وٹرو میں اور ویوو ٹیسٹس پارٹ 1 کے ذریعے تشخیص شدہ لائکین کے عرقوں کی ڈپگمنٹنگ پوٹینشل

Apr 11, 2023

خلاصہ

میلانین انسانی جلد کا اہم روغن ہے، جو الٹرا وائلٹ تابکاری سے تحفظ کا بنیادی کردار ادا کرتا ہے۔ میلانین کی پیداوار میں تبدیلی جمالیاتی اور صحت دونوں کے نتائج کے ساتھ ہائپر پگمنٹیشن کی بیماریوں کا باعث بن سکتی ہے۔ اس طرح، melanogenesis کو دبانے والے طبی اور کاسمیٹک علاج کے لیے مفید اوزار تصور کیے جاتے ہیں۔ بڑی دلچسپی قدرتی ذرائع پر مرکوز ہے، جس کا مقصد محفوظ اور مقداری طور پر دستیاب ڈیپگمنٹنگ مادوں کو تلاش کرنا ہے۔ Lichens کو اس قسم کے مرکب کے ممکنہ ذرائع سمجھا جاتا ہے، کیونکہ بہت سے فینولک مالیکیولز کی موجودگی میلانین کی ترکیب میں شامل فینولیس انزائمز پر ممکنہ اثرات کی نشاندہی کرتی ہے، جیسے ٹائروسینیز۔ اس کام میں، ہم نے بڑھتی ہوئی قطبیت کے سالوینٹس میں نچوڑ حاصل کرنے کے لیے، Cetraria islandica Ach.، Flavoparmelia caperata Hale، اور Letharia vulpina (L.) Hue، اور Parmotrema perlatum (Hudson) M. Choisy کا استعمال کیا۔ کلوروفارم، کلوروفارم میتھانول، میتھانول، اور پانی۔ سیل سے پاک، ٹائروسینیز کی روک تھام کے تجربات نے L. vulpina میتھانول کے عرق کے لیے سب سے زیادہ روک تھام ظاہر کی، اس کے بعد C. islandica chloroform-methanol۔ وٹرو اور ویوو سسٹمز، جیسے MeWo میلانوما سیلز اور زیبرا فش لاروا کا استعمال کرتے ہوئے ڈیپگمنٹنگ سرگرمیوں کے تقابلی نتائج دیکھے گئے۔ ہمارا مطالعہ ٹائروسینیز کی روک تھام سے لے کر خلیے تک اور ویوو ماڈلز میں لائکین کے عرقوں کے اثرات کو ظاہر کرنے کا پہلا ثبوت فراہم کرتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ L. vulpina اور C. islandica extracts جلد کو سفید کرنے والی مصنوعات تیار کرنے کے لیے مزید مطالعہ کے مستحق ہیں۔

متعلقہ مطالعات کے مطابق،cistancheایک عام جڑی بوٹی ہے جسے "معجزہ جڑی بوٹی جو زندگی کو طول دیتی ہے" کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اس کا بنیادی جزو ہے۔cistanoside، جس کے مختلف اثرات ہوتے ہیں جیسےاینٹی آکسیڈینٹ, غیر سوزشی، اور مدافعتی فنکشن کو فروغ دینا۔ cistanche اور کے درمیان میکانزمجلد کی سفیدیcistanche کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر میں مضمر ہے۔glycosides. انسانی جلد میں میلانین ٹائروسین کے آکسیکرن کے ذریعے پیدا ہوتا ہے۔ٹائروسینیز، اور آکسیڈیشن ردعمل میں آکسیجن کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، لہذا جسم میں آکسیجن فری ریڈیکلز میلانین کی پیداوار کو متاثر کرنے والا ایک اہم عنصر بن جاتے ہیں۔ Cistanche میں cistanoside ہوتا ہے، جو کہ ایک اینٹی آکسیڈینٹ ہے اور جسم میں آزاد ریڈیکلز کی پیداوار کو کم کر سکتا ہے، اس طرحمیلانین کی پیداوار کو روکتا ہے۔.

cistanche herb

سفیدی کے لیے Cistanche Tubulosa Supplement پر کلک کریں۔

مزید معلومات کے لیے:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

مضامینپلانٹ سائنس، ڈرمیٹولوجی

مطلوبہ الفاظTyrosinase، Lichen سیکنڈری میٹابولائٹس، Zebrafish، Melanogenesis، Letharia vulpina، Cetraria islandica

تعارف

کشیراتی جانوروں میں، میلانن کی ترکیب کو میلانوسائٹس نامی خصوصی خلیات کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے، جو کہ میلانوسومس کہلانے والے لائوسووم نما آرگنیلز کے اندر ہوتے ہیں۔ میلانائزیشن کو مختلف عملوں کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے، بشمول ماحولیاتی (مثلاً، UV شعاعیں) اور اینڈوجینس (مثلاً، -MSH) عوامل، میلانوکارٹن -1 ریسیپٹر (MC1R) کی تحریک، cAMP اور MAPK کے راستوں سے سگنل کی منتقلی، مائیکرو فیتھلمیا کو چالو کرنا۔ منسلک ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF)، اور پری میلانوسم پروٹین (Pmel)، ٹائروسینیز (TYR)، اور ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین (TYRP1) کا اظہار (D'Mello et al.، 2016؛ Cheli et al.، 2010)۔

ٹائروسینیز (EC1.14.18.1) میلانین کی ترکیب کا ایک کلیدی انزائم ہے اور میلانائزیشن کے ماڈیولیٹری ایجنٹوں کے ہدف کے طور پر وسیع پیمانے پر تحقیق کی گئی ہے۔ یہ ایک ملٹی فنکشنل تانبے پر مشتمل انزائم ہے، جو فطرت میں وسیع پیمانے پر تقسیم ہوتا ہے، جو جانوروں میں میلانائزیشن اور پودوں اور مائکروجنزموں میں بھورے پن کے لیے ذمہ دار ہے (کونڈو اینڈ ہیئرنگ، 2011)۔ انزائم میلانین کی تشکیل کے دو الگ الگ رد عمل کو اتپریرک کرتا ہے: مائکوفینولٹ سرگرمی کے ذریعہ ٹائروسین کا ہائیڈرو آکسیلیشن، اور 3،4-ڈائی ہائڈروکسی فینیلالینین (L-DOPA) کا آکسیڈیشن ڈیفینولز کے عمل سے o-dopaquinone سے۔ یہ رد عمل والے O-quinones میلانین بنانے کے لیے غیر انزیمیٹک پولیمرائزیشن سے گزرتے ہیں۔

cistanche amazon

اگرچہ انسانی جلد میں میلانین UV-حوصلہ افزائی سے ہونے والے نقصان سے تحفظ کے لیے ایک ضروری روغن ہے، لیکن میلانین کی ضرورت سے زیادہ پیداوار ہائپر پگمنٹیشن کی خرابیوں کا باعث بنتی ہے، جیسے میلاسما، ایفیلائیڈز، اور لینٹیگائنز (Mukherjee et al.، 2018)۔ یہ حالات بہت سے لوگوں کے لیے ایک مسئلہ کی نمائندگی کرتے ہیں اور اس کے نتیجے میں، ڈیپگمنٹنگ ایجنٹوں کی تلاش نے طبی اور دواسازی کے شعبوں میں بہت زیادہ دلچسپی پیدا کی ہے (سولانو، 2014)۔ لہٰذا، کافی تحقیقی کوششوں کو ہدایت کی گئی ہے کہ نئی قدرتی فعال مصنوعات کو دریافت کیا جائے جو محفوظ اور مقداری طور پر دستیاب پگمنٹیشن روکنے والے ہیں (Li et al., 2013; Lo et al., 2013; Wang et al., 2011)۔ بنیادی حکمت عملی ٹائروسینیز کو نشانہ بنانا ہے، جس میں قدرتی مصنوعات کو ٹائروسینیز انابیٹرز کے طور پر استعمال کرنے میں دلچسپی بڑھ رہی ہے (لیڈن ایٹ ال۔، 2011)۔ ادب میں، قدرتی ذرائع سے ٹائروسینیز روکنے والوں کی ایک بڑی تعداد پگمنٹیشن جلد کی خرابیوں کے علاج کے لیے ان کے ممکنہ استعمال کی اطلاع دی گئی ہے (مکھرجی ایٹ ال۔، 2018؛ پرویز ایٹ ال۔، 2007)۔ ان میں سے بہت سے مرکبات کے لیے، روکنے والی سرگرمی کا تعلق ان کے فینولک ڈھانچے سے ہے جو اعلیٰ اینٹی آکسیڈینٹ طاقت فراہم کرتا ہے۔ شواہد کے مختلف ٹکڑوں سے پتہ چلتا ہے کہ اس قسم کے مرکبات کے ممکنہ ذرائع کے طور پر لائیچنز کی تحقیق کی جانی چاہئے (Brandão et al., 2017; Higuchi et al., 1993; Honda et al., 2016; Lopes, Coelho & Honda, 2018)۔

Lichens ایک ہیٹروٹروفک فنگس (مائکوبیونٹ) اور ایک یا زیادہ فوٹو سنتھیٹک پارٹنرز (فوٹو بائیونٹس) (نیش III، 2006) کے درمیان سمبیوٹک ایسوسی ایشن ہیں۔ symbiosis کے نتیجے میں، مائکوبیونٹ کئی ثانوی میٹابولائٹس (جسے lichen مادہ کہتے ہیں) پیدا کرتا ہے، جن میں سے زیادہ تر ان جانداروں کے لیے منفرد ہیں (Ranković & Kosanić، 2015)۔ یہ میٹابولائٹس حیاتیاتی اور ابیوٹک عوامل، جیسے کہ سبزی خور یا UV تابکاری (Phinney, Solhaug & Gauslaa, 2018) سے بچانے میں مدد کر سکتے ہیں۔ ان میں سے زیادہ تر فینولک مرکبات ہیں جو بنیادی طور پر ایسیٹیٹ پولی میلونیٹ پاتھ وے سے اخذ کیے گئے ہیں اور توقع کی جاتی ہے کہ وہ کئی حیاتیاتی سرگرمیوں کے متحمل ہوں گے۔ اس کے مطابق، لائیچین کو دنیا بھر میں روایتی ادویات میں مختلف مقاصد کے لیے استعمال کیا جاتا ہے (Crawford, 2015; Devkota et al., 2017)، جبکہ مختلف lichen مادوں کو جڑی بوٹیوں اور دواسازی کے لیے استعمال کیا جاتا ہے (Einarsdóttir et al., 2010; Gül¸ cin et al.، 2002؛ Ranković اور Kosanić، 2015)۔ مختلف خصوصیات میں سے، ان مرکبات کی فینولک نوعیت فینولیس انزائمز جیسے ٹائروسینیز (Honda et al. Lichens قدرتی اینٹی آکسیڈنٹس کے اچھے ذرائع ہیں، جن میں سے کچھ کو ٹائروسینیز انحیبیٹرز کے طور پر پہچانا جاتا ہے (بہیرا، اڈوادکر اور مکھیجا، 2004)۔ کچھ پیٹنٹس ٹائروسینیز کے خلاف سرگرمیوں کا دعویٰ بھی کر رہے ہیں جو لائکین کے عرقوں یا لائکین مرکبات سے متعلق ہیں (Takayama et al., 2010)، لیکن انہیں طویل عرصے سے نظر انداز کیا گیا ہے اور بنیادی طور پر ان کو کافی مقدار اور ساختی وضاحت کے لیے کافی مقدار اور طہارت حاصل کرنے میں مشکلات کی وجہ سے نظر انداز کیا گیا ہے۔ فارماسولوجیکل ٹیسٹنگ (Boustie, Tomasi & Grube, 2011; Muggia, Schmitt & Grube, 2009)۔

اس مطالعہ کا مقصد مختلف پگمنٹیشن ماڈلز، سیل فری اور سیلولر دونوں پر لائکین مادوں کے حیاتیاتی اثرات کو تلاش کرنا تھا، جس میں ویوو زیبرا فش تجربات بھی شامل ہیں۔ مزید برآں، ہم نے ڈیپگمنٹنگ کمپاؤنڈز کو نکالنے اور فارماسیوٹیکل اور کاسمیٹک ڈیپگمنٹنگ پروڈکٹس کی تیاری کے لیے لائیچین کے استحصال کے امکان کے بارے میں اشارے فراہم کیے ہیں۔ میلانائزیشن پر لائکین اثرات کے بارے میں محدود معلومات کی وجہ سے، ہم نے سب سے پہلے مختلف پرجاتیوں کی اسکریننگ کی جو ان کی وسیع تقسیم اور کثرت کے لیے مشہور ہیں۔ Cetraria islandica Ach.، Flavoparmelia caperata Hale، Letharia vulpina (L.) Hue، اور Parmotrema perlatum (Hudson) M. Choisy. ہر ایک پرجاتی سے، ہم نے خالص کلوروفارم سے لے کر پانی تک، بڑھتی ہوئی قطبیت کے سالوینٹس کا استعمال کرکے چار اقتباسات کی ایک سیریز حاصل کی۔ پہلے سروے کے طور پر، تمام نچوڑوں کا سیل فری، ٹائروسینیز انحبیشن تجربات میں تجربہ کیا گیا۔ نشان زد خوراک پر منحصر روکنے والی سرگرمی کو ظاہر کرنے والے نچوڑ کا استعمال وٹرو اور ویوو میلانائزیشن ماڈلز میں بالترتیب میلانین پیدا کرنے والے میلانوما سیلز (MeWo) کی ثقافتوں اور زیبرا فش ایمبریو کی نشوونما کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ہم نے زیبرا فش کا استعمال کیا کیونکہ اسے حال ہی میں میلانوجینک ریگولیٹری مرکبات کی فینوٹائپ پر مبنی اسکریننگ کے لیے ایک ان ویوو ماڈل کے طور پر قائم کیا گیا ہے (لن ایٹ ال۔، 2011)۔ خاص طور پر، زیبرا فش منشیات کے اثرات کا اندازہ لگانے کے لیے ایک اہم کشیراتی نمونہ بن گیا ہے کیونکہ یہ منفرد خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے، بشمول دیکھ بھال اور منشیات کے انتظام میں آسانی، مختصر تولیدی سائیکل، بیرونی فرٹلائجیشن، اور نشوونما، شفافیت کے ذریعے ترقیاتی ماحول اور نظری پیمائش میں ہیرا پھیری کی اجازت دیتی ہے۔ جسم کی دیوار.

cistanche para que serve

مواد اور طریقے

کیمیکل

تمام ریجنٹس سگما-الڈرچ (میلان، اٹلی) سے خریدے گئے تھے جب تک کہ دوسری صورت میں اشارہ نہ کیا جائے۔

Lichen پرجاتیوں اور نچوڑ کی تیاری

F. caperata اور P. perlatum کے Thalli کو مشرقی لیگوریا (NW Italy) کے جنگلاتی علاقے میں جمع کیا گیا تھا، L. vulpina والٹورنینچ (NE Valle d'Aosta، ​​Italy) کے جنگلاتی علاقے میں، اور C. islandica کو کبجا سے خریدا گیا تھا۔ Ürditalu (ٹالن، ایسٹونیا)۔ اطالوی قانون سازی کے مطابق لائکین جمع کرنے کے لیے کسی اجازت کی ضرورت نہیں ہے۔ ہم میں سے ایک (PG) نے شناختی چابیاں اور اسپاٹ ٹیسٹ کی مدد سے مائکروسکوپ کے تجزیے کے ذریعے لائکین مواد کی شناخت کی تھی۔ اس کے بعد لکین مواد کو ملبے سے صاف کیا گیا، رات بھر کمرے کے درجہ حرارت پر خشک ہونے کے لیے چھوڑ دیا گیا، اور استعمال ہونے تک کمرے کے درجہ حرارت پر کاغذ کے تھیلوں میں محفوظ کیا گیا۔

خشک لکین تھیلی کو کمرے کے درجہ حرارت (تقریباً 23 ◦C) پر کلوروفارم سے پانی میں چار سالوینٹ قطبین کے ساتھ نکالا گیا: کلوروفارم، کلوروفارم – میتھانول (9:1)، میتھانول، اور پانی (14.4 جی ایف کیپیراٹا ہر ایک کے 70 ملی لیٹر میں سالوینٹ، 60 ملی لیٹر میں 10.4 جی پی پرلیٹم، 75 ملی لیٹر میں 13.3 جی ایل ولپینا، اور 500 ملی لیٹر میں 100.6 جی سی آئی لینڈیکا)۔ ہر سالوینٹس کے لیے 5 دن اور 3 بار نکالے گئے، بار بار اشتعال کے ساتھ۔ اس کے بعد سپرنٹنٹ مائع کو روٹری سسٹم (روٹاواپور ہائیڈولف، شواباچ، جرمنی) میں خشک نچوڑ (سوزا ایٹ ال۔، 2016) حاصل کرنے کے لیے فلٹر کیا گیا اور خشک ہونے کے لیے بخارات بنا دیا گیا۔ لکین کے عرق کی پیداوار کی اطلاع جدول 1 میں دی گئی ہے۔

cistanche tubulosa

ٹائروسینیز روکنا پرکھ

لائکین کے عرقوں کو ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) میں 10 mg/ml کی آخری ارتکاز میں تحلیل کیا گیا تھا۔ 10، 50، 100، 250، 350، اور 500 µg/ml کے حتمی ارتکاز کے ساتھ ٹیسٹ سلوشنز کی ایک سیریز حاصل کرنے کے لیے ایکسٹریکٹ اسٹاک سلوشنز کو پھر پانی میں پتلا کر دیا گیا۔ ری ایکشن مکس کے اجزاء کو کنویں کی پلیٹوں کے ہر کنویں میں درج ذیل ترتیب میں شامل کیا گیا: 70 µL فاسفیٹ بفر، 60 µL ایکسٹریکٹ سلوشنز (کنٹرول کے لیے پانی)، 10 µL مشروم ٹائروسینیز (سگما-الڈرچ، T3824، 25 kU، فاسفیٹ بفر میں 125 U/ml، pH 6.8) اور 70 µL L-tyrosine (0.3 mg/ml پانی میں)۔ 0.5 سے 500 µg/ml تک ارتکاز میں اضافے پر، کوجک ایسڈ کو مثبت کنٹرول کے طور پر لائکن کے عرق کے بجائے استعمال کیا گیا۔ انزائمز کے بغیر خالی نمونے بھی تمام حالات کے لیے شامل کیے گئے تھے۔ اس کے بعد پلیٹوں کو 60 منٹ کے لئے 30 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا اور مائکروپلیٹ ریڈر (اسپیکٹرا میکس 340PC) میں جاذبیت 505 nm پر پڑھی گئی۔ فیصد روکنے والی سرگرمی (I فیصد ) کا حساب فارمولے کے مطابق کیا گیا تھا۔

cistanche reddit

جہاں Aex/en=نچوڑ اور انزائم کے ساتھ نمونے کے مرکب کا جذب؛ نچوڑ کے ساتھ اور بغیر انزائم کے نمونے کے مرکب کا Aex=جذب؛ اینزائم کے ساتھ اور بغیر نچوڑ کے نمونے کے مرکب کا Aen=جذب؛ انزائم اور نچوڑ کے بغیر نمونے کے مرکب کا Abk=جذب (خالی)۔

TLC بائیو آٹوگرافی تجزیہ

روایتی TLC کرومیٹوگرافک پروفائل 20 × 20 سینٹی میٹر پلیٹوں (مرک سلیکا جیل 60 F254) پر لٹریچر پروٹوکول (کلبرسن اور کرسٹنسن، 1970؛ وائٹ اینڈ جیمز، 1985) کے بعد کیا گیا تھا۔ مختصراً، L. vulpina methanolic extract اور C. islandica chloroform-methanol کے نچوڑ کے نمونے ان کے نکالنے والے سالوینٹس میں حل کیے گئے اور پھر کیپلیری ٹیوب کا استعمال کرتے ہوئے TLC پلیٹ پر دیکھے گئے۔ TLC پروفائل ٹولیوین: ایسٹک ایسڈ (200:30 ملی لیٹر) کو موبائل فیز (سالوینٹ سی) کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ سالوینٹ فرنٹ تک پہنچنے کے بعد، پلیٹ کو کمرے کے درجہ حرارت پر خشک ہونے کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ خشک پلیٹوں کی جانچ پڑتال کی گئی اور ابتدائی طور پر مرئی روشنی (دن کی روشنی) میں رنگین دھبوں کے طور پر روغن کا پتہ لگانے کے لیے، اور پھر فلوروسینس روشنی میں، 254 اور 350 این ایم اتیجیت کا استعمال کرتے ہوئے ان کی تصویر کشی کی گئی۔

ہر جگہ پر ٹائروسینیز کی روک تھام کی سرگرمی کی موجودگی کا تصور کرنے کے لیے، TLC پلیٹوں پر L-tyrosine محلول (تقریباً 2.5 × 10−5 mmol/cm2 ) اور پھر ٹائروسینیز محلول (تقریباً 3.6 U/cm2 ) کے ساتھ اسپرے کیا گیا۔ ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی والے دھبے سیاہ پس منظر پر سفید دکھائی دیتے ہیں (وانگتھونگ ایٹ ال۔، 2007)۔

سیل کلچر، سیل ویبلٹی، اور میلانین اسسیس

MeWo ہیومن میلانوما سیل لائن (cat. HTB-65, ATCC, Manassas, VA, USA، سیل ویبلٹی پرکھ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، جیسا کہ Pastorino et al. (2017) نے رپورٹ کیا ہے، اور میلانین پرکھ کے لیے، جیسا کہ بیان کیا گیا ہے۔ Cornara et al. (2018)۔

cistanche tubulosa supplement

مختصراً، سیل کے قابل عمل پرکھ کے لیے، خلیات کو 96-کنواں پلیٹوں میں آباد کیا گیا تھا، جو 48 گھنٹے کے لیے لایکن ایکسٹریکٹ ارتکاز کے لوگاریتھمک سیریز کے سامنے آئے تھے، جس کی جانچ 3-(4,5-dimethylthiazol{{{{ 5} yl)-2،5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) کا رد عمل، اور مائکروپلیٹ ریڈر (Spectra Max 340 PC) میں 550 nm پر پڑھیں۔ میلانین پرکھ کے لیے، خلیات کو 24-کنواں پلیٹوں میں آباد کیا گیا تھا، جو لکین کے نچوڑ سے تین نقلوں میں ظاہر کیے گئے تھے، یا مثبت کنٹرول کے طور پر آربوٹین (8 ایم ایم)، پی بی ایس کے ساتھ دھوئے گئے، ٹرپسنائزڈ، سینٹری فیوجڈ، منجمد پگھلائے گئے، 1 این میں تحلیل کیے گئے۔ NaOH، اور مائکروپلیٹ ریڈر میں 505 nm پر پڑھیں۔ خاص طور پر، غیر سائٹوٹوکسک ارتکاز کا تجربہ کیا گیا: L. ولپینا کے لیے 10 اور 50 µg/ml، اور C. islandica کے لیے 25 اور 50 µg/ml۔

زیبرا فش ڈیپگمنٹیشن پرکھ

بالغ زیبرا فش (ڈینیو ریریو) کو ایک تجارتی ڈیلر سے حاصل کیا گیا تھا اور اسے گردشی نظام میں رکھا گیا تھا جس میں 500–530/سینٹی میٹر پانی کی چالکتا 27 ◦C، pH 7.0–7.5 ایک مستقل 14/10 روشنی کے تحت/ سیاہ فوٹو پیریڈ جانوروں کی ویٹرنری دیکھ بھال اطالوی قانون (D.to L.Vo 26/2014) کے مطابق کی گئی تھی اور تجربات کو ادارہ جاتی اخلاقیات کا جائزہ لینے والی باڈی (جینوا یونیورسٹی) اور اطالوی وزارت صحت (اجازت 720/) نے منظور کیا تھا۔ 2015-PR)۔ بالغ زیبرا فش کی سپوننگ معیاری طریقوں کے مطابق کی گئی تھی۔ خاص طور پر، مطابقت پذیر جنین صبح کے وقت روشنی کو آن کر کے قدرتی اسپوننگ سے حاصل کیے گئے تھے۔ ایمبریوز کو کنویں کی پلیٹوں میں ترتیب دیا گیا تھا جس میں 2 ملی لیٹر ایمبریو میڈیم اور 15 ایمبریوز فی کنواں تھے۔ ایکسٹریکٹ سٹاک سلوشنز کو استعمال سے عین قبل ایمبریو میڈیم کے ساتھ مطلوبہ ارتکاز میں پتلا کر دیا گیا تھا (L. vulpina methanol extract: 6–45 µg/ml; C. islandica chloroform-methanol extract: 5–65 µg/ml)۔ ہر ایک کنویں میں پتلا عرق شامل کیا گیا اور 8 سے 56 hpf (کھانے کے بعد کے گھنٹے) تک انکیوبیٹ کیا گیا، جس کے نتیجے میں 48 گھنٹے کی نمائش ہوئی۔ اربوٹین 10 ایم ایم کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ مرکبات کی یکساں تقسیم کو یقینی بنانے کے لیے میڈیم کی تبدیلی ہر 24 گھنٹے بعد کی جاتی تھی۔ 56 ایچ پی ایف کے ایمبریوز کو فورسپس کے ذریعے ڈیکورونیٹ کیا گیا، ٹرائیکین میتھین سلفونیٹ محلول (سگما الڈرچ) میں اینستھیٹائز کیا گیا، اور پھر سٹیریو مائکروسکوپ (لائیکا M205C) کے تحت تصویر کشی کی گئی۔ امیج جے سافٹ ویئر v. 1.74 کا استعمال کرتے ہوئے پگمنٹیشن پر اثرات کا جائزہ لیا گیا۔ پکسل پیمائش تجزیہ کار فنکشن زیبرا فش پگمنٹیشن کے علاقے کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

tyrosinase inhibition، MTT، اور zebrafish pigmentation data کے ذریعے حاصل کردہ خوراک – ردعمل کے منحنی خطوط کا تجزیہ ایک لاجسٹک ریگریشن ماڈل کے ذریعے کیا گیا، جس سے IC50 اور IC05 قدریں حاصل ہوئیں جنہیں بالترتیب درمیانی اور حد کی سطح کے طور پر فرض کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار کا موازنہ R 3.0.1 (R کور ٹیم، 2013) ماحول کے ساتھ کیا گیا، ANOVA ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے، بونفرونی کی اصلاح کے ساتھ t طالب علم، اور متعدد موازنہ کے لیے Dunnett کے ٹیسٹ۔

cistanche supplement

نتائج

ٹائروسینیز کی سرگرمی پر اثرات

Lichen کے عرقوں نے مشروم ٹائروسینیز کی سرگرمی پر ماڈیولیٹری اثرات کا ایک پیچیدہ حصہ دکھایا، جس کا اندازہ سیل فری پرکھ میں وٹرو میں کیا گیا۔ کچھ اقتباسات نے ٹائروسینیز ایکٹیویشن کی حوصلہ افزائی کی، خاص طور پر F. caperata methanol، chloroform، اور L. vulpina water extracts، دوسروں نے biphasic رویہ دکھایا، جبکہ کچھ روکے ہوئے تھے (تصویر 1 اور جدول 2)۔ خاص طور پر، کلوروفارم-میتھانول (تصویر 1B) اور میتھانول کے نچوڑ (تصویر 1C) نے خوراک پر منحصر اثرات کے ساتھ، پورے مضبوط ٹائروسینیز کی روک تھام کو ظاہر کیا۔ L. vulpina (تصویر 1C) کے میتھانول کے عرق کے لیے سب سے مضبوط روک تھام کی سرگرمی ریکارڈ کی گئی، اس کے بعد C. islandica (تصویر 1B) کا کلوروفارم-میتھانول ایکسٹریکٹ۔ ان نچوڑ کی روک تھام کرنے والی سرگرمیاں صرف وہی تھیں جنہوں نے 95 فیصد CI (ٹیبل 2) کے ساتھ IC50 اقدار کا تخمینہ لگانے کی اجازت دی۔ ایک مثبت کنٹرول کے طور پر، ان تجربات میں 13.9 µg/ml (95 فیصد اعتماد کا وقفہ: 12.4–15.7) کے IC50 کے ساتھ کوجک ایسڈ سے متاثرہ ٹائروسینیز روکنا۔

سیل سے پاک تجربات کے نتائج کی بنیاد پر، ہم نے L. vulpina methanol اور C. islandica chloroform-methanol extracts کا انتخاب کیا تاکہ میلانوما سیلز پر ان وٹرو ماڈل کے ساتھ ساتھ زیبرا فش پر ان ویوو ماڈل کے طور پر ان کے ڈیپگمنٹنگ اثرات کی جانچ کی جا سکے۔

cistanches herba


مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

شاید آپ یہ بھی پسند کریں