سلویا ہینکی کا مزید جائزہ جلد کی تصویر کی عمر کو روکنے اور رکاوٹ کی سالمیت کو بحال کرنے کے لیے ایک جدید حکمت عملی کے طور پر

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ:جلد انسانی جسم کی ایک ضروری رکاوٹ ہے جو متعدد افعال انجام دیتی ہے۔ اندرونی عوامل، بیرونی حملوں کے ساتھ مل کر، جلد کی سالمیت کو مسلسل متاثر کرتے ہیں، جس سے مختلف ساختی تبدیلیاں آتی ہیں جو نہ صرف جلد کی ظاہری شکل کو بلکہ اس کے مختلف جسمانی افعال کو بھی متاثر کرتی ہیں۔ رکاوٹ کے افعال میں ردوبدل بیماری اور ضمنی ردعمل کے بڑھتے ہوئے خطرے کا باعث بنتا ہے، اس طرح ایپیڈرمل رکاوٹ کی سالمیت کو برقرار رکھنے اور جلد کی عمر بڑھنے کے عمل کو سست کرنے کی اہمیت واضح ہے۔cistanche عضو تناسل کی ترقیسالویہ ہانکی (SH) کو حال ہی میں ایک ممکنہ اینٹی سینسینس ایجنٹ کے طور پر شناخت کیا گیا ہے۔ اس کا عرق ll.1a ریلیز کو متاثر کرکے اور ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی نسل کو کم کرکے سینسنٹ سیلز کی سطح کو کم کرنے کے قابل ہے۔ اس تحقیق میں، SH ایکسٹریکٹ کو انسانی کیراٹینوسائٹ سیل لائن (HaCaT) پر آزمایا گیا جو خلیات کی قبل از وقت عمر بڑھنے سے متعلق تناؤ کے عوامل جیسے کہ فری ریڈیکلز اور الٹرا وائلٹ بی تابکاری سے متعلق ہے۔ ہم نے اس بات کی تصدیق کی کہ SH ROS کے سکیوینجر کے طور پر کام کرتا ہے اور اس نے cytoskeleton ڈھانچے کو مضبوط بنا کر، تنگ جنکشن کو سیل کر کے، اور خلیات کی نقل مکانی کی شرح کو بڑھا کر جلد کی رکاوٹ کی سالمیت کو بحال کرنے کی اس کی صلاحیت کو پایا۔ ان نتائج کو دیکھتے ہوئے، یہ کام متعلقہ ہو جاتا ہے، جس میں سالویہ ہینکی کو ایک مرکب کے طور پر شناخت کیا جاتا ہے جو کہ طبی کارکردگی میں عمر کے خلاف جلد کے علاج کے لیے مفید ہے۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

تعارف

صحت مند اور کام کرنے والی جلد پانی کی کمی اور مختلف قسم کے دخول کو 100 فیصد، مائکروجنزم، الرجین، خارش اور تابکاری سے بچانے کے لیے ضروری ہے۔ بعض اندرونی عوامل، جیسے جینیات، سیلولر میٹابولزم، ہارمون، اور میٹابولک عمل کے ساتھ مل کر خارجی ایجنٹوں کے ساتھ روزانہ کی نمائش جلد کی قدرتی عمر بڑھنے کا باعث بنتی ہے [1]۔ خاص طور پر، جلد کی عمر بڑھنے کے رجحان کا تعلق بالائے بنفشی تابکاری، آلودگی، پٹھوں کے بار بار استعمال، اور کشش ثقل سے ہے [2، 3]۔ اس لیے جلد کی عمر بڑھنا، مجموعی ساختی اور جسمانی تبدیلیوں اور جلد کی تہوں کی ترقی پسند ترمیم کے نتیجے میں ہوتا ہے [2، 4، 5]۔ یہاں تک کہ اگر عمر بڑھنے کو ایک پیتھولوجیکل حالت نہیں سمجھا جاتا ہے، بلکہ ایک حیاتیاتی اور ناگزیر عمل ہے، اس کا جلد کی مختلف بیماریوں سے تعلق اب اچھی طرح سے قائم ہے۔ اس بات کو مدنظر رکھتے ہوئے کہ عمر سے متعلقہ جلد کی سب سے زیادہ متعلقہ بیماریاں انحطاطی عوارض، سومی اور مہلک نوپلاسم وغیرہ ہیں، جلد کے بعض امراض کے علاج یا روک تھام کے لیے جلد کی دیکھ بھال کی اہمیت واضح ہوتی ہے۔[6-8]۔ آج کل، جلد کی اینٹی ایجنگ کی حکمت عملی تصویر/تاریخی عمر کی جلد اور ایپیڈرمل علامات کو ریورس کرنے کے لیے کام کرتی ہے۔ ان کے نقطہ نظر کی بنیاد پر، ان کی درجہ بندی اس طرح کی جا سکتی ہے: کاسمیٹولوجیکل کیئر، ٹاپیکل ایجنٹس، ناگوار طریقہ کار، سیسٹیمیٹک ایجنٹس، عمر بڑھنے والے خارجی عوامل سے گریز، طرز زندگی اور عادات کی اصلاح، اور حفاظتی ادویات [9]۔ ایجنٹوں کے دو اہم گروپس ہیں جنہیں عمر مخالف فارمولیشنز کے اجزاء کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے: 1. سیل ریگولیٹرز، جیسے ریٹینول، پیپٹائڈز، اور نمو کے عوامل، جو براہ راست کولیجن میٹابولزم اور پیداوار پر کام کرتے ہیں۔ 2. اینٹی آکسیڈنٹس، جیسے وٹامنز، پولی فینولز، اور فلیوونائڈز، کولیجن کے انحطاط کو کم کرنے کے قابل ہیں [9]۔

کافی شواہد اس خیال کی تائید کرتے ہیں کہ جلد کی عمر بڑھنے کا عمل بنیادی طور پر ROS کے ذریعے ہوتا ہے، جو اینڈوجینس آکسیڈیٹیو سیل میٹابولزم کے دوران پیدا ہوتا ہے [10,11]۔ یہ معلوم ہے کہ ROS جمع سیل کو پہنچنے والے نقصان کے لیے ذمہ دار ہے جس میں لپڈ پیرو آکسیڈیشن، جھلی پروٹین کو پہنچنے والے نقصان، اور ڈی این اے میوٹیشن شامل ہیں جو جلد کی ساختی اور فعال تبدیلیوں کا باعث بنتے ہیں۔ وقت گزرنے کے ساتھ ساتھ، انسانی خلیے ROS کی سطح میں قدرتی اضافے کو کم کرتے ہیں، جو کہ اینٹی آکسیڈینٹ دفاع کے جزوی نقصان سے وابستہ ہے۔ اس ناگزیر حالت کو روزانہ الٹرا وائلٹ شعاع ریزی (UVR) کے ذریعہ مزید فروغ دیا جاتا ہے جو میٹرکس میٹالوپروٹیناسس (MMPs) کی ترکیب کو اکساتا ہے اور اس کے نتیجے میں، MMP کی ثالثی کولیجن کی تباہی [12، 13]۔ ویوو مطالعات میں مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو نقصان ، سیلولر سنسنی ، اور عمر بڑھنے والے فینوٹائپس کے درمیان کارآمد تعلق کا مظاہرہ کیا گیا [10، 14]۔

سیلولر سنسنینس کی تعریف سیل کی نشوونما کی ایک مستحکم گرفتاری کے طور پر کی گئی ہے جو عمر بڑھنے کے دوران تمام انسانی خلیوں میں ہوتی ہے [15-17]۔ دباؤ والے واقعات کے نتیجے میں، جیسے کہ آنکوجین اوور ایکسپریشن، ROS جنریشن، اور ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان (مثال کے طور پر UVR کے ذریعے، خاص طور پر UVB لائٹ سے)، خلیات وقت سے پہلے سنسنی خیز ہو سکتے ہیں [18]۔cistanche سالسا فوائداس منظر نامے میں، یہ ظاہر ہوتا ہے کہ جدید حکمت عملیوں کو تیار کرنے کی اہمیت جو سنسنی خیز خلیوں کے جمع ہونے کو روکنے یا انہیں منتخب طور پر ہلاک کرنے کے قابل ہے، اس طرح عمر بڑھنے اور بڑھاپے سے وابستہ عوارض کا مقابلہ کرنا۔ حال ہی میں، ہم نے وٹامن بی اور اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات سے مالا مال بولیویا کا پودا سیلویا ہینکی (SH) کو ایک ممکنہ اینٹی سینسینس ایجنٹ کے طور پر شناخت کیا ہے [18]۔

وقت کے ساتھ سینسنٹ سیلز کا جمع ہونا ایک اہم ترین میکانزم کے طور پر جانا جاتا ہے جس کے ذریعے ٹشوز عمر بڑھنے کے عمل سے گزرتے ہیں، جو بنیادی طور پر ایک عام سوزش کی حالت کے برقرار رہنے سے پیدا ہوتا ہے۔ درحقیقت، حواس باختہ خلیات پھیلنے سے قاصر ہونے کے باوجود، وہ اعلیٰ میٹابولک سرگرمی رکھتے ہیں اور وہ مؤثر طریقے سے کئی سوزشی مالیکیول پیدا کرتے ہیں [19]۔ جلد ہیومن ایپیڈرمس (EpiSkin) کے ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، یہ واقعتاً ثابت ہوا کہ SH اقتباس ILla کی رہائی کو متاثر کرکے اور ROS کی نسل کو کم کرکے سنسنی خلیوں کی سطح کو کم کرتا ہے [18]۔

ہومیوسٹیٹک حالات کے تحت، جلد ایک موثر رکاوٹ ہے جو بیرونی حملوں اور endogenous عوامل سے بچاتی ہے اور سیال، الیکٹرولائٹس اور پروٹین کے نقصان کو کنٹرول کرتی ہے۔ یہ اہم کام بنیادی طور پر epidermis سے منسوب ہے، جو ایک متحرک، انتہائی سطحی اپکلا ہے۔ ایپیڈرمس کے دو بڑے اجزاء سٹریٹم کورنیئم، بیرونی پرت، اور ٹائٹ جنکشن (TJs)، انٹر سیلولر جنکشنز ہیں جو سٹریٹم گرینولوسم [20] میں ملحقہ کیراٹینوسائٹس کو سیل کرتے ہیں۔ ایپیڈرمل رکاوٹ کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لئے سیل سیل چپکنا ضروری ہے۔cistanche tubulosa dosage redditیہ اہم فنکشن خصوصی سیل سیل جنکشنز سے پورا ہوتا ہے: ایڈرینس جنکشن (AJs)، ڈیسموسومز، اور تنگ جنکشن۔ یہ ڈھانچے نہ صرف خلیات کے درمیان جسمانی رابطوں کی اجازت دیتے ہیں، بلکہ مجموعی طور پر سائٹوسکیلیٹل عناصر کو منظم کرتے ہیں، اور بافتوں کی نشوونما، ساخت، اور فزیالوجی میں شامل سگنلنگ راستوں کو ماڈیول کرتے ہیں۔ حالیہ جینیاتی مطالعات نے غیر متوقع طور پر جنکشنل پروٹینز کے غیر کینونیکل کردار کا انکشاف کیا، جس سے جنکشنل کراسسٹالک، باہمی انحصار، اور بافتوں کی مضبوطی کی اجازت دینے کے لیے معاوضے کی اہمیت کو سامنے لایا گیا [21]۔

یہاں ہم نے تصویر/تاریخی جلد کی عمر پر اس کے حفاظتی اثرات کے لیے ذمہ دار مالیکیولر میکانزم کو سمجھنے کے لیے سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کی سرگرمی کا مطالعہ کیا۔ اس تناظر کے ساتھ، انسانی بے ساختہ لافانی keratinocytes (HaCaT) کو وٹرو ماڈل کے طور پر استعمال کیا گیا تھا، اور عمل کے SH طریقہ کار کا تجزیہ ایک بنیادی طرز عمل کے ساتھ ساتھ H202 اور/یا UVB شعاع ریزی کی وجہ سے دباؤ والے حالات میں کیا گیا تھا۔

نتائج

ایس ایچ ایکسٹریکٹ اور اینٹی ایجنگ خصوصیات کا محفوظ پروفائل جلد میں آکسیڈیٹیو تناؤ عمر بڑھنے کے عمل اور جلد کے متعدد امراض کے روگجنن میں اہم کردار ادا کرتا ہے [22]۔ میٹک وغیرہ۔ سالویہ ہینکی کی سنسنی مخالف سرگرمی کا مظاہرہ پہلے ہی کرچکا ہے جو اس کی صفائی کی خصوصیات سے بھی منسلک ہے [18]۔ ان حفاظتی اثرات سے استفادہ کیا جا سکتا ہے تاکہ جلد کی مرمت کرنے والا ایک نیا علاج تیار کیا جا سکے جو رکاوٹ کی سالمیت کو برقرار رکھ سکے۔ SH خصوصیات کی گہرائی سے چھان بین کرنے کے مقصد کے ساتھ، HaCaT سیل ماڈل میں سیل کی قابل عملیت اور ROS جنریشن پر نچوڑ کی سرگرمی سب سے پہلے تصدیق کی گئی۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

سیل ویئبلٹی پرکھ کیراٹینوسائٹس پر سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کے ممکنہ سائٹوٹوکسک اثرات کو حل کرنے کے لیے کی گئی تھی۔ HaCaT خلیوں کا علاج SH اقتباس （0.01-10 ug/ml） سے 24 اور 48 گھنٹے تک کیا گیا۔ سیل کی قابل عملیت کا اندازہ ٹریپن بلیو ایکسکلوژن پرکھ کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ شکل 1A اور 1B سے پتہ چلتا ہے کہ SH اقتباس کے ساتھ علاج سیل کی عملداری کو متاثر نہیں کرتا ہے جو استعمال شدہ تجرباتی حالات کے تحت HaCaT خلیات پر نچوڑ کے حفاظتی پروفائل کی تصدیق کرتا ہے۔

ROS جنریشن پر Salvia haenkei extract کی سرگرمی کو HaCaT خلیات میں علاج کے 3-24 گھنٹے بعد اور H2O2 کی نمائش سے پہلے اور بعد میں جانچا گیا۔

شکل 2A کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ SH خلیات کے اندر بنیادی ROS کی سطح کو کم کرنے کے قابل ہے، خاص طور پر 3-گھنٹوں کے علاج کے اوقات کے دوران۔ H-Oz محرک (شکل 2C) کے بعد ROS کی سطح میں نمایاں اضافے کے علاوہ، SH ROS کی پیداوار کو روکنے کے قابل ہے۔ SH اقتباس (0.01 ug/ml) نمایاں طور پر کم ہوا (-25 فیصد ) ROS جنریشن آکسیڈیٹیو محرک (شکل 2B) سے متاثر ہوا، جو علاج کے 3 گھنٹے بعد NAC کے ساتھ موازنہ کرنے والا اثر دکھاتا ہے۔ 24 گھنٹے کے SH علاج زیادہ ROS مؤثر انسدادی اضافہ دکھائی دیتے ہیں، ROS کی سطح کو 1 اور 10 ug/ml (شکل 2B) میں نمایاں طور پر کم کرتے ہیں۔ یہ نتائج سالویہ ہینکی کی تصدیق کرتے ہیں۔

اینٹی آکسیڈینٹ اثرات، جیسا کہ پہلے مشاہدہ کیا گیا ہے [18]، مختصر علاج سے شروع ہونے والا اینٹی آکسیڈینٹ بیسل اثر دکھاتا ہے۔ آکسیڈیٹیو محرک کی حوصلہ افزائی میں اضافے کو روکنے میں اثر طویل علاج کے وقت کے لیے سب سے زیادہ متعلقہ ہے۔

یہ اطلاع دی گئی ہے کہ الٹرا وائلٹ شعاعیں انسانی جلد میں ROS کی انٹرا سیلولر لیول میں اضافے کا باعث بنتی ہیں جو نقصان اور قبل از وقت بڑھاپے اور دیگر پیتھالوجیز [23-25] کا باعث بنتی ہیں۔ لہذا، UVB ثالثی ROS کی پیداوار پر SH اقتباس کے اثر کا جائزہ لیا گیا ہے۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، شکل 3C میں نتائج UVB محرک کے بعد انٹرا سیلولر ROS کی سطح میں نمایاں اضافہ دکھاتے ہیں۔ SH کے ساتھ علاج، جو خلیوں کے اندر بنیادی ROS کی سطح کو کم کرنے کا رجحان پیدا کرتا ہے (شکل 3A)، UVB محرک (شکل 3B) سے ہونے والے اضافے کو روکنے کے قابل ہے۔ SH علاج کے 3 گھنٹے ROS کی سطح کو کم کرنے کا رجحان پیدا کرتے ہیں۔ ایک لمبا SH علاج آکسیڈیٹیو تناؤ کا مقابلہ کرنے میں زیادہ موثر ہے، جو کہ شکل 3A میں نمایاں کمی کو ظاہر کرتا ہے۔ یہ اعداد و شمار UVB ثالثی آکسیڈیٹیو تناؤ میں بھی سالویہ ہینکی کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی نشاندہی کرتے ہیں۔

جیسا کہ ذکر کیا گیا ہے، بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ سنسنی خیز خلیات تاریخ کے لحاظ سے اور تصویری عمر کی جلد میں جمع ہوتے ہیں، جو عمر سے متعلقہ جلد کی تبدیلیوں اور پیتھالوجیز میں حصہ ڈالتے ہیں [26]۔ لہذا سالویہ ہانکی کے اثر کا اندازہ p21 اور p27 سنسنی مارکر (جو ریٹینوبلاسٹوما پروٹین (Rb) کے فاسفوریلیشن کو روکتا ہے اور بالترتیب CDK2-سائیکلن ای پر روکنے والی سرگرمی کے ساتھ [27]) فوٹو اسٹریس کے بعد الٹرا وایلیٹ تابکاری. شکل 4 کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UVB شعاع ریزی غیر محرک کنٹرول کے مقابلے p21 اور p27 mRNA کی سطح میں نمایاں اضافہ کرتی ہے۔cistanche แอมเวย์اضافے کی روک تھام میں اسی طرح کا رجحان SH کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں دیکھا جاتا ہے۔ SH 1 ug/ml UVB محرک کنٹرول کے مقابلے p21 کی سطح میں نمایاں کمی لاتا ہے، جبکہ دیگر ارتکاز کم کرنے کا رجحان پیدا کرتا ہے (شکل 4A)۔ SH 0 کے ساتھ پہلے سے علاج کرنے سے P27 کی سطح نمایاں طور پر کم ہوتی ہے۔{6}}1,0.1 اور 10 ug/ml (شکل 4B)۔

یہ بھی قائم کیا گیا ہے کہ سینسنٹ سیلز کیموکائنز، سائٹوکائنز، گروتھ ہارمونز اور پروٹیز کے سوزش آمیز مرکب کو خارج کر کے مائیکرو ماحولیات کو منفی طور پر متاثر کرتے ہیں، جسے سنسنی سے وابستہ سیکرٹری فینوٹائپ (SASP) کہا جاتا ہے [28]۔ شکل 5 کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UVB محرک غیر محرک کنٹرول کے حوالے سے ILla (A)، IL6 (B)، اور IL18 (C) mRNA کی سطح میں نمایاں اضافہ کرتا ہے۔ SH کے ساتھ پہلے سے علاج سائٹوکائن کی سطح میں اضافے کا مقابلہ کرنے میں ایک مضبوط سرگرمی پیش کرتا ہے۔ جیسا کہ شکل 5A میں دکھایا گیا ہے، SH 10 ug/ml میں نمایاں طور پر ILla کی سطح میں کمی آئی ہے۔ IL6 میں اضافے کا SH 0.01,0.1 اور 10 ug/ml (شکل 5B) کے ذریعہ نمایاں طور پر مقابلہ کیا گیا ہے جبکہ تمام جانچ شدہ ارتکاز IL18 کی سطح کو نمایاں طور پر کم کرنے کے قابل ہیں (شکل 5C)۔ جلد کی رکاوٹ کی دیکھ بھال اپکلا سیل لائن پر مذکورہ بالا رپورٹ شدہ نتائج کو دیکھتے ہوئے، جلد کی رکاوٹ کی دیکھ بھال اور ٹشو کو پہنچنے والے نقصان کی مرمت میں شامل متعدد پروٹینوں اور عملوں پر ایس ایچ ایکسٹریکٹ کے اثر کا جائزہ لیا گیا۔

Sirtuin-1 اظہار

کئی ان وٹرو مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ UVB شعاعیں انسانی فائبرو بلاسٹس کے Sirtuinl (SIRT1) پروٹین کی سطح میں کمی کا باعث بنتی ہیں، جو UVB کی ثالثی سے ہونے والے نقصان میں SIRT1 کی شمولیت کی نشاندہی کرتی ہیں [29]۔ لہذا، Sirtuinl پروٹین اظہار پر Salvia haenkei اقتباس کے اثر کا اندازہ مغربی بلاٹ پرکھ (شکل 6) سے کیا گیا۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، UVB محرک نے HaCaT خلیوں میں SIRTI پروٹین کے اظہار میں نمایاں کمی کی حوصلہ افزائی کی۔ لہذا SIRT1 کی سطح پر SH نچوڑ کی سرگرمی کی تحقیقات کی گئیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 1 ug/ml SH اقتباس، کنٹرول کے مقابلے میں، بنیادی حالات میں SIRTl اظہار ( جمع 40 فیصد ) میں اضافہ ہوا، جو SIRT1 کی سطحوں پر ممکنہ محرک اثر کی نشاندہی کرتا ہے۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، UVB محرک SIRT1 کی سطح میں نمایاں کمی لاتا ہے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 0.01 ug/ml SH اقتباس کے ساتھ پریٹ ٹریٹمنٹ UVB سے علاج شدہ کنٹرول کے مقابلے میں Sirtuin 1 کی سطحوں میں ایک بہتر اثر کو ظاہر کرتا ہے۔

زخم کی شفا یابی پرکھ

Keratinocytes epidermis کے اہم اجزاء ہیں، جو حیاتیات اور ماحول کے درمیان رکاوٹ فراہم کرتے ہیں۔ لہذا، ان کے پھیلاؤ اور منتقلی ایک مؤثر رکاوٹ کی دیکھ بھال اور زخموں کے بعد زخموں کو بھرنے میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں [30، 31]۔ اس طرح، HaCaT سیل ہجرت پر SH کے اثر کا اندازہ کیا گیا۔ شکل 7A میں موجود تصاویر سے پتہ چلتا ہے کہ SH کے ساتھ علاج سے خروںچ کی موٹائی میں کمی واقع ہوتی ہے جو HaCaT سیل کی منتقلی پر اثر کو ظاہر کرتی ہے۔ شکل 7B HaCaT خلیات کی منتقلی کی رفتار کی کیموگرام کی تعمیر کی اطلاع دیتا ہے۔ تصاویر سیل کی منتقلی میں ارتکاز پر منحصر اضافہ دکھاتی ہیں۔ شکل 7C میں گراف 0.01 ug/ml SH نچوڑ کے ساتھ علاج کے 4-8 گھنٹے کے بعد سیل کی منتقلی کی رفتار میں نمایاں اضافہ کی نشاندہی کرتا ہے۔ زیادہ سے زیادہ اضافہ 8-12 گھنٹے کے وقفے میں ہوتا ہے، جہاں سیل کی منتقلی کی رفتار سیلز میں کنٹرول کے حوالے سے تقریباً 165 فیصد ہے۔ یہ اعداد و شمار، سیل کے پھیلاؤ پر حاصل کردہ نتائج کے طور پر، اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ ایس ایچ ایکسٹریکٹ کا سب سے کم ارتکاز سیل کی منتقلی کی رفتار میں اضافہ کرنے کے قابل ہے جس کا تعلق ہائپر پرولیفریٹیو فینوٹائپ سے نہیں ہے۔

سخت جنکشنز کی دیکھ بھال

سٹریٹم کورنیئم کے ساتھ ساتھ، سخت جنکشن (TJs) جلد کی سالمیت میں اہم کردار ادا کرتے ہیں، پانی اور محلول کے لیے ایک رکاوٹ کے طور پر کام کرتے ہیں، اور خلیات کی تفریق، پھیلاؤ، خلیے کی قطبیت، اور سگنل کی منتقلی کے عمل میں شامل ہوتے ہیں۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یووی لائٹ ٹی جے ڈھانچے کے واحد پروٹین کے اظہار اور لوکلائزیشن کو تبدیل کرتی ہے، جس کے نتیجے میں جلد کی رکاوٹ کے کام میں خلل پڑتا ہے [32]۔

TJs کے خلل کے خلاف ممکنہ حفاظتی ایجنٹ کے طور پر Salvia haenkei extract کے اثر کا جائزہ لینے کے لیے، occludin کے اظہار کو UVB تابکاری کے سامنے آنے کے بعد امیونو سائیٹو کیمسٹری سے ماپا گیا۔ اعداد و شمار 8A، اور 8B میں موجود تصاویر سے پتہ چلتا ہے کہ SH کے دونوں ارتکاز کے ساتھ علاج occludin پروٹین کے اظہار میں اضافہ کا باعث بنتا ہے، جو ایپیڈرمل رکاوٹ کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لیے مفید جنکشن کی تشکیل کو فروغ دیتا ہے۔ جیسا کہ توقع کی جاتی ہے، UVB تابکاری کی نمائش کے بعد، خلیات ایک فاسد اور غیر متعین جھلی کی انگوٹھی دکھاتے ہیں (شکل 8A)۔ SH علاج، خاص طور پر زیادہ ارتکاز میں، جھلی کی شکل کو محفوظ رکھتا ہے اور ساخت کو غیر محرک کنٹرول کے مقابلے میں برقرار رکھتا ہے۔ ایس ایچ ایکسٹریکٹ جنکشن کمک کو فروغ دیتا ہے اور جلد کی رکاوٹ کی فعالیت کو برقرار رکھتے ہوئے UVB کی نمائش سے ہونے والے نقصان کو روکتا ہے۔

فلیگرین کا اظہار

فیلاگرین (FLG) پروٹین ایکسپریشن پر سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کے اثر کا اندازہ امیونوسیٹو کیمسٹری سے کیا گیا۔ Filaggrin جلد کی رکاوٹ کی نشوونما اور دیکھ بھال میں بنیادی ساختی پروٹین ہے۔ اعداد و شمار 9A، اور 9B کے نتائج SH نچوڑ کے ساتھ 24 گھنٹے کے علاج کے بعد فلیگرین پروٹین کے اظہار میں ارتکاز پر منحصر اضافہ دکھاتے ہیں۔ مزید برآں، F-actin پروٹین کا اظہار SH کے ساتھ علاج کے بعد خلیوں کی باقاعدہ تقسیم کی طرف اشارہ کرتا ہے، جو اپکلا رکاوٹ کے ایک منظم ساختی تسلسل کی طرف جاتا ہے۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ جلد کی رکاوٹ پر SH کا فائدہ مند اثر پڑتا ہے، فلیگرین اظہار کو بہتر بناتا ہے، جو جلد کی درست تشکیل اور کام کے لیے ضروری ہے۔

Metalloproteinase اظہار

بالائے بنفشی شعاعوں سے جلد کی نمائش ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (ECM) میں خرابیوں کو جنم دیتی ہے جس کی وجہ سے جلد کی جھریاں پڑتی ہیں، جھریاں پڑتی ہیں، اور سستی ہوتی ہے، جو جلد کی عمر بڑھنے کی اہم خصوصیات ہیں۔ میٹرکس میٹالوپروٹینیسز (MMPs) ای سی ایم کے اجزاء جیسے کولیجن، ایلسٹن، فائبرونیکٹین، اور پروٹیوگلائیکنز [33] کی کمی کے لیے بنیادی ذمہ دار ہیں۔کتنا cistanche لینا ہے؟مطالعے کی ایک بڑی تعداد اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ جلد کی UV شعاعوں کی نمائش مختلف MMPs کو اپ گریڈ کرنے کا باعث بنتی ہے، جس سے جلد کی ظاہری شکل اور صحت متاثر ہوتی ہے [34-37]۔

شکل 10 کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UVB تابکاری جیلیٹنیز MMP-2 کے mRNA اظہار کو بڑھاتی ہے جو تہہ خانے کی جھلی کولیجنز اور ڈینیچرڈ سٹرکچرل کولیجنز کو کم کرتی ہے [38]۔ SH کے ساتھ علاج MMP-2 mRNA کی سطح کو نمایاں طور پر کم کرنے کے قابل ہے جلد، تصویر کشیدگی سے نقصان پہنچا.

بحث

جلد کی عمر بڑھنا اندرونی اور بیرونی عوامل کا مجموعی اثر ہے جو جلد میں کمی کا باعث بنتا ہے، پتلا ہونے، سختی اور لچک میں کمی کا باعث بنتا ہے۔ جلد حیاتیات اور ماحول کے درمیان پہلی رکاوٹ ہے، لہذا اس کی فعال اور جسمانی سالمیت کو برقرار رکھنا ضروری ہے۔ عمر بڑھنے کے قدرتی عمل اور عمر بڑھنے سے متعلقہ حالات جیسے ذیابیطس، رجونورتی وغیرہ کے علاوہ، خارجی عوامل جلد کی ساخت کو متاثر کرنے میں متفق ہو سکتے ہیں۔ خاص طور پر فوٹو ڈیمج، آلودگی، یا طرز زندگی کے عوامل (سگریٹ نوشی، خوراک، جذباتی تناؤ، وغیرہ) جلد کی ساخت اور افعال کو روک سکتے ہیں [39,40]۔ Keratinocytes epidermis کے اہم اجزاء ہیں، جو سب سے بیرونی رکاوٹ کے لیے سیلولر بنیاد فراہم کرتے ہیں؛ اس کام میں، HaCaT انسانی keratinocyte سیل لائن کو تناؤ کے عوامل، جیسے آزاد ریڈیکلز اور الٹرا وائلٹ B تابکاری کے سامنے لایا گیا ہے، تاکہ جلد کی قدرتی عمر کی نقل کی جا سکے، اس طرح رکاوٹ کے کام کو تبدیل کر دیا جائے۔ سالویا ہینکی کو حال ہی میں ایک ممکنہ اینٹی سینسینس ایجنٹ کے طور پر شناخت کیا گیا ہے جو جلد کی عمر اور جلد کی عمر سے متعلق عوارض میں اس کے ممکنہ استعمال کی تجویز کرتا ہے۔ لہذا، اس پودے کے عرق کے اثر کی جلد کی عمر بڑھنے، جلد کی سالمیت کی دیکھ بھال، اور جسمانی حالات سے متعلق پیرامیٹرز پر گہرائی سے چھان بین کی گئی۔ عام اینڈوجینس میٹابولک عمل یا UVR اور آلودگی کے ذریعے رد عمل آکسیجن پرجاتیوں یا آزاد ریڈیکلز کی پیداوار جلد کی عمر بڑھنے کے عمل میں حصہ ڈالتی ہے۔ جلد مختلف قسم کے ریڈوکس رد عمل کا شکار ہے، اور جلد کے ہومیوسٹاسس کی دیکھ بھال میں ریڈوکس کا توازن ضروری ہے۔ کم آر او ایس ارتکاز جسمانی سرگرمیاں انجام دیتا ہے، لیکن ان پرجاتیوں کی بڑھتی ہوئی سطح راستوں کو چالو کرنے میں ملوث ہے جس کے نتیجے میں کولیجن کے انحطاط میں اضافہ، ایلسٹن کا جمع ہونا، میٹرکس-ڈیگریڈنگ میٹالوپروٹیزس کا فعال ہونا وغیرہ۔ [41]۔ مزید یہ کہ، ROS پیتھولوجیکل عمل میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے جس میں عمر بڑھنے، سوزش، چوٹیں، اور جلد کی متعدد بیماریوں جیسے psoriasis اور vitiligo [42] کے روگجنن شامل ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کو بنیادی حالات، آکسیڈیٹیو تناؤ کے حالات، اور UVB شعاع ریزی سے پیدا ہونے والے تناؤ کے حالات میں ROS کی سطح کو کم کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے، جو ROS کی ثالثی کی تبدیلیوں کے خلاف ممکنہ حفاظتی اثر کی نشاندہی کرتا ہے [22]۔

سالویہ ہینکی کے پہلے مشاہدہ کیے گئے اینٹی ایجنگ اثر کی حمایت میں، اس کام میں، ہم نے UVB تابکاری سے حوصلہ افزائی کیراٹینوسائٹس میں سنسنی کو کم کرنے کے لیے ایس ایچ ایکسٹریکٹ کی صلاحیت کا ثبوت دیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ SH p21 اور p27 سنسنی مارکر کے جین کے اظہار کو کم کرنے کے قابل ہے، جو UVB تابکاری سے محرک ہوتے ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ SH اقتباس خلیات میں فوٹوڈیمیج کے ذریعے پیدا ہونے والے سوزشی ردعمل کو کم کرنے میں امید افزا سرگرمی دکھاتا ہے، انٹرلییوکنز کی نقل کو کم کرکے۔ مزید برآں، ہم نے دلچسپ طریقے سے یہ ثابت کیا ہے کہ سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ نے نہ صرف تناؤ کے بعد بلکہ بنیادی حالات میں بھی Sirtuinl پروٹین کے اظہار کی حوصلہ افزائی کی، جو عمر بڑھنے کے عمل کو سست کرنے میں امید افزا سرگرمی دکھاتی ہے۔ Sirtuin خاندان، اور خاص طور پر SIRT1، کو بڑھاپے کی تصویر کشی میں کردار ادا کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے، خاص طور پر MMPs کی روک تھام اور اس کے نتیجے میں کولیجن کے انحطاط کے ذریعے؛ متعدد مطالعات نے UVB کی ثالثی والی تصویر کشی میں اس کے حفاظتی کردار پر روشنی ڈالی۔ قدرتی مرکبات جیسے juglone (5-hydroxy-1,4-napthalenedione) UVB کے علاج کے بعد SIRT1 کو معمول کی سطح پر بحال کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ SIRTI UVB سے متاثرہ سرطان پیدا ہونے سے روکنے میں کردار ادا کر سکتا ہے۔ [29]۔ ہمارے نتائج اس بات کی بھی نشاندہی کرتے ہیں کہ UVB تناؤ کے بعد مرمت کے عمل میں سیرٹوئنز کی ممکنہ شمولیت اور ایپیڈرمس ہومیوسٹاسس کی دیکھ بھال میں ان کا کردار۔

عام سوزش والی جلد کی خرابی، جیسے کہ atopic dermatitis اور psoriasis، نیز عمر بڑھنے کے عمل، رکاوٹ کے کام میں کمی کو ظاہر کرتے ہیں، اور epidermal خلیات کا رکاوٹ میں خلل کا ردعمل اس طرح کے حالات کو بڑھا سکتا ہے، برقرار رکھ سکتا ہے، یا یہاں تک کہ شروع کر سکتا ہے۔ اس کام کے نتائج نے ان عملوں میں شامل کئی پروٹینوں کی ماڈیولیشن کے ذریعے جلد کی رکاوٹ کی سالمیت کو بحال کرنے کے لیے SH کی مضبوط صلاحیت کا انکشاف کیا۔ خاص طور پر، یہ مشاہدہ کیا گیا occludin اور filaggrin ٹرانسکرپشن کی محرک خلیات کے درمیان adhesions پر ایک کمک کارروائی کا اشارہ. وراثت میں ملنے والی اور حاصل شدہ فلیگرین کی کمی ایپیڈرمل رکاوٹ کو متاثر کرتی ہے، جس سے اس کی تنظیم بدل جاتی ہے۔

cytoskeleton keratin filaments اور جلد کے cornified envelop کی ساخت [43]۔ مزید برآں، FLG اظہار میں نقائص keratohyalin granules کی تعداد میں کمی، قدرتی موئسچرائزنگ فیکٹر (NMF) کے ارتکاز میں واضح کمی، اور جلد کے pH کی الکلائنائزیشن [44] کی حوصلہ افزائی کرتے ہیں۔ مزید برآں، کلاڈینز اور اوکلوڈن پروٹینز میں تبدیلیاں، جن کا تعلق ٹائٹ جنکشن (TJs) پروٹین سے ہے، عمر بڑھنے کے عمل کے بارے میں اچھی طرح سے بیان کیا گیا ہے۔ TJs اپکلا خلیوں کے درمیان انٹر سیلولر جگہ کو سیل کرنے، ایک فعال رکاوٹ بنانے کے لیے ذمہ دار ہیں، اور سیل کے پھیلاؤ اور تفریق میں شامل ہیں [45]۔ سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کو فلیگرین ایکسپریشن کو بہتر بنانے اور خلیے کی جھلیوں پر اوکلوڈن لوکلائزیشن کو محفوظ رکھنے کے لیے دکھایا گیا ہے، جو UVB شعاعوں سے خراب ہے۔ صحت مند جلد کی دیکھ بھال میں SH ایکسٹریکٹ کی ایک اضافی سرگرمی کا ثبوت میٹرکس میٹالوپروٹیناسز 2(MMP-2) ٹرانسکرپشن کو کم کرنے کی صلاحیت سے ہوا ہے، جو UVB تابکاری سے متحرک ہے۔ MMPs کی اپ گریجولیشن عمر بڑھنے اور جلد کے پیتھالوجیز کو سہولت فراہم کرتی ہے، کولیجن اور ایلسٹن کو گھٹا کر ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (ECM) [33، 38] میں خرابی کا باعث بنتی ہے، اس طرح جلد کی عمر بڑھنے کے تناظر میں ان پروٹینیز کی کمی قابل قدر ہے۔

اس تحقیق میں جلد کے سب سے عام مالیکیولر پیرامیٹرز پر مشاہدہ کیے گئے ایس ایچ کے علاج کے مثبت اثرات کی تصدیق ایک حالیہ کلینیکل ٹرائل سے بھی ہوئی، جو 45 سے 60 سال کی عمر کی پچاس کاکیشین خواتین کے ایک گروپ میں انجام دی گئی [46]۔ سالویہ ہانکی کو کریم کی تشکیل میں دیا گیا ہے اور کئی پیرامیٹرز، جیسے جلد کی سرخی اور لچک، جھریوں کی گہرائی، اور اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت، کا جائزہ طبی اور آلہ کار تشخیص کے ساتھ ساتھ مضامین کے ذریعے خود تشخیص کے ذریعے کیا گیا۔ اس مطالعہ کے نتائج سے ظاہر ہوتا ہے کہ جلد کی کمی کو کم کرنے میں ایس ایچ کی افادیت کو ظاہر کرتا ہے جب جلد کی معتدل عمر کے تناظر میں روزانہ اس کا اطلاق ہوتا ہے۔ درحقیقت، درخواست کے 84 دنوں کے بعد، خواتین کی جلد زیادہ لچکدار ہونے کے نتیجے میں سرخ رنگ کے حصے اور کم جھریوں کی ایک کم تعداد پیش کرتی ہے۔ مزید یہ کہ، مطالعہ کریم کے روزانہ استعمال کے بعد جلد کی اینٹی آکسیڈینٹ کی صلاحیت میں ترقی پسند اضافہ کو ظاہر کرتا ہے [46]۔

بیرونی ماحول سے جسم کے لیے حفاظتی پناہ گاہ کے طور پر، جلد کو مسلسل ممکنہ چوٹ کا سامنا رہتا ہے، اور اس طرح زخم کا بھرنا تمام جانداروں کی بقا کے لیے ایک ضروری عمل ہے۔ صحت مند اور بے داغ جلد کو برقرار رکھنے میں SH کی ثابت شدہ صلاحیت کو مدنظر رکھتے ہوئے، ہم نے فرض کیا کہ یہ عرق جلد کے زخموں کی مرمت میں مفید ثابت ہو کر جلد کی تخلیق نو کو بڑھانے میں بھی مدد کر سکتا ہے۔ اس طرح، keratinocytes کی منتقلی پر SH سرگرمی، زخموں کے بعد جلد کی رکاوٹ کو بحال کرنے میں ایک اہم قدم ہے، آخر میں غور کیا گیا تھا. ایس ایچ ایکسٹریکٹ ٹریٹمنٹ نے ایک دلچسپ سرگرمی کا انکشاف کیا جو ہجرت کی HaCaT کی رفتار کو بڑھانے کے قابل ہے، جو گھاووں کے بعد اپکلا کی چوٹ کے دوبارہ قیام پر مضبوط اثر کا مظاہرہ کرتا ہے۔ چونکہ ہجرت زخم بھرنے کے عمل میں ایک اہم عنصر ہے، اس لیے ہمارے اعداد و شمار، جو کہ نچوڑ کی غیر ہائپر پرولیفریٹیو سرگرمی پر بھی غور کرتے ہیں، جلد کی رکاوٹ میں چوٹ کے اثر کو تیزی سے مقابلہ کرنے میں ایس ایچ کے نچوڑ کے ممکنہ اثر کی نشاندہی کرتے ہیں، جس سے اس کے خطرے کو کم کیا جاتا ہے۔ انفیکشن

ہمارا ڈیٹا سالویہ ہینکی ایکسٹریکٹ کو ایک مفید مرکب کے طور پر بتاتا ہے یا تو رکاوٹ کو دوبارہ قائم کرنے میں یا ایپیڈرمل تناؤ کے ردعمل کو کم کرنے کے لیے۔ انسانوں میں حالیہ آزمائش کے ساتھ ساتھ، یہ کام جلد کی عمر پر عرق کے مثبت اثر میں شامل میکانزم کے بارے میں مزید بصیرت فراہم کرتا ہے۔

یہ کام، پچھلے کاموں کی حمایت میں [18، 46]، جلد کے پیرامیٹرز کو ماڈیول کرنے میں سالویہ ہینکی کی افادیت سے منسلک ایک زیادہ عجیب طریقے سے مالیکیولر میکانزم کی نشاندہی کرتا ہے، جو کہ سالویہ ہینکی کی مطابقت کو بڑھاپے کے خلاف مفید ایجنٹ کے طور پر ظاہر کرتا ہے۔ اور عمر بڑھنے سے متعلق جلد کے امراض۔

مواد اور طریقے سیل کلچر اور UVB شعاع ریزی

HaCaT خلیات (انسانی بے ساختہ لافانی keratinocytes) کو ہائی گلوکوز Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagle's Medium (DMEM) میں 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (لائف ٹیکنالوجیز، والتھم، ایم اے، یو ایس اے)، اور 2 ایم ایم 0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 کلو گرام تک بڑھایا گیا تھا۔ ug/ml streptomycin (لونزا، باسیلیا، سوئٹزرلینڈ)۔ خلیوں کو ہوا میں 5 فیصد CO2 کی مرطوب ماحول میں برقرار رکھا گیا تھا اور 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔

تجرباتی پروٹوکول کے ذریعہ درخواست کرنے پر، خلیات کو 30 KJ/m²UVB تابکاری کا سامنا کرنا پڑا، جو فلپس میڈیکل نارو بینڈ UVB PL-S لیمپ کے ذریعہ فراہم کیا گیا تھا۔ ٹشو کلچر میڈیم کے ذریعے روشنی کے جذب کو روکنے کے لیے، اسے شعاع ریزی سے پہلے ہٹا دیا گیا تھا، اور شعاع ریزی پروٹوکول [47] کے بعد ڈی ایم ای ایم ایف بی ایس اور ریڈ فینول فری کے ساتھ بدل دیا گیا تھا۔ UVB شعاع ریزی کے بعد، خلیوں کو ایک تازہ گروتھ میڈیم کے ساتھ کھلایا گیا یا پروٹوکول کے بعد تجربات کے لیے استعمال کیا گیا۔

سیل وائبلٹی-ٹریپن بلیو ایکسکلوژن پرکھ 35 x10³ سیلز کو 12 کنویں پلیٹوں پر چڑھایا گیا تھا اور، رات بھر انکیوبیشن کے بعد، تجرباتی پروٹوکول کے مطابق سالویہ ہینکی ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ کے مختلف ارتکاز کے سامنے آئے تھے۔ اقتباس برائے مہربانی IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Italy) نے فراہم کیا ہے اور HPLC کے ذریعہ 0.6 فیصد w/w کے مارکر rosmarinic ایسڈ کا مواد پیش کرتا ہے۔ علاج کے بعد، خلیات کو دھویا گیا، 0.25 فیصد ٹرپسن-0.2 فیصد EDTA سے الگ کیا گیا، اور ٹرپین بلیو (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) میں درمیانے محلول میں l: I کے تناسب سے معطل کر دیا گیا۔ چیمبر برکر ہیموسیٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں کی گنتی کی گئی۔

ROS فلوروسینس پرکھ

ROS کی مقدار 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA، Sigma-Aldrich، St Louis، MO، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [48]۔ مختصراً، خلیات (5x10') کو کنویں پلیٹوں میں 96-بیج کیا گیا، انہیں رات بھر چپکنے کی اجازت دی گئی، اور پھر 3 یا 24 گھنٹے تک ایس ایچ کے عرق کے سامنے رکھا گیا۔ N-acetylcysteine ​​5mM (Sigma-Aldrich، St Louis، MO، USA) کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

آکسیڈیٹیو تناؤ کی حالت کے لئے، H2Oz [48] کی غیر موجودگی یا موجودگی میں 50 μM Hz-DCF-DA کے اضافے کے بعد ROS کی سطح کی پیمائش کی گئی۔ ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے DCF فلوروسینس کی شدت کو اتیجیت 485 nm — اخراج 535 nm پر ماپا گیا۔

UVB تناؤ کے حالات میں ROS کی سطحوں کی تشخیص کے لیے، PBS میں SH علاج - 50 μM Hz-DCF-DA سلوشن میں خلیات کو انکیوبیٹ کر کے پروٹوکول میں قدرے ترمیم کی گئی تھی۔ 37 ڈگری پر انکیوبیشن کے 25 منٹ کے بعد، پلیٹ کو UVB شعاعوں کا سامنا کرنا پڑا اور DCF فلوروسینس کی شدت کو فوری طور پر جوش 485 nm — اخراج 535 nm پر ماپا گیا، ایک ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTOR X3 (PerkinElmer, USA, USA,) کا استعمال کرتے ہوئے۔

امیونو فلوروسینس مائکروسکوپی

10x104 سیلوں کو شیشے کی کور سلپس پر سیڈ کیا گیا تھا جو 24-کنویں پلیٹوں میں کولیجن کے ساتھ پہلے سے لیپت ہوئے تھے، انہیں رات بھر جوڑنے کی اجازت دی گئی تھی، اور پروٹوکول کے مطابق ایس ایچ ایکسٹریکٹ کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔ -کیٹنین اور اوکلوڈن پروٹین کی کھوج کے لیے، خلیات کو UVB تابکاری کا سامنا کرنا پڑا، جیسا کہ اوپر پروٹوکول میں بیان کیا گیا ہے۔ شعاع ریزی کے بعد، خلیات کو ایک تازہ گروتھ میڈیم کھلایا گیا یا پروٹوکول کے بعد تجربے کے لیے استعمال کیا گیا۔ امیونو فلوروسینس پرکھ کے لیے، UVB شعاع ریزی کے 4 گھنٹے بعد، خلیات کو دھویا گیا، 4 فیصد formaldehyde کے ساتھ فکس کیا گیا، PBS میں 0.1 فیصد Triton X-100 کے ساتھ پارمیبلائز کیا گیا، اور مختلف پروٹین مخصوص اینٹی باڈیز کے ساتھ 37 ڈگری پر 1 گھنٹے تک داغ دیا گیا: ماؤس مونوکلونل اینٹی اوکلوڈین (انویٹروجن لائف ٹیکنالوجیز، والتھم، ایم اے، یو ایس اے)، ماؤس اینٹی فلیگرین (سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے)۔ پی بی ایس دھونے کے بعد، خلیات کو سیکنڈری اینٹی باڈیز/ فلوروسین آئسوتھیوسائنیٹ (الیکسا فلور 488 اینٹی ماؤس یا الیکسا فلور 536 اینٹی ریبٹ امیونوگلوبلین جی، مالیکیولر پروبس، انویٹروجن لائف ٹیکنالوجیز، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا اور 1 گھنٹے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت. RNase کے ساتھ 10 منٹ کے علاج کے بعد، Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) کا استعمال کرکے کور سلپس کو شیشے کی سلائیڈوں پر لگایا گیا اور پروپیڈیم آئوڈائڈ شامل کیا گیا۔ تصاویر کنفوکل مائکروسکوپ LSM 800، میگنیفیکیشن 60X، سافٹ ویئر ZN 2.1 بلیو ایڈیشن (کارل زیس، جینا، جرمنی) کے ذریعے حاصل کی گئیں اور امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے مقدار درست کی گئی۔

شماریاتی تجزیہ

اعداد و شمار کا تجزیہ گراف پیڈ پرزم ورژن 7.02 برائے ونڈوز (گراف پیڈ سافٹ ویئر، سان ڈیاگو، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ جب تک کہ دوسری صورت میں بیان نہ کیا گیا ہو، نتائج بطور اوسط جمع SEM پیش کیے جاتے ہیں۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا اور p اقدار<0.05 were="" considered="" statistically="">

مخففات

AJ:adherens جنکشن؛ ECM: ایکسٹرا سیلولر میٹرکس؛ FLG: filaggrin؛ Hz-DCF-DA: 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate; H2Oz: ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ؛ ایم ایم پی: میٹرکس میٹالوپروٹینیز؛ NAC: N-acetylcysteine؛ NMF: عنصر؛ ROS: رد عمل آکسیجن قدرتی موئسچرائزنگ

پرجاتیوں SIRTl: Sirtuinl; ایس ایچ: سالویہ ہانکی؛ TJ: تنگ جنکشن؛ UVB: الٹرا وائلٹ تابکاری B.

یہ مضمون www.aging-us.com سے لیا گیا ہے۔