Cistanche Deserticola Extract Osteoblasts میں ہڈیوں کی تشکیل کو بڑھاتا ہے--حصہ اول

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

ٹی ماو لی^aاور ایک

خلاصہ
مقاصد ہم نے کے اثر کی چھان بین کی۔Cistanchedeserticolaایم اے (CD) آنہڈیتشکیلمہذب آسٹیو بلوسٹس کے ذریعہ۔ طریقے معدنی نوڈول کی تشکیل پرکھ کا استعمال سی ڈی کے ان وٹرو اثرات کی جانچ کے لیے کیا گیا تھا۔(Cistanchedeserticola)پرہڈیتشکیل. الکلائن فاسفیٹیس (ALP)، بون مورفوجینیٹک پروٹین (BMP)-2، اور osteopontin (OPN) mRNA اظہار کو مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ سی ڈی کی کارروائی کا طریقہ کار(Cistanchedeserticola)مغربی بلوٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے نچوڑ کی تحقیقات کی گئیں۔ سی ڈی کا ان ویوو اینٹی آسٹیوپوروٹک اثر(Cistanchedeserticola)نچوڑ کا اندازہ اوورییکٹومائزڈ چوہوں میں کیا گیا تھا۔
کلیدی نتائج

سی ڈی(Cistanchedeserticola)ایکسٹریکٹ کا کلچرڈ آسٹیو بلوسٹس کے پھیلاؤ، منتقلی، یا زخم بھرنے پر کوئی اثر نہیں پڑا، لیکن ALP، BMP-2، اور OPN mRNA اور ہڈیوں کی معدنیات میں اضافہ ہوا۔ Mitogen-activated protein kinase (MAPK) یا نیوکلیئر فیکٹر (NF)-kB روکنے والوں نے CD کو کم کر دیا(Cistanchedeserticola)اقتباس کی حوصلہ افزائیہڈی کی تشکیلاور ALP، BMP-2، اور OPN اظہار۔ تاہم، سی ڈی(Cistanchedeserticola)نچوڑ osteoclastogenesis کو متاثر نہیں کرتا تھا۔ اس کے علاوہ سی ڈی(Cistanchedeserticola)ایکسٹریکٹ نے ویوو میں اوورییکٹومی کی وجہ سے ہڈیوں کے نقصان کو روکا۔
نتائج

سی ڈی(Cistanchedeserticola)ایک ناول ہو سکتا ہےہڈی کی تشکیلآسٹیوپوروسس کے علاج کے لئے ایجنٹ.

مطلوبہ الفاظہڈی کی تشکیل; Cistanchedeserticola; چینی جڑی بوٹی؛ osteoblasts

Cistanche deserticolaکے لیے اچھا ہےہڈی کی تشکیل

تعارف

ہڈی ایک پیچیدہ ٹشو ہے جو کئی خلیوں کی اقسام پر مشتمل ہے جو کہ تجدید اور مرمت کے مسلسل عمل سے گزرتی ہے جسے 'ہڈیوں کی دوبارہ تشکیل' کہا جاتا ہے۔ ہڈیوں کی دوبارہ تشکیل کے لیے ذمہ دار دو بڑی سیل قسمیں آسٹیو کلاسٹس ہیں، جو ہڈی کو دوبارہ جذب کرتی ہیں، اور آسٹیو بلوسٹس، جو نئی ہڈی بناتی ہیں۔ ہڈیوں کی دوبارہ تشکیل کو کئی سیسٹیمیٹک ہارمونز (مثلاً پیراٹائیرائڈ ہارمون، 1، 25-ڈائی ہائیڈروکسی وٹامن ڈی3، جنسی ہارمونز، اور کیلسیٹونن) اور مقامی عوامل (مثلاً نائٹرک آکسائیڈ، پروسٹاگلینڈنز، نمو کے عوامل، اور سائٹوکائنز) کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے۔[1] آسٹیوپوروسس کا نتیجہ اس صورت میں نکلتا ہے جب ہڈیوں کی ریزورپشن اور تشکیل غیر مربوط ہو اور ہڈیوں کا زیادہ ٹوٹ جانا ہڈیوں کی تعمیر سے زیادہ ہو جائے۔ آسٹیوپوروسس کے موجودہ علاج میں بیسفاسفونیٹس، کیلسیٹونن، اور ایسٹروجن شامل ہیں، جو ہڈیوں کی ریزورپشن روکنے والے ہیں جو آسٹیو کلاس کی سرگرمی کو روک کر ہڈیوں کے بڑے پیمانے کو برقرار رکھتے ہیں۔[3] تاہم، ہڈیوں کے بڑے پیمانے کو بڑھانے یا بحال کرنے میں ان ادویات کا اثر نسبتاً کم ہے، یقیناً ہر سال 2 فیصد سے زیادہ نہیں۔ لہذا، ہڈیوں کی تعمیر کے ایجنٹوں کی ضرورت ہے، جیسے ٹیریپراٹائڈ، جو نئے کو متحرک کرتے ہیں۔ہڈیتشکیلاور ٹریبیکولر مائیکرو آرکیٹیکچر میں تبدیلی کو درست کریں جو آسٹیوپوروسس کی خصوصیت ہے۔[4,5] کیونکہ نئےہڈیتشکیلبنیادی طور پر آسٹیو بلوسٹس کا ایک کام ہے، وہ ایجنٹ جو یا تو آسٹیو بلوسٹک نسب کے خلیات کے پھیلاؤ کو بڑھا کر یا آسٹیو بلوسٹس کی تفریق پیدا کر کے ہڈیوں کی تشکیل کو بڑھا سکتے ہیں۔[5,6]
اگرچہ آسٹیوپوروسس کے طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہیں، لیکن ان کا تعلق ہڈیوں کی نشوونما کے عوامل، جیسے کہ ہڈیوں کے مورفوجینیٹک پروٹین (BMPs) کی کم دستیابی یا اثرات سے ہے۔[7] BMPs، جو ساختی طور پر تبدیلی کرنے والے گروتھ فیکٹر-b سے سپر فیملی سے متعلق ہیں، اصل میں ان کی ایکٹوپک پیدا کرنے کی صلاحیت سے شناخت کی گئی تھی۔ہڈی تشکیلچوہوں میں۔ BMPs ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ہڈیتشکیلاور الکلائن فاسفیٹیس (ALP) کی سرگرمی کے ساتھ ساتھ پروٹیوگلائکن، کولیجن، اور آسٹیوپونٹن (OPN) کی ترکیب کو متحرک کرکے ہڈیوں کے خلیوں میں تفریق۔[9] ایک حالیہ تحقیق میں BMP-2، ALP، اور OPN جینز میں آسٹیوپوروسس اور مخصوص پولیمورفزم کے درمیان ایک ربط پایا گیا، جو یہ بتاتا ہے کہ وہ آسٹیوپوروسس کی نشوونما سے وابستہ ہیں۔[10]

Cistanchedeserticolaایم اے (Orobanchaceae؛ مختصراً CD)(Cistanchedeserticola)چین میں ایک مقامی جڑی بوٹی ہے اور روایتی ادویات میں اس کی سکون آور، ینالجیسک، اور مدافعتی خصوصیات کی وجہ سے بڑے پیمانے پر علاج کے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتی ہے۔[11] جدید فارماسولوجیکل اسٹڈیز نے دکھایا ہے کہ سی ڈی(Cistanchedeserticola)نچوڑ قوت مدافعت کو متحرک کر سکتے ہیں، آزاد ریڈیکلز کو ختم کر سکتے ہیں[13]، اور سپر آکسائیڈ کے اخراج کی سرگرمی کو بڑھا سکتے ہیں۔[14] اینٹی سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ ایجنٹوں میں اضافہ کرکے آسٹیوپوروسس کا علاج کرنے کی صلاحیت ہے۔ہڈی تشکیلاور/یا ہڈیوں کی ریزورپشن کو دبانا۔[15,16] تاہم، سی ڈی کا اثر(Cistanchedeserticola)ہڈیوں کے خلیوں کے فنکشن پر ابھی تک تعین نہیں کیا گیا ہے۔ یہاں، ہم اس سی ڈی کی اطلاع دیتے ہیں۔(Cistanchedeserticola)ایکسٹریکٹ نے مہذب آسٹیو بلوسٹس کے پھیلاؤ، منتقلی، یا زخم بھرنے کی سرگرمی کو متاثر نہیں کیا، لیکن ALP، BMP-2، اور OPN اظہار اور ہڈیوں کی معدنیات میں اضافہ کیا۔ اس کے علاوہ، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPK) اور نیوکلیئر فیکٹر (NF)-kB سگنلنگ پاتھ ویز جین کے اظہار اور ہڈیوں کی معدنیات میں CD-ثالثی اضافے میں شامل ہو سکتے ہیں۔ اس کے برعکس، سی ڈی(Cistanchedeserticola)نچوڑ نے وٹرو میں آسٹیو کلاسٹوجینیسیس کو نہیں دبایا۔ خاص طور پر، سی ڈی کے ساتھ چوہوں کا علاج(Cistanchedeserticola)اقتباس Vivo میں اوورییکٹومی کی وجہ سے ہڈیوں کے نقصان کو روکتا ہے۔ لہذا ہمارا ڈیٹا تجویز کرتا ہے کہ سی ڈی(Cistanchedeserticola)حوصلہ افزائی کرنے کے لئے استعمال کیا جا سکتا ہےہڈیتشکیلآسٹیوپوروسس کے علاج کے لیے

Cistanche deserticolaقوت مدافعت کو بڑھانا

مواد اور طریقے

Cistanche deserticola اقتباس اور مواد

سی ڈی(Cistanchedeserticola)اقتباس Chuang Song-Zong فارماسیوٹیکل کمپنی (Kaohsiung, Taiwan) سے خریدا گیا تھا۔ سی ڈی کو نکالنا اور الگ کرنا(Cistanchedeserticola)اس کی پیروی کی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (اسپیکٹرل ڈیٹا کی بنیاد پر انہوں نے کیمیائی ساخت کی نشاندہی کی ہے جس میں بیٹا سیٹوسٹرول، ڈاؤکوسٹرول، سوکسینک ایسڈ، ٹرائیکونٹانول، ایکٹیوسائیڈ، بیٹین، اور پولی سیکرائیڈ شامل ہیں)۔ خرگوش پولی کلونل اینٹی باڈیز کے لیے مخصوص p-ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کنازس (ERK)، ERK، p-p38، p38، pc-Jun N-terminal kinases (JNK) JNK، p-p65، اور p65 کو سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی سے خریدا گیا تھا۔ سانتا کروز، امریکہ)۔ osteocalcin ELISA کٹ بائیو سورس ٹیکنالوجی (نیویلس، بیلجیم) سے خریدی گئی تھی۔ قسم-I کولیجن ELISA کٹ کے سی ٹرمینل ٹیلوپیپٹائڈس کراس لیپس (ہرلیو، ڈنمارک) سے حاصل کیے گئے تھے۔ p38 غالب-منفی اتپریورتی ڈاکٹر جے ہان (ساؤتھ ویسٹرن میڈیکل سینٹر، ڈلاس، USA) نے فراہم کیا تھا۔ JNK غالب-منفی اتپریورتی ڈاکٹر ایم کیرن (یونیورسٹی آف کیلیفورنیا، سان ڈیاگو، USA) نے فراہم کیا تھا۔ ERK2 غالب-منفی اتپریورتی ڈاکٹر ایم کوب (ساؤتھ ویسٹرن میڈیکل سینٹر) نے فراہم کیا تھا۔ دیگر تمام ریجنٹس سگما الڈرچ (سینٹ لوئس، امریکہ) سے حاصل کیے گئے تھے۔

سیل کلچر

مورائن آسٹیو بلاسٹ سیل لائن MC3T3-E1 امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC؛ Rockville, USA) سے خریدی گئی تھی۔ خلیوں کو 95 فیصد ہوا میں، 5 فیصد CO2 a-MEM کے ساتھ جو 20 ملی میٹر HEPES اور 10 فیصد حرارت سے غیر فعال برانن بچھڑے کا سیرم، 2 ملی میٹر-گلوٹامین، پینسلن (100 U/ml)، اور اسٹریپٹومائسن (100 ملی گرام) کے ساتھ تیار کیا گیا تھا۔ /ml)۔

معدنیات سے متعلق نوڈول کی تشکیل کی پیمائش

معدنی نوڈول کی تشکیل کا اندازہ کیا گیا جیسا کہ بیان کیا گیا ہے۔ مختصراً، آسٹیو بلوسٹس کو دو ہفتوں کے لیے وٹامن سی (50 ملی گرام/ملی لیٹر) اور بی گلیسرو فاسفیٹ (10 ملی میٹر) پر مشتمل میڈیم میں کلچر کیا گیا، اور ہر تین دن بعد میڈیم تبدیل کیا گیا۔ سی ڈی کے ساتھ انکیوبیشن کے بعد(Cistanchedeserticola)12 دن کے لیے نچوڑ، خلیات کو 20 ملی میٹر Tris-buffered نمکین کے ساتھ دو بار دھویا گیا جس میں 0.15 m NaCl (pH 7.4) شامل تھا، 30 منٹ کے لیے برف کے ٹھنڈے 75 فیصد (v/v) ایتھنول میں طے کیا گیا، اور ہوا خشک کیلشیم جمع کرنے کا تعین الزارین ریڈ ایس سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ مختصراً، ایتھنول سے طے شدہ خلیات اور میٹرکس کو 40 ملی میٹر الیزرین ریڈ-ایس (پی ایچ 4.2) کے ساتھ 1 گھنٹہ کے لیے داغ دیا گیا اور پانی سے بڑے پیمانے پر دھویا گیا۔ پابند داغ کو 10 فیصد (w/v) cetylpyridinium chloride کے ساتھ ختم کیا گیا تھا اور نمونوں میں alizarin red-S کی مقدار 550 nm پر جاذبیت کی پیمائش کرکے اور ایک معیاری وکر کے مقابلے میں کی گئی تھی۔ الیزارین ریڈ-ایس کا ایک تل کیلشیم کے تقریباً دو تلوں کو منتخب طور پر جوڑتا ہے۔

Cistanche deserticolaکے لیے اچھا ہےہڈی کی تشکیل

مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن

کل آر این اے TRIzol کٹ (MDBio Inc.، Taipei، تائیوان) کا استعمال کرتے ہوئے آسٹیو بلوسٹس سے نکالا گیا تھا۔ ریورس ٹرانسکرپشن 2 ملی گرام کل آر این اے اور ایک اولیگو (ڈی ٹی) پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ امریکا). ترتیب سے متعلق پرائمر اور تقمان® تحقیقات کے ساتھ کل cDNA (100 ng فی 25-ml ردعمل) شامل کیا گیا۔ تمام ٹارگٹ جین پرائمر اور تحقیقات تجارتی طور پر خریدی گئی تھیں، بشمول بی ایکٹین بطور اندرونی کنٹرول (اپلائیڈ بایو سسٹم)۔ سٹیپ ون پلس سیکوینس کا پتہ لگانے والے نظام (اپلائیڈ بایو سسٹم) پر کیو پی سی آر اسیس کو سہ رخی میں انجام دیا گیا تھا۔ سائیکلنگ کے حالات 95 ڈگری پر 10- منٹ پولیمریز ایکٹیویشن تھے جس کے بعد 15 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری کے 40 سائیکل اور 60 سیکنڈ کے لیے 60 ڈگری تھے۔ حد کو غیر ٹیمپلیٹ کنٹرول پس منظر کے اوپر اور سائیکل نمبر کا حساب لگانے کے لیے ہدف جین امپلیفیکیشن کے لکیری مرحلے کے اندر مقرر کیا گیا تھا جس پر ٹرانسکرپٹ کا پتہ چلا تھا (سی ٹی کی نشاندہی کی گئی تھی)۔

مغربی دھبے کا تجزیہ

سیل لائسیٹس تیار کیے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔ دھبوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لیے 4 فیصد بوائین سیرم البومین کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا اور پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لیے خرگوش کے اینٹی ہیومن اینٹی باڈیز کے خلاف p-65، یا p-p65 (1: 1000) کے ساتھ تحقیقات کی گئیں۔ تین دھونے کے بعد، دھبوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ کے لیے پیرو آکسیڈیس کنجوگیٹڈ گدھے کے اینٹی خرگوش سیکنڈری اینٹی باڈی (1: 1000) کے ساتھ لگایا گیا۔ X-OMAT LS فلم (ایسٹ مین کوڈک، روچیسٹر، USA) کا استعمال کرتے ہوئے بہتر کیمیلومینیسینس کے ذریعے دھبوں کا تصور کیا گیا۔

اوورییکٹومی سے متاثرہ آسٹیوپوروسس

خواتین ICR چوہوں، چار ہفتے پرانے، 22 ~ 28 جی، اس مطالعے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ trichloroacetaldehyde (100 mg/kg) اینستھیزیا کے تحت چوہوں کو دو طرفہ طور پر ovariectomized کیا گیا تھا اور مقابلے کے لیے کنٹرول چوہوں کو sham-operated (Sham) کیا گیا تھا۔ ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے معدنی مواد کی پیمائش سی ڈی کی مختلف ارتکاز کی زبانی انتظامیہ کے بعد کی گئی۔(Cistanchedeserticola)چار ہفتوں تک ہر دو دن بعد نکالیں۔ جسم کی ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے معدنی مواد کا تعین دوہری توانائی کے ایکسرے جذب کرنے والے میٹر (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, USA) کے ذریعے چھوٹے مضامین کے لیے وضع کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔[18, 23] تمام پروٹوکول ادارہ جاتی رہنما خطوط کی تعمیل کرتے ہیں اور چائنا میڈیکل یونیورسٹی کی اینیمل کیئر کمیٹی نے ان کی منظوری دی تھی۔

شماریاتی تجزیہ

شماریاتی تجزیہ Prism 4 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔{4}}1 سافٹ ویئر۔ (GraphPad Software Inc.، San Diego, USA)۔ دی گئی اقدار کا مطلب SEM ہے۔ دو نمونوں کے درمیان شماریاتی تجزیہ اسٹوڈنٹ کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ بونفرونی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے ساتھ تغیر کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے دو سے زیادہ گروپوں کے شماریاتی موازنہ کیے گئے۔ تمام معاملات میں، P <0.05 کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

Cistanche deserticolaکے لیے اچھا ہےہڈی کی تشکیل

نتائج

Cistanche deserticolaنچوڑ ہڈیوں کے معدنیات کو بڑھاتا ہے جس سے آسٹیو بلوسٹس سی ڈی کا اضافہ ہوتا ہے۔(Cistanchedeserticola)24 یا 48 گھنٹے کے لیے نکالنے نے MTT پرکھ میں ماؤس آسٹیو بلاسٹ MC3T3-E1 خلیات کے پھیلاؤ کو متاثر نہیں کیا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ چونکہ آسٹیو بلاسٹ تفریق ایک پیچیدہ عمل ہے جس میں خلیوں کے پھیلاؤ اور منتقلی شامل ہے، ہم نے CD کے ساتھ علاج کے بعد MC3T3-E1 خلیوں کی نقل مکانی کی صلاحیت کا بھی تجربہ کیا۔(Cistanchedeserticola)نکالنا ٹرانس ویل اور زخموں کو ٹھیک کرنے والے اسسیس کا استعمال کرتے ہوئے، ہمیں وہ سی ڈی ملی(Cistanchedeserticola)اقتباس نے آسٹیو بلاسٹ ہجرت کو متاثر نہیں کیا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ معدنی نوڈولس کی تشکیل آسٹیو بلاسٹ میچوریشن کے نشانات میں سے ایک ہے۔ الیزارین ریڈ ایس سٹیننگ سے پتہ چلتا ہے کہ معدنیات سے متعلق نوڈول اس وقت بنتے ہیں جب آسٹیو بلوسٹس کو وٹامن سی (50 ug/ml) اور -glycerophosphate (10 mm) پر مشتمل میڈیم میں کلچر کیا جاتا ہے، جو CD کے اضافے سے ارتکاز پر منحصر ہوتا ہے۔(Cistanchedeserticola)(شکل 1a)۔ لہذا، سی ڈی(Cistanchedeserticola)مہذب آسٹیو بلوسٹس کے ذریعہ حوصلہ افزائی شدہ ہڈی کے نوڈول کی تشکیل کو نکالیں، لیکن ان کے پھیلاؤ یا منتقلی سے نہیں۔ ہم نے سی ڈی کے کردار کا بھی جائزہ لیا۔(Cistanchedeserticola)RANKL-حوصلہ افزائی osteoclastogenesis میں نکالا لیکن کوئی اثر نہیں ملا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔

Cistanche deserticola extract alkaline phosphatase، bone morphogenetic protein-2، اور osteopontin کے اظہار کو مہذب آسٹیو بلوسٹس میں بڑھاتا ہے

تفریق شدہ آسٹیو بلوسٹس بلند ALP سرگرمی کی نمائش کرتے ہیں، جو کہ انزائم اظہار کی اعلی سطح کے ساتھ تعلق رکھتی ہے۔[18] ہم نے وہ علاج سی ڈی کے ساتھ پایا(Cistanchedeserticola)72 گھنٹے کے لیے نچوڑ نے آسٹیو بلاسٹ ALP سرگرمی میں نمایاں اضافہ کیا (شکل 1b)۔ آسٹیو بلاسٹ تفریق میں BMP-2، ALP، اور OPN کے اہم کردار کو دیکھتے ہوئے، ہم نے جانچ کی کہ آیا CD(Cistanchedeserticola)اقتباس BMP-2، ALP، اور OPN اظہار کو ریگولیٹ کرکے آسٹیو بلاسٹ تفریق پر اپنا اثر ڈالتا ہے۔ سی ڈی کے ساتھ خلیات کا علاج(Cistanchedeserticola)ALP، BMP-2، اور OPN کے بڑھے ہوئے mRNA اظہار کو ارتکاز پر منحصر انداز میں نکالتا ہے (شکل 1c)، یہ ظاہر کرتا ہے کہ CD(Cistanchedeserticola)ALP، BMP-2، اور OPN اظہار کو اپ گریڈ کرکے آسٹیو بلوسٹس کی حوصلہ افزائی کی تفریق نکالیں۔

Cistanche deserticola extract mitogen-activated protein kinase pathway کے ذریعے ہڈیوں کے نوڈول کی تشکیل کو بڑھاتا ہے

بتایا گیا ہے کہ MAPK اس میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ہڈیتشکیل[24,25] لہذا ہم نے اگلی جانچ کی کہ آیا یہ سگنلنگ پاتھ وے سی ڈی میں شامل ہے۔(Cistanchedeserticola)نچوڑ حوصلہ افزائی ہڈی معدنیات. ERK inhibitor U0126، p38 inhibitor SB203580، یا JNK inhibitor SP600125 کم CD کے ساتھ خلیات کا پہلے سے علاج(Cistanchedeserticola)نچوڑ سے بڑھی ہوئی ہڈیوں کی معدنیات (اعداد و شمار 2a، 3a، اور 4a)۔ مزید برآں، روکنے والوں نے سی ڈی کو بھی بلاک کر دیا۔(Cistanchedeserticola)اقتباس سے حوصلہ افزائی ALP، BMP-2، اور OPN اظہار (اعداد و شمار 2b–4c)۔ ERK2، p38، یا JNK اتپریورتی کم CD والے خلیوں کی منتقلی(Cistanchedeserticola)ALP، BMP-2، اور OPN mRNA اظہار میں ایکسٹریکٹ اضافہ (اعداد و شمار 2c، 3c، اور 4c)۔ اگلا، ہم نے CD کے بعد ERK، p38، اور JNK ایکٹیویشن کا براہ راست جائزہ لیا۔(Cistanchedeserticola)علاج نکالنا. سی ڈی کے ساتھ خلیوں کا انکیوبیشن(Cistanchedeserticola)حوصلہ افزائی ERK، p38، اور JNK فاسفوریلیشن (اعداد و شمار 2d، 3d، اور 4d) نکالیں۔ لہذا، ERK، p38، اور JNK اضافہ میں ثالثی کرتے ہیں۔ہڈیتشکیلCD کی طرف سے حوصلہ افزائی(Cistanchedeserticola)osteoblasts کا علاج.

Cistanche deserticola اقتباس نیوکلیئر فیکٹر-kB پاتھ وے کے ذریعے ہڈیوں کے نوڈول کی تشکیل کو بڑھاتا ہے۔

جیسا کہ پہلے ذکر کیا گیا ہے، NF-kB ایکٹیویشن کے لیے ضروری ہے۔ہڈیتشکیل[26,27] ہم نے اگلی بار NF-kB inhibitors pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) اور N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) کے ساتھ اوسٹیو بلوسٹس کا علاج Calbiochem (Darmstadt, Germany) سے کیا تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ NF-kB ایکٹیویٹیشن ہے یا نہیں۔ سی ڈی میں ملوث(Cistanchedeserticola)نچوڑ حوصلہ افزائی ہڈی معدنیات. شکل 5a سے پتہ چلتا ہے کہ پی ڈی ٹی سی یا ٹی پی سی کے کے ساتھ آسٹیو بلوسٹس کی پری ٹریٹمنٹ سی ڈی کو روکتی ہے۔(Cistanchedeserticola)اقتباس کی حوصلہ افزائی سے ہڈی کے نوڈول کی تشکیل، اور ALP، BMP-2، اور OPN اظہار (شکل 5b اور 5c) میں اضافے کو بھی کم کیا۔ NF-kB p65 subunit کا فاسفوریلیشن NF-kB ایکٹیویشن کا ایک اشارہ ہے؛ [28] اس کے ساتھ ہم آہنگ، ہم نے پایا کہ CD(Cistanchedeserticola)نچوڑ نے آسٹیو بلوسٹس میں p65 فاسفوریلیشن میں اضافہ کیا (شکل 5d)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ NF-kB ایکٹیویشن CD ایکسٹریکٹ سے حوصلہ افزائی ALP، BMP-2، اور OPN اظہار اور ہڈیوں کے نوڈول کی تشکیل کے لیے اہم ہے۔

شکل 4 میں c-Jun N-terminal kinases (JNK) کی شمولیتCistanchedeserticola(CD) آسٹیو بلوسٹس میں ہڈیوں کی معدنیات کو نکالنا۔ (a) سیلوں کو 24-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا اور دو ہفتوں تک وٹامن سی (50 ملی گرام/ملی لیٹر) اور بی گلیسرو فاسفیٹ (10 ایم ایم) پر مشتمل میڈیم میں کلچر کیا گیا۔ خلیوں کا بیک وقت سی ڈی کے ساتھ علاج کیا گیا۔(Cistanchedeserticola)اقتباس (26 ملی گرام/ملی لیٹر) پلس ایس پی 600125 (3 ایم ایم)۔ معدنیات سے متعلق نوڈول کی تشکیل کا اندازہ الیزرین ریڈ-ایس سٹیننگ (n=5) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ (b، c) خلیات کو SP600125 کے ساتھ 30 منٹ تک پہلے سے علاج کیا گیا یا JNK اتپریورتی یا 24 گھنٹے کے ساتھ منتقل کیا گیا جس کے بعد CD ایکسٹریکٹ، اور الکلائن فاسفیٹیس (ALP) سرگرمی اور ALP، ہڈیوں کی مورفوجینیٹک پروٹین (BMP)-2 اور osteopontin (OPN) mRNA اظہار کی پیمائش ALP کٹ اور مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن سے کی گئی۔ ( d ) سیلوں کا اشارہ وقت کے وقفوں کے لئے CD ایکسٹریکٹ کے ساتھ کیا گیا تھا ، اور p-JNK اظہار کی جانچ مغربی بلاٹنگ کے ذریعہ کی گئی تھی۔ *پی< 0.05,="" compared="" with="" control="" group;="">< 0.05,="" compared="" with="" cd="">(Cistanchedeserticola)نچوڑ سے علاج شدہ گروپ۔

Ovariectomized چوہوں میں Cistanche deserticola نچوڑ کے ذریعہ ہڈیوں کے نقصان کی روک تھام

سی ڈی کے اثر کو جانچنا(Cistanchedeserticola)ہڈیوں کے نقصان پر نچوڑ، اوورییکٹومی کے ذریعے مادہ چوہوں میں آسٹیوپوروسس ہوا تھا۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، اوورییکٹومائزڈ چوہوں نے ظاہر کیا کہ جسم کی ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے معدنی مواد میں کمی واقع ہوئی ہے (شکل 6a اور 6b)۔ سی ڈی کے ساتھ علاج(Cistanchedeserticola)چار ہفتوں تک ایکسٹریکٹ نے خوراک پر منحصر انداز میں ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے معدنی مواد کے نقصان کو روکا (شکل 6a اور 6b)۔ ALP کے خون میں ارتکاز آسٹیو بلاسٹک سرگرمی کی عکاسی کر سکتا ہے۔[29] جیسا کہ شکل 6c، CD میں دکھایا گیا ہے۔(Cistanchedeserticola)ایکسٹریکٹ نے اوورییکٹومی کی وجہ سے سیرم ALP سرگرمی میں کمی کو روکا۔ اس کے علاوہ سی ڈی(Cistanchedeserticola)اقتباس بھی osteocalcin کی سطح میں اضافہ ہوا، ایک مارکرہڈیتشکیل، اور ٹائپ-I کولیجن کے C-ٹرمینل ٹیلوپیپٹائڈس کی سطح کو کم کر دیا، جو ہڈیوں کی بحالی کا ایک نشان ہے (شکل 6d اور 6e)۔ اس طرح یہ نتائج CD کی طاقت اور افادیت کی حمایت کرتے ہیں۔(Cistanchedeserticola)Vivo میں ہڈیوں کے نقصان کو روکنے میں اقتباس۔

تصویر 6 اوورییکٹومی کی روک تھام کی وجہ سے ہڈیوں کے معدنی کثافت اور ہڈیوں کے معدنی مواد میں کمیCistanchedeserticola(CD) اقتباس۔ خواتین آئی سی آر چوہوں کو دھوکہ دہی کا آپریشن کیا گیا تھا یا ان کو اوورییکٹومائز کیا گیا تھا۔ اوورییکٹومائزڈ چوہوں کا علاج سی ڈی کی نشاندہی شدہ حراستی کے ساتھ کیا گیا تھا۔(Cistanchedeserticola)زبانی کھانا کھلانے سے نکالیں۔ جسم کی کل ہڈیوں کی معدنی کثافت (a)، ہڈیوں کے معدنی مواد (b)، سیرم الکلائن فاسفیٹیس (ALP) سرگرمی (c)، سیرم آسٹیوکالسن (d)، اور قسم I کولیجن (e) کے سیرم C-ٹرمینل ٹیلوپیپٹائڈس کا تعین کیا گیا تھا۔ سرجری کے بعد ہفتوں. ڈیٹا کو اوسط SE، n=8–10 چوہوں/گروپ کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ *P < 0.05،="" شم="" کے="" مقابلے="" میں؛="" #p=""><0.05، اوورییکٹومائزڈ="" گروپ="" کے="">

بحث

اس مضمون کے حصہ دوم (تبادلہ خیال اور نتیجہ) کے بارے میں معلومات کے لیے یہاں کلک کریں۔

منجانب:'Cistanchedeserticolaنکالنے میں اضافہ ہوتا ہےہڈیتشکیلکی طرف سے osteoblasts میںٹی ماو لی^aET رحمہ اللہ تعالی

---© 2012 مصنفین۔ JPP © 2012 رائل فارماسیوٹیکل سوسائٹی 2012جرنل آف فارمیسی اینڈ فارماکولوجی, 64، صفحہ 897-907