HPLC کے ذریعہ Cistanche Herba کے پانی کے نچوڑ میں Echinacoside کا تعین

خلاصہ:

مقصد کے لیے ایک HPLC طریقہ قائم کیا گیا تھا۔echinacoside کا تعینمیںCistanche کے پانی کا عرقہربا

طریقوں Echinacoside HPLC کی طرف سے مقرر کیا گیا تھا. علیحدگی Inertsil ODS-SP C18 کالم پر ایک موبائل فیز کے ساتھ کی گئی تھی جس میں acetonitrile(A) اور 0.4% فاسفورک ایسڈ سلوشن (B) پر مشتمل تھا، گریڈینٹ ایلیوشن کے ذریعے۔ پتہ لگانے کی طول موج 333 nm پر سیٹ کی گئی تھی، اور کالم کا درجہ حرارت 30 ڈگری تھا۔ بہاؤ کی شرح 1.0 mL·min-1 تھی اور انجیکشن کا حجم 10 μL تھا۔ نتائج 44 کے ارتکاز کی حد کے اندر echinacoside کا لکیری رشتہ۔{11}}۔{12}} ug ·mL- 1 اچھا تھا وصولیاں 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%,n=9) تھیں۔ Cistanche herba کے پانی کے عرق میں echinacoside کا مواد 15.527,7.347,12.267 mg·g-1 تھا۔ نتیجہ درست، سادہ اور قابل عمل ہے۔ یہ Cistanche herba کے پانی کے عرق میں echinacoside کے تعین کے لیے موزوں ہے۔

مطلوبہ الفاظ:HPLC;Cistanche herba کے پانی کا عرق; Echinacoside; مواد کا تعین

Cistanche deserticola ایک ٹانک روایتی چینی دوا ہے جو عام طور پر طبی مشق میں استعمال ہوتی ہے اور اسے "صحرائی ginseng" [1] کے نام سے جانا جاتا ہے۔ چینی فارماکوپیا کے 2015 کے ایڈیشن میں ریکارڈ کیا گیا Cistanche deserticola، Cistanche deserticola YC Ma یا Cistanche tubulosa (Schenk) Wight کے کھردری پتوں کے ساتھ خشک مانسل تنا ہے۔ یہ گرم، میٹھا اور نمکین ہے، اور گردے اور بڑی آنت کے میریڈیئنز میں واپس آتا ہے۔ اس میں گردے یانگ کی پرورش، جوہر اور خون کو بھرنے، اور آنتوں اور جلاب کو نمی بخشنے کے اثرات ہیں [2]۔ "شین نونگ کی میٹیریا میڈیکا،" کہتی ہے کہ یہ "درمیان کو ٹنائی، پانچ اندرونی اعضاء کی پرورش، ین کو مضبوط اور جوہر کی پرورش کر سکتی ہے"۔ Cistanche deserticola میں بنیادی طور پر phenylethanoid glycosides، iridoids اور ان کے glycosides، lignans اور ان کے glycosides، polysaccharides، ester compounds اور alkaloids ہوتے ہیں [3]۔ Phenylethanol glycosides Cistanche deserticola کے اہم فعال اجزاء ہیں۔ ان میں سے، echinacoside اور verbascoside چینی فارماکوپیا میں Cistanche deserticola میں درج ہیں۔

شناخت اور مواد کے تعین کے لیے اشارے والے اجزاء۔ فارماسولوجیکل اسٹڈیز [4] سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche deserticola کے مختلف فارماسولوجیکل اثرات ہیں جیسے جلاب، جگر کی حفاظت، اینٹی آسٹیوپوروسس، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ایجنگ، اور اینٹی تھکاوٹ۔ Cistanche deserticola aqueous extract چوہا آسٹیو بلوسٹس میں ہڈیوں کے مورفوجینیٹک پروٹین 2 جین کے اظہار کو فروغ دے سکتا ہے، ٹارٹریٹ مزاحم ایسڈ فاسفیٹیس، اوورییکٹومائزڈ چوہوں کے سیرم میں اوسٹیوکالسن، اور Smad1، mad5 جینز، بو میرو میں ترقی کے عنصر کو تبدیل کرتا ہے۔ ، اینٹی آسٹیوپوروسس اثرات ہیں [5-6]۔

Echinacea آسٹیو بلوسٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتا ہے اور بون میرو mesenchymal اسٹیم سیلز کے فرق کو فروغ دے سکتا ہے جو وٹرو میں آسٹیو بلوسٹس میں کلچر ہوتے ہیں [7-9]۔ حالیہ برسوں میں، Cistanche deserticola ethanol extract اور اس کی مرکب تیاریوں میں echinacoside اور verbascoside کے مواد کے تعین کے بارے میں بہت سی تحقیقی رپورٹس آئی ہیں، لیکن Cistanche deserticola میں انڈیکس اجزاء کے مواد کے تعین کے بارے میں کچھ رپورٹس موجود ہیں۔ آبی نچوڑ. اس مطالعہ میں، اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کا استعمال Cistanche deserticola کے آبی نچوڑ میں echinaceaside کے مواد کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔

1 مواد

1.1 آلات

LC-20AT اعلی کارکردگی والی مائع کرومیٹوگرافی، SPD-20ایک ڈیٹیکٹر، SIL-20ایک آٹو سیمپلر، CTO-10ASvp کالم اوون، LC سلوشن مائع کرومیٹوگرافی ورک سٹیشن، Shimadzu Corporation of جاپان؛ MES125P-OCE-DU الیکٹرانک تجزیاتی توازن، سارٹوریئس کمپنی، جرمنی؛ SHZ-D (Ⅲ) گردش کرنے والا پانی کثیر مقصدی ویکیوم پمپ، Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 روٹری ایوپوریٹر کولنگ سرکولیشن سسٹم، RV 10 D S96 روٹری ایوپوریٹر، IKA کمپنی، جرمنی؛ DK-S26

الیکٹرک مسلسل درجہ حرارت پانی کا غسل، شنگھائی Jinghong تجرباتی آلات کمپنی، لمیٹڈ؛ یو پی آر سیریز الٹرا پیور واٹر مشین، سیچوان یوپو الٹرا پیور ٹیکنالوجی کمپنی، لمیٹڈ۔

1.2 دواؤں کے مواد اور ری ایجنٹس

Cistanche deserticola میڈیسنیل مواد Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Limited سے خریدا گیا تھا، بیچ نمبر: 1801001, 1806001, 181001۔ Tu Xingming، جو چینی روایتی چینی فارماسسٹ کی نشاندہی کرتا ہے، میانگ ژو کے تیسرے ملحقہ ہسپتال میں چینی فارماسسٹ کی شناخت کی گئی ہے۔ Cistanche deserticola YCMa کے کھردرے پتوں کے ساتھ خشک مانسل تنے کے طور پر۔ یہ نمونہ گوانگژو یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن کے تیسرے منسلک ہسپتال کے ڈرگ ٹیسٹنگ روم میں محفوظ ہے۔ Echinacea Glycoside حوالہ جات، مواد 89.7%، چائنا انسٹی ٹیوٹ آف فوڈ اینڈ ڈرگ کنٹرول، بیچ نمبر: 111670-

201706; acetonitrile chromatographically خالص ہے (مرک، جرمنی)؛ میتھانول اور فاسفورک ایسڈ تجزیاتی طور پر خالص ہیں (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.)؛ پانی انتہائی خالص پانی ہے.

2 طریقے اور نتائج

2.1 Cistanche deserticola کے پانی کے عرق کی تیاری

Cistanche deserticola میڈیسنیل مواد کا موٹا پاؤڈر لیں، 10 بار آست پانی، حرارت اور ریفلکس نکالنے کے لیے دو بار، ہر بار 1 گھنٹہ شامل کریں، فلٹر کریں، فلٹریٹ کو یکجا کریں، اور فلٹریٹ کو روٹری ایوپوریٹر سے مرتکز کریں۔ 0.100 g·mL-1 کے خام منشیات کے مواد تک، اور بعد میں استعمال کے لیے اسے 4 ڈگری پر اسٹور کریں۔

2.2 کرومیٹوگرافک حالات اور نظام کی مناسبیت

کرومیٹوگرافک کالم: Inertsil ODS SP C18 کالم (150 ملی میٹر × 4.6 ملی میٹر، 5 μm)؛ موبائل مرحلہ: acetonitrile (A)-0.4% فاسفورک ایسڈ محلول (B)، تدریجی اخراج: 0 ~ 5 منٹ، 17%

ایک; 5 ~ 25 منٹ، 20% A; 25 ~ 30 منٹ، 17% A; پتہ لگانے کی طول موج: 333 این ایم؛ کالم درجہ حرارت: 30 ڈگری؛ بہاؤ کی شرح: 1.0 mL·min-1;

انجیکشن کا حجم: 10 μL۔ ان chromatographic حالات کے تحت، echinacoside اور ملحقہ اجزاء کی چوٹیوں کے درمیان علیحدگی 1.5 سے زیادہ ہے، اور echinaceaside چوٹی پر مبنی نظریاتی پلیٹوں کی تعداد 4،000 سے کم نہیں ہونی چاہیے۔ کرومیٹوگرام کو شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔

2.3 حل کی تیاری

2.3.1 حوالہ جات کا محلول ایکناکوسائیڈ ریفرنس مادہ کی مناسب مقدار کا وزن کریں، اسے درست طریقے سے وزن کریں، اسے 10 ملی لیٹر والیومیٹرک فلاسک میں رکھیں، اسے تحلیل کرنے کے لیے میتھانول شامل کریں، اور ایک حوالہ مادہ کا محلول تیار کریں جس میں 898.794 ug echinaceaside فی ملی لیٹر، 4 ڈگری پر مشتمل ہو۔ بعد میں استعمال کے لیے محفوظ کریں۔

2.3.2 ٹیسٹ حل

2۔ حاصل کرنے کے لیے ایک 0.22 μm مائکروپورس جھلی۔

2.4 لکیری تعلقات کی تحقیقات

درست طریقے سے پیمائش کریں {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, آئٹم 2.3.1 کے تحت حوالہ محلول کا 3۔ }، 89۔{19}}۔ 179۔{21}}، 359۔ 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کے مطابق پیمائش کریں، اور چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں۔ حوالہ مادہ کی بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ لکیری رجعت کو بطور abscissa (X, ug·mL-1) اور چوٹی کے علاقے کو ordinate (Y) کے طور پر انجام دیں، اور رجعت کی مساوات حاصل کی جاتی ہے: Y=13 185 .0X-32 273.0، r=0۔{39}}۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ایکائنسیا کا 44 کے ارتکاز کی حد کے اندر ایک اچھا لکیری تعلق ہے۔{41}} ~ 539۔{43}} ug·mL-1۔

2.5 صحت سے متعلق ٹیسٹ

539276 4 ug ·mL- 1 حوالہ حل لیں، 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کے مطابق مسلسل 6 بار انجیکشن اور پیمائش کریں، اور چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ echinacoside چوٹی کے علاقے کا RSD 1.81% تھا، جو آلہ کی اچھی درستگی کی نشاندہی کرتا ہے۔

2.6 استحکام ٹیسٹ

درست طریقے سے 2۔ 7}}.22 μm مائکروپورس جھلی، آئٹم 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کی پیروی کریں، اور بالترتیب 0 اور 2 پر رکھیں۔ ، 4، 8، 12، 24 گھنٹہ انجیکشن کی پیمائش، چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ echinacoside چوٹی کے علاقے کا RSD 1.16% تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ 24 گھنٹوں کے اندر ٹیسٹ سلوشن میں اچھی استحکام ہے۔

2.7 تکراری ٹیسٹ

Cistanche deserticola water extract کے 2. 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کے مطابق پیمائش کے لیے نمونے لگائیں اور چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ RSD کیechinacosideبڑے پیمانے پر ارتکاز 1.28٪ تھا، جو طریقہ کار کی اچھی تکرار کی نشاندہی کرتا ہے۔

2.8 نمونہ وصولی ٹیسٹ

Cistanche deserticola water extract کے 1.{2}} mL کے 9 حصوں کو درست طریقے سے پیمائش کریں، 0.8، 1.0، اور 1.2 mL حوالہ حل (1.552 mg·mL{{11) شامل کریں۔ }}) بالترتیب، پانی کے غسل میں خشک ہونے کے لیے بخارات بنیں، پگھلنے کے لیے میتھانول شامل کریں، اور 10 mL والیومیٹرک فلاسک میں ایڈجسٹ کریں؛ اچھی طرح سے ہلائیں اور 0.22 μm مائکرو پورس جھلی کے ذریعے فلٹر کریں تاکہ اعلی، درمیانے اور کم ارتکاز کے ٹیسٹ حل تیار کریں۔ متوازی طور پر ہر ارتکاز کی 3 کاپیاں تیار کریں۔ 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کے مطابق پیمائش کریں۔ چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں اور نمونے کی وصولی کا حساب لگائیں۔ شرح نتائج ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔

2.9 نمونے کے مواد کا تعین

Cistanche deserticola aqueous extract کے 20 mL کے 3 حصوں کو درست طریقے سے ماپیں، پانی کے غسل میں خشک ہونے کے لیے بخارات بن جائیں، پگھلنے کے لیے میتھانول شامل کریں، 10 mL والیومیٹرک فلاسک میں پتلا کریں، اچھی طرح ہلائیں، اس کے ساتھ فلٹر کریں۔ ایک 0.22 μm مائکروپورس جھلی، اور 2.2 کے تحت کرومیٹوگرافک حالات کے مطابق پیمائش کریں۔ چوٹی کے علاقے کو ریکارڈ کریں اور echinaceaside مواد کا حساب لگائیں۔ نتائج ٹیبل 2 میں دکھائے گئے ہیں۔

ٹیبل 1 ایکناکوسائیڈ کے ریکوری ٹیسٹ کے نتائج

ٹیبل 2 Cistanche herba کے پانی کے عرق میں echinacoside کے مواد کے تعین کے نتائج