Enteropeptidase روکنا ذیابیطس گردے کی بیماری کے چوہے کے ماڈل میں گردے کے کام کو بہتر بناتا ہے۔
Mar 13, 2022
تعارف
ٹائپ 2 ذیابیطس میلیتس ایک دائمی میٹابولک عارضہ ہے جس کی خصوصیات ہائپرگلیسیمیا، انسولین مزاحمت، اور نسبتاً انسولین کی کمی ہے۔ یہ ایک عالمی طبی مسئلہ ہے جو مائیکرو واسکولر اور میکرو واسکولر ذیابیطس کی پیچیدگیوں کا باعث بنتا ہے۔ گردے کی بیماری(DKD) ذیابیطس کی ایک بڑی مائیکرو واسکولر پیچیدگی ہے جس کا نتیجہ دائمی ہوتا ہے۔گردے کی بیماری(CKD) اور اختتامی مرحلہگردوں کی بیماری. ریاستہائے متحدہ میں، ٹائپ 2 ذیابیطس کے 40 فیصد سے زیادہ مریضوں میں DKD ہوتا ہے۔ 2 DKD کی تعریف مائیکرو البومینیوریا سے ہوتی ہے جس کے بعد پروٹینوریا ہوتا ہے، جو ہائپرگلیسیمیا کی وجہ سے ہائی بلڈ پریشر، ہائی بلڈ پریشر اور پوڈوسیٹ انجری کی وجہ سے ہونے والے گلوومیرولر نقصان کی عکاسی کرتا ہے۔ proximal tubular خلیات پر بوجھ کا سبب بنتا ہےگردوںسوزش اور بیچوالا فبروسس، کلیدی راستےگردے خرابترقی۔4 رینن-انجیوٹینسن سسٹم (RAS) کی ناکہ بندی یا تو انجیوٹینسن کو تبدیل کرنے والے انزائم انحیبیٹرز یا انجیوٹینسن II ریسیپٹر بلاکرز (ARBs) کے ساتھ DKD والے مریضوں کے لیے طبی طور پر ایک معیاری علاج کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ {6}} inhibitors renoprotective drugs کی ایک نئی کلاس کے طور پر متعارف کرائے گئے ہیں۔گردے کی تقریب باقی رہیں، اور ان کو بہتر بنانے کے لیے نئی دواؤں کی کارروائی کے نئے میکانزم کی ضرورت ہے۔گردوںپیتھولوجیکل حالت.اضافی غذائی پروٹین کی مقدار کی ترقی کو تیز کرنے کے لئے سمجھا جاتا ہےگردے خرابگلوومیرولر ہائپر فلٹریشن، یوریمک ٹاکسن کے جمع ہونے، اور گلوومیریولر آٹوفجی کو روک کر۔ یہ بتایا گیا ہے کہ غذائی پروٹین کی مقدار میں اضافہ اختتامی مرحلے میں بڑھنے کے بڑھتے ہوئے خطرے سے مثبت طور پر تعلق رکھتا ہے۔گردے خرابCKD کے مریضوں میں؛ 9 تاہم، غذائی پروٹین کی مقدار کو کم کرنے کی علاج کی اہمیتگردے کی تقریبمتنازعہ رہتا ہے، 10 اور پروٹین ہاضمہ جھرنوں کو منظم کرنے میں فارماسولوجیکل مداخلتوں کی تاثیر واضح نہیں ہے۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کی خرابی کو بہتر کرے گا۔
Enteropeptidase ایک قسم II transmembrane serine protease ہے، جس کا اظہار گرہنی کے برش بارڈر پر انٹروسائٹس کے لومینل سائیڈ پر ہوتا ہے۔ یہ غیر فعال ٹرپسینوجن کو ٹرپسینوجن ایکٹیویشن سائٹ پر کلیویج کے ذریعے فعال ٹرپسن میں تبدیل کرتا ہے، اور چالو ٹرپسن بعد میں لبلبے سے خارج ہونے والے دیگر ہاضمہ زیموجینز کو متحرک کرتا ہے، بشمول chymotrypsinogen، proelastase اور procarboxypeptidases. AAs)۔ اس طرح، انٹروپیپٹائڈیس پروٹین کے عمل انہضام اور AA جذب میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔ SCO-792 ایک ناول ہے، جو زبانی طور پر دستیاب انٹروپیپٹائڈیس انحیبیٹر ہے جس میں نصف زیادہ سے زیادہ روک تھام کرنے والا ارتکاز ہے<10 nm="" against="" rat="" and="" human="" enteropeptidase="" in="" vitro.14="" in="" mouse="" models,="" enteropeptidase="" inhibition="" improves="" obesity="" and="" diabetes.15="" how="" ever,="" the="" pharmacological="" effects="" of="" enteropeptidase="" inhibition="" on=""> گردہپیچیدگیاں زیادہ تر نامعلوم ہیں. اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ انٹروپیپٹائڈیس پروٹین کے عمل انہضام اور جذب کے عمل میں شامل انزائمز کا سب سے دور کا اوپری حصہ ہے، ڈی کے ڈی کی حالت پر انٹروپیپٹائڈیس کی روک تھام کے علاج کے اثر کی تحقیقات قابل قدر ہو سکتی ہیں۔موجودہ مطالعہ میں، ہم نے ایک انٹروپیپٹیڈیس روکنے والے، SCO-792 کے اثرات کا جائزہ لیا۔گردہ ویسٹار فیٹی (WF) چوہوں میں متغیر، DKD.16 کے ساتھ ایک جانوروں کا ماڈل سب سے پہلے، ہم نے WF چوہوں میں SCO-792 کے میٹابولک اور رینو پروٹیکٹو اثرات کا جائزہ لیا۔ اس کے بعد، SCO-792 کی افادیت میں AA جذب میں تبدیلیوں کے تعاون کا جائزہ لیا گیا۔ گلومیرولر آٹوفجی سرگرمی پر SCO 792 کے اثر کو ظاہر کرنے اور ARB کے ساتھ SCO-792 کے مشترکہ اثر کو جانچنے کے لیے اضافی تجربات کیے گئے۔
مطلوبہ الفاظ:اینٹی ذیابیطس منشیات، ذیابیطس نیفروپتی، منشیات کی ترقی؛ گردے کی بیماری؛ گردے خراب؛ گردوں
مواد اور طریقے
موادتمام ریجنٹس FUJIFILM واکو پیور کیمیکل کارپوریشن (اوساکا، جاپان) سے خریدے گئے تھے، جب تک کہ دوسری صورت میں اشارہ نہ کیا جائے۔ SCO-792 کو Takeda Pharmaceutical Co. Ltd (Tokyo, Japan) نے ترکیب کیا تھا۔ پیوگلیٹازون ہائیڈروکلورائڈ ٹوکیو کیمیکل انڈسٹری (ٹوکیو، جاپان) سے خریدی گئی تھی۔ Irbesartan LKT لیبارٹریز، انکارپوریٹڈ (سینٹ پال، مینیسوٹا) سے خریدا گیا تھا۔
جانورنر WF چوہے اور اسی طرح کے بغیر ٹائپ شدہ Wistar lean (WL) چوہے RABICS Ltd (Kanagawa, Japan) سے حاصل کیے گئے تھے۔ تمام جانوروں کو ایک کمرے میں رکھا گیا تھا جس میں درجہ حرارت (23 سینٹی گریڈ)، نمی (55 فیصد) اور لائٹنگ (لائٹس 7:00 AM اور 7:{5}} PM کے درمیان تھیں، مفت رسائی کے ساتھ معیاری لیبارٹری چاؤ ڈائیٹ (CE-2; CLEA Japan, Inc., Tokyo, Japan) اور نلکے کے پانی تک۔ موجودہ مطالعات میں جانوروں کی دیکھ بھال کے طریقہ کار اور جانوروں کے تجرباتی پروٹوکولز کو ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی (شونان ہیلتھ انوویشن پارک) نے منظور کیا تھا، جسے امریکن ایسوسی ایشن فار ایکریڈیٹیشن آف لیبارٹری اینیمل کیئر نے تسلیم کیا ہے۔
CISTANCHE کڈنی/رینل فنکشن کو بہتر کرے گا۔
ڈبلیو ایف چوہوں میں دو ہفتوں کا بار بار خوراک کا مطالعہنر WF چوہوں، 31 ہفتوں کی عمر، جس کا بنیادی وزن جسمانی وزن 693.5 ± 22.5 g اور گلائکیٹڈ ہیموگلوبن کی سطح 7.4 ± 0.4 فیصد ہے، کو بے ترتیب طور پر پانچ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا (گاڑی، 6، 20 اور 60 mg/kg SCO-792، اور 1 mg/kg pioglitazone hydrochloride؛ n=7)، پیشاب کے ابتدائی البومین سے کریٹینائن تناسب (UACR)، گلائیکیٹڈ ہیموگلوبن، پلازما گلوکوز، پلازما انسولین اور جسم کا وزن۔ WL چوہوں کو بطور کنٹرول استعمال کیا گیا تھا (n=5)۔ چوہوں کو زبانی طور پر یا تو گاڑی (0.5 فیصد [w/v] میتھیل سیلولوز)، SCO-792، یا پیوگلیٹازون ہائیڈروکلورائڈ روزانہ ایک بار 15 دنوں تک دی جاتی تھی۔ علاج کے پہلے دن کو دن 0 کے طور پر نامزد کیا گیا تھا۔ ہر 1 سے 4 دن میں جسمانی وزن اور کھانے کی مقدار کی نگرانی کی جاتی تھی، اور 7 ویں دن پاخانے کو جمع کیا جاتا تھا۔ خون کے نمونے بے ترتیب ہونے سے پہلے اور 14 دن کو خون کے تغیرات کا اندازہ لگانے کے لیے جمع کیے گئے تھے۔ پیشاب کے نمونے بے ترتیب ہونے سے پہلے اور 3، 7 اور 13 دنوں میں پیشاب کے متغیرات کی پیمائش کے لیے جمع کیے گئے تھے۔ دن 15 پر،گردہٹشوز کو بے ہوشی والے چوہوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور استعمال ہونے تک −80C پر محفوظ کیا گیا تھا۔
گلوومیرولر فلٹریشن کی شرح کی پیمائشمرد WF چوہوں، 30 ہفتوں کی عمر کے، کو ان کی ابتدائی گلوومیرولر فلٹریشن ریٹ (GFR)، UACR، گلائیکیٹڈ ہیموگلوبن اور جسمانی وزن کی بنیاد پر دو گروپس (n=7) میں بے ترتیب بنایا گیا اور پھر زبانی طور پر دیا گیا۔ گاڑی (0.5 فیصد میتھیل سیلولوز) یا 60 ملی گرام/کلوگرام SCO-792 4 دنوں کے لیے۔ ڈبلیو ایل چوہوں کو بطور کنٹرول استعمال کیا گیا تھا (n=5)۔ جی ایف آر کی پیمائش فلوروسین آئسوتھیوسائنیٹ (FITC) -inulin (F3272؛ سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، مسوری) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ نمکین میں تحلیل شدہ FITC-inulin کو چوہے کی دم کی رگوں میں 36 mg/kg پر انجکشن لگایا گیا، اور FITC-inulin کی حراستی کی پیمائش کرنے کے لیے انجیکشن کے بعد 20، 40، 60 اور 80 منٹ پر خون جمع کیا گیا۔ GFR کا حساب FITC-inulin کلیئرنس سے کیا گیا تھا۔17
WF چوہوں میں AA ضمیمہ کی تشخیصنر WF چوہوں، 24 ہفتوں کی عمر، کو ان کے ابتدائی UACR، گلائیکیٹڈ ہیموگلوبن، پلازما گلوکوز اور جسمانی وزن کی بنیاد پر چار گروپوں (n=5) میں بے ترتیب بنایا گیا تھا۔ چوہوں کو یا تو پاؤڈر CE-2 غذا ملی یا خوراک بشمول AAs میں 51.8 فیصد اضافہ (CE-2 کے اسی تناسب سے) 18 L-AAs (aspartic acid, threonine, serine, glutamic) کے بعد تیزاب، گلائسین، ایلانائن، ویلائن، آئسولیوسین، لیوسین، ٹائروسین، فینی لالینین، لائسین، ہسٹائڈائن، ارجینائن، پرولین، سیسٹین، میتھیونین اور ٹرپٹوفن)۔ یا تو گاڑی (0.5 فیصد میتھائل سیلولوز) یا 60 ملی گرام/کلوگرام SCO- 792 11 دنوں تک روزانہ ایک بار چوہوں کو زبانی طور پر دی گئی۔ پلازما AA کی سطحوں میں تبدیلیوں کا جائزہ لینے کے لیے، خون کے نمونے SCO-792 کی انتظامیہ سے پہلے اور دن 9 کو 3، 8 اور 13 گھنٹے بعد جمع کیے گئے۔ UACR کی پیمائش کے لیے پیشاب کے نمونے 11 دن کو جمع کیے گئے۔
گلومیرولر آٹوفجی مارکر کی پیمائشنر WF چوہوں، 29 ہفتوں کی عمر، کو ان کے UACR، گلائکیٹڈ ہیموگلوبن لیول، پلازما گلوکوز لیول اور جسمانی وزن (n=7) کی بنیاد پر دو گروپوں میں بے ترتیب بنایا گیا تھا اور پھر انہیں زبانی طور پر چلایا گیا گاڑی (0)۔ 5 فیصد میتھیل سیلولوز) یا 60 ملی گرام/کلوگرام SCO-792۔ 3 گھنٹے کے بعد،گردہبے ہوشی والے چوہوں سے ٹشوز کو الگ تھلگ کیا گیا، اور پھر گلوومیرولی کو چھلنی کے طریقے سے الگ تھلگ کیا گیا۔ گلوومیرولی کا پتہ مغربی بلوٹنگ کے ذریعہ کیا گیا تھا۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے انفیکشن کو بہتر بنائے گا۔
WF چوہوں میں irbesartan کے ساتھ SCO-792 کا چار ہفتوں کا مجموعہ علاجنر ڈبلیو ایف چوہوں، 32 ہفتوں کی عمر، جس کا بنیادی وزن جسمانی وزن 675.7 ± 31.2 گرام اور گلائکیٹڈ ہیموگلوبن 7۔ 9}}۔ {29}}۔ ان کا UACR، گلائکیٹڈ ہیموگلوبن، پلازما گلوکوز اور جسمانی وزن۔ ڈبلیو ایل چوہوں کو عام کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا (n=5)۔ چوہوں کو CE-2 پاؤڈر ڈائیٹ تک مفت رسائی حاصل تھی جس میں ہر ایک مرکب (w/w: 0.02 اور 0.05 فیصد SCO-792) یا صرف CE-2 پاؤڈر ڈائیٹ شامل تھی۔ یا تو گاڑی (0.5 فیصد میتھیل سیلولوز) یا ایربیسارٹن (15 ملی گرام/کلوگرام) روزانہ ایک بار زبانی طور پر دی جاتی تھی۔ خون کے متغیرات کا تعین کرنے کے لیے 28 دن خون کے نمونے جمع کیے گئے۔ پیشاب کے نمونے بے ترتیب ہونے سے پہلے اور 7 اور 30 دنوں میں پیشاب کے متغیرات کا تعین کرنے کے لیے جمع کیے گئے تھے۔گردہٹشوز کو 33 دن کو بے ہوشی والے چوہوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور استعمال ہونے تک −80C پر محفوظ کیا گیا تھا۔
شماریاتی تجزیہاعداد و شمار کی اہمیت کا تجزیہ سب سے پہلے بارٹلیٹ کے متغیرات کی یکسانیت کے ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اس کے بعد ولیمز کا ٹیسٹ (P > {{0}}۔{6}}5) اور شرلی ولیمز ٹیسٹ (P سے کم یا اس کے برابر 0۔ کنٹرول بمقابلہ متعدد موازنہ کے لیے 0 کے برابر۔ متبادل طور پر، تغیرات کی یکسانیت کے لیے F ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی اہمیت کا تجزیہ کیا گیا، اس کے بعد طالب علم کا ٹی-ٹیسٹ (P > 0.2) یا ایک Aspin-Welch ٹیسٹ (P 0.2 سے کم یا اس کے برابر)۔ ولیمز اور شرلی ولیم کے ٹیسٹ 2.5 فیصد (0.025) کی ایک دم اہمیت کی سطح کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔ دوسرے ٹیسٹ 1 فیصد (0.01) اور 5 فیصد (0.05) کی دو دم اہمیت کی سطح کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے۔ اس بات کا جائزہ لینے کے لیے کہ آیا SCO-792 اور irbesartan کے ساتھ امتزاج کے علاج میں اہم اضافی یا synergistic اثرات تھے، دو طرفہ ANOVA انجام دیا گیا، جس نے SCO-792 اور irbesartan کے بنیادی اثرات اور تعامل کا اثر فراہم کیا۔ تمام ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔ فیکل پروٹین کی مقدار کو درست کرنے کے طریقے، خون اور پیشاب کے متغیرات کی پیمائش، جین کے اظہار کا تجزیہ، گلوومیرولس کو الگ کرنا، مغربی دھبے کا انعقاد، اور پیمائشگردوںکولیجن مواد کو ضمیمہ S1 میں بیان کیا گیا ہے۔
نتائج
SCO-792 نے WF چوہوں میں میٹابولک متغیر کو بہتر بنایاEnteropeptidase inhibition کی اینٹی DKD صلاحیت کا جائزہ لینے کے لیے، SCO-792 کو زبانی طور پر WF چوہوں کو 2 ہفتوں تک روزانہ ایک بار دیا گیا۔ WF چوہوں کو Wistar Kyoto چوہوں اور Zucker fatty rats19 کی کراس بریڈنگ کے ذریعے پیدا کیا گیا تھا اور یہ DKD ماڈل کے طور پر استعمال کے لیے مثالی ہیں کیونکہ ان کے نمائندہ میٹابولک فینوٹائپس (ہائپرگلیسیمیا، شدید موٹاپے کے ساتھ انسولین کے خلاف مزاحمت، 12 ہفتے کی عمر سے پروگریسو پروٹینوریا)۔ فیکل پروٹین کی سطح، جو آنتوں میں انٹروپیپٹائڈیس کی روک تھام کے بعد کم پروٹین کے عمل انہضام کا فارماکوڈینامک مارکر ہے، SCO-792-علاج شدہ چوہوں (شکل 1A) میں خوراک پر منحصر اضافہ کیا گیا تھا۔ مطالعہ کے دوران خوراک کی مقدار میں کمی دیکھی گئی اور SCO-792 (شکل 1B) کی طرف سے مجموعی خوراک کی مقدار میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ مستقل طور پر، SCO-792-علاج شدہ چوہوں (شکل 1C) میں جسمانی وزن کم تھا۔ ذیابیطس کے متغیرات جیسے پلازما گلوکوز، گلائکیٹیڈ ہیموگلوبن، پلازما انسولین اور پلازما گلوکاگن کی سطح 2-SCO کی ہفتہ وار خوراک-792 (شکل 1D–G) کے بعد کم ہوئی تھی۔ SCO-792 (شکل 1H,I) کے ذریعہ پلازما لپڈ کی سطح میں بھی کمی واقع ہوئی۔
SCO-792 نے WF چوہوں میں گردوں کے متغیرات کو بہتر کیا۔ذیابیطس کے متغیرات میں بہتری کے علاوہ، SCO-792 نے UACR کو فوری طور پر کم کر دیا اور یہ اثر بار بار خوراک کے دوران برقرار رکھا گیا (شکل 2A)۔ اس کے برعکس، پلازما گلوکوز کی سطح میں زبردست کمی کے باوجود، یو اے سی آر پیوگلیٹازون کے زیر انتظام چوہوں میں کوئی تبدیلی نہیں کی گئی، جو ایک پیروکسوم پرولیفیریٹر ایکٹیویٹڈ ریسیپٹر ایگونسٹ ہے۔
SCO-792 کے مساوی (اعداد و شمار 1D، 2A)۔ مطالعہ کے اختتام پر،گردوںایس سی او کے زیر انتظام چوہوں میں Col1a1، ایک فائبروسس مارکر، 20 اور Ccl2، ایک سوزش کا نشان، 21 کی mRNA کی سطح میں کمی واقع ہوئی (شکل 2B)۔ پیشابگردہچوٹ کا مالیکیول-1 (KIM-1)، جو ایک بائیو مارکر ہےگردہSCO-792-علاج شدہ چوہوں (شکل 2C) میں نلی نما چوٹ، 22 کو بھی کم کیا گیا تھا۔ FITC-inulin کا استعمال کرتے ہوئے GFR کی پیمائش سے WL چوہوں کے مقابلے WF چوہوں میں گلوومیرولر ہائپر فلٹریشن حالت کا انکشاف ہوا۔ تاہم، SCO کی 4-دن کی انتظامیہ-792 کے بعد، WF چوہوں میں گلومیرولر اوورلوڈ مکمل طور پر معمول پر آ گیا تھا (شکل 2D)۔
WF چوہوں میں SCO-792 کی طرف سے خوراک الٹ UACR میں کمی کا AA ضمیمہایس سی او-792 کے علاج کے بعد فیکل پروٹین کی سطح میں مشاہدہ شدہ اضافہ نے اس بات کی تصدیق کی کہ انٹروپیپٹائڈیس روکنا پروٹین کے عمل انہضام کو روکتا ہے (شکل 1A)۔ اس طرح، SCO-792 نے گٹ لیمن میں پروٹین سے AAs کی نسل کو کم کیا۔ SCO-792 کے renoprotective اثرات میں AA کے انٹیک کے کردار کی چھان بین کرنے کے لیے، گاڑی یا SCO-792 کے ساتھ ڈوز کیے گئے چوہوں کو ایک عام چاؤ یا AA سے اضافی چاؤ تک مفت رسائی کے ساتھ رکھا گیا تھا۔ جیسا کہ توقع کی جاتی ہے، عام چاؤ سے کھلائے جانے والے چوہوں میں، SCO- 792 نے پلازما کی کل AA کی سطح کو کم کیا (شکل 3A,C)۔ تاہم، غذا میں AA کی تکمیل نے انٹروپیپٹیڈیس سے متاثر تبدیلی (شکل 3B، C) کی نفی کی۔ اگرچہ برانچڈ چین امینو ایسڈز (BCAAs) جیسے ویلائن، لیوسین اور آئسولیوسین کے پلازما لیول میں خاص طور پر SCO-792 کے ذریعہ عام چاؤ سے کھلائے جانے والے چوہوں میں کمی واقع ہوئی تھی، ایک بار پھر، ان تبدیلیوں کو AA سپلیمنٹیشن (شکل 3D–F) کے ذریعے نفی کیا گیا۔ )۔ پلازما AA کی سطحوں میں مشاہدہ شدہ تبدیلیوں کے ساتھ مطابقت رکھتے ہوئے، SCO-792-کی حوصلہ افزائی UACR کی کمی کو AA سے اضافی چاؤ فیڈ چوہوں (شکل 3G) میں بڑی حد تک کم کیا گیا تھا۔
SCO-792 نے WF چوہوں کے گلومیرولس میں آٹوفجی سگنلنگ کو چالو کیاامینو ایسڈ انٹرا سیلولر پروٹین ہومیوسٹاسس کے کلیدی ریگولیٹر کے طور پر کام کرتے ہیں، اس طرح انابولک (پروٹین کی ترکیب) اور کیٹابولک (آٹوفیجی) کے عمل کے درمیان توازن کو تبدیل کرتے ہیں۔ غیر دبانے والے کناز کا عمومی کنٹرول 2۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا SCO-792 گلومیرولس میں آٹوفجی راستے کو متاثر کرتا ہے، WF چوہوں کے گلومیرولس میں LC3A/BI اور LC3A/B-II پروٹین کا اظہار تھا۔
مغربی بلوٹنگ سے ماپا جاتا ہے۔ LC3A/B ایک آٹوفاگوسم مارکر ہے، جبکہ LC3A/BI آٹوفجی کے دوران C-ٹرمینل لپڈیشن کے ذریعے LC3A/B-II میں تبدیل ہو جاتا ہے۔ لہذا، LC3A/B-II سے LC3A/BI کے پروٹین ایکسپریشن کا تناسب آٹوفجی کے اشارے کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ LC3A/BI WF چوہوں کے گلومیرولس میں (شکل 4A,B)۔ اس کے برعکس، p62 کی پروٹین کی سطح، ایک متبادل آٹوفیجی مارکر جو آٹوفیجک سبسٹریٹس کو آٹوفیگوسوم تک پہنچاتا ہے اور آٹوفیجی کے ذریعے انحطاط پذیر ہوتا ہے، 25 کو SCO-792 (شکل 4A,C) نے کم کیا تھا۔ مزید برآں، SCO-792 نے S6 پروٹین کے فاسفوریلیشن کی سطح میں نمایاں کمی کی ہے۔ اس نے ایم ٹی او آر سگنلنگ کے غیر فعال ہونے کا اشارہ کیا (شکل 4A، D)۔ اس کے برعکس، WT1 کے اظہار کی سطح، ایک پوڈوسیٹ مارکر، اور -ایکٹین، مغربی بلوٹنگ کے لیے لوڈنگ کنٹرول، گروپوں کے درمیان کوئی تبدیلی نہیں کی گئی تھی (شکل 4A،E،F)۔
WF چوہوں میں irbesartan additively UACR میں کمی کے ساتھ SCO-792 کا مجموعہچونکہ RAS inhibitors بڑے پیمانے پر DKD والے مریضوں کے لیے معیاری علاج کے طور پر استعمال ہوتے ہیں، نوول اینٹی DKD ادویات کے لیے RAS inhibitors کے اضافی اثر کی ضرورت ہوتی ہے۔ ARB کے ساتھ SCO-792 کے مشترکہ اثر کا جائزہ لینے کے لیے، SCO-792 (0۔{6}}2 فیصد اور 0۔{21}}5 فیصد خوراک میں) اور irbesartan (15 mg/kg روزانہ ایک بار زبانی خوراک) اکیلے یا مجموعہ میں WF چوہوں کو 4 ہفتوں تک دیا گیا۔ بیماری کے متغیرات پر پائیدار انٹروپیپٹائڈیس روکنا کی افادیت کا جائزہ لینا دلچسپی کا باعث تھا۔ لہذا اس مطالعہ میں SCO-792 کی ڈائیٹ ایڈمکس ایڈمنسٹریشن کی گئی۔ ہر گروپ کے لیے حسابی SCO-792 خوراکیں (mg/kg/d) 0 کے لیے 6.81 تھیں۔{31}}2 فیصد SCO-792 گروپ، 0.05 فیصد SCO کے لیے 13.10 -792 گروپ، 0.02 فیصد SCO-792 کے علاوہ irbesartan گروپ کے لیے 6.59، اور 0.05 فیصد SCO-792 پلس irbesartan گروپ کے لیے 11.44۔ جبکہ اکیلے SCO-792 اور irbesartan نے UACR میں کمی کی، SCO-792 اور irbesartan کے امتزاج نے UACR میں مزید کمی کی۔ irbesartan (شکل 5A,B) کے ساتھ مل کر SCO- 792 کی انتظامیہ کے بعد UACR میں کمی پر ایک اہم اضافی اثر دیکھا گیا۔ اس کے برعکس میں،irbesartan نے SCO-792 (شکل 5C-F) کے ذریعہ حاصل کردہ اینٹی ذیابیطس یا موٹاپا مخالف اثر کو متاثر نہیں کیا۔ خاص طور پر، SCO-792 نے نمایاں طور پر کمی کی۔گردوںکولیجن مواد (شکل 5G)۔
بحثموجودہ مطالعہ میں، ہم نے DKD کے ایک preclinical چوہا ماڈل میں بیماری کی حالت پر ایک ناول انٹروپیپٹائڈیس انحیبیٹر، SCO-792 کے اثرات کا جائزہ لیا۔ WF چوہوں کو SCO-792 کی زبانی انتظامیہ نے صرف 3 دن کے علاج کے بعد البومینوریا کو فوری طور پر ختم کر دیا، اور یہ اثر دوا کی انتظامیہ کی پوری مدت میں برقرار رہا۔ مزید یہ کہ یہ اثر شاید گلوکوز کنٹرول سے آزاد تھا۔ مزید برآں، میں فبروسس، سوزش اور نلی نما چوٹ مارکر میں کمیگردہSCO-792-علاج شدہ چوہوں میں دیکھا گیا۔ ایس سی او-792 خوراک کی حوصلہ افزائی اضافیگردہحفاظتی اثرات، بشمول گلوومیرولر ہائپر فلٹریشن سے نجات اور گلومیرولس میں آٹوفجی کو چالو کرنا۔ SCO-792-کی حوصلہ افزائی سے UACR کی کمی کو بڑی حد تک خوراک کے AA ضمیمہ سے کم کیا گیا۔ آخر میں، SCO-792 اور irbesartan کو ملانا مؤثر طریقے سے UACR امینو ایسڈز کو کم کرنے سے ہائپر فلٹریشن کا ایک معروف محرک ہے۔ انسانوں میں، ایک ہی پروٹین سے بھرپور کھانا یا AA انفیوژن عارضی طور پر GFR کو بڑھاتا ہے۔ 27,28 ہائپر فلٹریشن کی حالت پروٹین سے بھرپورغذا میں ترقی پسند کمی کو تیز کرنے کے لئے سمجھا جاتا ہےگردوں کی تقریبCKD کے مریضوں میں۔ جبکہ SCO-792 کے علاج نے WF چوہوں میں پلازما AA کی سطح کو کم کیا اور UACR میں کمی کی، اس اثر کو خوراک میں AA کی تکمیل کے بعد مسترد کر دیا گیا۔ اس کے علاوہ، SCO-792 کے علاج نے WF چوہوں میں GFR کو معمول بنایا۔ ایک ساتھ لے کر، SCO-792-سرکولیٹنگ AAs میں کمی گلومیرولر ہائپر فلٹریشن کو کم کرنے اور WF چوہوں میں UACR کو کم کرنے میں کردار ادا کر سکتی ہے۔ مزید برآں، SCO-792 میں فائبروسس، سوزش اور نلی نما چوٹ کے نشانات میں بہتری آئی ہے۔گردہ.گلوومیرولر فلٹریٹ میں اضافی پروٹین آمادہ کر سکتا ہے۔گردوںقربت والے نلی نما خلیوں میں سوزش اور بیچوالا فبروسس۔ 4 البومینوریا کی تخفیف اس وجہ سے گلومیرولر اورگردوںSCO میں نلی نما خلیات-792-کی ترقی سے چوہوں کا علاج کیا۔گردوںخرابی
CISTANCHE گردے/ گردوں کے درد کو بہتر کرے گا۔
LC3AB-II سے LC3AB-I تناسب اور p62 پروٹین کی سطح میں ہونے والی تبدیلیوں نے SCO-792-کی گلوومیرولر فریکشن میں آٹوفجی ایکٹیویشن کو ظاہر کیا۔گردہڈبلیو ایف چوہوں میں ٹشوز۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ SCO-792 نے WF چوہوں میں پلازما BCAA کی سطح میں شدید کمی کی۔ BCAAs، خاص طور پر لیوسین، ایم ٹی او آر سگنلنگ کے ساتھ آٹوفجی پاتھ وے کے کلیدی ریگولیٹرز ہیں اور آٹوفاگوسومز کی تشکیل کو روکتے ہیں۔ 23,30 درحقیقت، ایس 6 پروٹین کی فاسفوریلیشن، جو ایم ٹی او آر کا ایک ڈاون اسٹریم سگنلنگ مالیکیول ہے، کو SCO{{{ کے ذریعے روکا گیا تھا۔ 4}}، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ پلازما بی سی اے اے کی سطح میں انٹرو پیپٹائڈیس روکنا ایم ٹی او آر پاتھ وے کے غیر فعال ہونے کے ذریعے گلوومرولر آٹوفجی ایکٹیویشن میں شامل ہوسکتا ہے۔ آٹوفیجی عام طور پر غذائی اجزاء کی کمی کا جواب ہے، لیکن یہ مختلف جسمانی عمل اور بیماری کی نشوونما میں بھی شامل ہے، بشمولگردے کی بیماریوں.31 گلوومیرولس میں، پوڈو سائیٹس کو اینڈوپلاسمک ریٹیکولم تناؤ سے بچانے اور پوڈو سائیٹ کے فنکشن کو برقرار رکھنے کے لیے آٹوفجی ضروری ہے، اور اس طرح، پوڈو سائیٹس میں آٹوفجی سرگرمی کی ایک اعلی سطحی سطح ہوتی ہے۔ گلومیرولر فلٹریشن مشینری میں آٹوفجی کا اہم کردار۔ 32,33 اس لیے، گلوومرولر آٹوفجی کو چالو کرنا AA سے متعلقہ میکانزم میں سے ایک ہو سکتا ہے جس کے ذریعے SCO-792 نے WF چوہوں میں البومینوریا کو بہتر کیا۔
دائمی ہائپرگلیسیمیا پولیول پاتھ وے کو چالو کرنے، اعلی درجے کی گلیکشن اینڈ پروڈکٹس کی تخلیق، آکسیڈیٹیو تناؤ، اور سوزش کے ذریعے ڈی کے ڈی کے راستے کی پیدائش میں ملوث ہونے کی اطلاع ہے۔ ڈبلیو ایف چوہوں میں۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ ہائپرگلیسیمیا کو بہتر بنانا اس ماڈل میں SCO-792 کے ذریعہ فوری UACR میں کمی کا بنیادی عنصر نہیں ہے۔ RAS کی ترقی کے لیے ایک اہم راستہ ہے۔گردے خراب، اور DKD کے مریضوں میں ARBs کے ساتھ اس کی روک تھام کا فائدہ مند اثر اچھی طرح سے قائم ہے۔ 5 ایک مشترکہ مطالعہ سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ UACR کم کرنے کے شروع ہونے کا وقت SCO-792 اور irbesartan کے درمیان مختلف ہے، اور یہ کہ یہ کام پاؤنڈ اضافی طور پر کام کرتے ہیں۔ WF چوہوں میں UACR کو بہتر بنانے کے لیے۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ ایس سی او-792 کے اینٹی البومینوریا اثر کا بنیادی طریقہ کار RAS سے آزاد ہے۔ WF چوہے نارمل ہوتے ہیں اور SCO-792 کا WF چوہوں میں بلڈ پریشر پر کوئی اثر نہیں ہوتا تھا۔ لہذا، SCO-792 کا مشاہدہ اثر بلڈ پریشر کنٹرول پر منحصر نہیں ہوسکتا ہے (شکل S1)۔ لہذا، SCO-792 کو مستقبل کی کسی بھی طبی ترتیب میں RAS inhibitors کے لیے ایک اضافی تھراپی کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ مزید برآں، بیماری کے متغیرات کے علاج میں Enteropeptidase کی مستقل روک تھام کو زیادہ مؤثر ثابت کرنے کی تجویز دی گئی ہے کیونکہ SCO-792 کی خوراک کی ایڈمکس انتظامیہ نے روزانہ زبانی خوراک کے مقابلے میں کم یومیہ خوراک پر زیادہ طاقتور علاج کی افادیت ظاہر کی ہے۔
جیسا کہ اوپر ذکر کیا گیا ہے، WF چوہوں میں SCO-792 کے ذریعے AAs میں پلازما BCAA کی سطح خاص طور پر کم ہوئی تھی۔ میٹابولک امراض اور BCAAs کے درمیان تعلقات بڑے پیمانے پر انسولین مزاحمت کے ساتھ جڑے ہوئے ہیں۔ 35 مزید برآں، پروٹین کا استعمال انسانوں میں عضلاتی انسولین کے خلاف مزاحمت پیدا کرتا ہے۔ ڈبلیو ایف چوہوں میں ذیابیطس فینوٹائپ۔ یہ ذیابیطس کے چوہوں میں پچھلے مطالعے کے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے جو اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ SCO-792 نے hyperinsulinaemic-euglycaemic clamp مطالعہ میں انسولین کی حساسیت (بنیادی طور پر پٹھوں میں) میں اضافہ کیا۔ } گلوکاگون اور AAs کے درمیان باہمی آراء کے چکر کے ذریعے پلازما گلوکاگون کی کمی میں شامل ہو سکتا ہے۔ SCO-792 کی خوراک کا مطالعہ۔ یہ انڈی میں AA پر منحصر میکانزم کی نشاندہی کرتا ہے جس میں انسولین کے خلاف مزاحمت میں بہتری اور پلازما گلوکاگن کی سطح میں کمی SCO-792 کے انسداد ذیابیطس اثر کے علاوہ جسمانی وزن میں کمی پر منحصر عمل میں شامل ہونے کا امکان ہے۔
موجودہ مطالعے کی بنیادی حد یہ ہے کہ DKD کے آخری مرحلے پر SCO-792 کے اثر کا جائزہ نہیں لیا گیا۔ ڈبلیو ایف چوہوں نے ایلیویٹڈ جی ایف آر کے ساتھ البومینوریا ظاہر کیا، ایک بیماری کی حالت جو ڈی کے ڈی کے نسبتاً ابتدائی مرحلے کی نمائندگی کرتی ہے۔ اس حد کو حل کرنے کے لیے، طویل مدتی کی تشخیص کے لیے GFR میں ترقی پسند کمی کو پیش کرنے والے دیگر CKD ماڈلز کی ضرورت ہوگی۔گردوںSCO-792 علاج کے بعد نتیجہ۔ حال ہی میں، گٹ-گردہمحور دلچسپی کے موضوعات میں سے ایک بن گیا ہے، اور گٹ مائکرو بائیوٹا اور اس کے میٹابولائٹس کی ایسوسی ایشنگردے کی بیماریوںانٹریوپیپٹائڈیس کے جسمانی کردار پر غور کرتے ہوئے، اس کی روک تھام گٹ مائکرو بائیوٹا کی ساخت کو تبدیل کر سکتی ہے۔ لہذا، مائیکرو بائیوٹا میں SCO-792-کی حوصلہ افزائی تبدیلیوں پر توجہ مرکوز کرنے والے اضافی تجزیوں کی بھی ضرورت ہے۔
آخر میں، یہ پہلا مطالعہ ہے جس میں یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ انٹروپیپٹائڈیس روکنے والا SCO-792 مؤثر طریقے سے بہتر ہوتا ہے۔گردہDKD کے چوہا ماڈل میں متغیرات۔ گٹ میں پروٹین کی خرابی کی روک تھام، جس کے بعد AA جذب میں کمی واقع ہوتی ہے، SCO-792 کے renoprotective اثرات کے لیے ایک اہم راستہ ہونے کا امکان ہے، جس سے گلوومیرولر ہائپر فلٹریشن کی ریلیف اور گلومیرولس میں آٹوفجی کو چالو کیا جاتا ہے۔ ایک ساتھ مل کر، نتائج بتاتے ہیں کہ SCO-792 میں DKD کے مریضوں کے لیے ایک نئے علاج کے اختیار کے طور پر صلاحیت موجود ہے۔