اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی میلانوجینک سرگرمیاں ہیٹ ٹریٹڈ لائکورائس (وونگام، گلیسریزا گلبرا × جی یوریلینسس) ایکسٹریکٹ۔

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

من ہائے کانگ 1,2، گوی یونگ جنگ 1، یون جیونگ جی 1، جیونگ ہون لی 1، سو جی چوئی 1، تائی کیونگ ہیون 2،* اور ہیونگ ڈان کم 1،*

خلاصہ:میلانین ایک بھورا یا سیاہ روغن ہے جو جلد کو بالائے بنفشی تابکاری اور رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) سے بچاتا ہے۔ تاہم، میلانین کی زیادہ پیداوار کا تعلق lentigines، melasma، freckles اور جلد کے کینسر سے ہے۔لیکوریسدکھایا گیا ہےاینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ٹیومر، اینٹی پلیٹلیٹ، اینٹی سوزش، اور مدافعتی سرگرمیاں اور جلد کے قدرتی علاج کے طور پر استعمال ہوتی ہیں۔سفید کرنا.ہمارا مقصد وونگم کی صلاحیت کی تصدیق کرنا تھا، جو کہ دیہی ترقی کی انتظامیہ (RDA) کی طرف سے تیار کردہ لیکوریس کی ایک نئی کاشت ہے۔سفید کرناکاسمیٹکس میں ایجنٹ اس کے علاوہ، ہم نے موازنہ کرکے لیکوریس کی بایو ایکٹیویٹی پر گرمی کے علاج کے اثر کی تصدیق کی۔اینٹی آکسیڈینٹاوراینٹی میلانوجینکگرم کرنے سے پہلے اور بعد میں لیکوریس کے عرق کی سرگرمیاں (130 ◦C)۔ ہیٹ ٹریٹڈ لائیکورائس ایکسٹریکٹ (WH-130) نے ABTS پلس (2,20-azino-bis-(3-ethyl benzothiazoline-6-sulfonic تیزاب) ڈائمونیم نمک) اور ڈی پی پی ایچ (2،2-ڈفینائل-1-پکریل ہائیڈرزائل) اسیس۔ مزید برآں، WH-130 نے غیر گرم ہونے کے مقابلے B16F10 میلانوما خلیوں میں ٹائروسینیز کی کمی کی وجہ سے میلانوجینیسیس کو زیادہ مؤثر طریقے سے روکالیکوریسنکالنا مزید یہ کہ گرمی کے علاج سے کل فینولک مواد میں اضافہ ہوا۔ خاص طور پر، isoliquiritigenin، ایکاینٹی آکسیڈینٹاوراینٹی میلانوجینکلیکورائس کا مرکب، گرمی کے علاج سے تیار کیا گیا تھا۔ آخر میں، WH-130، بائیو ایکٹیو فینولیکس جیسے کہ isoliquiritigenin کی بڑھتی ہوئی سطحوں کے ساتھ، ایک نئی جلد میں ترقی کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔سفید کرناکاسمیٹکس میں درخواستوں کے ساتھ مواد۔

مطلوبہ الفاظ: اینٹی میلانوجینکسرگرمی؛ گرمی کا علاج؛لیکوریس; مورائن میلانوما خلیات (B16F10)

Cistanche ایک اینٹی آکسیڈینٹ ہے۔

1. تعارف

لیکوریس(Glycyrrhiza species)، ایک بارہماسی جڑی بوٹی جس میں دواؤں کا استعمال Leguminosae خاندان میں ہوتا ہے، وسط ایشیا، چین، روس، منچوریا، منگولیا اور یورپ میں وسیع پیمانے پر تقسیم کیا جاتا ہے [1]۔ یہ طویل عرصے سے ذائقہ دار اور میٹھا کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا رہا ہے۔ لیکورائس کے خشک جڑ اور اسٹولن کو نزلہ، کھانسی، دمہ، تھکاوٹ اور سانس کی نالی کے انفیکشن کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جس میں لیکورائس کی حیاتیاتی سرگرمیوں کی وجہ سے شامل ہیں۔اینٹی آکسیڈینٹاینٹی مائکروبیل، اینٹی ٹیومر، اینٹی پلیٹلیٹ، اینٹی سوزش اور مدافعتی سرگرمیاں [2,3]۔ Glycyrrhiza کی نسل تقریباً 22 licorice انواع پر مشتمل ہے، جن میں G. uralensisFisch، G. glabra L. اور G. inflata Batal شامل ہیں۔

وونگم، لیکوریس کی ایک نئی متصل ہائبرڈ کاشت، دیہی ترقی کی انتظامیہ نے گلائسیریزا گلیبرا ایکس جی یوریلینسس (G. korshinskiGrig) کے ہائبرڈ کے طور پر تیار کی ہے۔ وونگم کی پیداوار زیادہ ہے اور اس کی بیماری کے خلاف مزاحمت G. uralensis کے مقابلے میں بہتر ہے۔ G. uralensis کی حیاتیاتی سرگرمیوں پر متعدد مطالعہ کیے گئے ہیں، جبکہ Wongam پر موجودہ تحقیق، ایک نئی کاشت، اس کی اینٹی الرجک، امیونو موڈیولیٹری اور السر کی سرگرمیوں تک محدود ہے [1,2]۔ اس طرح، وونگم کی وسیع بائیو ایکٹیویٹی کی چھان بین ضروری ہے۔

میں اہم بایو ایکٹو اجزاءلیکوریسجڑیں flavonoids اور triterpene saponins ہیں، بشمول liquiritin، liquiritigenin، isoliquiritigenin (ISL) اور glycyrrhizin (یا glycyrrhizicacid) [4,5]۔ آئی ایس ایل ایک فلیوونائڈ ہے جو لیکوریس میں پایا جاتا ہے جس نے مختلف دواسازی کی سرگرمیاں ظاہر کی ہیں، بشمول اینٹی پلیٹلیٹ، اینٹی الرجک، اینٹی ٹیومر، اینٹی سوزش اوراینٹی آکسیڈینٹسرگرمیاں [6-8]۔ ISL licorice جڑ میں isoliquiritin سے ایک ہائیڈولیسس پروڈکٹ ہے۔ یہ ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ پروٹین کناز (ERK) سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرکے مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) کے انحطاط کے ذریعے میلانوجینیسیس کو روک سکتا ہے۔ نتیجتاً، MITF انحطاط نے SK-MEL-2 خلیات [9,10] میں ٹائروسینیز (TYR) اور ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین (TRP-1 اور TRP-2) جینوں کے اظہار کو دبا دیا۔ مشروم TYR کی mono- اور diphenolase سرگرمیوں کے ساتھ ساتھ melanocytes میں themelanogenesis کو روک سکتا ہے [11]۔

میلانین، جلد کی رنگت فراہم کرنے والا ایک اہم روغن، ایپیڈرمل میلانوسائٹس میں ترکیب کیا جاتا ہے اور انٹرا سیلولر آرگنیلز میں ذخیرہ کیا جاتا ہے جسے میلانوسومز کہتے ہیں [12]۔ میلانین روغن دو قسموں پر مشتمل ہوتا ہے: بھورا یا سیاہ یومیلانین اور سرخ یا پیلا فیومیلینن [12]۔ میلانوجینیسیس بیرونی محرکات کی طرف سے حوصلہ افزائی کی جا سکتی ہے، بشمول الٹرا وایلیٹ (UV) تابکاری، رد عمل آکسیجن اسپیسز (ROS) اور کیمیکلز جیسے کہ -melanocyte-stimulating hormone (-MSH) andisobutylmethylxanthine (IBMX)، جو سائکلک adenosphetnosphet کو بلند کرتا ہے۔ میلانین جلد کو ان محرکات سے بچاتا ہے، جبکہ اس کی زیادہ پیداوار جلد کے ہائپر پگمنٹیشن کا سبب بنتی ہے، جو جلد کے کینسر جیسی بیماریوں کا باعث بن سکتی ہے [13-17]۔ جلدسفید کرناایجنٹوں جیسے کوجک ایسڈ، ہائیڈروکوئنون، آربوٹین اور ایسکوربک ایسڈ، جو کہ TYR روکنے والے ہیں، کو کئی کاسمیٹک مصنوعات میں ہائپر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا ہے [13,18]۔ میلانوجینیسیس کو سگنلنگ کے مختلف راستوں کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے، اور یہ سگنلز MITF کے اپ گریجولیشن سے منسلک ہوتے ہیں۔ MITF کا فعال ہونا TYR اور TRPs (TRP-1, TRP-2) کے اظہار کو فروغ دیتا ہے۔ پھر، TYR L-tyrosine to3،4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) کے آکسیڈیشن کو اتپریرک کرتا ہے، جو بعد میں DOPAquinone میں آکسائڈائز ہو جاتا ہے۔ TRP-2 dopachrome کو 5،6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA) یا 5,6-dihydroxyindole (DHI) میں تبدیل کرتا ہے۔ آخر میں، DHICA اور DHI کو TRP-1 کے ذریعے آکسائڈائز کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں میلانوجینیسیس [19] ہوتا ہے۔

حرارتی عمل پودوں کے نچوڑ کی فزیوکیمیکل اور حیاتیاتی خصوصیات کو متاثر کرتے ہیں۔ وہ خلیے کی دیواروں کو تباہ کرتے ہیں اور ہم آہنگی بانڈز کو توڑ دیتے ہیں، جس کے نتیجے میں بائیو ایکٹیو مرکبات کی رہائی ہوتی ہے [20,21]۔ شراب بنانے والوں کے ہیٹ ٹریٹمنٹ میں اناج کے عرق کو 130 ◦ سے اوپر خرچ کیا جاتا ہے جس میں کل فینولک مواد (TPC) اور کل flavonoid مواد (TFC) کی سطح میں اضافہ ہوتا ہے، اسی طرح اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں میں اضافہ ہوتا ہے [16,20,21]۔ لیموں کے چھلکوں کو گرم کرنے سے فینولک مرکبات کے اخراج اور اضافہ ہو سکتا ہے۔اینٹی آکسیڈینٹسرگرمی [17]۔

ہمارا بنیادی مقصد قدرتی جلد کے طور پر وونگم کی صلاحیت کی تصدیق کرنا ہے۔سفید کرناکاسمیٹکس میں مواد. اس کے علاوہ، اس مطالعہ کا مقصد یہ بھی ثابت کرنا ہے کہ آیا گرمی کا علاج اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی میلانوجینک سرگرمیوں کو بہتر بنا سکتا ہے۔لیکوریس. ہم نے تفتیش کی۔اینٹی آکسیڈینٹسرگرمیاں، Wongam ارک کے TPC کے ساتھ مل کر۔اینٹی میلانوجینکوونگم کے نچوڑوں کے اثرات کی تصدیق TYR کی روک تھام کی سرگرمی اور میلانین کے مواد میں میلانوما خلیوں سے کی گئی۔

Cistanche ایک قدرتی ہےجلدسفید کرنا جڑی بوٹی

2. مواد اور طریقہ

2.1 نمونے کی تیاری

نمونے پہلے بتائے گئے طریقہ [22] کے مطابق تیار کیے گئے تھے۔لیکوریس(وونگام، گلائسیریزا گلوبرا x جی یوریلینسس، جس کی شناخت NIHHS، RDA سے یون جی لی نے کی اور واؤچر نمبر MPS006326 کے ساتھ کوریا میڈیسنل ریسورسز ہربیریم میں رجسٹرڈ) ہربل کراپ ریسرچ ڈیپارٹمنٹ (Eumsung,Chungkbuong, Korean) میں کاشت اور کاشت کی گئی ) 2018 میں، اور 20 گھنٹے کے لیے 60 ◦C پر خشک ہوا۔ 10 کلولیکوریسدھویا گیا اور 1 کلو گراؤنڈ تھا۔ ان کو ملانے کے بعد بالترتیب WC یا WH کے 3 نمونے حاصل کیے گئے۔ گراؤنڈ لائیکورائس (5 جی) کو شیشے کے کنٹینر میں 1 ملی لیٹر آست پانی کے ساتھ رکھا گیا تھا اور اسے آٹوکلیو (جسیکو، سیول، کوریا) میں 1 گھنٹے کے لیے 130 ◦C (WH-130) پر علاج کیا گیا تھا۔ ، 5 جی) اور WH-130 کو کمرے کے درجہ حرارت (RT) پر 24 گھنٹے کے لیے 70 فیصد ایتھنول (نمونہ: سالوینٹ، 1:50، v:v) کا استعمال کرتے ہوئے الگ الگ نکالا گیا۔ فلٹریشن کے بعد، نچوڑ کو ویکیوم کے نیچے بخارات بنا دیا گیا، منجمد کر کے خشک کیا گیا اور −80 ◦C پر محفوظ کیا گیا۔ تمام عرقوں کو ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) (Sigma, St. Louis, MO, USA) اور میتھانول (Sigma, St. Louis, MO, USA) میں حل کیا گیا تھا۔

2.2 براؤننگ کا تعین

کا براؤننگ انڈیکسلیکوریسنچوڑ (WC اور WH-130) کو ان کی جاذبیت کی قدر کی بنیاد پر 420 nm (A420) پر ریکارڈ کیا گیا جس کی پیمائش مائکروپلیٹ ریڈر (BioTek, Winooski, VT, USA) کے ذریعے کی گئی۔ 420 nm پر جاذبیت کی اعلی قدریں ایک اعلی براؤننگ انڈیکس [23,24] کے مساوی ہیں۔

2.3۔ کل فینولک مواد (TPC)

پہلے بتائے گئے طریقہ [25] کے مطابق، TPC کی پیمائش اس اصول کی بنیاد پر کی گئی تھی کہ Folin–Ciocalteu کا ریجنٹ aphosphotungstic-phosphomolybdenum کمپلیکس پر مشتمل ایک نیلے رنگ کے کروموفور تک کم ہو جاتا ہے جو الکلائن حالات اور فینولک مرکبات کے ارتکاز پر منحصر ہوتا ہے۔ ہر نمونہ (10 µL) کو 2 فیصد سوڈیم کاربونیٹ (200 µL) اور پھر Folin–Ciocalteu کے ری ایجنٹ (10 µL) کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ مرکب کو RT پر 30 منٹ کے لئے چالو کیا گیا تھا۔ پھر، مائکروپلیٹ ریڈر (BioTek، Winooski، VT، USA) کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 750 nm پر ماپا گیا۔ ٹی پی سی کا حساب گیلک ایسڈ کے معیاری منحنی خطوط سے کیا گیا تھا اور نتائج کو گیلک ایسڈ کے مساوی اقدار، mg GAE g−1 extract کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

2.4 اینٹی آکسیڈینٹ کی صلاحیت کا تعین

ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کو 2،20-azino-bis-(3-ethylbenzothiazolin 6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) کا استعمال کرتے ہوئے پہلے بیان کردہ طریقہ کے مطابق معمولی ترمیم کے ساتھ ماپا گیا تھا [19، 26]۔ ABTS ریڈیکل کیٹیشن حل 2.6 mM پوٹاشیم پرسلفیٹ اور 7.4 mM ABTS کو ملا کر تیار کیا گیا تھا اور انہیں 24 H atRT تک رد عمل ظاہر کرنے کی اجازت دی گئی تھی۔ اس کے بعد ABTS محلول کو 1{15}}–1.500 کی حد میں جذب کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے ڈسٹل واٹر سے پتلا کیا گیا۔ اس کے بعد، نمونے کے 20 µL پر 180 µL ABTS پلس حل کے ساتھ رد عمل ظاہر کیا گیا، روشنی سے محفوظ کیا گیا، اور نمونے اور محلول کا مرکب 30 منٹ atRT کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔ 735 nm پر مائکروپلیٹ ریڈر (BioTek، Winooski، VT، USA) کا استعمال کرتے ہوئے جذب کی پیمائش کی گئی۔ Trolox معیاری وکر سے، Trolox مساویاینٹی آکسیڈینٹصلاحیت (TEAC) کا حساب لگایا گیا تھا اور اس کا اظہار ٹرولوکس مساوی (TE) کے ملی گرام خشک نمونے کے فی جی میں کیا گیا تھا۔

2،2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) ریڈیکل حل0.2 mM DPPH کو 99 فیصد ایتھنول میں تحلیل کرکے تیار کیا گیا تھا۔ DPPH محلول کو 1000–1500 کے 520 nm پر جذب کرنے کے لیے آست پانی سے پتلا کیا گیا تھا۔ پھر، 50 µL نمونے کو DPPH کے 200 µL حل کے ساتھ ملایا گیا اور RT پر 30 منٹ تک رد عمل ظاہر کیا۔ ردعمل کے بعد، مرکب کی جاذبیت 520 nm پر طے کی گئی تھی۔ Trolox معیاری منحنی خطوط سے، TEAC کا حساب لگایا گیا تھا اور خشک نمونے کے فی g mg TE میں ظاہر کیا گیا تھا۔

2.5 ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) تجزیہ

ایک ترمیم شدہ HPLC طریقہ لاگو کیا گیا تھا [22]۔ کا ISL موادلیکوریسHPLC کے ذریعے ایک UV-visible detector (HPLC: 1200 سیریز، Agilent Technologies، Santa Clara، CA، USA؛ کالم: SynergiTM، 250 × 4.6 ملی میٹر، 4 µm، Fusion-RP 8{{40}} Å, Phenomenex, Torrance, CA, USA)۔ موبائل فیز میں سالوینٹ A (0.1 فیصد فارمک ایسڈن واٹر) اور سالوینٹ B (0.1 فیصد فارمک ایسڈ ایسٹونیٹرائل) پر مشتمل تھا۔ موبائل مرحلے کے لیے گریڈیئنٹ پروگرام کو درج ذیل گریڈینٹ کے تحت چلایا گیا: 0–8 منٹ (20–20 فیصد B)، 8–30 منٹ (20–38 فیصد B)، 30–42 منٹ (38–50 فیصد) بی)، 42–47 منٹ (50–90 فیصد بی)، 47–53 منٹ (90–90 فیصد بی)، 53–54 منٹ (90–20 فیصد بی) اور 54–60 منٹ (20–20 فیصد بی) . بہاؤ کی شرح، پتہ لگانے کی طول موج اور انجیکشن والیوم کو بالترتیب 1.0 mL/min، 360 nm اور 10 µL پر سیٹ کیا گیا تھا۔ ISL معیاری حل کا تجزیہ چار مختلف ارتکاز (0.05, 0.1, 0.2, 0.4 mg/mL) کے ساتھ کیا گیا۔ کیلیبریشن کریو (y=ax plus b) ISL کے مواد کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ رجعت کی مساوات میں، x سے مراد ISL کے ارتکاز (mg mL−1) اور y کا مطلب ہے چوٹی کا علاقہ۔

2.6۔ مشروم ٹائروسینیز انحیبیٹری ایکٹیویٹی پرکھ

TYR روک تھام کی سرگرمی پرکھ TYR inhibitor اسکریننگ کٹ (BioVision, Milpitas, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ ہر ایک نچوڑ (WC اور WH-130) کو DMSO میں 250 µg/mL کی حتمی حراستی میں تحلیل کیا گیا تھا۔ مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال ہونے والے کوجک ایسڈ کو بھی DMSO میں 250 µg/mL تک پتلا کیا گیا تھا۔ مختصراً، 20 µL نچوڑ یا کوجک ایسڈ کو 50 µL TYR انزائم محلول کے ساتھ ملایا گیا۔ RT میں 10 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، ہر کنویں میں 30 µL TYR سبسٹریٹس حل شامل کیا گیا۔ نچوڑ اور کوجک ایسڈ کا حتمی ارتکاز 50 µg/mL تھا۔ اس کے بعد کنوؤں کی نظری کثافت کو ایک مائیکرو پلیٹ ریڈر (BioTek, Winooski, VT, USA) کے ساتھ 510 nm کائنےٹک موڈ میں ناپا گیا۔

cistanche پاؤڈر: مخالف آکسیکرن

2.7۔ سیل کلچر

مورائن میلانوما B16F10 خلیات امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC، Manassas، VA، USA) سے حاصل کیے گئے تھے۔ B16F10 خلیوں کو Dulbecco کے ترمیم شدہ ایگلز میڈیم (DMEM) میں 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS)، 100 یونٹس/mLof پینسلن اور 100 µg/mL streptomycin (Gibco، Grand Island) کے ساتھ مل کر کلچر کیا گیا تھا، جو کہ NYA کے وسط میں یو ایس 5 ماحول پر مشتمل ہے۔ 37 ◦C پر CO2 فیصد۔

2.8۔ سیل وائبلٹی پرکھ

کی cytotoxicityلیکوریسنچوڑ (WC اور WH-130) سے B16F10 خلیوں کا تعین MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,{{8} کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ }}diphenyltetrazolium bromide] assay.B16F10 سیلز کو 4 × 103 سیلز/ کنویں میں 96-کنویں پلیٹ میں 24 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 50، 100 اور 200 µg/mL کے ارتکاز میں خلیات میں نچوڑ شامل کیے گئے اور 48 گھنٹے کے لیے 37 ◦C انکیوبیٹیڈیٹ کیے گئے۔ پھر، MTT محلول ہر کنویں (500 µg/mL) میں شامل کیا گیا اور پلیٹ کو 37 ◦C پر 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ہر کنویں میں میڈیم کو ضائع کر دیا گیا اور DMSO کا 100 µL شامل کیا گیا۔ 30 منٹ تک ہلانے کے بعد، جاذبیت کو مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ 540 nm پر ماپا گیا۔ تمام ٹیسٹ سہ رخی میں کئے گئے تھے۔

2.9 سیلولر میلانین مواد کی پیمائش

انٹرا سیلولر میلانین کے مواد کو پہلے بیان کردہ ایمتھوڈ کے قدرے ترمیم شدہ ورژن کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا [27]۔ B16F10 میلانوما خلیات کو 8 × 104 خلیات کی کثافت والی پلیٹوں میں 6- کنویں میں بیج دیا گیا تھا اور 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ خلیوں کو نچوڑ (WC اور WH-130، 100 µg/mL)، کوجک ایسڈ (100 µg/mL) یا ISL (10 µM، ملی پور سگما، برلنگٹن، MA، ریاستہائے متحدہ) کے سامنے 48 گھنٹے کے لیے رکھا گیا تھا۔ 100 µM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) کی موجودگی۔ علاج کے بعد، خلیات کو Dulbecco کے فاسفیٹ بفرڈ نمکین (DPBS) سے دھویا گیا اور 90 ◦C پر 2 گھنٹے کے لیے 1 N NaOH کے 200 µL میں تحلیل کر دیا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 405 nm پر جاذبیت کی پیمائش کی گئی۔

2.10 سیلولر ٹائروسینیز ایکٹیویٹی پرکھ

انٹرا سیلولر TYR سرگرمی کو پہلے بیان کردہ طریقہ [27] کے قدرے ترمیم شدہ ورژن کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ B16F10 میلانوما خلیات (8 × 104 خلیے/ کنویں) کا علاج 48 گھنٹے کے لیے 100 µM IBMX کی موجودگی میں نچوڑ (100 µg/mL) یا کوجک ایسڈ (100 µg/mL) سے کیا گیا، جمع کیا گیا اور DPBS کے ساتھ دھویا گیا۔ پروٹین کے نمونوں کو سوڈیم فاسفیٹ بفر (pH 6.8) کے ساتھ 1 فیصد TrionX-100 (MilliporSigma, Burlington, MA, USA) میں لیس کیا گیا اور پھر 15،000 rpm پر 10 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ فریکشن کو جمع کیا گیا تھا اور پروٹین کی ارتکاز کا تعین بائی سینچونینک ایسڈ (بی سی اے) پرکھ کٹ (والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ 30 µg پروٹین (1 فیصد Trion X-100 کے ساتھ 100 µL کے ساتھ ایڈجسٹ) اور 10 mM L-DOPA کا 100 µL ایک 96- ویل پلیٹ کے ہر کنویں میں شامل کیا گیا تھا۔ 1 گھنٹہ کے لئے 37 ◦C پر انکیوبیشن کے بعد، مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 490 nm پر جذب کی پیمائش کرکے ڈوپاکروم کی نگرانی کی گئی۔ TYR سرگرمی کا حساب درج ذیل فارمولے سے کیا گیا:

ٹائروسینیز سرگرمی ( فیصد )=(نمونہ کا OD405/ OD405 کنٹرول کا) × 100

2.11۔ ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (RT-PCR)

MITF، TYR، TRP-1 اور TRP-2 سمیت melanogenesis سے متعلق جینوں کے mRNA اظہار کی سطحوں کا تعین ایک ترمیم شدہ RT-PCR پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا [28]۔ مختصراً، B16F10 سیل کو 8 × 104 سیل فی کنویں کی کثافت پر 6- کنویں کی پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا اور 24 گھنٹے تک کلچر کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیات کو 48 گھنٹے کے لیے نچوڑ (100 µg/mL)، کوجک ایسڈ (100 µg/mL) یا ISL (10 µM) کے ساتھ علاج کیا گیا۔ کل RNA کو TRIzol reagent (Ambion, Austin, TX, USA) کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور پھر RNA کی حراستی کو مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق ریورس ٹرانسکرپٹیس پریمکس کٹ (ElpisBiotech، Daejeon، Korea) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA (2 µg) کی تیاری کے بعد، MITF، TYR، TRP-1, TRP-2 کا استعمال کرتے ہوئے ریئل ٹائم پی سی آر کو انجام دیا گیا۔ اور -ایکٹین پرائمر (ٹیبل 1، بایونر، ڈیجیون، کوریا) ایک CFX96 ریئل ٹائم پی سی آر انسٹرومنٹ (بائیو ریڈ، ہرکولیس، CA، USA) میں SYBR گرین کٹ (ProGEN، Heidelberg، Germany) کے ساتھ۔ تمام ڈیٹا کو ایک حوالہ ہاؤس کیپنگ جین کے طور پر -actinmRNA کی سطح پر معمول بنایا گیا تھا۔

2.12۔ سیل لائسیٹس اور ویسٹرن بلاٹ تجزیہ کی تیاری

B16F10 خلیات کو 6-کنویں کی پلیٹوں میں 8 × 104 سیل فی کنویں کی کثافت پر بیج کیا گیا، 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر نچوڑ (100 µg/mL)، کوجک ایسڈ (100 µg/mL) کے سامنے لایا گیا۔ ) یا ISL(10 µM) 48 گھنٹے کے لیے۔ DPBS کے ساتھ دھونے کے بعد، 1 فیصد پروٹیز اور phosphataseinhibitor کاک ٹیل پر مشتمل Triton X-100بفر (MilliporSigma, Burlington, MA, USA) میں خلیات کی کٹائی اور لیس کی گئی۔ پورے سیل لائسیٹس کی پروٹین کی تعداد کو اے بی سی اے پرکھ کٹ (والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ پروٹین کی مساوی مقدار (20 µg) کو 10 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیلوں پر لوڈ کیا گیا، جو 70 V پر 4 گھنٹے تک چلائے گئے۔ پھر، پروٹینز کو پولی وینیلائیڈین فلورائیڈ (PVDF) جھلی میں منتقل کیا گیا۔ جھلی کو تین بار Tris-buffered saline [50 mM Tris-HCl (pH 7.5)، 150 mM NaCl] سے دھویا گیا جس میں 0.1 فیصد ٹوین 20 (TBST) اور 2 فیصد بوائین سیرم البومین (GenDEPOT) کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے بلاک کیا گیا۔ اس کے بعد، جھلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 4 گھنٹے کے لیے پرائمری اینٹی باڈیز (ڈیلیشن 1:1000) کے ساتھ راتوں رات 4 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ MITF, TYR, TRP-1, TPR-2 اور -ایکٹین کو خرگوش پولی کلونل اینٹی MITF اینٹی باڈی (Abcam, Cambridge, UK) کے ساتھ پتہ چلا۔ گوٹ پولی کلونل اینٹی ٹی وائی آر اینٹی باڈی (سانتا کروز، ڈلاس، ٹی ایکس، امریکہ)؛ اور ماؤس مونوکلونل اینٹی ٹی آر پی-1، اینٹی ٹی آر پی-2 اور اینٹی- -ایکٹین اینٹی باڈیز (سانتا کروز، ڈلاس، ٹی ایکس، یو ایس اے) بالترتیب۔ اس کے بعد، جھلیوں کو ٹی بی ایس ٹی سے کئی بار دھویا گیا۔ اور 1 گھنٹے کے لیے سیکنڈری اینٹی باڈیز (ڈائلیشن 1:2000) کے ساتھ انکیوبیٹڈ، یعنی خرگوش مخالف ماؤس آئی جی جی، ماؤس اینٹی گوٹ آئی جی جی اور بکری اینٹی ماؤس آئی جی جی (سانٹا کروز، ڈلاس، ٹی ایکس، یو ایس اے)، جس کے بعد ٹی بی ایس ٹی کے ساتھ کئی بار دھوئے۔ کیمی ڈاک امیجنگ سسٹم (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کے ساتھ بہتر کیمیلومینیسینس (ECL) ریجنٹ (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ہدف پروٹین کا پتہ لگایا گیا۔ پروٹین بینڈ کی مقدار کا تعین امیج جے سافٹ ویئر (ونڈوز کے لیے ورژن 1.52a؛ NIH، Rockville، MD، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا [28]۔

2.13۔ اعداد و شمار کا تجزیہ مائیکروسافٹ ایکسل 2016 کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا اور تمام تجرباتی نتائج کو تین آزاد پیمائشوں کے اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر پیش کیا گیا۔ طالب علم کے دو نمونوں والے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کنٹرول اور نمونوں کے درمیان فرق کا اندازہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ تغیر کا یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) اور ڈنکن ٹیسٹ Rsoftware (ورژن 3.6.3) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تاکہ ہر ایک موازنہ کی اہمیت کا تعین کیا جا سکے۔ p < 0="" کی="" سطحیں۔{13}}5="" (*)،="" p="">< 0.01="" (**)="" اور="" p=""><0.001 (***)۔="" ارتباط="" کا="" تجزیہ="" prism5.02="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="" usa)="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" کیا="">

3. نتائج

3.1 لیکوریس کے عرق کا براؤننگ انڈیکس

کی براؤننگ کی ڈگریلیکوریسنچوڑ کو شکل 1a میں دکھایا گیا ہے۔ ان نتائج نے اس بات کی تصدیق کی کہ ہیٹ ٹریٹڈ ایکسٹریکٹ (WH-130, 0.965 ± 0۔{8}}25 AU [جذب یونٹس]) میں غیر گرم کیے جانے والے براؤننگ انڈیکس کی قدریں بہت زیادہ تھیں۔ اقتباس (WC, 0.758 ± 0.005 AU)۔ ہم توقع کرتے ہیں کہ تھرمل پروسیسنگ WH-130 میں میلانوڈین کی تشکیل کو بڑھاتی ہے اور یہ تبدیلی مختلف حیاتیاتی سرگرمیوں سے منسلک ہو سکتی ہے۔

3.2 Licorice کے نچوڑ کا کل فینولک مواد (TPC)

شکل 1b کا TPC دکھاتا ہے۔لیکوریسنچوڑ ہمیں WC اور WH{{0}} کے درمیان TPC میں فرق ملا، جیسا کہ WC کا TPC 12 تھا۔{8}}93 ± 0.061 mg GAE/g ایکسٹریکٹ، جبکہ WH-130 میں ایک TPC 14.098 ± 0.781 mg GAE/g ایکسٹریکٹ۔ ہیٹ ٹریٹمنٹ نے لیکوریس ایکسٹریکٹ کی TPC میں اضافہ کیا۔

3.3 لیکوریس کے عرقوں کی ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی

دیاینٹی آکسیڈینٹکی سرگرمیلیکوریسنچوڑ کو شکل 1c، d میں پیش کیا گیا ہے۔ WH-130 اقتباس (6086 ± 0.304 mg TEAC/gextract) کے مقابلے میں WC اقتباس (3.542) کے لیے ABTS پلس ریڈیکل سکیونگنگ کی صلاحیت زیادہ تھی۔ ± 0.093 ملی گرام TEAC/g ایکسٹریکٹ)۔ ڈی پی پی ایچ پرکھ میں، اسی طرح کا رجحان دیکھا گیا۔ WH-130 (7.442 ± 0.292 mg TEAC/g اقتباس) WC اقتباس (4.033 ± 0.160 mg TEAC/gextract) سے زیادہ DPPH ریڈیکل سکیونگنگ سرگرمی ظاہر کرتا ہے۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ گرم کرنے سے عرقوں کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں اضافہ ہو سکتا ہے۔

3.4 Licorice کے عرقوں کا Isoliquiritigenin مواد

نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ گرمی کے علاج کے بعد ڈبلیو سی کے آئی ایس ایل مواد میں نمایاں اضافہ ہوا ہے (ٹیبل 2، شکل 2)، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ تھرمل پروسیسنگ اس کے مواد کو متاثر کر سکتی ہے۔اینٹی آکسیڈینٹاوراینٹی میلانوجینکمرکب

cistanche tubolosa

3.5 سیل وابستگی

جیسا کہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے،لیکوریساقتباسات نے IBMX کے زیر علاج کنٹرول سے متعلق 50 یا 100 µg/mL پر سیل کی عملداری کو متاثر نہیں کیا۔ تمام عرقوں کے 50 اور 100 µg/mL علاج میں، سیل کی قابل عملیت 100 فیصد سے زیادہ رہی۔ لہٰذا، مزید تجربات 100 µg/mL تک لیکوریس ایکسٹریکٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔

3.6۔ B16F10 میلانوما سیلز میں میلانین کی پیداوار پر لیکوریس کے عرق کے اثرات

B16F10 خلیوں کا رنگت اور میلانین مواد شکل 4a،b میں دکھایا گیا ہے۔ B16F10 خلیوں کے میلانین مواد 3 تک بڑھ گئے ہیں۔ WC اور WH-130 نے IBMX-علاج شدہ گروپ (شکل 4a,b) کے مقابلے میں پگمنٹیشن اور میلانین مواد میں نمایاں کمی ظاہر کی۔ WC اورWH{{10}} دونوں نے KA-علاج شدہ خلیات سے کم میلانین مواد کی نمائش کی۔ B16F10 خلیوں میں میلانین کی ترکیب کا روکنے والا اثر WH-130 کے ساتھ علاج کیا گیا WC سے زیادہ تھا۔ 100 µg/mL WC اور WH-130 کے ساتھ علاج کے بعد موجود میلانین کی مقدار تقریباً 0۔{18}}گنا اور 0۔{20}}گنا، بالترتیب IBMX-علاج شدہ سطح کے group.ISL (10 µM) اور KA (100 µg/mL) نے میلانین کی پیداوار کو 059-فولڈ اور 067-گنا، بالترتیب IBMX-علاج شدہ خلیات میں سطح کے حساب سے۔

یہ نتیجہ ظاہر کرتا ہے کہ گرمی کا علاج کیا گیا ہے۔لیکوریسایکسٹریکٹ (WH-130) میلانین کی پیداوار کو غیر گرم کرنے والے عرق (WC) سے زیادہ مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔ مزید برآں، ہم نے مشاہدہ کیا کہ WH-130 ایکسٹریکٹ کے ساتھ 25، 50 اور 100 µg/mL (شکل 4c) کے علاج کے نتیجے میں B16F10 میلانوما سیلز کے میلانین مواد میں ارتکاز پر منحصر کمی واقع ہوئی۔ ایک ساتھ، یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ حرارتی نظام میں بہتری آئی ہے۔اینٹی میلانوجینکlicorice نچوڑ کی سرگرمی.

3.7 Tyrosinase سرگرمی پر Licorice ارک کے اثرات

3.7.1 مشروم ٹائروسینیز کی سرگرمی

کا اثرلیکوریسمشروم TYR سرگرمی پر نچوڑ تصویر 5a میں دکھایا گیا ہے۔ ہم نے تصدیق کی کہ سبسٹریٹس کے ذریعے مشروم TYR کے آکسیکرن پر نچوڑ (WC اور WH-130) کا اثر سیل فری حالات میں ہوا ہے۔ 50 µg/mL پر، WC ایکسٹریکٹ انبیبیٹیڈنزیم کی سرگرمی کو 81.33 فیصد، جبکہ WH-130 نے TYR سرگرمی کو EClevel کے 65.95 فیصد تک دبا دیا۔ دریں اثنا، کوجک ایسڈ (KA)، ایک TYR روکنے والا، EC سطح کے 47.09 فیصد تک انزائم کی سرگرمی کو روکتا ہے۔ TYR سرگرمی کی روک تھام گرمی سے علاج شدہ لائکورائس (WH-130) میں غیر گرم لائیکوریس (WC) کے مقابلے زیادہ تھی۔

3.7.2 سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی

جیسا کہ شکل 5b میں دکھایا گیا ہے، IBMX سے علاج شدہ خلیوں کی TYR سرگرمی غیر علاج شدہ کنٹرول (100 فیصد) کی نسبت 233 فیصد تک بڑھ گئی۔ WC نے IBMX کے زیر علاج گروپ کے مقابلے TYR کی سرگرمی کو 82.17 فیصد تک کم کر دیا۔ WH-130 ایکسٹریکٹ نے سیلولر TYR کی سرگرمی کو IBMX سے علاج شدہ خلیوں کے مقابلے میں 59.88 فیصد تک روک دیا۔ KA نے سیلولر TYR سرگرمی کو IBMX سے علاج شدہ خلیوں کی سطح کے 74.07 فیصد تک کم کر دیا۔ ایک ساتھ، یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ لیکوریس کے نچوڑ (WC اور WH-130) TYR سرگرمی کو دباتے ہیں اور WH-130 میں WC اور KA کے مقابلے زیادہ طاقتور TYR روکنے والی سرگرمی ہے۔

اگلا، ہم نے TPC، ISL مواد کے درمیان ارتباط کی چھان بین کی۔اینٹی آکسیڈینٹسرگرمی اور اینٹی میلانوجینک سرگرمی (ٹیبل 3)۔ TPC مثبت طور پر ISL مواد (0.827) کے ساتھ، نیز ABTS پلس اور DPPH ریڈیکل اسکیوینگ سرگرمیوں (0.886 اور 0.896، بالترتیب) کے ساتھ منسلک تھا، جبکہ TPC کا میلانین مواد (–0.859) کے ساتھ الٹا تعلق تھا۔ آئی ایس ایل کا مواد مثبت طور پر ABTS پلس اور DPPH ریڈیکل اسکیوینجنگ سرگرمیوں (0.977 اور 0.985، بالترتیب) کے ساتھ منسلک تھا، جبکہ ISL کا مواد الٹا TYRactivity (–0) کے ساتھ منسلک تھا۔ 834) اور میلانین مواد (–0.995)۔ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں (ABTS پلس اور DPPH) TYR سرگرمی (–{{20}.879 اور –0.856، بالترتیب)) اور میلانین مواد (–0) کے ساتھ الٹا تعلق رکھتی تھیں۔ بالترتیب 974 اور -0.984)۔ ان نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ فینولک مرکبات جیسے کہ لیکوریس میں موجود آئی ایس ایل اینٹی آکسیڈنٹ کے ساتھ قریبی تعلق رکھتے ہیں اوراینٹی میلانوجینکlicorice ارک کی سرگرمیاں.

3.8۔ میلانوجینیسیس سے متعلق جینز کے ایم آر این اے اظہار پر لیکوریس کے عرق کے اثرات

ہم نے B16F10 خلیوں میں melanogenesis سے متعلق جینز کے اظہار کی جانچ کی تاکہ melanogenesis پر licorice extracts کے اثرات کو واضح کیا جا سکے۔ WC اور WH-130 دونوں نے MITF، TYR، TRP-1 اور TRP-2 کے mRNA اظہار کو دبا دیا (شکل 6)۔ WC نے MITF، TYR، TRP-1 اور TRP-2 کی سطح 0 کے mRNA اظہار کو روک دیا۔{10}}گنا، 0۔ {12}} فولڈ، 0۔{14}} فولڈ اور 0۔{16}} فولڈ، بالترتیب، IBMX کے زیر علاج سیلز میں۔ WH-130 نے MITF، TYR، TRP-1 اور TRP{{20} سے 0 کے mRNA اظہار کو روک دیا۔{22}}گنا، {{33} }}۔ WH{{30}} اقتباس کا mRNA اظہار پر WC اقتباس سے زیادہ مضبوط روک تھام کا اثر تھا۔ ISL نے MITF, TYR, TRP-1 اور TRP-2 (042-fold, 059-fold, 068-fold کے اظہار کو بھی دبا دیا۔ اور 0۔ WH-130-علاج شدہ گروپ میں، میلانوجینیسیس سے متعلق جینوں کے mRNA اظہار میں کمی کی حد WC-علاج شدہ گروپ کی نسبت زیادہ تھی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہلیکوریسعرق میلانوجینیسیس سے متعلقہ جین کی نقل کو دبانے کے ذریعے میلانوجینیسیس کو روکتا ہے اور گرمی کا علاج بہتر کرتا ہے۔اینٹی میلانوجینکlicorice نچوڑ کی سرگرمی.

3.9 میلانوجینیسیس سے متعلقہ جینز کے پروٹین اظہار پر لیکوریس کے عرق کے اثرات

جیسا کہ شکل 7b میں دکھایا گیا ہے، WC اور WH-130 کے ساتھ علاج نے MITF، TYR، TRP-1 اور TRP-2 کے پروٹین اظہار کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا۔ MITF، TYR،TRP-1 اور TRP-2 کے اظہار کی سطحیں WC (0.79-fold, 0 کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں دبا دی گئی تھیں۔{9} }} فولڈ، {{10}}۔{11}} فولڈ اور 0۔{13}} فولڈ، بالترتیب، IBMX سے علاج شدہ سیلز سے متعلق)۔ WH-130 نے MITF، TYR، TRP-1 اور TRP-2 ({{20}} کے پروٹین ایکسپریشن کی سطح کو کم دکھایا۔{19}}گنا، {{24} }}۔ . ISL نے MITF، TYR اور TRP-2 (076-fold, 083-fold and 0.41-fold, بالترتیب, IBMX-treated کے مقابلے میں پروٹین کے اظہار کی سطح کو کم کیا خلیات)۔ WH-130 نے میلانوجینیسیس سے متعلق جینز کے پروٹین اظہار کو WC سے زیادہ مضبوطی سے دبایا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہلیکوریسعرق میلانوجینیسیس سے متعلق جینوں کے ترجمے کے میلانوجینیسیس ویاسپریشن کو روکتا ہے اور گرمی کا علاج بہتر کرتا ہے۔اینٹی میلانوجینکlicorice نچوڑ کی سرگرمی.

جلد کو سفید کرنے والا cistanche پاؤڈر

4. بحث

اس مطالعہ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ گرمی کا علاجلیکوریسTPC، اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی، اور کو متاثر کرتا ہے۔اینٹی میلانوجینکسرگرمی WH-130 میں WC سے زیادہ براؤننگ انڈیکس اور TPC قدریں تھیں۔ درجہ حرارت اور دباؤ سمیت پروسیسنگ کے حالات نمونے کے اجزاء کو متاثر کرتے ہیں۔ [29]۔ حرارت میلارڈ کے رد عمل کو فروغ دے سکتی ہے، جو میلانوڈین کی پیداوار سے منسلک ہیں [23]۔ Melanoidins کے کچھ حیاتیاتی اثرات ہوتے ہیں، بشمولاینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ٹیومر، اور اینٹی ہائپرٹینسیس سرگرمیاں، نیز بلڈ شوگر کی ماڈیولیشن [30]۔ یہ مرکبات پولیمیرک بھورے رنگ کے میکرو مالیکیولز ہیں جو میلارڈ ری ایکشن کے ذریعے اعلی درجہ حرارت پر شکر اور امینو ایسڈ کے درمیان تعامل کے ذریعے تشکیل پاتے ہیں [21]۔ اس طرح، گرم نچوڑ میں میلانوائیڈنز جتنا زیادہ ہوگا، براؤننگ انڈیکس اتنا ہی زیادہ ہوگا۔ غیر گرم لائیکورائس ایکسٹریکٹ (WC) کا رنگ ہلکا بھورا دکھائی دیتا تھا، لیکن زیادہ درجہ حرارت (130 ڈگری) کے ساتھ رنگ آہستہ آہستہ گہرا ہوتا جا رہا تھا۔ حرارتی عمل فینولک مرکبات کے کیمیائی ڈھانچے میں کچھ تبدیلیاں بھی لا سکتا ہے اور پودوں کی سیل دیواروں کو توڑنے کا سبب بن سکتا ہے، فینولکس کو جاری کرتا ہے، جس سے اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں ہوتی ہیں [31]۔ اس طرح، گرمی کے علاج کے ساتھ لیکورائس کے نچوڑ کا فینولک مواد بڑھ سکتا ہے [21]۔ پچھلی رپورٹوں سے پتہ چلتا ہے کہ شہد کے گرمی کے علاج سے میلانوڈین کی تشکیل میں اضافہ ہوا، اور بھوری ہونے کی ڈگری اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں اضافے کے ساتھ موافق ہے [24]۔ لہذا، WH-130 نے ABTS پلس اور DPPH ریڈیکل اسکیوینگنگ اسسیس میں WC سے زیادہ اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت ظاہر کی، جو الیکٹران یا ہائیڈروجن ایٹموں کی منتقلی کی صلاحیت کی بنیاد پر نمونوں کی اینٹی ریڈیکل سرگرمیوں کا تعین کرنے کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیے گئے ہیں [32]۔

سب سے زیادہ عام قدرتیاینٹی آکسیڈینٹاور اینٹی میلانوجینک مرکبات فینولک ہیں۔ Tricin اور 9- hydroxyoctadecadienoic acid کو Sorghum bicolor میں اہم phenolic کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، ان اجزاء نے ٹائروسینیز سرگرمی کو روک کر اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی میلانوجینک اثرات دکھائے [19]۔ اس کے علاوہ، p-coumaric acid، Sasa quelpaertensis Nakai کا غیر فعال مرکب، ثابت ہوا ہے کہ یہ مرکب ٹائروسینیز کی سرگرمی کو سختی سے روکتا ہے اور میلانوما خلیوں میں میلانین کی پیداوار کو کم کرتا ہے [27]۔ پچھلی تحقیق کے مطابق، ISL، licorice جڑ [6-8] کے ہائیڈرولیسس پروڈکٹ میں ایک معروف فلیوونائڈ مرکب، TYR سرگرمی، میلانوزوم ٹرانسپورٹ اور میلانین کے انحطاط [10,31] کو روک کر اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی میلانوجینک سرگرمیوں کی نمائش کرتا ہے۔ .لہذا، ہم نے اقتباسات کے ISL مواد اور melanogenesis سے متعلق میکانزم میں ISL کی کارروائی پر توجہ مرکوز کی۔ آئی ایس ایل کو اس کی متعدد حیاتیاتی سرگرمیوں کی وجہ سے بہت سی بیماریوں کے علاج کے ایجنٹ کے طور پر لاگو کیا جاتا ہے، بشمول اینٹی سوزش، اینٹی مائکروبیل، اینٹی آکسیڈیٹیو، اینٹی کینسر، امیونوریگولیٹری، ہیپاٹوپروٹیکٹو اور کارڈیو پروٹیکٹو اثرات [33]۔ اس مطالعہ میں، WC کے مقابلے WH-130 میں اعلی ISL مواد کی پیمائش کی گئی۔ جلد کی ہائپر پگمنٹیشن کا تعلق آکسیڈیٹیو تناؤ سے ہے۔ فری ریڈیکل اسکیوینجرز کو ہائپر پیگمنٹیشن [17,34] کو دبانے میں اہم کردار ادا کرنے کی اطلاع دی گئی ہے۔ ایک ساتھ، یہ نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ لیکورائس کی گرمی کا علاج اس کی بنیاد پرستی سے پاک کرنے والی سرگرمیوں کو بہتر بنا سکتا ہے اوراینٹی میلانوجینکاینٹی آکسیڈینٹ فینولک مرکبات جیسے ISL کی بڑھتی ہوئی سطح کے ذریعے سرگرمیاں۔ پچھلے لٹریچر کے مطابق، لیکوریس میں گلیبرین، گلیبریڈن، گلیبرول، لیکوریٹیگینن (گلیسیریزا یوریلینسس، جی گلبرا) موجود ہیں، جو ٹائروسینیز کی روک تھام کو ظاہر کرتے ہیں۔ لہذا، یہ مرکبات اینٹی میلانوجینک سرگرمیوں پر بھی اثر ڈال سکتے ہیں [10,11,15,35]۔ ان پر مزید مطالعات لیکورائس کے اینٹی میلانوجینک اثرات کو واضح کرنے کے لیے اہم ہیں۔

میلانین کی ترکیب کو TYR، TRP-1، TRP-2 (dopachrome tautomerase) اور MITF (شکل 8) کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔ TYR، ایک تانبے پر مشتمل گلائکوپروٹین، شرح کو محدود کرنے والے اینزائم کے طور پر کام کرتا ہے اور میلانین کی پیداوار میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔ TYR ٹائروسین کے ہائیڈرو آکسیلیشن کو 3،4-ڈائی ہائیڈروکسی فینیلالینین (DOPA) پر اتپریرک کرتا ہے۔ TYR ڈوپا کو ڈوپاکوئنون میں آکسیڈیشن اور ڈوپاکوئنون کو ڈوپاکروم میں تبدیل کرنے کو بھی متحرک کرتا ہے۔ پھر، dopachrome dihydro-indolizine (DHI) یا indole 5،6-quinone-2-carboxylicacid (DHICA) [36–38] میں تبدیل ہو جاتا ہے۔ اس راستے میں، TRP-2 ڈوپاکروم کی DHICA میں تبدیلی کو اتپریرک کرتا ہے، جسے TRP-1 سے آکسائڈائز کیا جاتا ہے تاکہ eumelanin بن سکے۔ MITF ایک مخصوص ٹرانسکرپشن فیکٹر ہے جو TYR، TRP-1 اور TRP-2 اظہار کے بڑے ریگولیٹر کے طور پر melanogenesis میں اہم کردار ادا کرتا ہے (شکل 8) [28,37]۔ melanogenesis کا کیمیائی محرک ہے3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)، جو cAMPsignaling پاتھ وے [13] کے ذریعے TYR کی سرگرمی کو بڑھاتا ہے۔ IBMX سی اے ایم پی فاسفوڈیسٹریس کو روک کر انٹرا سیلولر سی اے ایم پی حراستی میں اضافہ کرتا ہے۔ CAMP کی سطح میں اضافہ پروٹین kinase A (PKA) کو چالو کرتا ہے اور PKA کو چالو کرنے سے CAMP سے متعلق بائنڈنگ پروٹین (CREB) [39] کی سرگرمی اور اظہار میں بہتری آتی ہے۔ CREB MITF پروموٹر سے منسلک ہوتا ہے، جس کی وجہ سے MITF جین ایکسپریشن کو اپ گریجولیشن ہوتا ہے۔ MITF کو چالو کرنا TYR اور TRPs کے اظہار کو فروغ دیتا ہے [13,19]۔ لہذا، MITF کی کمی کا نتیجہ ہائپو پگمنٹیشن میں ہوتا ہے۔

گرم لیکورائس ایکسٹریکٹ (WH-130) نے مشروم TYR اور سیلولر TYR سرگرمی کو غیر گرم لائیکورائس ایکسٹریکٹ (WC) سے زیادہ مؤثر طریقے سے روکا۔ لیکوریس کے عرقوں میں سیلولر TYRactivity کی روک تھام TYR کی کمی کی وجہ سے ہوسکتی ہے۔ یہ نتائج B16F10 میلانوما خلیوں کے میلانین مواد سے منسلک ہیں۔ B16F10 خلیوں میں، WH-130 علاج نے WC علاج سے بہتر IBMX-حوصلہ افزائی میلانین کی پیداوار کو دبایا۔ مزید برآں، WH 130 نے B16F10 خلیات میں میلانوجینیسیس سے متعلق مارکروں (MITF، TYR، TRP-1، TRP-2) کی نقل اور ترجمے کو WC سے زیادہ حد تک کم کر دیا۔ یہ مارکر مجموعی طور پر مجموعی طور پر حصہ ڈال سکتے ہیں۔اینٹی میلانوجینکسرگرمی [40]۔

کی حرارتلیکوریسایکسٹریکٹ نے اینٹی آکسیڈینٹ فینولک مرکبات جیسے ISL کی کثرت میں اضافہ کیا، اور یہ اضافہ اضافہ سے منسلک تھا۔اینٹی آکسیڈینٹسرگرمیاں (ABTS پلس اور DPPH)۔ گرم لیکورائس ایکسٹریکٹ (WH-130) نے بھی TYR کی بڑھتی ہوئی روک تھام کی سرگرمی اور میلانین کی ترکیب میں کمی کی نمائش کی۔ حفاظت کے امکانات کی وجہ سے قدرتی مواد کی ترقی میں ایک نیا رجحان ہے. لیکوریس کا استعمال کاسمیوٹیکل کریموں میں ہائپر پگمنٹیشن [41] کے لیے کیا گیا ہے۔ ہم نے ایک نئے کے طور پر وونگم کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا۔جلد کو سفید کرناکاسمیٹکس میں استعمال کے لیے ایجنٹ اور تصدیق کی کہ گرمی کا علاج اس کی صلاحیت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

Glycyrrhiza uralensis Fischer (licorice) انسانی ڈرمل فائبرو بلاسٹس میں اینٹی آکسیڈینٹ اور UV فوٹو پروٹیکٹو سرگرمیاں رکھتا ہے [22]۔ تاہم، وونگم (لیکورائس) اور دیگر مقامی انواع کے درمیان موازنہ کے مطالعے کو بعد میں کرنے کی ضرورت ہے۔ اس کے علاوہ، وونگم کے غیر شناخت شدہ اجزا، جیسے گلیبرین، گلیبریڈن، پر مزید مطالعات جو کہ اس کے اینٹی میلانوجینک اثر سے وابستہ ہیں، مناسب طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے کرائے جائیں۔ یہ ضروری ہے کہ فینولک مرکبات کے درمیان ہم آہنگی یا مخالفانہ اثرات کی چھان بین کے بعد لیکوریس ایکسٹریکٹ میں اجزاء کے تجزیہ کے بعد [40]۔ یہ جانچنے کے لیے کہ یہ مادے کیسے کام کرتے ہیں۔اینٹی آکسیڈینٹاور اینٹی میلانوجینک میکانزم، ہائیڈروجن ایٹم ٹرانسفر یا سنگل الیکٹران ٹرانسفر سسٹم اور مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز سگنلنگ پاتھ ویز کا جائزہ لیا جانا چاہیے [32,37]۔

5. نتائج

اس مطالعہ میں، ہم نے وونگم کے نچوڑ کی صلاحیت کی چھان بین کی، جو کہ ایک نئی کاشت ہے۔لیکوریس، کی طرحسفید کرناکاسمیٹکس میں استعمال کے لیے ایجنٹ اور ان کی حیاتیاتی سرگرمی پر گرمی کے علاج کا اثر۔ وونگم کے نچوڑ (WC اور WH-130) نے TYR کی سرگرمی کو دبا کر IBMX-حوصلہ افزائی میلانوسائٹس میں اعلی ریڈیکل-سکیونگنگ سرگرمیاں اور میلانین کی ترکیب کو روکا۔ گرمی کے علاج میں اضافہ ہوااینٹی آکسیڈینٹاور وونگم کی میلانجینک مخالف سرگرمیاں۔ نتیجے کے طور پر، WH-130 نے اعلیٰ اینٹی آکسیڈیٹیو اوراینٹی میلانوجینکWC سے زیادہ سرگرمیاں۔ ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ ہیٹ ٹریٹڈ وونگم ایکسٹریکٹ (WH-130) مختلف ڈرمیٹولوجک ہائپر پگمنٹیشن عوارض بشمول بھورے دھبے، فریکلز اور میلاسما میں ممکنہ ایپلی کیشنز کے ساتھ پگمنٹ کو کم کرنے والا ایجنٹ ہے اور یہ ظاہر کرتا ہے کہ تھرمل پروسیسنگ کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ licorice کے مخالف میلانوجینک سرگرمی.

cistanche tubolosa کے فوائد: جلد کو سفید کرنا