باب 2: Krϋppel-like Factor 15 P53 SUMO1 کنجوگیشن کو بڑھانے کے ذریعے رینل گلومیرولر میسنجیل سیل کے پھیلاؤ کو دباتا ہے۔

مزید معلومات کے لیے۔ رابطہtina.xiang@wecistanche.com

3 نتائج

3.1|پرائمری رینل گلومیرولر MCs میں ChIP-Seq کے ذریعے KLF15-بائنڈنگ جینز کی اسکریننگ

KLF15 کے براہ راست بائنڈنگ پارٹنر جینوں کی شناخت کے لیے، ہم نے ChlP-Seq تجزیہ کیا اور بالآخر 2478 جینز کی اسکریننگ کی۔ ویب سائٹ www.uniprot.org (شکل 1A, B) پر ٹول کے ذریعے ان جینز کے GO تجزیہ نے 1941 جینز سے وابستہ مالیکیولر فنکشن کی اصطلاحات، 1662 جینز سے متعلق سیلولر جزو کی اصطلاحات اور 1766 جینز سے متعلق حیاتیاتی عمل کی اصطلاحات کا انکشاف کیا۔ چونکہ ہمارا مقصد یہ جاننا تھا کہ KLF15 کس طرح MCs کو متاثر کرتا ہے، ہم نے سیل پروسیس سے متعلق جینز پر توجہ مرکوز کی۔ سیل کے عمل سے متعلق 1315 جینوں میں سے، 74 جین سیل سائیکل کے عمل میں حصہ لینے کے لیے پائے گئے۔ خاص طور پر، ان جینز نے مائٹوٹک سیل سائیکل، سیل سائیکل مرحلے کی منتقلی اور دیگر عملوں میں حصہ لیا (شکل 1C، D)۔ مزید برآں، ہم نے نشوونما میں شامل جینوں کا تجزیہ کیا اور پایا کہ ان کا تعلق ترقیاتی نشوونما، خلیوں کی نشوونما اور دیگر اقسام کی نمو (شکل 1E) سے ہے۔

3.2

والدین کے خلیات کے مقابلے KLF15 کو زیادہ متاثر کرنے والے HRMCs کا SILAC اور LC/MS تجزیہ 1357 پروٹینوں کی شناخت کا باعث بنا۔ ہم نے DAVID اور IPA کا استعمال GO ڈومینز حاصل کرنے کے لیے کیا اور SILAC کے ذریعے شناخت شدہ مقداری پروٹینوں کے بھرپور راستے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ بہت ساری پروٹینز کی حیاتیاتی فنکشن سے متعلق شرائط سرفہرست 30 نمایاں طور پر افزودہ GO اصطلاحات میں شامل تھیں، جن میں سیلولر امینو ایسڈ میٹابولک عمل کا ضابطہ، پروٹیزوم کمپلیکس، پروٹین بائنڈنگ، اور ٹرانسکرپشن اور ترجمے کی اصطلاحات شامل ہیں، جن کا سب سے قریبی تعلق ہے۔ ہر جگہ (شکل 2A)۔ شکل 2B سب سے اوپر 30 نمایاں طور پر افزودہ راستے کی شرائط کو ظاہر کرتا ہے۔ حیاتیاتی عمل کی کئی اصطلاحات، بشمول پروٹیزوم اور نیوروڈیجینریٹیو بیماری کی اصطلاحات، بھی ہر جگہ سے متعلق تھیں۔

کے بارے میں جاننے کے لیے کلک کریں۔cistancheتفصیلات کے ساتھ فروخت کے لیے

3.3|KLF15-بائنڈنگ جینز کا بائیو انفارمیٹکس تجزیہ جو ممکنہ طور پر رینل گلومیرولر ایم سی پھیلاؤ سے وابستہ ہیں

KLF15-بائنڈنگ جینز کو دریافت کرنے کے لیے جو ممکنہ طور پر وابستہ ہیں۔رینل گلومیرولرMC پھیلاؤ، ہم نے ChIP-Seq ڈیٹا اور SILAC-LC/MS ڈیٹا کا بائیو انفارمیٹکس تجزیہ کیا۔ باون جینوں کی اسکریننگ کی گئی (ٹیبل 2 اور شکل 2C)، اور ان میں سے پانچ جین، بشمول SUMO1، میکروفیج مائیگریشن انحیبیٹری فیکٹر (MIF)، یوکریوٹک انیشیشن فیکٹر (EIF)، انسولین نما گروتھ فیکٹر (IGF) اور ریٹیکولوکلبن (RCN) ) سے گہرا تعلق تھا۔سیل پھیلاؤ. چونکہ امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے پروٹینوں کے GO اور پاتھ وے کے تجزیوں نے تجویز کیا ہے کہ اسکرین شدہ جین بنیادی طور پر ہرجائی کے عمل سے متعلق تھے، اس لیے ہم نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ SUMO1، یوبیوکیٹین نما (UBL) پروٹین فیملی کا ایک رکن، ترجمہ کے بعد کی ترمیم میں حصہ لیتا ہے۔ کے ایل ایف 15 کے ہدف جین کے طور پر ہر جگہ۔

شواہد کی بڑھتی ہوئی مقدار نے اس بات کی نشاندہی کی ہے کہ ایچ جی ذیابیطس نیفروپیتھی کی نشوونما کو اکسانے والے بڑے عوامل میں سے ایک ہے، اور یہ وٹرو میں ایم سی کے پھیلاؤ اور میٹرکس کی ترکیب میں اضافہ کو فروغ دیتا ہے۔ تجرباتی glomerulonephritis میں glomerulosclerosis کے۔ 26 اس بات کی تصدیق کرنے کے بعد کہ MCs کو وٹرو میں HG یا PDGF-BB سے متحرک کیا گیا تھا، ہم نے RNA اور پروٹین دونوں میں KLF15 اور SUMO1 کے اظہار میں تبدیلیوں کا پتہ لگایا۔

سطحوں اور پایا کہ ان مالیکیولز میں ایک جیسے رجحانات تھے (شکل 2D-l)۔ آخر میں، ہم نے طے کیا کہ SUMO1 KLF15 کا ہدف جین ہے۔

3.4|KLF15 16 bp CACCCA-SUMO-1 پروموٹر ریجن اور C پلس A سے بھرپور شکل کے پابند ہو کر SUMO-1 جین کے اظہار کو ریگولیٹ کرتا ہے۔

ہم نے MEME سویٹ (http://meme-suite.org/tools/meme) کو KLF15 ChlP-Seq ڈیٹا سے 52 اسکرین شدہ جینز کے KLF15-بائنڈنگ شکلوں کی خصوصیت کے لیے استعمال کیا اور KLF-بائنڈنگ موٹف کی نشاندہی کی۔ (شکل 3A)۔اس کے علاوہ، ہم نے SUMO1 کے پروموٹر کے ایک ہزار سے زیادہ اڈوں کا مزید تجزیہ کیا اور پایا کہ KLF15 ایک 16 bp ترتیب (نیوکلیوٹائڈز -205~-199) کو پہچان سکتا ہے اور اس کا پابند ہوسکتا ہے، بشمول - CACCCA-(شکل 3B)۔ChIP-PCR نے تصدیق کی کہ KLF15 SUMO1 پروموٹر کا پابند ہے، اور نتائج نے بیک گراؤنڈ کنٹرول گروپ (Figure 3C) کے مقابلے اینٹی KLF15 اینٹی باڈی گروپ میں SUMO1 کا نمایاں طور پر زیادہ اظہار ظاہر کیا۔

مزید برآں، ہم نے SUMO1 اور KLF15 کے درمیان اہدافی تعلقات کی تصدیق کے لیے ایک ڈوئل لوسیفریز رپورٹر پرکھ کی۔ جنگلی قسم کے SUMO1 پروموٹر گروپ نے HRMCs میں pGL3 ویکٹر اور اتپریورتی گروپوں کے مقابلے میں اعلی luciferase سرگرمی دکھائی، اور KLF15 کی حد سے زیادہ کارکردگی سے سرگرمی میں نمایاں اضافہ ہوا۔ لوسیفریز سرگرمی میں اضافے کو پلاسمڈ کے ساتھ منتقلی کے ذریعہ تبدیل کردیا گیا جس میں اتپریورتی فروغ دینے والے خطے (شکل 3D) کا اظہار کیا گیا تھا۔ ایک ساتھ لے کر، یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ SUMO1 KLF15 کا براہ راست نقلی ہدف ہے۔

3.5 |SUMO1 کے SUMOylation سبسٹریٹ کے طور پر P53 کی اسکریننگ

SUMO ترمیمات کو یوکرائٹس میں ترجمہ کے بعد کی تبدیلیوں کا وسیع پیمانے پر اظہار کیا جاتا ہے۔ سبسٹریٹ پروٹینوں میں ان تبدیلیوں کے الٹ جانے والے جوڑ کو SUMOylation کے نام سے بھی جانا جاتا ہے، جو ہدف پروٹین کے افعال کو منظم کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور مزید مختلف حیاتیاتی عمل میں حصہ لیتا ہے، جیسے کہ نیوکلیو سائیٹوپلاسمک ٹرانسپورٹ، ٹرانسکرپشن ریگولیشن، اپوپٹوس، پروٹین اسٹیبلائزیشن، تناؤ کے ردعمل اور سیل سائیکل پروگریشن۔ 27 SUMO1 کے ذریعے براہ راست جوڑنے والے بہاو سگنلنگ مالیکیولز کو دریافت کرنے کے لیے، ہم نے IPA ڈیٹا بیس کا استعمال کرتے ہوئے SUMO1 کا نیٹ ورک تجزیہ کیا، اور اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ SUMO1 براہ راست P53، APP، JUN اور AKT سے جوڑ سکتا ہے۔ پروٹین (شکل 4A-C)۔ ہم نے ابتدائی طور پر P53 کو SUMO1 کے بہاو والے مالیکیول کے طور پر منتخب کیا کیونکہ یہ ایک معروف پروٹین ہے جس کا سیل کے پھیلاؤ سے گہرا تعلق ہے۔ شکل 4D)۔ اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا واقعی P53 میں SUMOylation کے ذریعے ترمیم کی گئی ہے، ہم نے عارضی طور پر HRMCs کو SUMO1 اوور ایکسپریشن پلاسمڈ یا SUMO1 siRNA سے تبدیل کیا۔ IP اور مغربی دھبے دونوں کے نتائج نے SUMO1-P53 اور P53 کے اظہار کی تبدیلیوں کے رجحانات کو ظاہر کیا جو تبدیلیوں کے ساتھ مطابقت رکھتے تھے۔ SUMO1 میں (شکل 4E-J)۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ P53 SUMO1 کا ایک SUMOylation سبسٹریٹ ہے۔

3.6 |KLF15 SUMO1 اظہار اور P53 SUMOylation کو فروغ دے کر MC کے پھیلاؤ کو روکتا ہے

KLF15 اور SUMO1 کے ذریعے P53 SUMOylation اور MC پھیلاؤ کے ضابطے کو قائم کرنے کے لیے، ہم نے HRMCs میں KLF15 یا SUMO1 اظہار کے ساتھ مداخلت کی اور PDGF-BB کے ساتھ HRMCs کا علاج کیا۔ PDGF-BB سے علاج شدہ HRMCs میں، KLF15 اوور ایکسپریشن پلاسمڈ سے منتقلی والے خلیات نے KLF15 کنٹرول پلاسمڈ سے منتقل ہونے والے خلیوں کے مقابلے SUMO1-P53, P53, KLF15 اور SUMO1 کے اعلی اظہار کی نمائش کی۔ SUMO1-P53, P53 اور SUMO1 میں وہی تبدیلیاں SUMO1 اوور ایکسپریشن پلاسمڈ ٹرانسفیکٹڈ سیلز میں پائی گئیں، جبکہ KLF15 ایکسپریشن ان سیلز میں کوئی تبدیلی نہیں کی گئی تھی (شکل 5A-F)۔ PDGF-BB اب تک بیان کیے گئے MCs کی ترقی کے سب سے مؤثر عوامل میں سے ایک ہے، اور PDGF-BB کے لیے HRMCs کا پھیلاؤ کا ردعمل دیکھا گیا۔ جیسا کہ شکل 5G، H میں دکھایا گیا ہے، ریکومبیننٹ PDGF-BB کی انتظامیہ سے EDU- مثبت خلیوں کی فیصد میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ ای ڈی یو کے داغدار نتائج نے اشارہ کیا کہ KLF15 اور SUMO1 اوور ایکسپریشن دونوں نے PDGF-BB حوصلہ افزائی سیل پھیلاؤ کو روکا (شکل 5G، H)۔

HRMCs کو پھیلانے میں KLF15 اور SUMO1 کے کردار کے بارے میں مزید بصیرت حاصل کرنے کے لیے، ہم نے خلیات کو صرف SUMO1 siRNA سے منتقل کیا یا انہیں SUMO1 siRNA اور KLF15 اوور ایکسپریشن پلاسمڈ سے منتقل کیا۔ SUMO1 کے ڈاون ریگولیشن نے KLF15 کے اظہار کو متاثر نہیں کیا، لیکن SUMO1-P53 اور P53 کے اظہار کی سطحیں واضح طور پر SUMO1 siRNA کی منتقلی (Figure6A-C) کے بعد کم ہوگئیں۔ اس کے علاوہ، جب SUMO1 کے اظہار کو روکا گیا تھا، SUMO1-P53 اور P53 کے اظہار کی سطحوں کو بھی دبا دیا گیا تھا یہاں تک کہ KLF15 (شکل 6D-F) سے زیادہ اظہار کرنے والے خلیوں میں بھی۔ اس کے بعد، MC پھیلاؤ کا اندازہ EDU سٹیننگ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ SUMO1 RNAi نے PDGF-BBon HRMCs کے پھیلاؤ والے اثر کو بڑھایا، اور KLF15 اوور ایکسپریشن پلاسمڈ اور SUMO1 siRNA کے ساتھ کوٹرانسفیکٹ شدہ گروپ میں اوور ایکسپریشن پلاسمڈ اور ہائبرڈ سیکوئنس کنٹرول (HRNAGFsi) کے ساتھ کوٹرانسفیکٹڈ گروپ سے زیادہ EDU-مثبت خلیات تھے۔ . لہذا، ہم یہ نتیجہ اخذ کرتے ہیں کہ KLF15 P53 SUMOylation کو بڑھا کر MC پھیلاؤ کو دباتا ہے۔

3.7

اینٹی تھائی ون نیفرائٹس سیلف لمیٹڈ میسنجیئل پرولیفیریٹو گلوومیرولونفرائٹس کا ایک کلاسیکی ماڈل ہے جس میں پھیلاؤ اور بحالی کا مرحلہ ہے۔ اس ماڈل کو بنانے کے لیے ہم نے وِسٹار چوہوں میں Thy1 اینٹی باڈی کا انجیکشن لگایا۔ سیرم یوریا نائٹروجن اور کریٹینائن دونوں میں کنٹرول چوہوں اور ماڈل چوہوں (شکل S1) کے درمیان کوئی خاص تبدیلی نہیں ہے۔ ماڈل چوہوں میں پھیلاؤ والے مرحلے (دن 5 اور 7) کے دوران نشان زدہ میسنجیئل پھیلاؤ اور ای سی ایم جمع دیکھا گیا، اور 10 دن (شکل 7A) کو بحالی کے مرحلے کے دوران ایم سی کی تعداد میں کمی واقع ہوئی۔ ہم نے IHC (شکل 7A, B) کے ذریعہ سیل کے پھیلاؤ کے مارکر PCNA میں اظہار کی تبدیلیوں کا بھی پتہ لگایا۔ PCNA کی سطح دن 5 کو بڑھائی گئی، 7 دن کو عروج پر اور دن 10 (شکل 7F) کو کم ہوا۔ مغربی دھبے کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ الگ تھلگ گلوومیرولی میں P53، SUMO1 اور KLF15 کا پروٹین ایکسپریشن ماڈل گروپس میں کنٹرول گروپ (شکل 7C، D) کے مقابلے میں کم تھا، جو امیونو ہسٹو کیمیکل نتائج (شکل 7E، F) کے مطابق تھا۔ ان نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ اینٹی Thy1 ماڈل چوہوں میں MCs کے غیر معمولی پھیلاؤ کا تعلق KLF15 اور SUMO1 کے نچلے درجے کے اظہار سے ہے۔ ان مالیکیولز کے اظہار میں مداخلت سے چوہوں میں پیتھولوجیکل فینوٹائپ کے خاتمے کی توقع کی جاتی ہے۔

4. بحث

دیگلوومیرولیکی فلٹریشن یونٹس ہیں۔گردہ. گلوومیرولر فنکشن میں خلل بنیادی گلوومیرولر پیتھالوجی کی وجہ سے ہوسکتا ہے یا سیسٹیمیٹک بیماریوں سے ثانوی ہوسکتا ہے۔ گلوومیریولر چوٹ کے بعد میسنجیئل تبدیلیاں دیکھی گئیں جن میں ایم سی کی ہائپر پرولیفریشن شامل ہے جس کے بعد ای سی ایم (میسنجیل توسیع) کی ضرورت سے زیادہ پیداوار اور سوزش والے خلیوں کے لئے کیموآٹریکٹنٹ کی پیداوار شامل ہے۔ لہذا، MC ردعمل کی ترمیم، خاص طور پر غیر معمولی پھیلاؤ، ایک نیا علاج کا طریقہ ہے۔ KLF15 ایک پروٹین ہے جو مخصوص ڈی این اے کی ترتیب سے منسلک ہو کر ٹرانسکرپشن فیکٹر کے طور پر ایک ریگولیٹری کردار ادا کرتا ہے۔ بہت سے مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ KLF15 سیل کے پھیلاؤ کے ضابطے میں شامل ہے۔ مثال کے طور پر، یہ پایا گیا ہے کہ KLF15 ایم سی پھیلاؤ سے متعلق سگنلنگ راستوں کی روک تھام میں حصہ لیتا ہے، 15,30 لیکن ادب میں اس کے براہ راست ہدف والے جین کی اطلاع نہیں دی گئی ہے۔ لہذا، اس مطالعہ میں KLF15 کے براہ راست ہدف جین کی شناخت کے لیے بنیادی طور پر نقل اور ترجمہ کی سطح کی مشترکہ اسکریننگ شامل ہے۔

KLF15 مختلف انواع اور مختلف ٹشوز اور اعضاء میں مختلف جینز کو منظم کرتا ہے۔ MCs کے پھیلاؤ کو منظم کرنے کے عمل میں، KLF15 متعدد جینوں کے اظہار کو متاثر کرتا ہے اور متعدد راستوں میں حصہ لیتا ہے۔ قرنیہ اپکلا خلیوں کے فرق پر KLF7 کے ضابطے کا مطالعہ کرنے کے لیے ٹیکنالوجی۔ 33 Ying M et al نے اس تکنیک کا استعمال KLF9 کے pluripotency پر glioblastoma کے روکنے والے اثر کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا۔ اعلی ریزولیوشن، زیادہ پتہ لگانے کی حساسیت اور کم نمونے کے سائز کی طلب کے ساتھ۔ 35 ہم نے براہ راست KLF15 سے جڑے ہوئے DNA کے ٹکڑے حاصل کرنے کے لیے ChP کا استعمال کیا، اور GenBank کے ساتھ موازنہ اور تجزیہ کے بعد، ہم نے 2478 ممکنہ ہدف والے جینز کی اسکریننگ کی۔ GO اور پاتھ وے کے تجزیوں کے ذریعے، ہم نے سیل سائیکل اور پھیلاؤ کے عمل میں شامل بہت سے ہدف والے جینوں کی نشاندہی کی۔

ChlP-Seq تجربات میں پتہ لگانے کے سگنل کو بڑھاوا دینے کے لیے PCR کی ضرورت ہوتی ہے، اور ایمپلیفیکیشن کے عمل کے دوران کچھ حد تک تعصب ناگزیر ہے۔ اس کے علاوہ، ChIP-Seq صرف وہی جین حاصل کرتا ہے جنہیں KLF15 باندھ سکتا ہے اور ان تبدیلیوں کی نشاندہی نہیں کرتا جو ان جینز کے اظہار میں واقع ہوتی ہیں جب KLF15 کا اظہار تبدیل ہوتا ہے۔ ہم نے ان کوتاہیوں کی تلافی کے لیے SILAC-LC/MS پروٹومکس تجزیہ کا استعمال کیا۔ یہ تکنیک ان تمام پروٹینوں کے بارے میں معلومات فراہم کرتی ہے جن کا اظہار KLF15 کے ریگولیشن پر تبدیل ہوتا ہے، بشمول KLF15 کے ذریعے براہ راست ریگولیٹ کیے جانے والے پروٹین اور وہ پروٹین جو بالواسطہ طور پر ریگولیٹ ہوتے ہیں یا ترجمہ کے بعد تبدیل ہوتے ہیں۔ HRMCs کو SILAC کا استعمال کرتے ہوئے کلچر کیا گیا تھا، اور KLF15 کو پلاسمڈ ٹرانسفیکشن کے ذریعے خلیوں میں زیادہ متاثر کیا گیا تھا۔ ایل سی / ایم ایس کا پتہ لگانے کے لئے پروٹین جمع کیے گئے تھے، اور 1357 مختلف پروٹین حاصل کیے گئے تھے۔ GO اور پاتھ وے کے تجزیوں سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ کچھ امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے پروٹین ہر جگہ شامل تھے۔ جین اور پروٹین کے اعداد و شمار کو آپس میں جوڑا گیا تھا۔ تحقیق کے مقصد سے متعلق نہ ہونے والے جین اور KLF15 کے ذریعے براہ راست ریگولیٹ نہ ہونے والے جینز کو ہٹا دیا گیا تھا۔ بالآخر، 52 جینوں کی اسکریننگ کی گئی۔ ان میں سے، سب سے زیادہ واضح اظہار کے فرق کے ساتھ پانچ جینوں کا انتخاب کیا گیا جو پھیلاؤ سے سب سے زیادہ قریب سے متعلق تھے۔ HRMCs، ChlP-PCR اور ڈوئل لوسیفریز رپورٹر اسسیس کو پھیلانے میں پاتھ وے تجزیہ، SUMO1 اور KLF15 اظہار تجزیہ کے مشترکہ نتائج کو دیکھتے ہوئے، پروٹین SUMO1 کو KLF15 کے ہدف جین کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔

ubiquitin کے علاوہ، UBLproteins کی بڑھتی ہوئی تعداد، 3637 بشمول SUMO، 38 نیورل پریسرسر سیل-اظہار، ترقیاتی طور پر ڈاون ریگولیٹڈ 8 (NEDD8) 3940 اور انٹرفیرون محرک جین 15 (ISG15)، 41 کی نشاندہی کی جا رہی ہے۔ یہ ترمیم کرنے والے پروٹین مختلف قسم کے حیاتیاتی عمل کو طاقتور طریقے سے منظم کرتے ہیں۔ سبسٹریٹس میں SUMO کا ہم آہنگ اضافہ، جسے SUMOylation کہا جاتا ہے، ایک پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم ہے جو سیلولر پروسیسز کی ایک سیریز میں شامل ہے، بشمول نیوکلیئر-سائٹوسولک ٹرانسپورٹ، ٹرانسکرپشن ریگولیشن، اپوپٹوسس، پروٹین سٹیبلٹی کنٹرول، تناؤ کے ردعمل اور سیل سائیکل کی ترقی۔ 27SUMO عام طور پر ہوتا ہے۔ پروٹین سبسٹریٹس کے قبول کرنے والے لائسین کی باقیات کے ساتھ منسلک ہے جو ایک متفقہ ترتیب کو برقرار رکھتا ہے اور پروٹین-پروٹین کے تعامل کے ضابطے کے ساتھ ساتھ ذیلی سیلولر کمپارٹمنٹلائزیشن اور پروٹین کے استحکام میں تعاون کرتا ہے۔ اور سیل سائیکل ریگولیٹری پروٹین کو مستحکم کرنا۔ 43 لہٰذا، لٹریچر رپورٹ اور جامع اسکریننگ اور تجزیہ کے نتائج کے ساتھ مل کر، ہم نے اس بات پر توجہ مرکوز کی کہ KLF15 کس طرح میسنجیل سیل کے پھیلاؤ پر SUMO1 کے اثر کو کنٹرول کرتا ہے۔

SUMO1 کے سبسٹریٹس کی شناخت کرنے کے لیے، ہم نے IPA ڈیٹا بیس اور SUMOsp سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے SUMO1 کا نیٹ ورک تجزیہ کیا۔ P53 پر شائع شدہ تحقیق کے ساتھ مل کر، ہمارے ابتدائی اسکریننگ ڈیٹا نے P53 کو SUMO1 کے نیچے دھارے کے مالیکیول کے طور پر SUMOylation ترتیب YKxD/E کے ساتھ تجویز کیا۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ P53 SUMOylation،45 کا سبسٹریٹ تھا اور بہتر P53 SUMO1 کنجوجیشن نے P53 کے استحکام اور سرگرمی کو فروغ دیا اور se-nescence کی حوصلہ افزائی کی۔ SUMO1-P53 اور P53، یہ ​​بتاتا ہے کہ P53 SUMO1 کا ایک SUMOylation سبسٹریٹ تھا۔

ابھرتے ہوئے شواہد نے اشارہ کیا ہے کہ SUMOylation اور de-SUMOylation متعدد نیفروپیتھک بیماریوں میں کردار ادا کرتے ہیں، جیسے کہ رینل ڈیزنیسیس، رینل کارسنوما، گلوومیرولر بیماری، پوڈوسیٹ اپوپٹوس، اور رینل میڈولا ہائپرٹونسیٹی، گردے کی شدید چوٹ اور نیفرولیتھیاسس۔{1} KLF15، SUMO1، P53 SUMOylation اور MC پھیلاؤ کے درمیان تعلق، ہم نے ان خلیوں پر منتقلی کے علاج کا ایک سلسلہ انجام دیا جو PDGF-BB کی حوصلہ افزائی کے پھیلاؤ سے گزرے تھے۔ KLF15 کے اوور ایکسپریشن نے SUMO1 کے اظہار کو ریگولیٹ کیا، جبکہ SUMO1 کے زیادہ اظہار نے KLF15 کے اظہار کو متاثر نہیں کیا۔ یا تو KLF15 یا SUMO1 اوور ایکسپریشن نے P53 کے SUMOylation میں اضافہ کیا اور PDGF-BB کے ذریعہ سیل پھیلاؤ کی مخالفت کی۔ جب SUMO1 کے اظہار کو روک دیا گیا تھا، P53 کی SUMOylation کو بھی روک دیا گیا تھا، اور KLF15 نے سیل کے پھیلاؤ پر اپنا مخالف اثر کھو دیا تھا۔ جاندار کےاندر. MCs کے پھیلاؤ میں mesangial proliferative nephritis کے بڑھنے کے ساتھ آہستہ آہستہ اضافہ ہوا، جبکہ KLF15، SUMO1 اور P53 کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ خلیوں اور بافتوں میں مربوط مشاہدات پر غور کرتے ہوئے، ہم ابتدائی طور پر یہ نتیجہ اخذ کرتے ہیں کہ KLF15 SUMO1 کے ذریعے P53 کے SUMOylation کو منظم کرتا ہے، اس طرح MC کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔

5. نتائج

کچھ مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ KLF15 MCs کے پھیلاؤ کو منظم کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ اس کام میں، ہم نے اس ٹرانسکرپشن عنصر کے ذریعہ ثالثی MC پھیلاؤ کو دبانے کے طریقہ کار کی کھوج کی۔ ہم نے بائیو انفارمیٹکس تجزیوں کے ذریعے MCs میں KLF15 کے بنیادی ہدف کے طور پر SUMO1 کی شناخت کی جس میں ChIP-Seq اور SILAC-LC/MS شامل ہیں۔ مزید برآں، IPA ڈیٹا بیس اور SUMOsp سافٹ ویئر کی مدد سے، ہم نے طے کیا کہ P53 SUMO1 کا براہ راست ذیلی حصہ تھا۔ ان وٹرو اور ان ویوو تجربات نے اس بات کی تصدیق کی کہ KLF15 SUMO1 کے اظہار کو فروغ دے سکتا ہے اور P53 کا SUMOylation پھر MCs (Figure S2) کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔ یہ نتائج MC پھیلاؤ میں KLF15 کے ریگولیٹری کردار کو سمجھنے میں معاون ہیں اور MC پھیلاؤ سے متعلق گردے کی بیماریوں کے نئے علاج تلاش کرنے کے لیے ایک نظریاتی بنیاد فراہم کرتے ہیں۔