کاسمیٹکس کی صنعت میں پھولوں کے عرق ملٹی فنکشنل رنگوں کے طور پر حصہ 2

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

بہت سی قدرتی مصنوعات روایتی طبی نظاموں میں درد اور سوزش کی علامات سے نجات کے علاج کے لیے استعمال کی جاتی ہیں، [61] اس لیے لیپوکسیجنز اور پروٹینیز کی سرگرمی کی روک تھام پر تجزیہ کیے گئے عرقوں کے اثر کی تحقیق کی گئی۔ تجزیہ کردہ ارتکاز کی حد میں (100-500 ug/mL)، CTE پانی کے عرق نے پروٹینیز کو روکنے کی مضبوط ترین صلاحیت ظاہر کی (شکل 4) (500 ug/mL کے ارتکاز کے لیے 57 فیصد پر)۔ اس سرگرمی کا موازنہ معروف پروٹینیز انحیبیٹر ڈائکلوفیناک سے کیا گیا، جسے بطور کنٹرول استعمال کیا جاتا ہے (تحقیق شدہ سب سے زیادہ ارتکاز پر تقریباً 89 فیصد روکنا)۔ تاہم، اسی طرح کے نتائج GGE اور KTE نچوڑ کے لیے حاصل کیے گئے تھے (تقریباً 56 فیصد اور 53 فیصد، بالترتیب، سب سے زیادہ ارتکاز کے لیے)۔ PRE اور PGE نچوڑ کے لئے لوئر پروٹینیز روکنا دیکھا گیا۔ lipoxygenase کو روکنے کی صلاحیت کی پیمائش کرنے والے مزید ٹیسٹ میں، KTE اور CTE سے پانی کے نچوڑ سب سے زیادہ قدروں کو ظاہر کرتے ہیں (500 ug/mL کے ارتکاز کے لیے بالترتیب تقریباً 67 فیصد اور 64 فیصد روکنا)۔ Diclofenac کو کنٹرول کے طور پر بھی استعمال کیا گیا تھا۔ GGE، PGE، اور PRE اقتباسات بھی نمایاں طور پر اعلیٰ اقدار کو نمایاں کرتے ہیں (بالترتیب 60 فیصد، 57 فیصد، اور 54 فیصد)۔ یہ بھی نوٹ کیا گیا کہ LOX اور پروٹینیز انزائمز کو روکنے کی صلاحیت نچوڑ کے ارتکاز پر منحصر ہے (شکل 5)۔

پچھلے مطالعات نے اشارہ کیا کہ بہت سے پولی فینولک مرکبات نے بہت سے پودوں کے نچوڑ کی سوزش کی سرگرمیوں میں نمایاں طور پر حصہ ڈالا ہے[62]۔ مطالعات نے سوزش کے عمل میں ROS کی شمولیت کو ظاہر کیا ہے، اور phenolic مرکبات جیسے gallic اور quinic acid، lipoxygenase کی سرگرمی کو روک کر arachidonic ایسڈ میٹابولزم کو روک سکتے ہیں، یا وہ reactive free radicals کی صفائی کا کام کر سکتے ہیں، جو arachidonic ایسڈ کے دوران پیدا ہوتے ہیں۔ [63]۔ BenSaad et al کے ذریعہ حاصل کردہ نتائج۔ اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ P. granatum سے الگ تھلگ ellagic acid، gallic acid، اور punicalagin A&B نے lipopolysaccharide (LPS) میں نائٹرک آکسائیڈ (NO)، prostaglandin E2 (PGE2)، اور interleukin 6 (IL-6) کی پیداوار کو روکا ہے۔ RAW 267.4 میکروفیجز۔ آیا یہ مرکبات واحد ایجنٹوں کے طور پر کام کرتے ہیں یا ان کا ہم آہنگی کا اثر ابھی بھی ایک سوال ہے [64]۔ چونکہ بہت سے flavonoids سوزش کی خصوصیات دکھاتے ہیں، ان کے اندرونی اینٹی آکسیڈینٹ رویے کی وجہ سے، وہ مختلف سوزش کی خرابیوں میں ملوث ہیں.flavonoid نکالنے کا طریقہ پی ڈی ایف،خاص طور پر، quercetin سب سے زیادہ دلچسپ مالیکیول ہے کیونکہ یہ مخصوص حیاتیاتی راستوں میں مداخلت کرتا ہے۔ مزید یہ کہ، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ مختلف میکانزم کے ذریعے کئی ماڈلز میں شامل سوزش کے عمل کو کم کر سکتا ہے[65]۔ خاص طور پر، AMP- ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز اور ہسٹون/پروٹین ڈیسیٹیلیز (AMPK/SIRT1) پاتھ وے کے نتیجے میں سوزش کا انتظام زیادہ دلچسپ ہوتا ہے۔ اس طرح، AMPK ایکٹیویٹر میکروفیج کی سوزش کو کم کر سکتے ہیں۔ Quercetin اور دیگر flavonoids، AMPK اور SIRT1 کے متحرک ہونے کے طور پر، اس راستے میں مداخلت کرکے سوزش کو کم کر سکتے ہیں [66]۔ یہ بھی دکھایا گیا ہے کہ quercetin اور quercetin monoglucosides ایک اعلی LOX روکنے کی صلاحیت کا استعمال کرتے ہیں [67]Nair et al. نے quercetin moiety جیسے manghaslin Qu 3-[2G] rhamnosylrutinoside، Qu 3-O-dirhamnoside، اور rutin کے ساتھ flavonols کی موجودگی کا جائزہ لے کر KTE ایکسٹریکٹ کی سوزش مخالف خصوصیات کو ظاہر کیا ہے۔ ان مالیکیولز نے COX-2 سرگرمی کی مضبوط روک تھام اور جزوی ROS دبانے کا مظاہرہ کیا ہے۔ عام طور پر، سی ٹی ای میں موجود پولی فینولز نے RAW 264.7 میکروفیج سیلز میں LPS کی حوصلہ افزائی کی سوزش میں سوزش کی خصوصیات ظاہر کیں[68]۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

2.5.Cytotoxicity تشخیص

نئے کاسمیٹک خام مال بنانے میں، سب سے اہم خصوصیات میں سے ایک ان کے استعمال کی حفاظت ہے۔ کاسمیٹکس میں استعمال کے لیے وقف شدہ مادے غیر زہریلے ہونے چاہئیں، خاص طور پر جلد کے خلیات، جیسے کیراٹینوسائٹس اور فائبرو بلاسٹس کے سلسلے میں۔ HaCaT اور BJ خلیات پر تجزیہ شدہ عرقوں کے زہریلے پن کا تعین کرنے کے لیے دو قسم کے ٹیسٹ استعمال کیے گئے ہیں۔flavonoidsپہلا مطالعہ، غیر جانبدار ریڈ اپٹیک پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے، ہمیں تجزیہ کردہ نچوڑ کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں کی عملداری کا اندازہ لگانے کے قابل بناتا ہے۔ یہ رنگ ایک زندہ خلیے کے لائزوزوم میں داخل ہوتا ہے اور مردہ خلیوں کے سائٹوپلازم میں جاری ہوتا ہے۔ یہ مشاہدہ کیا گیا (شکل 6) کہ CTE نچوڑ میں HaCaT اور BJ دونوں خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی اعلیٰ صلاحیت ہے۔ کنٹرول کے مقابلے میں، اس اقتباس نے بالترتیب 250 μL/mL （HaCaT اور B】）اور 500 μL/mL（BJ خلیات） کے ارتکاز پر جانچ شدہ پیرامیٹر سے تقریباً 20 فیصد اور 40 فیصد زیادہ قدریں حاصل کیں۔ 100 اور 250 μL/mL کے ارتکاز میں GGE اقتباس اور 500 μL/mL کے ارتکاز میں KTE ایکسٹریکٹ BJ خلیات پر تھوڑا زہریلے اثر سے نمایاں تھے۔ دوسرے نچوڑ نے ان خلیوں کی عملداری پر مثبت اثر ڈالا۔ 100 μL/mL کے ارتکاز میں PRE اور PGE نچوڑ کنٹرول سے نمایاں طور پر مختلف نہیں تھے، اور انہوں نے BJ خلیات کے پھیلاؤ میں 250 اور 500 μL/ کے ارتکاز کے مقابلے میں تقریباً 10-15 فیصد اضافہ کیا۔ ایم ایل keratinocytes کے معاملے میں، سیل کی عملداری میں کوئی کمی نہیں دیکھی گئی۔ PGE، PRE، اور CTE نچوڑ کے لیے، بڑھتے ہوئے ارتکاز کے ساتھ پھیلاؤ میں اضافہ نوٹ کیا گیا، جب کہ KTE اور GGE نچوڑ کے بڑھتے ہوئے ارتکاز کے ساتھ خلیے کی عملداری میں کمی کا مظاہرہ کیا گیا۔

ٹیسٹ کیے گئے نچوڑوں کی سائٹوٹوکسیٹی کا تعین کرنے کے لیے دوسرا ٹیسٹ ریسازورین ٹیسٹ (الامر بلیو) تھا۔ یہ دکھایا گیا ہے (شکل 7) کہ خلیوں کی عملداری کا انحصار اس نچوڑ کے ارتکاز پر ہے جس کے ساتھ خلیات کو انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ فبرو بلوسٹس کے معاملے میں، PRE، PGE، اور CTE نچوڑ ان کی حراستی میں اضافے کے ساتھ زیادہ خلیے کے پھیلاؤ کا سبب بنتے ہیں۔ سب سے زیادہ تجزیہ شدہ ارتکاز （500 μL/mL） پر، کنٹرول کے مقابلے میں تقریباً 20 فیصد زیادہ پھیلاؤ دیکھا گیا۔hesperidin استعمال کرتا ہےکے ٹی ای اور جی جی ای کے نچوڑوں کے معاملے میں، نچوڑوں کے ارتکاز میں اضافے کے ساتھ سیل کی عملداری میں کمی دیکھی گئی۔ ان نچوڑوں نے BJ پر 250 اور 500 μL/mL کی تعداد میں تھوڑا سا زہریلا اثر دکھایا۔ keratinocytes کے معاملے میں، جلد کے خلیات پر تجزیہ شدہ عرقوں کا اسی طرح کا اثر دیکھا گیا، لیکن ان کے پھیلنے کی صلاحیت اتنی مضبوط نہیں تھی جتنی fibroblasts کے معاملے میں ہوتی ہے۔ keratinocyte کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی اعلی ترین صلاحیت CTE نچوڑ کے لئے تجزیہ کردہ ارتکاز کی پوری رینج میں دیکھی گئی۔ اسی طرح کی قدریں PRE اقتباس کے لیے 250 μL/mL کے ارتکاز میں اور PGE ایکسٹریکٹ کے لیے 500 μL/mL کے ارتکاز میں حاصل کی گئیں۔ KTE اقتباس نے GGE نچوڑ کے مقابلے میں HaCa خلیات پر نمایاں طور پر زیادہ زہریلا اثر دکھایا۔

تجزیہ شدہ عرقوں کا اس سے پہلے جلد کے خلیوں میں زہریلا ہونے کے لیے بڑے پیمانے پر تجربہ نہیں کیا گیا تھا۔ نچوڑ یا ان کے اہم فعال اجزاء، خاص طور پر کینسر کے خلیات کے بارے میں صرف چند سائٹوٹوکسائٹی اسٹڈیز ہیں۔ پچھلے مطالعات کے مصنفین نے اشارہ کیا کہ یہ نچوڑ عام طور پر جلد کے خلیوں پر زہریلے اثر نہیں ڈالتے ہیں، اور خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی ان کی صلاحیت اکثر پولیفینول، اینتھوسیاننز، اور فلیوونائڈز کے اعلی مواد سے منسوب ہوتی ہے [45,69-73 ] کچھ مصنفین نے یہ بھی اشارہ کیا کہ نچوڑ میں شامل انفرادی اجزاء جلد کے خلیوں پر زہریلا اثر ظاہر کر سکتے ہیں، جبکہ مجموعی طور پر نچوڑ ایسا نہیں کرتا ہے۔ علی حجازی وغیرہ۔ [69] سے پتہ چلتا ہے کہ Punica granatum سے نکالے گئے الکلائڈز نارمل اور کینسر سیل لائنوں کے لیے زہریلے ہوتے ہیں، جبکہ پورا نچوڑ کم زہریلا ہوتا ہے۔ ناصری وغیرہ کا مطالعہ۔ [70] اشارہ کرتا ہے کہ پونیکا گرینیٹم پھولوں کا عرق جلد کے خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی صلاحیت کی وجہ سے زخم بھرنے کے عمل کو تیز کرنے میں کارآمد ثابت ہو سکتا ہے۔ ہماری پچھلی تحقیق [45] میں، یہ دکھایا گیا تھا کہ تجزیہ شدہ پودوں سے حاصل کردہ واٹر ایتھانولک نچوڑ BJ خلیات کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی اعلیٰ صلاحیت کے حامل تھے، اور KTE اور GGE کے نچوڑ نے ان خلیوں پر کم زہریلا اثر دکھایا۔ .کھوئی ہوئی سلطنتHaCaT خلیوں پر پانی کے ایتھنول کے عرقوں کا اثر خالص پانی کے عرقوں کی طرح تھا، لیکن ایتھنول کے ساتھ حاصل کیے گئے عرقوں کی صورت میں، پانی کے نچوڑ کے مقابلے میں قدرے زیادہ سازگار پھیلاؤ کی خصوصیات دیکھی گئیں۔ تجزیہ شدہ عرقوں کی دونوں اقسام کی ساخت کے درمیان فرق ان کی زہریلے پن کا سبب بن سکتا ہے۔ جیسا کہ دکھایا گیا ہے، پانی کے عرق حیاتیاتی اجزاء سے اتنے زیادہ نہیں ہوتے ہیں جتنے واٹر ایتھنول کے عرقوں میں۔ سب سے بڑا فرق rutin اور isoquercitrin کے مواد میں دیکھا جاتا ہے۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

2.6.سورج کے تحفظ کے عنصر کا تعین

جلد پر UV تابکاری کے ناگوار اثرات نمائش کے فوراً بعد اور برسوں بعد بھی ظاہر ہو سکتے ہیں۔ شمسی تابکاری کا ایک مدافعتی اثر ہوتا ہے جو جلد کی عمر بڑھنے کے عمل کو تیز کرتا ہے جس سے اس سے وابستہ تمام نتائج ہوتے ہیں، بشمول سرطان پیدا ہونے میں اضافہ[74]۔ فی الحال مشاہدہ شدہ رجحانات ایسی مصنوعات تیار کرنے کی بڑھتی ہوئی ضرورت کی نشاندہی کرتے ہیں جن کی خصوصیت نہ صرف استعمال میں انتہائی اعلیٰ سطح کی حفاظت سے ہوتی ہے بلکہ اس لحاظ سے کثیر فعالیت بھی ہوتی ہے کہ مصنوعات جلد کی تابکاری سے بچاؤ کے تحفظ کو اب تک استعمال کیے جانے کے مقابلے میں وسیع تر عمل کے ساتھ نمایاں کریں گی۔ کچھ پودوں کے مادے اس پہلو میں ایک انمول کردار ادا کرتے ہیں، جو نہ صرف سورج سے تحفظ فراہم کرنے کے قابل ہیں بلکہ جلد پر شمسی تابکاری کے پہلے سے موجود منفی اثرات کو بھی بے اثر کر سکتے ہیں [75-77]۔ کی گئی تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ تجزیہ شدہ پلانٹ کے نچوڑ PRE، PGE، KTE، CTE، اور GGE اعلی SPF کوفیشینٹس کی خصوصیت رکھتے ہیں۔

گتانک (SPF) کا تجزیہ 10 اور 50 mg/mL کے ارتکاز میں مذکورہ پودوں سے حاصل کردہ پانی کے نچوڑ کے لیے کیا گیا تھا۔ ہر تحقیق شدہ پودے کے لیے نچوڑ کی زیادہ ارتکاز کے نتیجے میں SPF کی قدر نمایاں طور پر زیادہ ہوتی ہے۔مائکرونائزڈ پیوریفائیڈ فلاوونائڈ فریکشن 1000 ملی گرام استعمال کرتا ہے۔اقتباسات کے درمیان موازنہ سے پتہ چلتا ہے کہ KTE ایکسٹریکٹ کے لیے SPF کی سب سے زیادہ قدریں دیکھی گئی ہیں، جو دونوں تفتیشی ارتکاز کے لیے رکھتی ہیں۔ ایک اور دلچسپ مشاہدہ یہ ہے کہ تحقیقاتی ارتکاز میں سے کم تعداد میں بھی KTE اقتباس میں اب بھی اعلی SPF کی نمائش ہوئی ہے، جبکہ دیگر نچوڑ کی قدروں میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے۔ یہ اس وقت واضح ہوتا ہے جب ہم تجزیہ کرتے ہیں کہ KTE کا نتیجہ دوسرے نچوڑ سے کتنا زیادہ تھا۔ 50 mg/mL کے ارتکاز کے لیے، SPF 1.2 کے فیکٹر سے زیادہ تھا (PGE, CTE کے مقابلے میں) تقریباً 1.9 کے فیکٹر سے (جب PRE, GE کے مقابلے میں)۔ 10 mg/mL کے ارتکاز کے لیے یہی حساب 1.4 (PGE کے مقابلے میں) سے لے کر رینج 2-3 (CTE, GGE کے مقابلے) کے عوامل کو دے گا، یہاں تک کہ 10 جیسے عوامل تک پری کے ٹی ای ایکسٹریکٹ پر توجہ مرکوز کرتے وقت، کوئی یہ دیکھ سکتا ہے کہ فیکٹر 5 کے ذریعے عرق کی کم ہوتی ہوئی ارتکاز (50 ملی گرام/ملی گرام کی قدر سے 10 ملی لیٹر/ایم ایل کی قدر تک) کے نتیجے میں فیکٹر 3.4 کے ذریعے ایس پی ایف کی قدر میں کمی واقع ہوتی ہے۔ ، جس کا مطلب ہے کہ SPF ارتکاز سے آہستہ کم ہوتا ہے۔ مندرجہ بالا سے پتہ چلتا ہے کہ KTE ایکسٹریکٹ کم ارتکاز میں لاگو ہونے پر بھی کارآمد ہو سکتا ہے (شکل 8)۔

2.7.Transepidermal Water Loss(TEWL)اور جلد کی ہائیڈریشن کی پیمائش

پودوں کے خام مال کی حیاتیاتی اور فارماسولوجیکل سرگرمیوں کی وسیع رینج کی وجہ سے، نچوڑ میں شامل پودوں کے مادوں کا جلد کی حالت پر نمایاں اثر پڑتا ہے۔ خاص طور پر، ہم یہاں ہماری جلد کی حالت [78,79] پر ثانوی میٹابولائٹس کے اثر و رسوخ کے بارے میں بات کر رہے ہیں۔

تحقیق کے اگلے مرحلے میں، ہائیڈریشن اور TEWL کے تجزیے کیے گئے۔ جلد پر آزمائشی عرقوں کے اثر کا اندازہ لگایا گیا۔ پیمائش 60 اور 360 منٹ کے دو بار وقفوں پر 10mg/mL کے نچوڑ کی حراستی کے لئے کی گئی تھی۔ TEWL پیمائش کے لیے، PGE اقتباس کے لیے سب سے زیادہ فیصد کمی دکھائی گئی، جہاں 13.9 کی کنٹرول ویلیو گر کر 8.71 ہوگئی، جس کے نتیجے میں فیصد میں 37 فیصد کی کمی واقع ہوئی۔ اس نقطہ نظر سے KTE اقتباس کا تجزیہ کرنے کے قابل بھی ہے، کیونکہ یہ سب سے زیادہ SPF اقدار کو ظاہر کرنے والا تھا۔ KTE ایکسٹریکٹ کے لیے، TEWL کنٹرول ویلیو کم ہو کر 10.22 ہو گئی، جس کا مطلب ہے 26 فیصد کی کمی (شکل 9A)۔

تاہم، دوسرے آلے کی پیمائش کے معاملے میں، یہ دکھایا گیا کہ تجزیہ شدہ نچوڑ 60 کے بعد اور 360 منٹ کے بعد، کنٹرول کے نمونے کے سلسلے میں نمی میں اضافے کا سبب بنتے ہیں۔

تجزیوں کے نتیجے میں، یہ پایا گیا کہ تجزیہ شدہ PRE، PGE، KTE، CTE، اور GGE نچوڑ جلد کی ہائیڈریشن کو بڑھاتے ہیں (شکل 9B)۔ تیاریوں میں نچوڑ کے ارتکاز میں اضافے کے ساتھ موئسچرائزنگ خصوصیات میں اضافہ دیکھا گیا۔ PRE اور PGE نچوڑ کے لیے سب سے مضبوط نمی کی خصوصیات دیکھی گئی ہیں جو 60 منٹ کے بعد 32 فیصد اور 29 فیصد کے برابر ہیں اور 360 منٹ کے بعد 21 فیصد اور 22 فیصد کے برابر ہیں۔ جلد کی ہائیڈریشن کی سب سے کم سطح، اگرچہ، KTE ایکسٹریکٹ کے لیے 60 منٹ کے بعد 18 فیصد اور 360 منٹ کے بعد 3 فیصد کے قریب پائی گئی ہے۔

2.8۔ درخواست کا تجزیہ

2.8.1 نچوڑ کے رنگ کے پیرامیٹرز کا تعین

ان کے قدرتی رنگ کی وجہ سے، پودوں کے پھولوں کے فعال اجزاء کو کئی تجارتی مصنوعات، جیسے کاسمیٹکس اور خوراک میں قدرتی رنگوں کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ حاصل کردہ نچوڑ (ٹیبل 5) کے لئے رنگین تجزیہ کیا گیا تھا۔

پی آر ای، کے ٹی ای، اور سی ٹی ای کے نچوڑوں میں قدرتی کاسمیٹک پگمنٹ کے طور پر سب سے زیادہ صلاحیت پائی گئی۔ تاہم، سب سے زیادہ کروما اقدار (C*) CTE کے لیے دیکھی گئیں۔ ایچ ڈگری پیرامیٹر کی قدر کی بنیاد پر، یہ پتہ چلا کہ یہ اس نچوڑ کا پیلا رنگ ہے جو کھلی آنکھ سے دیکھا اور نظر آتا ہے۔ KTE اور PRE اقتباسات کے معاملے میں، کم C* ویلیو (2.8) کے باوجود، ان عرقوں کا رنگ کھلی آنکھوں سے واضح طور پر دیکھا جا سکتا ہے اور PRE کے لیے سرخ-جامنی اور KTE اقتباس کے لیے نیلے بنفشی کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ پی جی ای اور جی جی ای کے پانی کے نچوڑ سرخی مائل اور قدرے نارنجی رنگ کے تھے، اور حاصل شدہ کروما کی قدریں 1.3 کی سطح پر تھیں۔ اس رنگ کے لیے، یہ اقدار ننگی آنکھ کے لیے نمایاں طور پر قابل فہم نہیں تھیں۔

2.8.2 عرقوں کی بنیاد پر کاسمیٹکس کے کلر پیرامیٹرز کا تعین

حالیہ برسوں میں، خاص طور پر خوراک اور کاسمیٹک صنعتوں میں، قدرتی رنگ کے نئے رنگوں کو تیار کرنے کی سخت ضرورت ہے۔ مصنوعی طور پر حاصل کیے گئے رنگوں کے مقابلے میں، ان کا انسانی صحت اور ماحول پر کم منفی اثر پڑ سکتا ہے [80]۔ حاصل کردہ نچوڑ ایک ماڈل مائکیلر میک اپ ریموور مائع کی تشکیل میں استعمال کیے گئے تھے۔ ہر فارمولیشن میں، وہ 1 فیصد کے ارتکاز میں استعمال ہوتے تھے۔ ماڈل کاسمیٹکس کے رنگ پیرامیٹرز کے نتائج ٹیبل 6 میں پیش کیے گئے ہیں۔

یہ دیکھا گیا کہ PRE، PGE، CTE، اور GGE سے 1 فیصد پانی کے نچوڑ نے میک اپ ریموور کے رنگ کو نمایاں طور پر متاثر کیا۔ ہر نمونہ رنگ میں ننگی آنکھ کو واضح طور پر نظر آتا تھا۔ PRE ایکسٹریکٹ نے کاسمیٹک کا رنگ نارنجی میں تبدیل کر دیا، اور PGE، CTE، اور GGE ایکسٹریکٹ نے اسے پیلا کر دیا۔

تجزیہ شدہ عرقوں کو ممکنہ رنگوں کے طور پر استعمال کرنے کے امکان کی تصدیق △میک اپ ریموور کے ساتھ ایکسٹریکٹ/بیس میک اپ ریموور کی نسبتاً زیادہ قدروں سے ہوتی ہے، جو کہ ماڈل کاسمیٹکس کے رنگ میں نمایاں تبدیلی کی نشاندہی کرتا ہے بنیادی نمونے میں (عرقوں کو شامل کیے بغیر)۔ ادب کے اعداد و شمار [73] سے پتہ چلتا ہے کہ اگر AE کی قدریں 5 سے زیادہ ہیں، تو رنگ برہنہ حوا کے ذریعہ سمجھا جاتا ہے اور اسے رنگ کے اثر کے طور پر سمجھا جاتا ہے۔ PRE، KTE، اور CTE نچوڑ پر مشتمل میک اپ ہٹانے والوں کے لیے، بالترتیب 8.83,9.17 اور 8.14 کی AE قدریں حاصل کی گئیں۔ پی جی ای اور جی جی ای کے نچوڑوں والی مصنوعات کے معاملے میں، تیاری کے رنگ پر نچوڑ کا کوئی خاص اثر نہیں دیکھا گیا۔ AE کی قدریں 2 کی رینج میں ہیں۔{12}}.82۔ اس کا مطلب ہے کہ رنگ میں فرق صرف ایک تجربہ کار مبصر [80,81] کے لیے قابل فہم ہے۔

3. مواد اور طریقے

3.1 پلانٹ کا مواد اور نکالنے کا طریقہ کار

تحقیق میں استعمال ہونے والا پودے کا مواد P. rhoeas L.، P.granatum L.، C.ternatea L.، C.tinctorius L.، اور G.globosa L. کے خشک پھول تھے، جو مقامی جڑی بوٹیوں کی دکان سے حاصل کیے گئے تھے۔ . نکالنے کا عمل الٹراسونک غسل (ڈیجیٹل ایم جیٹراسونک کلینر، برلن، جرمنی) میں انجام دیا گیا تھا جو یانگ ایٹ ال کے بیان کردہ طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔[82]۔ 10 گرام خشک پھول اور 100 گرام پانی استعمال کیا گیا تاکہ ٹیسٹ شدہ پودوں کا پانی نکالا جا سکے۔ یہ عمل کمرے کے درجہ حرارت پر 20 منٹ تک کیا گیا۔ اس کے بعد حاصل کردہ نچوڑ کو واٹ مین نمبر 1 فلٹر پیپر کے ذریعے تین بار جمع اور فلٹر کیا گیا۔ فلٹریشن کے بعد، نچوڑ 40 ڈگری پر کم دباؤ کے تحت بخارات بن گئے تھے۔ 100 mg/mL کے ارتکاز پر ایک اسٹاک محلول خشک عرقوں سے تیار کیا گیا تھا اور مزید تجزیہ تک 4 ڈگری پر اندھیرے میں محفوظ کیا گیا تھا۔ مندرجہ ذیل مخففات استعمال کیے جاتے ہیں: PRE—Papaver rhoeas extract, PGE—Punica granatum extract, GGE—Gomphrena globosa extract, CTE—Carthamus tinctorius extract, KTE—Clitoria ternatea extract.

3.2 HPLC-UV-ESI-MS کے ذریعے حیاتیاتی مرکبات کا تعین

HPLC(DionexUltiMate 300{{20}} RS Thermo Fisher Scientific, Sunnyvale, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ان کے اہم بایو ایکٹیو مرکبات کا تعین کرنے کے لیے حاصل کردہ نچوڑ کا تجزیہ کیا گیا۔ ایک ماس سپیکٹرو میٹر (4000 QTRAP, AB Sciex, Concord, ON, Canada) کے ساتھ، الیکٹرو سپرے آئنائزیشن سورس (ESI) اور ٹرپل کواڈروپول آئن ٹریپ ماس سے لیس تجزیہ کار کرومیٹوگرافک علیحدگی ایک گریڈینٹ ریورس فیز سسٹم کے ساتھ حاصل کی گئی تھی۔ مزید برآں، 100×4.6 ملی میٹر کرومیٹوگرافک کالم Kinetex 3.5 μm XB-C18 100 A iso-butyl سائڈ چینز کے ساتھ اور TMS اینڈ کیپنگ سٹیشنری فیز کے ساتھ اسی طرح کے کمپوزیشن گارڈ کالم کے ساتھ استعمال کیا گیا Phenomenex سے خریدا گیا اور اسے 30 ڈگری پر برقرار رکھا گیا۔ . ایک بائنری سالوینٹ سسٹم جس میں 0.1 فیصد (o/v) آبی فارمک ایسڈ بطور سالوینٹ A اور میتھانول بطور سالوینٹ B کو رن ٹائم کے 19.1 منٹ کے دوران گریڈینٹ موڈ کے تحت استعمال کیا گیا۔ اخراج کی شرائط درج ذیل تھیں۔ فیصد B,17۔ الیکٹرو اسپرے آئن ماس اسپیکٹومیٹر (ESI-MS) کے ذریعے منفی آئن موڈ کے تحت ایلیونٹ کی نگرانی کی گئی اور m/z 20 سے 1000 Da تک اسکین کی گئی۔ مقدار کے تجزیے کے لیے، ٹرپل کواڈروپول ایم ایس ڈیٹیکٹر ایک سے زیادہ ردعمل کی نگرانی (MRM) اسکین موڈ میں کام کر رہا تھا۔ زیادہ سے زیادہ بڑے پیمانے پر تجزیہ کرنے والے حالات اور انفرادی مرکبات کے لیے پروڈکٹ آئنوں کا انتخاب تجرباتی طور پر طے کیا گیا تھا۔ اس مقصد کے لیے، موبائل فیز کمپوزیشن میں تفتیش شدہ مرکبات (1 ng/mL) کے معیاری حل ایک انفیوژن پمپ کا استعمال کرتے ہوئے متعارف کرائے گئے جو مستقل نمونے کی ترسیل میں کام کرتے ہیں۔ اس بات کو یقینی بنانے کے بعد کہ درست پیشگی آئن کا انتخاب کیا گیا تھا، ڈیکلسٹرنگ پوٹینشل (DP)، داخلی صلاحیت (EP)، تصادم سیل ایگزٹ پوٹینشل (CXP)، اور تصادم کی توانائی (CE) کو ہر MRM منتقلی (ٹیبل S1) کے لیے بہتر بنایا گیا تھا۔ دو MRM ٹرانزیشنز کی نگرانی کی گئی، ایک کوانٹیفیکیشن کے لیے اور ایک تصدیق کے لیے۔ MS کے پیرامیٹرز کو اس طرح ترتیب دیا گیا تھا: 600 C کا کیپلیری درجہ حرارت، 35 psi پر پردے کی گیس، 60 psi پر نیبولائزر گیس، اور خشک کرنے والی گیس 50 psi پر۔ بائیو ایکٹیو مرکبات کے تعین کے لیے منفی آئنائزیشن موڈ سورس وولٹیج -4500 V لاگو کیا گیا تھا۔ نائٹروجن کو پردے اور تصادم گیس کے طور پر استعمال کیا گیا۔ تجزیہ کار 1.5.1 سافٹ ویئر کے ساتھ ڈیٹا کے تجزیہ پر کارروائی کی گئی۔ منتخب مرکبات کی شناخت مالیکیولر ماس اور ہر ایک کمپاؤنڈ کے اینون اندراجات کے ٹکڑے کے ذریعہ کی گئی تھی اور MS2 کے ٹکڑے ہونے سے تصدیق کی گئی تھی۔ نو مرکبات کی شناخت ان کے کیمیائی فارمولے، deprotonated مالیکیولر آئنوں، اور ہر انفرادی چوٹی کے لیے خصوصیت کے ٹکڑے کے آئنوں کے ساتھ طے کی گئی تھی۔ تجزیاتی معیارات کے انتہائی شدید MRM ٹرانزیشن کے چوٹی والے علاقوں کا استعمال کرتے ہوئے پیدا ہونے والے انشانکن وکر کی بنیاد پر چھ مرکبات کی مقدار درست کی گئی۔ مقداری مرکبات کے لیے ڈیٹیکٹر کے ردعمل کی لکیری کو 0.01 ug/mL سے لے کر 2ug/mL تک کی آٹھ حراستی سطحوں پر انشانکن معیارات کے انجیکشن کے ذریعے ظاہر کیا گیا۔ انشانکن کے منحنی خطوط 0.99 سے زیادہ ارتباط (R) کے گتانک کے ساتھ تھے۔ نمونے CMS ڈیٹیکٹر کی لکیری رینج میں نہ آنے کی صورت میں، نمونوں کو پتلا کر دیا گیا۔

کوئنک ایسڈ، گیلک ایسڈ، کیفیک ایسڈ، کیفیوئلکوئنک ایسڈ (CQA، دو آئیسومر:3- اور 5-CQA)، اور quercetin کے تجزیاتی معیار سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA سے خریدے گئے تھے۔ )۔ استعمال کیے گئے تمام معیارات تجزیاتی گریڈ کے تھے (99 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر)۔

معیاری سٹاک سلوشنز کو 10 mL LC-MS گریڈ میتھانول میں ہر معیار کے 20 mg کو درست طریقے سے وزن کر کے اور تحلیل کر کے تیار کیا گیا تھا تاکہ 2 mg/mL کا ارتکاز ہو سکے۔ 2 کے سیریل ڈائیوشنز۔ .1 ug/mL، 0.05 ug/mL, 0.02 ug/mL، اور 0.01 ug/mL پھر LC-MS گریڈ میتھانول محلول کا استعمال کرتے ہوئے بنائے گئے۔ مقدار کی حد (LOQ) کو 0.01 ug/ml کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔

LC-MS/MS پرکھ سہ رخی میں انجام دیا گیا تھا۔ حاصل کردہ ڈیٹا کو بطور ذریعہ پیش کیا گیا ± معیاری انحراف۔

3.3 اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کا تعین

3.3.1.ABTS · پلس سکیوینگنگ پرکھ

سب سے پہلے، ABTS محلول 19.5 mg ABTS اور 3.3 mg پوٹاشیم پرسلفیٹ کو 7mL فاسفیٹ بفر (pH=7.4) کے ساتھ ملا کر تیار کیا گیا اور 16 گھنٹے تک اندھیرے میں تحلیل کر دیا گیا۔ اس کے بعد، محلول کو تقریباً 1 کی سطح پر جذب کرنے کے لیے پتلا کر دیا گیا۔{9}}۔ جذبوں کو طول موج 入=734 nm پر ماپا گیا۔ اس کے بعد، 20 ملی لیٹر کے ٹی ای، پی جی ای، پری، سی ٹی ای، اور جی جی ای کے نچوڑ (10,100,250,500 ug/mL) کو 980 ملی لیٹر ABTSe ​​پلس محلول کے ساتھ ملایا گیا اور پھر اندھیرے میں 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اگلے مرحلے میں، تیار کردہ نمونوں کی جاذبیت کو UV/VIS سپیکٹرو فوٹومیٹر Aquamate Helion (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے 入=734 nm پر ماپا گیا۔ آست پانی کو خالی کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ABTS plus scavenging کا حساب مساوات (1):

کہاں: نمونے کی جذب کے طور پر؛ AC - کنٹرول کے نمونے کا جذب۔ پیمائش ہر نکالے گئے نمونے کے لئے سہ رخی میں کی گئی تھی۔ طریقہ کار گویل-بیبن ایٹ ال نے بیان کیا تھا۔ [83]۔

3.3.2.DPPH ریڈیکل اسکیوینگنگ پرکھ

فری ریڈیکلز کو نکالنے کے لیے نچوڑوں کی قابلیت برانڈ ولیمز ایٹ ال کے بیان کردہ طریقہ کو استعمال کرتے ہوئے انجام دی گئی۔ [84]۔ یہ 1،1-ڈفینائل-2-پکریل ہائیڈرزائل （DPPH） ریڈیکل کے استعمال پر مبنی ہے۔ سب سے پہلے، 100g/mL کے ارتکاز میں 33 μL نچوڑ کے آبی محلول کو DPPH（4 mM） کے 167 μL میتھانول محلول کے ساتھ ملایا گیا اور ایک 96-کنویں پلیٹ میں منتقل کیا گیا، پھر ہلا کر ملایا گیا۔ اس کے بعد، نمونوں کی جاذبیت کو 517 nm کی طول موج پر ماپا گیا۔ پیمائش ہر 5 منٹ پر 30 منٹ کے لیے UV-VIS فلٹر Max入=5 سپیکٹرو فوٹومیٹر（تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، MA، USA) پر کی گئی۔ ہر نچوڑ کے لئے تین آزاد نقل تیار کی گئیں۔ DPPH محلول والا پانی بطور کنٹرول استعمال ہوتا تھا۔ اینٹی آکسیڈینٹ کی صلاحیت کو مساوات (2) کا استعمال کرتے ہوئے ڈی پی پی ایچ کی روک تھام کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا:

کہاں: نمونے کی جذب کے طور پر؛ AC - کنٹرول کے نمونے کا جذب۔ پیمائش ہر نکالے گئے نمونے کے لئے سہ رخی میں کی گئی تھی۔

3.3.3.رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی انٹرا سیلولر سطحوں کا پتہ لگانا

HaCaT اور BJ خلیات میں ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کی انٹرا سیلولر پیداوار پیدا کرنے کے لیے تجزیہ شدہ نچوڑ کی صلاحیت کا تعین کرنے کے لیے، ایک فلوروجینک H، DCFDA ڈائی استعمال کیا گیا تھا۔ اس کمپاؤنڈ میں غیر فعال بازی کے ذریعے خلیوں میں داخل ہونے کی صلاحیت ہوتی ہے، جہاں اسے انٹرا سیلولر ایسٹریسیس کے ذریعے غیر فلوروسینٹ مرکب میں تبدیل کیا جاتا ہے۔ اگر سیل میں رد عمل آکسیجن پرجاتیوں موجود ہیں، تو یہ مرکب انتہائی فلوروسینٹ DCF میں تبدیل ہو جاتا ہے۔ HaCaTs اور BJ میں ROS کی انٹرا سیلولر سطح کا تعین کرنے کے لیے، خلیات کو 96-کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ، خلیوں کو 24 گھنٹے کے لئے انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ ڈی ایم ای ایم میڈیم کو ہٹا دیا گیا اور اس کی جگہ 10 μM H2DCFDA（Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA） سیرم فری DMEM میڈیم میں تحلیل کر دیا گیا۔ HaCaT اور BJ خلیات کو H, DCFDA میں 45 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر 100، 250، اور 500 ug/mL کے ارتکاز میں عرقوں کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ 1 ایم ایم ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H2O2) کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ کنٹرول کے نمونے ایسے خلیات تھے جن کا تجربہ شدہ عرقوں سے علاج نہیں کیا گیا تھا۔ DCF فلوروسینس کو ہر 90 منٹ میں FilterMax F5 مائکروپلیٹ ریڈر (تھرمو فشر سائنٹیفک) کا استعمال کرتے ہوئے زیادہ سے زیادہ 485 nm اور اخراج سپیکٹرا 530 nm [85] پر ناپا گیا۔

3.4 میٹرکس Metallopeptidases روکنا کا اندازہ

3.4.1۔اینٹی ایلسٹیس سرگرمی کا تعین

میٹرکس میٹالوپروٹینیس کو روکنے کے امکان کا تعین کرنے کے لیے، نیوٹروفیل ایلسٹیس (NE)، ایک فلورومیٹرک کٹ (Abcam، ab118971) کا اطلاق کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ کٹ کے ساتھ منسلک ہدایات کے مطابق اور Niziol-Lukaszewska et al کے بیان کردہ طریقہ کار کے مطابق کیا گیا تھا۔ [86]۔ تجزیے ایک معیاری 96-کنویں پلیٹ میں کیے گئے تھے جس میں ایک واضح فلیٹ نیچے تھا۔ تجزیہ کے لیے، 100 اور 250 ug/mL کے ارتکاز میں پودوں کے عرق استعمال کیے گئے۔ ابتدائی طور پر، NE انزائم سلوشنز، ایک NE سبسٹریٹ، اور ایک inhibitor کنٹرول (SPCK) ہدایات کے مطابق تیار کیے گئے تھے۔ پتلا NE محلول کو تمام کنوؤں میں شامل کیا گیا اور پھر، ٹیسٹ کے نمونے، روکنے والے کنٹرول، اور انزائم کنٹرول (Assay Buffer) کو بعد کے کنوؤں میں شامل کیا گیا۔ اس کے بعد، نمونوں کو ملایا گیا اور 37 ڈگری پر 5 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس دوران، Assay Buffer اور NE سبسٹریٹ کو ملا کر ایک رد عمل کا مرکب تیار کیا گیا۔ مرکب کو ہر ایک کنویں میں شامل کیا گیا اور اچھی طرح سے ملایا گیا۔ فلوروسینس کو فوری طور پر اتیجیت طول موج 入=400 nm اور اخراج 入=505 nm پر مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا (فلٹر میکس F5، تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) تجزیہ کی NE سرگرمی کو روکنے کی صلاحیت نمونوں کا حساب مساوات (3):

حتمی نتیجہ تین آزاد پیمائشوں کا ریاضی کا مطلب تھا۔

3.4.2 اینٹی کولیجنز سرگرمی کا تعین

کولیجینیز کی سرگرمی کو روکنے کے لیے حاصل کردہ نچوڑ کی صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے، ایک فلورو میٹرک کٹ (Abcam, Cambridge, UK, ab211108) کا اطلاق کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ کٹ کے ساتھ منسلک ہدایات کے مطابق اور Niziol-Lukaszewska et al کے بیان کردہ طریقہ کار کے مطابق کیا گیا تھا۔ [86]۔ تجزیے ایک معیاری 96-کنویں پلیٹ میں کیے گئے تھے جس میں ایک واضح فلیٹ نیچے تھا۔ تجزیہ کے لیے، 100 اور 250 ug/mL کے ارتکاز میں پودوں کے عرق استعمال کیے گئے۔ سب سے پہلے، collagenase (COL) کو کولیجینیز تجزیہ بفر (CAB) میں تحلیل کیا گیا تھا۔ پھر، تجزیہ شدہ نمونے COL اور CAB میں شامل کیے گئے۔ روک تھام کرنے والے کنٹرول کے نمونے کولیجینیز انحیبیٹر (1،10-فینانتھرولین (80 ایم ایم) کو کولیجینیز اور سی اے بی بفر کے ساتھ ملا کر تیار کیے گئے تھے۔ انزائم کنٹرول ویلز کو سی اے بی کے ساتھ پتلی سی او ایل کو ملا کر تیار کیا گیا تھا۔ سی اے بی بفر کو بیک گراؤنڈ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، نمونوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ کولیجینیز سبسٹریٹ کو CAB کے ساتھ ملا کر ایک رد عمل کا مرکب تیار کیا گیا۔ اس طرح تیار کردہ رد عمل کے مرکب کو تمام تجزیہ شدہ نمونوں میں شامل کر کے اچھی طرح ملایا گیا۔ اس کے بعد، فلوروسینس کی پیمائش کی گئی۔ 490 nm کی حوصلہ افزائی طول موج اور 520 nm کا اخراج۔ پیمائش 60 منٹ کے لئے 37 C پر کی گئی تھی۔

3.5 سوزش کی خصوصیات کا تعین

3.5.1 پروٹین ڈینیچریشن کی روک تھام

PRE، PGE، KTE، CTE، اور GGE ایکسٹریکٹس کی پروٹینیز روک تھام کی سرگرمی Sakat et al [87] کے طریقہ کار کے مطابق انجام دی گئی تھی، جسے Gunathilake et al نے تبدیل کیا تھا۔ مختصراً، رد عمل کا حل (2 ملی لیٹر) 2{{10}} mM Tris-HCl بفر (pH7.4) میں 1 ملی لیٹر 1 فیصد ٹرپسن اور 1 ملی لیٹر ٹیسٹ نمونے ({{17}) پر مشتمل تھا۔ }.02 ملی لیٹر نچوڑ 0.980 ملی لیٹر پانی)۔ محلول کو انکیوبیٹ کیا گیا (5 منٹ کے لیے 37 ڈگری)، اور پھر 0.8 فیصد (w/v) کیسین کا 1 ملی لیٹر شامل کیا گیا اور اس مرکب کو مزید 20 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے اختتام پر، رد عمل کو مکمل کرنے کے لیے 70 فیصد پرکلورک ایسڈ کا 2 ملی لیٹر شامل کیا گیا۔ مرکب کو سینٹرفیوج کیا گیا تھا، اور سپرنٹنٹ کے جذب کو بفر کے خلاف خالی جگہ کے طور پر 210 nm پر ماپا گیا تھا۔ فاسفیٹ بفر حل بطور کنٹرول استعمال ہوتا تھا۔ مندرجہ ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین ڈینیچریشن کی فیصد کی روک تھام کا حساب لگایا گیا تھا:

جہاں A1= کنٹرول کے نمونے کا جذب، اور A2= ٹیسٹ کے نمونے کا جذب۔

3.5.2 Lipoxygenase سرگرمی کی روک تھام

lipoxygenase کی سرگرمی کو روکنے کے لیے حاصل کیے گئے نچوڑوں کی قابلیت کا تعین اس طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا جو سرویسورن ایٹ ال نے بیان کیا ہے۔ 【89】۔ پہلے، مختلف ارتکاز میں پودوں کے 10 μL نچوڑ (100، 250، اور 500 ug/mL) کو ایک 96-کنویں پلیٹ میں 160 μL 100 mM PBS اور 20 μL سویا بین lipoxygenase محلول（16 μL کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ ایم ایل)۔ نمونے 25 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے لگائے گئے اور اس وقت کے بعد رد عمل شروع کرنے کے لیے 10 μL سوڈیم لینولک ایسڈ شامل کیا گیا۔ پھر، FilterMax F5microplate ریڈر (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے ہر منٹ میں 3 منٹ کی مدت میں 234 nm پر نمونوں کی جاذبیت کی پیمائش کی گئی۔ Diclofenac ایک مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا. lipoxygenase سرگرمی کی روک تھام کا فیصد مساوات (6) سے شمار کیا گیا تھا:

جہاں: جیسا کہ ٹیسٹ شدہ نمونے کا جذب ہے، Ac منفی کنٹرول کا جاذب ہے۔

حتمی نتیجہ تین آزاد پیمائشوں کا ریاضی کا مطلب تھا۔

3.6۔ سائٹوٹوکسیٹی تجزیہ

3.6.1 سیل کلچر

اس تحقیق میں، جلد کی دو سیل لائنیں استعمال کی گئیں: نارمل ہیومن کیراٹینوسائٹس (HaCaT) اور fibroblasts (BJ)۔HaCaTs CLSCell Lines Service (CLS Cell Lines Service GmbH، Eppelheim، Germany) اور BJs سے امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن سے حاصل کیے گئے تھے۔ ماناساس، VA، USA)۔ Dulbecco's Modification of Eagles Medium (DMEM, Biological Industries, Cromwell, CO, USA) میں سوڈیم پائروویٹ، L-glutamine، اور اعلی گلوکوز مواد (4.5g/L) کے ساتھ سیل اگائے گئے تھے۔ میڈیم کو 10 فیصد فیٹل بوائن سیرم (گبکو، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) اور 1 فیصد اینٹی بائیوٹکس (100 U/mL پینسلن اور 1000 ug/mL streptomycin، Gibco) سے بھی افزودہ کیا گیا تاکہ مائکروبیل آلودگی کو روکا جا سکے۔ خلیوں کو ایک انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 95 فیصد ہوا اور 5 فیصد کاربن ڈائی آکسائیڈ کے مرطوب ماحول میں اگایا گیا تھا۔

3.6.2.الامر بلیو پرکھ

کلچرڈ سیلز (HaCaT اور BJ) کے مطلوبہ سنگم تک پہنچنے کے بعد، DMEM میڈیم کلچر فلاسکس میں مطلوب تھا۔ نیچے سے منسلک خلیوں کو جراثیم سے پاک فاسفیٹ بفرڈ نمکین سے دو بار دھویا گیا تھا۔ سیل پرت کو ٹرپسن کے ساتھ الگ کیا گیا تھا اور پھر خلیوں کو ایک تازہ ڈی ایم ای ایم میڈیم میں رکھا گیا تھا۔ خلیات کو 96-اچھی طرح سے فلیٹ باٹم پلیٹوں (VWR, Radnor, PE, USA) میں چڑھایا گیا تھا اور پلیٹوں کے نیچے سے منسلک ہونے کے بعد، خلیوں کو نچوڑ (100، 250، اور 500 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔ خلیوں کو 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔

سائٹوٹوکسٹی ٹیسٹ الامر بلیو پرکھ (سگما، R7017، لائف ٹیکنالوجیز، بلیس وِک، نیدرلینڈز) کے ساتھ کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے بعد، 60 یو ایم کے ارتکاز میں ایک ریسازورین محلول کو کنوؤں میں شامل کیا گیا، پھر پلیٹوں کو انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے رکھا گیا۔ اس وقت کے بعد، فلوروسینس کی پیمائش کی گئی ہے（入=570nm）۔ ہر اقتباس کی حراستی کو تین نقلوں میں انجام دیا گیا تھا۔

3.6.3 غیر جانبدار ریڈ اپٹیک پرکھ

نیوٹرل ریڈ اپٹیک پرکھ دوسرا ٹیسٹ ہے جو PRE، PGE، KTE، CTE، اور GGE کی سائٹوٹوکسٹی کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ پہلے،96-اچھی طرح سے فلیٹ باٹم پلیٹیں تیار کی گئیں جیسا کہ پچھلے حصے میں بیان کیا گیا ہے۔ خلیات کے نچوڑوں کے سامنے آنے کے 24 گھنٹے کے بعد، ان کی خواہش کی گئی اور غیر جانبدار سرخ رنگ (40 ug/mL) کے ساتھ تبدیل کیا گیا اور 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس وقت کے بعد، خلیات کو فاسفیٹ بفرڈ نمکین سے دھویا گیا۔ اگلے مرحلے میں، ڈی کلرائزنگ بفر（150 μL） کو کنوؤں میں شامل کیا گیا۔ پھر، نیوٹرل ریڈ ڈی وی کے اپٹیک کا تعین آپٹیکل ڈینسٹی (OD) کو 540 nm پر کر کے کیا گیا۔ ہر اقتباس کی حراستی کو تین نقلوں میں انجام دیا گیا تھا۔

3.7۔ سورج کے تحفظ کے عنصر کا تعین (ان وٹرو)

سورج سے تحفظ کے عنصر (SPF) کا تعین 10 ug/mL اور 50 ug/mL کے ارتکاز میں نچوڑ کے ایک آبی محلول کے جذب کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا، طول موج کی حد کے اندر 290 سے 320 nm کے درمیان 5-nm وقفوں پر۔ حاصل کردہ نتائج سے، SPF کا حساب منصور مساوات [90] سے کیا گیا: جہاں∶ EE（λ） — erythemal اثر سپیکٹرم، I（入） — شمسی شدت کا سپیکٹرم، ABS（入） — سن اسکرین پروڈکٹ کا جذب، CF — اصلاحی عنصر (=10）، E（N）×I（λ）) — Sayre کی طرف سے متعین قدریں استعمال کی گئیں [91]۔

3.8۔ ٹرانسپیڈرمل پانی کا نقصان (TEWL) اور جلد کی ہائیڈریشن پیمائش

TEWL اور جلد کی ہائیڈریشن پیمائش TEWAmeter TM 300 پروب اور Corneometer CM 825 پروب کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جو MPA اڈاپٹر سے منسلک ہے (Courage Plus Khazaka Electronic, Köln, Germany)۔ پانچ رضاکاروں نے مطالعہ میں حصہ لیا۔ ان کے بازو پر جلد، چھ علاقوں (2 × 2 سینٹی میٹر سائز) کو نشان زد کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ شدہ پودوں کے نچوڑوں کی 0.2 ملی لیٹر کی مقدار پانچ جگہوں پر لگائی گئی تھی، چھٹا مقام کنٹرول تھا (کسی نمونے کے ساتھ علاج نہیں کیا گیا)۔ 60 اور 360 منٹ کے بعد ، ہائیڈریشن لیول اور TEWL پیمائش لی گئی۔ حتمی نتیجہ ریاضی کا مطلب تھا (ہر رضاکار سے) پانچ آزاد پیمائشوں (جلد کی ہائیڈریشن) اور 20 پیمائشیں (TEWL)۔

3.9 ماڈل کاسمیٹکس کی تیاری (میک اپ ریموور) نچوڑ پر مشتمل

ایک ماڈل کاسمیٹک (میک اپ ریموور) تیار کیا گیا تھا۔ استعمال ہونے والے تمام اجزاء EcoCert اور COSMOS کی ضروریات کے مطابق تھے۔ فارمولیشن ٹیبل 7 میں دکھائی گئی ہے۔

پروڈکٹ کو کمرے کے درجہ حرارت پر اجزاء (آئٹم 1 سے آئٹم 6 تک) کو ملا کر تیار کیا گیا تھا جب تک کہ ایک یکساں مائع حاصل نہ ہو جائے۔ آخری مرحلے میں، فارمولیشن کے پی ایچ کو ایڈجسٹ کیا گیا تھا. میک اپ ریموور کو حصوں میں تقسیم کیا گیا تھا۔ نچوڑ کے اسٹاک سلوشنز کا 1 فیصد ہر حصے میں شامل کیا گیا اور اچھی طرح سے ملایا گیا۔

3.10. عرقوں اور کاسمیٹکس (میک اپ ریموور) کے نچوڑوں پر مشتمل رنگ کے پیرامیٹرز کا تعین

نچوڑ کے ساتھ عرقوں اور کاسمیٹکس کے نمونوں کی تیاری کے 48 گھنٹے بعد کمرے کے درجہ حرارت پر جانچ کی گئی۔ ایک CHROMA METER CR-400(Konica Minolta, Sensing Inc., Tokyo, Japan) رنگ کے پیرامیٹرز (CIELAB کوآرڈینیٹس) کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ CIELAB نظام کی تعریف بین الاقوامی کمیشن برائے الیومینیشن نے 1978 میں کی تھی۔ یہ تین رنگوں کی خصوصیات پر مبنی ہے: L*, a*,b، جہاں L* منسل سسٹم میں قدر کے متناسب چمک کا متغیر ہے، اور a* اور b* رنگین نقاط ہیں۔ a* اور b* نقاط بالترتیب سرخ/سبز اور پیلے/نیلے رنگ کے محور پر پوزیشنوں کی نشاندہی کرتے ہیں ( جمع a=سرخ، -a=سبز؛ جمع b=پیلا، - b=نیلا)۔

حاصل کردہ ڈیٹا کی بنیاد پر: L*, a*, اور b*، درج ذیل رنگ کے پیرامیٹرز کا حساب لگایا گیا: کروما (C*) اور رنگ (h)۔ مندرجہ ذیل مساوات کا استعمال کیا گیا تھا:

4. نتائج

حاصل کردہ نتائج کی بنیاد پر، یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ آزمائشی پودوں کے نچوڑ میں کئی مثبت خصوصیات پائی جاتی ہیں، جن کی بدولت انہیں کاسمیٹکس کی تیاری میں ان کے محفوظ اور حیاتیاتی اجزاء کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ یہ دکھایا گیا ہے کہ یہ پودے پولی فینول کا بھرپور ذریعہ ہیں، جو انہیں اینٹی آکسیڈنٹ خصوصیات فراہم کرتے ہیں۔ PRE نے فری ریڈیکلز کو نکالنے کی بہترین صلاحیت دکھائی، جس کی وجہ شاید یہ ہے کہ اس میں دوسرے پودوں کے مقابلے میں سب سے زیادہ پولیفینول موجود ہیں۔ PGE اور PRE نے خلیوں میں ROS کی پیداوار کو کم کرنے کی بہترین صلاحیت ظاہر کی۔ مزید یہ کہ پودے کوئی سائٹوٹوکسک سرگرمی نہیں دکھاتے ہیں۔ تمام جانچے گئے نچوڑوں نے ایلسٹیس اور کولیجینیز انزائمز پر روکا اثر دکھایا، جس میں P. granatum اور GGE سب سے زیادہ روک تھام کا اثر رکھتے ہیں۔ اس سے یہ ظاہر ہو سکتا ہے کہ ان پودوں کو کاسمیٹکس میں ایسے مادوں کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے جو عمر بڑھنے کے عمل کو سست کر دیتے ہیں۔ مزید یہ کہ حاصل کردہ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ان پودوں میں سوزش کی خصوصیات ہیں۔ اس معاملے میں، سی ٹی ای اور کے ٹی ای بہترین ثابت ہوئے۔ KTE اور PGE نے UV تابکاری کے خلاف حفاظتی اثر دکھایا، یہاں تک کہ کم ارتکاز میں بھی۔ زیادہ ارتکاز پر، تمام پودوں پر UV حفاظتی اثر ہوتا ہے۔ مزید برآں، پودوں نے جلد کی ہائیڈریشن پر مثبت اثر ڈالا اور ٹرانسپیڈرمل پانی کی کمی کو کم کیا۔ PRE، KTE، اور CTE نچوڑ کاسمیٹکس مصنوعات میں موثر رنگین کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ میک اپ ہٹانے کے لیے ماڈل مائع جس میں اوپر دیے گئے عرقوں پر مشتمل ہے وقت کے ساتھ ساتھ ایک شدید اور مستحکم رنگ کی خصوصیت تھی۔ پی جی ای اور جی جی ای کے نچوڑوں کے ساتھ کاسمیٹکس کا رنگ صرف تجربہ کار مبصرین ہی دیکھ سکتے ہیں، اور وہ نچوڑ کے اضافے کے بغیر، خالی کاسمیٹک نمونے سے نمایاں طور پر مختلف نہیں ہیں۔ تمام حاصل شدہ نتائج پر غور کرتے ہوئے، یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ Papaver rheaas، Clitoria ternatea، اور Carthamus tinctorius کو کاسمیٹکس کی تیاری میں پیلے، نارنجی، نیلے اور جامنی رنگوں کے ذرائع کے طور پر کامیابی کے ساتھ استعمال کیا جا سکتا ہے جو کہ استعمال میں محفوظ ہوں گے، اور، زیادہ کیا ہے، جلد پر مثبت اثر پڑے گا.

یہ مضمون مالیکیولز 2022, 27, 922 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/molecules27030922 https://www.mdpi.com/journal/molecules