کاکو-2 سیل مونولیئر ماڈل کے اس پار Cistanche Deserticola سے Phenylethanoid Glycoside سے بھرپور نچوڑ کی آنتوں کی نقل و حمل کا اندازہ

تعارف

Caco-2 سیل لائن، جو انسانی بڑی آنت کے اڈینو کارسینوماس سے اخذ کی گئی تھی، انٹروسائٹ جیسی خصوصیات کو ظاہر کرتی ہے۔ عام حالات میں، Caco-2 خلیے بے ساختہ بالغ خلیات سے الگ ہو جاتے ہیں اور برقرار monolayers بناتے ہیں [1]۔ ملحقہ خلیے monolayer کے apical side میں بننے والے سخت جنکشن کے ذریعے چپک جاتے ہیں، جو اپکلا پرت [2] کے پار غیر فعال اور فعال طور پر منتقل ہونے والی دوائیوں میں امتیاز کر سکتے ہیں۔ نارمل انٹروسائٹس سے مورفولوجیکل اور بائیو کیمیکل مماثلت کی وجہ سے، Caco-2 سیل monolayers آنتوں میں جذب ہونے کی صلاحیت اور منشیات کی نقل و حمل کی خصوصیات کے مطالعہ کے لیے ایک اچھی طرح سے قبول شدہ ان وٹرو ماڈل کے طور پر کام کرتے ہیں [3, 4]۔

کیمیکلز کے برعکس، پودوں کے نچوڑ (PE) وہ مرکب ہیں جن کی حیاتیاتی سرگرمی اور فعال اجزاء اکثر اچھی طرح سے پہچانے نہیں جاتے ہیں [5]۔ مزید یہ کہ، PE کی آنتوں کی نقل و حمل کی خصوصیات، اس کے اجزاء کی خصوصیات کے برعکس، طبی استعمال سے گہرا تعلق رکھتی ہیں۔ Caco-2 سیل monolayer میں ٹیسٹ کے نمونے کے لیے بہاؤ کی پیمائش میں عام طور پر کیمیائی طریقے شامل ہوتے ہیں، جیسے HPLC، LC/MS، وغیرہ۔ اگرچہ یہ طریقے طاقتور ٹولز ہیں، لیکن یہ پیچیدہ، وقت طلب، مہنگے اور کبھی کبھار ہوتے ہیں۔ جدید آلات کی ضرورت ہے. زیادہ اہم بات یہ ہے کہ نہ تو کوئی واحد اور نہ ہی کوئی اقلیتی جزو مجموعی طور پر PE کی عکاسی کر سکتا ہے۔ اس طرح، PE کی نقل و حمل کی خصوصیات کی شناخت اور جائزہ لینے کے لیے اجزاء کے تعین سے آزاد ایک نیا نقطہ نظر قائم کرنے کی ضرورت ہے۔

Cistanche deserticola YC Ma (CD)، ایک ہولوپراسٹک پلانٹ، ایک عام روایتی چینی دوا ہے جو بنیادی طور پر گردوں کی کمی، جسم کی کمزوری، اور قبض کے علاج کے لیے استعمال ہوتی ہے، اور یہ استعمال سرکاری طور پر چینی فارماکوپیا [6] میں ریکارڈ کیے گئے ہیں۔ Phenylethanoid glycosides (PhGs) سمیتechinacoside (EC)، acteoside (AC) اور isoacteoside(IS)، وغیرہ، پولی فینولک مرکبات کی ایک کلاس ہیں [7]۔ وہ بڑے میں سے ایک سمجھے جاتے ہیں۔Cistanche پرجاتیوں کے حیاتیاتی اجزاء[8]۔ فارماسولوجیکل مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ پی ایچ جی کی حیاتیاتی سرگرمی متنوع ہے اور اس میں اینٹی آکسیڈیٹیو [9]، اینٹی تھکاوٹ [10]، ہیپاٹوپروٹیکٹو [11]، امیونوموڈولیٹری [12]، سوزش مخالف [7، 13]، اور نیورو پروٹیکٹو اثرات شامل ہیں۔ 14]۔ تاہم، پی ایچ جی کی آنتوں کی نقل و حمل کی خصوصیات کی تحقیقات نہیں کی گئی ہیں۔ اس مطالعہ میں، ہم نے دریافت کیاCD سے PhG سے بھرپور ایکسٹریکٹ (PRE) کی آنتوں کی پارگمیتاایک مربوط نظام کے طور پر اور مختلف Caco-2 خلیوں میں تین بڑے PhGs (AC، IS، اور EC) کی پارگمیتا۔ ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ PRE کو بنیادی طور پر بغیر کسی اخراج کے ارتکاز کے میلان کے نیچے غیر جذب شدہ غیر فعال بازی کے ذریعے منتقل کیا جاتا ہے، جو CD میں PhGs کے کلینیکل اطلاق کے لیے فارماکوکینیٹک بنیاد فراہم کرتا ہے۔

نیچرل CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE ہربس PHGS75% ECH 30% ACT 12%

مواد اور طریقے

مواد

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98%) کو مسٹ بائیو ٹیکنالوجی کمپنی (چینگڈو، چین) سے خریدا گیا تھا۔ Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM)، fetal bovine serum (FBS)، اور غیر ضروری امینو ایسڈ (NEAA) Gibco BRL (Grand Island, NY, USA) نے تیار کیے تھے۔ 6- اچھی طرح سے ٹرانس ویل ٹی ایم پلیٹس (انسرٹ میمبرین گروتھ ایریا 4.67 سینٹی میٹر 2 ) کارننگ (کوسٹار) انکارپوریشن (ٹیوکسبری، ایم اے، یو ایس اے) سے حاصل کی گئیں۔ چوہے کی دم کا کولیجن سگما الڈرچ (سینٹ لوئس، ایم او، امریکہ) سے حاصل کیا گیا تھا۔ HPLC تجزیہ کے لیے تمام ری ایجنٹس اور کیمیکل تجزیاتی گریڈ کے تھے۔

CD سے PRE کی تیاری

ہوا سے خشک سی ڈی مواد کو پاؤڈر کیا گیا تھا اور 70٪ ایتھنول کے ساتھ ٹکرانے کے ذریعے نکالا گیا تھا۔ پی ایچ جی سے بھرپور حصہ تیار کیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا [10] اور پانی سے سیر شدہ این-بٹیل الکحل کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ نکالنے والی شراب کو کم دباؤ میں مرتکز اور خشک کیا گیا تھا۔ میکروپورس رال-یووی سپیکٹرو فوٹومیٹری [15] نے 78.4% کے پی ایچ جی مواد کی پیمائش کی۔ حتمی نمونہ خشک وزن کے لحاظ سے خام مال کی 1.75% پیداوار کی نمائندگی کرتا ہے۔ حاصل کردہ نمونے کو مزید استعمال تک −20 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔

HPLC کے ذریعے AC، IS، اور EC کا تعین

LC سلوشن سافٹ ویئر سے لیس ایک Shimadzu HPLC سسٹم PRE میں AC، IS، اور EC کے مواد کو جانچنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ایک ریورس فیز انٹرسل C18 کالم (4.6 ملی میٹر × 250 ملی میٹر، 5 μm) کمرے کے درجہ حرارت پر استعمال اور برقرار رکھا گیا تھا۔ موبائل فیز ایسٹونائٹرائل اور پانی تھے جن میں 0.1% فاسفورک ایسڈ (v/v) 1.0 ملی لیٹر فی منٹ کے بہاؤ کی شرح سے گریڈینٹ ایلیوشن (ٹیبل 1) کے ساتھ تھا۔ UV سپیکٹرو فوٹومیٹر کا پتہ لگانے والا 334 nm پر سیٹ کیا گیا تھا۔ AC اور IS کے بہاؤ کا درست تعین کرنے کے لیے، ہم نے ایک ناول HPLC-fluorescence detection (HPLC-FLD) طریقہ تیار کیا۔ ساختی تجزیہ اور فلوروسینس ویو لینتھ اسکیننگ کے بعد (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)، ہم نے AC (مثال کے طور پر 338 nm، Em: 448 nm) اور IS (مثال کے طور پر: 320 nm، Em: 434 nm) کے لیے فلوروسینس کا پتہ لگانے کے بہترین حالات حاصل کیے۔

HPLC تجزیاتی طریقہ کی توثیق درج ذیل کارکردگی کی خصوصیات کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی: استحکام، لکیری، حساسیت، درستگی (انٹرا اور انٹر ڈے تغیر)، اور درستگی۔ ٹرانسپورٹ بفر میں تجزیہ کاروں کو 24 گھنٹے کے لیے اندھیرے میں 25 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا، اور ان کے استحکام کی پیمائش کی گئی تھی۔ تجزیہ کار وٹامن سی (0.4%) کی موجودگی میں انتہائی مستحکم تھے کیونکہ چوٹی والے علاقوں میں متعلقہ معیاری انحراف (RSD) کی قدریں <3.5% تھیں۔ لکیری رجعت کی مساوات، ارتباط کے گتانک، لکیری کی حد، LOD، اور LOQ برائے AC، IS، اور EC کو جدول 2 میں دکھایا گیا ہے۔ LODs (18–30 nM) اور LOQs (60–100 nM) اقدار واضح کرتی ہیں کہ HPLC-FLD اور HPLC-UV طریقے انتہائی حساس ہیں۔ RSD قدریں جو طریقہ کی درستگی کا اظہار کرتی ہیں وہ تمام <2% انٹرا اور انٹر ڈے تغیرات کے لیے تھیں، جو اچھی درستگی کی نشاندہی کرتی ہیں۔ بحالی کی تشخیص کے لیے، AC، IS، اور EC کو ٹرانسپورٹ بفر میں شامل کیا گیا تاکہ تین (اعلی، درمیانے اور کم) ارتکاز کی سطح حاصل کی جا سکے۔ تجزیہ کاروں کے طریقہ کار کی بازیافت کی قدروں کا خلاصہ جدول 3 میں دیا گیا ہے۔ اوسط وصولی 90.0% سے 96.4% تک ہے، جو اچھی درستگی کی نشاندہی کرتی ہے۔ آخر میں، HPLC کے قائم کردہ طریقے نقل و حمل کے بفر میں AC، IS، اور EC کی مقدار کے تعین کے لیے لکیری، حساسیت، درستگی اور درستگی کے حوالے سے تسلی بخش ہیں۔

نیچرل سیسٹینچ ٹیوبولوسا ایکسٹریکٹ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

بائیو آسے سسٹم کے ذریعے PRE کا تعین

بایواسے (کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت) FRAP (فیرک کم کرنے/اینٹی آکسیڈینٹ پاور) پرکھ پر مبنی تھی جسے ہم نے پہلے بیان کیا تھا [16] اور لکیریٹی اور درستگی (انٹرا اور انٹر ڈے تغیر) کے لحاظ سے توثیق کی گئی تھی۔ بائیوسے طریقہ کی لکیری کا تعین انشانکن منحنی خطوط کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ لکیریٹی کی ارتکاز کی حد 0 تھی۔{16}}625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996)۔ قائم شدہ بایواسی طریقہ کی درستگی کا تعین PRE (10.0 ug/ml) کے تجزیہ کے لیے انٹرا اور انٹر ڈے تغیر کے لحاظ سے کیا گیا تھا۔ طریقہ کار کی انٹرا ڈے ریپیٹبلٹی کا تعین ایک ہی دن لگاتار پانچ تعینات کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ انٹر ڈے ریپیٹ ایبلٹی کی پیمائش تین مختلف دنوں پر لگاتار پانچ تعین کی بنیاد پر کی گئی۔ طریقہ کی درستگی کے لیے RSD کی قدریں 1.014% اور 4.72% تھی جو کہ انٹرا اور انٹر ڈے تغیرات کے لیے بالترتیب اچھی درستگی کی نشاندہی کرتی ہے۔ اس طرح، نقل و حمل کے بفر میں PRE کی مقدار کو درست کرنے کے لیے خطی، درستگی، اور درستگی کے حوالے سے قائم شدہ بایواسے طریقہ تسلی بخش ہے۔

سیل کلچر

Caco{{0}} خلیات کو 37 ڈگری اور 95% رشتہ دار نمی پر ماحول میں کلچر کیا گیا جس میں 5% CO2 اور ایک میڈیم جس میں DMEM، 10% FBS، 1% NEAA، 1% L-glutamine، penicillin شامل تھا۔ (100 U/ml)، اور streptomycin (100 ug/ml)۔ خلیوں کی نشوونما اور تفریق کے دوران میڈیم کو ہر دوسرے دن تبدیل کیا جاتا تھا۔ خلیوں کو 75-cm2 پلاسٹک کے فلاسکس میں اگایا گیا تھا اور ہر 3-5 دن بعد 0.05% EDTA-trypsin کے ساتھ کاٹا جاتا تھا۔ نقل و حمل کے تجربات کے لیے، خلیات کو کولیجن کے ساتھ لیپت ٹرانس ویل انسرٹس پر 1×105 سیل/cm2 کی کثافت پر سیڈ کیا گیا تھا۔ بیج بونے کے تقریباً 21 دن بعد، monolayers نقل و حمل کے تجربات کے لیے استعمال کیے گئے۔ ان کی سالمیت کا تعین ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA) سے لیس EVOM کے ساتھ monolayers کے پار ٹرانس اپیٹیلیل الیکٹریکل ریزسٹنس (TEER) کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا۔ Caco-2 سیل monolayer کی TEER قدریں 500 O∙cm2 سے تجاوز کرنے کی ضرورت ہے۔

نقل و حمل کے تجربات

monolayer کو ٹرانسپورٹ بفر سے دھویا گیا تھا (P-buffer جس میں 10 mM HEPES، 1 mM سوڈیم پائروویٹ، 10 mM گلوکوز، 3 mM CaCl2، اور 145 mM NaCl، pH 7.4) اور پھر 20 کے لیے پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 37 ڈگری پر ٹرانسپورٹ بفر کو ہٹانے کے بعد، ٹیسٹ کے نمونوں پر مشتمل تازہ ٹرانسپورٹ بفر کو اے پی میں اپیکل (اے پی) چیمبر (1.5 ملی لیٹر) میں بیسولیٹرل (بی ایل) ڈائریکشنل اسٹڈیز یا بی ایل سے اے پی ڈائریکشنل اسٹڈیز میں بی ایل چیمبر (2.5 ملی لیٹر) میں شامل کیا گیا۔ HPLC کا استعمال کرتے ہوئے AC، IS، اور EC asses کے لیے، ایک aliquot (300 ul) ہر ریسیور چیمبر سے مختلف وقت کے وقفوں (30، 60، 90، اور 120 منٹ) پر ہٹا دیا گیا تھا۔ ریسیور چیمبر کو ہر سیمپلنگ کے بعد تازہ پری ہیٹڈ (37 ڈگری) ٹرانسپورٹ بفر کے اسی حجم سے بھر دیا گیا تھا۔ جمع کیے گئے نمونے مزید استعمال کے لیے −20 ڈگری پر محفوظ کیے گئے تھے۔ بائیوسے کا استعمال کرتے ہوئے پری عزم کے لیے، صرف 120 منٹ پر نمونے لیے گئے تھے۔ PRE، AC، IS، اور EC کی عدم استحکام کی وجہ سے، 0.4% (w/v) وٹامن سی تھا

HPLC کے ذریعے AC، IS، اور EC کے مشمولات کا تعین کرنے کے لیے نمونوں کو مستحکم کرنے کے لیے شامل کیا گیا، اور PRE bioassay کے نمونوں کو نمونے لینے کے فوراً بعد جانچ لیا گیا۔ ہر نمونے کی ظاہری پارگمیتا گتانک (Papp یا 'Papp) کی قدر کا حساب لگایا گیا تھا۔

ڈیٹا کا تجزیہ

AC، IS، اور EC کی AP BL یا BLAP سمتوں میں Papp اقدار کا حساب درج ذیل مساوات کی بنیاد پر کیا گیا تھا: Papp {{0} (4Q/4t)/(AC0), جہاں Papp ظاہری پارگمیتا گتانک (cm/s) ہے جو HPLC کے ذریعے متعین کیا جاتا ہے۔ (4Q/4t) وصول کنندہ کی طرف ٹیسٹ کمپاؤنڈ (AC, IS یا EC) کی ظاہری شکل کی شرح ہے (μmol/s)؛ A داخل کرنے کا سطحی رقبہ ہے (cm2 )؛ C0 ڈونر سائیڈ (μmol/ml) پر ابتدائی ٹیسٹ کمپاؤنڈ ارتکاز ہے۔ خاص طور پر، ماس یونٹ "ug" کو "μmol" کے بجائے استعمال کیا گیا تھا جب 'Papp ویلیوز کا حساب لگایا گیا تھا۔ اعداد و شمار کو ذرائع ± SD کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔

نتائج

CD سے PRE میں AC، IS، اور EC کی تشکیل

کیونکہ AC، IS، اور EC کو اہم بایو ایکٹیو سمجھا جاتا ہے۔Cistanche پرجاتیوں کے PhGs[8]، ہم نے HPLC-UV کے ذریعے PRE میں ان کے مواد کا تجزیہ کیا۔ نمائندہ کرومیٹوگرام تصویر 1 میں دکھایا گیا ہے۔ ان اجزاء کی شناخت 334 nm کی طول موج پر مستند معیارات کے ساتھ برقرار رکھنے کے اوقات اور UV سپیکٹرم کا موازنہ کرنے پر مبنی تھی۔ PRE میں AC، IS، اور EC کے مواد بالترتیب 26.60%، 1.84%، اور 32.83% تھے۔ اس طرح، یہ تین مرکبات PRE کا 61.27% بنتے ہیں۔ مزید برآں، مندرجہ بالا نتائج بتاتے ہیں کہ PRE میں PhG کا مواد 78.4% ہے۔ لہذا، PRE میں AC، IS، اور EC کا تقریباً 80% PhGs ہے۔

گردے کے فنکشن کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

PRE، AC، IS، اور EC کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت

CD سے PhGs کی اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی کے مطالعے کی اطلاع دی گئی ہے [9]، اور AC، IS، اور EC PRE میں تقریباً 80% PhGs کا حصہ ہیں۔ اس طرح، PRE، AC، IS، اور EC کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیتوں کا جائزہ لیا گیا اور FRAP اقدار (× 10–6 mmol) کا استعمال کرتے ہوئے اظہار کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 2 میں دکھایا گیا ہے، جب FRAP کی قیمت 8 × 10–6 mmol تھی، PRE، AC، IS، اور EC کی حتمی تعداد 6.20 ug/ml، 3.14 ug/ml، 22.92 ug/ml، اور 4.89 ug تھی۔ /ml، بالترتیب، یہ بتاتا ہے کہ ان چار نمونوں کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت درج ذیل ہے: AC > EC > PRE > IS۔ PRE کی بایو ایکٹیویٹی اس کے فعال اجزاء گروپس (AIG) سے منسوب ہے۔ تقریباً 60% PRE، AC اور EC نے PRE اور IS کے مقابلے زیادہ مضبوط اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی دکھائی۔ چونکہ IS (1.84%) PRE کا ایک بہت ہی چھوٹا حصہ بناتا ہے، اس لیے دیگر اجزاء، جیسے کمزور اینٹی آکسیڈیٹیو IS، PRE میں بھی واضح طور پر فعال ہیں۔ حیرت انگیز طور پر، کل اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی AC اور اس کے isomer IS کے درمیان تقریباً 7-گنا فرق رکھتی ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ نہ صرف فینولک ہائیڈروکسیل گروپس کی تعداد [9] بلکہ مالیکیول میں فینولک ہائیڈروکسیل گروپس کی پوزیشن بھی متاثر ہوتی ہے۔ اینٹی آکسیڈیٹیو اثر۔

Caco-2 monolayers کی توثیق

Caco-2 سیل monolayer سسٹم کی توثیق کرنے کے لیے، پروپرانولول (ایک اچھی طرح سے نقل و حمل کرنے والا مارکر) اور لوسیفر پیلا (ایک ناقص نقل و حمل مارکر) کی Papp قدریں AP سے BL تک Caco-2 monolayers میں تھیں۔ بالترتیب 1.51 × 10–5 cm/s اور 2.8 × 10–7 cm/s کے طور پر مقرر کیا گیا ہے، اور یہ قدریں پچھلی رپورٹس میں شائع ہونے والوں سے متفق ہیں [17، 18]۔ الکلائن فاسفیٹیس سرگرمی پرکھ نے بھی اس بات کی تصدیق کی کہ Caco-2 سیل monolayers چھوٹے آنتوں کے اپکلا [19] کے ساتھ معیار کے لحاظ سے موازنہ کر سکتے ہیں۔

AC، IS، اور EC کی پارگمیتا

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1۔< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2 [20]. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

PRE کی پارگمیتا

مندرجہ بالا نتائج بتاتے ہیں کہ PRE کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت کم از کم PRE سے AIG کے 61.27% کی وجہ سے ہے۔ اس طرح، ہم نے PRE کے TR کا اندازہ اس کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت کے ارتکاز اثر وکر کی بنیاد پر کیا اور PRE کی نقل و حمل کی خصوصیات کو ظاہر کرنے کے لیے 'Papp ویلیوز' کا حساب لگایا۔ AP!BL اور BL!AP کے لیے PRE کی Papp قدریں تھیں (2.16 ± 0.26) × 10–7 cm/s اور (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/ s، بالترتیب، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ یہ کمپاؤنڈ ناقص پارگمی تھا۔ مزید برآں، بہاؤ یا فعال نقل و حمل واضح نہیں تھا کیونکہ PRE کے لیے 'Papp BL to AP / 'Papp AP سے BL کا تناسب 1.45 تھا [20]۔ مزید برآں، PRE کا دو طرفہ TR تقریباً 300 اور 900 ug/ml (تصویر 5) کے درمیان لکیری طور پر بڑھ گیا۔ نتائج کی دشاتمک ترجیح کا فقدان بتاتا ہے کہ غیر فعال بازی PRE کا بنیادی نقل و حمل کا طریقہ کار ہے۔

بحث

انتہائی صاف شدہ دوائیوں کی مصنوعات کے مقابلے میں، PE عام طور پر ایسا مرکب ہوتا ہے جو وسیع پیمانے پر مختلف فزیو کیمیکل خصوصیات کے ساتھ سینکڑوں اجزاء پر مشتمل ہوتا ہے۔ اس لیے، PE اپنے پیچیدہ AIG [21] کی وجہ سے منظم، ملٹی ٹارگٹ، اور ملٹی چینل ہم آہنگی کا عمل کرتا ہے، جو PE کی نقل و حمل کی خصوصیات کے تجزیہ میں رکاوٹ ہے۔ PE کی نقل و حمل کی خصوصیات کو زیادہ سائنسی طور پر جانچنے کے لیے، کچھ محققین نے PE [22-24] میں ایک جزو کے بجائے متعدد اجزاء کی نشاندہی کی ہے۔ اس کے باوجود، حلقوں کی ایک محدود تعداد مجموعی طور پر PE کی عکاسی نہیں کر سکتی۔ تاہم، PE میں تمام اجزاء کا تعین کرنا ناممکن ہے۔ مزید یہ کہ، اگر PE میں متنوع اجزاء بالکل مختلف نقل و حمل کی خصوصیات کو ظاہر کرتے ہیں، تو PE کی مجموعی نقل و حمل کی خصوصیات کی شناخت مشکل ہو گی۔

1990 کی دہائی میں، antimicrobial ایجنٹوں [25] کے TR کا جائزہ لینے کے لیے بائیوسے سسٹم استعمال کیے گئے۔ 2005 تک، Eguchi اور ان کے ساتھیوں نے [26] مختلف Caco-2 خلیات سے BL میڈیا کا استعمال کرتے ہوئے گاجر کے عرق کی اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی کا جائزہ لیا تھا۔ یہ نقطہ نظر vivo کے حالات میں عکاسی کرنے کے لیے زیادہ مناسب ہے۔

پی ایچ جی کی سرگرمی پر ایک پچھلی رپورٹ کی بنیاد پر [9] اور ہمارے نتائج (تصویر 2)، پی آر ای میں اے آئی جی کے ٹی آر کو ریسیور چیمبر میں میڈیم کی کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت کا تعین کرکے جانچا جاسکتا ہے۔ نقل و حمل کے تجربات کے بعد، ہم نے پایا کہ PRE کا TR دونوں سمتوں میں یکساں تھا، اور یہ نقل و حمل غیر سیر شدہ اور ناقص جذب تھی ('Papp < ​​1.0 × 10–6 cm/s) [3]، اور اس نے بہاؤ کی نشاندہی نہیں کی، یہ تجویز کرتا ہے کہ ارتکاز کے میلان میں غیر فعال بازی PRE (تصویر 5) کا بنیادی نقل و حمل کا طریقہ کار ہے۔ مزید برآں، PRE کی نقل و حمل کی خصوصیات AC، IS، اور EC کے ساتھ مطابقت رکھتی ہیں، مؤثر اجزاء جو PRE میں اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی کو ظاہر کرتے ہیں (تصویر 4 اور جدول 4)۔ اس نتیجے کی توقع کی گئی تھی اور اشارہ کیا گیا تھا کہ موجودہ بایواسے سسٹم مختلف Caco-2 سیلز میں PRE میں AIG کی نقل و حمل کی خصوصیات کی جانچ کے لیے مناسب اور قابل اعتماد ہے۔

کینونیکل پیپ ویلیو کے برعکس، جو عام طور پر کسی ایک مرکب کی نقل و حمل کی عکاسی کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے، 'ارتکاز اثر وکر کی بنیاد پر TR سے حاصل کردہ Papp قدر نہ صرف ان اجزاء کی عکاسی کر سکتی ہے جو ایک برقرار ساخت کے ساتھ monolayers میں گھس جاتے ہیں بلکہ ہدف کی سرگرمی سے متعلق دیگر عوامل بھی شامل ہوتے ہیں، جیسے کہ اجزاء کی میٹابولائٹس، کیمیائی طور پر انحطاط شدہ مصنوعات، اور یہاں تک کہ محرک کے جواب میں Caco-2 خلیوں سے چھپنے والی کچھ سائٹوکائنز جو ہدف کی حیاتیاتی سرگرمی کو متاثر کر سکتی ہیں۔ اس طرح، اوپر ذکر کردہ ملٹی فیکٹر، صرف نقل و حمل کے برقرار اجزاء کے بجائے، 'Papp قدر کا تعین کرتا ہے۔ لہذا، 'Papp کینونیکل Papp قدر [26] سے زیادہ مضبوطی سے vivo کے حالات میں تعلق رکھتا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے PRE کی 'Papp ویلیو' کی بنیاد پر غیر فعال طور پر پھیلی ہوئی اور ناقص جذب شدہ نوعیت کو واضح کیا، اور اس نوعیت کا تعلق CD کی زیادہ خوراک اور طویل طبی علاج کی مدت سے ہو سکتا ہے [27]۔ بہر حال، یہ نتائج CD کے اطلاق میں معالجین کے لیے زیادہ منظم رہنمائی فراہم کریں گے جب صرف CD میں زیادہ تر AIG کی نقل و حمل کی خصوصیات، نہ صرف PhGs کی نشاندہی کی گئی ہے۔

نیچرل CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE ایکسٹریکٹ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

تاہم، منتخب شدہ بائیو ایکٹیویٹی آئٹم کو ریسیور چیمبر کے درمیانے درجے میں پتہ لگانے کے لیے کافی حد تک حساس ہونا چاہیے، جو PE کی نقل و حمل کی خصوصیات کا جائزہ لینے کے لیے بائیو آسے سسٹم کے قیام کے لیے ایک چیلنج پیش کرتا ہے۔ مزید برآں، بایو ایکٹیویٹی کا انحصار بھی زیادہ سے زیادہ اجزاء پر ہونا چاہیے۔ ہمارے مطالعے میں، کل اینٹی آکسیڈیٹیو صلاحیت پرکھ کئی دوسرے طریقوں (S1 تصویر) سے زیادہ مناسب تھی۔ لیکن اس کے باوجود، ہماری پرکھ صرف 120 منٹ پر PRE کے TR کا پتہ لگا سکتی ہے۔

اجتماعی طور پر، موجودہ مطالعہ نے مختلف Caco-2 خلیوں میں PRE کی آنتوں کی پارگمیتا کا جائزہ لینے کے لیے ایک نیا بایواسی نظام قائم کیا۔ حاصل کردہ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ بغیر کسی اخراج کے ارتکاز کے میلان کے نیچے ایک ناقص جذب شدہ غیر فعال بازی PRE (تصویر 5) کا بنیادی نقل و حمل کا طریقہ کار ہے، جو CD میں PhGs کے طبی اطلاق کے لیے فارماکوکینیٹک بنیاد فراہم کرتا ہے۔ TR کا اندازہ لگانے کے لیے ایک نوول بائیو ایسے سسٹم کا استعمال اور اس طرح 'پیپ ویلیوز' کا اندازہ لگانے کے لیےآنتوں کی نقل و حمل کی خاصیتPEs میں AIG کا ہونا ممکن ہے۔ مناسب بایو ایکٹیویٹی کے پیش نظر یہ نقطہ نظر دوسرے PE کے لیے بھی موزوں ہو سکتا ہے۔