Cistanche Deserticola Polysaccharides کا نیورو پروٹیکٹو اثر ہوتا ہے۔

مزید معلومات کے لیے:Ali.ma@wecistanche.com

یو لیو، وغیرہ

خلاصہ:

اسکیمیا اسٹروک ایک بیماری ہے جس میں زیادہ بیماری اور اموات ہوتی ہیں۔Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز(CDP) وسیع پیمانے پر فائدہ مند اثرات کا حامل ہے، بشمول ہیپاٹو پروٹیکشن اور امیون ہومیوسٹاسس۔ جہاں تک ہم جانتے ہیں، سی ڈی پی کا حفاظتی اثر(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)آکسیجن گلوکوز کی کمی/ریپرفیوژن (OGD/RP) سے زخمی ہونے والے نیوران پر تحقیق نہیں کی گئی ہے۔ اس مطالعہ میں، OGD/RP نے PC12 سیل ماڈل کو زخمی کیا۔ مختصراً، سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)({{0}}.05، 0.5، اور 5 ug/ml) ریفرفیوژن سے پہلے دیا گیا تھا۔ سی ڈی پی کا حفاظتی اثر(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)اس کے بعد سیل کی قابل عملیت، لییکٹیٹ ڈیہائیڈروجنیز (LDH) کے رساو، [Ca2 پلس] I، مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل (MMP) اور سیل اپوپٹوسس، ریپرفیوژن کے بعد اینڈریڈوکس اسٹیٹس کی بنیاد پر جانچ کی گئی تھی جس کا اندازہ ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (آر او ایس)، کیٹلاسیس (آر او ایس) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ CAT)، glutathione peroxidase (GSH-Px) اور کل اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت۔ اس حقیقت کی بنیاد پر کہ پارکنسنز کی بیماری سے وابستہ پروٹین DJ-1 endogenous antioxidation میں حصہ لیتا ہے اور انجام دیتا ہےneuroprotectiveاسکیمیا اسٹروک کے بعد اثرات، ہم نے CDP کے درمیان تعامل کی تحقیقات کی۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)اور DJ{{0}}۔ DJ-1 اظہار کا پتہ ELISA اور ویسٹرن بلاٹ تجزیہ کے ذریعے لگایا گیا تھا، اور DJ-1 کی ٹرانسلوکیشن کا اندازہ امیونو فلوروسینس کے ذریعے کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ CDP (0.05، 0.5، اور 5 ug/ml) نے PC12 سیل کی موت کو کم کیا، MMP اور کیلشیم ہومیوسٹاسس کو محفوظ رکھا؛ inhibitedoxidative تناؤ، اور سیل apoptosis میں کمی۔ مزید برآں، CDP (5 ug/ml) واضح طور پر DJ{10}} سراو اور اظہار کو متحرک کرتا ہے۔ مجموعی طور پر، نتائج نے تجویز کیا کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)لگاتا ہے aneuroprotectiveOGD/RP-حوصلہ افزائی چوٹ کے خلاف اثر آکسیڈیٹیو تناؤ کو روک کر اور DJ-1 کے راستے کو منظم کر کے

مطلوبہ الفاظ:Cistanche deserticola, Polysaccharides, Neuroprotective, Oxygen glucose deprivation/reperfusion, Oxidative stressDJ-1

Cistanche UK مصنوعات کے لیے کلک کریں۔

1. تعارف

اسکیمک اسٹروک اموات کی دوسری بڑی وجہ ہے اور عالمی سطح پر طویل مدتی معذوری کی بنیادی وجہ ہے [1]۔ 2030 میں فالج کی وجہ سے ہونے والی اموات کی تعداد 7.8 ملین تک بڑھنے کی توقع ہے [2]۔ چین میں، 58 سے 142 فی 100،000 لوگ ہر سال فالج سے مرتے ہیں۔ اس طرح، اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ کو ریورس کرنے والی موثر حکمت عملی تیار کی جانی چاہیے۔ وسیع شواہد اس بات کی تائید کرتے ہیں کہ آکسیڈیٹیو تناؤ ایک بڑا عنصر ہے جو ریپرفیوژن کے دوران دماغی انفکشن کی نشوونما اور ترقی کو فروغ دیتا ہے[3,4]۔ لہذا، مؤثر دریافتneuroprotectiveROS کو کم کرنے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو دبانے کے قابل ایجنٹوں نے تحقیق میں کافی دلچسپی حاصل کی ہے۔ پارکنسنز کی بیماری سے وابستہ پروٹین ڈی جے-1 اینٹی اپوپٹوٹک اور اینٹی آکسیڈیٹیو جین اظہار [4,5] کو متحرک کرکے نیورو پروٹیکشن میں ثالثی کرتا ہے۔ DJ-1 کو آکسیڈیٹیو تناؤ اور مائٹوجن محرک کے ذریعہ مائٹوکونڈریا میں منتقل کیا جا سکتا ہے اور پیتھولوجیکل حالات جیسے چھاتی کا کینسر، میلانوما، اور OGD/RP چوٹ [6] کے تحت ایکسٹرا سیلولر میٹرکس میں محفوظ کیا جا سکتا ہے۔ مزید یہ کہ، ڈی جے-1 اسکیمک نیوروڈیجنریشن کے لیے علاج کے ہدف میں کارآمد ہے کیونکہ اینٹی آکسیڈیشن [4,7] میں اہم کردار ہے۔ پچھلے 10 سالوں میں، کئی گروپس نے تصدیق کی ہے کہ DJ-1 نےneuroprotectiveVivofocal دماغی اسکیمیا ماڈلز اور وٹرو OGD/RP ماڈلز پر اثرات [6–9]۔دریں اثنا، سائکلوسپورین A اور سوڈیم فینائل بیوٹریٹ سمیت کچھ دوائیں DJ-1 اپریگولیشن انیشیمیا اسٹروک کے ذریعے نیورونل سیل کی موت کو منسوخ کرتی ہیں [9,10 ]

Cistanchedeserticola، کا لازمی خشک پوداCistanchedeserticolaYCMa اور Cistanche tubulosa Wight، بنیادی طور پر شمالی اور شمال مغربی چین کے صحرائی علاقوں میں پیدا ہوتا ہے [11]۔ C. deserticola کھانے کے قابل ہے اور اسے 'صحراوں کی Ginseng' کے طور پر نوازا گیا ہے۔ ایکیوپوائنٹ نسخے میں، itis کو گردوں کی دائمی بیماری، جنسی کمزوری، خواتین میں بانجھ پن، لیکوریا، میٹروریاجیا، اور بوڑھے قبض کے علاج کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے [12].C. deserticola polysaccharides، سے الگ تھلگ ایک اہم فعال جزوCistanche deserticola. سی ڈی پی، مدافعتی فنکشن اور لپڈ بیلنس کو موڈیلیٹ کرتا ہے اور بڑھاپے، آکسیڈیشن، اور جگر کے نقصان سے تحفظ فراہم کرتا ہے۔ مزید یہ کہ، سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)دل اور جگر میں اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ کو روکتا ہے [13,14]۔ حالیہ مطالعات نے رپورٹ کیا کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)غیر زہریلے ہیں[12,15,16]، اور C. Deserticola سے نکالے گئے دیگر فائٹو کیمیکل، بشمول echinacoside، isoacteoside، acteoside، اور salidroside، نمائشneuroprotectiveاثرات [11,12]۔ تاہم، اسکیمک اسٹروک کے نقصان کو کم کرنے کے لیے CDP کے ممکنہ استعمال کی ابھی تک اطلاع نہیں ملی ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم قیاس کرتے ہیں کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)نیورو پروٹیکشن کے لئے آکسیڈیٹیو اسٹریس کو روکتا ہے۔ سی ڈی پی کے ممکنہ حفاظتی اثرات(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)OGD/RP زخمی PC12cells کا استعمال کرتے ہوئے انیشیمیا اسٹروک نقصان کی جانچ کی گئی۔ اس کے بعد DJ-1 سے وابستہ بنیادی تعاملات کی کھوج کی گئی۔

2. طریقے

2.1 سیل کلچر اور OGD/RP ماڈل

PC12 سیلز کو RPMI 1640 میڈیم میں 37 ڈگری پر 10 فیصد FBS پر مشتمل ایک نارموکسک انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا جس میں 5 فیصد CO2 تھا۔ میڈیم کو ہر 48 گھنٹے بعد تبدیل کیا جاتا تھا۔ OGD/RP ماڈل تیار کیا گیا تھا۔ پی سی 12 سیلز دھوئے گئے اور ایرل کے متوازن نمک کے محلول کے سامنے لائے گئے۔ اس کے بعد، خلیوں کو 4 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر 5 فیصد CO2 اور 95 فیصد N2 پر مشتمل اینیروبک چیمبر میں منتقل کیا گیا اور پھر انہیں دوبارہ آکسیجن کرنے کی اجازت دی گئی۔ دوبارہ آکسیجنیشن کے بعد، خلیوں کو 24 گھنٹے کے لیے نارموکسک انکیوبیٹر پر رکھا گیا تھا۔

2.2 منشیات کی انتظامیہ

سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)Yuanye حیاتیاتی ٹیکنالوجی کمپنی، شنگھائی، چین (C23J7Y18405،> 98 فیصد پاکیزگی) سے خریدا گیا تھا۔ نیموڈیپائن، اسکیمیا اسٹروک کے لیے پہلی لائن روک تھام کرنے والی دوا، کو ایک مثبت کنٹرول کمپاؤنڈ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا [17-19]۔ نموڈیپائن انجیکشن بائر کمپنی کی طرف سے تھا۔ سیلز کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، یعنی کنٹرول، ve ہیکل (OGD/RP)، Nimo (5 ug/ml)، CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)(0.05 ug/ml)، CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)(0.5 ug/ml) اور CDP (5 ug/ml)۔ نیموڈپائن اور سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)reperfusion سے پہلے شامل کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ کو نارمل میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا اور اسے نارمل حالت میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔

2.3۔ سیل کی قابل عملیت: ایم ٹی ٹی اور این آر یو اسسیس

PC12 خلیات (6 × 103 فی کنواں) کو ایک 96- ویل کلچر پلیٹ میں سیڈ کیا گیا تھا۔ خلیوں کا علاج ہر گروپ کی ضرورت کے مطابق کیا گیا تھا۔ ایم ٹی ٹی (سولاربیو، چین) کو 5 ملی گرام/ملی لیٹر کے ارتکاز میں خلیات میں شامل کیا گیا اور 37 ڈگری پر 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ Formazan زندہ خلیوں میں succinate dehydrogenase کی کمی کی پیداوار ہے [20]۔ DMSO کو جنریٹڈ بلیو فارمازان کی تحلیل کے لیے شامل کیا گیا تھا۔ مائکروپلیٹ ریڈر (تھرمو، USA) کے ساتھ 490 nm کی طول موج پر جذب کا پتہ چلا جب خلیوں کو 25 ڈگری پر 10 منٹ تک ہلایا گیا۔ سیل کی عملداری کے نتائج کنٹرول گروپ [21] کے فیصد کے طور پر ظاہر ہوئے تھے۔

غیر جانبدار ریڈ اپٹیک (NRU) پرکھ پہلے شائع شدہ پروٹوکول [22] کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ جب ریپرفیوژن پیریڈز مکمل ہو گئے تو، نیوٹرل ریڈ (سولاربیو، چائنا) کو 50 ug/ml کے ارتکاز پر سیلوں میں شامل کیا گیا۔ مرکب کو 3 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، خلیات کو 0.5 فیصد فارملڈہائڈ اور 1 فیصد کیلشیم کلورائیڈ پر مشتمل محلول کے ساتھ تیزی سے دھویا گیا۔ خلیوں کو بعد میں ایک مرکب میں شامل کیا گیا تھا جس میں 1 فیصد ایتھیلک ایسڈ اور 50 فیصد اینہائیڈروسیتھانول تھا۔ 37 ڈگری پر 20 منٹ تک خلیوں کو ہلانے کے بعد پلیٹوں کو 540 nm جذب پر پڑھا گیا۔ سیل کی عملداری کے نتائج کنٹرول گروپ کے فیصد کے طور پر ظاہر کیے گئے تھے۔

Cistanche deserticola polysaccharidesہے ایکنیورو پروٹیکٹو اثر

2.4 سائٹوٹوکسائٹی کا اندازہ

LDH ایک سائٹوپلاسمک انزائم ہے جو لییکٹیٹ ٹاپائرویٹ کے آکسیکرن کو اتپریرک کرتا ہے۔ جب خلیے کی جھلی کو نقصان پہنچتا ہے تو ایل ڈی ایچ تیزی سے خلیے کے سیال میں خارج ہوتا ہے۔ لہذا، LDH کا پتہ لگانے عام طور پر cytotoxicity کی تشخیص کے لئے انجام دیا جاتا ہے. [23]۔ تجرباتی طریقہ کار نے LDH پرکھ کٹ (جیانچینگ، چین) کے ذریعے فراہم کردہ تجارتی کٹ ہدایات پر عمل کیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ ہر نمونے کی جاذبیت 440 nm پر پائی گئی۔ سیل کی موت کا فیصد درج ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا: قابل عمل (فیصد)=(OD علاج − ODTreatment blank)/(OD Max LDH سرگرمی − OD Max LDH سرگرمی خالی) × 100 فیصد۔

2.5 انٹرا سیلولر Ca2 پلس حراستی کا پتہ لگانا

Ca2 پلس کا انٹرا سیلولر ارتکاز Fluo-3/AM [15] سے ماپا گیا۔ PC12 سیلز کو تین بار PBS سے دھویا گیا اور پھر 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, China) کے ساتھ اندھیرے میں 37 ڈگری پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد خلیوں کو ایکسٹرا سیلولر ڈائی صاف کرنے کے لیے پی بی ایس سے تین بار دھویا گیا۔ Fluo-3/AM کی فلوروسینس کی شدت کا تعین لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ (اولمپس، جاپان) پر کیا گیا تھا۔ سافٹ ویئر پیکج Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer اور ImageJ کو گرے اسکیل ویلیو کے حساب کے لیے استعمال کیا گیا تھا

2.6۔ ایم ایم پی کی پیمائش

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine; Beyotime, China) ایک آسان وولٹیج حساس تحقیقات ہے جو عام طور پر داغ لگانے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ خلیات اور ایم ایم پی کی تشخیص [24]۔ پی سی 12 سیلز کو ٹھنڈے پی بی ایس سے دو بار دھویا گیا اور پھر اندھیرے میں 37 ڈگری پر 15 منٹ تک 50 فیصد میڈیم اور 50 فیصد ورکنگ مائع پر مشتمل مکسچر کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ ریڈینڈ گرین فلوروسینس کی تصاویر لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپی کے ذریعے حاصل کی گئیں۔ سرخ اور سبز فلوروسینس سگنلز کا رشتہ دار تناسب MMP پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا تھا [25]۔ سافٹ ویئر پیکجOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer اور ImageJ کو گرے اسکیل ویلیو کے حساب سے استعمال کیا گیا تھا۔

2.7۔ اپوپٹوسس کا پتہ لگانے کا پرکھ، Hoechest33342، اور فلو سائٹومیٹری تجزیہ

Hoechst33342، ایک DNA بائنڈنگ ڈائی، سیل اپوپٹوسس [26] کے امتحان کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ریفرفیوژن کے بعد، پی سی 12 خلیوں کو پی بی ایس سے تین بار دھویا گیا اور اندھیرے میں 37 ڈگری پر 15 منٹ کے لئے 5 ug/ml کی حراستی Hoechst33342 (Beyotime، China) کے ساتھ لگایا گیا۔ پھر، خلیات کو لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ کے تحت دیکھا گیا۔ تھیپوپٹوٹک خلیوں نے شدید نیلے رنگ کی فلوروسینس اور نیوکلئس گاڑھاو کی نمائش کی۔ ہر داغ لگانے کے تجربے کے لئے، تین بے ترتیب فیلڈز کو پکڑا گیا اور مقدار درست کردی گئی۔ Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer اور ImageJ کو گرے اسکیل ویلیو کے حساب کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اپوپٹوٹک خلیوں کی فیصد کا حساب درج ذیل فارمولے کے ذریعے کیا گیا: اپوپٹوٹک رقم/کل رقم × 100 فیصد [27]۔

2.8۔ ROS نسل کی پیمائش

فلوروسینٹ پروب 2′,7′- dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA; Jiancheng, China) سیل کی جھلیوں میں گھس سکتا ہے اور نان فلوروسینٹ DCFH میں ہائیڈولائزڈ کیا جا سکتا ہے۔ DCFH کو انٹرا سیلولر ROS tofluorescent DCF [29] کے ذریعہ آکسائڈائز کیا جاتا ہے۔ ریفرفیوژن کے بعد، خلیوں کو پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھویا گیا اور پھر اندھیرے میں 37 ڈگری پر 45 منٹ کے لئے 10 μM کی حتمی حراستی میں DCFH-DA کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ فلوروسینس 485 nm کی حوصلہ افزائی طول موج اور 535 nm کی اخراج طول موج کے ساتھ افلوورسنس سپیکٹرو فوٹومیٹر کے ذریعہ مشاہدہ کیا گیا تھا۔

Cistanche deserticola polysaccharidesہے ایکنیورو پروٹیکٹو اثر

2.9 آکسیڈیٹیو تناؤ کے اشارے کا تعین: CAT، GSH-Px، اور T-AOClevels

خلیوں کو کھرچ کر پی بی ایس میں دوبارہ معطل کردیا گیا تھا۔ حاصل کردہ سیل سسپنشنز کو برف پر 45 بار سونیکیٹ کیا گیا اور 4 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے 1000r/منٹ پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹس کو برقرار رکھا گیا تھا اور پتہ لگانے کے لئے استعمال کیا گیا تھا [24]۔ سیل سپرنٹنٹ کے کل پروٹین مواد کی پیمائش BCA پروٹین پرکھ ریجنٹ کٹ (KeyGEN، China) سے کی گئی۔ CAT، GSH-Px، اور T-AOC کی سطحوں کی سرگرمیوں کو مینوفیکچررز کی ہدایات (جیانچینگ، چین) کے مطابق ماپا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ ہر نمونے کی جاذبیت کا پتہ چلا۔

2.10 ایکسٹرا سیلولر DJ-1 ارتکاز کی پیمائش

پی سی 12 سیل (6 × 103 فی کنواں) کو 96- ویل کلچر پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ ریفرفیوژن کے بعد، سیل سپرنٹنٹ کو ڈی جے-1/پارک-7 ایلیسا کٹ (ریبیو، امریکہ) کے ذریعے جمع اور تجزیہ کیا گیا تھا۔ ) کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق [9]۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ 450 nm یا 540 nm کی دوہری طول موج پر ہر نمونے کی جاذبیت کا پتہ چلا۔

2.11۔ مغربی دھبے کا تجزیہ

سیلولر پروٹین کو مینوفیکچررز کی ہدایات (KeyGEN، چین) کے مطابق آئس کولڈ لیسیز بفر کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ پروٹین کی حراستی کا تعین BCA پروٹین پرکھ ریجنٹ کٹ کے ساتھ کیا گیا تھا۔ ہر گروپ سے مساوی مقدار میں پروٹین لائسیٹس (20 ug) کو 12 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس میں حل کیا گیا اور بعد میں نائٹروسیلوز جھلی پر منتقل کیا گیا۔ اس جھلی کو کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے کے لیے 5 فیصد سکم دودھ پر مشتمل PBS کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر 4 ڈگری پر رات بھر اینٹی PARK7/DJ-1 اینٹی باڈیز (ab76008, Abcam; dilution 1:1000) کے ساتھ جانچ کی گئی۔ پھر، جھلی کو PBST کے ساتھ تین بار دھویا گیا اور 2 گھنٹے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر سیکنڈری اینٹی باڈی بکری اینٹی خرگوش IgG (SA00001-2، پروٹینٹیک گروپ؛ dilution1:5000) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ اینٹی باڈی اینٹی- -ٹیوبولن (10759-1-AP، پروٹینٹیک گروپ؛ ڈائلیشن 1:1000) کو کنٹرول سمجھا جاتا تھا۔ پروٹین بینڈ کو بہتر کیمیلومینیسینس (ECL) ری ایکشن ری ایجنٹس کے ذریعے تصور کیا گیا تھا۔ بینڈ کی کثافت کو کوانٹی ون تجزیہ سافٹ ویئر v.4.6.9 سے ماپا گیا۔

2.12۔ امیونوسیٹو کیمسٹری تجزیہ

پی سی 12 سیلز کو ریپرفیوژن ٹریٹمنٹ [9] کے بعد کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ کے لیے 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ میں طے کیا گیا تھا۔ ضرورت سے زیادہ paraformaldehyde کو ہٹانے کے بعد، خلیات کو کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ کے لیے PBS میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا جس میں 0.3 فیصد Triton X-100 تھا۔ پھر، خلیات کو پی بی ایس سے تین بار دھویا گیا اس سے پہلے کہ وہ 5 فیصد نارمل گوٹ سیرم سے 1 گھنٹہ تک لگائے جائیں۔ اس کے بعد خلیوں کو خرگوش ماؤس مونوکلونل اینٹی اے ٹی پی سنتھیس چین (MABS1304، EMD ملی پور، ڈائلیشن 1:200) کے ساتھ مائٹوکونڈریا کے داغ کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا اور بعد ازاں اینٹی PARK7/DJ-1 اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ 100) پروٹین DJ-1 کی جانچ کے لیے۔ خلیات کو بکری مخالف خرگوش IgG-Alexa 488 (سبز؛ A11034، Invitrogen؛ dilution 1:1000) اور بکری اینٹی ماؤس IgG-Alexa 594 (سرخ؛ A11032؛ Invitrogen؛ dilution 1:1000) سے دھویا گیا اور انکیوبیٹ کیا گیا۔ منٹ آخر میں، خلیوں کو پی بی ایس کے ساتھ تین بار دھویا گیا اور DAPI پر مشتمل ایک بڑھتے ہوئے میڈیم کے ساتھ شیشے کی سلائیڈوں پر لگایا گیا۔ امیونو فلوروسینٹ امیجز کو لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ کا استعمال کرکے تصور کیا گیا تھا۔

Cistanche deserticola polysaccharidesہے ایکنیورو پروٹیکٹو اثر

2.13۔ ڈیٹا/شماریاتی تجزیہ

تمام اقدار کو اوسط ± SD کے طور پر دکھایا گیا تھا۔ اہمیت کا تعین تغیرات کے یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) کے ذریعے کیا گیا، جس کے بعد Dunnett کا کثیر موازنہ ٹیسٹ ہوا۔ p < .05="" کو="" شماریاتی="" اہمیت="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" spss="" 17.0="" شماریاتی="" سافٹ="" ویئر="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" تجرباتی="" ڈیٹا="" کا="" تجزیہ="" کیا="">

3. نتائج

3.1 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)OGD/RP-حوصلہ افزائی سیل نقصان کو روکتا ہے۔

OGD/RP کے سامنے آنے والے PC12 خلیات نے تعداد میں نمایاں کمی کی نمائش کی۔ سیل کی شکل بدل گئی تھی اور سیل کی جھلی ٹوٹ گئی تھی۔ MTT پرکھ میں، CDP میں سیل کی قابل عملیاں(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس ({{0}}.05، 0.5 اور 5 ug/ml) بالترتیب 58.91 فیصد ± 5.40 فیصد، 61.13 فیصد ± 3.81 فیصد اور 68.57 فیصد ± 3.24 فیصد تھے، p <.05 (تصویر="" 1a)="" اور="" گاڑی="" کے="" ساتھ="" 51.68="" فیصد="" ±="" 3.89="" فیصد="" تھا۔="" ان="" اقدار="" نے="" اشارہ="" کیا="" کہ="">(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)خلیات کو OGD/RP چوٹ سے بچایا اور سیل کی موت میں کمی آئی۔ مزید برآں، نیمو گروپ میں سیل کی قابل عملیت 77.02 فیصد ± 5.22 فیصد تھی، جو کہ تقریباً 5 ug/ml CDP کے برابر ہے۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)علاج شدہ گروپ.

NRU پرکھ میں، CDP میں سیل کی قابل عملیاں(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس ({{0}}.05، 0.5، اور 5 ug/ml) بالترتیب 52.03 فیصد ± 4.72 فیصد، 58.49 فیصد ± 2.50 فیصد اور 69.17 فیصد ± 3.91 فیصد تھے، (تصویر 1B) اور وہ گاڑی کے ساتھ 47.14 فیصد ± 2.88 فیصد تھا۔ اقدار نے CDP کے ارتکاز پر منحصر حفاظتی اثر کی نشاندہی کی۔

گاڑی کے برعکس (44.73 فیصد ± 3.30 فیصد)، سی ڈی پی میں ایل ڈی ایچ کی ریلیز نمایاں طور پر کم ہوئی تھی۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس سی ڈی پی میں(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس ({{0}}.05، 0.5 اور 5 ug/ml)، LDH کے رساو کی شرح بالترتیب 32.41 فیصد ± 3.70 فیصد، 27.13 ± 2.79 فیصد اور 23.13 فیصد ± 4.59 فیصد تھی، p <.01 (تصویر="" 1)="" 1c)۔="" مزید="" برآں،="" نیمو="" گروپ="" میں="" ایل="" ڈی="" ایچ="" کے="" رساو="" کی="" شرح="" 21.99="" فیصد="" ±="" 4.02="" فیصد="" تھی،="" جو="" کہ="" 5="" ug/ml="" cdp="" علاج="" شدہ="" گروپ="" میں="" تقریباً="" برابر="">

3.2 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)[Ca2 پلس ]i کا کم OGD/RP-حوصلہ افزائی اضافہ

کنٹرول گروپ (373.62 ± 75.69) کے برعکس OGD/RP چوٹ کے بعد PC12 خلیوں میں انٹرا سیلولر Ca2 پلس کی سطح کو 4146.60 ± 195.97 تک بڑھا دیا گیا تھا۔ سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس ({{0}}.05، 0.5 اور 5ug/ml) خوراک پر انحصار کرتے ہوئے انٹرا سیلولر Ca2 پلس کی سطح کو 2921.25 ± 222.19، 2015.85 ± 230.53 اور 1768.43 ± 426.1F اور A. )۔ مزید برآں، 5 ug/ml CDP علاج شدہ گروپ میں Ca2 پلس کی سطح کم ہو کر اس کے مقابلے میں نمو گروپ (1591.19 ± 213.21) کی سطح پر آ گئی۔

3.3 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)MMP کی کم OGD/RP-حوصلہ افزائی کی کھپت

کنٹرول گروپ (1.67 ± 0.89) کے مقابلے میں، گاڑیوں کے گروپ (0.48 ± 0.10) نے سرخ FL سے زیادہ سبز FL فلوروسینس کی نمائش کی۔ فلوروسینس (تصویر 2 بی اور ڈی)۔ سرخ اور سبز FL فلوروسینس کے درمیان تناسب 0.5 اور 5 ug/ml CDP میں 1.11 ± 0.26 اور 1.18 ± 0.16 تک کم ہو گیا تھا۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)بالترتیب علاج شدہ گروپس، p <.01. گرین="" fl="" فلوروسینس="" میں="" نمایاں="" کمی="" واقع="" ہوئی="">

3.4 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)OGD/RP-حوصلہ افزائی سیل اپوپٹوسس کو روکا۔

گاڑھا کرومیٹن یا بکھرے ہوئے نیوکلی کی نمائش کرنے والے خلیوں کو اپوپٹوٹک خلیوں کے طور پر اسکور کیا گیا تھا [30]۔ Hoechst33342 پرکھ کے نتائج نے OGD/RP (تصویر 3A اور C) کے بعد گاڑھا ہوا مرکزہ ظاہر کیا۔ گاڑیوں کے گروپ میں نیوکللی میں ایک اعلی FL فلوروسینس کی شدت دیکھی گئی۔ نیوکلی کی FL فلوروسینس کی شدت 5 ug/ml CDP میں کمزور ہو گئی تھی۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)علاج شدہ گروپ. ہم نے FITC-Annexin V/PI ڈبل سٹیننگ (تصویر 3B اور D) کا استعمال کرتے ہوئے ساتھی cytometry کے ذریعے PC12 خلیوں میں apoptotic شرح کا تجزیہ کیا۔ کنٹرول گروپ میں 4.16 فیصد ± 0.24 فیصد سیل اپوپٹوٹک ریٹ تھا، جب کہ گاڑیوں کے گروپ میں 22.98 فیصد ± 0.66 فیصد تھا۔ 5 ug/ml CDP سے علاج شدہ گروپ میں، سیل اپوپٹوس کی شرح 7 تھی۔{14}} فیصد ± 1.16 فیصد تھی۔

3.5 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)کم شدہ OGD/RP کی حوصلہ افزائی انٹرا سیلولر ROS جمع اور محفوظ شدہ ریڈوکس حیثیت

سی ڈی پی کے اثرات(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)آکسیڈیٹیو تناؤ کا مظاہرہ ROS جنریشن، GSH-Px، CAT سرگرمیوں، اور T-AOC کی سطحوں کی بنیاد پر کیا گیا۔ OGD/RP سے زخمی PC12 خلیوں میں ROS کی سطح بڑھ گئی اور کنٹرول گروپ (p <.01) کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" زیادہ="" ہو="" گئی۔="" دریں="" اثنا،="" cdp="" میں="" ros="" کی="">(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپس ({{0}}.05، 0.5 اور 5 ug/ml) خوراک پر منحصر انداز میں کم ہوئے (p <.01؛ تصویر="" 4a)۔="" مزید،="" cdp="" نے="" گاڑی="" کے="" مقابلے="" t-aoc="" (p=""><.05؛ تصویر="" 4b)،="" cat="" (p=""><.05؛ تصویر="" 4c)="" اور="" gsh-px="" (p=""><.05؛ تصویر="" 4d)="" کی="" سطحوں="" میں="" بھی="" نمایاں="" اضافہ="" کیا۔="" گروپ="" سی="" ڈی="" پی="" میں="" اینڈوجینس="" اینٹی="" آکسیڈینٹ="" کی="">(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)گروپوں میں اضافہ ہوا.

3.6۔ سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)DJ-1 کے سراو کو متحرک کیا اور DJ کے اظہار کو بڑھایا-1

سیل سپرنٹنٹ میں DJ-1 ارتکاز کی تبدیلیوں کا پتہ چلا اور DJ-1 اور CDP کے درمیان ممکنہ تعلق کا انکشاف ہوا۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز). DJ-1 کی رہائی OGD/RP سے زخمی PC12 خلیات (تصویر 5) سے دیکھی گئی۔ DJ-1 کو 5 ug/ml CDP میں کافی حد تک ریگولیٹ کیا گیا تھا۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)علاج شدہ گروپ (38.66 ± 8.44 pg/ml) اور گاڑیوں کے گروپ (18.33 ± 3.80 pg/ml, p <.01) اور کنٹرول گروپ (9.67 ± 3.96 pg/ml, p <.01) کے مقابلے میں نمایاں اضافہ ہوا۔ .

سی ڈی پی کے اثرات کی تحقیقات کے لیے(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)DJ-1 کے انٹرا سیلولر اظہار پر، ہم نے مغربی بلاٹنگ کے ذریعہ DJ-1 پروٹین کی سطح کی پیمائش کی۔ ڈی جے-1 پروٹین ایکسپریشن لیول ریپرفیوژن کے بعد 24 گھنٹے میں نمایاں طور پر بڑھ گئے۔ اس کے برعکس، 5 ug/ml CDP پوسٹ ٹریٹمنٹ نے گاڑیوں کے گروپ (p <.01، تصویر="" 6)="" کے="" مقابلے="" dj-1="" کے="" اوور="" ایکسپریشن="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="">

3.7 سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)مائٹوکونڈریا میں بہتر DJ-1 ٹرانسلوکیشن

پی سی 12 سیلز اینٹی پارک 7/ڈی جے-1 اور اینٹی اے ٹی پی سنتھیس چین اینٹی باڈیز (تصویر 7 اور 8) سے داغدار تھے۔ اینٹی اے ٹی پی سنتھیس - مائٹوکونڈریل کمپلیکس I کے ساتھ چین اینٹی باڈی لنکس، اور بائنڈنگ اینٹیجن مائٹوکونڈریل اندرونی جھلی میں مقامی تھے۔ نتائج سے پتہ چلا کہ DJ-1 OGD/RP کی توہین کے بعد مائٹوکونڈریل اندرونی جھلی میں منتقل ہوا (تصویر 8)۔ دریں اثنا، DJ-1 اور مائٹوکونڈریا ڈبل ​​سٹیننگ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)سہولت شدہ DJ- 1 مائٹوکونڈریل ٹرانسلوکیشن اور کو-لوکلائزیشن (تصویر 8)۔ ان نتائج نے DJ-1 اور کے درمیان براہ راست تعامل کی نشاندہی کی۔neuroprotectiveسی ڈی پی کا اثر(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)(تصویر 9)۔

4. بحث

اس مطالعہ میں، ہم نے خود اطلاع دی کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)DJ-1 پروٹین کے اپ گریجولیشن کے ذریعے OGD/RP-حوصلہ افزائی PC12 سیل کے نقصان کو مؤثر طریقے سے کم کرتا ہے۔ سی ڈی پی(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)سیل کی عملداری میں بہتری، خلیے کی جھلی کو پہنچنے والے نقصان کو کم کیا، انٹرا سیلولر Ca2 پلس ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھا، MMP کے نقصان کو روکا، سیل اپوپٹوسس میں کمی، آکسیڈیٹیو تناؤ کو دبایا، DJ-1 کے اظہار کو فروغ دیا، اور DJ-1 کو مائٹوکونڈریا میں ٹرانسلوکیشن میں اضافہ۔ DJ-1 کو حال ہی میں کے ضابطے میں ملوث کیا گیا ہے۔neuroprotectiveاثر اور مائٹوکونڈریل سالمیت۔ ان نتائج نے اس بات کا قائل ثبوت فراہم کیا۔neuroprotectiveسی ڈی پی کے اثرات(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)اسکیمیا کے خلاف. مزید برآں، CDP اور DJ-1 کے درمیان تعامل aneuroprotectiveOGD/RP-حوصلہ افزائی PC12 سیل کو پہنچنے والے نقصان میں کردار۔ مندرجہ بالا نتائج CDP کے فائدہ مند اثر کے بارے میں ہماری سمجھ کو فروغ دے سکتے ہیں اور مستقبل میں فالج کے علاج کے لیے مفید معلومات فراہم کر سکتے ہیں۔

اسکیمیا اسٹروک کو بائیو کیمیکل اور مالیکیولر میکانزم کی ایک پیچیدہ سیریز سے منسوب کیا گیا ہے، جس میں ایکسائٹوٹوکسٹی، کیلشیم اوورلوڈ، اور آکسیڈیٹیو تناؤ شامل ہیں [31]۔ OGD/RP بڑے پیمانے پر اسکیمیا ریپرفیوژن کے ان وٹرو ماڈل کے طور پر استعمال ہوتا ہے اور اسے اعصابی اور حیاتیاتی کیمیکل تبدیلیوں کی تلاش کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ PC12 سیل لائن OGD/RP چوٹ کے لیے حساس ہے [2]۔ یہ ہمدرد نیورونز کی متعدد خصوصیات اور خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے [32] اور اس طرح فالج کی وجہ سے اعصابی نقصان کے طریقہ کار سے متعلق تحقیق کے لیے نیورونل سیل لائنوں کو وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے [33,34]۔ متعدد مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ آکسیڈیٹیو تناؤ فالج اور دماغی اسکیمیا کو پہنچنے والے نقصان [35–37] میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ پارکنسنز کی بیماری سے وابستہ پروٹین DJ-1 ROS کی ثالثی نیورونل چوٹ کو کم کر کے اسکیمک نیوروڈیجنریشن اور رویے کی خرابی کو روک سکتا ہے [7]۔ لہذا، ہم نے تحقیقات کے لیے OGD/RP-injury PC12 سیل ماڈل کا استعمال کیا۔neuroprotectiveسی ڈی پی کا اثر(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز).

OGD/RP کی طرف سے حوصلہ افزائی PC12 خلیوں میں چوٹ کی ڈگری کا اندازہ MTT، NRU، اور LDH ریلیز اسسیس کے ذریعے کیا گیا۔ سی ڈی پی کی انتظامیہ(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)({{0}}.05، 0.5، اور 5 ug/ml) سیل کی بقا میں بہتری اور LDH ریلیز میں کمی۔ CDP علاج کے فائدہ مند اثرات میں انٹرا سیلولر کیلشیم اوورلوڈ میں کمی اور MMP کا تحفظ بھی شامل ہے۔ انٹرا سیلولر Ca2 پلس ارتکاز کی غیر معمولیات، خاص طور پر مائٹوکونڈریل کیلشیم اوورلوڈ، نیورونل اپوپٹوسس اور اسکیمیا اسٹروک [38] کی وجہ سے ہونے والی موت سے منسلک ہیں۔ ایم ایم پی الیکٹران ٹرانسپورٹ چین کی کارکردگی کی عکاسی کرسکتا ہے اور اس نظام کے پیتھولوجیکل ڈس آرڈر انڈیکس کے طور پر اشارہ کیا گیا ہے [39]۔ انٹرا سیلولر Ca2 پلس ارتکاز اور ایم ایم پی نقصان کی دونوں بلندی نیوران کی ساخت کو غیر مستحکم کرنے کا باعث بن سکتی ہے اور آخر کار سیل کو نقصان یا سیل کی موت [21,40] کا باعث بنتی ہے۔ اس مطالعے میں، نتائج نے ظاہر کیا کہ CDP نے انٹرا سیلولر Ca2 پلس اوورلوڈ کو نمایاں طور پر روکا اور OGD/RP-injury PC12 خلیوں میں MMP کی سطح میں اضافہ کیا۔ اپوپٹوس دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ کی پیچیدہ پیتھوفیسولوجی میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔ بڑھتے ہوئے اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ اپوپٹوس کو مائٹوکونڈریل dysfunction میں ملوث کیا گیا ہے۔ ایم ایم پی کی کھپت ایک ابتدائی واقعہ ہے جس کے نتیجے میں سیل اپوپٹوسس ہوتا ہے [8,39]۔ اپوپٹوسس بے کار خلیوں کو ضائع کرنے کے لئے توانائی پر منحصر پروگرام شدہ سیل موت کا ایک عمل ہے۔ اسکیمک اسٹروک میں بہت سے نیوران اپوپٹوس سے گزریں گے [41]۔ اس مطالعے میں، ہم نے اپوپٹوسس [23,28] پر CDP کے اثر کو جانچنے کے لیے Hoechst33342 اور Annexin V-FITC/PI سٹیننگ کا مظاہرہ کیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی پی نیوکلئس کی سالمیت کو برقرار رکھتا ہے اور سیل اپوپٹوسس کی شرح کو کم کرتا ہے۔ ان تمام نتائج نے اشارہ کیا کہ سی ڈی پی کی اینٹی اپوپٹوٹک سرگرمی نے پی سی 12 خلیوں میں نیورونل چوٹ میں فائدہ مند اثر میں حصہ لیا۔

زیادہ سے زیادہ ROS جمع ہونے کی وجہ سے اسکیمیا کو پہنچنے والے نقصان سے گزرنے والے خلیات، جو لپڈ پیرو آکسیڈیشن، سیل جھلی کو نقصان، کیلشیم اوورلوڈ، اور مائٹوکونڈریل dysfunction کا باعث بن سکتے ہیں، بالآخر سیل اپوپٹوسس اور موت [42]۔ SOD، CAT، اور GSH-Px جیسے endogenous antioxidants کی کھپت نے بھی اس کی موجودگی کی نشاندہی کی تصویر 9. CDP کے حفاظتی اثرات کے لیے ممکنہ طریقہ کار(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)OGD/RP-حوصلہ افزائی PC12 سیل کو پہنچنے والے نقصان کے خلاف۔ CDP کا علاج آکسیڈیٹیو تناؤ کو دباتا ہے، Ca2 پلس ارتکاز اور MMP کو مستحکم کرتا ہے، مائٹوکونڈریا میں DJ-1 اظہار اور لوکلائزیشن کو بڑھاتا ہے۔ Y. Liu et al. بائیو میڈیسن اور فارماکو تھراپی 99 (2018) 671–680 678 اسکیمیا ریپرفیوژن کے دوران آکسیڈیٹیو تناؤ۔ اس مطالعہ میں، OGD/RP گروپ نے ROS میں نمایاں اضافہ اور CAT، GSH-Px، اور T-AOC میں 5 ug/ml CDP- علاج شدہ گروپ کے مقابلے میں کمی دکھائی۔ تاہم، ہم نے CDP گروپس میں ROS جنریشن اور اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹس (CAT، GSH-Px، اور T-AOC) کے استعمال کی شرحوں میں خاطر خواہ کمی دیکھی۔ 5 ug/ml CDP گروپ میں فائدہ مند اثرات نیمو گروپ کے قریب تھے۔ نتائج نے تجویز کیا کہ CDP ROS کی نسل کو روکتا ہے اور انزیمیٹک اینٹی آکسیڈینٹ دفاع کو بحال کرتا ہے۔

DJ-1 ایک کلیدی redox-reactive ہے۔neuroprotectiveفالج میں آکسیڈیٹیو تناؤ کے ضابطے میں شامل پروٹین۔ DJ-1 اوور ایکسپریشن کے فائدہ مند اثرات میں اسکیمیا ریپرفیوژن سے سیل کی بقا اور مائٹوکونڈریل فنکشن اور مورفولوجی کا تحفظ شامل ہے، جیسے مائٹوکونڈریا پارگمیٹی ٹرانزیشن پور اوپننگ [39,43]۔ پچھلے مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ OGD/RP کے سامنے آنے والے خلیوں میں DJ-1 کا حفاظتی اثر اس کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات اور مائٹوکونڈریا ٹرانسلوکیشن [43–45] سے متعلق ہے۔ DJ-1 ٹرانسلوکیشن کے ذریعے مائٹوکونڈریل نقائص کو کم کرنے میں موثر اینڈوجینس نیورو پروٹیکشن انجام دیتا ہے [46]۔ کئی مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ DJ-1 ٹرانسلوکیشن کا اثر مائٹوکونڈریل حرکت پر پڑ سکتا ہے، سیل سیل کے تعامل کو بڑھاتا ہے، اور دوسرے سیل پرو سروائیول عمل کو فروغ دیتا ہے۔

DJ-1 وٹرو اور ویوو ماڈلز [6,9,47,48] دونوں میں سیل کی منتقلی اور آسنجن، کیموٹیکسس، پھیلاؤ، اور اپوپٹوسس جیسے کئی عملوں کو متاثر کرتا ہے۔ OGD/RP زخمی PC12 سیلز اسٹروک ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے CDP کے درمیان ممکنہ تعلق کی تلاش کی۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)اور DJ-1۔ DJ- 1 اوور ایکسپریشن کی شناخت ELISA اور ویسٹرن بلاٹنگ سے ہوئی۔ اس فنکشن کے ساتھ، تجربات میں ایک اہم دریافت نے یہ ظاہر کیا کہ DJ-1 کا اہم حد سے زیادہ اظہار اس وقت ہوا جب CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)(5 ug/ml) ریفرفیوژن سے پہلے زیر انتظام تھا۔ اس نے ایک ممکنہ تجویز پیش کی۔neuroprotectiveCDP اور DJ کے تعلقات میں اثر-1۔ مزید برآں، ہم نے مشاہدہ کیا ہے کہ OGD/RP کے حالات میں مائٹوکونڈریا میں موجود DJ-1 اور DJ-1 کے وافر اظہار نے ROS کے لیے سیلولر حساسیت کو کم کیا اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو روکا [45]۔ نتائج سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ CDP DJ-1 کو ریگولیٹ اور بڑھاتا ہے، جو مائٹوکونڈریا کی خرابی اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے درمیان ایک مالیکیولر لنک کے طور پر کام کرتا ہے اور فالج [5,47,49–51] میں ثانوی سیل کی موت کی ترقی فراہم کرتا ہے۔ مائٹوکونڈریا میں DJ-1 کے استحکام کے ساتھ، CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)علاج نے سیل کی بقا میں اضافہ کیا، Ca2 پلس ہومیوسٹاسس کو مستحکم کیا، ایم ایم پی کی کھپت کو بہتر بنایا، اور مائٹوکونڈریل سے متعلق اپوپٹوس کو روکتا ہے [43]۔ مجموعی طور پر، ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ CDP ایک ناول کا استعمال کرتا ہے۔neuroprotectiveاسکیمک اسٹروک کے علاج میں طریقہ کار

5. نتیجہ

ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ CDP(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)PC12 سیلز کو OGD/RP سے متاثر ہونے والی چوٹ سے اس کے اینٹی آکسیڈینٹ اثرات کے ذریعے بچاتا ہے، جو جزوی طور پر DJ-1 ثالثی راستے سے منسوب ہیں۔ ان اثرات میں سیل کی جھلی کو پہنچنے والے نقصان کی شرح میں کمی، [Ca2 plus ] I ہومیوسٹاسس کا تحفظ، MMP کی کھپت میں بہتری، سیل اپوپٹوسس کی روک تھام، انٹرا سیلولر ROS کی توجہ، اور DJ-1 کی سطحوں کی ماڈیولیشن شامل ہیں۔ نتائج نے یہ بھی اشارہ کیا کہ CDP اور DJ-1 کے درمیان تعامل نیورو پروٹیکشن کو بڑھاتے ہیں اور مائٹوکونڈریل سالمیت کو برقرار رکھتے ہیں۔ لہذا، سی ڈی پی کے ذریعے کمزور نیوران کی حفاظت کی جا سکتی ہے۔(Cistanchedeserticolaپولی سیکرائڈز)اسکیمیا اسٹروک کے دوران DJ-1 اظہار کو بڑھانے کے ذریعے۔

اعترافات

اس مطالعہ کو نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن آف چائنا (گرانٹ 81360649)، نیشنل سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کلیدی پروگرام (گرانٹ 2015BAK45B01)، اور Ningxia Hui Autonomous Region Science and Technology Support Program (grant 2016BZ07) نے تعاون کیا۔

Cistanche deserticola polysaccharidesہے ایک نیورو پروٹیکٹو اثر

حوالہ جات

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans HDAC1/6، Neuromol کو کم کرکے ہائپوکسیا سے متاثرہ زہریلے سے کارٹیکل نیوران کی حفاظت کرتا ہے۔ میڈ. 18 (2016) 274–282۔

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: چین میں فالج کے لیے ایک تیز ردعمل پروگرام، Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28۔

[3] پی ایم جارج، جی کے اسٹین برگ، ناول اسٹروک تھیراپیوٹکس: بے نقاب اسٹروک پیتھوفیسولوجی اور طبی علاج پر اس کا اثر، نیوران 87 (2015) 297–309۔

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oxidase-related pathophysiology in فالج کے تجرباتی ماڈلز, Int. جے مول سائنس (2017) 18۔

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, DJ{{ کی آکسیکرن حالتیں 1}} 4-ایچ پی آر: آٹوفیجی یا اپوپٹوسس سے پیدا ہونے والے آکسیڈیٹیو تناؤ کے جواب میں سیل کی قسمت کا حکم دیں؟ اینٹی آکسیڈ ریڈوکس سائن۔ 21 (2014) 1443–1459۔

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 ممکنہ طور پر mitochondrial pathway, Neurobiol, Dis کے ذریعے وٹرو میں اسکیمک سیل کی موت کو کم کرتا ہے۔ 62 (2014) 56–61۔

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} چوہوں میں فوکل سیریبرل اسکیمیا اور ریپرفیوژن کی وجہ سے ہونے والے نیوروڈیجنریشن سے بچاتا ہے، جے سیریب۔ خون کے بہاؤ. ملا۔ 28 (2008) 563–578۔

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Oxygen-glucose-deprived چوہے کے بنیادی عصبی خلیے صحت مند مائٹوکونڈریا میں DJ-1 کی نقل کی نمائش کرتے ہیں: ایک طاقتور اسٹروک علاج کا ہدف، CNS Neurosci۔ وہاں 20 (2014) 275–281۔

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A علاج پارکنسنز کی بیماری سے وابستہ پروٹین DJ-1، CNS نیوروسی کی اپ گریجولیشن کے ذریعے مائٹوکونڈریل سالمیت کو محفوظ رکھتے ہوئے اسکیمیا سے متاثرہ نیورونل سیل کی موت کو منسوخ کرتا ہے۔ وہاں 22 (2016) 602–610۔

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., سوڈیم Phenylbutyrate کے ساتھ پہلے سے علاج دماغی اسکیمیا کو ختم کرتا ہے/ ڈی جے-1 پروٹین، فرنٹ کو اپ ریگولیٹ کرکے ریپرفیوژن چوٹ۔ نیورول. 8 (2017) 256۔

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. نیوروفرماکولوجی کا جائزہ، فرنٹ۔ فارماکول۔ 7 (2016) 289۔

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): روایتی چینی ادویات کے بہترین دوا ساز تحفوں میں سے ایک، فرنٹ۔ فارماکول۔ 7 (2016) 41۔

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Myocardial ischemia-reperfusion injury کو کم کرنے میں چینی جڑی بوٹیوں کی دوائی کے اثرات اور طریقہ کار، Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625۔

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches H9c2 cardiomyocytes میں mitochondrial respiration سے پیدا ہونے والی رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کے ذریعے سیلولر glutathione redox cycling کو متحرک کرتا ہے۔ بائول 51 (2013) 64–73۔

[15] ٹی وانگ، ایکس ژانگ، ڈبلیو زی،Cistanchedeserticola YC Ma، "ڈیزرٹ ginseng": ایک جائزہ، ایم۔ جے چن میڈ. 40 (2012) 1123–1141۔

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolaکاڑھی نر چوہوں، ایشین جے اینڈرول میں ہائیڈروکسیوریا کی وجہ سے خصیوں کے زہریلے پن کو ختم کرتی ہے۔ 15 (2013) 838–840۔

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of the theneuroprotectiveنیورو 2 اے خلیوں پر نموڈپائن کا اثر سرجری جیسے تناؤ کے ماڈل کے ذریعہ ، انٹ۔ جے مول سائنس 15 (2014) 18453–18465۔

[18] جی وہابزادہ، این رہبر-روشندل، ایس اے ابراہیمی، ایم محمودیان،نیورو پروٹیکٹودماغی آکسیجن-گلوکوز کی کمی کی چوٹ پر نوسکپین کا اثر، فارماکول۔ Rep. 67 (2015) 281–288۔

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A آکسیجن گلوکوز کی کمی کے بعد چوہے کے کارٹیکل نیوران کی بنیادی ثقافت میں اسکیمک خرابی سے بچاتا ہے۔ بذریعہ ریپرفیوژن، جے نیوروسکی۔ Res. 92 (2014) 944–954۔

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehyde نے PC12 خلیوں کو آکسیجن اور گلوکوز کی کمی سے محفوظ رکھا /ریپرفیوژن (OGD/R) - اینٹی اپوپٹوسس اور اینٹی آکسیڈیٹیو تناؤ کے ذریعے متاثر ہونے والی چوٹ، Mol۔ سیل بائیو کیم۔ 421 (2016) 67–74۔

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Aloin کے آکسیجن پر حفاظتی اثرات اور پی سی 12 خلیوں میں گلوکوز کی کمی سے متاثرہ چوٹ، دماغی ریز۔ بیل. 121 (2016) 75–83۔

[22] ایم اگروال، وی کمار، اے کے سنگھ، ایم پی کشیپ، وی کے کھنہ، ایم اے صدیقی، اے بی پنت، ٹرانس ریسویراٹرول ہائپوکسیا سے منسلک ٹرانسکرپشن عوامل کو روک کر اور اینٹی آکسیڈینٹ دفاعی خامروں کی سطح کو بڑھا کر اسکیمک PC12 خلیوں کی حفاظت کرتا ہے۔ کیم نیوروسکی 4 (2013) 285–294۔

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B پی سی 12 خلیوں کو آکسیجن گلوکوز کی کمی سے متاثر نیورونل موت کے خلاف تحفظ فراہم کرتا ہے اور ubiquitin- پر انحصار کے ذریعے mitochondrial homeostasis کو برقرار رکھتا ہے۔ p53 پروٹین کی کمی، یورو۔ جے فارماکول۔ 751 (2015) 13–23۔

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., نوزائیدہ چوہا پرائمری پر الوپیرین کے حفاظتی اثرات کلچرڈ ہپپوکیمپل نیورونز آکسیجن-گلوکوز کی کمی اور ریپرفیوژن سے زخمی، جے نیٹ۔ میڈ. 69 (2015) 575–583۔

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib Bcl-2، Neurochem کو اپ ریگولیٹ کرکے OGD/R حوصلہ افزائی نیوروٹوکسائٹی کے خلاف ماؤس کورٹیکل نیوران کی حفاظت کرتا ہے۔ Res. 40 (2015) 1294–1302۔

[26] ایم پی پونوسوامی، پی. شیشاچاریولو، اے واز، پی. ڈے، ایس کے بترا، MUC4 HER2 اظہار کو مستحکم کرتا ہے اور رحم کے کینسر کے خلیات میں کینسر کے اسٹیم سیل کی آبادی کو برقرار رکھتا ہے، J. Ovarian Res. 4 (2011) 7۔

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, RGC-5 خلیوں کو H(2)O( سے بچاتا ہے 2) PI3K/Akt/eNOS سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرکے آکسیڈیٹیو تناؤ کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ جے مول سائنس 16 (2015) 22350–22367۔

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Propolis کے Dichloromethane کے نچوڑ سیل کو آکسیجن-گلوکوز کی کمی-حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچاتے ہیں Y. Liu et al. بائیو میڈیسن اور فارماکوتھراپی 99 (2018) 671–680 679بذریعہ اپوپٹوسس کو کم کرنے، فوڈ نیوٹر۔ Res. 60 (2016) 30081۔

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,نیورو پروٹیکٹوآکسیجن گلوکوز کی کمی میں نیوروسرپین کا اثر- اور وٹرو میں ری آکسیجنیشن سے علاج شدہ چوہا آسٹروسائٹس، پی ایل او ایس ون۔ 10 (2015) e0123932۔

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Lithium ions attenuate serum-deprivation-induced apoptosis PC12 خلیوں میں Akt/FoxO1 سگنلنگ کے ضابطے کے ذریعے راستے، سائیکوفارماکولوجی (برل) 12 (2015) 625–633۔

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al.، ایگزیکٹو سمری دل کی بیماری اور فالج کے اعداد و شمار 2016 اپ ڈیٹ۔ امریکن ہارٹ ایسوسی ایشن کی ایک رپورٹ، سرکولیشن 133 (2016) 447–454۔

[32] جے ای جمبلاٹ، ٹی اے، پی سی 12 فیوکروموسیٹوما سیلز میں اعصابی نمو کے عنصر کے ذریعے مسکارینک لیگنڈ بائنڈنگ سائٹس کا ضابطہ، فطرت 297 (1982) 152–154۔

S. Afrazi، S. Esmaeili-Mahani، V. Sheibani، M. Abbasnejad، Neurosteroid allopregnanolone ہائی گلوکوز کی وجہ سے apoptosis کو کم کرتا ہے اور تجرباتی ذیابیطس نیوروپیتھک درد کو روکتا ہے: وٹرو اور vivo اسٹڈیز میں، J. سٹیرایڈ بائیو کیم۔ مول بائول 139 (2014) 98–103۔

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol PC12 خلیوں کو OGD/ R-induced apoptosis کے خلاف mitochondrial-mediated signaling path, Acta Biochem Biophys Sin کے ذریعے تحفظ فراہم کرتا ہے۔ . 48 (2016) 342–353۔

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidases as a oxidative stress and molecular target in ischemia/reperfusion چوٹ، J. Mol. میڈ. (برل) 90 (2012) 1391–1406۔

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, اعضاء کے حفاظتی اثرات سرخ شراب کے عرق کے, resveratrol, oxidative stress-mediated reperfusion injury میں, Oxid۔ میڈ. سیل لونگیو۔ (2015) 568634۔

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, distinct mPTP ایکٹیویشن میکانزم اسکیمیا ریپرفیوژن میں: Ca2 پلس پلس، ROS، pH، اور غیر نامیاتی پولی فاسفیٹ، کارڈیوواوا کی شراکت۔ Res. 106 (2015) 237–248۔

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, کم خوراک ایتھنول پری کنڈیشننگ آکسیجن-گلوکوز کی کمی/ری آکسیجنیشن-حوصلہ افزائی نیورونل چوٹ سے بڑے کنڈکٹنس کو چالو کر کے تحفظ فراہم کرتی ہے۔ ، Ca2 پلس پلس - ایکٹیویٹڈ K پلس پلس چینلز ان وٹرو، نیوروسکی۔ بیل. 33 (2017) 28–40۔

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang، اسکیمیا/ریپرفیوژن چوٹ کے دوران چوہے کے ہپپوکیمپل نیوران میں توانائی کے تحول پر مائٹوکونڈریل فِشن کو روکنے کا اثر، نیورول۔ Res. (2016) 1–8۔

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., کے حفاظتی اثرات آکسیجن گلوکوز کی کمی اور ریپرفیوژن سے زخمی ہونے والے نوزائیدہ چوہے پرائمری کلچرڈ ہپپوکیمپل نیورون پر لائسیئم باربرم پولی سیکرائیڈ، جے مول۔ ہسٹول۔ 43 (2012) 535–542۔

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin astrocytes کو hypoxia in vitro, PLOS One سے بچاتا ہے۔ 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase PINK1/Parkin اور DJ کو منظم کرتا ہے{{3} سیپسس کے دوران مائٹوفگی کے راستے، FASEB J. 31 (2017) 4382–4395۔

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 ہائپوکسیا سے متاثرہ سیلولر ردعمل کا ایک اہم ثالث ہے، Proc. ناٹل اکاد۔ سائنس USA 106 (2009) 1111–1116۔

[45] Z. Xianhong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase PINK1/ کو منظم کرتا ہے۔ پارکن اور DJ-1 سیپسس کے دوران مائٹوفگی کے راستے، FASEB J. (2017)۔ [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation to DJ-1 to PTEN نیورونل سیل کی موت کو کم کرتا ہے۔ پارکنسنز کی بیماری کے ماڈلز میں، J. نیوروسی. 34 (2014) 15123–15131۔

[47] آر کے ڈونگ ورتھ، یو اے مکھرجی، اے آر ہال، آر ایسٹن، ایس بی اونگ، زیڈ یاو، اے ڈائیسن، جی سزبادکائی، ایس ایم ڈیوڈسن، ڈی ایم ییلون، ڈی جے ہاوسنلوئے، ڈی جے-1 سیل کی موت سے حفاظت کرتے ہیں۔ شدید کارڈیک اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کے بعد، سیل ڈیتھ ڈس۔ 5 (2014) e1082۔

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Ventureella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} اعلی خطرے والے اینڈومیٹریال کینسر، ٹیومر بائیول کو امتیاز دینے کے لیے ایک قابل اعتماد سیرم بائیو مارکر ہے۔ 39 (2017) 1010428317705746۔

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 nigrostriatal کی حفاظت کرتا ہے۔ AKT پاتھ وے کی ماڈیولیشن کے ذریعے نیوروٹوکسن MPTP سے محور، Proc. ناٹل اکاد۔ سائنس USA 107 (2010) 3186–3191۔

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. احمد, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinson's disease protein DJ-1 ہےneuroprotectiveسسٹین سلفینک ایسڈ سے چلنے والے مائٹوکونڈریل لوکلائزیشن کی وجہ سے، پروک۔ ناٹل اکاد۔ سائنس USA 101 (2004) 9103–9108۔

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglycemia-induced of DJ-1 اظہار نے چوہوں میں اسکیمک پوسٹ کنڈیشنگ کارڈیو پروٹیکشن کی تاثیر سے سمجھوتہ کیا۔ میڈ. سیل لونگیو۔ (2013) (2013) 564902۔