آنتوں کی خرابی کے ساتھ چوہوں کے گٹ مائکروبیوٹا پر Cistanche Tubulosa Aqueous Extract

1. تعارف

آنتوں کے مائکروجنزم بنیادی طور پر آنتوں کے لیمن اور میوکوسل پرت کو نوآبادیاتی بناتے ہیں اور مواد اور توانائی کے تبادلے، تبدیلی اور دیگر عملوں کے ذریعے میزبان کے ساتھ باہمی تعلق رکھتے ہیں [1]۔ وہ سگنلنگ ہب ہیں جو ماحولیاتی پیغامات جیسے خوراک کو جینیاتی اور مدافعتی اشاروں کے ساتھ مربوط کرتے ہیں، نتیجتاً میزبان کے میٹابولزم، قوت مدافعت، اعصابی نظام اور انفیکشن کے ردعمل کو متاثر کرتے ہیں [2]۔ عام طور پر، آنتوں کے پودوں اور میزبانوں کے درمیان ایک متحرک توازن ہوتا ہے۔ تاہم، گٹ dysbiosis کے نتیجے میں صحت/بیماری کے توازن میں تبدیلی، مدافعتی خرابی، اور بہت سی بیماریوں کا سبب بن سکتا ہے [3]۔ گٹ مائکرو بائیوٹا میں اعتدال پسند تبدیلیاں میزبان کے لیے قابل قبول ہیں۔ تاہم، یہ اب بھی دیگر بڑھنے والے عوامل میں تبدیلیوں کو بڑھانے کے مواقع فراہم کر سکتا ہے، جیسے کہ بیکٹیریوفیجز، بیکٹیریوسنز، اور آکسیڈیٹیو تناؤ [4]۔

آنتوں کے گٹ مائکروبیوٹا کو بہتر بنانے کے لیے CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

پچھلے مطالعات نے یہ دکھایا ہے۔Cistanche tubulosa کے ایتھنول کا عرق(CT)، ایک روایتی چینی جڑی بوٹیوں کا فارمولا، چوہوں میں گٹ مائکروبیل مرکب کو منظم کر سکتا ہے [5]، اور CT کے کل گلائکوسائیڈز ناکارہ گٹ مائکروبیٹا کو ایڈجسٹ کرتے ہیں [6]۔ Cistanche پرجاتیوں، جو بنیادی طور پر Tamarix پرجاتیوں کی جڑوں پر طفیلی ہوتی ہیں، کو "صحرا کا ginseng" بھی کہا جاتا ہے اور Cistanche deserticola (CD) اور Cistanche tubulosa (CT) کے تنوں پر مشتمل ایک ٹانک جڑی بوٹیوں کے علاج کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ ] CT phenylethanol glycosides (PHGs) کے اہم کیمیائی اجزا، جو کہ اینٹی آکسیڈینٹ مادے ہیں [8, 9]، تولیدی عمل کو بہتر بنانے کے لیے پائے گئے [10]، ہیپاٹک سٹیلیٹ سیل ایکٹیویشن کو دباتے ہیں، TGF میں سگنلنگ راستوں کی ترسیل کو روکتے ہیں{{6} }/ SMAD [11]، اور چوہوں میں بوائین سیرم البومین سے متاثرہ ہیپاٹک فائبروسس کو روکتا ہے [12]۔ CT میں 100 سے زیادہ اجزاء میں، پولی سیکرائیڈ بھی ایک اہم مادہ ہے جس میں وافر مواد ہوتا ہے [13، 14]۔ پچھلے مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ C. deserticola polysaccharides melanocytes میں melanogenesis کی حوصلہ افزائی کرتے ہیں، oxidative stress کو کم کرتے ہیں [15]، چوہوں میں اینٹی آکسیڈینٹ اور سوزش کے عمل کو منظم کرکے علمی خرابی کو کم کرتے ہیں ]،Vivo میں echinacoside جذب کو بڑھانا، اور گٹ مائکروبیوٹا کو متاثر کرتا ہے [18]۔

پروبائیوٹکس زندہ نان پیتھوجینک مائکروجنزم ہیں جو صحت کے فوائد رکھتے ہیں اور مناسب مقدار میں استعمال ہونے پر معدے میں مائکروبیل توازن فراہم کرتے ہیں [19]۔ وہ غیر مخصوص سیلولر مدافعتی ردعمل کو بڑھا سکتے ہیں جن کی خصوصیت میکروفیجز، قدرتی قاتل (NK) خلیات، اور اینٹیجن مخصوص سائٹوٹوکسک ٹی لیمفوسائٹس اور مختلف سائٹوکائنز کو تناؤ کے مخصوص اور خوراک پر منحصر انداز میں جاری کرنے سے ہوتی ہے [20]۔ پروبائیوٹک تناؤ TJ ماڈیولیشن کے ذریعے آنتوں کے اپکلا کی خصوصیات کو بہتر بناتے ہیں، اور مخصوص پروبائیوٹک تناؤ کو mucin کے اظہار کو منظم کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے، اس طرح بلغم کی تہہ کی خصوصیات پر اثر انداز ہوتا ہے اور بالواسطہ طور پر آنتوں کے مدافعتی نظام کو منظم کرتا ہے [21]۔ لیکٹک ایسڈ بیکٹیریا (LAB) اور Bifidobacterium کے تناؤ بڑے پروبائیوٹکس ہیں جو بہت سے شعبوں میں استعمال ہوئے ہیں [22-26]۔ ان کے صحت کے فوائد بے شمار ہیں، ان کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت ان کے صحت سے متعلق افعال میں ایک اہم عنصر ہے [27]۔ پروبائیوٹکس دھاتی آئنوں کو چیلیٹ کر سکتے ہیں تاکہ انہیں آکسیڈیشن کو کیٹلائز کرنے سے روکا جا سکے [28، 29]؛ وہ اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز [30، 31] کے اظہار کو بھی بڑھا سکتے ہیں، اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کے ساتھ مختلف میٹابولائٹس پیدا کرسکتے ہیں [32، 33]، اینٹی آکسیڈینٹ سگنلنگ پاتھ ویز [34-36] میں ثالثی کرسکتے ہیں، اور ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) پیدا کرنے والے انزائمز کو منظم کرسکتے ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ پر آنتوں کے مائکروجنزموں کا ردعمل [37]۔

ایک حالیہ مطالعہ نے یہ ظاہر کیا ہے کہ سی ڈی کے پولی سیکرائڈز کر سکتے ہیں۔کچھ لیکٹک ایسڈ بیکٹیریا کی نشوونما کو متحرک کریں۔، جو انسانی صحت کو فائدہ پہنچا سکتا ہے [38]۔ تاہم، سی ڈی میں پولی سیکرائڈز کا مواد CT [7، 39] سے مختلف ہے، اور یہ فرق آنتوں کے مائکروجنزموں پر مختلف اثرات کا باعث بن سکتا ہے۔ مزید برآں، اگرچہ CD پولی سیکرائڈز NRF2/HO-1 راستے کو فعال کر کے آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کر سکتے ہیں [15]، لیکن ایک پولی سیکرائڈ کے اثرات CT میں متعدد مرکبات کے مجموعی اثر سے مختلف ہو سکتے ہیں۔ اس طرح، آنتوں کے سوکشمجیووں پر سی ٹی آبی عرقوں کے اثرات کو قطعی طور پر بیان کرنا ضروری ہے۔ اس کے علاوہ، PHGs بھی آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مزاحمت کر سکتے ہیں [40] اور کیپ 1/Nrf2/HO-1 راستے کو چالو کر کے لیپوپولیساکرائڈ کی ثالثی سے ہونے والے اشتعال انگیز ردعمل کو دبا سکتے ہیں۔ لہذا، سی ٹی آبی نچوڑ کے اثر کا تعین بہت اہمیت کا حامل ہے۔ اس کے علاوہ، آکسیڈیٹیو تناؤ اور آنتوں کے نباتات پر آبی سی ڈی کے عرق کے بعض اجزاء کے اثرات یہ بتاتے ہیں کہ آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مزاحمت آنتوں کے نباتاتی تبدیلیوں سے منسلک ہو سکتی ہے۔

مندرجہ بالا عنوانات کے بارے میں علم کے خلا کو پُر کرنے کے لیے، ہم نے آنتوں کے نباتاتی عوارض والے چوہوں کے گٹ مائکرو بائیوٹا پر سی ٹی آبی عرق کے اثرات کی چھان بین کی۔وese نتائج ان ممکنہ میکانزم کے بارے میں قیمتی معلومات فراہم کریں گے جن کے ذریعے CT آنتوں کے پودوں کو تبدیل کرتا ہے اور آنتوں کو آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مزاحمت فراہم کرتا ہے۔

2. مواد اور طریقے

2.1 تجرباتی جانور۔

کل 18 SPF کلاس کے نر C57BL/6J چوہے، جن کا وزن 18–22 گرام ہے، لائسنس نمبر SCXK (نیا) 2018-0003 کے ساتھ سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی کے تجرباتی جانوروں کے مرکز سے خریدے گئے۔ انہیں معیاری حالات کے تحت پنجروں میں رکھا گیا تھا: 12 گھنٹے روشنی/ تاریک فوٹو پیریڈ، درجہ حرارت 23 ± 2 ڈگری، اور نمی 55 ± 5%۔ جانوروں کو تجارتی خوراک (51% نائٹروجن سے پاک عرق، 25% خام پروٹین، 4.6% خام چربی، 6.5% خام راکھ، 40% خام ریشہ، اور 8.9% نمی) اور نل کا پانی کھلایا گیا۔ جانوروں کا علاج نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ کے لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے گائیڈ میں بیان کردہ سفارشات کے مطابق کیا گیا۔

PHGS75% ECH 30% ACT 12% قوت مدافعت کو بہتر بنانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSA

2.2 آبی عرق نکالنا۔

C. tubulosa کے خشک سلائسس، Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. کی طرف سے فراہم کیے گئے، کو پیس کر پاؤڈر بنا دیا گیا، اور 2{{10}} اور 40 کے درمیان ذرات کے سائز والے دانے دار میشز تھے۔ منتخب نکالنے کے حالات حسب ذیل تھے: ٹھوس مائع کا تناسب 1:19، درجہ حرارت 80 ڈگری، مائیکرو ویو ٹائم 6 منٹ، الٹراسونک ٹائم 16 منٹ، مائکروویو پاور 400 ڈبلیو، اور الٹراسونک پاور 400 ڈبلیو۔ پانی کے نچوڑ کے اہم اجزاء کے مواد کی پیمائش HPLC (Agilent 1260 Infinity II، California، USA) کے ذریعے کی گئی۔ مختصراً، ایکیناکوسائیڈ (0.2 ملی گرام/ملی لیٹر) اور ایکٹیوسائیڈ (0.2 ملی گرام/ملی لیٹر) کے معیاری مادوں کو 50% میتھانول میں تحلیل کیا گیا تاکہ ایک حوالہ مادہ کے حل کے طور پر کام کیا جا سکے۔ پھر، CT آبی عرق کا 1 جی 100 ملی لیٹر 50٪ میتھانول میں تحلیل کیا گیا اور 30 ​​منٹ کے لیے سیٹ کرنے کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ نچوڑ کے محلول کو 10 منٹ کے لیے 250 W اور 35 kHz پر الٹراساؤنڈ کے ساتھ علاج کیا گیا اور اس کے بعد 12,000 rpm/min پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو 0.45 μm مائکروپورس فلٹر جھلی کے ذریعہ فلٹر کیا گیا تھا۔ مندرجہ ذیل حالات میں HPLC کے ذریعہ حوالہ دار مادہ کے محلول اور فلٹریٹ کا پتہ چلا: فلر کے طور پر اوکٹیڈیسیل سائلین بانڈڈ سلیکا جیل، موبائل فیز A کے طور پر میتھانول، اور موبائل فیز B کے طور پر 0.1% فارمک ایسڈ۔ کالم کا درجہ حرارت 30 کے طور پر سیٹ کیا گیا تھا۔ ڈگری، پتہ لگانے کی طول موج 330 nm مقرر کی گئی تھی، اور انجیکشن کا حجم 10 μL تھا۔

2.3۔ تجربات۔

موافقت کے ایک ہفتے کے بعد، 18 چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا: A (عام طور پر درمیانی خوراک کے ساتھ CT ایکوئس ایکسٹریکٹ شامل کیا جاتا ہے)، B (سی ٹی آبی عرق کے بغیر نارمل)، C (آبی نچوڑ کے بغیر ماڈل)، D ( ماڈل جس میں ہائی ڈوز سی ٹی ایکوئس ایکسٹریکٹ شامل کیا گیا ہے)، E (ماڈل جس میں درمیانی مقدار میں CT آبی نچوڑ شامل کیا گیا ہے)، اور F (ماڈل جس میں کم ڈوز سی ٹی آبی عرق شامل کیا گیا ہے)۔ گروپوں کے ساتھ مندرجہ ذیل سلوک کیا گیا: نارمل گروپ کو نارمل نمکین محلول سے بھیگ دیا گیا، ماڈل گروپ کو سیفکسائم (30 ملی گرام/کلوگرام، شیاؤ گروپ اوئی فارماسیوٹیکل کمپنی لمیٹڈ، شیجیازوانگ، چین) اور نارمل نمکین محلول، اعلیٰ -ڈوز گروپ کو cefixime اور 221.14 mg/kg CT آبی عرق سے بھیگ گیا تھا، درمیانی خوراک کے گروپ کو cefixime اور 165.54 mg/kg آبی عرق سے بھیگ گیا تھا، اور کم خوراک والے گروپ کو cefixime اور 110kg/mg57. پانی کے عرق کا۔ A گروپ کو 165.54 ملی گرام/کلو گرام پانی کے عرق سے بھیگ دیا گیا، اور کوئی سیفکسائم شامل نہیں کیا گیا۔ Cefixime روزانہ دوپہر h پر دیا جاتا تھا، اور دیگر مادوں کا انتظام روزانہ 15:00 h پر کیا جاتا تھا۔ تجربات کے دوران، C، D، E، اور F گروپوں کو آنتوں کے امراض کی ماڈل حالت میں رکھا گیا۔ پاخانے کو ہر سات دن بعد جراثیم سے پاک چلانے کے قابل میز پر جمع کیا جاتا تھا اور −20 ڈگری پر محفوظ کیا جاتا تھا۔

2.4 چوہوں کی بڑی آنت کا ہسٹوپیتھولوجیکل مشاہدہ۔

تجربے کے اختتام پر، چوہوں کو سروائیکل ڈس لوکیشن سے ہلاک کیا گیا، اور ان کی بڑی آنت کے مواد کو جراثیم سے پاک آپریشن کے قابل میز پر جمع کیا گیا اور −80 ڈگری سینٹی گریڈ پر محفوظ کیا گیا۔ ایک ہی وقت میں، کالونک ٹشو کے نمونے 10٪ غیر جانبدار فارملین میں طے کیے گئے تھے۔ اس کے بعد، نمونوں کو ایتھنول کے تدریجی ارتکاز کا استعمال کرتے ہوئے پانی کی کمی کی گئی، زائلین کا استعمال کرتے ہوئے ہائیلینائز کیا گیا، پیرافین میں سرایت کیا گیا، سیکشن کیا گیا، اور ہیماتوکسیلین-ایوسین سے داغدار کیا گیا۔ کالونی میوکوسا میں مورفولوجیکل تبدیلیوں کا مشاہدہ کیا گیا اور آپٹیکل مائکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے موازنہ کیا گیا۔ بڑی آنت میں وِلس کی لمبائی اور کریپٹ گہرائی کی پیمائش کی گئی، اور ویلس کی لمبائی کے کرپٹ گہرائی (V/C ویلیو) کے تناسب کا حساب لگایا گیا (51)۔

2.5 ڈی این اے نکالنا اور لائبریری کی تعمیر۔

مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے فضلہ سے DNA نکالا گیا تھا۔ ڈی این اے کے معیار کا تعین فلورومیٹر (QuantiFluor™ – ST، Promega Corporation، USA) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ 16s rDNA کے V3-V4 ریجن میں جوڑا بنائے گئے پرائمر اس خطے کو وسیع کرنے اور 466 bp DNA کے ٹکڑے تیار کرنے کے لیے بنائے گئے تھے۔ فارورڈ پرائمر 341F (-5- CCTACGGGGNGGCWGCAG-3-) تھا، اور ریورس پرائمر 806R (-5-GGACTACHVGGGGTATCTAAT-3-) تھا۔ ہر PCR والیوم 25 μL تھا، جس میں 10 × PCR بفر کا 2.5 μL، dNTPs کا 2 μL، ہر پرائمر کا 1 μL، اور ٹیمپلیٹ DNA کا 20–30 ng شامل تھا۔ اس کے بعد، ترتیب شدہ لائبریریوں کو پیدا کرنے کے لیے انڈیکسڈ اڈاپٹر ایمپلیونز کے سرے سے منسلک تھے۔ لائبریریوں کو QuantiFluor™ fluorometer کا استعمال کرتے ہوئے توثیق کیا گیا تھا اور 10 nmol تک مقدار درست کی گئی تھی۔

2.6۔ 16s rRNA جین کی ترتیب اور مائکروبیل کمیونٹی تجزیہ۔

Illumina پلیٹ فارم (Illumina MiSeq) کو 2 × 250 bp پیئرڈ اینڈ ڈیٹا حاصل کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ آپریشنل ٹیکونومک یونٹس (OTUs) 97% مماثلت کے ساتھ معیاری کلسٹرنگ کے ذریعے اپرس سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیے گئے تھے۔ RDP درجہ بندی کا سادہ Bayesian اسائنمنٹ الگورتھم OTUs کو Greengene ڈیٹا بیس ریلیز 13.5 کے ساتھ سیدھ میں لانے اور پرجاتیوں کی تشریح کو انجام دینے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ گٹ مائکرو بائیوٹا کے الفا تنوع کا حساب شینن اور سمپسن انڈیکس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، اور گروپوں کے درمیان فرق کا تجزیہ لکیری امتیازی تجزیہ اثر سائز (LEfSe) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ بیٹا تنوع کا تجزیہ بری – کرٹس کی تفاوت کے پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ (PCoA) کے ذریعے کیا گیا۔ PICRUST2 کا استعمال گٹ مائکروبیوم [42] کی مائکروبیل میٹابولک صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لئے کیا گیا تھا۔

2.7۔ شماریاتی ڈیٹا تجزیہ۔

SPSS 20 کو یک طرفہ ANOVA کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور تجرباتی ڈیٹا کو X ± S کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ X اوسط قدر کی نشاندہی کرتا ہے، اور S معیاری انحراف کی نشاندہی کرتا ہے۔

میٹابولک تبدیلیوں کو معتدل کرنے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ایکٹ 12%

3. نتائج

3.1 بڑی آنت کی شکل پر CT ایکویئس ایکسٹریکٹ کا 8e اثر۔

نمائندہ مرکبات (echinacoside اور acteoside) اور ان کے CT نچوڑ کی تعداد کو HPLC (شکل S1) کے ذریعہ توثیق کیا گیا تھا۔ گٹ پر پانی کے عرق کے اثر کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے CT آبی عرق کے ساتھ علاج کے بعد بڑی آنت کی طوالت اور رسیسز کی گہرائی کی چھان بین کی۔ عام اور زیادہ خوراک والے گروپس (A، B، اور D) میں بڑی آنت والی والی لمبی اور انگلیوں کی طرح تھی، جبکہ ماڈل اور کم خوراک والے گروپس (C اور F) میں بڑی آنت کی والی چھوٹی تھی، اور بڑی آنت کے اشارے villi ٹوٹ گئے تھے (شکل 1)۔ اس کے مطابق، ہائی ڈوز سی ٹی آبی عرق نے بڑی آنت کی لمبائی میں نمایاں اضافہ کیا اور آنتوں کے امراض والے چوہوں میں ریسیسس کی گہرائی کو ماڈل گروپ کے چوہوں کے مقابلے میں کم کیا (P < 0۔{8}}1)۔ اس کے برعکس، ریسسس کی گہرائی زیادہ خوراک والے گروپ اور نارمل گروپ (P > 0.05) (ٹیبل S1) کے درمیان نمایاں طور پر مختلف نہیں تھی۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ CT ایکوئس ایکسٹریکٹ کی زیادہ مقدار آنتوں کے امراض والے چوہوں کی بڑی آنت کے اندر مورفولوجی کو بہتر بنا سکتی ہے۔

3.2 8e گٹ مائکروبیوٹا کے تنوع پر CT ایکویئس ایکسٹریکٹ کا اثر۔

ہم نے بڑی آنت کے اندر مورفولوجیکل تبدیلیوں کی ممکنہ وجہ کی تحقیقات کے لیے 16s rRNA جین کی ترتیب کا مظاہرہ کیا اور CT آبی عرق کے ساتھ علاج کے بعد گٹ مائکروبیوٹا میں ہونے والی تبدیلیوں کی تحقیقات کی۔ 77,734 سے 125,144 کے درمیان اوسطاً 100,553 موثر ٹیگز خام ڈیٹا (ٹیبل S2) سے حاصل کیے گئے تھے۔ ان ٹیگز کو 4932 OTUs (ٹیبل S3) میں کلسٹر کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ہم نے ان OTUs کی بنیاد پر گٹ مائکرو بائیوٹا کے تنوع کا تجزیہ کیا۔ شینن اور سمپسن اشاریہ جات نے A گروپ (سی ٹی آبی عرق کے ساتھ نارمل) اور بی گروپ (سی ٹی آبی عرق کے بغیر نارمل) (شکل 2(a)) کے درمیان کوئی فرق نہیں دکھایا۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ سیفکسائم ٹریٹمنٹ کے بغیر چوہوں میں، سی ٹی آبی عرق کا گٹ مائکرو بائیوٹا کے تنوع پر کوئی اضافی فائدہ مند یا نقصان دہ اثر نہیں ہو سکتا تھا۔ تاہم، ماڈل گروپ (C) میں تنوع نے عام گروپوں کے مقابلے میں کمی کا رجحان ظاہر کیا۔ اعلی اور درمیانی خوراک والے CT آبی عرقوں کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں تنوع کی بحالی کی علامات ظاہر ہوئیں، جب کہ کم خوراک والے CT آبی عرق (شکل 2(a)) کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں ایسا رجحان نہیں دیکھا گیا۔ دریں اثنا، پی سی او اے نے انکشاف کیا کہ نارمل گروپس (A اور B) اور آنتوں کے عارضے والے گروپوں نے ہائی ڈوز (D) اور درمیانی خوراک (E) CT آبی عرقوں کو ماڈل گروپ کے مقابلے میں کم انٹرسمپل فاصلوں پر رکھا تھا۔ کم خوراک سی ٹی ایکوئس ایکسٹریکٹ سپلیمنٹ گروپ (F) (شکل 2(b))۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ سی ٹی آبی عرق مدد کر سکتا ہے۔گٹ مائکرو بائیوٹا کے تنوع کو بہتر بنائیںآنتوں کی خرابی کے ساتھ چوہوں میں.

3.3 CT Aqueous Extract کے ساتھ علاج شدہ گٹ مائکروبیوٹا کی ساخت میں تبدیلیاں۔

مائکرو بائیوٹا کمپوزیشن پروفائلز کا موازنہ مختلف گروپوں میں کیا گیا۔ فیلم کی سطح پر، ماڈل گروپ میں پروٹو بیکٹیریا کی نسبتا کثرت دوسرے گروپوں کی نسبت زیادہ تھی (شکل 3(a))۔ پروٹو بیکٹیریا میں اضافے نے تجویز کیا کہ ماڈل چوہوں کے مائکرو بایوم کو سیفکسائم کے ذریعہ تبدیل کیا گیا تھا اور یہ کہ سی ٹی آبی نچوڑ آنتوں کے مائکرو بائیوٹا کو فائدہ پہنچا سکتا ہے کیونکہ پروٹو بیکٹیریا کا بڑھتا ہوا پھیلاؤ ناکارہ آنتوں کے پودوں کا مرکز ہے [43–45]۔ اس کے علاوہ، جینس کی سطح پر، ماڈل گروپ میں لییکٹوباسیلس کی نسبتا کثرت عام اور زیادہ خوراک والے گروپوں کے مقابلے میں کم ہوئی؛ تاہم، درمیانی اور کم خوراک والے گروپ (شکل 3(b)) کے مقابلے میں اس میں اضافہ ہوا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ زیادہ مقدار میں CT آبی عرق لییکٹوباسیلس جینس سے کچھ بیکٹیریا کی افزائش کو فروغ دے سکتا ہے۔

مطالعہ شدہ گروپوں کے مابین تفریق مائکرو بائیوٹا کا مزید تعین LEfSe تجزیہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ اس تجزیے سے معلوم ہوا کہ سیفکسائم کے علاج کے بعد، ٹورسیبیکٹر، الفاپروٹو بیکٹیریا، ایسڈوبیکٹیریا، بیٹاپروٹو بیکٹیریا، اور کلوروفلیکسی کی نسبتا کثرت میں نمایاں اضافہ ہوا، جب کہ لییکٹوباسیلس، یوبیکٹیریم_نوڈیٹم گروپس،{1} ، اور Christensenellaceae_R-7_گروپ میں عام گروپ کے مقابلے میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے (شکل 4(a))۔ حیرت انگیز طور پر، جب ماڈل گروپ کو ہائی ڈوز سی ٹی آبی عرق کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تو، ماڈل گروپ کے مقابلے میں Muribaculaceae، Lactobacillus، Kineosporiaceae، Eubacterium nodatum گروپ، اور Pedobacter کی نسبتا کثرت میں نمایاں اضافہ ہوا۔ دریں اثنا، روڈوبیکٹر، رومینوکوکیسی UCG_013، Roseburia، Ruminiclostridium_9، اور Candidatus Stoquefichus کی نسبتا کثرت ماڈل گروپ (شکل 4(b)) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوئی۔

3.4 گٹ مائیکرو بائیوٹا کے افعال سی ٹی ایکویئس ایکسٹریکٹ کے ساتھ علاج سے متعلق ہیں۔

ہم نے گٹ مائکروبیوٹا کے میٹابولک راستوں کی پیش گوئی کرنے کے لیے PICRUST2 سافٹ ویئر کا استعمال کیا، اور عام گروپ کو دوسرے گروپوں میں ہونے والی تبدیلیوں کا تجزیہ کرنے کے لیے بطور حوالہ استعمال کیا گیا۔ cefixime علاج کے تحت، ethylbenzene کے انحطاط کی نسبتا کثرت، siderophore گروپ nonribosomal peptides کی biosynthesis، اور cytochrome P450 راستے کے ذریعے xenobiotics کے میٹابولزم میں اضافہ ہوا۔ اعلی اور درمیانی خوراک سی ٹی آبی عرقوں کے ساتھ علاج کے بعد، ان کی نسبتا کثرت معمول کی سطح پر واپس آگئی۔ دریں اثنا، cefixime علاج کے تحت cyanoamino acid میٹابولزم کے راستے کی نسبتا کثرت میں کمی واقع ہوئی؛ تاہم، ہائی ڈوز سی ٹی آبی عرق کے ساتھ علاج کے بعد اس میں اضافہ ہوا۔ مزید برآں، عام طور پر، سیفکسائم کے ساتھ علاج کے بعد میٹابولائٹ کے مختلف راستوں میں تبدیلیاں عام گروپ کے لوگوں کے مقابلے میں اہم تھیں۔ تاہم، سی ٹی آبی عرق کا اضافہ ضرورت سے زیادہ تبدیلیوں کو روکنے کے قابل تھا (شکل 5)۔

4. بحث

بڑی آنت کی شکل کو نمو، عمل انہضام اور جذب، مدافعتی ضابطے، اور آنتوں کی چوٹ کی مرمت [46-50] کے ذریعے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ V/C تناسب جامع طور پر آنتوں کی نالی کے ہاضمہ کی حیثیت کی عکاسی کر سکتا ہے اور یہ آنتوں کی نالی کے ہاضمہ اور جذب کی صلاحیت کے براہ راست متناسب ہے [51, 52]۔ موجودہ مطالعہ میں، ولی اور ریسیسیس بائیوپسی اور شماریاتی اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ زیادہ مقدار میں پانی کا نچوڑ بڑی آنت کے اندر کی خراب شکل کو جزوی طور پر بہتر بنا سکتا ہے۔

یہ جاننے کے لیے کہ پانی کا عرق کس طرح آنتوں کی شکل کو تبدیل کرتا ہے اور آنتوں کے مائکرو بایٹا کو متاثر کرتا ہے، ہم نے آنتوں کے پودوں میں ہونے والی تبدیلیوں سے پیچھے ہٹ کر کام کیا۔ ہم نے پایا کہ پروٹو بیکٹیریا کی نسبتا کثرت، جو آنتوں کے ناکارہ پودوں کا ایک مرکز ہے، سیفکسائم کے ساتھ علاج کے دوران سیفکسائم کے علاج کے بغیر اس کے مقابلے میں اضافہ ہوا ہے۔ دوسرے حب مارکر، بیکٹیرائڈائٹس اور فرمکیوٹس کی نسبتا کثرت میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئی، حالانکہ یہ

گروہ انسانی آنت میں غالب ہیں۔ دبلے پتلے لوگوں کے مقابلے موٹے لوگوں میں بیکٹیرائڈائٹس/فرمکیوٹس کا تناسب کم پایا گیا، اور یہ تناسب دو قسم کی کم کیلوریز والی خوراک [38, 41, 43-45] والے لوگوں میں وزن میں کمی کے ساتھ بڑھتا ہوا پایا گیا۔ 48، 53، 54]۔ دریں اثنا، ٹوریسی بیکٹر، جو موٹاپا کے ساتھ منسلک ہے [55]، دوسرے گروپوں کے مقابلے میں ماڈل گروپ میں نمایاں طور پر بلند ہوا. خاص طور پر، ماڈل چوہوں میں گٹ مائکروبیوٹا کے تنوع کو CT آبی عرق کے اضافے سے بہتر بنایا گیا تھا۔ ہم نے مختلف علاج کے تحت چوہوں میں کچھ مخصوص آنتوں کے بیکٹیریا کو نوٹ کیا۔ مثال کے طور پر، Lactobacillus اور Muribaculaceae دو اہم بیکٹیریل جنرا تھے جو ماڈل گروپ (شکل 4) کے مقابلے میں زیادہ مقدار والے CT آبی عرق کے ساتھ علاج کیے گئے گروپ میں بڑھے۔ حالیہ مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ سی ٹی آبی عرقوں کے پولی سیکرائڈز اہم ہیں۔

کچھ لیکٹک ایسڈ بیکٹیریا کی افزائش، جو میزبان کی صحت کو فائدہ پہنچا سکتی ہے [43]۔ متوازی طور پر، Muribaculaceae پروبائیوٹک حیاتیات ہیں جو لمبی عمر سے منسلک ہیں [57]۔وese نے تجویز کیا کہ وہ طریقہ کار جس کے ذریعے CT آبی نچوڑ گٹ مائکرو بائیوٹا کو بہتر بناتا ہے وہ پروبائیوٹک جانداروں کی نشوونما یا تحفظ ہو سکتا ہے۔ ایک اور بیکٹیریا جو قابل توجہ ہے وہ بیکٹیریم YE57 تھا۔ اگرچہ اعلی خوراک والے CT آبی عرق نے موجودہ مطالعہ (شکل 4) میں بیکٹیریم YE57 کی نسبتا کثرت کو فروغ دیا، لیکن پچھلے مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ اس کی کثرت عام گٹ میں اس سے زیادہ تھی جس کا علاج زیادہ ارتکاز والی جڑی بوٹیوں والی چائے کی باقیات کے ساتھ کیا جاتا تھا۔ [58] اور یہ کہ XOS (xylooligosaccharides) کے ساتھ مل کر Bacillus licheniformis کے ساتھ مداخلت کے بعد اس کی کثرت میں کمی آئی [59]۔وہمارے ہاں، گٹ مائکرو بائیوٹا میں اس بیکٹیریم کا کردار مزید مطالعہ کا مستحق ہے۔ اس کے علاوہ، اس مطالعے میں نسبتاً کم نمونے کی تعداد غلط مثبت اور غلط منفی کی پیمائش کا سبب بن سکتی ہے، اور بڑے نمونوں پر مستقبل کے مطالعے کی تجویز دی گئی ہے کہ وہ بیکٹیریل مارکر کی شناخت کی توثیق کرے۔

آنتوں کے عوارض والے چوہوں کے گٹ مائکرو بائیوٹا میں ساخت اور فنکشنل تبدیلیوں پر اس کے اثرات کے لیے سی ٹی ایکویئس ایکسٹریکٹ کمپوزیشن اہم ہو سکتی ہے۔ PHGs CD اور CT میں پائے جانے والے عام فعال اجزاء ہیں، اور echinacoside کو CT [60] میں اہم PHG کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ پچھلی دہائیوں میں، echinacoside کو کئی فارماسولوجیکل سرگرمیاں، جیسے antiaging اور neuroprotective اثرات، کارڈیک فنکشن میں بہتری، hyperlipidemia اور hyperglycemia میں کمی، اور موٹاپے کی وجہ سے ذیابیطس اور میٹابولک سنڈروم کی روک تھام کے لیے دکھایا گیا ہے [53, 61-65] . ہم نے گٹ مائکروبیٹا کے میٹابولک راستوں میں تبدیلیوں کا پتہ لگایا۔وسیفکسائم کے علاج سے ایتھائل بینزین کے انحطاط سے متعلق بیکٹیریا کی افزودگی ہوئی اور سائڈروفور گروپ نان رائبوسومل پیپٹائڈس کے بائیو سنتھیسز، جبکہ اعلی اور درمیانی خوراک والے سی ٹی آبی عرق کے ساتھ علاج ان تبدیلیوں کو کم کر سکتا ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہ عرق بیکٹیریا سے متعلق کمیونٹی کو معتدل کرتا ہے۔ ان افعال کے لئے. اس کے علاوہ، ہائی ڈوز آبی عرق کے ساتھ علاج کے تحت سائانوامینو ایسڈ میٹابولزم پاتھ وے سے متعلق بیکٹیریل افزودگی میں اضافہ اور ماڈل چوہوں میں اس کی افزودگی میں کمی نے اشارہ کیا کہ سی ٹی آبی عرق سائانو امینو ایسڈ کے میٹابولزم کو فروغ دے سکتا ہے۔ومتعلقہ میٹابولائٹس میں تبدیلیاں اس آبی عرق کو فارماسولوجیکل سرگرمیوں کے ساتھ فراہم کر سکتی ہیں۔

اگرچہ وہ طریقہ کار جس کے ذریعے CT آبی نچوڑ آنتوں کے مائکرو بائیوٹا کی ساخت اور کام کو تبدیل کرتا ہے پیچیدہ ہے، تاہم ممکنہ طریقہ کار کے بارے میں قیاس کرنے کے لیے کچھ سراغ موجود ہیں۔ یہ بتایا گیا ہے کہ لیکٹک ایسڈ بیکٹیریا اور سی ٹی آبی عرق دونوں آکسیڈیٹیو تناؤ کا مقابلہ کر سکتے ہیں۔ سوزش کے دوران ہونے والا آکسیڈیٹیو تناؤ ایک عام عنصر ہے جو آنتوں کی خرابی کو بڑھاتا ہے گٹ مائکروبیل تنوع کو مضبوطی سے کم کرکے اور مخصوص بیکٹیریا کے اضافے کو فروغ دے کر (4)۔ اس کے برعکس، رد عمل آکسیجن کی نسلیں نائٹریٹ اور ٹیٹراتھیونیٹ سانس کے ذریعے بیکٹیریل گروپوں کی منتخب ترقی کو بھی فروغ دیتی ہیں [66–68]؛ مثال کے طور پر، Enterobacteriaceae خاندان کے بیکٹیریا سوزش کے دوران آکسیڈیٹیو حالات میں آنتوں کے پودوں کی ساخت میں تبدیلی کے نتیجے میں تیزی سے بڑھ سکتے ہیں [69, 70]۔ زیادہ تر جاندار آکسیجن ریڈیکلز کو ختم کرنے کے لیے انزائیمیٹک ڈیفنس، نان اینزیمیٹک اینٹی آکسیڈینٹ ڈیفنس، اور مرمت کے طریقہ کار کو تیار کرتے ہیں [71]۔ تاہم، یہ مقامی اینٹی آکسیڈینٹ نظام عام طور پر جانداروں میں آکسیڈیٹیو نقصان کو روکنے کے لیے کافی نہیں ہیں۔ کئی اضافی مصنوعی اینٹی آکسیڈینٹ، بشمول بائٹلیٹڈ ہائیڈروکسیانسول اور بٹلیٹیڈ ہائیڈروکسی ٹولین، آکسیکرن کو کم کرنے کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیے گئے ہیں، لیکن ان کی حفاظت پر سوالیہ نشان لگایا گیا ہے [72، 73]۔ لہذا، محققین نے قدرتی طور پر پائے جانے والے مادوں سے حاصل کردہ محفوظ اور زیادہ قدرتی اینٹی آکسیڈنٹس تلاش کرنے کا رخ کیا ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کو ختم کرنے کے لیے پولی سیکرائیڈز اور لیکٹک ایسڈ بیکٹیریا دونوں کی صلاحیت کی وجہ سے، آنتوں کے مائکرو بایوٹا پر سی ٹی آبی عرقوں کے عین مطابق اینٹی آکسیڈیٹیو میکانزم کا تعین کرنے کے لیے مستقبل میں مزید تحقیقات کی ضرورت ہے۔

آخر میں، ہم نے پایا کہ سی ٹی آبی عرق اس قابل تھا۔آنتوں کے گٹ مائکرو بائیوٹا کو بہتر بنائیںتنوع کو فروغ دے کر آنتوں کے امراض والے چوہوں میں،میٹابولک تبدیلیوں کو معتدل کرنا، اور گٹ مائکرو بائیوٹا کے ڈھانچے کو دوبارہ تشکیل دینا ، اور یہ نتائج مستقبل میں متعلقہ دوائیوں کی نشوونما کے لئے ایک حوالہ فراہم کرسکتے ہیں۔

گٹ مائکروبیوٹا پی ایچ جی ایس 75٪ ECH 30٪ ایکٹ 12٪