فینیلایتھنول گلیکوسائڈز کا اثر ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر پر – پی 1/ سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے ان دی ہیومن ہائپرٹروفک اسکار فائبروبلاسٹس

تبدیلی پذیر نمو کے عنصر پر فینیلیتھانوئیڈ گلیکوسائڈز کا اثر - انسانی ہائپرٹروفک داغ فائبروبلاسٹس میں پی 1/ سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے

مزید information:Ali.ma@wecistanche.com

[تجریدی]مقصد تبدیلی نمو کے عنصر پر مبنی - پی ایل (ٹی جی ایف - پی ایل)/ سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے کے اثرات کی تحقیقات کے لئےفینیلیتھانوئیڈ گلیکوسائڈزسےسیستانچے ٹبلوسا(سی پی ایچ جیز) انسانی ہائپرٹروفک اسکار فائبروبلاسٹس (ایچ ایس ایف بی) اور ممکنہ میکانزم پر۔ طریقے مارچ سے جون 2019 تک، بم کے بعد ہائپرٹروفک داغ کے 9 مریضوں کو داخل کیا گیا تھا۔ فائبروبلاسٹس کو ہائپرٹروفک داغ سے الگ تھلگ اور مہذب کیا گیا تھا۔ انسانی ہائپرٹروفک داغ وں کو ہٹا دیا گیا اور فائبروبلاسٹس کو ان ویٹرو میں ثقافت دی گئی۔ خالی گروپ، ماڈل گروپ، مثبت کنٹرول گروپ (ٹی جی ایف - پی ایل + 5 - فلوروراسیل) اور تجرباتی گروپ (ٹی جی ایف - پی ایل + سی پی ایچ جی) قائم کیے گئے تھے۔ کے اثراتفینیلیتھانوئیڈ گلیکوسائڈزسےسیستانچے ٹبلوساایچ ایس ایف بی کے پھیلاؤ پر مختلف ارتکاز پر سیل گنتی کٹ - 8 (سی سی کے - 8) پرکھ کے ذریعے پتہ چلا. سمیڈ2، سمیڈ3، سمیڈ7، کولاجن آئی (کول -1) اور کولاجن ایچ آئی (کول -3) ایم آر این اے کے اظہار کا پتہ ہر گروپ میں حقیقی - وقت مقداری ریورس ٹرانسکرپٹس - پولیمرز چین ری ایکشن (آر ٹی - کیو پی سی آر) نے لگایا۔ سمیڈ2، سمیڈ3، فاسفورسیلیٹڈ سمیڈ2 (پ - سمیڈ2)، فاسفورسیلیٹڈ سمیڈ3 (پی - سمیڈ3)، سمیڈ7، کول -1 اور کول - 3 پروٹین کے اظہار کا پتہ مغربی بلاٹنگ نے لگایا۔ پیمائش کے اعداد و شمار کا اظہار معیاری انحراف ± مطلب کے طور پر کیا گیا تھا (ایس ڈی ± مطلب)۔ متعدد گروپوں کا موازنہ ایک طریقہ اے این او وی اے کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ نتائج سی پی ایچ جی کے ساتھ علاج کے بعد ریبروبلاسٹس کی روک تھام کی شرح 60، 90، اور 120 ملی گرام/ایل برائے 48 گھنٹہ (36.87 ±0.06)٪ بمقابلہ (43.52 ±0.04)٪ بمقابلہ (78.11 ±0.03)٪ ، ایف ویلیو =45.070، پی<0.01. the="" inhibitory="" effects="" of="" cphgs="" on="" fibroblasts="" increased="" with="" the="" increase="" of="" drug="" concentration="" and="" the="" prolonga­tion="" of="" action="" time.="" rt="" -="" qpcr="" results="" showed="" that="" as="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" expression="" of="" col="" -1,="" col="" -="" 3,="" smad2,="" smad3="" mrna="" was="" reduced,="" and="" the="" expression="" of="" smad7="" mrna="" was="" in­creased="" in="" the="" experimental="" and="" positive="" control="" groups="" (0.21="" ±="" 0.04="" vs.="" 0.3="" ±0.25="" vs.="" 1.56="" ±="" 0.01,="" f="" value="39.755,"><0.01), (0.55="" ±0.04="" vs.="" 0.27="" ±0.04="" vs.="" 1.66="" ±0.22,="" f="" value="61.991,">< 0.01),="" (0.55="" ±0.03="" vs.="" 0.78="" ±0.76="" vs.="" 1.06="" ±0.15,="" f="" value="17.769,"><0.01), (0.46="" ±0.08="" vs.="" 0.55="" ±="" 0.10="" vs.="" 2.05="" ±="" 0.29,="" f="" value="56.796," p="">< 0.01),="" (1.77="" ±="" 0.59="" vs.="" 0.11="" ±="" 0.02="">

0.04 ± 0.04، ایف ویلیو = 14.780، پی< 0.05)="" ；="" western="" blotting="" results="" showed="" that="" the="" protein="" expression="" of="" p-smad2="" and="" p="" -smad3,="" col="" -="" 1,="" col="" -3,="" in="" the="" experimental="" group="" and="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" model="" group,="" and="" the="" expression="" of="" smad7="" protein="" was="" significantly="" high­er="" than="" that="" in="" the="" model="" group="" (0.="" 16="" ±="" 0.03="" vs.="" 0.="" 11="" ±="" 0.02="" vs.="" 0.06="" ±="" 0.00),="" (0.="" 12="" ±="" 0.02="">

0.07 ± 0.01 بمقابلہ 0.04 ±0.01، ایف ویلیو =7.670، پی< 0.05),="" (0.12="" ±0.03="" vs.="" 0.15="" ±0.06="" vs.="" 0.23="" 土="" 0.05,="" f="" value="3.936,"><0.05), (0.27="" ±0.02="" vs.="" 0.08="" ±0.01="" vs.="" 0.05="" ±0.04,="" f="" value="34.291," p="">< 0.01),="" (0.33="" ±0.02="" vs.="" 0.16="" ±0.02="" vs.="" 0.17="" ±0.01="" f="" value="16.322,"><0.01). conclusion="" cphg="" inhibited="" hypertrophic="" scar="" fibroblasts="" proliferation="" and="" activation="" via="" blocking="" the="" tgf="" -="" pl/smad="">

[کلیدی الفاظ] فینیلیتھانوئیڈ گلیکوسائڈزسےسیستانچے ٹبلوسا； ہائپرٹروفک داغ فائبروبلاسٹس؛ نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا - پی ایل/ سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے

سیستانچے ڈیزیٹریکولا ما اور سیستانچے مصنوعات پر کلک کریں

ہائپرٹروفک اسکرنگ (ایچ ایس) جلد کی ایک ریشے دار بیماری ہے جس کی خصوصیت فائبروبلاسٹس (ایف بی ایس) کے ضرورت سے زیادہ پھیلاؤ کے ساتھ ساتھ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (ای سی ایم) ڈیپوزیشن ہے، جو داغ کی تشکیل کے لئے اہم فعال خلیات ہیں، کولاجن کی بڑی مقدار خارج کر سکتے ہیں، اور تبدیلی نمو کا عنصر (ٹی جی ایف) - پی / سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے کا ایچ ایس کی تشکیل سے گہرا تعلق ہے۔سیستانچےایک روایتی ٹانک روایتی چینی دوا ہے، جس کا عرق فینیلیتھانوئیڈ ایسیٹک ایسڈ ٹوٹل (سی ایف جی) دواؤں کے اثرات ڈالنے والے اہم اجزاء میں سے ایک ہے اور مختلف حیاتیاتی افعال جیسے اینٹی سوزش، اینٹی ٹیومر، اینٹی ریڈیایشن، فری ریڈیکل اسکیوینجنگ وغیرہ کے مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ سی ایف جی ہیپاٹک سٹیلیٹ خلیات کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے، اور یہ کہ یہ سمیڈ2 کے اظہار کو کم کرکے ایسا کر سکتا ہے، سمیڈ3، سمیڈ7 کے اظہار میں اضافہ اس طرح ٹی جی ایف پی / سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے ٹرانسڈکشن کو بلاک کر دیا اور پھر جگر فائبروسس کی پیش رفت میں تاخیر کی۔ اس مطالعے کا مقصد ٹی جی ایف پی ایل / سمیڈ سگنلنگ پاتھ وے کی بنیاد پر انسانی ہائپرٹروفک اسکار فائبروبلاسٹس (ایچ ایس ایف بی) سے متعلق جینز اور پروٹین کے اظہار پر اثرات کا مشاہدہ کرنا تھا۔

مواد اور طریقے

1۔ مواد:سیستانچےسی ایف جی ہیچن فارماسیوٹیکل بائیو ٹیک کمپنی لمیٹڈ، ہیٹیان، چین سے خریدے گئے تھے۔ فیٹل بووائن سیرم کلارک بائیو سائنس، امریکہ سے خریدا گیا تھا؛ سیل گنتی کٹ ٹی جی ایف پی ایل پیپرو ٹیک، امریکہ سے خریدا گیا تھا؛ فلوریسینس مقداری پی سی آر کٹ ٹاکارا کارپوریشن، جاپان سے خریدی گئی تھی؛ ریورس ٹرانسکرپشن کٹس سب تھرمو فشر سائنٹفک، امریکہ سے خریدی گئیں؛ سمیڈ2 / 3، پی سمیڈ2 / 3 اینٹی باڈیز سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، امریکہ سے خریدی گئیں؛ اینٹی باڈیز ٹو سمیڈ7، کول-1، کول-3، گلیسرالڈیہائیڈ-3-فاسفیٹ ڈی ہائیڈروجناس (گیپ-ڈی ایچ) ایبیم (برطانیہ) سے خریدے گئے تھے؛ امریکہ کے ملی پور سے پولی وینیلائڈ فلورائڈ (پی وی ڈی ایف) جھلیاں خریدی گئیں۔

2۔ یہ تمام معاملات آرتھوپیڈکس کے محکمے، سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی کے پہلے ملحقہ اسپتال سے منتخب کیے گئے تھے اور تین نمونے (جن میں سے تمام کی تشخیص یقینی طور پر پیتھالوجی کے ذریعہ ہائپرٹروفک داغ کے طور پر کی گئی تھی) کو ایف بی ایس کی بنیادی ثقافت کے لئے بے ترتیب طور پر منتخب کیا گیا تھا؛ اس تجربے کی منظوری سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی کے پہلے ملحقہ اسپتال (منظوری نمبر 20170214-71) کی طبی اخلاقیات کمیٹی نے دی اور مریضوں اور ان کے اہل خانہ سے باخبر رضامندی حاصل کی گئی۔

3۔ سیل گروپنگ: بے ترتیب طور پر خالی گروپ میں تقسیم؛ ماڈل گروپ: 5 |وگ / ایل ٹی جی ایف - اور 1؛ مثبت کنٹرول: 5|یوجی / ایل ٹی جی ایف پی آئی + 250 ملی گرام / ایل 5-فلوروراسیل (5-ایف یو)؛ تجرباتی گروپ: 5|یوجی / ایل ٹی جی ایف پی ایل + (60 ملی گرام / ایل، 90 ملی گرام / ایل >، 120 ملی گرام / ایل) سی ایف جی ایس او.

4۔ خلیات کے پھیلاؤ کا تعین سیل گنتی کٹ (سی سی کے-8) سے کیا گیا تھا: لاگرتھمک نمو کے مرحلے میں ایچ ایس ایف بی کو لیا گیا، ہر گروپ کے خلیوں کو ڈیزائن کیا گیا اور ہر گروپ کے ہر کنویں کی جذب کرنے کی قدر کی ترتیب وار 450 این ایم طول موج پر نگرانی کی گئی جس میں 24، 48 اور 72 گھنٹے پر مائیکرو پلیٹ ریڈر کا استعمال کیا گیا۔

5۔ آر ٹی کیو پی سی آر کی طرف سے ایم آر این اے اظہار کا پتہ لگانا: 48 گھنٹے کی مداخلت جمع ہونے کے بعد ہر گروپ سے ایچ ایس ایف بی، آر این اے نکالا گیا اور ایم آر این اے اظہار کی مقدار کا تعین کیا گیا۔

6۔ پروٹین کے اظہار کا تعین مغربی دھبے کے تجزیے سے کیا گیا تھا۔ ہر پروٹین کے اظہار کا پتہ لگانے کے لئے ہر گروپ سے علاج کے ٤٨ گھنٹے بعد کل سیلولر پروٹین نکالا گیا تھا۔

7۔ شماریاتی طریقے: شماریاتی سافٹ ویئر ایس پی ایس ایس 22.0 کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا، اور پیمائش کے اعداد و شمار کو معیاری انحراف ± مطلب کے طور پر ظاہر کیا گیا (مطلب ± ایس ڈی) اور متعدد گروپوں کے درمیان موازنہ کے لئے فرق کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا، اور پی< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

نتائج

خلیات کے پھیلاؤ کے نتائج سے پتہ چلا کہ فائبروبلاسٹس پر 48 گھنٹوں کے لئے 60، 90 اور 120 ملی گرام / ایل سی ایف جی، روک تھام کی شرح [(36.87 ±0.06)٪: (43.52 ±0.04)٪ :(78.11 ±0.03)٪٪ ,ایف=45.073,پی< 0.01="" ],90="" mg/l="" cphgs.="" 24h-28h="" was="" [(26.29="" ±0.04)%="" :(43.52="" ±0.04)%="" :(64.11="" 土="" 0.03)%,f=""><0.01]. it="" indicated="" that="" the="" inhibition="" rate="" of="" cphgs="" on="" hsfbs="" was="" gradually="" elevated="" with="" time="" extension="" and="" increasing="" concentration,="" showing="" a="" proportional="">

ہر گروپ میں سی او ایل-1، کول-3، سمیڈ2 اور سمیڈ3 ایم آر این اے اظہار کا موازنہ: ماڈل گروپ کے مقابلے میں، مثبت کنٹرول اور تجرباتی گروپ دونوں ترقی کے عنصر کو کم کرسکتے ہیں β - متاثرہ سی او ایل-1، کول-3، سمیڈ2، اور سمیڈ3 ایم آر این اے اظہار، اور اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم اختلافات کے ساتھ سمیڈ7 ایم آر این اے اظہار کو فروغ دے سکتے ہیں۔ (1.56 ±0.01:0. 30 ± 0.25 : 0.21 ±0.04,ایف = 39. 755,پ<0.01； 1.66="" ±0.="" 22="" :="" 0.="" 27="" ±0.04="" :="" 0.="" 55="" ±0.="" 04.f="61." 991="" ,p=""><0. 01；="" 1.="" 06="" ±="" 0.15="" 比="" 0.="" 78="" ±="" 0.="" 76="" 比="" 0.="" 55="" ±="" 0.="" 03,="" f="17.769" ,p=""><0.01 ；2.05="" ±="" 0.29="" :="" 0.55="" ±="" 0.10="" :="" 0.46±="" 0.08,f=""><0.01 ；0.04="" ±0.04="" :="" 0.11="" ±0.02="" :="" 1.77±0.="" 59,f="14."><0.>

ہر گروپ میں پی سمیڈ2، پی سمیڈ3، کول ایل، کول-3 کا موازنہ: خالی گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں پی سمیڈ2، کول-ایل کے پروٹین اظہار میں اضافہ ہوا، جبکہ سمیڈ7 کا موازنہ کم ہوا؛ ماڈل گروپ کے مقابلے میں مثبت کنٹرول گروپ پی سمیڈ3، سی او ایل-1، کول-3 کے پروٹین اظہار کو کم کر سکتا ہے اور تجرباتی گروپ نے پی سمیڈ2، پی سمیڈ3، کرنل - 3 کے بلند پروٹین اظہار پر انہیبیٹری اثر دکھایا۔ سی او ایل-3 کے اظہار کو مختلف درجوں تک روک دیا گیا جبکہ دونوں گروپوں میں سمیڈ7 کے اظہار میں نسبتا اضافہ کیا گیا اور خالی گروپ میں پی سمیڈ2، پی سمیڈ3، سمیڈ7، کول-ایل، کول-3 کی پروٹین اظہار اقدار میں نسبتا اضافہ کیا گیا۔ مثبت کنٹرول گروپ اور تجرباتی گروپ (0.09 ±0.04,0.16 ±0.03,0.11 ± 0.02,0.06 ± 0.00)، (0.07 ±0.03,03,02 ± 0.02,0.07 ± 0.01,04 ±0.04,ایف = 7. 670, P<0. 05),="" (0.="" 22="" ±0.05、="" 0.12="" ±0.03,0.15="" ±0.06,0.23="" ±="" 0.05,="" f="3.936,">< 0.05),(0.19="" ±0.02,0.27="" ±="" 0.02,0.08="" ±0.01,0.05="" ±="" 0.04,f=""><0.01)、(0.21 ±0.04.0.="" 33="" ±0.02、="" 0.16="" ±0.02,0.17="" ±0.01,f=""><>

بحث

ایچ ایس ٹشو کی مرمت کا ایک ناگزیر نتیجہ ہے، اور اس کے وقوع کا طریقہ کار بنیادی طور پر ایف بی ایس ہائپر پروپرلیشن، ناکافی تنزلی وغیرہ ایچ ایس کی تشکیل اور ترقی کا باعث ہے۔ ٹی جی ایف پی 1 وسیع پیمانے پر سیلولر، ٹشو غیر معمولی پھیلاؤ اور تفریق کی بیماریوں میں ملوث ہے اور زخم وں کے شفا یابی کے دوران جاری رہتا ہے؛ یہ بنیادی طور پر ٹی جی ایف پی / سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے اپنے اثرات مرتب کرتا ہے، جس میں سمیڈ2 / 3 پروٹین کی فاسفورسلیشن انٹرا سیلولر اور ایکسٹرا سیلولر فائبرو جینک پروٹین کے اظہار میں اضافہ کا باعث بنتی ہے، کولاجن کی پیداوار کو فروغ دیتی ہے، اور فائبروسس کی پیش رفت کو تیز کرتی ہے؛ سمیڈ7، ایک منفی ریگولیٹر کے طور پر، فعال ٹی جی ایف پی 1 ریسیپٹرز کے ساتھ تعامل کے ذریعے اس راستے کو روک سکتا ہے، جس سے کولاجن فائبر کی تالیف میں کمی آسکتی ہے؛ اس طرح یا تو سمیڈ7 اظہار میں اضافہ ہو رہا ہے یا سمیڈ2 / 3 اظہار کو روکنا ہائپرٹروفک داغ کی نشوونما کو روک سکتا ہے۔

اس مطالعے نے جلد کی فائبروٹک بیماری ایچ ایس پر سیسٹانچے سی ایف جی ایس کا اطلاق کیا اور پتہ چلا کہ سی ایف جی کی مختلف خوراکوں نے ٹی جی ایف پی 1 کے ذریعہ متاثرہ ایچ ایس ایف بی کے پھیلاؤ کو روک دیا؛ مزید برآں، 90 میٹر اور / ایل سی ایف جی ز نے سمیڈ7 اظہار کو فروغ دے کر اور جین اور پروٹین اظہار دونوں سطحوں پر سمیڈ2 / 3 اظہار کو کم کرکے پاتھ وے سگنلنگ کو روک دیا، اور سی او ایل-1، سی او ایل-3 کی پیداوار کو کم کیا، جس کے نتیجے میں ایچ ایس کی ترقی کو روک دیا گیا۔ ہمارے نتائج نے تصدیق کی کہ سی ایف جی نے ٹی جی ایف پی 1 تحریک کے تحت ٹی جی ایف پی / سمیڈز سگنلنگ پاتھ وے سے متعلق پروٹین کے اظہار میں مداخلت کرکے کولاجن کی پیداوار کو روک دیا۔ موجودہ مطالعے کے نتائج نے ثابت کیا کہ سیستانچے سی ایف جی ایس نے پھیلاؤ کو روک دیا اور ٹی جی ایف پی / سمیڈز سگنلنگ راستے کے ذریعے ہائپرٹروفک داغ فائبروبلاسٹس کے کولاجن رطوبات کو موثر طور پر کم کیا۔