Echinacoside 5-FU کی حوصلہ افزائی مائیلوسوپریشن چوہوں میں ہیماٹوپوائٹک فنکشن کو بہتر بناتا ہے

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

سائسائی وانگ، وغیرہ

خلاصہ

مقاصد:ہم کے اثرات کی تحقیقات کا مقصدechinacoside(ای سی ایچ) آنhematopoietic5-FU-حوصلہ افزائی بون میرو ڈپریشن چوہوں میں فنکشن۔

اہم طریقے:وٹرو میں، ECH کے ساتھ محرک کے بعد، بون میرو (BM) خلیات اور بون میرو سٹرومل سیل (BMSCs) کے پھیلاؤ کی صلاحیتmyelosuppressionچوہوں کا اندازہ بالترتیب CCK8 پرکھ اور مورفولوجی سے کیا گیا۔ Vivo میں، 5-FU-حوصلہ افزائی مائیلوسوپریشن یا کنٹرول چوہوں میں سے کسی ایک کے ساتھ intragastrically انتظام کیا گیا تھا۔(echinacoside)کالونی بنانے والے سیل پرکھ کے لیے بی ایم سیلز کو الگ تھلگ کرنے سے پہلے 15 ملی گرام/کلوگرام یا عام نمکین کے برابر مقدار میں 12 دن پہلے۔ دریں اثنا، BMSCs کو 4 ہفتوں تک مہذب کیا گیا تھا اس سے پہلے کہ خلیوں کی نشوونما کے نمونے کا مشاہدہ کیا جائے، ELISA کے ذریعے GM-CSF سراو کے لیے سیل کلچر سپرنٹنٹس کو جمع کیا گیا تھا، اور EPO اور GM-CSF RT-PCR کے لیے خلیوں کا RNA نکالا گیا تھا۔ BM خلیات یا BMSCs جو ECH کے ساتھ 24 h یا 48 h کے لیے متحرک تھے پروٹین نکالنے اور مغربی بلوٹنگ کے لیے جمع کیے گئے تھے۔

کلیدی نتائج:ای سی ایچ(echinacoside)BM خلیوں کی نشوونما کو متحرک کیا لیکن 5-FU سے علاج شدہ چوہوں سے اخذ کردہ BMSCs نہیں۔ ECH کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ(echinacoside)میں 5-FU علاج شدہ چوہوں کی کل تعداد میں اضافہ ہو سکتا ہے۔hematopoieticprogenitor خلیات اور GM progenitor خلیات کو صحت مند کنٹرول چوہوں کی سطح پر، لیکن BFU پروجینیٹر خلیات نہیں. ECH سے علاج شدہ BMSCsmyelosuppressionچوہوں نے زیادہ بھرپور طریقے سے اضافہ کیا اور مزید GM-CSF کا اظہار کیا، لیکن EPO نہیں۔ ECH نے PI3K سگنلنگ پاتھ وے کو 5-FU دبائے ہوئے BM سیلز میں فعال کیا۔

اہمیت:ای سی ایچ(echinacoside)کو بہتر بنا سکتا ہے۔hematopoieticبون میرو کا فنکشن 5-FU-حوصلہ افزائی میںmyelosuppressionچوہوں. ای سی ایچ(echinacoside)کیموتھراپی یا HSC ٹرانسپلانٹیشن کے دوران مریضوں کے لیے ایک متبادل موثر تھراپی کے طور پر سمجھا جا سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:Echinacoside، Hematopoietic، Myelosuppression، GM-CSF، PI3K سگنلنگ پاتھ وے

Echinacoside میںCistanche

تعارف

فلوروراسل یا 5-ایف یو کینسر کے ضمنی اور فالج کے علاج کے لیے تجویز کردہ کیموتھراپیٹک ایجنٹوں میں سے ایک ہے [2,9,28]۔ یہ ہائیڈروجن کی جگہ C-5 پوزیشن پر فلورین ایٹم کے ساتھ uracil کا ایک اینالاگ ہے اور thymidylate synthase کی سرگرمی کو ناقابل واپسی روکنے کے ذریعے کام کرتا ہے اور اس کے بعد DNA کی نقل کو روکتا ہے [20]۔ Leukopenia اور atrophy کےhematopoieticاعضاء دو غالب زہریلے ہیں جن کا تعلق 5-انسانوں، چوہوں اور خنزیروں میں FU ایپلی کیشنز [15,17,22] سے ہے۔Myelosuppressionپر روک تھام اور سائٹوٹوکسک اثرات کے نتیجے میںhematopoieticپروجینیٹر سیلز [10] اور بون میرو [25] پر آکسیڈیٹیو تناؤ، 5-FU پر مبنی کیموتھراپی کے طبی اطلاق کو محدود کرتا ہے۔

5-FU کے ذریعہ بون میرو دبانے کے نتیجے میں خون کے تمام خلیوں کی تعداد میں کمی واقع ہوتی ہے۔ اس کے نتیجے میں طبی علامات میں بخار، خون کی کمی، اور خون بہنا شامل ہیں، اور علاج بنیادی طور پر انتقال اور نمو کے عوامل پر منحصر ہے [4]۔ خون کے سرخ خلیات اور پلیٹلیٹس کو بھرنے میں ٹرانسفیوژن مؤثر ثابت ہو سکتی ہے، لیکن یہ ریلیف قلیل مدتی ہے اور اسے بار بار علاج کی ضرورت ہے۔ ترقی کے عوامل میں erythropoietin، granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF)، اور granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) شامل ہیں۔ یہ عوامل قدرتی کیمیکلز ہیں اور بون میرو کی کارکردگی کو بڑھا سکتے ہیں [7,21]، لیکن یہ پیسہ خرچ کرنے والے ہیں اور سفید خون کے خلیوں کی نشوونما کو متحرک کرنے کے لیے مفید نہیں ہیں۔ متبادل موثر علاج کی مانگ ہے۔ روایتی چینی ادویات ایک دستیاب آپشن ہے جو مقبولیت حاصل کرتی ہے [5]۔ پچھلے کئی سالوں میں، بہت سے مطالعات نے کیموتھراپی سے متعلق روک تھام اور علاج کے لیے چینی جڑی بوٹیوں کی دوائیوں کے اثرات پر توجہ مرکوز کی۔myelosuppression[33,35].

Echinacoside(ECH) (تصویر 1) روایتی چینی ادویات Herba Cistanches سے نکالا جانے والا ایک phenylethanoid مرکب ہے جو خون کی گردش، گردے کی کمی کے لیے ادویات کے ساتھ ساتھ نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کے لیے ایک فروغ دینے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے [24]۔ ای سی ایچ(echinacoside)ہڈیوں کی تخلیق نو کی متعدد فارماسولوجیکل سرگرمیاں ہیں [18]، اینٹی آکسیڈیشن [8,14,27]، مدافعتی ضابطے، نیورو پروٹیکشن، اور طرز عمل میں بہتری [11,16]۔ یہ ہیپاٹوٹوکسٹیٹی [32] اور پھیپھڑوں کی شدید چوٹ [34] کے خلاف حفاظتی ایجنٹ کے طور پر بھی نازل ہوا تھا۔ Trk ریسیپٹرز اور نیچے کی طرف Trk-ERK راستہ روٹینون چوٹ کے خلاف اس کی نیورونل حفاظتی سرگرمی میں شامل ہوسکتا ہے [36]۔ فروغ دینے میں ECH کا کردار اور نیا طریقہ کارmyelosuppressionبون میرو سیل کی نشوونما پوری طرح سے سمجھ نہیں آتی ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے ECH کے اثرات کا جائزہ لیا۔(echinacoside)پرhematopoieticوٹرو اور ویوو میں FU-حوصلہ افزائی بون میرو ڈپریشن چوہوں اور متعلقہ میکانزم میں فنکشن۔

مواد اور طریقے

کیمیکل اور بائیو کیمیکل

Echinacosideرونگے میڈیکل ٹیکنالوجی اینڈ ڈویلپمنٹ کارپوریشن (شنگھائی، چائنا) سے خریدا گیا تھا (98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، HPLC کے ذریعہ طے شدہ) اور DMSO میں تحلیل کیا گیا تھا۔ 5-FU HaoRan بائیو ٹیکنالوجی کارپوریشن (شنگھائی، چین) سے حاصل کیا گیا تھا۔ ماؤس سیلز کے لیے ریکومبیننٹ سائٹوکائنز (میتھو کلٹ میڈیم) کے ساتھ میتھیل سیلولوز میڈیم سٹیم سیل ٹیکنالوجیز (وینکوور، کینیڈا) سے خریدا گیا تھا۔

cistanche باڈی بلڈنگ

جانور اور تجرباتی ڈیزائن

مخصوص روگزن سے پاک، 5- سے 6-ہفتہ پرانے مادہ بلب/c چوہوں، جن کا وزن 15-18 گرام کے درمیان تھا شنگھائی لیبارٹری اینیمل کمپنی (SLAC، شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ چین کی ژیجیانگ یونیورسٹی میں جانوروں کی سہولت میں چوہوں کی دیکھ بھال کی گئی۔ جانوروں کے تجربات کو زیجیانگ یونیورسٹی کی اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی نے منظور کیا تھا اور وہ لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے گائیڈ کی پیروی کر رہے تھے [1,31]۔

چوہوں کو بون میرو ڈپریشن قائم کرنے کے لیے 200 mg/kg کی ایک خوراک کے ساتھ intraperitoneally انجکشن لگایا گیا تھا 5-FU جیسا کہ Choi EH et al نے بیان کیا ہے۔ [6]۔ وٹرو مطالعہ کے لیے، بون میرو (BM) خلیات اور بون میرو سٹرومل سیل (BMSCs) کو 5-FU انجیکشن کے 2 دن بعد الگ تھلگ کر دیا گیا تھا۔ Vivo میں، چوہوں کو تصادفی طور پر 4 گروپوں میں تقسیم کیا گیا، ہر گروپ میں 5–6 چوہے (n=5–6): 5-FU/ECH گروپ، 5-FU/کنٹرول گروپ، ECH(echinacoside)گروپ، اور کنٹرول گروپ۔ 5-FU/ECH گروپ میں، 5-FU انجیکشن کے بعد، چوہوں کو 12 دن تک روزانہ 15 mg/kg کی شرح سے ECH کے ساتھ کھلایا جاتا تھا۔ ECH کے بجائے 5-FU/کنٹرول گروپ میں(echinacoside)، عام نمکین کی مساوی مقدار 5-FU انجیکشن والے چوہوں کو دی گئی۔ ECH گروپ اور کنٹرول گروپ کے لیے، ECH یا نارمل نمکین کو اسی طریقے سے 5-FU غیر علاج شدہ چوہوں کو دیا گیا تھا۔ 12 ویں دن، چوہوں کو euthanatized کیا گیا تھا اور مزید مطالعہ کے لئے ہڈی میرو کے خلیات کو نکالا گیا تھا. تفصیل سے، BM خلیات کالونی بنانے والے سیل (CFC) پرکھ کے لیے تیار کیے گئے تھے، BMSCs پھیلاؤ پرکھ کے لیے تھے، اور BMSCs کے سیل کلچر سپرنٹنٹس کو GM-CSF ELISA کے لیے جمع کیا گیا تھا اور BMSCs کے RNA EPO اور GM-CSF RT کے لیے نکالے گئے تھے۔ -پی سی آر۔ تجربات 3 بار دہرائے گئے۔

بی ایم سیل اور بی ایم ایس سی کی تیاری

BM خلیات ماؤس بون میرو سے نکالے گئے سنگل سیل معطلی سے تیار کیے گئے تھے۔ مختصراً، چوہوں کو ایتھانوٹائز کیا گیا اور 5 منٹ تک ایتھنول میں بھگو دیا گیا۔ سیل کو ٹبیا اور فیمورل ہڈی کے میڈولری کینال سے ایک 23-گیج سوئی سے بار بار دھو کر باہر نکالا گیا اور سنگل سیل سسپنشن حاصل کرنے کے لیے 100 μm سیل سٹرینر کے ذریعے چھلنی کی گئی۔ اریتھرایڈ بون میرو سیلز کو امونیم کلورائیڈ بفر کے ساتھ قلیل مدتی انکیوبیشن (30 s) کے ذریعے لیس کیا گیا جس کے بعد کلچر میڈیم کے ساتھ بار بار دھونے کے اقدامات کیے گئے۔ قابل عملیت اور سیل کی گنتی کا تعین ہیموسیٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے ٹرپین بلیو اخراج کے طریقہ سے کیا گیا تھا۔

بی ایم ایس سی کی نسل کے لیے، بی ایم سیلز کو ٹی سی پلیٹوں کے کنوؤں میں 24 گھنٹے تک بڑھنے کی اجازت دی گئی، غیر ماننے والے خلیوں کو ہٹانے اور کلچر میڈیم سے بار بار دھونے کے بعد، پیروکار خلیوں کو بی ایم ایس سی کے طور پر لیا گیا۔

Dulbecco کے موڈیفائیڈ ایگل میڈیم (DMEM) میں ایک مرطوب انکیوبیٹر میں 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ڈگری پر سیلز کو کلچر کیا گیا جس میں 10 فیصد ہیٹ ان ایکٹیویٹڈ فیٹل بوائن سیرم (FBS)، پینسلن/سٹریپٹومائسن (100 U/ml)، اور L-glutamine کی تکمیل کی گئی۔ (2 این ایم)۔ تمام سیل کلچرنگ ریجنٹس انویٹروجن (شنگھائی، چین) سے خریدے گئے تھے۔

CCK8 پرکھ کے ذریعہ وٹرو BM خلیوں کا پھیلاؤ

5-FU سے علاج شدہ چوہوں کے BM خلیات کو 1 × 103 خلیات کی کثافت پر ایک 96-کنویں پلیٹ (کوسٹار) میں چڑھایا گیا تھا اور ECH کی مختلف ارتکاز کے ساتھ ایک درمیانے درجے میں کلچر کیا گیا تھا۔(echinacoside)({{0}} μM، 0.1 μM، 1 μM، 10 μM، 25 μM، 50 μM، بالترتیب)۔ دن 3 یا 6 ویں دن، خلیات کو 20 ul CCK-8 محلول ری ایجنٹ (بیو ٹائم، جیانگسو) کے ساتھ "پلس" کیا گیا اور اضافی 4 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا۔ 450 nm پر الٹرا مائکروپلیٹ ریڈر (مالیکیولر ڈیوائسز) پر کلر میٹرک سی سی کے 8 کی پیمائش کرکے سیل کے پھیلاؤ کی جانچ کی گئی۔

Echinacoside میںCistanche

ان وٹرو BMSC پھیلاؤ اور مورفولوجی

BMSCs کو ایک 6-کنویں پلیٹ کے کنویں میں تیار کیا گیا تھا جس میں BM خلیات کی ابتدائی کثافت (5-FU سے علاج شدہ چوہوں سے بھی) 3.5 × 106 خلیات/کنویں تھی۔ 24 گھنٹے کے بعد، کلچر میڈیم کو ECH (50 ug/ml) پر مشتمل میڈیم سے بدل دیا گیا۔ ہر ہفتے، نصف سپرنٹینٹس کو ہٹا دیا جاتا تھا اور ان کی جگہ ایک تازہ کلچر میڈیم (ای سی ایچ کے ساتھ یا اس کے بغیر) لے لیا جاتا تھا۔(echinacoside)جیسا کہ اشارہ کیا گیا ہے)۔ ثقافت کے 4 ہفتوں کے بعد، BMSCs کی شکل کو الٹی خوردبین کے تحت دیکھا گیا۔

کالونی تشکیل دینے والا سیل (CFC) پرکھ

میتھو کلٹ میڈیا میں سی ایف سی پرکھ کارخانہ دار کی ہدایات کے بعد انجام دیا گیا تھا۔ مختصراً، چوہوں کے مختلف گروہوں کے BM خلیے 2 × 105 فی ملی لیٹر پر تیار کیے گئے۔ اس کے بعد، سیل مرکب بنانے کے لیے 0.4 ملی لیٹر خلیوں کو میتھو کلٹ میڈیم کے 4 ملی لیٹر میں شامل کیا گیا۔ ایک 16-گیج بلنٹ اینڈ سوئی کے ساتھ اچھی طرح مکس کرنے کے بعد، 1.1 ملی لیٹر سیل مکسچر کو فی 35 ملی میٹر کلچر ڈش (سٹیم سیل ٹیکنالوجیز) میں تقسیم کیا گیا، تین گنا کیا گیا، اور 5 فیصد CO2 کے مرطوب ماحول میں 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ 7 دن کے لئے. 7 دن کی ثقافت کے بعد، کم از کم 30 خلیوں پر مشتمل کالونیوں کی شناخت اور گنتی کی گئی۔

ریورس ٹرانسکرپٹیس پولیمریز چین ری ایکشن (RT-PCR) اور GM-CSF ELISA

جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے چوہوں کے مختلف گروہوں سے اخذ کردہ BMSCs کو 4 ہفتوں تک مہذب کیا گیا تھا۔ 4-ہفتہ ثقافت کے بعد، BMSCs کو RNAsimple ٹوٹل RNA کٹ (TianGen, بیجنگ) کے ساتھ کل RNA نکالنے کے لیے جمع کیا گیا۔ iScript cDNA ترکیب کٹ (Bio-Rad, Richmond, CA) کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA (DNase-treated) کے 1 ug کا استعمال کرتے ہوئے فرسٹ اسٹرینڈ cDNA کی ترکیب کی گئی۔ granulocyte-macrophage colony-stimulator factor (GM-CSF) اور Erythropoietin (EPO) کے تاثرات نیم مقداری RT-PCR کے ذریعے شناخت کیے گئے تھے۔ PCR پرائمر کی ترتیب حسب ذیل تھی: GM-CSF: 5′-GGCCTTGGAA GCATGTAGAGG-3′ (آگے) اور 5′-GGAGAACTCGTTAGAGACGA CTT-3′ (ریورس)؛ EPO: 5′-CCTCATCTGCGACAGTCG AG-3′ (آگے) اور 5′-ACAACCCAT CGTGACATTTTCT-3′ (الٹ)؛ ہاؤس کیپنگ جین بیٹا ایکٹین: 5′-GTATCCTGACCCT GAAGTACC-3′ (آگے) اور 5′-TGAA GGTCAAACATGATCT-3′ (ریورس)۔ پی سی آر ایمپلیفیکیشن 2720 تھرمل سائیکلر (اپلائیڈ بایو سسٹم) پر کی گئی تھی اور ایگرز جیل الیکٹروفورسس کا استعمال کرتے ہوئے مصنوعات کا تجزیہ کیا گیا تھا۔ اہداف کے ایم آر این اے اظہار کی سطح کو بیٹا ایکٹین کے مطابق معمول بنایا گیا تھا۔ BMSCs کے سپرنٹنٹس کو GM-CSF ELISA پرکھ کے لیے GM-CSF ELISA کٹ (جن سوئی، شنگھائی) کا استعمال کرتے ہوئے کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق جمع کیا گیا تھا۔

مغربی دھبہ

BM سیل اور BMSCs سے 5-FU حوصلہ افزائیmyelosuppressionچوہوں یا کنٹرول چوہوں کو کنویں کی پلیٹوں میں 5 × 106 فی کنویں کی ابتدائی کثافت پر چڑھایا گیا تھا۔ 24 گھنٹے کے بعد، ECH کو کلچر میڈیم میں 50ug/ml پر شامل کیا گیا اور خلیوں کو 1×RIPA بفر (CST، Danvers، MA) میں 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride پر مشتمل ہونے سے پہلے اضافی 24 گھنٹے یا 48 گھنٹے تک بڑھنے دیا گیا۔ (PMSF)۔ پروٹین کی حراستی کا تعین BCA پروٹین پرکھ کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ کل پروٹین کا 30ug 10 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ-پولیاکریلامائڈ جیلوں پر الیکٹروفورس کیا گیا تھا اور پی وی ڈی ایف جھلیوں (ملی پور، ایم اے، امریکہ) میں منتقل کیا گیا تھا۔ جھلیوں کو بلاک کرنے والے بفر (بیو ٹائم، ہیمن، چین) کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر روک دیا گیا، اور پھر ایکٹین (#4967، CST)، فاسفو-PI3 کناز p85 (Tyr458)/p55 کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ (Tyr199) (#4228, CST)، phospho-Akt (Ser473) (#4060, CST), اکٹ (پین) (C67E7) (#4691, CST)، phosphor-Stat1(Tyr701)(#9167, CST) Phospho-Stat3 (Tyr705) (#9415, CST), Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (#9215, CST), Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (#ST4377, )، p38 MAPK(#9212, CST), p44/42 MAPK (Erk1/2)(#4695, CST), Phospho- SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (#4668, CST)، اور SAPK/JNK(# بالترتیب 9258، CST)۔ دھونے کے بعد، جھلیوں کو ہارسریڈش-پیرو آکسیڈیز-کنججٹیڈ بکری اینٹی خرگوش ثانوی اینٹی باڈی (لیانکے، ہانگزو، چین) سے جانچا گیا جس کے بعد فلور کیم ای سسٹم (پروٹین سادہ، سانتا کلارا،) کے ساتھ سگنل کا پتہ چلا۔ CA، USA)۔

شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا گیا تھا ہر گروپ کے درمیان فرق کی اہمیت کا تعین طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ایک p-value b 0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔

cistanche باڈی بلڈنگ

نتائج

وٹرو فراہم کردہ ECH(echinacoside)5-FU دبائے ہوئے BM خلیوں کے پھیلاؤ کو متحرک کرتا ہے۔

5-FU سے BM سیلز کی حوصلہ افزائیmyelosuppressionچوہوں کا علاج ECH سے کیا گیا۔(echinacoside)3 دن یا 6 دن کے لیے 0.01 سے لے کر 50 μM تک مختلف ارتکاز پر اور CCK8 پرکھ کے ذریعے سیل کے پھیلاؤ کا اندازہ لگایا گیا۔ جیسا کہ تصویر 2 میں دکھایا گیا ہے، ECH-علاج شدہ BM خلیوں کے پھیلاؤ کی سطح 3 یا 6 دنوں کی ثقافت کے بعد ECH- علاج نہ کیے جانے والے خلیوں سے زیادہ تھی۔ محرک اثر نے خوراک پر منحصر انداز دکھایا۔

وٹرو فراہم کردہ ECH(echinacoside)5-FU دبائے ہوئے BMSC پھیلاؤ پر کوئی اثر نہیں ہے۔

BMSCs سے 5-FU حوصلہ افزائیmyelosuppressionچوہوں کا علاج ECH سے کیا گیا۔(echinacoside)4 ہفتوں کے لئے 50 ug/ml کے ارتکاز پر اور سیل کے پھیلاؤ کا اندازہ ہلکے الٹی خوردبین کے تحت سیل مورفولوجی کے مشاہدے سے کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 3 میں دکھایا گیا ہے، خلیوں کی نشوونما اور شکل ECH علاج کے ساتھ یا اس کے بغیر ایک جیسی تھی۔

Intragastrically زیر انتظام ECH(echinacoside)5-FU induced myelosuppressive granulocyte-macrophage (CFU-GM) کے hematopoietic فنکشن کو متحرک کرتا ہے، لیکن erythroid (BFU-E) پروجینیٹر سیل نہیں

{{0}FU/ ECH، 5-FU/control، ECH سے BM خلیات کے پھیلاؤ اور تفریق کے نمونے(echinacoside)، اور کنٹرول گروپ کا اندازہ CFC پرکھ کے ذریعہ کیا گیا۔ MethoCult میڈیم میں BM خلیات کی ثقافت کے 7 دنوں کے بعد، CFCs کی درجہ بندی کی گئی اور ہلکے خوردبین کے نیچے سیٹو میں شمار کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 4 میں دکھایا گیا ہے، پروجینیٹر لیولز کے تجزیے سے ایک اہم انکشاف ہوا (pb 0۔{23}}001) 5-FU/ECH گروپ میں CFU-GM کی تعداد میں اضافہ ہوا۔ جیسا کہ 5-FU/کنٹرول گروپ (169.3 ± 11.1 بمقابلہ 54.5 ± 3.1)، نیز کنٹرول گروپ (169.3 ± 11.1 بمقابلہ 129.3 ± 5.6) (pb 0.05، بالترتیب)۔ ہر گروپ میں BFU-E کی تعداد میں کوئی فرق نہیں تھا (73.0 ± 11.1 بمقابلہ 74.7 ± 8.6 بمقابلہ 91.2 ± 5.5)۔ ECH گروپ میں CFU-GM اور BFU-E کی تعداد تقریباً وہی تھی جو کنٹرول گروپ میں تھی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔

تصویر 4. انٹراگاسٹرک طور پر زیر انتظام ECH(echinacoside)کی حوصلہ افزائی کرتا ہےhematopoieticکا فنکشن 5-FU inducedmyelosuppressiongranulocyte-macrophage (CFU-GM)، لیکن erythroid (BFU-E) پروجینیٹر سیل نہیں۔ (A) کالونی بنانے والی اکائیوں کی نمائندہ تصویر۔ CFU-GM: کالونی بنانے والی اکائیاں-گرینولوسائٹ میکروفیج۔ BFU-E: پھٹنے والی یونٹ-اریتھرایڈ۔ (B) ہر گروپ کی کالونی بنانے والی اکائیوں کی نمائندہ تصاویر۔ (C) ہر گروپ کی کالونی بنانے والی اکائیوں کی تعداد۔ BM خلیوں کو ہر گروپ سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور CFU-GM اور BFU-E پروجینیٹر سیل کالونی بنانے والی پرکھ کے لیے بیج دیا گیا تھا جیسا کہ مواد اور طریقوں میں بیان کیا گیا ہے۔ نتائج 3 آزاد تجربوں سے حاصل کیے گئے اور ± SEM، n=5–6 کے طور پر ظاہر کیے گئے۔ * pb 0۔{19}}5 کنٹرول گروپ کے مقابلے، ## pb 0.0001 5-FU گروپ کے مقابلے۔

Intragastrically زیر انتظام ECH(echinacoside)حوصلہ افزائی کرتا ہے 5-FU induced myelosuppression BMSC پھیلاؤ۔

ثقافت کے 4 ہفتوں کے بعد، BMSCs کے پھیلاؤ کا اندازہ ہلکی الٹی مائکروسکوپ کے تحت سیل مورفولوجی کے مشاہدے سے کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 5 میں دکھایا گیا ہے، 5-FU/ECH میں BMSCs(echinacoside)گروپ کنٹرول گروپ سے زیادہ مضبوطی سے بڑھا۔

Intragastrically زیر انتظام ECH(echinacoside)FU induced myelosuppressive BMSCs کی GM-CSF پیداوار کو متحرک کرتا ہے

BMSCs کی ثقافت کے 4 ہفتوں کے بعد، GM-CSF اور خلیوں کے EPO کے mRNA اظہار کا تعین RT-PCR کے ذریعے کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 6A میں دکھایا گیا ہے، ECH-علاج شدہ بون میرو سپریشن چوہوں سے BMSCs میں GM-CSF اظہار کو 5-FU/کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا۔ سیل کلچر سپرنٹنٹس میں GM-CSF کی پیداوار کا تعین ELISA نے کیا تھا۔ جیسا کہ تصویر 6B میں دکھایا گیا ہے، 5-FU/ کنٹرول گروپ کے مقابلے، 5-FU/ECH(echinacoside)گروپ نے GM-CSF (pb 0.05) کا ایک اعلی اظہار دکھایا اور تقریبا کنٹرول گروپ جتنا تھا۔

ای سی ایچ(echinacoside)PI3K سگنلنگ پاتھ وے کو 5-FU دبائے ہوئے BM سیلز میں فعال کرتا ہے

BM سیل اور BMSCs سے 5-FU حوصلہ افزائیmyelosuppressionیا کنٹرول چوہوں کو ECH کے ساتھ متحرک کیا گیا تھا۔(echinacoside)24 گھنٹے یا 48 گھنٹے کے لیے 50 ug/ml کے ارتکاز میں اس سے پہلے کہ خلیوں کو پروٹین نکالنے اور مغربی دھبے کے لیے اکٹھا کیا جائے۔ ECH کے میکانزم کے بعد سے(echinacoside)زیادہ مطالعہ نہیں کیا گیا ہے، ہم نے متعلقہ سگنل پاتھ ویز کا ایک پینل اسکرین کیا، بشمول JAK/STAT1، JAK/STAT3، SAPK/JNK، p-38 MAPK، p44/42 MAPK، اور PI3K/Akt سگنلنگ پاتھ ویز۔ جیسا کہ تصویر 7 میں دکھایا گیا ہے، ECH BM سیلوں میں p-PI3K p85/p55 کے اعلی اظہار کو آمادہ کر سکتا ہے جو 5-FU چوہوں سے اخذ کیے گئے ہیں جن کے لیے BMSCs یا کنٹرول گروپس میں انڈکشن واضح نہیں تھا۔ دیگر تمام راستوں کے لیے، ہم نے بڑے فرق نہیں دیکھے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔

بحث

یہ سچ لگ رہا تھا کہ ECH(echinacoside)چوہوں پر نارمل ہیماٹوپوائسز کا کوئی اثر نہیں ہوا کیونکہ چوہوں کے لیے بغیر 5-FU علاج کے، ECH میں hemato-poietic progenitor خلیات کی تعداد(echinacoside)گروپ تقریباً وہی تھا جو کنٹرول گروپ کا تھا، اسی طرح BMSCs کا پھیلاؤ اور ایکٹیویشن بھی ہوا جیسا کہ مورفولوجی، GM-CSF اور EPO رطوبتوں سے ظاہر ہوتا ہے۔ اس طرح، نتیجہ کے سیشن میں، ECH سے ڈیٹا(echinacoside)گروپ کو ایک کنٹرول گروپ کے ساتھ جوڑا گیا تھا اور اسے کنٹرول کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔

5-کینسر کے علاج میں کیموتھراپی کی دوا کے طور پر FU کا بون میرو کے کام پر اثر پڑتا ہے۔ 5-FU کی زیادہ مقدار کا استعمال بون میرو کے شدید دباو کا سبب بن سکتا ہے [19]۔ ہمارے مطالعے میں، چوہوں میں بون میرو دبانے کا ماڈل کامیابی کے ساتھ 5-FU علاج کے ذریعے قائم کیا گیا تھا، جیسا کہ کالونی بنانے والی اکائیوں اور BMSCs کی مورفولوجی کی مدد سے تعاون کیا گیا تھا۔

بون میرو ایک اہم ہے۔hematopoieticہیماٹوپوائٹک اسٹیم سیلز (HSCs) اور بون میرو اسٹرومل سیلز (BMSCs) پر مشتمل عضو [13]۔ سابقہ ​​خلیے خون کے خلیے بنا سکتے ہیں جن میں سرخ خلیات، پلیٹلیٹس، مونوکیٹس، گرینولوسائٹس اور لیمفوسائٹس شامل ہیں۔ اور بعد کے خلیے چربی، کارٹلیج اور ہڈی پیدا کر سکتے ہیں جن کی تعریف mesenchymal یا stromal خلیات سے کی جاتی ہے [26]۔ یہ اچھی طرح سے قبول کیا جاتا ہے کہ BMSCs HSC طاق کے کلیدی اجزاء ہیں جہاں یہ دو اسٹیم سیل آبادی قریب سے ترتیب دیتے ہیں۔hematopoieticاور کنکال ہومیوسٹاسس [29]۔ BMSCs ریگولیٹری مالیکیولز اور سائٹوکائنز، جیسے FL [23]، GM-CSF [12]، اور SCF [12,3] کو خفیہ کرکے HSCs کے پھیلاؤ کو متحرک اور بڑھا سکتے ہیں۔

وٹرو ڈیٹا نے یہ ظاہر کیا کہ ECH(echinacoside)سے BM خلیوں کے پھیلاؤ کو متحرک کر سکتا ہے۔myelosuppressionچوہوں کی خوراک پر منحصر انداز میں، اگرچہ، عام طور پر، خلیات 6 ویں دن کے مقابلے 3 ویں دن زیادہ مضبوطی سے بڑھے، شاید وٹرو کلچر کے ماحول کے نتیجے میں۔ اس کے برعکس، ECH(echinacoside)5-FU سے علاج شدہ چوہوں سے BMSCs کے پھیلاؤ پر کوئی اثر نہیں ہوا۔ اس امکان کو خارج کرنے کے لیے کہ منفی اثر سیل کی نشوونما کی حالت کی وجہ سے نہیں تھا، تجرباتی ترتیب میں، ہم نے Rg1 کو بھی شامل کیا، جو جڑی بوٹیوں کا ایک جزو ہے جو BMSCs کو متحرک کرنے کے لیے ثابت ہوا ہے۔myelosuppressionچوہوں کی نشوونما، ایک مثبت کنٹرول کے طور پر [33]۔

Vivo ڈیٹا میں ثابت ہوا کہ ECH(echinacoside)مؤثر طریقے سے ہیماٹوپوائسز کو دوبارہ تشکیل دے سکتا ہے، غالباً گرینولوسیٹوپوائسز اور میگاکاریوسائٹوپوائسز لیکن اریتھروپائیسس نہیں،myelosuppressionچوہوں. ECH کی انٹرا گیسٹرک انتظامیہ(echinacoside)سے 5-12 دنوں تک چوہوں کا علاج FU کرنے کے نتیجے میں دونوں کی مجموعی تعداد میں اضافہ ہوا۔hematopoieticپروجینیٹر سیلز اور گرینولوسائٹ میکروفیج پروجینیٹر سیل، لیکن اریتھرایڈ پروجینیٹر سیلز کے نہیں جیسا کہ CFC اسسیس سے CFU-GM اور BFU-E کی تعداد سے اشارہ کیا گیا ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہم نے دیکھا کہ 5-FU/ECH میں CFU-GM کی تعداد(echinacoside)گروپ کنٹرول گروپوں میں اس سے بھی زیادہ تھا۔ ہم نے CFU-GM کی تیزی سے توسیع کا قیاس کیا جو کہ معاوضے کے طور پر پیش آیاmyelosuppressionحالت جس کی قیادت 5-FU۔ ہمارے اعداد و شمار سے یہ بھی پتہ چلتا ہے کہ ECH BMSC کے پھیلاؤ اور GM-CSF کو متحرک کر سکتا ہے لیکن EPO پرو پروڈکشن کو نہیںmyelosuppressionچوہے، جو سی ایف سی کے نتائج کے مطابق تھے۔

اب تک کے نتائج نے ایک نئے طریقے سے ECH کی نشاندہی کی۔(echinacoside)اسے بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔hematopoieticمیں فنکشنmyelosuppressionچوہے (جیسا کہ تصویر 8 میں دکھایا گیا ہے): HSC مخصوص ماحول میں، یا تو وٹرو میں مخلوط BMs کلچر کے ذریعے یا بون میرو میں سیٹو میں، ECH BMSC کے پھیلاؤ اور GM-CSF کی پیداوار کو تحریک دیتا ہے، اس طرح پھیلاؤ اور تفریق کو متحرک اور بڑھاتا ہے۔ HSCs کی HSCs کے وجود کے بغیر، ECH BMSC کے پھیلاؤ کو تحریک دینے کے قابل نہیں ہے۔

GM-CSF رسیپٹر (ligand بائنڈنگ) اور (سگنلنگ) ذیلی یونٹس پر مشتمل ہوتا ہے۔ GM-CSF سب سے پہلے سبونائٹ سے منسلک ہوتا ہے، پھر سبونائٹ [30] کے ساتھ انفیکٹر پروٹین کے تعامل کے ذریعے نیچے کی طرف سگنلنگ جھرنوں کو اکساتا ہے۔ ذیلی یونٹ ٹرانس ایکٹیویٹڈ JAK2، جو ڈاون اسٹریم سگنلنگ شروع کرتا ہے۔ جن سگنلنگ ماڈیولز کو چالو کیا گیا ہے ان میں جینس کناز/سگنل ٹرانسڈیوسر اور ایکٹیویٹر آف ٹرانسکرپشن (JAK/STAT) پاتھ وے، مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPK) پاتھ وے اور فاسفیٹائیڈلینوسیٹول 3-کناز (PI3K) پاتھ وے [30] شامل ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہماری اسکریننگ کے نتیجے سے پتہ چلتا ہے کہ PI3K پاتھ وے کو 5-FU-علاج شدہ چوہوں سے اخذ کردہ BM خلیوں میں چالو کیا گیا تھا، لیکن 5-FU دبائے ہوئے BMSCS اور عام BM خلیات یا BMSCs میں واضح نہیں تھا۔ امکان ہے کہ GM-CSF/PI3K پاتھ وے، ECH کو چالو کرنے کے ذریعے(echinacoside)انتخابی طور پر BM خلیوں کی نشوونما کو متحرک کرتا ہے۔

cistanche میں Echinacoside

نتائج

خلاصہ طور پر، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ ECH(echinacoside)پر ایک امید افزا پروموشنل اثر ہےhematopoietic5-FU کی حوصلہ افزائی بون میرو کو دبانے والے چوہوں میں فنکشن، خاص طور پر گرینولوسائٹک اور میکروفاگوسیٹک سیلز پر، تجویز کرتا ہے کہ ECH(echinacoside)کیموتھراپی یا کیمیکلز کے ساتھ علاج کے بعد HSC ٹرانسپلانٹیشن کے دوران بون میرو کی روک تھام میں کلینیکل ایپلی کیشن کی صلاحیت ہوسکتی ہے۔

مفادات کا تصادم کا بیان

مفادات کا کوئی تصادم نہیں ہے۔

حوالہ جات

[1] ای ایس ڈی ایلیوا، لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے رہنما، ایتھولوجی 103 (1997) 1072–1073۔

[2] J. Bergh, T. Wiklund, B. Eriksen, E. Lidbrink, H. Lindman, P. Malmstrom, et al., tailored fluorouracil, epirubicin، اور cyclophosphamide کے مقابلے میں معاون علاج کے طور پر میرو سپورٹڈ ہائی ڈوز کیموتھراپی ہائی رسک بریسٹ کینسر کے لیے: ایک بے ترتیب ٹرائل۔ اسکینڈینیوین بریسٹ گروپ 9401 اسٹڈی، لینسیٹ 356 (2000) 1384–1391۔

[3] اے برنسٹین، ایل فارسٹر، اے ڈی ریتھ، پی. ڈوبروئیل، آر روٹاپل، دی مورین ڈبلیو/سی-کِٹ اور اسٹیل لوکی اور ہیماٹوپوائسز کا کنٹرول، سیمین۔ ہیماتول۔ 28 (1991) 138–142۔

[4] پی جے کیری، منشیات سے متاثرmyelosuppression: تشخیص اور انتظام، ڈرگ سیف۔ 26 (2003) 691–706۔

[5] ایف چیونگ، ٹی سی ایم: چین میں بنایا گیا، نیچر 480 (2011) S82–S83۔

[6] EH Choi, HE Ok, Y. Yoon, BA Magnuson, MK Kim, HS Chun, بلبیری (Vaccinium myrtillus L.) سے اینتھوسیانین سے بھرپور عرق کا حفاظتی اثر 5-  فلووروراسل، بائیو فیکٹرز (بائیو فیکٹرز) کے ذریعے پیدا ہونے والی مائیلوٹوکسائٹی کے خلاف آکسف انگلینڈ) 29 (2007) 55–65۔

[7] J. Crawford, H. Ozer, R. Stoller, D. Johnson, G. Lyman, I. Tabbara, et al., بخار اور نیوٹروپینیا کے گرانولوسائٹ کالونی محرک عنصر کی طرف سے کمی جو کیموتھریپی کے ذریعے چھوٹے مریضوں میں سیل پھیپھڑوں کا کینسر، N. انگریزی. جے میڈ 325 (1991) 164–170۔

[8] L. Dalby-Brown, H. Barrett, AK Landbo, AS Meyer, P. Molgaard, alkamides کے Synergistic antioxidative effects, caffeic acid derivatives, and polysaccharide fractions Echinacea purpurea سے انسانی کم کثافت کے وٹرو آکسیڈیشن پر جے ایگرک فوڈ کیم۔ 53 (2005) 9413–9423۔

[9] WH de Vos tot Nederveen Cappel, HJ Meulenbeld, JH Kleibeuker, FM Nagengast,

FH Menko, G. Grifioen, et al., بقا کے بعد ملحقہ 5- موروثی نان پولیپوسس کولوریکٹل کینسر میں اسٹیج III بڑی آنت کے کینسر کا FU علاج, Int. جے کینسر 109 (2004) 468–471۔

[10] LE Friberg، MO Karlsson، میکانکی ماڈلز کے لیےmyelosuppression،تحقیقات نئی دوائیں 21 (2003) 183–194۔

[11] X. Geng, X. Tian, ​​P. Tu, X. Pu, Neuroprotective اثراتechinacosideپارکنسنز کی بیماری کے ماؤس MPTP ماڈل میں، Eur. جے فارماکول۔ 564 (2007) 66–74۔

[12] JY Han, RY Goh, SY Seo, TH Hwang, HC Kwon, SH Kim, et al., cod blood of cotransplantationhematopoieticSCID چوہوں میں اسٹیم سیلز اور کلچر کے ذریعے توسیع شدہ اور GM-CSF−/SCF- منتقلی mesenchymal اسٹیم سیل، J. Korean Med. سائنس 22 (2007) 242–247۔

[13] EL Herzog, L. Chai, DS Krause, Plasticity of marrow-derived stem cell, Blood 102 (2003) 3483–3493۔

[14] C. Jia, H. Shi, W. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao, et al., Metabolism ofechinacoside، ایک اچھا اینٹی آکسیڈینٹ، چوہوں میں: اس کے بلیری میٹابولائٹس کی تنہائی اور شناخت، ڈرگ میٹاب۔ ڈسپوز۔ 37 (2009) 431–438۔

[15] S. Kojima, K. Takaba, N. Kimoto, T. Takeda, M. Kakuni, M. Mizutani, et al., 5- fluorouracil-حوصلہ افزائی پر glutathione کے حفاظتی اثراتmyelosuppressionچوہوں میں، آرک. ٹاکسیکول۔ 77 (2003) 285–290۔

[16] R. Kuang, Y. Sun, W. Yuan, L. Lei, X. Zheng, کے حفاظتی اثراتechinacoside، phenylethanoid glycosides میں سے ایک، PC12 خلیات میں H(2)O(2) کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی پر، پلانٹا میڈ۔ 75 (2009) 1499–1504۔

[17] جے سی لارینز، ایم ہدجیساواس، جی ڈبلیو چوانیک، ایف ڈبلیو بازر،Myelosuppressionسور میں (Sus scrofa): uteroferrin نوجوان خنزیروں میں 5- fluorouracil کے myelosuppressive اثرات کو کم کرتا ہے، Comp. بائیو کیم۔ فزیول ایک فزیول۔ 116 (1997) 369–377۔

[18]
F. Li, Y. Yang, P. Zhu, W. Chen, D. Qi, X. Shi, et al.,EchinacosideMC3T3-E1 خلیات، Fitoterapia 83 (2012) 1443–1450 میں OPG/RANKL تناسب کو بڑھا کر ہڈیوں کی تخلیق نو کو فروغ دیتا ہے۔

[19] اے لِنڈنر، ڈی سنٹیلی، جے ہوجٹ، سی نیرلِنگر، فلووروریسل کے اثرات پر 5-hematopoieticماؤس کا نظام، کینسر ریس. 20 (1960) 497–502۔

[20] ڈی بی لانگلے، ڈی پی ہارکن، پی جی جانسٹن، 5- فلوروراسیل: میکانزم آف عمل اور طبی حکمت عملی، نیٹ۔ Rev. کینسر 3 (2003) 330–338۔

[21] بی آر لوس، جے ڈبلیو سنگر، ​​جے ایم ویسلر، سی ڈی بکنر، ایس ایچ شینگولڈ، کے شینن-ڈورسی، وغیرہ، لیمفائیڈ کینسر کے لیے آٹولوگس بون میرو ٹرانسپلانٹیشن کے بعد دوبارہ پیدا ہونے والا انسانی گرانولوسائٹ-میکروفیج کالونی محرک عنصر: ایک اقتصادی طور پر انا ایک بے ترتیب، ڈبل بلائنڈ، پلیسبو کنٹرول ٹرائل، فارماکو اکنامکس 6 (1994) 42–48۔

[22] M. Malet-Martino, R. Martino, 5- uorouracil (capecitabine, UFT, S-1) کے تین زبانی ادویات کے کلینیکل اسٹڈیز: ایک جائزہ، آنکولوجسٹ 7 (2002) 288–323 .

[23] S. Mishima, A. Nagai, S. عبداللہ, C. Matsuda, T. Taketani, S. Kumakura, et al., مؤثر ex vivo expansion ofhematopoieticosteoblast-differentiated mesenchymal اسٹیم سیلز استعمال کرنے والے اسٹیم سیلز CXCL12 پر منحصر ہیں، Eur۔ جے ہیماتول۔ 84 (2010) 538–546۔

[24] ایم مصطفی، این نہار، ایم موسیحزمان، ٹی مخمور، ایم آئی چوہدری، اے یو رحمان، لیوکاس انڈیکا لن، نیٹ سے فری ریڈیکل اسکیوینگنگ فینی لیتھانوائڈ گلائکوسائیڈز۔ پیداوار Res. 21 (2007) 354–361۔

[25] S. Numazawa, K. Sugihara, S. Miyake, H. Tomiyama, A. Hida, M. Hatsuno, et al., 5- fluorouracil ثالثی میں آکسیڈیٹیو تناؤ کی ممکنہ شمولیتmyelosuppressionچوہوں میں، بنیادی کلین۔ فارماکول۔ ٹاکسیکول۔ 108 (2011) 40–45۔

[26] DJ Prockop، میرو سٹرومل خلیات کی مسلسل تجدید کے لیے اسٹیم سیلز کے طور پرnonhematopoieticٹشوز اور جین تھراپی کے ممکنہ ویکٹر کے طور پر، جے سیل۔ بائیو کیم۔ (1998) 284–285۔

[27] BD Sloley, LJ Urichuk, C. Tywin, RT Coutts, PK Pang, JJ Shan, مختلف Echinacea species کے کیمیائی اجزاء اور اینٹی آکسیڈنٹس کی صلاحیت کا موازنہ، J. Pharm. فارماکول۔ 53 (2001) 849–857۔

[28] C. Twelves, A. Wong, MP Nowacki, M. Abt, H. Burris III, A. Carrato, et al., Capecitabine as adjuvant treatment for the stage III colon cancer, N. Engl. جے میڈ 352 (2005) 2696–2704۔

[29] M. Valtteri, A. Sorrentino, the mesenchymal stromal cell contribution to homeostasis, J. Cell. فزیول 217 (2008) 296–300۔

[30] ایل وین ڈی لاار، پی جے کوفر، اے ایم وولٹ مین، جی ایم-سی ایس ایف کے ذریعے ڈینڈریٹک سیل کی نشوونما کا ضابطہ: سالماتی کنٹرول اور امیون ہومیوسٹاسس اور تھراپی کے لیے مضمرات، بلڈ 119 (2012) 3383–3393۔

[31] JMBK Worley, M. Bloomsmith, K. Coleman, TL Koban, The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (2011) کا آٹھواں ایڈیشن؛ رویے کے انتظام کے لیے مضمرات، ایم۔ J. Primatol. 73 (2011) 98۔

[32] وائی وو، ایل لی، ٹی وین، وائی کیو لی، کے حفاظتی اثراتechinacosideچوہوں میں کاربن ٹیٹرا کلورائیڈ سے متاثرہ ہیپاٹوٹوکسٹی پر، ٹاکسیکولوجی 232 (2007) 50-56۔

[33] SF Xu, LM Yu, ZH Fan, Q. Wu, Y. Yuan, Y. Wei, et al., ginsenoside Rg1 کی بہتریhematopoieticcyclophosphamide-حوصلہ افزائی میں کامmyelosuppressionچوہے، یورو. جے فارماکول۔ 695 (2012) 7–12۔

[34] Y. Zhang, J. Xing, T. Ai, T. Wen, L. Guan, J. Zhao, تحفظechinacosideچوہوں میں اولیک ایسڈ کی وجہ سے پھیپھڑوں کی شدید چوٹ کے خلاف، فری ریڈک۔ Res. 41 (2007) 798–805۔

[35] AB Zhao, B. Yu, XL Wu, KJ Cao, EQ Li, QM Li, et al., پر حفاظتی اثراتmyelosuppressionچوہوں کا علاج تین مختلف کلاسک چینی ادویات کے فارمولے، Pharmacogn کے ذریعے کیا گیا۔ میگ 7 (2011) 133–140۔

[36] M. Zhu, C. Lu, W. Li, عارضی نمائشechinacosideTrk سگنلنگ کو چالو کرنے اور نیورونل سیلز کو روٹینون، جے نیوروکیم سے بچانے کے لیے کافی ہے۔ 124 (2013) 571–580۔