پھیپھڑوں کے کینسر سیل A549 کے حیاتیاتی رویے پر Cistanche Polysaccharides کے اثرات

خلاصہ: مقصد کے اثر کی تحقیقات کرناسیستانچ پولی سیکرائڈپھیپھڑوں کے کینسر سیل A549 کے حیاتیاتی رویے پر۔ طریقے پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیات A549 کو کنٹرول گروپ میں تقسیم کیا گیا تھا،سیستانچ پولی سیکرائڈ100, 200, 400 ng/mL گروپ، si-NC گروپ، si-LINC01410 گروپ،سیستانچ پولی سیکرائڈ400 ng/mL پلس pcDNA،سیستانچ پولی سیکرائڈ400 ng/mL پلس pcDNA- LINC01410 گروپ۔ A549 خلیوں کے پھیلاؤ کی شرح کا پتہ MTT طریقہ سے لگایا گیا تھا، A549 خلیوں کی کلوننگ کی صلاحیت کا پتہ کالونی تشکیل پرکھ کے ذریعے کیا گیا تھا، اور 549 خلیوں کا بہاؤ سائٹومیٹری سے پتہ چلا تھا۔

سیل اپوپٹوسس کی شرح، A549 خلیوں کی منتقلی اور حملے کی صلاحیت کا پتہ لگانے کے لیے ٹرانس ویل طریقہ استعمال کیا گیا تھا، اور RT-qPCR طریقہ A549 خلیوں میں LINC01410 mRNA کے اظہار کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

نتائج:سیستانچ پولی سیکرائڈA549 سیل کے پھیلاؤ، کالونی کی تشکیل، نقل مکانی، اور حملے کی صلاحیت کو روک سکتا ہے، LINC01410 mRNA اظہار (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">سیستانچ پولی سیکرائڈA549 خلیوں کے پھیلاؤ، اپوپٹوسس، ہجرت اور حملے پر۔ نتیجہ:سیستانچ پولی سیکرائڈپھیپھڑوں کے کینسر کے خلیوں کی سرگرمی، کلون کی تشکیل، منتقلی، اور حملے کی صلاحیت کو روک سکتا ہے اور LINC01410 کے اظہار کو کم کرکے سیل اپوپٹوسس کو فروغ دے سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:سیستانچ پولی سیکرائڈ; پھیپھڑوں کا کینسر سیل A549; LINC01410; پھیلاؤ apoptosis

Cistanche کا مفت نمونہ حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

جگر کے نقصان کو کم کرنا

پھیپھڑوں کا کینسر ایک مہلک ٹیومر ہے جس میں میرے ملک میں پہلی بیماری اور اموات کی شرح ہے۔ پھیپھڑوں کے کینسر کے علاج کے طریقوں میں حفاظتی ٹیکوں، سرجری اور کیموتھراپی شامل ہیں [1]۔

مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ روایتی چینی ادویات اور اس کے اجزاء پھیپھڑوں کے کینسر کے علاج میں بہت زیادہ فائدے رکھتے ہیں اور پھیپھڑوں کے کینسر کی افادیت کو بہتر بنا سکتے ہیں [2-3]۔Cistancheمیرے ملک میں ایک قیمتی دواؤں کا مواد ہے، اور اس کے اہم اجزاء میں فینیتھائل الکحل ٹوٹل گلائکوسائیڈز، پولی سیکرائڈز، ایریڈائڈز، الکلائیڈز اور لگنان شامل ہیں۔ مطالعہ نے یہ کل پایا ہےCistanche کے phenylethyl glucosidesکر سکتے ہیںH22 ٹیومر والے چوہوں میں جگر کے نقصان کو کم کرتا ہے اور ٹیومر کی نشوونما کو روکتا ہے۔[4]۔ Ergosteroside، Cistanche کا فعال جزو، عریاں چوہوں کے زینوگرافٹ ماڈل میں ٹیومر کی نشوونما اور کولوریکٹل کینسر سیل کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے، اور apoptosis [5] کو آمادہ کر سکتا ہے۔

Cistanche polysaccharidesقدرتی قاتل خلیات اور انٹرلییوکن 2 (IL-2) کی سرگرمیوں کو بڑھا کر لیوس پھیپھڑوں کے کینسر اور S180 سارکوما خلیوں کو روک سکتا ہے۔

تاہم، ممکنہ افعال، بایوجنسیس کے عمل اور بنیادی میکانزمCistanche polysaccharidesپھیپھڑوں کے کینسر میں غیر واضح رہتا ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ lncRNAs اکثر پھیپھڑوں کے کینسر میں بے ضابطہ رہتے ہیں اور پھیپھڑوں کے کینسر کی موجودگی، نشوونما اور علاج میں اہم کردار ادا کرتے ہیں [7]۔ LINC01410 endometrial کینسر میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے اور endometrial کینسر کے مریضوں کی تشخیص کو متاثر کرتا ہے [8]؛ LINC01410 اوور ایکسپریشن miR-532-5p [9] کو روک کر گیسٹرک کینسر انجیوجینیسیس اور میٹاسٹیسیس کو فروغ دیتا ہے۔ پیپلیری تھائیرائڈ کینسر کے خلیے پھیلتے ہیں، منتقل ہوتے ہیں اور حملہ کرتے ہیں [10-11]، جبکہ پھیپھڑوں کے کینسر میں LINC01410 کا کردار واضح نہیں ہے۔ اس تجربے کا مقصد کے اثرات کا مطالعہ کرنا تھا۔Cistanche polysaccharidesاور LINC01410 پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیوں کی مہلک فینوٹائپ پر، اور آیا LINC01410 اس کے ضابطے میں شامل تھا۔Cistanche polysaccharidesپھیپھڑوں کے کینسر کے خلیات کے مہلک حیاتیاتی رویے پر، مزید تحقیق کے لیے بنیاد فراہم کرنے کے لیےCistanche polysaccharides.

Cistanche polysaccharides

علاج کینسر کے مطالعہ پر Cistanche polysaccharides کا مواد

پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیات A549 امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC) سے خریدے گئے تھے۔سیستانچ پولی سیکرائڈ(طہارت 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر، پروڈکٹ نمبر D3281) سے خریدی گئی تھی۔Wecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. فیٹل بوائین سیرم گوانگزو شوہینگ بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدا گیا تھا۔

RPMI-1640 میڈیم Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd. سے خریدا گیا تھا۔ MTT کٹ شنگھائی Meixuan Biotechnology Co., Ltd. سے خریدی گئی تھی۔ ٹرانس ویل چیمبر اور میٹریجل بیجنگ یونیکون بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدے گئے تھے۔ Apoptosis کٹ جرمنی کی کمپنی PromoCell سے خریدی گئی تھی۔ SYBRremix ExTaqTM کٹ شنگھائی شانران بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔

علاج کینسر کے مطالعہ پر Cistanche polysaccharides کے 2 طریقے

2.1 سیل کلچر اور گروپ بندی

A549 خلیوں کو RPMI-1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 37 ڈگری، 5 فیصد CO2 انکیوبیٹر میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم ہوتا ہے۔ لوگاریتھمک نمو کے مرحلے میں خلیوں کا علاج کیا گیا۔سیستانچ پولی سیکرائڈبالترتیب 100، 200، اور 400 ng/mL کی بڑے پیمانے پر، اور بطور ریکارڈسیستانچ پولی سیکرائڈ100، 200، اور 400 ng/mL گروپس؛ A549 خلیات جن کا علاج Cistanche polysaccharide کے ساتھ نہیں کیا گیا تھا وہ کنٹرول گروپ تھے۔ A549 خلیوں کو بالترتیب si-NC یا si-LINC0141 سے تبدیل کیا گیا تھا، جس کو si-NC گروپ، si-LINC01410 گروپ کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ si-NC اور si-LINC01410 کو A549 خلیوں میں تبدیل کیا گیا اور 400 ng/mL کے ساتھ علاج کیا گیا۔سیستانچ پولی سیکرائڈ، کے طور پر اشارہ کیا گیا ہے۔Cistanche Polysaccharide400 این جی / ایم ایل پلس پی سی ڈی این اے گروپ،سیستانچ پولی سیکرائڈ400 ng/mL پلس pcDNA-LINC01410 گروپ۔

2.2 MTT طریقہ کا پتہ لگانا

A549 سیل پھیلاؤ کی شرح A549 خلیوں کے ساتھ علاج کیا گیا۔سیستانچ پولی سیکرائڈبالترتیب 50، 100، 150، 200، 250، 300، 350، اور 400 ng/mL کی بڑے پیمانے پر ارتکاز پر۔ ہر گروپ میں A549 خلیات جمع کریں اور انہیں ایک کنویں کی پلیٹ میں رکھیں، ہر کنویں میں 20 μL MTT شامل کریں، 4 گھنٹے تک انکیوبیٹر میں کلچر جاری رکھیں، سپرنٹنٹ کو ضائع کریں، ہر کنویں میں 150 μL DMSO شامل کریں۔ ، اور 490 nm کی طول موج پر خلیوں کے ہر گروپ کی روشنی کا پتہ لگاتا ہے۔ کثافت (OD) اقدار سیل کے پھیلاؤ کی شرح کا حساب لگانے کے لیے استعمال کی گئیں۔

Cistanche کی کاشت

2.3 کالونی کی تشکیل پرکھ

A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 سیلز) ریکارڈ کیے گئے۔

2.4 فلو سائٹومیٹری کا پتہ لگانا

A549 سیل اپوپٹوسس ریٹ A549 سیل ہر گروپ میں جمع کیے گئے اور 100 μL فاسفیٹ بفرڈ نمکین بفر (1×106/mL) میں دوبارہ معطل کیے گئے، اور 1 mL سیل معطلی، 10 μL Annexin V-FITC اور 5 μLPI ٹیسٹ میں شامل کیے گئے۔ ، روشنی سے محفوظ 30 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد ، خلیوں کو جمع کیا گیا اور بہاؤ سائٹوومیٹری کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا۔

apoptosis.

2.5 ٹرانس ویل طریقہ سے پتہ لگانا

A549 سیل کی منتقلی اور حملے کی صلاحیت ہر گروپ کے A549 سیل معطلی (2×104/200 μL، سیرم فری میڈیم) ٹرانس ویل چیمبر کے اوپری چیمبر میں یکساں طور پر پھیلے ہوئے تھے، اور 500 μL RPMI{{ 7}} 10 فیصد FBS پر مشتمل میڈیم کو زیریں چیمبر میں شامل کیا گیا۔ اوپری چیمبر کے خلیوں کو ہٹا دیا گیا تھا، اور نچلے چیمبر کے خلیوں کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ طے کیا گیا تھا اور 0.1 فیصد کرسٹل وایلیٹ سے داغ دیا گیا تھا۔ خلیوں کا مشاہدہ ہلکے خوردبین کے تحت کیا گیا تھا، اور گنتی کے لیے تصادفی طور پر 5 فیلڈز کا انتخاب کیا گیا تھا۔ سیل پر حملے کے تجربے میں، میٹریجل کو ٹرانس ویل چیمبر کے اوپری چیمبر پر پہلے سے لیپت کیا گیا تھا، اور باقی اقدامات وہی تھے جیسے منتقلی کے تجربے میں تھے۔

2.6 RT-qPCR کا پتہ لگانا

A549 خلیوں میں LINC01410 mRNA کا اظہار کل RNA کو TRIzol reagent کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں سے نکالا گیا تھا، اور cDNA کو ریورس ٹرانسکرپشن کٹ ہدایات کے مطابق ترکیب کیا گیا تھا۔ رد عمل کا نظام ریورس ٹرانسکرپشن پروڈکٹ کا 2 μL، 10 μL SYBR گرین مکس، 0.5 μL فارورڈ اور ریورس پرائمر، اور 7 μL جراثیم سے پاک پانی تھا۔ رد عمل کے حالات 30 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری، 30 سیکنڈ کے لیے 60 ڈگری، اور 30 ​​سیکنڈ کے لیے 72 ڈگری تھے، کل 40 چکروں کے لیے؛ LINC01410mRNA کے متعلقہ اظہار کا حساب 2-ΔΔCT طریقہ سے GAPDH کے ساتھ اندرونی حوالہ کے طور پر کیا گیا تھا۔ پرائمر کی ترتیبیں ہیں LINC01410 فارورڈ 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3'، ریورس 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; اندرونی حوالہ GAPDH فارورڈ 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3'، ریورس 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'۔

2.7 شماریاتی تجزیہ

SPSS 20.0 سافٹ ویئر کو پروسیسنگ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، پیمائش کے ڈیٹا کو (x±s) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا، دو گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے آزاد نمونوں کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا، متعدد کے درمیان موازنہ کے لیے تغیر کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا تھا۔ گروپس، اور LSD-t ٹیسٹ گروپوں کے درمیان جوڑے کے مقابلے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ پی<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

Cistanche Extract پاؤڈر

علاج کینسر کے مطالعہ پر Cistanche polysaccharides کے 3 نتائج

3.1 کا اثرسیستانچ پولی سیکرائڈA549 خلیوں کے پھیلاؤ اور apoptosis پر کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، A549 خلیوں کے پھیلاؤ کی شرح ہر خوراک گروپ میںسیستانچ پولی سیکرائڈاضافہ ہوا (پی<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">

3.2 کا اثرسیستانچ پولی سیکرائڈA549 خلیوں کی منتقلی اور حملے کی صلاحیت پر کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ہر خوراک کے گروپ میں A549 خلیوں کی تعدادسیستانچ پولی سیکرائڈکمی (پی<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">

3.3 کا اثرسیستانچ پولی سیکرائڈA549 خلیوں میں LINC01410 mRNA کے اظہار پر کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ہر خوراک گروپ میں A549 خلیوں میں LINC01410 mRNA کا اظہارسیستانچ پولی سیکرائڈخوراک پر منحصر انداز میں کمی (P＜0.05) ہوئی۔