وٹرو میں ایسٹروجن ریسیپٹرز کے معاون کے طور پر Cistanche Deserticola سے Glycosides کی Estrogenic سرگرمی

تعارف

Cistanche deserticola(چینی زبان میں "رو کانگ رونگ")، ایک روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا جو پہلی بار ریکارڈ کی گئی۔ShenNongBenCaoJingہزاروں سالوں سے گردے کی کمی، نامردی، بوڑھے قبض اور خون کی کمی کے علاج کے لیے استعمال کیا جا رہا ہے۔[1] یہ بنیادی طور پر شمال مغربی چین کے صحرائی علاقوں جیسے گانسو اور سنکیانگ میں تقسیم کیا جاتا ہے۔.[2]فارماکولوجی کی جدید تحقیق نے ثابت کیا کہ C. deserticola وسیع پیمانے پر دواؤں کے افعال کو آگے بڑھا سکتا ہے، جیسے ہارمون ریگولیشن، امیونوموڈولیٹری، اینٹی آکسیڈیٹیو، نیورو پروٹیکٹو، اینٹی سوزش، اورایسٹروجینک سرگرمی.[3,4] Cistanches کے گلائکوسائیڈز(GCs) کو مختلف حیاتیاتی اثرات کے ساتھ اہم فعال اجزاء میں سے ایک سمجھا جاتا تھا۔

ایسٹروجن ریسیپٹرز‑ (ERs‑) اور ER ERs کی ذیلی قسمیں ہیں جو جسمانی افعال کو منظم کر سکتی ہیں۔[7] یہ پروٹین سیل نیوکلئس میں منسلک ڈی این اے ریگولیٹری ترتیب کے پابند ہو کر ہدف کے جین کی نقل کو منظم کر سکتے ہیں۔ دونوں ذیلی قسمیں قلبی اور مرکزی اعصابی نظاموں میں واضح طور پر ظاہر ہوتی ہیں۔ ER بنیادی طور پر پروسٹیٹ، بیضہ دانی اور مثانے میں موجود ہوتا ہے۔[10,11] مزید یہ کہ دو ذیلی قسموں کے لیے کچھ مشترکہ جسمانی کردار ہیں، جیسے رحم کی نشوونما اور کام اور قلبی نظام کا تحفظ۔ 12,13] ہمارے گروپ میں پچھلی تحقیق نے میٹابولومک تجزیہ کے طریقہ کار سے GCs کے ایسٹروجینک جیسا طریقہ کار کا انکشاف کیا تھا۔ ایک مسلسل مطالعہ میں، ہم نے ERs سے متعلق MCF-7 سیل لائنوں پر GCs کی ایسٹروجینک سرگرمی کے طریقہ کار کا تجزیہ کیا۔

بہتر بنانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSAایسٹروجینک سرگرمیPHGS75% ECH 30% ACT 12%

مواد اور طریقے

آلات

ECO-170P-230 انکیوبیٹر نیو برنسوک سائنٹیفک (چائنا) کمپنی لمیٹڈ، بائیو راڈ 680 مائکروپلیٹ ریڈر سے تھا اور الیکٹروفورسس اپریٹس بائیو راڈ لیبارٹریز انکارپوریشن سے تھا، CX21 مائکروسکوپ اولمپس کمپنی لمیٹڈ سے تھا۔ GIS‑2019 جیل امیجنگ سسٹم ٹینن سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ کا تھا، فلیٹ نیچے کی پلیٹ کارننگ انکارپوریشن کی تھی، EPICS‑XL فلو سائٹومیٹری بیک مین-کولٹر انکارپوریشن کی تھی، اور StepOnePlus ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن ( پی سی آر) سسٹم تھرمو فشر سائنٹیفک کا تھا۔

کیمیکل اور ری ایجنٹس

GCs کو ہماری لیبارٹری میں تیار کیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بتایا گیا طریقہ تھا، [14] اور الٹرا وائلٹ اسپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعہ GCs کی پاکیزگی 52٪ (جی سی کے تعین کے لیے ایکٹیوسائیڈ کو مارکر کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا) کا تعین کیا گیا تھا۔ Estradiol (E2) Yuanye Biotechnology Co., Ltd. (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ فیٹل بوائین سیرم (FBS) اور RPMI-1640 Gibco Co., Ltd. سے تھے، 96‑well فلیٹ نیچے والی پلیٹ کارننگ انکارپوریٹڈ کی تھی، اور dimethyl سلفوکسائیڈ (DMSO) اور 3‑[4,5‑dimethyl‑2‑thiazolyl ]‑2,5‑diphenyltetrazolium bromide (MTT) Sigma-Aldrich Corporation سے خریدا گیا تھا۔ TRIzol ریجنٹ، ریورس ٹرانسکرپشن (RT) کٹ، اور TB Green™ RT‑PCR کٹ TaKaRa Co., Ltd., Dalian, China سے خریدے گئے تھے۔ اینٹی-ER Rabbit pAb، anti-ER Rabbit pAb، اور ‑ایکٹین اینٹی باڈیز وانلی بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدے گئے تھے۔ دیگر تمام عام کیمیکل معیاری تجارتی سپلائرز سے خریدے گئے تھے۔

نمونے کی تیاری

Cistanches اسٹاک محلول کے glycosides کی تیاری

GC اقتباس کو DMSO میں تحلیل کیا گیا تاکہ 0.1051 g/ml کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک حل بنایا جا سکے اور اسے 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جا سکے۔ فینول ریڈ فری RPMI-1640 استعمال کرنے سے پہلے اسٹاک کے حل کو مختلف ارتکاز میں پتلا کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

ایسٹراڈیول اسٹاک حل کی تیاری

E2 اقتباس کو DMSO میں تحلیل کیا گیا تاکہ 0.27 mg/ml کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک حل بنایا جا سکے اور اسے 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جا سکے۔ فینول ریڈ فری RPMI-1640 استعمال کرنے سے پہلے اسٹاک کے حل کو مختلف ارتکاز میں پتلا کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

چارکول ڈیکسٹران ٹریٹڈ جنین بوائین سیرم کی تیاری

FBS کے ایک سو ملی لیٹر کو 250 ملی گرام ایکٹیویٹڈ چارکول پاؤڈر اور 25 ملی گرام ڈیکسٹران کے ساتھ ملایا گیا۔ 55 ڈگری پر 45 منٹ تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، مرکب کو 4 ڈگری، 1000 rpm پر 15 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ چارکول ڈیکسٹران ٹریٹڈ (سی ڈی ٹی) - ایف بی ایس حاصل کرنے کے لیے ملی پور ایکسپریس پی ای ایس جھلی کا استعمال کرتے ہوئے سپرنٹنٹ کو فلٹر کیا گیا اور اسے −20 ڈگری پر اسٹور کیا گیا۔

سیل کلچر

انسانی چھاتی کا کینسر MCF-7 سیل لائنیں امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC) سے حاصل کی گئیں۔ مزید برآں، خلیات کو RPMI-1640 میڈیم کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا جس میں 10% FBS اور 1% پینسلن-اسٹریپٹومائسن 37 ڈگری پر مرطوب 5% CO2 ماحول میں تھا۔ MTT پرکھ سے 4 دن پہلے فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں سیلز کو کلچر کیا گیا تھا جس میں 5% CDT-FBS ہوتا ہے تاکہ خلیوں میں موجود ایسٹروجن کو صاف کیا جا سکے۔

MCF-7 سیل لائنوں پر ایسٹراڈیول کے سیل پھیلاؤ کا تجزیہ

MCF‑7 خلیوں کے لیے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل کے پھیلاؤ کی پیمائش کی گئی تھی۔ }}.1، 1، 10، 100، اور 1000 nM۔ MCF-7 سیل لائنوں کو 4 دن تک فینول ریڈ فری RPMI-1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا۔ فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI-1640 میڈیم کو 96‑کنویں کی پلیٹوں میں 1.5 × 104 فی کنواں پر شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج E2 محلول کی مختلف تعداد میں 72 گھنٹے تک کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ جذب کی پیمائش 570 nm پر کی گئی تھی ، اور پھیلاؤ کی شرح (PR) کا حساب لگایا گیا تھا۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

MCF-7 سیل لائنوں پر Cistanches کے glycosides کے سیل کے پھیلاؤ کا تجزیہ

MCF-7 خلیوں کے لئے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل پھیلاؤ کی پیمائش کی گئی۔ GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کیا گیا تھا جس میں 0.1% DMSO 0 کی حتمی تعداد میں تھا۔{29}}175, 0.175, 1.75, 17.5, اور 175 µg /ml MCF‑7 سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 4 دنوں کے لیے 5% CDT‑FBS تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 1.5 × 104 فی کنواں کے حساب سے 96‑ ویل پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کو بالترتیب 24، 48، اور 72 گھنٹے کے لئے GCs حل کی مختلف حراستی کے ساتھ علاج کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ جاذب کی پیمائش مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ 570 nm پر کی گئی تھی ، اور PR کا حساب لگایا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔

MCF-7 سیل لائنوں پر fulvestrant کے ساتھ Cistanches کے glycosides کے سیل کے پھیلاؤ کا تجزیہ

MCF-7 خلیوں کے لئے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل پھیلاؤ کی پیمائش کی گئی۔ GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کر دیا گیا تھا جس میں 0.1% DMSO 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی تعداد میں تھا۔ MCF‑7 سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 4 دنوں کے لیے 5% CDT‑FBS تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 1.5 × 104 فی کنواں کے حساب سے 96‑ ویل پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج GCs محلول کی مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا اور 48 گھنٹے کے لیے fulvestrant (6.06 × 10−5 µg/ml) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ جاذب کی پیمائش مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ 570 nm پر کی گئی تھی ، اور PR کا حساب لگایا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔

سیل سائیکل پرکھ

GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کر دیا گیا تھا جس میں 0.1% DMSO 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی تعداد میں تھا۔ MCF‑7‑سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں 4 دنوں کے لیے 5% CDT‑FBS پر مشتمل کیا گیا تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 1 mL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 6 کنویں کی پلیٹوں میں 2.5 × 105 فی کنواں پر شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج GCs محلول کی مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا اور 48 گھنٹے کے لیے fulvestrant (6.06 × 10−5 µg/ml) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیات کو تین بار پی بی ایس کے ساتھ اکٹھا کیا گیا اور دھویا گیا، 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری، 1000 آر پی ایم پر سینٹرفیوج کیا گیا، اور راتوں رات −20 ڈگری پر 70٪ ایتھنول کے ساتھ طے کیا گیا۔ PBS سے دو بار دھونے کے بعد، خلیات کو PI محلول (50 mg/mL) سے داغ دیا گیا تھا جس میں 1 mg/mL RNase A اور 0.1% Triton X‑100 30 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر اندھیرے میں تھا۔ سیل سائیکل کا پتہ فلو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، اور پھیلاؤ انڈیکس (PI) کا حساب درج ذیل کیا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔

PI {{0}} (S + G2 M)/(G0 /G1  + S + G2 M) × 100%

آر این اے تنہائی اور اصل وقتی مقداری پولیمریز چین رد عمل کا تجزیہ

mRNA کی سطح کی پیمائش کرنے کے لیے، ایک RT- مقداری PCR (qPCR) پرکھ استعمال کیا گیا تھا۔ کل سیلولر آر این اے کو TRIzol ری ایجنٹ کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ qPCR کے لیے، RNA کو RT کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA کے 4 µg سے cDNA میں الٹا نقل کیا گیا تھا۔ RT‑PCR تجزیہ TB Green™ RT‑PCR کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ تمام پروٹوکول کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دیئے گئے تھے۔ ER کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑GGGAAGTATGGCTATGGAATCTG‑3' (آگے) اور 5'‑TGGCTGGACACATATAGTCGTT‑3' (ریورس) تھا۔ ER کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑AGTGCCGCTCTTGGAGAGCTG‑3' (آگے) اور 5'‑CCTGGGTCGCTGTGACCAGA‑3' (الٹا) تھا۔ ER اور ER کے لیے پی سی آر کے حالات 3 منٹ کے لیے 94 ڈگری تھے جس کے بعد بالترتیب 37 اور 40 سائیکل، 30 سیکنڈ کے لیے 94 ڈگری، 2 منٹ کے لیے 58 ڈگری، اور 2 منٹ کے لیے 72 ڈگری۔ GAPDH کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT‑3' (آگے) اور 5'‑GGCTGTTGTCATACTTCATGG‑3' (الٹا) تھا۔ GAPDH کے لیے پی سی آر کے حالات 3 منٹ کے لیے 94 ڈگری تھے، اس کے بعد 30 سیکنڈ کے لیے 94 ڈگری کے 30 چکر، 2 منٹ کے لیے 58 ڈگری، اور 2 منٹ کے لیے 72 ڈگری تھے۔ ہر بار RT-qPCR تجربہ دو بار سے زیادہ دہرایا گیا۔ اس کے لیے GAPDH کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا۔ کنٹرول خلیوں کے بارے میں ٹرانسفیکٹنٹس کے ER/ER کے متعلقہ جین اظہار کا حساب لگایا گیا: 2−(∆∆Ct)۔

مغربی دھبہ

ER اور ER پروٹین کے اظہار کا پتہ مغربی بلاٹ تجزیہ کے ذریعہ معمولی ترمیم کے ساتھ اطلاع شدہ طریقہ کے طور پر پایا گیا تھا۔ مختصراً، MCF-7 خلیات کو 6 کنویں پلیٹوں میں 2.5 × 105 سیل فی کنواں پر اگایا گیا اور بالترتیب 48 گھنٹے کے لیے 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی حراستی پر GCs کے ساتھ علاج کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، پورے سیل کے نچوڑ کو RIPA بفر کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا جس میں 1 mM PMSF تھا۔ پورے سیل کے نچوڑوں میں پروٹین کو 12٪ سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ الگ کیا گیا تھا اور پھر پولی وینیلائڈین ڈائی فلورائڈ جھلیوں میں منتقل کیا گیا تھا۔ جھلی کو TBST بفر میں 5% (w/v) سکم دودھ کے ساتھ مسدود کیا گیا تھا اور بدلے میں پرائمری اور سیکنڈری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پابند اینٹی باڈیز کا مشاہدہ کیا گیا۔

بہتر بنانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSAایسٹروجینک سرگرمیPHGS75% ECH 30% ACT 12%

شماریاتی تجزیہ

نتائج کو ذرائع اور معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا، اور SPSS 21{1}} سافٹ ویئر (IBM Co., Ltd. America) کے ساتھ طالب علم کے ٹی-ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی اہمیت کو انجام دیا گیا تھا۔ پی<0.05 was considered statistically significant. 

نتائج

E2 علاج کے 24 گھنٹے کے بعد، MCF-7 خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھایا گیا [شکل 1a]۔ E2 محلول کا 10nM ظاہر ہے (123.89٪) خلیوں کی نشوونما کو متحرک کر سکتا ہے۔ تاہم، E2 کی حراستی میں اضافے کے ساتھ، سیل کے پھیلاؤ کی صلاحیت کمزور ہو گئی۔ لہذا، 10nM اس تجربے میں E2 کی زیادہ سے زیادہ حراستی تھی۔ 1.75، 17.5، اور 175 µg/mg کی ارتکاز میں GCs گروپ ایک وقت اور خوراک پر منحصر انداز میں MCF-7 سیل لائنوں کے پھیلاؤ کو بڑھا سکتا ہے اور منفی گروپ [شکل 1b] کے ساتھ نمایاں فرق ظاہر کر سکتا ہے۔ منفی گروپ کے مقابلے میں، E2 گروپ نے واضح پھیلاؤ (120.06%) ظاہر کیا۔ CDT-FBS میڈیم میں مشترکہ دوائیوں کا گروپ (CMG) (E2 یا GCs کے ساتھ فلوسٹرینٹ) MCF-4 خلیوں کے ساتھ انکیوبیٹڈ تھے۔ 72 گھنٹے کے بعد

انکیوبیشن، سی ایم جی انفرادی دوائی گروپ (آئی ایم جی) (پی) کے مقابلے پی آر کے مائل کا باعث بن سکتی ہے۔< 0.01) [Figure 1c]. Flow cytometry analysis showed that GCs could slightly increase the PI value suggesting that GCs could advance G0/G1 phase cells to S and G2/M phase [Figure 2 and Table 1] and promote cell DNA synthesis. The result indicated that the mechanism of GCs on MCF‑7 was similar to that of E2. In CMG  (fulvestrant with GCs), the PI value of cell PI declined to that of IMG slightly (P < 0.05). RT‑PCR analysis indicated that the expressions of ERα and ERβ mRNA were increased compared with the control group  (P  <  0.01) in a dose‑dependent manner after being treated with different concentrations of GCs for 48 h [Figure 3a and b]. Western blot result indicating that after treatment with various concentrations of GCs for 48  h, contents of ERα and ERβ proteins in MCF‑7 increase with the GCs increased in a dosage‑dependent manner [Figure 3c‑e]. 

نتیجہ

اس تحقیق میں، MCF-7 کے پھیلاؤ اور سیل سائیکل پر GCs کے اثر کو بالترتیب MTT اور فلو cytometry کے طریقہ کار سے جانچا گیا۔GCs MCF-7 خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھا سکتے ہیں۔72 گھنٹے تک انکیوبیشن کے بعد 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حراستی پر۔ تاہم، جب CCs اور fulvestrant کو ایک ساتھ استعمال کیا جاتا ہے تو اضافہ سست ہوجاتا ہے۔ GCs MCF‑7 سیلز کی PI قدر میں اضافہ کر سکتے ہیں، G1 فیز کے سیل کو کم کر سکتے ہیں، اور S اور G2 فیز کے سیلز کو بڑھا سکتے ہیں۔

Fulvestrant ایک ER-مخصوص مخالف ہے، جو رسیپٹر ڈائمرائزیشن اور توانائی پر منحصر نیوکلیئر ٹرانسپورٹ کو خراب کرکے ER کے جوہری لوکلائزیشن کو روکتا ہے۔[17] اس تحقیق میں، ایک نتیجے نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ fulvestrant MCF-7 خلیوں پر GCs کے پھیلاؤ کو کمزور کر سکتا ہے، اور یہ سیل سائیکل کی تبدیلی کو متاثر کر سکتا ہے۔ لہذا، اس مطالعہ نے GCs کی ایسٹروجینک سرگرمی کی نشاندہی کی، اور یہ بھی، ER ہے۔

GCs کا ہدف RT-PCR اور ویسٹرن بلاٹ تجربے میں، MCF-7 خلیوں میں ER اور ER کے mRNA اور پروٹین کے اظہار میں GC کی حراستی میں اضافہ کے ساتھ اضافہ ہوا۔ لہذا،جی سی ایس ایسٹروجینک سرگرمی میں کردار ادا کر سکتے ہیں۔ER اور ER کے upregulated mRNA اور پروٹین کے مطابق۔

بہتر بنانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSAایسٹروجینک سرگرمیPHGS75% ECH 30% ACT 12%