اینٹی وائرل زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز ثالثی ہیسپریڈین اور سلیکو کمپریژن اسٹڈی میں اینٹی وائرل فینولکس کے درمیان اینٹی SARS-CoV-2

مزید معلومات کے لیے ای میل کریں۔tina.xiang@wecistanche.com

جنوری 2020 سے Elsevier نے ناول کورونا وائرس COVID-19 پر انگریزی اور مینڈارن میں مفت معلومات کے ساتھ ایک COVID-19 وسائل کا مرکز بنایا ہے۔ COVID-19 ریسورس سینٹر کمپنی کی عوامی خبروں اور معلومات کی ویب سائٹ Elsevier Connect پر میزبانی کرتا ہے۔ Elsevier اس کے ذریعے اپنی تمام COVID-19-متعلقہ تحقیق کو بنانے کی اجازت دیتا ہے جو COVID-19 کے وسائل مرکز پر دستیاب ہے - اس تحقیقی مواد سمیت - فوری طور پر PubMed سنٹرل اور دیگر عوامی فنڈڈ ریپوزٹریز، جیسے WHO میں دستیاب ہے۔ غیر محدود تحقیق کے دوبارہ استعمال اور کسی بھی شکل میں یا کسی بھی طریقے سے اصل ماخذ کے اعتراف کے ساتھ تجزیہ کرنے کے حقوق کے ساتھ COVID ڈیٹا بیس۔ یہ اجازتیں Elsevier کی طرف سے مفت دی جاتی ہیں جب تک کہ COVID-19 وسائل کا مرکز فعال رہتا ہے۔

خلاصہشدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS-CoV-2)، جو کورونا وائرس (COVID-19) کا سبب بنتا ہے، دنیا بھر میں 69,613,607 ملین سے زیادہ انفیکشن اور 1,582,966 سے زیادہ اموات کا ذمہ دار وائرس ہے۔ علاج کے تمام اقدامات اور پروٹوکول کو صرف معاون سمجھا جاتا تھا نہ کہ علاج کرنے والا۔ اس موجودہ کورونا وائرس وبائی مرض کے دوران، روک تھام، علاج اور بحالی میں مدد کے لیے دواسازی یا روایتی تکمیلی اور انٹیگریٹیو ادویات کی تلاش فائدہ مند رہی ہے۔ یہ فائٹو فارماسیوٹیکلز اور نیوٹراسیوٹیکل زیادہ اقتصادی، دستیاب، محفوظ اور کم ضمنی اثرات ہو سکتے ہیں۔ یہ دس فینولک کے سلیکو موازنہ مطالعہ میں ہے۔اینٹی وائرلSARS-CoV-2 کے خلاف ایجنٹوں کے ساتھ ساتھ قدرتی ذرائع سے سب سے زیادہ فعال میٹابولائٹ کو الگ کرنا۔ زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز (ZnO NPs) کو بھی پھر ان میٹابولائٹس کو کم کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا۔ تمام ٹیسٹ شدہ مرکبات نے پیش گوئی کی اینٹی SARS-CoV-2 سرگرمی دکھائی۔Hesperidinسب سے زیادہ ڈاکنگ سکور دکھایا، یہ ہمیں سنتری کے چھلکوں سے الگ کرنے کی طرف لے جاتا ہے اور ہم نے روایتی سپیکٹروسکوپک تجزیہ کے ذریعے اس کی ساخت کی تصدیق کی۔ اس کے علاوہ، ہیسپریڈین زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی ترکیب UV، IR، XRD، اور TEM کی خصوصیت تھی۔ Hesperidin اور ZnO NPs کی وٹرو اینٹی وائرل سرگرمی کو ہیپاٹائٹس اے وائرس کے خلاف RNA وائرس کی ایک مثال کے طور پر جانچا گیا۔ تاہم، ZnO NPs اور hesperidin نے HAV کے خلاف اینٹی وائرل سرگرمی دکھائی لیکن ZnO NPs نے اس سے زیادہ سرگرمی دکھائی۔hesperidin. اس طرح، Hesperidin اور اس کے ثالثی ZnO نینو پارٹیکلز تیار اینٹی وائرل ایجنٹ ہیں، اور SARS-CoV-2 کے خلاف مزید مطالعات کو ممکنہ علاج کے طور پر استعمال کرنے کی ضرورت ہے۔

مطلوبہ الفاظ: SARS-CoV-2 نیوٹراسیوٹیکلز مالیکیولر ڈاکنگ زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز ہیسپریڈین

1. تعارف

موجودہ COVID-19 وبائی بیماری دنیا بھر میں آج تک 69 ملین سے زیادہ انفیکشن اور 1.5 ملین سے زیادہ اموات، 2.3 ملین انفیکشنز اور 55 سے زیادہ،000 افریقہ میں اموات، اور 119 سے زیادہ،{{9} } مصر میں انفیکشن اور 6000 سے زیادہ اموات [1]۔ SARS-CoV-2 سے متاثرہ زیادہ تر افراد میں علامات میں سانس کی ہلکی سے اعتدال پسند بیماری شامل ہوتی ہے جو ڈاکٹر کے مشورے کے بغیر ٹھیک ہو سکتی ہے۔ تاہم، دل کی بیماری، ذیابیطس، دائمی سانس کی بیماری، یا کینسر جیسے دائمی امراض میں مبتلا افراد میں سانس کی شدید علامات پیدا ہونے کا خطرہ زیادہ ہوتا ہے۔ سماجی فاصلہ برقرار رکھنے، ہاتھ دھونے یا الکحل کی جراثیم کشی کے استعمال اور چہرے کو چھونے سے COVID-19 کی منتقلی کو روکا جاتا ہے۔ جہاں یہ شخص کی ناک سے تھوک کی بوندوں کے ذریعے منتقل ہوتا ہے جب ایک متاثرہ فرد کھانستا ہے یا چھینکتا ہے [1]۔ تمام اقدامات اور پروٹوکول کو صرف معاون سمجھا جاتا تھا لیکن علاج معالجہ نہیں تھا۔ تاہم، ممکنہ دوائیوں کا جائزہ لینے والے بہت سے موجودہ کلینیکل ٹرائلز ہیں [1]۔ COVID-19 کو عالمی وبا کے طور پر دعویٰ کرنے کے بعد سے، روک تھام، علاج اور بحالی میں مدد کے لیے دواسازی یا روایتی، تکمیلی، اور انٹیگریٹیو دوائیوں کی تلاش کی ضرورت تھی [2]۔

قدرتی مصنوعات مرکبات کے غیر استعمال شدہ ذرائع ہیں جو مختلف بیماریوں کی روک تھام اور علاج میں استعمال کی جا سکتی ہیں۔ اس کے علاوہ، قدرتی مرکبات اکثر کئی بیماریوں کے خلاف سستی اور محفوظ دوا کے امیدوار کے طور پر کام کرتے ہیں، بہت سے غذائی اجزاء کے بارے میں بتایا گیا ہے کہاینٹی وائرل سرگرمیاں[3]۔ گزشتہ دہائی میں، نئے کی تعداداینٹی وائرل ادویاتقدرتی ذرائع سے حاصل کی جانے والی اشیاء میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ قدرتی مصنوعات اینٹی وائرل ادویات کی دریافت میں مدد کرتی ہیں، براہ راست یا بالواسطہ [4]۔

لہذا، کمپیوٹیشنل اسکریننگ کے طریقوں جیسے مالیکیولر ڈاکنگ کے ذریعے قدرتی کمپاؤنڈ لائبریریوں کی اسکریننگ منشیات کی نشوونما میں وقت اور پیسہ دونوں بچا سکتی ہے [3]

دوسری طرف، Znic (Zn) پر مشتمل مرکبات نے دکھایا ہے۔اینٹی وائرل خصوصیاتاس طرح کے جسمانی عمل کے مطابق متعدد وائرسوں کی طرف جیسے وائرس کا لگاؤ، وائرس انفیکشن، اور uncoating. وائرل پروٹیز اور پولیمریز [5] کی روک تھام کے علاوہ۔ عام طور پر، Zn ایک ضروری عنصر ہے جو ہمارے جسم کے ٹشوز جیسے کہ پٹھوں، دماغ، جلد، ہڈی میں پایا جاتا ہے۔ یہ میٹابولزم اور نیوکلک ایسڈ اور پروٹین بائیو سنتھیسس میں شامل مختلف انزائم سسٹمز کا ایک لازمی جزو بھی ہے [5]۔

واضح رہے کہ ZnO NPs جسم کی طرف سے زنک سے زیادہ آسانی سے جذب ہو جاتے ہیں۔ ZnO NPs فی الحال کھانے کی صنعت میں بطور اضافی اور پیکیجنگ میں استعمال ہوتے ہیں۔ مزید برآں، ZnO کو امریکی فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن نے محفوظ مادہ کے طور پر درجہ بندی کیا تھا۔ لہذا، ZnO NPs بائیو میڈیکل ایپلی کیشنز میں استعمال کے لیے پرکشش ہیں۔ ZnO NPs کی خصوصیات ان کی کم اقتصادی لاگت اور کم زہریلا ہے، لہذا، ZnO NPs کو بائیو میڈیکل ایپلی کیشنز کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا جا سکتا ہے جیسا کہ اینٹی بیکٹیریل، اینٹی کینسر، اینٹی ذیابیطس، اینٹی انفلامیٹری، منشیات کی ترسیل، اور زخم کی شفایابی [6]۔

Zn پر مشتمل مرکبات کو حال ہی میں اینٹی SARS-CoV-2 سرگرمی ظاہر کرنے کی اطلاع دی گئی تھی [7] اس طرح، Zn پر مشتمل دوائیں عام طور پر COVID-19 تحفظ کے پروٹوکول میں تجویز کی جاتی ہیں۔ نتیجتاً، ZnO NPs کی سبز ترکیب خاص توجہ کے لائق ہے۔

اس کام میں، SARS CoV-2 مین پروٹیز (Mpro) کے خلاف اینٹی وائرل سرگرمی کو دریافت کرنے کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والے دواؤں کے پودوں اور کھانے کی اشیاء (نیوٹراسیوٹیکلز) سے متعدد فائٹو فارماسیوٹیکل فینولک مرکبات سلیکو مالیکیولر اسٹڈی سے گزرتے ہیں، اور تجرباتی طور پر سب سے زیادہ ڈاکنگ سکور مرکب ہیپاٹائٹس اے وائرس (HAV) کے خلاف اس کے ثالثی ZnO نینو پارٹیکلز کے ساتھ ٹیسٹ کیا جائے گا، جو SARS− COV- 2 سے ملتا جلتا ایک RNA وائرس ہے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 مالیکیولر ڈاکنگ

مین پروٹیز (Mpro) ایک اہم انزائم ہے جسے کورونا وائرس جینوم کے ذریعے انکوڈ کیا گیا ہے، جو وائرس کی نقل اور ٹرانسکرپشن کے عمل میں ایک ضروری کردار کے ساتھ ہے، جو اسے SARS-CoV-2 کے لیے ایک مناسب منشیات کا ہدف بناتا ہے۔ منتخب پولی فینولک مرکبات جیسے روٹین، کوریلاگین، ڈائیوسمین، مائریسیٹین-3-O-xylosyl- (1→2)-rhamnoside، epigallocatechin-3-O-gallate، کی روک تھام کے طریقہ کار کو ظاہر کرنے کے لیےhesperidin, lyoniresinol, myricetin, naringenin, and quercetin 3-O-glucuronide بمقابلہ SARS-CoV-2 Mpro (6lu7) [8] کے کرسٹل ڈھانچے جو 2.1 Aᵒ کے ریزولوشن کے ساتھ استعمال کیے گئے تھے۔ یہ سلیکو مالیکیولر ڈاکنگ میں استعمال ہوتا تھا۔ یہ پروٹین دو پولی پیپٹائڈس پر مشتمل ہے جسے پروٹومر A اور B کہا جاتا ہے۔ اس ڈائمر میں دو گنا محور کے ساتھ کرسٹالوگرافک ہم آہنگی ہے۔ یہ تین ڈومینز پر مشتمل ہے؛ ڈومین I (اوشیشوں 8–101)، ڈومین II (اوشیشوں 102–184) ایک متوازی - شیٹ کی ساخت کے ساتھ، اور ڈومین III (اوشیشوں 201–303) میں پانچ ہیلائسز ہیں جو متوازی کروی کلسٹرز کے طور پر ترتیب دی گئی ہیں۔ جہاں ڈومین III ڈومین II سے ایک لمبے لوپ ریجن (اوشیشوں 185–200) کے ذریعے منسلک ہوتا ہے۔ SARS-CoV-2, Mpro میں Cys-His مل کر کیٹلیٹک سرگرمی ہے، جہاں سبسٹریٹ بائنڈنگ سائٹ ڈومین I اور ڈومین II کے درمیان ایک درار میں واقع ہے [8] جیسا کہ تصویر 1 میں ہے۔ موجودہ مطالعہ میں ، مالیکیولر ڈاکنگ کے طریقہ کار کو سوئس ڈاک سروس [9] کے ذریعہ انجام دیا گیا تھا۔ EADock DSS کا استعمال کرتے ہوئے، جو بلائنڈ ڈاکنگ کرتا ہے اور اس کی CHARMM توانائیوں کا اندازہ ایک گرڈ پر کیا گیا جہاں سب سے زیادہ سازگار توانائیوں کا تخمینہ FACTS اور کلسٹرڈ کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ ان جھرمٹوں کا تصور کیا جا سکتا ہے اور Chimera کا استعمال کرتے ہوئے تشریح کی جا سکتی ہے جیسا کہ ادب میں رپورٹ کیا گیا ہے [10]۔

2.2 پلانٹ کا مواد، نکالنا، اور تنہائی

سنتری کے چھلکے (500 گرام) مقامی جوس فیکٹری سے خریدے گئے تھے۔ نارنجی کے چھلکے (200 گرام) 2 L گرم پانی کے ساتھ نکالے گئے جب تک کہ تھکن ختم نہ ہو۔ نچوڑ کو فلٹر کیا گیا تھا اور ایک خلا کے نیچے زیادہ مرتکز ہونے کے لئے بخارات بنایا گیا تھا۔ پانی کے نچوڑ کو CH2Cl2 کے ذریعہ تقسیم کیا گیا تھا جس کے بعد بٹنول تھا۔ بٹانول ذیلی فرکشن واٹ مین فلٹر پیپر شیٹس 3 MM پر BAW کو ایلیونٹ [12,11] کے طور پر استعمال کرتے ہوئے الٹرا وایلیٹ (UV) روشنی کے تحت ایک بڑا گہرا جامنی رنگ کا بینڈ حاصل کرنے کے لیے لگایا گیا تھا۔ گہرے جامنی رنگ کے بینڈ کو الگ تھلگ کیا گیا اور میتھانول میں مکس کیا گیا، پھر گھومنے والے بخارات کا استعمال کرتے ہوئے ویکیوم کے نیچے بخارات بن گئے۔ خشک مواد کو EtOH/H2O (1:1) کا استعمال کرتے ہوئے Sephadex LH -20 کالم پر 120 ملی گرام حاصل کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔hesperidin.

2.3 جوہری مقناطیسی گونج (NMR)

Bruker Avance III، 400 MHz NMR سپیکٹرومیٹر، اور 13C NMR کے لیے 100 MHz پر 1H-نیوکلیئر مقناطیسی گونج (NMR) سپیکٹرا ریکارڈ کیا گیا۔ 1H کیمیکل شفٹوں (δ) کو پی پی ایم میں ماپا گیا، TMS اور 13C-NMR کیمیکل شفٹوں کو dimethyl سلفوکسائڈ-d6 میں اور 39.5 کا اضافہ کرکے TMS اسکیل میں تبدیل کیا گیا۔

2.4 زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی ترکیب (ZnO NPs)

500 ملی گرام زنک ایسیٹیٹ کے ساتھ 50 ملی لیٹر دو آست پانی میں تحلیل کیا جاتا ہے اور ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں 20 منٹ تک گرم کیا جاتا ہے۔ اس کے بعد امونیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے پانچ قطرے پی ایچ کو 12 تک بڑھانے کے ردعمل میں شامل کیے گئے، جہاں ایک ZnO NPs precipitate بنتا ہے۔ ZnO NPs میں زنک ایسیٹیٹ کی مکمل کمی کے لیے مرکب کو آدھے گھنٹے کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ تشکیل شدہ پریپیٹیٹ کو 8000 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا، اس کے بعد دو بار دو بار پانی سے آست پانی سے دھویا گیا تھا، اور دو بار ایتھنول سے دھویا گیا تھا تاکہ منجمد خشک ہونے پر ZnO NPs کے سفید چھرے نکل سکیں۔

2.5 دھاتی نینو پارٹیکلز کی خصوصیت

2.5.1 UV-vis اسپیکٹرل تجزیہ

ZnO NPs کی تیاریوں کی جانچ UV سپیکٹرو فوٹومیٹر، Shimadzu، UV-1601 (Shimadzu Corporation، Japan) کے ذریعے کی گئی۔ UV سپیکٹرا 200-400 nm کے درمیان ریکارڈ کیا گیا۔

2.5.2 FT-IR تجزیہ

4000 - 400 cm− 1 کی حد میں FTIR 6100 اسپیکٹومیٹر (Jasco, Japan) کا استعمال کرتے ہوئے ترکیب شدہ زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز اور hesperidin کمپاؤنڈ کے فنکشنل گروپس کی خصوصیات تھیں۔

2.5.3 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (TEM)

ہیسپریڈین کے ذریعہ ثالثی شدہ ZnO NPs کی شکل اور ذرہ کا سائز TEM (JEOL-JEM-1011، جاپان) کے ذریعہ طے کیا گیا تھا۔ نینو پارٹیکلز سسپنشن کے قطرے کاربن لیپت تانبے کے گرڈ پر رکھے گئے تھے اور TEM امیج کو ریکارڈ کرنے سے پہلے سالوینٹس کو کمرے کے درجہ حرارت پر بخارات بنا دیا گیا تھا۔

2.5.4 ایکس رے پھیلاؤ (XRD)

طول موج 1d706 کی Cu K تابکاری کا استعمال کرتے ہوئے PANLYTICAL X رے diffractometer کے ساتھ ریکارڈ کیا گیا ZnO NPs ایکس رے ڈفریکشن پیٹرن؛ اسکین رینج 21d703 میں =0.1541 nm؛=20− 70∘۔

2.6۔ اینٹی وائرل سرگرمی کا اندازہ

اینٹی وائرل اسکریننگ ریجنل سینٹر فار مائکولوجی اینڈ بائیو ٹیکنالوجی (RCMB، الازہر یونیورسٹی، قاہرہ، مصر) میں تختی کی روک تھام پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔

2.6.1 ممالیہ سیل لائن

افریقی سبز بندر کے گردے سے حاصل کردہ ویرو سیل امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (اے ٹی سی سی، ماناساس، وی اے، یو ایس اے) سے حاصل کیے گئے تھے۔

ویرو سیلز کو Dulbecco کے ترمیم شدہ ایگلز میڈیم (DMEM) میں 10 فیصد ہیٹ ان ایکٹیویٹڈ فیٹل بوائن سیرم (FBS)، HEPES بفر، 1 فیصد L-glutamine، اور 50 ug/mL gentamycin کے ساتھ ضمیمہ میں پھیلایا گیا تھا۔ تمام خلیوں کو 5 فیصد CO2 کے ساتھ مرطوب ماحول میں 37 ◦C پر کلچر کیا گیا تھا اور 7 دنوں کے لئے دو بار ذیلی ثقافتی کی گئی تھی [14]۔

2.6.2 سائٹوٹوکسٹی کی تشخیص

ایمپلانٹیشن کے 24 گھنٹے کے بعد ہیسپریڈین اور ZnO NPs کو شامل کیا گیا۔ آزمائشی نمونوں کے سیریل دو گنا کم کرنے (3000 ug/mL سے 2 ug/mL تک) کو کنفلوئنٹ سیل monolayers میں شامل کیا گیا تھا جو 96-کنویں، چپٹی نیچے والی مائکرو ٹائٹر پلیٹوں (فالکن، جرسی، NJ، USA) میں تقسیم کیے گئے تھے۔ ) ملٹی چینل پائپیٹ کا استعمال کرتے ہوئے. مائکرو ٹائٹر پلیٹوں کو 2 دن کی مدت کے لئے 5 فیصد CO2 کے ساتھ ایک مرطوب انکیوبیٹر میں 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ تفتیشی نمونوں کی ہر حراستی کے لئے تین کنویں استعمال کیے گئے تھے۔ کنٹرول سیلز بغیر ٹیسٹ کے نمونوں کے اور DMSO کے ساتھ یا اس کے بغیر لگائے گئے تھے۔

انکیوبیشن پیریڈ کے بعد، قابل عمل سیل کی پیداوار کا تعین ایم ٹی ٹی کلرومیٹرک پرکھ [15] کے ذریعے کیا گیا تھا۔ زندہ بچ جانے والے خلیوں اور جانچے گئے نمونوں کے ارتکاز کے درمیان تعلق کو مخصوص مرکبات کے ساتھ علاج کے بعد ویرو سیل لائن کے بقا کے منحنی خطوط حاصل کرنے کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ 50 فیصد سائٹوٹوکسک ارتکاز (CC50)، 50 فیصد برقرار خلیات میں زہریلے اثرات پیدا کرنے کے لیے درکار ارتکاز کا تخمینہ GraphPad Prism سافٹ ویئر (San Diego, CA. USA) کا استعمال کرتے ہوئے ہر ارتکاز کے لیے خوراک کے جوابی وکر کے گرافک پلاٹوں سے لگایا گیا تھا۔ ہر hesperidin اور ZnO NPs کی زیادہ سے زیادہ غیر زہریلے ارتکاز [MNTC] کا تعین کیا گیا اور مزید حیاتیاتی مطالعات کے لیے استعمال کیا گیا۔

2.6.3 وائرس کا پھیلاؤ

HAV کا cytopathogenic HAV HM175 سٹرین (ATCC VR-1402) confluent Vero خلیات میں پھیلایا گیا اور پرکھا گیا [16]۔ متعدی وائرسوں کی گنتی 50 فیصد ٹشو کلچر کی متعدی خوراک کے ساتھ آٹھ کنویں فی ڈیلیشن اور 20 μL انوکولم فی کنواں Spearman-Karber طریقہ استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی [17]۔

3. نتائج اور مباحثہ

دس نیوٹراسیوٹیکل فینولک مرکبات کو ان کی دستیابی کے مطابق منتخب کیا گیا اور قدرتی غذائیت سے بھرپور خوراک کے ذرائع سے حاصل کردہ فارماسیوٹیکل خوراک کی شکل کے طور پر پھیلایا گیا۔

یہ نیوٹراسیوٹیکلز ڈائیوسمین، روٹین، نارنگینن، کوئرسیٹن 3-اوگلوکورونائیڈ، مائریسیٹین 3-O-xylosyl-(1→2)-rhamnoside، myricetin، epigallocatechin-3-O-gallate، corilagin اور lyoniresinol. Hesperidin، diosmin، اور rutin بڑے پیمانے پر دواسازی کی دکانوں میں مختلف تجارتی ناموں کے تحت دستیاب ہیں اور مختلف قدرتی غذائیت سے بھرپور غذاؤں سے حاصل کیے جا سکتے ہیں جن میں اینٹی وائرل خصوصیات کی اطلاع دی گئی ہے، مثال کے طور پر، لیموں کے چھلکوں سے ہیسپریڈین کے بارے میں بتایا گیا ہے کہاینٹی وائرل سرگرمی[18]۔ سلیکو اسکریننگ کی بنیاد پر ہیسپریڈن کی SARS-CoV-2 سپائیک اور ACE2 ریسیپٹرز کے درمیان تعامل کی جگہ کو نشانہ بنانے کی بھی پیشین گوئی کی گئی تھی، اس طرح انسانی پھیپھڑوں کے خلیوں میں وائرس کے داخلے کو روکتا ہے۔ لہٰذا، ہیسپریڈین کووڈ-19 [19] کے خلاف ایک امید افزا دوا ثابت ہو سکتی ہے۔

اس کے علاوہ، لیموں کے چھلکے سے نارنگینن کو زیکا وائرس کے خلاف ایک اینٹی وائرل ایجنٹ کے طور پر رپورٹ کیا گیا تھا [20]، روٹین [21] نے اینٹی وائرل [19] کے طور پر اہم نتائج دکھائے تھے۔ سبز چائے کی ایپیگالوکیٹچن-3-او-گیلیٹ میں ہوتی ہے۔اینٹی وائرل اثراتڈی این اے اور آر این اے وائرس کی ایک بڑی تعداد کے خلاف [22]۔ Corilagin HCV کی نقل کو روک کر اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو ماڈیول کر کے جگر کے نقصان کو روکتا ہے [23]۔ اینٹی ایچ آئی وی سرگرمی مائریسیٹین اور اس کے گلائکوسیلیٹڈ ڈیریویٹوز [24] کے لیے رپورٹ کی گئی ہے۔ اس کے علاوہ، کئی lignans کے ہونے کی اطلاع ملی ہے۔اینٹی وائرلخواص [25]۔

3.1 مالیکیولر ڈاکنگ

موجودہ تحقیق میں، بنیادی پروٹیز COVID-19 کی روک تھام کے طریقہ کار سے متعلق تجرباتی نتائج کی تشریح اور حمایت کرنے کی کوشش کی گئی۔ سوئس ڈاک سرور کا استعمال کرتے ہوئے دس پولی فینولک مرکبات ڈوک کیے گئے تھے، جہاں ان پولی فینولز پر رسیپٹر پر مبنی نقطہ نظر کا اطلاق کیا گیا تھا۔ Covid-19 protease 6lu7 کا کرسٹل ڈھانچہ، جو دل کی شکل اختیار کرتا ہے، جس میں دو ڈائمر ایک جیسی سبونائٹس اور دو فعال سائٹس ہیں۔ ایک وسیع اسپیکٹرم روکنے والے کو پروجنیٹر بیٹ کورونا وائرس کی فعال سائٹ His 41 اور Cys 148 کو نشانہ بنانا چاہیے، جیسا کہ PDB انٹری 4yoi میں ہے۔ اس مطالعے نے مالیکیولر ڈاکنگ (تصویر 2) کے ذریعے کرسٹل ڈھانچے 6lu7 میں فینولک مرکبات کے بائنڈنگ موڈ کو واضح کیا۔ ڈاکنگ اسٹڈی نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ ہیسپریڈین ٹی ایچ آر 25، ایل ای یو 27، ہیز 41، اور گلائی 143 باقیات کے ساتھ الیکٹرو اسٹاٹک تعاملات تشکیل دے سکتا ہے جبکہ ٹی وائی آر 118 کے ساتھ پائی اسٹیکنگ تعامل تشکیل دے سکتا ہے جیسا کہ جدول 1 میں درج ہے۔

زیادہ تر پولی فینولک مرکبات نے ڈومین II، III (اوشیشوں 185–200) اور ڈومین I کے درمیان درار کے علاقے میں روکی سرگرمی دکھائی ہے جیسا کہ تصویر 2 میں دیکھا گیا ہے جبکہ جدول 1 میں پولی فینولک مرکبات کو ان کی پابند توانائیوں کے مطابق درج کیا گیا تھا۔ RMSD کا مقامی بائنڈنگ موڈ سے تعلق (مکمل فٹنس (نیلے، بائیں X-axis)) اور توانائی (سادہ فٹنس (سرخ، دائیں y-axis)) کو تصویر A، (سپلائی فائل) میں دکھایا گیا ہے۔ . ہیسپریڈین کے لیے ڈاکنگ موڈ میں دکھایا گیا تھا (تصویر B برائے SARS-CoV-2 Mpro اور Fig. C برائے HAV 3C پروٹینیز [26]، 2HAL کرسٹل ڈھانچہ)، myricetin (Fig. D,1,2)، diosmin (تصویر E 1,2)، epigallocatechin-3-O-gallate (Figs F1,2)، rutin (Figs G1,2)، quercetin 3-O-glucuronide (Figs H 1,2)، corilagin (Figs I1,2)، myricetin (Figs J1,2)، naringenin (Figs L1,2) اور lyoniresinol (Figs M1,2)، ضمنی فائل میں۔

3.2 ہیسپریڈین کی تنہائی اور شناخت

جیسا کہ ہیسپریڈین نے سب سے زیادہ ڈاکنگ سکور دکھایا، اس کے ساتھ، ہم نے اسے کھانے کے فضلے (سنتری کے چھلکے) سے الگ کر دیا، اور HAV (RNA وائرس میں سے ایک) کے خلاف اس کی اینٹی وائرل سرگرمی کا جائزہ لیا گیا۔

نارنجی کے چھلکوں کے آبی عرق سے بٹانول کا حصہ واٹ مین فلٹر پیپر شیٹس پر BAW کو بطور ایلیونٹ استعمال کرتے ہوئے لاگو کیا گیا تھا، جس کے تحت پری پیراٹیو پیپر کرومیٹوگرافی پر فلیوونائیڈل نوعیت کا ایک بڑا گہرا جامنی بینڈ دیکھا گیا تھا۔ میتھانول کے ساتھ گہرے جامنی رنگ کے بڑے بینڈ کا اخراج ایک خالص مرکب کو الگ تھلگ کرنے کا باعث بنا کہ اس کی شناخت 1 H, 13C سے ہیسپریڈین ہونے کی تصدیق کی گئی [27] مندرجہ ذیل: 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 δ 5.50 (dd, J=12.2, 3.4 Hz, 1H, H-2), 2.78 (dd, J =3.24 Hz & 17.16, 1H, H{{22} }ax)، 3.26 (dd, J=17.16, 8.22 Hz, 1H, H-3eq), 6.14 (brs, 1H, H-6), 6.12 (brs, 1H , H-8), 4.97 (d, J =7.2 Hz, 1H, H-1′′), 4.53 (s, 1H, H-1′′' , 1.09 (d, J=6.2, 3H, CH3 of rhamnose)۔ 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 78.89 (C-2), 42.74(C{{64} })،197.48 (C-4)، 163.50 (C-5)، 96.85 (C-6)، 165.60 (C-7)، 96.00 (C{{79}) })، 162.96 (C-9)، 103.79 (C-10)، 131.35 (C-1′)، 118.42 (C-2′)، 146.92 (C{{) 94}}′)، 148.43 (C-4′)، 112.50 (C-5′)، 114.60 (C-6′)، 56.15 (O-Me)، 99.91 (C{ {109}}′′), 73.45 (C-2′′), 76.73 (C-3′′), 70.06 (C-4′′), 75.98 (C{{121}) }}′′)، 66.50 (C-6′′)، 101.06 (C-1′′')، 70.73 (C-2′′')، 71.17 (C{{133) }}′′)، 72.53 (C-4′′'), 68.78 (C-5′′'), 18.29 (CH3 of rhamnose C-6′′')۔

3.3 ZnO نینو پارٹیکلز کی تشکیل

80 ◦ سینٹی گریڈ تک گرم پانی کے غسل میں ہیسپریڈین محلول میں زنک ایسیٹیٹ کا اضافہ اس کے بعد امونیا کے چند قطرے شامل کرنے سے ZnO NPs [13] کی بارش ہوئی۔

3.3.1 UV تجزیہ

Hesperidin کے ذریعے ترکیب شدہ ZnO NPs کے لیے زیادہ سے زیادہ جذب کی چوٹی نے 335 nm (تصویر 3a) کی چوٹی کو ظاہر کیا جو ZnO NPs کی تشکیل کی تصدیق کرتا ہے [28]۔ ایک نانوسکل پر ZnO میں معیاری ZnO جذب پیٹرن کے مقابلے میں کم طول موج ہوتی ہے، ان رپورٹس کے ساتھ اتفاق کرتے ہوئے کہ مادی آکسائڈز کی طول موج کم ہوتی ہے اور نانوسکل مواد میں طول موج کم ہوتی ہے [29]۔

3.3.2 ZnO NPs اور hesperidin کا ​​FT-IR تجزیہ

تیار شدہ ZnO NPs اور hesperidin کے FT-IR سپیکٹرا (تصویر 3b) کو 400 سے 4000 cm− 1 کے درمیان اسپیکٹرل چوڑائی کی حد میں جمع کیا گیا تھا۔ جہاں 3546.04، 3478.29، اور 834cm کے ارد گرد پانی کے پھیلے ہوئے O–H گروپوں کے لیے چوٹیوں کو دکھایا گیا تھا۔ − 1 ہیسپریڈین کے O–H گروپوں کی نمائندگی کرتا ہے اور ZnO NPs کے لیے 3382.99 cm− 1 کے قریب۔ 2918.50 سینٹی میٹر - 1 پر کاربن ڈبل بانڈ کھینچنے سے خوشبودار موئیٹیز کی تصدیق ہوئی۔ 1096.12 cm− 1 پر چوٹی کی موجودگی سے الکحل کی موڑنے والی کمپن -CO–H کی تصدیق ہوتی ہے۔ ZnO NPs کے اسٹریچنگ موڈز کے خصوصیت والے بینڈ 542.9 اور 891.2 cm− 1 [13,30] پر تفویض کیے گئے ہیں۔

3.3.3.TEM تجزیہ

TEM تجزیہ کم ریزولیوشن اور ہائی ریزولوشن ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپس پر کیا گیا اور 20 سے 30 nm کے ذرات کے سائز کے ساتھ ہیکساگونل ZnO NPs کی تشکیل کو دکھایا گیا، تصویر 4۔

3.3.4 XRD تجزیہ

ZnO NPs کی موجودگی اور ان کی ساختی خصوصیات کی تحقیقات کی تصدیق X-ray diffraction (XRD) سے ہوئی، تصویر 5. ZnO NPs کی ثالثی flavonoid hesperidin نے 31.618◦, 34.334◦, 34.334◦, 36.474.474.4740 پر شناخت شدہ 2θ اقدار کے ساتھ چوٹیوں کو دکھایا۔ ◦، 56.440◦، 62.727◦، 66.245◦، 67۔ (103)، (200)، (112) اور (201)۔ ان چوٹیوں کو ڈیٹا کارڈ (00− 003-0888) کے ساتھ ملایا گیا تھا۔

ZnO NPs کا کرسٹل سائز 27.73 nm شمار کیا گیا تھا۔ یہ ڈیٹا TEM پیمائش سے بہت ملتا جلتا ہے۔ کرسٹل سائز کا حساب لگانے کے لیے ہم Scherrer کی مساوات کا اطلاق کرتے ہیں۔

کرسٹل سائز {{0}} (0.9 x λ)/ (dcosθ)

Θ=2θ/2، d=چوٹی کی نصف زیادہ سے زیادہ شدت پر پوری چوڑائی (Rad میں)، λ =0.154060 nm

3.4 اینٹی وائرل سرگرمی

3.4.1 ویرو خلیوں کے خلاف سائٹوٹوکسائٹی کا اندازہ

Hesperidin اور ZnO NPs کے دو نمونوں نے بالترتیب 50 فیصد سیل سائٹوٹوکسک ارتکاز (CC50)=620.8 ± 34.6 اور 243.7 ± 12.7 ug/mL ظاہر کیا۔ جیسا کہ انجیر میں دکھایا گیا ہے۔ K. &L.، suppl. فائل اور قدریں بالترتیب ٹیبل C اور D میں درج تھیں۔ پھر، ان مرکبات کے لئے ٹیسٹ کیا گیا تھااینٹی وائرل اثراتHAV کے خلاف زیادہ سے زیادہ غیر زہریلے ارتکاز (MNTC) پر تختی پرکھ کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے تصویر M. (ضمنی فائل) میں بیان کیا گیا ہے۔

3.4.2 اینٹی HAV سرگرمی

فلاوونائڈز میں ویوو اور وٹرو دونوں میں اینٹی وائرل سرگرمیاں ہونے کی اطلاع دی گئی ہے [31]۔ یہ بتایا گیا تھا کہ ایچ آئی وی (ایک آر این اے وائرس بھی) کے خلاف کچھ فلیوونائڈز کے عمل کا طریقہ کار سائٹوکائنز کے ذریعہ ثالثی پروٹین کے فاسفوریلیشن کو روکنے کی وجہ سے ہے۔ یہ بھی واضح رہے کہ کووڈ-19 انفیکشن میں سائٹوکائنز کے ذریعے ثالثی کرنے والے فاسفوریلیشن سگنلنگ میں اضافہ ہوتا ہے، جس کے نتیجے میں متعدد سائٹوسکیلیٹل پروٹینز کی فاسفوریلیشن ہوتی ہے۔ لہذا، flavonoids، جس میں hesperidin شامل ہیں، پروٹین فاسفوریلیشن کو روک سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں طاقتور اینٹی وائرل سرگرمی اور دوسرے خلیوں میں انفیکشن کی روک تھام ہوتی ہے [32]۔ ZnO NPs میں بھی اینٹی وائرل سرگرمی کی اطلاع دی گئی ہے [32,33]۔

Zn پر مشتمل مرکبات نے وائرل ریپلیکشن سائیکل کے متنوع مراحل کو متاثر کرنے کی اطلاع دی ہے جیسے کہ وائرس کو غیر فعال کرنا، وائرل انکوٹنگ کی روک تھام، وائرل جینوم ٹرانسکرپشن، وائرل پروٹین ٹرانسلیشن، اور پولی پروٹین پروسیسنگ۔ یہ بھی غور کرنا چاہیے کہ سرگرمی کا انحصار وائرس کی قسم اور زنک پر مشتمل مرکبات کے ارتکاز پر ہوتا ہے [34]۔

ہمارے مطالعے میں، ویرو سیلز کے سنگم monolayers HAV وائرس کے فکسڈ ڈائیوشنز سے متاثر تھے۔ انکیوبیشن کے بعد، انوکولم کو ہٹا دیا گیا اور اس کی جگہ سیرم فری MEM کے ساتھ رکھ دیا گیا جس میں 1.5 فیصد کاربوکسی میتھائل سیلولوز تھا۔ اس کے بعد خلیوں کو انکیوبیٹ کیا گیا جس سے وائرس کو تختیاں بنانے کی اجازت دی گئی۔ خلیوں کو 2 گھنٹے کے لیے 25 ◦C پر formaldehyde کے ساتھ طے کیا گیا تھا جو 5 فیصد کے ارتکاز تک براہ راست میڈیم میں شامل کیا گیا تھا۔ 30 منٹ تک 1 فیصد کرسٹل وایلیٹ اور 10 فیصد ایتھنول پر مشتمل محلول سے داغے جانے سے پہلے فکسڈ سیلز کو بڑے پیمانے پر پانی سے دھویا گیا۔ پانی سے کللا کرنے کے بعد، تختیوں کی تعداد شمار کی گئی، اور وائرس کے ٹائٹرز (گنتی) کا حساب لگایا گیا۔ زیادہ سے زیادہ نان سائٹوٹوکسک ارتکاز (MNCC) میں HAV کے خلاف دو ٹیسٹ شدہ نمونوں، hesperidin اور ZnO NPs کے اینٹی وائرل اثرات ٹیبل بی (ضمنی فائل) میں دکھائے گئے ہیں۔ زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز نے نسبتاً کم ارتکاز میں ہیسپریڈین سے زیادہ سرگرمی دکھائی جس کی وجہ اونچی سطح کے رقبے اور چھوٹے ذرات کے سائز کی وجہ سے زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی سرگرمی میں اضافہ ہوا۔ ٹیبل بی سے، تصویر ٹی، (ضمنی فائل)۔ Hesperidin اور ZnO NPs دونوں نے ہیپاٹائٹس اے وائرس (HAV) کے خلاف اینٹی وائرل سرگرمی ظاہر کی جس میں 44.75 اور 58.83 فیصد فیصد زیادہ سے زیادہ نان سائٹوٹوکسک ارتکاز اور EC50s بالترتیب 72.4 اور 176.3 ug/mL کے برابر ہے، جیسا کہ ٹیبلز A اور Bs میں دکھایا گیا ہے۔

4. نتائج

موجودہ وبائی بیماری COVID-19 دنیا بھر میں بہت زیادہ بیماری اور اموات کے لیے ذمہ دار ہے۔ ہمارے مطالعہ کے تحت نیوٹراسیوٹیکلز اور فائٹو فارماسیوٹیکلز فینولک مرکبات اچھے ڈاکنگ اسکورز کی نمائش کرتے ہیں اور یہ SARS-CoV-2 کے علاج کے لیے ایک مثالی ہدف ہو سکتا ہے۔ Hesperidin جو کہ کھانے کے فضلے کے سنتری کے چھلکوں سے الگ تھلگ ہوتا ہے، دوسرے ٹیسٹ شدہ مرکبات میں SARS-CoV-2 اہم پروٹیز کے خلاف سب سے زیادہ ڈاکنگ سکور (-8.84 Kcal/mol) ظاہر کرتا ہے۔ Hesperidin ZnO NPs کو ہیکساگونل شکل اور تقریباً 25 nm کے ذرات کے سائز کے ساتھ تیار کرنے کے لیے زنک آئنوں کو کم کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ Hesperidin ثالثی ZnO NPs زیادہ سے زیادہ غیر سائٹوٹوکسک ارتکاز میں 44.75 اور 58.83 فیصد کے فیصد کے ساتھ ہیسپریڈین سے زیادہ اینٹی وائرل سرگرمی کا مظاہرہ کرتے ہیں۔ SARS-CoV-2 وبائی بیماری کے محفوظ، سستے اور ممکنہ علاج تلاش کرنے کے لیے ہیسپریڈین، دیگر نیوٹراسیوٹیکلز، فائٹو فارماسیوٹیکل مرکبات، اور ان کے ZnO NPs کے لیے مزید مطالعات کی جانی چاہیے۔

مصنفین کی شراکتیں Gouda H. Attia، Yasmin S. Moemen، Mahmoud Youns، Ammar M. Ibrahim، Randa Abdou، Mohammad A. El Raey Gouda H. Attia اور محمد A. El Raey نے مخطوطہ کو ڈیزائن کیا۔ Gouda H. Attia، Ammar M. Ibrahim، اور Mohammad A. El Raey نے کرومیٹوگرافک علیحدگی کی اور خالص الگ تھلگ Hesperidin Gouda H. Attia، Randa Abdou، اور محمد A. El Raey نے ZnO کی سبز ترکیب کی ساخت کی وضاحت کی۔ NPs اور اس کی خصوصیات بیان کریں۔ یاسمین ایس مومین نے تمام مالیکیولر ڈاکنگ اسٹڈیز کیں اور محمد اے الرائے نے پروٹین تجویز کی۔

محمود یونس اور رندا عبدو نے اینٹی وائرل اور سائٹوٹوکسیٹی اسسیس اور ان کے ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ تمام مصنفین مخطوطہ کے حتمی ورژن کو تیار کرنے اور لکھنے اور حتمی مخطوطہ کی منظوری کے ذمہ دار تھے۔

فنڈنگ

اس کام کے لیے کوئی فنڈ نہیں ملا۔

تحقیقی اخلاقیات

ہم مزید تصدیق کرتے ہیں کہ اس مخطوطہ میں شامل کام کا کوئی بھی پہلو جس میں انسانی مریضوں کو شامل کیا گیا ہے تمام متعلقہ اداروں کی اخلاقی منظوری کے ساتھ کیا گیا ہے اور اس طرح کی منظوریوں کو مخطوطہ کے اندر تسلیم کیا گیا ہے۔

IRB کی منظوری حاصل کی گئی تھی (مطالعہ اور 3 یا اس سے زیادہ کیسوں کی سیریز کے لیے ضروری ہے)

ممکنہ طور پر شناخت کرنے والی معلومات شائع کرنے کے لیے تحریری رضامندی، جیسے کیس کی تفصیلات اور تصاویر، مریض یا ان کے قانونی سرپرست (سرپرستوں) سے حاصل کی گئی تھیں۔

مسابقتی دلچسپی کا اعلان

مصنفین دلچسپی کے کسی اعلان کی اطلاع نہیں دیتے ہیں۔

اعترافات

ہم ڈین شپ آف سائنٹفک ریسرچ، نجران یونیورسٹی، کے ایس اے کے شکر گزار ہیں کہ انہوں نے اس پروجیکٹ کو انجام دینے کے لیے فنڈ فراہم کی (NU/ MID/18/024)۔

ضمیمہ A. ضمنی ڈیٹا

اس مضمون سے متعلق اضافی مواد، آن لائن ورژن میں، DOI:https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2021.111724 پر پایا جا سکتا ہے۔

گوڈا ایچ عطیہa,b ، یاسمین ایس مومینc ، محمود یونسd ، عمار ایم ابراہیمe ,  رندا عبدوf,g ، محمد اے ایل راعیh, *  

a شعبہ فارماکگنوسی، کالج آف فارمیسی، نجران یونیورسٹی، نجران، سعودی عرب
b شعبہ فارماکگنوسی، فیکلٹی آف فارمیسی، کفر الشیخ یونیورسٹی، کفر الشیخ، مصر
c کلینکل پیتھالوجی ڈیپارٹمنٹ، نیشنل لیور انسٹی ٹیوٹ، مینوفیا یونیورسٹی، مینوفیا، مصر
d بایو کیمسٹری اور سالماتی حیاتیات کا شعبہ، فیکلٹی آف فارمیسی، ہیلوان یونیورسٹی، قاہرہ، مصر
e اپلائیڈ میڈیکل سائنسز کالج، نجران یونیورسٹی، نجران، سعودی عرب
f شعبہ فارماکگنوسی، فیکلٹی آف فارمیسی، ام القریٰ یونیورسٹی، مکہ مکرمہ، سعودی عرب
g شعبہ فارماکگنوسی، فیکلٹی آف فارمیسی، ہیلوان یونیورسٹی، قاہرہ، مصر
h شعبہ فائٹو کیمسٹری اور پلانٹ سسٹمیٹکس، فارماسیوٹیکل ڈویژن، نیشنل ریسرچ سینٹر، دوکی، قاہرہ، مصر

حوالہ جات

[1] ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن، ڈبلیو ایچ او کورونا وائرس بیماری (COVID-19)، 2020 (22 اکتوبر 2020 تک رسائی حاصل کی گئی)، https://www.worldometers. معلومات/کورونا وائرس/#ممالک۔

[2] J. ہنٹر، S. Arentz، J. Goldenberg، G. Yang، J. Beardsley، D. Mertz، S. Leeder، Rapid Review Protocol: CoVID کی روک تھام یا علاج کے لیے زنک-19 اور دیگر کورونا وائرس سے متعلق سانس کی نالی کے انفیکشن، Integr. میڈ. Res. 9 (2020), 100457۔ [3] جی جے کوتوال، انار کے جوس سے اینٹی وائرل نیوٹراسیوٹیکلز، ہینڈ بی میں۔ نیوٹراسیوٹیکلز، والیوم۔ I، CRC پریس، 2009، صفحہ 338–346۔

[4] L.-T. لن، ڈبلیو سی۔ Hsu, C.-C. لن، اینٹی وائرل قدرتی مصنوعات اور جڑی بوٹیوں کی ادویات، J. Tradit. تکمیل کرنا۔ میڈ. 4 (2014) 24–35۔

[5] اے کمار، وائی کبوٹا، ایم چرنوف، ایچ کاسویا، کووڈ کے روک تھام اور علاج میں زنک سپلیمنٹ کا ممکنہ کردار-19، میڈ۔ مفروضے (2020)، 109848۔

[6] J. Jiang, J. Pi, J. Cai، بائیو میڈیکل ایپلی کیشنز کے لیے زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی پیش قدمی، Bioinorg. کیم اپل (2018)، https://doi.org/10.1155/2018/ 1062562۔

[7] AJW Te Velthuis, SHE van den Worm, AC Sims, RS Baric, EJ Snijder, MJ van Hemert, Zn2 plus وٹرو میں کورون وائرس اور آرٹیریوائرس RNA پولیمریز کی سرگرمی کو روکتا ہے اور زنک ionophores سیل کلچر میں ان وائرسوں کی نقل کو روکتا ہے، PLoS پیتھوگ 6 (2010)، e1001176۔

[8] Z. Jin, X. Du, Y. Xu, Y. Deng, M. Liu, Y. Zhao, B. Zhang, X. Li, L. Zhang, C. Peng, SARS سے M pro کی ساخت CoV-2 اور اس کے روکنے والوں کی دریافت، نیچر (2020) 1–5۔

[9] A. Grosdidier, V. Zoete, O. Michielin, SwissDock, EADock DSS پر مبنی ایک پروٹین-چھوٹے مالیکیول ڈاکنگ ویب سروس، نیوکلک ایسڈ ریز۔ (2011)، https://doi.org/ 10.1093/nar/gkr366۔

[10] A. Kucukelbir, FJ Sigworth, HD Tagare, quantifying the local resolution of cryo-EM density maps, Nat. طریقے 11 (2014) 63–65۔

[11] ایچ ایچ برکات، ایم ایل-رائے، ایس اے ندا، آئی زید، ایم نوار، یوجینیا سپرا-اکسیلرس پتوں کی آئینی فینولکس اور ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمی، ای جے کیم۔ 54 (2011) 313–323۔

[12] SM Osman, WA El Kashak, M. Wink, MA El Raey, New isorhamnetin derivatives from Salsola imbricata Forssk. الگ الگ سوزش والی سرگرمی کے ساتھ پتے، فارماکگن۔ میگ 12 (2016) S47۔

[13] GH Attia، HS Alyami، MAA Orabi، AH Gaara، MA El Raey، بینگن سبز کیلیکس، انٹ کے ذریعے ثالثی میں چاندی اور زنک نینو پارٹیکلز کی اینٹی مائکروبیل سرگرمی۔ جے فارماکول۔ 16 (2020) 236–243۔

[14] پی وجین، سی. راگھو، جی اشوک، ایس اے دھنراج، بی سریش، نیلگیرس کے دواؤں کے پودوں کی اینٹی وائرل سرگرمی، ہندوستانی جے میڈ۔ Res. 120 (2004) 24-29۔

[15] T. Mosmann، سیلولر نمو اور بقا کے لیے ریپڈ کلوریمیٹرک پرکھ: پھیلاؤ اور سائٹوٹوکسیسیٹی اسسیس کے لیے درخواست، J. Immunol. طریقے 65 (1983) 55–63۔

[16] W. Randazzo, J. Piqueras, J. Rodríguez-Díaz, R. Aznar, G. S´ anchez, خوراک اور پانی کے نمونوں میں متعدی HAV کی منتخب شناخت کے لیے viability-qPCR کی کارکردگی کو بہتر بنانا، J. Appl. مائکروبیول 124 (2018) 958–964۔

[17] RM پنٹو، JM Diez، A. Bosch، کالونک کارسنوما سیل لائن CaCo-2 کا استعمال برائے vivo amplification and detection of enteric viruses, J. Med. ویرول۔ 44 (1994) 310–315۔

[18] Z. Ding, G. Sun, Z. Zhu, مختصر بات چیت Hesperidin انفلوئنزا A وائرس (H1N1) کی وجہ سے چوہوں میں پھیپھڑوں کی چوٹ کو اپنے اینٹی سوزش اثر اینٹی ویر کے ذریعے کم کرتا ہے۔ وہاں 23 (2018) 611–615۔

[19] C. Wu, Y. Liu, Y. Yang, P. Zhang, W. Zhong, Y. Wang, Q. Wang, Y. Xu, M. Li, X. Li, SARS کے علاج کے اہداف کا تجزیہ- CoV-2 اور کمپیوٹیشنل طریقوں سے ممکنہ ادویات کی دریافت، ایکٹا فارم۔ گناہ بی (2020)۔

[20] AHD Cataneo, D. Kuczera, AC Koishi, C. Zanluca, GF Silveira, TB de Arruda, AA Suzukawa, LO Bortot, M. Dias-Baruffi, WA Verri, The citrus flavonoid naringenin انسان کے ان وٹرو انفیکشن کو متاثر کرتا ہے۔ زیکا وائرس کے ذریعے خلیات، سائنس۔ Rep. 9 (2019) 1–15۔

[21] Y.-J. لن، Y.-C. چانگ، N.-W. Hsiao, J.-L. Hsieh، C.-Y. وانگ، S.-H. کنگ، F.-J. Tsai, Y.-C. لین، سی ڈبلیو۔ Enterovirus A71، J. Virol کے 3C پروٹیز انحیبیٹرز کے طور پر لن، فیسٹن اور روٹین۔ طریقے 182 (2012) 93–98۔

[22] K. Kaihatsu, M. Yamabe, Y. Ebara, Epigallocatechin-3-O-gallate اور اس کے فیٹی ایسڈ ایسٹرز کے عمل کا اینٹی وائرل میکانزم، مالیکیولز 23 (2018) 2475۔

[23] BU Reddy, R. Mullick, A. کمار, G. شرما, P. Bag, CL Roy, G. Sudha, H. Tandon, P. Dave, A. Shukla, A natural small molecule inhibitor corilagin HCV کی نقل کو روکتا ہے اور جگر کے نقصان کو کم کرنے کے لیے آکسیڈیٹیو تناؤ کو ماڈیول کرتا ہے، اینٹی وائرل ریس۔ 150 (2018) 47–59۔

[24] JT Ortega, AI Su'arez, ML Serrano, J. Baptista, FH Pujol, HR Rangel, The role of the glycosyl moiety of myricetin derivatives in anti HIV-1 activity in vitro, AIDS Res. وہاں 14 (2017) 1–6۔

[25] RB Teponno, S. Kusari, M. Spiteller, lignans and neolignans پر تحقیق میں حالیہ پیشرفت، Nat. پیداوار Rep. 33 (2016) 1044–1092۔

[26] J. Yin, MM Cherney, EM Bergmann, J. Zhang, C. Huitema, H. Pettersson, LD Eltis, JC Vederas, MNG James, A episulfide cation (thiiranium ring) HAV 3C پروٹینیز کی فعال جگہ میں پھنسا ہوا پیپٹائڈ پر مبنی کیٹون روکنے والوں کے ذریعہ غیر فعال، J. Mol. بائول 361 (2006) 673–686۔

[27] VM چاری، M. Jordan، H. Wagner، PW Thies، Valeriana wallichii سے ایک acyl-linarin کی ساخت کا 13C-NMR مطالعہ، فائٹو کیمسٹری 16 (1977) 1110–1112۔

[28] این سری نواسن، سی رنگاسامی، جے سی کنن، زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی ترکیب کا ڈھانچہ اور نظری خصوصیات، انٹ جے ایپل انجن ریس۔ 10 (2015) 343–345۔

[29] ایس فخری، ایم جمزاد، ایچ کبیری فرد، زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی سبز ترکیب: ایک موازنہ، گرین کیم۔ لیٹ Rev. 12 (2019) 19-24۔

[30] این بالا، ایس ساہا، ایم چکرورتی، ایم میتی، ایس داس، آر باسو، پی نندی، ہیبسکس سبڈاریفا پتی کے عرق کا استعمال کرتے ہوئے زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کی سبز ترکیب: ترکیب پر درجہ حرارت کا اثر، اینٹی بیکٹیریل سرگرمی، اور ذیابیطس مخالف سرگرمی، RSC Adv. 5 (2015) 4993–5003۔

[31] H. Zakaryan, E. Arabyan, A. Oo, K. Zandi, Flavonoids: وائرل انفیکشن کے خلاف قدرتی مرکبات کا وعدہ, Arch. ویرول۔ 162 (2017) 2539–2551۔

[32] M. Bouhaddou, D. Memon, B. Meyer, KM White, VV Rezelj, MC Marrero, BJ Polacco, JE Melnyk, S. Ulferts, RM Kaake, The Global phosphorylation landscape of SARS-CoV-2 انفیکشن، سیل 182 (2020) 685–712۔

[33] H. غفاری، A. Tavakoli، A. Moradi، A. Tabarraei، F. Bokharaei-Salim، M. Zahmatkeshan، M. Frahmand، D. Javanmard، SJ Kiani، M. Esghaei، H1N1 انفلوئنزا وائرس کے انفیکشن کی روک تھام زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز کے ذریعے: نینو میڈیسن کی ایک اور ابھرتی ہوئی ایپلی کیشن، J. بایومیڈ۔ سائنس 26 (2019) 1-10۔

[34] SA Read, S. Obeid, C. Ahlenstiel, G. Ahlenstiel, The role of zinc in antiviral immunity, Adv. نٹر 10 (2019) 696–710۔