چکن پری ایگریگیٹڈ فولیکلز میں گرینولوسا سیلز کی نشوونما پر Cistanche Deserticola Deserticola اور Kaempferol کے اثرات

خلاصہ:چکن کے پٹک کی نشوونما پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات کو دریافت کرنے کے لیے، تجربے نے MTT طریقہ سے چکن کے پہلے سے درجے والے گرینولوسا خلیوں کی سرگرمی پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے مختلف ارتکاز کے اثرات کا تجزیہ کیا اور زیادہ سے زیادہ ارتکاز کا تعین کیا۔ ریئل ٹائم فلوروسینٹ مقداری PCR کا استعمال Cistanche deserticola اور Kaempferol کے پھیلاؤ سیل نیوکلیئر اینٹیجن (PCNA)، follicle-stimulating hormone receptor (FSHR)، اور چکن پری گریڈڈ گرینولوسا سیلز کے ایسٹروجن ریسیپٹر (ER) پر ہونے والے اثرات کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ mRNA اظہار کا اثر؛ ڈمبگرنتی follicular ترقی پر Cistanche deserticola اور kaempferol کے اثرات کا تجزیہ ڈمبگرنتی ٹشو کے وٹرو کلچر کے ذریعے کیا گیا۔ نتائج سے معلوم ہوا کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol دونوں 1 × at 10-4 mol/L کے ارتکاز میں ، گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر فروغ دے سکتا ہے، جبکہ گرینولوسا خلیوں میں PCNA، FSHR، اور ER کو بھی فروغ دے سکتا ہے mRNA اظہار (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

مطلوبہ الفاظ: Cistanche deserticola; کیمپفیرول؛ چکن؛ گریڈ سے پہلے دانے دار خلیات؛ ڈمبگرنتی ٹشو

چینی جڑی بوٹی سیستانچ

بڑے پیمانے پر بچھانے والے مرغیوں کے فارموں کے لیے، انڈے کی پیداوار کی شرح کی سطح اس کے معاشی فوائد کو متاثر کرتی ہے، اور بیضہ دانی کے پٹکوں کی نشوونما براہ راست بچھانے والی مرغیوں کی پیداواری کارکردگی کو متاثر کرتی ہے۔ follicles کو ان کی فعال حیثیت کے مطابق تین مراحل میں تقسیم کیا جاتا ہے: بنیادی follicles، ثانوی follicles، اور mature follicles [1]۔ ہر روز، پختگی کے لیے تیار ہونے کے لیے ایک follicle کا انتخاب کیا جاتا ہے، اور انڈے کو فیلوپین ٹیوب میں خارج کر دیا جاتا ہے، جو فنل، توسیع، استھمس، بچہ دانی اور اندام نہانی سے گزر کر انڈے جیسا ڈھانچہ بناتا ہے [2-3]۔ قدیم follicles کی شروعات کا تعلق follicular granulosa خلیات کی نشوونما سے ہے۔ Follicle-stimulating hormone (FSH) granulosa خلیات پر follicle-stimulating hormone receptor (FSHR) سے منسلک ہوتا ہے، luteinizing ہارمون ریسیپٹر (LHR) کی تشکیل اور سٹیرایڈ ہارمونز کی ترکیب کو متحرک کرتا ہے [4-6]۔ FSH اور luteinizing ہارمون (LH) ہم آہنگی سے follicular ترقی اور پختگی کو فروغ دینے کے لیے granulosa خلیات پر کام کرتے ہیں، غالب follicles کے انتخاب میں حصہ لیتے ہیں۔ تحقیق سے پتا چلا ہے کہ اگرچہ گرانولوسا خلیات کی کمی والے ابتدائی follicles کو چالو کر دیا گیا ہے، لیکن وہ بالآخر تمام ایٹریسیا کو تیار کرتے ہیں [7]۔ پٹک کی نشوونما کے دوران، ایسٹروجن ڈمبگرنتی گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتا ہے، جبکہ بیضہ دانی کے گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ اور تفریق کو فروغ دینے کے لیے FSH اور LH کے ساتھ تعاون کرتا ہے۔ جب پلازما میں ایسٹروجن کا مواد بڑھ جاتا ہے، تو اسے پردیی گردش کے نظام کے ذریعے منفی طور پر ہائپوتھیلمس کو پلایا جائے گا، اس طرح ہائپوتھیلمس سے گوناڈوٹروپین جاری کرنے والے ہارمون (GnRH) کے اخراج کو روکتا ہے۔ GnRH ڈمبگرنتی follicle کی نشوونما کو فروغ دینے کے لئے FSH اور LH کی ترکیب اور اخراج کے لئے adenohypophysis کو متحرک کر سکتا ہے۔ جب GnRH کی رطوبت کم ہوتی ہے، تو یہ FSH اور LH کی رطوبت کو روک سکتا ہے، جو بالآخر پٹک کی نشوونما کو روکتا ہے [8-9]۔

پچھلے مطالعات سے پتا چلا ہے کہ Cistanche deserticola اور Cuscuta chinensis کا صحتیاب ہونے کے بعد atrophic oviducts اور تباہ شدہ oviducts پر ایک اچھا مرمتی اثر پڑتا ہے، اور یہ کم بچھانے والی مرغیوں کے بچھانے کی شرح کو بہتر بنا سکتا ہے [10]۔ جانوروں کی پیداوار میں، Flavonoids کا استعمال جانوروں کی پیداوار کی کارکردگی کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے، جانوروں کی بیماریوں کے خلاف مزاحمت کو بہتر بنا سکتا ہے، اور جانوروں کے مدافعتی کام کو بہتر بنا سکتا ہے۔

چینی ادویات جیسے ginseng، Cistanche deserticola، اور astragalus

Cistanche deserticola کے کل flavonoids وٹرو میں چکن کے پری گریڈ اور گریڈ follicular granulosa خلیات کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر فروغ دے سکتے ہیں، steroidogenic ریپڈ ریگولیٹری پروٹین (StAR) کی ٹرانسکرپشن لیول، کولیسٹرول سائیڈ چین کلیویج انزائم (CYP11A1) اور mRNA، mRNA۔ پروجیسٹرون کی. Cistanche deserticola کے کل flavonoids کا نمائندہ جزو Cistanche deserticola ہے۔ اس کا مالیکیولر وزن چھوٹا ہے، اور اسے خون – دماغی رکاوٹ سے گزرنے کا فائدہ ہے۔ ایک ہی وقت میں، اس میں سوزش، اینٹی ٹیومر، اور ایسٹروجن جیسے اثرات ہوتے ہیں [11]۔ Cuscuta chinensis کا بنیادی کیمیائی جزو Cuscuta chinensis کا کل flavonoids ہے۔ فی الحال، مختلف قسم کے flavonoids کو Cuscuta chinensis سے الگ کر دیا گیا ہے، بنیادی طور پر Quercetin اور Kaempferol، جن میں اعلیٰ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی ہوتی ہے۔

مادہ چوہوں میں ڈوڈر سیڈ فلیوونائڈ ایکسٹریکٹ کا استعمال ایسٹروجینک سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے، جس کا ڈمبگرنتی hCG/LH ریسیپٹر فنکشن کو بڑھانے پر خاص اثر پڑتا ہے۔ یہ نوعمر چوہوں پر گوناڈوٹروپین کا اثر رکھتا ہے اور ان کے تولیدی نظام کی نشوونما کو فروغ دے سکتا ہے [12-14]۔

اس تجربے میں، ہم نے چکن کے پری گریڈ فولیکولر گرانولوسا سیلز کا انتخاب کیا، اور چکن پری گریڈ فولیکولر گرانولوسا سیل کے پھیلاؤ اور متعلقہ رسیپٹر ایکسپریشن پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے فروغ کے اثر کو دریافت کیا۔ تہوں کی پیداواری کارکردگی کو بہتر بنانے کے لیے محفوظ، موثر اور باقیات سے پاک فیڈ ایڈیٹوز کی تحقیق اور ترقی کے لیے ایک نظریاتی حوالہ فراہم کرنا۔

Cistanche-Tonifying گردے کے اثرات

1 مواد اور طریقے

1.1 ٹیسٹ مواد

Cistanche deserticola (طہارت 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) شنگھائی جیزی بائیو کیمیکل ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔ کیمپفیرول (98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) شنگھائی علاء الدین بائیو کیمیکل ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔

1.2 اہم ریجنٹس اور آلات

مین ری ایجنٹس: قسم II کولیجینیس اور ڈی ایم ای ایم کو تھرمو فشر ٹیکنالوجی (چین) کمپنی لمیٹڈ سے خریدا گیا تھا۔ DMSO بیجنگ سولیباؤ ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدا گیا تھا۔ GDNA ہٹانے والی ریورس ٹرانسکرپشن کٹ کے ساتھ M5 Super qPCR RT کٹ بیجنگ Jumei Biotechnology Co., Ltd سے خریدی گئی تھی۔ اہم آلہ: BCM-1300شنگھائی باکسن انڈسٹریل کمپنی لمیٹڈ میڈیکل ایکوپمنٹ فیکٹری سے خریدا گیا پیوریفیکیشن ورک بینچ؛ AXTGL20M ہائی سپیڈ فریزنگ سینٹری فیوج Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd سے خریدا گیا تھا۔ Heracell 150i GP مستقل درجہ حرارت انکیوبیٹر Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd سے خریدا گیا تھا۔ LightCycle ® 96 قسم کا فلوروسینس مقداری پی سی آر آلہ اور DR-200بی ایس قسم کے انزائم لیبلنگ کا آلہ دونوں بول لائف میڈیکل پروڈکٹس (شنگھائی) کمپنی، لمیٹڈ سے خریدے گئے تھے۔

1.3 چکن کی درجہ بندی سے پہلے follicles سے granulosa خلیات کو الگ کرنا اور نکالنا

تیس 150- دن پرانی صحت مند ہیلان براؤن بچھانے والی مرغیاں (ہیبی باؤڈنگ ڈنگنونگ کمپنی کی طرف سے فراہم کی گئی) کو منتخب کیا گیا، کیروٹڈ شریانوں کے خون بہنے سے ہلاک کیا گیا، اور ان کے بیضہ دانیوں کو غیر محفوظ طریقے سے نکالا گیا (ویوو جانوروں کے تحقیقی ٹیسٹوں میں ان رہنما خطوط کے مطابق تھے جن کی منظوری دی گئی تھی۔ ہیبی زرعی یونیورسٹی کی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی)۔ پری گریڈ follicles چھوٹے سفید follicles میں تقسیم کیا جا سکتا ہے (SWF،<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

نوٹ: SWF چھوٹے سفید follicles کی نمائندگی کرتا ہے، LWF بڑے سفید follicles کی نمائندگی کرتا ہے، SYF چھوٹے پیلے follicles کی نمائندگی کرتا ہے، LYF بڑے پیلے follicles کی نمائندگی کرتا ہے، اور F1, F2, F3, F4, اور F5 پانچ بالغ فولیکلز کی نمائندگی کرتا ہے۔

جمع شدہ follicles کو 75 فیصد الکحل کے ساتھ تین بار دھویا گیا اور آخر میں PBS کے ساتھ ایک بار دھویا گیا۔ جراثیم سے پاک سوئی کا استعمال پی بی ایس میں 3 فیصد پینسلن اور اسٹریپٹومائسن پر مشتمل زردی کے سیال کو خارج کرنے، جھلی کے خلیے کی تہہ کو ہٹانے اور دانے دار سیل کی تہہ کو الگ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ 15mL EP ٹیوب لی گئی تاکہ follicles کی کٹ گرینولوسا سیل پرت کو شامل کیا جاسکے اور 4 mL 0.1 فیصد قسم II Collagenase شامل کیا گیا۔ اسے شیکر میں 37 ڈگری پر 3 منٹ تک ہلایا گیا۔ دوغلا پن مکمل ہونے کے بعد، ہضم کو ختم کرنے کے لیے مساوی مقدار میں کلچر محلول شامل کریں جس میں 0.5 فیصد FBS ہو۔ بالترتیب 200 میش چھلنی اور 400 میش چھلنی سے فلٹر کریں۔ فلٹریٹ کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1200 r/منٹ پر 5 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں اور سینٹرفیوگریشن کو دو بار دہرائیں۔ سپرناٹینٹ کو ضائع کریں، کلچر میڈیم شامل کریں، یکساں طور پر بلو اور ایسپریٹ کریں، اور سیل سسپنشن کو 5 × 106 ٹکڑوں/mL پر پتلا کریں، اور یکساں طور پر پیٹری ڈش میں 100 ملی میٹر قطر کے ساتھ شامل کریں، اور 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 پر کلچر کریں۔ .

1.4 گرینولوسا سیل کی سرگرمی پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات

دانے دار خلیوں کو معمول کے مطابق ڈی ایم ای ایم میڈیم میں کلچر کیا جاتا تھا جس میں 10 فیصد فیٹل بوائن سیرم ہوتا تھا۔ لوگاریتھمک نمو کے مرحلے میں خلیوں کو 2.5 جی / ایل ٹرپسن کے ساتھ لیا اور ہضم کیا گیا۔ خلیات 96 کنویں پلیٹوں میں یکساں طور پر پھیلے ہوئے تھے۔ ہر پلیٹ کو 10 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا جس میں ہر گروپ میں 6 بار بار سوراخ تھے۔ کلچر پلیٹ کے ارد گرد سوراخوں میں 200 کا اضافہ کریں μL PBS ایک موئسچرائزنگ سوراخ کے طور پر کام کرتا ہے۔ Cistanche deserticola کا ارتکاز 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ پر سیٹ کیا گیا ہے۔ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24} mol/L ایک خالی کنٹرول گروپ سیٹ کریں۔ Cistanche deserticola کے ساتھ خلیات کی 24 گھنٹے تک مشترکہ ثقافت کے بعد، ہر کنویں میں 10 فیصد شامل کریں μ5 mg/mL MTT L کے۔ مزید 4 گھنٹے تک کاشت کرنے کے بعد، ہر کنویں μL DMSO میں 150 شامل کریں، اور 3 منٹ کے لیے oscillate کریں۔ 37 ڈگری پر مستقل درجہ حرارت شیکر۔ 450 nm پر جاذبیت کی پیمائش کریں۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا، اور گرینولوسا سیلز کے لیے Kaempferol کی زیادہ سے زیادہ محفوظ خوراک کی اسکریننگ کا عمل اوپر جیسا ہی تھا۔

ریگستانی رہنے والا cistanche-Tonifying گردہ

1.5 Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات سیل نیوکلیئر اینٹیجن، follicle-stimulating hormone receptor، اور granulosa خلیات میں ایسٹروجن ریسیپٹر کو پھیلانے پر

ایم آر این اے اظہار کا اثر لوگاریتھمک گروتھ فیز کے گرینولوسا سیلز میں دیکھا گیا، جسے 5 × 106 ٹکڑوں/mL کی سیل کثافت کے ساتھ تین کلچر ڈشز میں ٹیکہ لگایا گیا۔ پیٹری ڈشز کو خالی کنٹرول گروپ میں تقسیم کیا گیا تھا۔ Cistanche deserticola گروپ، یعنی سیل کلچر کے 24 گھنٹے بعد، 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola شامل کریں۔ Kaempferol گروپ میں، سیل کلچر کے 24 گھنٹے کے بعد 1 کا اضافہ کریں × 10-4 mol/L Kaempferol؛ ایسٹروجن گروپ، سیل کلچر کے 24 گھنٹے بعد 5 شامل کریں × ایسٹروجن کے 10 سے 8 مول/L کے ساتھ علاج کریں۔ کاشت کے 24 گھنٹے بعد، تمام کلچر میڈیم کو ضائع کر دیں، پی بی ایس سے کللا کریں، ہاضمے کے لیے 1 ملی لیٹر لبلبے کا انزائم شامل کریں، اور چند منٹوں کے بعد، ہضم کو ختم کرنے کے لیے کلچر میڈیم کی برابر مقدار شامل کریں۔ سیل سسپنشن کو 1000 r/min پر 5 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں، سپرنٹنٹ کو ضائع کریں، اور ایک آئس باکس میں Trizol reagent شامل کریں۔ اس کے بعد، کلوروفارم کو شامل کیا گیا اور اسے بھرپور طریقے سے ہلایا گیا، تقریباً 3 منٹ کے لیے ایک آئس باکس میں رکھا گیا، اور 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر 12000 r/min پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ آر این اے کو ایک نئی EP ٹیوب میں منتقل کریں، آئسوپروپینول کا مساوی حجم شامل کریں، آہستہ سے اچھی طرح مکس کریں، اور 10 منٹ تک آئس باکس میں کھڑے ہونے دیں۔ سنٹرفیوگریشن کے بعد 4 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے 12 000 r/min پر، سپرنیٹینٹ کو ضائع کریں اور 80 فیصد ایتھنول کے ساتھ پریسیپیٹیٹ کو دھو لیں۔ 5 منٹ کے لیے 10 000 r/min اور 4 ڈگری پر سینٹری فیوج کریں، ایتھنول کو ضائع کر دیں، 5-10 منٹ کے لیے ہوا میں خشک کریں، اور اڑانے کے لیے ڈی ای پی سی پانی ڈالیں اور پرسیپیٹیٹ کو تحلیل کریں۔ یووی سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے آر این اے کی حراستی کی پیمائش کریں۔

cDNA حاصل کرنے کے لیے ریورس ٹرانسکرپشن کے لیے GDNA ہٹانے والی کٹ کے ساتھ M5 سپر پلس qPCR RT کٹ استعمال کریں۔ ریئل ٹائم فلوروسینٹ مقداری PCR MRNA رشتہ دار ٹرانسکرپشن لیول کے ذریعے پھیلنے والے سیل نیوکلیئر اینٹیجن، follicle-stimulating ہارمون ریسیپٹر، اور granulosa خلیات میں ایسٹروجن ریسیپٹر کا پتہ لگانا۔ پرائمر کی معلومات ٹیبل 1 میں دکھائی گئی ہے، اور پرائمر شینگگونگ بائیو ٹیکنالوجی (شنگھائی) کمپنی، لمیٹڈ کے اندرونی حوالہ گروپ - ایکٹین کے ذریعے ڈیزائن اور ترکیب کیے گئے تھے، ہر جین کے لیے mRNA کی متعلقہ نقل کی سطح کا تعین 2- سے کیا جاتا ہے۔ ΔΔ Ct کے حساب سے

جدول 1 پرائمر کی معلومات

1.6 ان وٹرو کلچر اور ڈمبگرنتی بافتوں کا مورفولوجیکل مشاہدہ

30 40- دن پرانی ہیلان براؤن بچھانے والی مرغیوں کا ڈمبگرنتی ٹشو لیں اور اسے 75 فیصد الکحل کے ساتھ تین بار دھو لیں۔ الٹرا کلین ٹیبل میں ڈمبگرنتی ٹشو کو 1-2 mm3 کے چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹ لیں، جس کی شرح 500 فی کنواں μL DMEM اور ITS میڈیم میں شامل کی گئی ہے (10 μG/mL انسولین، 5 μG/mL ٹرانسفرین ، اور 30 ​​nmol/L سوڈیم سیلینائٹ)۔ انکیوبیٹر میں کاشت کے 72 گھنٹے بعد گروپ بندی کی صورت حال کے مطابق علاج کریں۔ ڈمبگرنتی ٹشو کو ایک خالی کنٹرول گروپ، Cistanche deserticola گروپ، Kaempferol گروپ، اور ایسٹروجن گروپ میں تقسیم کیا گیا تھا۔ 72 گھنٹے کی کاشت کے بعد، بیضہ دانی کے ٹشو کو 4 فیصد فارملڈہائیڈ کے ساتھ طے کیا گیا تھا، اور بافتوں کے حصے معمول کے مطابق آپٹیکل مائکروسکوپ کے تحت مشاہدے کے لیے تیار کیے گئے تھے۔

1.7 شماریات اور تجزیہ

qPCR ڈیٹا کا تجزیہ Biorad CFX Manager 2۔{1}} سافٹ ویئر اور Microsoft Excel سافٹ ویئر، اور SPSS 21۔{3}} سافٹ ویئر کو یک طرفہ ANOVA کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈنکن کا طریقہ متعدد موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ نتائج کو "مطلب ± معیاری انحراف" کے طور پر پیش کیا جاتا ہے اور گراف پیڈ پرزم 5۔{6}} سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے پلاٹ کیا جاتا ہے۔ پی<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 نتائج اور تجزیہ

2.1 گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات

یہ اعداد و شمار 2 اور 3 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol دونوں گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتے ہیں۔ 1 × 10-4~1 × 10-10 mol/L کے ارتکاز کے میلان کے اندر، خالی کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ارتکاز 1 × 10-4 mol/L، 1 × {{ ہے 9} mol/L، 1 × 10-6 mol/L، 1 × 10-7 mol/L پر، فرق انتہائی اہم تھا (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

نوٹ: "* *" خالی کنٹرول گروپ (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

تصویر 2 24 گھنٹے تک مختلف ارتکاز میں Cistanche deserticola کے سامنے آنے والے گرینولوسا خلیوں کی جاذبیت کی قدریں

تصویر 3 24 گھنٹوں تک مختلف ارتکاز میں کیمپفیرول کے سامنے آنے والے گرینولوسا خلیوں کی جاذبیت کی قدریں

2.2 Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات سیل نیوکلیئر اینٹیجن کے پھیلاؤ پر، follicle-stimulating hormone receptor، اور chicken pregranulosa خلیات کے ایسٹروجن ریسیپٹر پر mRNA کا اثر رشتہ دار نقل کی سطح پر

یہ ٹیبل 2 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol گروپوں کا اثر سیل نیوکلیئر اینٹیجن کے پھیلاؤ پر ہوتا ہے، follicle-stimulating hormone receptor اور estrogen receptor of chick pre-graded granulosa cell کنٹرول گروپ اور ایسٹروجن گروپ (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

ٹیبل 2 Cistanche deserticola اور Kaempferol کے پھیلاؤ سیل نیوکلیئر اینٹیجن، follicle-stimulating hormone receptor، اور chicken pregranulosa خلیات کے ایسٹروجن ریسیپٹر پر اثرات mRNA کے رشتہ دار نقل کی سطح پر

2.3 بیضہ دانی کا ہسٹولوجیکل مشاہدہ

یہ شکل 4 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، Cistanche deserticola اور Kaempferol کے ساتھ علاج کیے جانے والے ڈمبگرنتی بافتوں میں follicles کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہوا، اور granulosa خلیات monolayer سے multilayer تک پھیل گئے۔ ایسٹروجن گروپ کے مقابلے میں، Cistanche deserticola گروپ اور Kaempferol گروپ میں رحم کے بافتوں کی پختگی اور نشوونما کو فروغ دینے کی زیادہ واضح صلاحیت ہے، اور Cistanche deserticola گروپ اور Kaempferol گروپ Kaempferol گروپ سے زیادہ واضح اثر رکھتے ہیں۔

3 بحث

3.1 Cistanche deserticola اور Kaempferol کا اثر

پٹک کی نشوونما کا پورا عمل گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ کے ساتھ ہوتا ہے ، جو پٹک کی نشوونما کے لئے بہت اہمیت رکھتے ہیں۔ وہ سازگار مالیکیولر مائیکرو ماحولیات بنا کر قدیم پٹکوں کی نشوونما کا آغاز کرتے ہیں۔ پٹک کی نشوونما کے دوران، گرینولوسا خلیات کا اپوپٹوس پٹک کی نشوونما، انڈے کے خلیوں کی پختگی، اور ایسٹروجن سراو [15-16] کو منظم کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ Cistanche deserticola، ایک چینی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے، جنسی ہارمون کی طرح اثر رکھتی ہے، جو جانوروں کے follicles اور سپرم کی پیداوار کو فروغ دے سکتی ہے، estrus کی معمول کی آمد کو فروغ دے سکتی ہے، رحم کے افعال اور سرگرمی کو بہتر بنا سکتی ہے، اور تولیدی افعال کو بہتر بنا سکتی ہے۔ Cuscuta chinensis، ایک روایتی گردے کو ٹونیفائی کرنے والی چینی ادویات کے طور پر، اس کے مؤثر جزو flavonoids کے طور پر اینٹی آکسیڈینٹ، تولیدی، اور عمر مخالف اثرات ہیں۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ Cuscuta chinensis سے flavonoids کی ایک مخصوص خوراک کا ماؤس کے ورشن کے درمیانی خلیات [17-18] پر پھیلاؤ کا اثر ہوتا ہے۔ اس تجربے میں، Cistanche deserticola اور Kaempferol، چینی روایتی ادویات Cistanche deserticola اور dodder کے اہم اجزاء کے طور پر، چکن فولیکولر گرینولوسا سیلز اور ان کے متعلقہ ریسیپٹرز، اور ڈمبگرنتی بافتوں کی اظہار کی صلاحیت پر ان کے اثرات کا مطالعہ کرنے کے لیے منتخب کیا گیا۔ پولٹری تولیدی نظام کی ترقی پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کا۔

Cistanche-Tonifying گردے کے اثرات

گردے کی بیماری کی مصنوعات کے لیے Cistanche دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

3.2 پھیلنے والے سیل نیوکلیئر اینٹیجن، فولیکل محرک ہارمون ریسیپٹر، اور ایسٹروجن ریسیپٹر کا کردار

PCNA ایک پھیلنے والا سیل نیوکلیئر اینٹیجن ہے، جو سیل کے پھیلاؤ کے آغاز میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور سیل کے پھیلاؤ کا ایک اچھا اشارہ ہے۔ لہذا، ٹیسٹ کے نتائج میں PCNA کے اضافے نے اس بات کی تصدیق کی کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol جب گرانولوسا سیلز پر عمل کرتے ہیں تو خلیے کے پھیلاؤ کو فروغ دیتے ہیں۔ FSH اہم ہارمون ہے جو پٹک کی نشوونما کو فروغ دیتا ہے [19]، اور follicle-stimulating hormone receptor (FSHR) کے اظہار کی جگہ بنیادی طور پر بیضہ دانی اور پٹکوں میں مرکوز ہے۔ مرغیوں کی تولیدی سرگرمیوں میں FSH کا حصہ لینے کا بنیادی طریقہ یہ ہے کہ پٹکوں کی نشوونما کو منظم کرنا۔ جب FSH کی رطوبت بڑھ جاتی ہے، تو یہ گرینولوسا کے خلیات میں FSHR کے اضافے کو فروغ دے سکتا ہے، اور دونوں کا امتزاج Aromatase کو فعال کر کے LHR کی ترکیب کو آمادہ کر سکتا ہے۔ چکن FSH اور LH [20-22] کے ہم آہنگی کے اثر کے تحت بیضہ دانی پیدا کر سکتا ہے۔ follicle کے انتخاب سے پہلے، granulosa خلیات FSHR کی صرف بنیادی سطحوں کا اظہار کرتے ہیں، جو FSH سگنلز حاصل کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں اور سیل کی سرگرمی کو برقرار رکھنے کے لیے سائکلک اڈینوسین فاسفیٹ کی کم سطح پیدا کرتے ہیں۔ جب FSHR کے اظہار کو پہلے سے درجے کے follicle کے granulosa خلیات میں نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا جاتا ہے، تو یہ تجویز کرتا ہے کہ follicle کو گریڈ follicle [23-24] بننے کے لیے منتخب کیا جائے گا۔ اس مطالعے میں، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، Cistanche deserticola اور Kaempferol گروپوں میں FSHR mRNA کے اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol FSHR mRNA کی نقل کو فروغ دے سکتے ہیں، FSH کی رطوبت کو بڑھا سکتے ہیں، اور انتخاب کو فروغ دے سکتے ہیں۔ follicles کے گریڈ follicles کے طور پر. E2 ایک قسم کا سٹیرایڈ ہارمون ہے جو تھیکا سیلز کے ذریعے خارج ہوتا ہے۔ اس کا کام مادہ جانوروں کی جنسی پختگی کو فروغ دینا اور دوسری جنسی خصوصیت کو ظاہر کرنا ہے۔ ایف ایس ایچ کے عمل کے تحت، بیضہ دانی کے گرینولوسا خلیات کے ذریعے تیار کردہ اروماٹیز اینڈروجن کو E2 میں تبدیل کرتا ہے، جسے دو ایسٹروجن ریسیپٹرز (ER اور ER) کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے ） یہ مادہ جانوروں کے مختلف اعضاء پر اثرات مرتب کرتا ہے اور جانوروں کی افزائش میں اہم کردار ادا کرتا ہے، خاص طور پر جسمانی پٹک کی نشوونما کے دوران، ایسٹروجن ایک اہم انٹرا سیلولر ریگولیٹری مالیکیول ہے جو گرینولوسا خلیوں کے پھیلاؤ کو تیز کرتا ہے اور ڈمبگرنتی خلیوں کے پھیلاؤ اور تفریق پر FSH اور LH کے اثرات کو بڑھاتا ہے۔ ER اہم ایڈجسٹمنٹ منفی رائے ہے، ER follicles کی نشوونما بیضہ دانی کے اندرونی اور بیرونی دونوں راستوں سے منظم ہوتی ہے ، بیضہ دانی، پروسٹیٹ، اور ہائپوتھیلمس [27]۔

اس مطالعہ میں، ER Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اظہار کی سطح کو Cistanche deserticola اور Kaempferol گروپوں میں نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، جس سے یہ تجویز کیا گیا تھا کہ cistanche اور kaempferol چکن کے بیضہ دانی کی نشوونما، پختگی اور بیضہ دانی پر مثبت اثرات مرتب کرتے ہیں۔ اس تحقیق کے نتائج سے معلوم ہوا کہ ER کی پیمائش کی گئی تھی اظہار کی سطح نسبتاً کم ہے۔ یہ Guo Miao کے [28] تحقیقی نتائج سے مطابقت رکھتا ہے کہ مرغیوں کی جنین کی نشوونما میں، ابتدائی مرغیوں کے بیضہ دانی میں ER کے لیے مخصوص بائنڈنگ سائٹس ہوتی ہیں۔ مرغیوں کے سفید follicles، پیلے follicles، اور granulosa کے خلیوں میں، ER اظہار ER سے نمایاں طور پر زیادہ ہوتا ہے۔ سویا بین flavonoids، ایک پودے پر مبنی ایسٹروجن کے طور پر، جب خوراک میں شامل کیا جاتا ہے تو مرغیوں کے انڈے کی پیداوار کی شرح کو بڑھا سکتا ہے [29]، جو ایسٹروجن ہارمون کی سطح اور انڈے کی پیداوار کی شرح کے درمیان براہ راست تعلق کی نشاندہی کرتا ہے۔

شکل 4 HE داغ لگنے کے بعد ڈمبگرنتی ٹشو (10 ×)

3.3 ڈمبگرنتی ٹشو پر Cistanche deserticola اور Kaempferol کے اثرات

اس تجربے میں، بالترتیب ڈمبگرنتی ٹشو کے ساتھ Cistanche deserticola اور Kaempferol کی مشترکہ ثقافت سے، یہ پتہ چلا کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol سے متاثر ہونے والے ڈمبگرنتی بافتوں میں follicles کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہوا، اور granulosa خلیات monolayer سے multilayer تک پھیل گئے۔ اس سے مزید ثابت ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol ہسٹولوجیکل نقطہ نظر سے رحم کی نشوونما کو فروغ دے سکتے ہیں۔ اس تجربے کے نتائج میں پھیلنے والے سیل اینٹیجن، follicle-stimulating ہارمون ریسیپٹر، اور ایسٹروجن ریسیپٹر کی پیمائش کی گئی اشارے میں تبدیلیوں نے اس بات کی تصدیق کی کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol میں ایسٹروجن جیسے اثرات ہیں، جو اہم اجزاء کے ہدف کو تلاش کرنے کے لیے تجرباتی بنیاد فراہم کرتا ہے۔ Cistanche deserticola اور dodder کے.

4 نتیجہ

اس تحقیق نے اس بات کی تصدیق کی کہ Cistanche deserticola اور Kaempferol چکن سے تیار شدہ گرینولوسا خلیات کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتے ہیں اور PCNA، FSHR، اور ER کو بڑھا سکتے ہیں mRNA کی نقل کی سطح follicles کی نشوونما کو نمایاں طور پر فروغ دے سکتی ہے۔

حوالہ:

［1］Yang Pengyun، Song Beibei، Ma Jinrui، et al انڈے کی تشکیل میں گرینولوسا خلیات کا کردار [J] پولٹری سائنس، 2021 (11): 50-54

2］ HUO SY, LI YR, GUO Y, et al. جبری پگھلنے کے بعد پرت مرغیوں میں منتخب تولیدی خصوصیات پر Epimedi⁃ um flavonoids کے اثرات کو بہتر بنانا［J］۔ پولٹری سائنس، 2020,99（5）: 2757-2765۔

［3］ HUO SY, LI YR, ZHANG S, et al. Regressed oviduct اور follicles of force molted layer hens پر Epimedium کے افعال ［J］۔ جرنل آف ورلڈ پولٹری ریسرچ، 2020,10（2）:326- 335۔

4］ راجو جی آر، چوان آر، دینادیال ایم، وغیرہ۔ Luteinizing ہارمون اور follicle stimulating Harmon synergy: کنٹرولڈ ڈمبگرنتی ہائپر محرک میں کردار کا جائزہ۔ جرنل آف hu⁃ مین ری پروڈکٹیو اینسس، 2013,6（4）:227-234۔

［5］ SCHMIDT D. مورائن ونگڈ- ہیلکس ٹرانسکرپشن فیکٹر Foxl2 گرینولوسا سیل کی تفریق اور بیضہ دانی کی دیکھ بھال کے لیے درکار ہے［J］۔ ترقی، 2004,131（4）:933-942۔

6］ سلیوان میگاواٹ، سٹیورٹ ایکرز اے، کراسنو جے ایس، وغیرہ۔ خواتین میں ڈمبگرنتی ردعمل ریکومبیننٹ follicle-stimu⁃ لیٹنگ ہارمون اور luteinizing ہارمون （LH）: follicular maturation کے آخری مراحل میں LH کے لیے ایک کردار［J］۔ جرنل آف کلینی⁃ کیل اینڈو کرائنولوجی اینڈ میٹابولزم، 1999,84（1）:228-232۔

［7］ GUO Y, LI YR, ZHANG S, et al. مرغیوں کے بچھانے میں گرینولوسا سیل کی نشوونما پر ایپی میڈیم کے کل فلیوونائڈز کا اثر ［J］۔ پولٹری سائنس، 2020,99（9）:4598-4606۔

［8］ ZHANG WD, LI N, DU ZR, et al. IGF-1 رسیپٹر ایسٹروائٹس کے بنیادی حالات میں اور ایک اشتعال انگیز چیلنج کے بعد icariin اور icaritin کے ریگولیٹری اثرات میں شامل ہے۔ یورپی جرنل آف فارماکولوجی، 2021,906（5）:174269- 174278۔

9］ FREDERIQUE RZ, MIGUEL F, GE Y, et al. L T2 گوناڈوٹروپ سیل کا ریگولیٹری آرکی ٹیکچر جو گوناڈوٹروپین جاری کرنے والے ہارمون ［J］ کے ردعمل کو بنیادی بناتا ہے۔ Endocrinol⁃ ogy، 2018,9:34 میں فرنٹیئرز۔

［10］ Huo Shuying، Kang Jingmin، Li Yurong، et al فیلوپین ٹیوبوں کی مرمت اور مرغیاں بچھانے میں کارکردگی پر "Yimu پاؤڈر" کا اثر [J] چینی پولٹری، 2018، 40 (19): 4

［11］ WANG S, WANG Q, WANG H, et al. icaritin کے ذریعہ ROS اور DNA نقصان پر منحصر سنسنی کی شمولیت ہیپاٹو سیلولر کارسنوما خلیوں میں اس کی اینٹی ٹیومر سرگرمی میں حصہ ڈالتی ہے۔ فارماسیوٹیکل بیالوجی، 2019,57（1）:424-431۔

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al دباؤ والے چوہوں میں ڈمبگرنتی اینڈوکرائن فنکشن پر Cuscuta chinensis سے flavonoids کا اثر [J] چینی جڑی بوٹیوں کی دوا، 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia فعال اجزاء پر تحقیق میں پیشرفت اور تولیدی عمل کو ریگولیٹ کرنے میں ڈوڈر بیج کے عمل کے طریقہ کار// فارماسیوٹیکل فائٹو کیمسٹری اور روایتی چینی طب کے وسائل کی پائیدار ترقی (I)، 2009 پر اکیڈمک کانفرنس کی کارروائی: {{2}

［14］ TAO CC,WU Y,GAO X,et al. چھاتی کے کینسر کے خلاف Icari⁃ tin کے اینٹی ٹیومر اثرات کا تعلق ایسٹروجن ریسیپٹرز ［J］ سے ہے۔ موجودہ مالیکیولر میڈیسن، 2020,21（1）:73-85۔

15۔ موننیاکس، ڈینیئل۔ oo⁃ cyte-somatic سیل ڈائیلاگ کے ذریعے folliculogenesis کی ڈرائیونگ: جینیاتی ماڈلز سے اسباق［J］۔ The⁃ riogenology, 2016,86（1）:41-53.

［16］تاکاشی شمیزو اے، نومیچی کوساکا اے، چیاکیمو⁃ رائاما اے، وغیرہ۔ بوائین بیضہ دانی میں پٹک کی نشوونما کے مختلف مراحل کے دوران گرینولوسا اور تھیکا سیلز میں اپیلین اور اے پی جے ریسیپٹر کا اظہار: اپوپٹوس اور ہارمونل ریگولیشن کی شمولیت۔ سائنس ڈائرکٹ۔ جانوروں کی تولیدی سائنس، 2009,116（1-2）:28-37۔

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al Cistanche deserticola deserticola کے کل flavonoids کا آسٹیوجینک تفریق کو فروغ دینے پر Estrogenic اثر ［ J ］ قدرتی مصنوعات کی تحقیق اور ترقی، 2020، 32 (3}): {{4}):

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al BPA پر Cuscuta chinensis سے flavonoids کا حفاظتی اثر ماؤس کے خصیوں کے بیچ والے خلیات میں مردانہ ہارمونز کی غیر معمولی رطوبت کی حوصلہ افزائی کرتا ہے [J] جانوروں کی دوائیوں میں پیشرفت، {91 04): {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al Danzhou Chicken FSH Study on Single-nucleotide polymorphism of gene ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10{5}):

20］ ZHANG M,SHI H,SEGALOFF DL,et al. مادہ ماؤس کی تولیدی نالی میں luteinizing ہارمون ریسیپٹر کا اظہار اور lo⁃ کیلائزیشن۔ تولیدی حیاتیات، 2001,64（1）: 179-187۔

［21］ Li Qin، Wang Qigui TGF- پولٹری میں فولیکولر ڈیولپمنٹ کو ریگولیٹ کرنے والے خاندان کے افراد کی تحقیقی پیشرفت اور امکانات ［ J］ چینی پولٹری، 2019، 41 (19): 1-5

［22］گوان ہونگ بِن، لی کِنگ ژانگ کی تحقیقی پیش رفت follicle stimulating hormone [J] جرنل آف نارتھ ایسٹ ایگریکلچرل یونیورسٹی، 2002، 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei، Wang Shuying Laiwu Black Goat کے رحم میں FSHR اور LHR کی امیونو ہسٹو کیمیکل لوکلائزیشن ［ J］ لائف سائنس ریسرچ، 2006، 25 (4): 367-371

24］ TISCHKAU SA,HOWELL RE,HICKOK JR,et al. lu⁃ ٹینائزنگ ہارمون سرج چکن بیضہ دانی میں سرکیڈین کلاک جین کے اظہار کو کنٹرول کرتا ہے۔ Chronobiology International، 2011,28（1）:10-20۔

25］Tang Haifei، Wang Zhiwen، Zheng Xuesong، et al Progress in estrogen function Research [J] تولید اور مانع حمل، 2019، 39 (4): 334-340

［26］ لیو لنگبن ایسٹروجن ریسیپٹر (ER، ER) پر یک رنگی تابکاری روشنی کا اثر، ڈمبگرنتی بافتوں میں پروجیسٹرون رسیپٹر (PR-A, PR-B) اظہار کا اثر: سیچوان زرعی یونیورسٹی، 2013

27］ کوس جے ایف، لنڈزی جے، گرینڈئن کے، وغیرہ ٹشو کی تقسیم اور ایسٹروجن ریسیپٹر الفا (ERal⁃ pha) اور ایسٹروجن ریسیپٹر-beta） (ERbeta！icbonesenger wildic acid) کا مقداری تجزیہ اور ERalpha ناک آؤٹ ماؤس 2J۔ En⁃ docrinology,1997,138（11）:4613-4621.

28］گو میاؤ ای آر مرغیاں بچھانے کے ڈمبگرنتی ٹشو میں متحرک تبدیلیوں کا واضح ضابطہ اور ریگولیٹر جین تائیان کی اسکریننگ: شیڈونگ زرعی یونیورسٹی، 2017۔ ] گوانگ ڈونگ فیڈ، 2017، 26 (8): 31-33