تجربہ 4 کا اثر Cistanche Deserticola Phenylethanol Glycoside On Mouse Perimenopausal Syndrome ڈپریشن ماڈل مواد اور طریقے 1 تجرباتی مواد
Apr 17, 2024
1.1 تجرباتی جانور
SPF گریڈ کے چوہے، کنمنگ نسل، خاتون، 18~22 گرام، شیڈونگ لوکانگ فارماسیوٹیکل کمپنی لمیٹڈ کی طرف سے فراہم کردہ، چوہوں کے سرٹیفکیٹ نمبر کا یہ بیچ: 0016003؛ لیبارٹری سرٹیفکیٹ نمبر SYXK (Yu) 2010-001۔ 1.2 تجرباتی ادویات
Cistanche phenylethanol glycosideتجربہ 1 کے طریقہ کار کے مطابق تیار کیا گیا تھا، اور مواد 66.47 فیصد تک پہنچ گیا تھا۔ Gengnian'an کیپسول، اجزاء: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, peony bark, Poria cocos, Mother-of-perl, curculigo, Schisandra chinensis, magnetite, Polygonum Unflowerum, polygonum ملٹی فلوٹیرم . افعال اور اشارے:ین کی پرورش کریں اور یانگ کو زیر کریں۔, مشکلات کو دور کریںاوردماغ کو پرسکون کرو. رجونورتی گرم چمک اور پسینہ آنا، چکر آنا، ٹنائٹس، چڑچڑاپن اور بے خوابی کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ تفصیلات: 0.3 گرام فی کیپسول۔ استعمال اور خوراک: زبانی، ایک وقت میں 3 کیپسول، دن میں 3 بار۔ مینوفیکچرر: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. پروڈکشن بیچ نمبر: 121104. منظوری نمبر: نیشنل ڈرگ اپروول نمبر Z14021848۔
CISTANCHE کو کام کرنے میں کتنا وقت لگتا ہے؟
سویا isoflavones اور وٹامن E نرم کیپسول، اجزاء کی فہرست: سویا isoflavones پاؤڈر، وٹامن E، سورج مکھی کا تیل، جلیٹن، گلیسرین، پانی، tartrazine، ٹائٹینیم ڈائی آکسائیڈ۔ مشہور اجزاء اور مواد: ہر 100 گرام میں 55.2 ملی گرام سویا آئسوفلاوون (جینسٹین کے حساب سے شمار کیا جاتا ہے) اور 608.5 ملی گرام وٹامن ای ہوتا ہے۔ صحت کے افعال: ہڈیوں کی کثافت میں اضافہ۔ ہدایات اور خوراک: 1 کیپسول دن میں 2 بار نیم گرم پانی کے ساتھ لیں۔ نردجیکرن: 500mg × 100 کیپسول۔ ڈویلپر: ویہائی زیگوانگ بائیوٹیکنالوجی ڈیولپمنٹ کمپنی، لمیٹڈ پروڈکشن بیچ نمبر: 13070302۔ منظوری نمبر: گوشیجیانزی G20080032۔ 1.3 تجرباتی ریجنٹس
سوڈیم کاربوکسی میتھائل سیلولوز، تیانجن ہینگکسنگ کیمیکل ریجنٹ مینوفیکچرنگ کمپنی، لمیٹڈ، بیچ نمبر: 20120418; پینسلن سوڈیم برائے انجیکشن، نارتھ چائنا فارماسیوٹیکل کمپنی، لمیٹڈ، تفصیلات: 4 ملین یونٹس، پروڈکشن بیچ نمبر: c1206807؛ formaldehyde حل (تجزیاتی گریڈ)، Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd.، پروڈکشن بیچ نمبر: 20130902؛ 0.9% سوڈیم کلورائد انجکشن، Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.؛ تفصیلات: 250ml، پیداوار بیچ نمبر: 1301265303؛
کلورل ہائیڈریٹ، تیانجن گوانگ فو فائن کیمیکل ریسرچ انسٹی ٹیوٹ، بیچ نمبر 20120827؛ ماؤس E2 ELISA کا پتہ لگانے والی کٹ، R&D کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A؛ ماؤس T ELISA کا پتہ لگانے والی کٹ، R&D کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A؛ ماؤس ایل ایچ ایلیسا کا پتہ لگانے کی کٹ، آر اینڈ ڈی کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A؛ ماؤس FSH ELISA پتہ لگانے کی کٹ، R&D کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A؛
ماؤس DA ELISA کا پتہ لگانے والی کٹ، R&D کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A؛ ماؤس 5-HT ELISA ڈیٹیکشن کٹ، R&D کمپنی، بیچ نمبر: 20140101A۔ 1.4 تجرباتی آلات
الیکٹرانک اسکیل، شنگھائی منقیاؤ میڈیکل انسٹرومنٹ کمپنی، لمیٹڈ، ماڈل: JY601؛ الیکٹرانک تجزیاتی توازن، اوہاؤس (شنگھائی) کمپنی، ماڈل: AR1140/C؛ تیز رفتار ڈیسک ٹاپ سینٹری فیوج، شنگھائی اینٹینگ سائنٹفک انسٹرومنٹ فیکٹری، ماڈل: TGL-168 ; الیکٹرک تھرموسٹیٹک پانی کا غسل، شنگھائی ییہنگ سائنٹفک انسٹرومنٹ کمپنی، لمیٹڈ، ماڈل: HWS12؛ ماؤس خود مختار سرگرمی ٹیسٹر، Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.، ماڈل: ZZ-6; ماؤس ڈارک اجتناب میٹر، Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.، ماڈل: BA-200; ٹیل معطلی ٹیسٹر، Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.، ماڈل: TS-200; ہائی سپیڈ ریفریجریٹڈ سینٹری فیوج، HKUST Innovation Co., Ltd. کی Zhongjia برانچ، ماڈل: KDC-160HR; ایڈجسٹ ایبل پائپٹنگ انسٹرومنٹ، شنگھائی لیبو اینالیٹیکل انسٹرومنٹ کمپنی، لمیٹڈ؛
مائکروپلیٹ ریڈر، امریکی BIO-RAD کمپنی، ماڈل: 680؛
الیکٹرک مائکروسکوپ، جاپان اولمپس کمپنی، ماڈل: BX61۔
2 تجرباتی طریقے
2.1 ماڈلنگ اور منشیات کی انتظامیہ
90 خواتین کنمنگ چوہوں کا انتخاب کیا گیا جن کا جسمانی وزن 23-25g تھا، اور 10 کو تصادفی طور پر خالی گروپ کے طور پر منتخب کیا گیا اور ان کی شرم کی سرجری کی گئی، اور باقی چوہوں کو تخلیق کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ perimenopausal ماڈلز. وزن کرنے کے بعد، چوہوں کو 10% کلورل ہائیڈریٹ (0.03ml/10g) کے انٹراپیریٹونیئل انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی اور پیٹ کی پوزیشن کو ٹھیک کر دیا گیا۔ اس کے بعد، بالوں کو چوہے کے پچھلے حصے سے آخری پسلی کے نیچے، midaxillary لائن کے چوراہے پر اور ریڑھ کی ہڈی کے باہر سے تقریباً 1cm کے فاصلے پر کاٹا گیا، اور پھر جراثیم کشی کے بعد کاٹا گیا۔ جلد اور کمر کے پٹھے تقریباً 0۔{9}}سینٹی میٹر چوڑے ہیں۔ چیرا والے میدان میں ایک دودھیا سفید چمکدار چربی کا ماس دیکھا جا سکتا ہے، اور بیضہ دانی اس میں سرایت کر گئی ہے۔ چربی کے بڑے پیمانے کو آہستہ سے پکڑنے اور اسے چیرا سے باہر نکالنے کے لیے چھوٹے چمٹیوں کا استعمال کریں، چربی کے بڑے پیمانے کو الگ کریں، اور آپ کو پتلی، بے قاعدہ، پیلے سرخ بیضہ دانیوں کا ایک گروپ نظر آئے گا۔ کاٹتے وقت، سب سے پہلے بیضہ دانی کے نیچے فیلوپین ٹیوبیں (چربی سمیت) کو پتلی دھاگوں سے لگائیں، اور پھر بیضہ دانی کو ہٹا دیں۔ آپریشن کے بعد، بچہ دانی کے سینگوں کو دوبارہ پیٹ کی گہا میں ڈال دیا جاتا ہے، پٹھوں اور جلد کو سیون کیا جاتا ہے، اور دونوں بیضہ دانی کو اسی طرح نکال دیا جاتا ہے۔ آپریشن کے بعد، جانوروں کو احتیاط سے اٹھایا گیا اور دن میں ایک بار، مسلسل 3 دن تک انفیکشن سے بچنے کے لیے پینسلن 200،000 u/kg (0.1 ملی لیٹر ہر ایک) کو انجکشن لگایا گیا۔ آپریشن کے 5 دن بعد، ہر ماؤس پر اندام نہانی کی سمیر کی جانچ ایک ایک کرکے کی گئی، دن میں ایک بار لگاتار 5 دن تک یہ تعین کرنے کے لیے کہ آیا بیضہ دانی کو مکمل طور پر ہٹا دیا گیا ہے۔ سمیر میں ایسٹروس ردعمل ظاہر کرنے والے چوہوں کو ضائع کر دیا گیا، اور 60 مکمل طور پر کاسٹرڈ چوہوں کو تجرباتی مقاصد کے لیے تصادفی اور یکساں طور پر 6 گروپوں میں تقسیم کیا گیا، یعنی ماڈل گروپ، مینگنیانان گروپ، سویا آئسوفلاوون گروپ، بڑے، درمیانے، اورکم خوراک Cistanche phenylethanol glycoside گروپ. ہر گروپ کے جانوروں کو سرجری کے 10 ویں دن اسی طرح کی دوائیں دی گئیں۔ 6 دن کی انتظامیہ کے بعد، خالی گروپ میں چوہوں کو 5 فی پنجرے کے حساب سے، عام خوراک اور پانی کے ساتھ، بغیر کسی محرک کے اٹھایا گیا۔ 6 ماڈل گروپس کو 1 ماؤس فی پنجرے پر اٹھایا گیا تھا، اور ہر روز تصادفی طور پر مختلف محرکات دیے گئے تھے۔ تناؤ کے سات عوامل 18 دنوں کے اندر تصادفی طور پر لاگو کیے گئے: نم گندگی (1 گرام لیٹر/1 ملی لیٹر پانی)؛ برف کے پانی میں تیراکی (4 ڈگری، 5 منٹ)؛ گرمی کا دباؤ (45 ڈگری، 5 منٹ)؛ رات بھر روشنی (24 گھنٹے)؛ ٹیل کلیمپنگ (1 منٹ)؛ پانی کی کمی (24 گھنٹے)؛ روزہ (24h). ہر روز ایک محرک بے ترتیب طور پر دیا جاتا تھا، اور ہر محرک 18 دنوں تک مسلسل ظاہر نہیں ہو سکتا تھا۔
تیاری کا طریقہ: 0.5% CMC تیاری کا طریقہ: 4 گرام کاربوکسی میتھائل سیلولوز سوڈیم کا وزن کریں اور اسے کشید پانی میں ملا کر 800 ملی لیٹر بنائیں۔
Cistanche phenylethanol glycoside گروپ کی بڑی، درمیانی اور چھوٹی خوراکوں کی خوراکیں 200mg/kg، 10{{20}mg/kg اور بالترتیب 50mg/kg (انتظامی حجم 0.1ml/10g)۔ تیاری کا طریقہ: بالترتیب 2000mg، 1000mg، اور 500mg Cistanche phenylethanoid glycoside کا وزن کریں، انہیں تھوڑی مقدار میں 0.5% CMC کے ساتھ تحلیل کریں، پھر حجم کو 100ml پر ایڈجسٹ کریں، اچھی طرح مکس کریں، اور بس۔ Gengniangan کیپسول (675mg/kg، آست پانی میں ملا کر 67.5mg/ml، 0.1ml/10g، 15 گنا طبی خوراک کے برابر)؛ تیاری کا طریقہ: 9 Gengniangan کیپسول لیں، پہلے تھوڑی مقدار میں 0.5% CMC Dissolve استعمال کریں، پھر حجم کو 40ml پر ایڈجسٹ کریں، اور Gengnianan Capsule Suspension (675mg/kg) کی خوراک حاصل کرنے کے لیے اچھی طرح مکس کریں۔ سویا بین آئسوفلاوون وٹامن ای سافٹ کیپسول (250mg/kg، 25mg/ml، 0.1ml/10g، 15 گنا طبی خوراک کے برابر بنانے کے لیے ڈسٹل واٹر استعمال کریں)؛ تیاری کا طریقہ: 2 سویا بین اسوفلاوون وٹامن ای سافٹ کیپسول لیں، اسے پہلے استعمال کریں تھوڑی مقدار میں 0.5% CMC کو گھول لیں، پھر حجم کو 40ml پر ایڈجسٹ کریں، اور سویا آئسوفلاوون وٹامن ای سافٹ کیپسول سسپنشن (250mg/kg) کی خوراک حاصل کرنے کے لیے اچھی طرح مکس کریں۔ )۔ ذخیرہ کرنے کا طریقہ: فریج میں رکھیں، استعمال کے دوران گرم رکھیں۔
انتظامیہ کا طریقہ: ہر گروپ کے جانوروں کو سرجری کے 10 ویں دن اسی طرح کی دوائیں دی گئیں۔ Gengnian'an گروپ کو زبانی طور پر Gengnian'an کیپسول معطلی 675 mg·kg-1، سویا isoflavone گروپ کو زبانی طور پر 250 mg·kg-1 سویا isoflavone وٹامن E نرم کیپسول معطلی، اور بڑے، درمیانی اورCistanche کی چھوٹی خوراکیںphenylethanol. گلائکوسائیڈ گروپ کو زبانی طور پر Cistanche phenylethanol glycoside 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{{ کی بڑی، درمیانی اور چھوٹی خوراکیں دی گئیں۔ 5}}، 0.1ml/10g بالترتیب۔ خالی گروپ اور ماڈل گروپ کو مسلسل 30 دنوں تک دن میں ایک بار 0.5% CMC محلول کے ایک ہی حجم کے ساتھ گیویج کیا گیا۔
2.2 مشاہداتی اشیاء اور پتہ لگانے کے طریقے
زبردستی تیراکی: دائمی تناؤ کے محرک کے خاتمے کے بعد پہلے دن، 6 منٹ کے اندر ہر گروپ میں چوہوں کی حرکت پذیری کا وقت 2-6 منٹ تک ناپا گیا۔ (ہر گروپ میں چوہوں کو 2000mL کے بیکر میں رکھیں۔ پانی کا درجہ حرارت 25 ڈگری ہے۔ تیرتے رہنے کے لیے ضروری کم از کم حرکت کے علاوہ، جانوروں کے اعضاء حرکت کرنا بند کر دیتے ہیں اور اسے غیر متحرک کے طور پر ریکارڈ کیا جاتا ہے۔ 2 سے کل غیر متحرک ہونے کا وقت ریکارڈ کریں۔ 6 منٹ کے اندر 6 منٹ تک ) رضاکارانہ سرگرمی کا ٹیسٹ: دائمی تناؤ کے محرک کے خاتمے کے بعد دوسرے دن، 5 منٹ کے اندر ہر گروپ میں چوہوں کی بے ساختہ سرگرمیوں کی تعداد کی پیمائش کی گئی۔
اندھیرے سے بچنے کا طریقہ: دائمی تناؤ کے محرک کے خاتمے کے بعد تیسرے دن، ماؤس کی دم کو پیمائش کے خانے میں ڈالیں جس کا سامنا اندھیرے کے کمرے میں چھوٹے سوراخ کی طرف ہے، اور تربیت کا انعقاد کریں۔ 24 گھنٹے کے بعد، پہلی بار ڈارک روم میں داخل ہونے والے ماؤس کی تاخیر اور 5 منٹ کے اندر اندر ڈارک روم میں داخل ہونے میں لگنے والے وقت کی دوبارہ پیمائش کریں۔ برقی جھٹکوں کی تعداد۔
دم کی معطلی کا ٹیسٹ: دائمی تناؤ کے محرک کے خاتمے کے بعد 5 ویں دن، 6 منٹ کے اندر ہر گروپ میں چوہوں کی حرکت پذیری کا وقت 2-6 منٹ تک ناپا گیا۔
آخری خوراک کے 2 گھنٹے بعد (کھانے یا پانی کے بغیر 12 گھنٹے)، چوہوں کا وزن کیا گیا، آنکھوں کی گولیاں نکالی گئیں، خون جمع کیا گیا، سیرم کو الگ کیا گیا، اور سیرم میں E2، T، LH، اور FSH کے مواد تھے۔ ماپا اس کے بعد چوہوں کو سروائیکل vertebrae کی نقل مکانی سے مارا گیا، اور چوہوں کو جدا کر دیا گیا۔ ، تھائمس، تلی، اور بچہ دانی کے ٹشو کو ہٹا دیں، ان کے گیلے وزن کا وزن کریں اور اعضاء کے انڈیکس کا حساب لگائیں (آرگن انڈیکس=آرگن گیلے وزن mg/mouse weight g)، پھر دماغ کو ہٹا دیں، نصف کو کاٹ دیں، اور دماغ تیار کریں۔ ٹشو ہوموجنیٹ. اینزائم امیونواسے کا استعمال دماغی بافتوں کے ہوموجنیٹ میں مونوامین نیورو ٹرانسمیٹر 5-HT اور DA کے مواد کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ تھائمس، تلی، بچہ دانی، اور دماغ کے ٹشوز کو 10% فارملڈہائیڈ محلول میں طے کیا گیا تھا، پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا، سیکشن کیا گیا تھا اور HE کے ساتھ داغ دیا گیا تھا۔ ہر گروپ کی مورفولوجیکل تبدیلیوں کو ہلکے خوردبین کے تحت دیکھا گیا۔ 2.3 کٹ کے تعین کا طریقہ
سیرم کے نمونے حاصل کریں: ایسی ٹیسٹ ٹیوبیں استعمال کریں جو پائروجن اور اینڈوٹوکسین سے پاک ہوں۔ آپریشن کے دوران کسی بھی خلیے کی حوصلہ افزائی سے گریز کریں۔ خون کو جمع کرنے کے بعد، اسے 3000 rpm پر 10 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں تاکہ سیرم اور خون کے سرخ خلیات کو جلدی اور احتیاط سے الگ کیا جا سکے۔ ٹشو ہوموجنیٹ کے نمونے حاصل کریں: ٹشو میں مناسب مقدار میں فزیولوجیکل نمکین ڈالیں اور اسے میش کریں۔ 3000 rpm پر 10 منٹ تک سینٹری فیوج کریں اور سپرنٹنٹ لیں۔
ماؤس (Mouse) estradiol (E2) ELISA کٹ کا تعین کرنے کا طریقہ تجربہ 2 جیسا ہی ہے۔ معیاری مصنوعات (S0-55) کی ارتکاز یہ ہیں: 0, 4, 8, 16, 32 ، اور 64 pmol/L۔
ماؤس ٹیسٹوسٹیرون (T) ELISA کٹ کا تعین کرنے کا طریقہ Estradiol (E2) جیسا ہی ہے۔ معیاری مصنوعات کی ارتکاز (S0-55) ہیں: 0, 50, 100, 200, 400, 800pg/mL۔
ماؤس follicle-stimulating hormone (FSH) ELISA کٹ کا تعین کرنے کا طریقہ ایسٹراڈیول (E2) جیسا ہی ہے۔ معیاری مصنوعات کی ارتکاز (S0-55) ہیں: 0، 5، 10، 20، 40، اور 8{{30} }mIU/mL ماؤس (Mouse) luteinizing hormone (LH) ELISA کٹ کا تعین کرنے کا طریقہ estradiol (E2) جیسا ہی ہے۔ معیار کی ارتکاز (S{10}}) ہیں: 0, 0.5, 1, 2, 4, اور 8mIU/mL۔ ماؤس کا تعین کرنے کا طریقہ 5-ہائیڈرو آکسیٹریپٹامائن (5-HT) ELISA کٹ وہی ہے جو estradiol (E2) کا ہے۔ معیاری مصنوعات کی ارتکاز (S0-55) ہیں: 0, 15, 30, 60, 120, 240ng/ml۔ ماؤس (ماؤس) ڈوپامائن (DA) ELISA کا پتہ لگانے کا طریقہ ایسٹراڈیول (E2) جیسا ہی ہے۔ معیاری مصنوعات کی ارتکاز (S0-55) ہیں: 0، 7.5، 15، 30، 60، اور 120pg/ml۔
یہ ٹیبل 21 اور شکل 25 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ خالی گروپ کے مقابلے میں، جبری سوئمنگ اور ٹیل سسپنشن تجربات میں ماڈل گروپ میں چوہوں کی حرکت پذیری کے وقت میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).
2 پیرمینوپاسل ڈپریشن ماڈل چوہوں میں خود مختار سرگرمیوں پر اثرات
ہر تجرباتی گروپ میں چوہوں کی خود مختار سرگرمی ٹیسٹ کے نتائج ٹیبل 22 اور شکل 26 میں دکھائے گئے ہیں۔
یہ ٹیبل 23 اور اعداد و شمار 27 اور 28 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ خالی گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں چوہوں کی تاخیر کا دورانیہ نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا اور بجلی کے جھٹکوں کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہوا تھا۔<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).
4 پیری مینوپاسل ڈپریشن ماڈل چوہوں میں آرگن انڈیکس پر اثرات
یہ ٹیبل 24 اور شکل 29 سے دیکھا جا سکتا ہے کہ خالی گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ کے تھائمس انڈیکس، اسلی انڈیکس اور یوٹیرن انڈیکس میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Cistanche phenylethanol glycosideگروپ تھائمس انڈیکس اور چوہوں کے یوٹیرن انڈیکس میں نمایاں اضافہ کیا جا سکتا ہے (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).
