلیو یو سائنس۔ 2008؛ 24:125-39۔

15. Giang PM، Son PT. ویتنامی کرکوما آرومیٹک سیلسب کے ریزوم سے سیسکوٹرپینائڈز کو الگ کرنا۔ جے کیم۔ 2000؛ 38:96-9۔

16. Asem SD، Laitonjan SW. ساخت کی تحقیقات – کرکوما سیکا روکسب کے ریزوم سے زیڈرون کا غیر خطی تعلق۔ انڈ جے کیم۔ 2012؛51:1738–42۔

17. فیض حسین سی، الامین ایم، رحمان کے ایم، سرکار اے، عالم ایم ایم، چوہدری ایم ایچ، وغیرہ۔ Curcuma amada سے ینالجیسک اصول۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2015؛ 163:273-7۔

18. احمد حمدی او اے، سید عبدالرحمن ایس این، اوانگ کے، عبدالوہاب این، لوئی سی وائی، تھامس این ایف، عبد ملک ایس این۔ Curcuma zedoaria کے rhizomes سے سائٹوٹوکسک اجزاء۔ سائنس ورلڈ جے 2014؛ 2014:321943۔

19. مکابے ایچ، مارو این، کوابارا اے، کامو ٹی، ہیروٹا ایم. کرکوما زیڈوریا سے سوزش کے خلاف سیسکیٹرپینز۔ Nat Prod Res. 2006؛ 20:680-5۔

20. Kikuzaki H، Nakatani N. Zingiber officinale کے rhizomes سے Cyclic diarylheptanoids۔ فائٹو کیمسٹری۔ 1996؛ 43:273-7۔

21. Dekebo A, Dagne E, Sterner O. Furanosesquiterpenes from Commiphora sphaerocarpa اور سچے مرر کے متعلقہ ملاوٹ کرنے والے۔ Fitoterapia. 2002؛ 73:48-55۔

22. جوشی ایس سی، متھیلا سی ایس۔ پتی کے ضروری تیل کی اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمیاں اور اس کے اجزاء فرانوڈینون اور کرزیرینون لنڈرا پلچرریما (نیز) بینتھ سے۔ سابق ہک. f Pharmacogn Res. 2012؛ 4:80–4۔

23. یانگ ایف کیو، لی ایس پی، ژاؤ جے، لاؤ ایس سی، وانگ وائی ٹی۔ Curcuma rhizomes کی تین پرجاتیوں میں نو sesquiterpenoids کے بیک وقت تعین کے لیے تجزیہ کاروں کے حل اور استحکام پر مبنی GC–MS حالات کی اصلاح۔ جے فارم بائیو میڈ اینل۔ 2007؛ 43:73-82۔

24. Li YW، Zhu GY، Shen XL، Chu JH، Yu ZL، Fong WF. Furanodienone انسانی چھاتی کے کینسر کے MCF-7 خلیوں میں ER سگنلنگ کو دبا کر سیل کے پھیلاؤ اور بقا کو روکتا ہے۔ جے سیل بائیو کیم۔ 2011؛ ​​112:217-24۔

25. Tao QF, Xu Y, Lam RY, Schneider B, Dou H, Leung PS, et al. ڈائریل ہیپٹانوائڈز اور زنگیبر آفسینال کے ریزوم سے ایک مونوٹرپینائڈ: اینٹی آکسیڈینٹ اور سائٹو پروٹیکٹو خصوصیات۔ جے نیٹ پروڈکٹ۔ 2008؛ 71:12-17۔

26. Yokosuka A, Mimaki Y, Sakagami H, Sashida Y. Tacca chantrieri کے rhizomes سے نئے diarylheptanoids اور diarylheptanoid glucosides اور ان کی سائٹوٹوکسک سرگرمی۔ جے نیٹ پروڈکٹ۔ 2002؛ 65:283-9۔

27. جیانگ جے ایل، جن ایکس ایل، ژانگ ایچ، ایس یو ایکس، کیاو بی، یوآن وائی جے۔ کرکوما لونگا ایل سے کرکومینائڈز میں اینٹی ٹیومر اجزاء کی شناخت ساخت اور سرگرمی کے تعلق کی بنیاد پر۔ جے فارم بائیو میڈ اینل۔ 2012؛70:664–70۔

28. ماروٹ ایل، میونیر جے آر۔ جلد کا ڈی این اے فوٹو ڈیمیج اور اس کے حیاتیاتی نتائج۔ جے ایم اکیڈ ڈرمیٹول۔ 2008؛ 58:139-48۔

29. پولیس گودرا آر ایس، ابیراج کے، چنے گوڑا ڈی، آرادھیا ایس ایم۔ آم ادرک (Curcuma amada Roxb.) rhizome سے اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی بیکٹیریل مرکب کی تنہائی اور خصوصیات۔ J Chromatogr B Anal Technol Biomed Life Sci. 2007؛ 852:40-8۔

30. Tadtong S، Viriyaroj A، Vorarat S، Nimkuntat S، Suksamrarn S. Antityrosinase اور مینگوسٹین پیری کارپ ایکسٹریکٹ کی اینٹی بیکٹیریل سرگرمیاں۔ جے ہیلتھ ریس 2009؛ 23:99-102۔

31. Li X, Guo L, Sun Y, Zhou J, Gu Y, Li Y. Baicalein ERK سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے میلانوجینیسس کو روکتا ہے۔ انٹ جے مول میڈ۔ 2010؛ 25:923–7۔