دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن کے ساتھ چوہوں میں آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ اور سیل اپوپٹوس پر Cistanche Deserticola Total Glycosides کے اثرات Ⅰ

Abstریکٹ

مقصد: کے اثرات اور ممکنہ میکانزم کو دریافت کرناCistanche deserticola کل گلائکوسائیڈزدماغی چوہوں میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو پہنچنے والے نقصان اور اعصابی خلیوں کے اپوپٹوسس پر (GCs)اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ(CIRI)۔

طریقے: مڈل سیریبرل آرٹری اوکلوژن (MCAO) ماڈل کو ماڈل چوہوں میں سیون ایمبولائزیشن طریقہ استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا تھا۔ ماڈل کے کامیابی سے قائم ہونے کے بعد، منشیات کے گروپ (GCs) میں چوہوں کو مسلسل 14 دنوں تک گیویج کے ذریعے GCs 50 mg/(kg·d) دیا گیا۔ شام آپریشن گروپ (شام) اور ماڈل گروپ (ماڈل) میں چوہوں کو عام نمکین کی ایک ہی مقدار دی گئی۔ زبانی انتظامیہ۔ انتظامیہ کے بعد، اعصابی خسارے کا اندازہ لگانے کے لیے لونگا سکور کا طریقہ استعمال کیا گیا۔ اس کے بعد چوہوں کی قربانی دی گئی، اور ٹی ٹی سی سٹیننگ کی گئی تاکہ دماغی انفیکٹ ایریا کی فیصد کا حساب لگایا جا سکے۔ سیرم کا پتہ لگانے کے لئے ELISA طریقہ استعمال کیا گیا تھا۔malondialdehyde(MDA) مواد،سپر آکسائیڈ خارج کرنا(SOD) اورGlutathione peroxidase (GSH-Px)سرگرمی؛ دماغی بافتوں میں جوہری عنصر E2-متعلقہ فیکٹر 2 (Nrf2)، ہیم آکسیجنز-1 (HO-1) اور B کا پتہ لگانے کے لیے مغربی دھبہسیلولر لیمفوما/لیوکیمیا-2 (Bcl-2)، Bcl-2-متعلقہ X پروٹین (بیکس)، اور کیسپیس-3 (کیسپیس-3) اظہار۔

نتائج: شام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں اعصابی خسارے کا سکور بڑھ گیا، دماغی انفکشن کے علاقے میں اضافہ ہوا،MDA مواد میں اضافہ، SOD اور GSH-Px سرگرمیوں میں کمی، اور Nrf 2، HO -1 اور Bc l-2 پروٹین اظہار کی سطح میں کمی Bax اور Caspase-3 کے پروٹین کے اظہار کی سطح میں اضافہ ہوا۔; ماڈل گروپ کے مقابلے میں، GCs گروپ میں چوہوں کے اعصابی خسارے کا سکور کم ہوا، دماغی انفکشن ایریا کا فیصد کم ہوا،MDA مواد کم ہو گیا۔، SOD اور GS H-Px کی سرگرمی میں اضافہ، Nrf 2، HO -1 اور Bcl - 2 کے پروٹین اظہار کی سطح میں اضافہ ہوا، اور Bax اور Caspase - 3 کے پروٹین اظہار کی سطح میں کمی واقع ہوئی۔ نتیجہ: GCs دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ کو مؤثر طریقے سے کم کر سکتا ہے، اور اس کا طریقہ کار Nrf 2 / HO - 1 راستے کو چالو کرنے سے متعلق ہو سکتا ہے، اس طرح آکسیڈیٹیو تناؤ کی سطح کو کم کرتا ہے اور اعصابی خلیوں کے اپوپٹوسس کو روکتا ہے۔

[اہم الفاظ]Cistanche deserticola کل گلائکوسائیڈز; دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ; اوکسیڈیٹیو تناؤ; سیل apoptosis

قدرتی آرگینک CISTANCHE اقتباس

مزید تفصیلات حاصل کرنے کے لیے کلک کریں۔

Wecistanche کی معاون خدمت - چین میں سب سے بڑا cistanche برآمد کنندہ:

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https://www.xjcistanche.com٪2014-شاپ

دماغی اسکیمیا - ریپرفیوژن،

سی آئی ایس ایک بیماری ہے جس میں انتہائیاعلی بیماری, معذوریاوراموات کی شرح. دماغی خلیے اسکیمیا اور ہائپوکسیا کے لیے انتہائی حساس ہوتے ہیں، اس لیے دماغی خون کی شریانوں کو جلد از جلد از سر نو بحال کرنا شدید اسکیمک اسٹروک سے نمٹنے کا سب سے مؤثر طریقہ ہے۔ انٹراوینس تھرومبولیسس اور مکینیکل تھرومبیکٹومی فی الحال بڑے پیمانے پر استعمال شدہ طریقے ہیں، لیکن ان کی نسبتاً

تنگ ٹائم ونڈو اور دیگر بے قابو عوامل کی وجہ سے، صرف<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن، CIRI دماغی خون کی نالیوں کی بحالی کی ایک قسم ہے جو سٹیناسس سے ایک سپرمپوزڈ پیتھولوجیکل نقصان ہے جو خون کے بہاؤ کے دوران ہوتا ہے۔ فی الحال یہ خیال کیا جاتا ہے کہ اس کا پیتھولوجیکل میکانزم ایکسائٹیٹری امینو ایسڈ زہریلا، کیلشیم اوورلوڈ، اشتعال انگیز عوامل کی رہائی، اور مائٹوکونڈریل نقصان [1] کی وجہ سے آکسیجن فری ریڈیکلز کے جمع ہونے سے متعلق ہو سکتا ہے، جو بالآخر خون دماغی رکاوٹ کی تباہی، مائیکرو سرکولیشن کی خرابیوں کا باعث بنتا ہے۔ عصبی خلیوں کا اپوپٹوسس، اور نیکروسس [1] 2] اور رد عمل کا ایک سلسلہ، اس طرح اعصابی خسارے میں مزید اضافہ ہوتا ہے۔

Cistanche deserticola Total glycosides (glycosides of cistanche, GCs) روایتی چینی ادویات Herba Cistanche سے ماخوذ ہیں اہم فعال جزو تنوں اور انچوں کی جڑوں سے نکالا جاتا ہے)۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ GCs لپڈ پیرو آکسائڈریشن کو مؤثر طریقے سے روک سکتے ہیں، مائٹوکونڈریل فنکشن کو بہتر بنا سکتے ہیں، اضافی آکسیجن فری ریڈیکلز کو ختم کر سکتے ہیں، سوزش والی سائٹوکائنز کے اخراج کو روک سکتے ہیں، سائٹوٹوکسائٹی کو کم کر سکتے ہیں، اینٹی پلیٹلیٹ ایگریگیشن، خلیے کے پھیلاؤ کو روک سکتے ہیں، نیوپوکونڈریل کی سطح کو روک سکتے ہیں۔ اس طرح اینٹی ایجنگ، اینٹی ٹیومر، اینٹی ڈپریشن، قوت مدافعت میں اضافہ، اسکیمک کارڈیو ویسکولر اور دماغی امراض کو بہتر بنانا، سیکھنے اور یادداشت کی صلاحیتوں اور علمی افعال کو بہتر بنانا، اور تولید کو بہتر بنانا [3]۔

مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ GCs خلیات کو آکسیڈیٹیو نقصان کو کم کرسکتے ہیں اور خون کے دماغ کی رکاوٹ کی سالمیت کو برقرار رکھ سکتے ہیں۔

[4]; GCs مؤثر طریقے سے خلیوں کی عملداری کو بہتر بنا سکتے ہیں اور اسکیمیا ریپرفیوژن [5] کے بعد ہونے والی سوزش اور اپوپٹوس کو روک سکتے ہیں۔ این آر ایف 2 سوزش اور اینٹی آکسیڈینٹ کے عمل میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے [6]۔ مندرجہ بالا پس منظر کی بنیاد پر، اس مضمون کا مقصد CIRI ماڈل کو نقل کرتے ہوئے CIRI کے بعد آکسیڈیٹیو تناؤ اور apoptosis پر GCs کے اثرات اور ممکنہ راستوں کا مزید مطالعہ کرنا ہے۔

1 مواد اور طریقے

1. 1 منشیات اور ری ایجنٹس GCs (SN-5692، طہارت 98%، مغربی

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% triphenyltetrazolium chloride (TTC) ڈائی سلوشن (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.)، ELISA کٹ (Beijing Boosen Co., Ltd.)، BCA پروٹین مقداری تجزیہ کٹ (USA سیل سگنلنگ) ٹیکنالوجی کمپنی)، خرگوش مخالف ماؤس اینٹی باڈی Bcl-2، Bax، Caspas اینٹی باڈیز جیسے e-3، Nrf 2، HO-1، اور بکری کے اینٹی خرگوش سیکنڈری اینٹی باڈیز سبھی سے خریدے گئے تھے۔ ریاستہائے متحدہ کی پروٹینٹیک کمپنی۔

1. 2 آلات

سینٹری فیوج (ماڈل: TDL-40B، Shanghai Anheng سائنٹیفک انسٹرومنٹ فیکٹری)، مائکروپلیٹ ریڈر (ماڈل: Max-M5، امریکن مالیکیولر ڈیوائسز کمپنی)، SDS-PAGE الیکٹروفورسس انسٹرومنٹ (ماڈل: DYY-7C، بیجنگ لیوئی بائیوٹیکنالوجی کمپنی، لمیٹڈ کمپنی)، جیل سکینر (ماڈل: 4466611، US BIO-RAD کمپنی)۔

1. 3 جانور

نر ویسٹار چوہے [SCXK (بیجنگ) 2019-0010]، کلین گریڈ، 8 ہفتے پرانا، جسمانی وزن 250-280 گرام۔

1. 3 طریقے

1. 3. 1 گروپ بندی اور ماڈلنگ

چوہوں کو ایک سادہ بے ترتیب طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے شام گروپ (شام)، ماڈل گروپ (ماڈل) اور منشیات کے گروپ (جی سی) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ ہر گروپ میں 15 چوہے تھے۔ ان کو 1 ہفتہ کے لئے انکولی طور پر اٹھایا گیا اور پھر ماڈلنگ کی گئی۔ سرجری سے 12 گھنٹے پہلے سختی سے روزہ رکھنا اور روزہ رکھنا، ماڈل گروپ اور GCs گروپ نے سیون ایمبولائزیشن کا طریقہ [7] استعمال کیا تاکہ درمیانی دماغی شریانوں کی روک تھام (درمیانی دماغی شریانوں کی روک تھام) پیدا ہو۔ occlusion، MCAO) چوہا ماڈل، ریپرفیوژن حاصل کرنے کے لیے اسکیمیا کے 2 گھنٹے بعد ایمبولس کو ہٹانا انجام دیا گیا۔ ، ریپرفیوژن کے آغاز کا وقت ریکارڈ کریں۔ زخم کو سیون کیا گیا تھا، جلد کو آئوڈوفور سے جراثیم سے پاک کیا گیا تھا، اور جانوروں کو پنجرے میں واپس لا کر پالا گیا تھا، اور پھر 24 گھنٹے کے لیے خوشبو لگا دی گئی تھی۔ شام گروپ میں چوہوں کا آپریشن وہی تھا جو ماڈل چوہوں کا تھا، لیکن کوئی پلگنگ نہیں کی گئی۔ آخر کار ، ہر گروپ میں 10 چوہوں کو بعد کے تجربات کے لئے برقرار رکھا گیا۔

1. 3. 2. انتظامیہ کا طریقہ

GCs پاؤڈر لیں اور 15 mg/mL محلول تیار کرنے کے لیے خالص پانی ڈالیں۔ ابتدائی مطالعات سے معلوم ہوا ہے کہ 50 mg/(kg·d) کی خوراک دیگر خوراک کے گروپوں سے بہتر ہے، اس لیے اس تجربے کے لیے منتخب کردہ خوراک پہلے جیسی ہی ہے۔ GCs گروپ میں چوہوں کو 24 گھنٹے اسکیمیا اور ریپرفیوژن کے بعد گیویج کے ذریعے GCs دیا گیا تھا، اور شام گروپ اور ماڈل گروپ میں چوہوں کو 14 دن تک گیویج کے ذریعے عام نمکین کی مساوی مقدار دی گئی تھی۔

1. 3. 3 اعصابی خسارے کا سکور

لونگا اسکورنگ کا طریقہ [7] سرجری کے 24 گھنٹے بعد اسکور کرنے کے لیے استعمال کیا گیا، اور 1 سے 3 کے اسکور والے ماڈل چوہوں کو بعد کے تجربات کے لیے برقرار رکھا گیا۔ آخری خوراک کے بعد اسکور کریں۔ 0 پوائنٹس: کوئی نہیں۔

اعصابی علامات؛ 1 نکتہ: معمولی اعصابی خسارہ، دم کو اٹھانے پر متضاد سامنے کا حصہ جھک جاتا ہے اور بلند ہو جاتا ہے، اور کندھے کو لگ جاتا ہے۔ 2 پوائنٹس: اعتدال پسند اعصابی خسارہ، دُم اٹھانے پر متضاد پہلو کا جھکاؤ اور بلند ہو جاتا ہے، کندھے کا شامل ہونا، چلتے وقت گھاووں کے مخالف سمت میں دائروں میں مڑنا؛ 3 پوائنٹس: شدید اعصابی خسارہ، چلتے وقت زخم کے مخالف سمت کی طرف جھک جانا؛ 4 نکات: لاشعوری اور خود مختار سرگرمیاں۔

1. 3. 4 دماغی انفکشن ایریا کے فیصد کا تعین

آخری انتظامیہ کے بعد، ہر گروپ سے 4 چوہوں کو تصادفی طور پر منتخب کیا گیا، گہرائی سے بے ہوشی کی گئی، سر کاٹ دیا گیا اور ان کے دماغوں کو تیزی سے ہٹا دیا گیا۔

دماغ کے ٹشو کو جلدی سے 20 منٹ کے لیے -20 ڈگری ریفریجریٹر میں منجمد کریں۔ دماغ کے ٹشو نسبتاً ٹھیک ہونے کے بعد اسے باہر نکال لیں۔ دماغ کے پچھلے قطب کے چوراہے سے شروع ہو کر آپٹک چیزم تک، اور پیشانی سے لے کر occiput تک، چوہے کے دماغ کو کورونل ہوائی جہاز کے ساتھ کاٹ دیں۔ 2 ملی میٹر کی موٹائی کے ساتھ 5 دماغ کے ٹکڑوں میں کاٹیں، انہیں 2% TTC محلول میں ڈبو دیں، انہیں 15 منٹ تک رنگنے کے لیے 37 ڈگری پانی کے غسل میں رکھیں، انہیں الٹ دیں، اور مزید 15 منٹ تک رنگ دیں۔ آخر میں، دماغ کے ٹکڑوں کو 4% پیرافارمیلڈہائڈ محلول میں ڈبو دیا گیا اور تصویر کھینچنے سے پہلے 12 گھنٹے کے لیے طے کیا گیا۔ عام دماغ کے ٹشو کو سرخ رنگ میں دکھایا گیا تھا اور انفیکٹڈ دماغ کے ٹشو کو سفید میں دکھایا گیا تھا۔ دماغ کے ہر ٹکڑے کے انفکشن کی شرح کا تجزیہ اور حساب لگانے کے لیے امیجز سافٹ ویئر استعمال کریں۔ انفکشن کی شرح=infarct ایریا/دماغ کے ٹکڑے کا کل رقبہ × 100%۔

1. 3. 5 آکسیڈیٹیو تناؤ سے متعلق اشارے کا پتہ لگانا

چوہے کو بے ہوشی کریں، 4 ملی لیٹر پیٹ کی شہ رگ کا خون لیں، اسے صاف EP ٹیوبوں میں ڈالیں اور اسے 4 ڈگری ریفریجریٹر میں 0 کے لیے رکھیں۔ 15 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر 5 گھنٹے کے لیے 3 500 r/min پر سینٹری فیوج کریں، سپرنٹنٹ لیں، اور آخر میں ہر گروپ میں 3 چوہوں کا سیرم رکھیں۔ میلونڈیالڈہائڈ (ایم ڈی اے) اور سپر آکسائیڈ ڈسموٹیز (سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز) کے مواد کا تعین ELISA کٹ آپریٹنگ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا۔ برخاست کرنا،

SOD)، glutathione peroxidase (glutathione peroxidase، GSH-Px) سرگرمی۔

1. 3. 6 مغربی دھبے کا پتہ لگانا

دماغی بافتوں میں Nrf 2، HO -1، Bcl -2، Bax، اور Caspase -3 پروٹین کے اظہار کی پیمائش کے لیے آکسیڈیٹیو تناؤ اور اپوپٹوسس سے متعلق پروٹین کی پیمائش کی گئی۔ ہر گروپ سے تین چوہوں کا انتخاب کیا گیا، اور بیمار علاقے سے دماغی پرانتستا کی مناسب مقدار لی گئی، اس میں لیسز کا حل شامل کیا گیا، اور پروٹین نکالنے کے بعد پروٹین کی حراستی کا حساب لگایا گیا۔ پروٹین جیل الیکٹروفورسس کے بعد، جھلی میں منتقلی، 2 گھنٹے کے لیے بلاکنگ سلوشن کے ساتھ بلاک کرنا، کلی کرنا، اور پھر رات بھر 4 ڈگری پر پرائمری اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا، اگلے دن، ٹی بی ایس ٹی کو ہٹا دیا گیا، کلی کیا گیا، اور سیکنڈری اینٹی باڈی کو 2 گھنٹے تک انکیوبیشن کے لیے شامل کیا گیا۔ h گرے ویلیو کا تجزیہ کرنے کے لیے ٹارگٹ بینڈ کو امیجنگ اینالائزر پر رکھیں۔ متعلقہ پٹی گرے ویلیو، رشتہ دار پٹی گرے ویلیو=ہدف کی پٹی گرے ویلیو/اندرونی حوالہ والی پٹی گرے ویلیو کا حساب لگائیں۔

1. 4 شماریاتی تجزیہ کے طریقے

ڈیٹا ایپلیکیشن SPSS 25. ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے 0 سافٹ ویئر، اور اس مضمون میں شماریاتی گراف گراف پیڈ پرزم 8 سافٹ ویئر کے ساتھ تیار کیے گئے تھے۔ عام تقسیم کے ساتھ مطابقت رکھنے والے ڈیٹا کے نتائج کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ متعدد نمونوں کے درمیان موازنہ کے لیے تغیر کا ایک فیکٹر تجزیہ استعمال کیا گیا، اور LSD-t دو آزاد نمونوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا۔ ٹیسٹ، P < 0 کے ساتھ۔ 05 اشارہ کرتا ہے کہ فرق شماریاتی لحاظ سے اہم ہے۔