Ganoderma Lucidum Aqueous Extract PHGPx inducing جھلی لپڈ ہائیڈروپرو آکسائیڈز کو روکتا ہے اور سنگل سیل اینیمل ٹرانسکروم کی بنیاد پر آکسیڈیٹیو تناؤ کو منظم کرتا ہے۔

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

اس تجربے میں، Tetrahymena thermophila کو تجرباتی مواد کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ T. thermophila ایک آزاد زندہ سیلیٹ ہے جو عالمی آبی ماحولیاتی نظام میں وسیع پیمانے پر موجود ہے اور ساخت اور فعال پیچیدگی میں میٹازوآن خلیوں کی طرح ہے۔ Tetrahymena میں ribozynnel6 اور telomerasel7 کی دریافت نے اینٹی ایجنگ میکانزم کی تحقیق میں ایک بڑا فروغ دیا، جسے دو نوبل انعامات سے نوازا گیا۔ اس کے مختصر نمو کے چکر، آسان ثقافت، اور واضح جینیاتی پس منظر کی وجہ سے، T. تھرموفائل ایک تجرباتی ڈیزائن میں Vivo اور in Vitro میں دوہری تحقیق فراہم کر سکتا ہے۔ T. thermophila منشیات کی جانچ اور فارماسولوجیکل میکانزم میں کامیابی کے ساتھ استعمال کیا گیا ہے۔ زیادہ اہم بات یہ ہے کہ T. thermophila glutathione peroxidase خاندان کے مالیکیولر ارتقاء کے بارے میں معلومات کا انکشاف کیا گیا ہے9-2۔ T کا معلوماتی پروفائل۔چنگیز خانthermophila GPX جینز Tetrahymena Functional Genomics Database(TetraFGD)(http://tfgd.ihb.ac.cn/)اور TGD(http://ww. ciliate.org) 22 سے حاصل کیے جاسکتے ہیں۔ بارہ میں سے دس۔ ٹیٹراہیمینا جینوم تقابلی ڈیٹا بیس میں فاسفولیپڈ ہائیڈروپر آکسائیڈ گلوٹاتھیون پیرو آکسیڈیس (PHGPx) کے طور پر شناخت کیا گیا ہے۔ PHP، ایک سیلینیم پر منحصر GPX، خاص طور پر فاسفولیپڈ ہائیڈروپرو آکسائیڈ کو کم کر سکتا ہے تاکہ لیسیتھن لیپوسومز اور بائیو فلموں کو آکسیڈیٹیو نقصان سے بچایا جا سکے PHGPx مونومر پروٹین کا kDa) ستنداریوں میں بیان کیا گیا ہے 24۔ مزید برآں، رپورٹس کی ایک بڑی تعداد نے ظاہر کیا کہ تھرموفیلا کا GPX اظہار مقداری طور پر مختلف تھا اور تناؤ کے منبع (آکسیڈینٹ، اپوپٹوس انڈیسر یا دھات) 2122 اور نمائش کے وقت پر منحصر تھا20-24

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

G.lucidum کے آبی عرق اور G.lucidum کے اہم monomers کے نمو کے منحنی خطوط اور T. thermophila کی زیادہ سے زیادہ کثافت کے اثرات کا موازنہ کرکے، اس مطالعہ نے بہترین اینٹی ایجنگ G. lucidum اقتباس حاصل کیا۔ G. lucidum کے اینٹی ایجنگ میکانزم، خاص طور پر GPX فیملی کے عمل کی قسم کا تعین، مالیکیولر، سیلولر، اور انفرادی سطح پر چھان بین کی گئی۔ اس مطالعے کے نتائج سے G. lucidum مصنوعات کے طبی استعمال میں تعاون کی توقع ہے۔

مواد اور طریقے

Ganoderma lucidum aqueous extract and monomers. Cuong 25,20 جی کی رپورٹ کا حوالہ دیتے ہوئے خشک جی لوسیڈم (چانگ بائی ماؤنٹین سینباؤ اسپیشلٹی اسٹور، جیلن) کو 1000 ملی لیٹر ڈی ڈی ایچ او میں پیس کر نکالا گیا۔ پانی کے عرق کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے جمع کیا گیا، ویکیوم خشک کرنے کے ذریعے 100 ملی لیٹر تک مرتکز کیا گیا، اور استعمال ہونے تک -20 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا۔

G. lucidum polysaccharide، Ganoderic Acid A، Ganoderal A، اور G. lucidum ergosterol کو Chengdu Must Biotechnology Co., Ltd. سے خریدا گیا تھا۔ ان تینوں معیارات کو یکساں ڈیزائن کے مطابق میتھانول میں تحلیل کر کے SPP میڈیم میں شامل کیا گیا۔ سیل کلچر اور منشیات کا علاج۔ Tetrahymenathermophila (SB210) انسٹی ٹیوٹ آف ہائیڈرو بایولوجی، چائنیز اکیڈمی آف سائنسز، ووہان، آئی پی آر چین نے فراہم کیا تھا۔ ٹی تھرموفیلا کو 28 ڈگری انکیو بیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ SPP میڈیم میں 2 فیصد (w/v) پروٹوز پیپٹون، 0.1 فیصد خمیر کا عرق (Oxoid)،0.2 فیصد گلوکوز، اور 0.003 فیصد سیکوسٹرین شامل ہے۔ یکساں ڈیزائن کے مطابق (ضمنی میزیں S1 اور S2)، G. lucidum aqueous extract, G. lucidum polysaccharide، Ganoderic Acid A، Ganoderal A اور G. lucidum ergosterol کو کلچر میڈیم میں شامل کیا گیا۔ کنٹرول گروپ کو ہر گروپ میں 3 متوازی لیل نمونوں کے ساتھ ڈبل ڈسٹلڈ واٹر کی ایک ہی مقدار سے تبدیل کیا گیا تھا۔ لوگاریتھمک مرحلے میں داخل ہونے کے بعد، زوال کے مرحلے تک ہر 2 گھنٹے بعد نمونے لیے گئے۔ T. thermophila کی کثافت کو خون کے خلیوں کی گنتی کے بورڈ کے ذریعے شمار کیا گیا تھا، اور T. thermophila کی کثافت اور وقت کے درمیان تعلق کھینچا گیا تھا۔

نقلی تجزیہ۔ تجربہ ایک 24-کنویں کی پلیٹ کے ساتھ کیا گیا تھا، اور ہر کنواں 900 μL SPP سے بنا تھا۔ تجرباتی گروپ میں، 100 μL 200 mg/mL G. lucidum aqueous extract شامل کیا گیا۔ اس کے بجائے کنٹرول گروپ کا علاج 100 μL ddH O سے کیا گیا۔ ہر گروپ میں تین متوازی نمونے مرتب کیے گئے تھے۔cistanche زندگی کی توسیعکنٹرول گروپ اور تجرباتی گروپ دونوں لوگارتھمک مرحلے (20 h) میں تھے، اور زوال کا مرحلہ (27h) ٹرانسکرپٹومک تجزیہ کے لیے جمع کیا گیا تھا۔ ہر گروپ کو حیاتیاتی طور پر نقل کیا گیا تھا، اور تمام نمونوں کو مکمل ٹرانسکرپٹ مائیکرو رے پرکھ (بائیو مارکر ٹیکنالوجیز، بیجنگ، چین) کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ جین ایکسپریشن پروفائل کا پتہ Affymetrix 3'IVT ایکسپریشن اری کے ذریعے کیا گیا تھا ویلیو جین کے اظہار کے اثر کو کم کرنے کے لیے، RPKM 5 سے بڑا یا اس کے برابر اور FC (فولڈ چینج) 2 سے بڑا یا اس کے برابر کو اسکرین کے معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ جین اونٹولوجی (GO) اور کیوٹو انسائیکلوپیڈیا آف جینز اینڈ جینومز (KEGG) کے راستے کے تجزیے کو سمجھنے کے لیے مختلف طور پر ظاہر کیے گئے جینز (DEGs) KOBAS کا استعمال کیا گیا تھا۔ افزودگی کے راستے کا تعین درست P-adj قدر 0.05 سے کم یا اس کے مساوی سے کیا گیا تھا۔ ٹرانسکرپٹوم کے نتائج کو مقداری ریورس ٹرانسکرپشن PCR(RT-qPCR) (طریقہ ضمیمہ فائل دیکھیں) کا استعمال کرتے ہوئے تصدیق کی گئی تھی۔ اس کے بعد، STRING ڈیٹا بیس کی بنیاد پر پروٹین-پروٹین انٹریکشن (PPI) نیٹ ورک قائم کیا گیا، اور CytoHubla کا استعمال کرتے ہوئے Cytoscape سافٹ ویئر میں مرکزی نوڈ کی شناخت کے لیے مرکزی جین کی اسکریننگ کی گئی۔

سلور سٹیننگ اور ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (TEM) مشاہدہ۔ سلور سٹیننگ کا طریقہ کار Foissner کے طریقہ 26 کے مطابق تھا۔ تیل خوردبین کے تحت تھرموفیلا کا مشاہدہ کیا گیا تھا۔ T. thermophila کے الٹرا سٹرکچر کو TEM نے دیکھا۔ G.lucidum aqueous extract اور کنٹرول گروپ کے ساتھ علاج کیے گئے T خلیات کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے 600×g پر 2 منٹ کے لیے جمع کیا گیا۔ خلیوں کو 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائڈ میں پہلے سے لگایا گیا تھا اور 8 گھنٹے کے لئے 4 ڈگری پر برقرار رکھا گیا تھا۔ نمونوں کو پی بی ایس (پی ایچ 7.5) سے تین بار دھویا گیا، 5 منٹ کے لیے 3000xg پر سینٹری فیوج کیا گیا، اور پھر 1 فیصد اوسمیم ٹیٹرا آکسائیڈ (4h) کے ساتھ طے کیا گیا۔ اس کے بعد، 15 فیصد سے 100 فیصد گریڈینٹ ایسیٹون کا استعمال کرتے ہوئے پانی کی کمی کی گئی۔ اس کے بعد، خلیوں کو ایمبیڈ 812 (TAAB) کم viscosity رال میں سرایت کیا گیا تھا۔ افٹیل کیورنگ، الٹرا تھین سیکشن (60-80 nm) کو الٹراتھن سلائزر کے ذریعے کاٹا گیا۔ الٹراسٹرکچر کا مشاہدہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (JEOL JEM-1010, Japan) کے ذریعے کیا گیا۔

سیل کے نقصان کا تعین انٹرا سیلولر lROS کا پتہ حساس فلوروسینٹ پروب 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) 27 کے ذریعے کیا گیا تھا۔ مالونڈیالڈہائڈ (MDA) کی سرگرمی کا تعین نانجنگ جیانچینگ بائیو انجینیئرنگ انسٹی ٹیوٹ، جیانگ، چین (نانجینگ) کی فراہم کردہ کمرشل کٹس سے کیا گیا تھا۔ ہائیڈروکسیل ریڈیکلز (·OH) کو ختم کرنے کی صلاحیت کا تعین کرنے کا طریقہ ٹیکمورا28 کے ذریعہ بیان کیا گیا تھا۔ OH فری ریڈیکل کو ختم کرنے کے لیے G. lucidum aqueous extract کی صلاحیت کو تجرباتی گروپ کی نظری کثافت مائنس کنٹرول گروپ کی نظری کثافت کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

Cistanche مخالف عمر رسیدہ کر سکتے ہیں

PHGPx سرگرمی۔ Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)/NADP* تناسب اور glutathione/glutathione disulfide (GSH/GSSG) تناسب کا تعین NADP*/NADPH کوانٹیفیکیشن کٹ (S0179، Beyotime)، GSH/GSSG Assay Kit (S0179، Beyotime)، GSH/GSSG Assay Kit (35SYAll) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ assays کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔

نتائج

T. ther-mochila کی نشوونما پر G.lucidum aqueous extract اور G.lucidum monomers کے اثرات۔ جیسا کہ پچھلے مطالعہ 7، جی. سپیکٹرو فوٹومیٹر کی شناخت (ضمیمہ تصویر S1) کے مطابق اس تجربے میں لوسیڈم پولی سیکرائیڈ G. lucidum aqueous extract کا بنیادی جزو تھا۔ G. lucidum aqueous extract کے فعال مادوں کا بھی GC-MS کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ G. lucidum aqueous extract کے کل ion diagram سے پتہ چلتا ہے کہ ll اجزاء پانی کے عرق میں موجود تھے (ضمیمہ انجیر S2)۔ G.lucidum aqueous extract (ضمنی میزیں S3 اور S4) کے مرکبات میں، G. lucidum acid A، Ganoderal A، اور G. lucidum ergosterol کو ان کے برقرار رکھنے کے وقت اور مماثل ڈگری کے مطابق منتخب کیا گیا تھا۔

G. lucidum aqueous extract اور T. thermophila کی نشوونما پر ان اہم monomers کے اثرات کا موازنہ کرنے کے لیے، G. lucidum aqueous extract اور G. lucidum monomers کے محلول کو T. thermophila کے کلچر میڈیم میں شامل کیا گیا۔ نتائج تصویر 1 میں دکھائے گئے تھے۔ کنٹرول گروپ کی زیادہ سے زیادہ کثافت 24 گھنٹے پر 6×104 سیل/mL تھی۔ G. lucidum aqueous extract گروپ کی سیل کثافت 12 سے 20 h تک تقریباً کنٹرول گروپ کے برابر تھی، لیکن 20 سے 25 گھنٹے تک یہ کنٹرول گروپ کے سیل کثافت سے نمایاں طور پر زیادہ تھی۔cistanche nzاس کے ساتھ ہی، لوگارتھمک مرحلے کو 1 گھنٹے تک لمبا کیا گیا، زیادہ سے زیادہ کثافت 1.15×105 سیلز/ایم ایل تھی۔ اگرچہ G. lucidum polysaccharide گروپ کی زیادہ سے زیادہ کثافت کنٹرول گروپ سے 9.7×104 خلیات/mL زیادہ تھی، لیکن یہ G.lucidum aqueous extract گروپ سے کم تھی۔ G. lucidum acid A، Ganoderal A اور G. lucidum ergosterol کی زیادہ سے زیادہ کثافت کنٹرول گروپ سے زیادہ نہیں تھی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ ان monomers کے الکحل محلول T. thermophila کی نشوونما کے لیے سازگار نہیں تھے۔ یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ مختلف قسم کے فعال مادوں پر مشتمل G.lucidum aqueous extract T. thermophila کی نشوونما کو اس کے monomers سے زیادہ فروغ دے سکتا ہے۔

G. lucidum aqueous extract کا مخالف عمر رسیدہ اثر۔ ثقافت کا وقت بڑھنے کے ساتھ، زوال کے مرحلے (تصویر 2b) میں ROS کی روشنی کی شدت لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 2a) سے زیادہ تھی۔ G. lucidum aqueous extract کو شامل کرنے کے بعد، اگرچہ کمی کے مرحلے (Fig. 2d) کی فلوروسینس کی شدت کو لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 2c) کے مقابلے میں اب بھی بڑھایا گیا تھا، لیکن یہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ کنٹرول گروپ میں MDA کا مواد بھی لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 2e) کی نسبت زوال کے مرحلے میں زیادہ تھا۔ دریں اثناء زوال کے مرحلے میں OH کی صفائی کی صلاحیت لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 2e) سے کم تھی۔ آکسیکرن اور کمی کے درمیان توازن کھو گیا اور جسم بوڑھا ہو گیا۔ G. lucidum aqueous extract کو شامل کرنے کے بعد، MDA کا مواد کنٹرول گروپ میں اس سے کم تھا (تصویر 2e میں بائیں کالم)، اور لوگاریتھمک مرحلے اور زوال کے مرحلے میں خلیات کے ذریعے نکالے گئے OH کی مقدار اس سے زیادہ تھی۔ کنٹرول گروپ (تصویر 2e میں دائیں کالم)۔ T[تھرموفلا کی نشوونما کا موازنہ اس کے سیلولر نقصان کے ذریعے کثیر خلوی جانداروں کی عمر بڑھنے کے عمل سے کیا جا سکتا ہے۔ جیسے جیسے ROS اور MDA جمع ہوئے، ترقی روک دی گئی اور T. thermophila کی کثافت کم ہو گئی۔ G. lucidum aqueous extract کا اضافہ T. thermophila میں redox کے توازن کو برقرار رکھ سکتا ہے اور عمر مخالف اثرات حاصل کر سکتا ہے۔

RT-qPCR کے ذریعہ امتیازی طور پر اظہار کردہ جینوں کا تجزیہ اور تصدیق۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، T. thermophila کے لوگاریتھمک مرحلے میں 11,519 جینوں کا اظہار SPP میں G. lucidum aqueous extract شامل کرنے کے بعد نمایاں طور پر تبدیل ہوا۔ ان میں سے 6201 جینز اپ ریگولیٹ اور 5318 جینز کو ڈاون ریگولیٹ کیا گیا۔cistanche عضو تناسل کا سائززوال کے مرحلے کے دوران 8772 جینز کا اظہار نمایاں طور پر تبدیل ہوا، جن میں سے 4721 جینز اپ ریگولیٹ اور 4051 جینز کو نیچے ریگولیٹ کیا گیا۔ ہماری لیبارٹری میں پچھلے مطالعات میں،

Stylonychia پر G.lucidum کا عمر مخالف اثر اینٹی آکسیڈینٹ انڈیکس میں ظاہر ہوا، اس لیے اینٹی آکسیڈنٹس سے متعلق 10 جینز (ضمنی جدول S5) کو تصادفی طور پر DEGs میں سے منتخب کیا گیا، اور RNA-seq ڈیٹا کی درستگی کی تصدیق RT- کے ذریعے کی گئی۔ کیو پی سی آر لوگاریتھمک مرحلے اور زوال کے مرحلے میں ان 10 جینوں کے اظہار کے نمونے RNA-seq ڈیٹا (ضمنی شکل S3) کے رجحان سے مطابقت رکھتے تھے۔ نتیجہ نے اشارہ کیا کہ RNA-seq ڈیٹا قابل اعتماد تھا اور اسے بعد کے تجزیے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔

GO افزودگی اور KEGG راستے کا تجزیہ۔ لوگاریتھمک مرحلے میں ڈی ای جیز 14 حیاتیاتی عمل (BP) میں 6 قسم کے مالیکیولر فنکشنز (MF) کے ساتھ شامل تھے اور وہ تمام خلیے کے اجزاء (CC) (تصویر 3a) میں موجود تھے۔ زوال کے مرحلے میں ڈی ای جیز 4 قسم کے ایم ایف کے ساتھ 12 بی پی میں شامل تھے اور وہ 12 سی سی میں موجود تھے دو مراحل میں سب سے زیادہ ملوث بی پی میٹابولک عمل تھا، ایم ایف بائنڈنگ تھا، اور سی سی میمبرین تھا۔ میٹابولک عمل، بائنڈنگ اور میمبرین میں، اپ ریگولیٹڈ جینز لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 3b) میں 70 فیصد اور زوال کے مرحلے (تصویر 3c) میں 75 فیصد تھے۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ G. lucidum aqueous extract دونوں مراحل میں سیل جھلی کی سالمیت کی بحالی کو فروغ دے سکتا ہے۔

کے ای جی جی پاتھ وے کی افزودگی کا تجزیہ دونوں مراحل کے درمیان ڈی ای جی کا مزید تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا۔ لوگاریتھمک مرحلے میں، 94 راستے مرتکز تھے، جن میں سے 68 فیصد کل جین میٹابولزم میں شامل تھے۔ زوال کے مرحلے میں، 91 راستے افزودہ ہوئے، جن میں میٹابولزم اب بھی سب سے بڑا راستہ تھا، جس کا 68 فیصد حصہ تھا۔ لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 3d) اور زوال کے مرحلے (تصویر 3e) میں سرفہرست 20 راستے ببل چارٹ بنانے کے لیے استعمال کیے گئے تھے اور یہ ظاہر کیا گیا تھا کہ اس میں شامل جینز کی اہمیت یا تعداد سے قطع نظر، G کا اثر۔cistanche پاؤڈرlucidum aqueous extract بنیادی طور پر glutathione میٹابولزم کے راستے پر مرکوز ہے۔ لوگارتھمک مرحلے میں، اس راستے میں 38 مختلف جینز کو افزودہ کیا گیا، جو کہ 45 فیصد ہے۔ زوال کے مرحلے میں، اس راستے میں 43 مختلف جینز کو افزودہ کیا گیا، جو کہ 50 فیصد ہے۔

ڈی ای جی کے پروٹین-پروٹین انٹرایکشن (پی پی آئی) نیٹ ورک۔ گلوٹاتھیون میٹابولزم پاتھ وے میں ڈی ای جیز کی وضاحت اور دیگر پروٹینز کے ساتھ ان کے تعامل کی بصیرت سے G. لوسیڈم آبی عرق کے ممکنہ ریگولیٹری میکانزم کو مزید دریافت کرنے میں مدد ملے گی۔ دونوں لوگارتھمک مرحلے (Fig.4a) اور زوال کے مراحل (Fig.4b) کے GPX1، GPX2، GPX7 اور GPX11 پر سب سے اہم اثرات مرتب ہوئے۔ TetraFGD ڈیٹا بیس کے استفسار کے ذریعے، یہ GPX خامروں کا تعلق PHGPx (ضمنی جدول S6) سے تھا۔ لہذا، اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، خاص طور پر PHGPx، G. lucidum aqueous extract کے ذریعے T. thermophila کی افزائش کو فروغ دینے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔

GPS سرگرمی اور فنکشن کی تصدیق۔ PHGPx کی سرگرمی سے مراد NADPH جذب میں کمی کی شرح ہے کلچر کے وقت میں اضافے کے ساتھ کمی واقع ہوئی۔ جی لوسیڈم آبی نچوڑ کو شامل کرنے کے بعد، زوال کے مرحلے میں NADPH/NADP پلس ویلیو ابھی بھی لوگاریتھمک مرحلے کے مقابلے میں کم تھی، لیکن کنٹرول گروپ کے دونوں مراحل سے زیادہ تھی۔ اس نتیجہ نے اشارہ کیا کہ G.lucidum aqueous extract PHGPx کی سرگرمی کو فروغ دے سکتا ہے۔

PHP خاص طور پر فاسفولیپڈ ہائیڈروپر آکسائیڈ کی کمی کو کم گلوٹاتھیون (GSH) کے ذریعے متحرک کر سکتا ہے، تاکہ زہریلے لپڈ پیرو آکسائیڈ (PL-PUFA-OOH) کو غیر زہریلے پولی ان سیچوریٹڈ فیٹی ایسڈز (PL-PUFA-OH) میں مؤثر طریقے سے تبدیل کیا جا سکے۔ GSH/GSSH تناسب کی تبدیلی PL-PUFA-OOH اور PL-PUFA-OH کی تبدیلی کی عکاسی کر سکتی ہے PHGPx سرگرمی (تصویر 5a) میں کمی کی وجہ سے، کنٹرول گروپ میں GSH/GSSH کا تناسب بھی کم ہو گیا ثقافت کے وقت میں اضافہ (تصویر 5b)۔ تاہم، G.lucidum aqueous extract شامل کرنے کے بعد، logarithmic مرحلے اور تنزلی کے مرحلے میں GSH/GSSH کا تناسب بڑھا دیا گیا۔ تجرباتی گروپ میں انٹرا سیلولر زہریلا PL-PUFA-OOH غیر زہریلا PL-PUFA-OH میں تبدیل ہوا، جو کنٹرول گروپ سے زیادہ تھا۔ مائکروسکوپک مورفولوجی اور الٹراسٹرکچر کا مشاہدہ۔ جھلی پر G. Luci-dum aqueous extract کے حفاظتی اثر کو امونیا سلور سٹیننگ اور TEM کے ذریعے تصور کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ کے لوگارتھمک مرحلے (تصویر 6a) اور کنٹرول گروپ کے زوال کے مرحلے (تصویر 6c) کا موازنہ کرتے ہوئے، یہ پایا گیا کہ ٹی تھرموفیلا کی سیل مورفولوجی ثقافت کے وقت کی توسیع کے ساتھ سنجیدگی سے بگڑ گئی تھی، اور مرکزہ دھندلا ہوا تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ خلیات عمر رسیدہ حالت میں ہیں۔ تاہم، G.lucidum aqueous extract گروپ میں، خلیات کی شکل اور سالمیت کو لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 6e) اور زوال کے مرحلے (تصویر 6 جی) میں اچھی طرح سے محفوظ کیا گیا تھا۔ خلیوں میں الٹراسٹرکچرل تبدیلیاں TEM کے ذریعہ دیکھی گئیں۔ کنٹرول گروپ میں لوگاریتھمک مرحلے (تصویر 6b) کے مقابلے میں زوال کے مرحلے (تصویر 6 ڈی) میں مائٹوکونڈریل کا رج اور سموچ دھندلا ہوا تھا۔ ثقافت کے وقت کی توسیع کے ساتھ مائٹوکونڈریا کی کشی میں اضافہ ہوا۔ G. lucidum aqueous extract کے اضافے نے logarithmic مرحلے (تصویر 6f) اور زوال کے مرحلے (تصویر 6h) میں مائٹوکونڈریا کی شکل کو بہتر کیا۔ G. lucidum aqueous extract mitochondria کے کام کی ضمانت دیتا ہے، جو جھلی کی سالمیت سے گہرا تعلق رکھتا ہے۔ واضح رہے کہ لوگاریتھمک مرحلے میں، تجرباتی گروپ میں مائٹوکونڈریا نے مورفولوجیکل تبدیلیاں ظاہر کیں (تصویر 6f، h)، لیکن جھلی کی سالمیت متاثر نہیں ہوئی۔

بحث

G.lucidum ارک کے استعمال کی روایتی چینی طب اور مشرقی ایشیا دونوں میں ایک طویل تاریخ ہے۔ مطالعہ کی ایک بڑی تعداد نے ان کی افادیت ظاہر کی ہے. پچھلی رپورٹس سے پتا چلا ہے کہ G.lucidum aqueous extract میں نہ صرف G. lucidum polysaccharides بلکہ Glucidum triterpenoids بھی شامل ہیں۔ پچھلی رپورٹس کے مطابق، Ganoderma acid، Ganoderma aldehyde، اور Ganoderma ergosterol G. lucidum triterpene 3 کے اہم اجزاء ہیں۔ یہ خلیے کی مرمت کے مختلف افعال کے ساتھ کام کرتے ہیں (ٹیبل 1)۔ Ganoderma lucidum aqueous extract مختلف قسم کے فعال مادوں پر مشتمل ہوتا ہے، جو دیگر چار فعال مادوں کے افعال کو مربوط کرتا ہے، جو نہ صرف آکسیکرن کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے بلکہ جھلی کی سالمیت کو بھی برقرار رکھتا ہے۔ اس مطالعہ میں،

T. thermophila پر G. lucidum aqueous extract کی ترقی کو فروغ دینے نے اس شمولیت کے تعلق کی تصدیق کی۔ کل آئن فلو کرومیٹوگرافی (ضمنی شکل S2) کے ذریعے G. lucidum aqueous extract کے تجزیہ کے ذریعے یہ معلوم کیا جا سکتا ہے کہ مختلف فعال مادوں کی تحلیل کا وقت مختلف تھا۔ لہذا G. lucidum آبی عرق ابلتے وقت کی توسیع کے ساتھ ایک پیچیدہ نامیاتی سالوینٹ بن جاتا ہے۔ ہمارا خیال ہے کہ G.lucidum aqueous extract میں فعال مادے مختلف اوقات میں کام کر سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں ہم آہنگی پیدا ہوتی ہے۔ یہ مستقبل میں مزید مطالعہ ہونا چاہئے.

T. thermophila transscriptome کے تجزیے نے G. lucidum aqueous extract کے جین کے اظہار پر نمو کے دوران اثر کا پتہ لگایا۔ G. lucidum aqueous extract کے ساتھ علاج کے بعد، PHGPx سیل کی کثافت اور نسل کے وقت میں ایک اہم اثر و رسوخ ظاہر ہوا۔ اس نتیجے نے اس بات کی تصدیق کی کہ G.lucidum aqueous extract نے GPX فیملی کی سیلینیم پر منحصر قسم پر کام کیا۔ پی ایچ پی ایک ملٹی فنکشنل سیلینو پروٹین ہے جو جسم میں وسیع پیمانے پر تقسیم ہوتا ہے جو نہ صرف اینٹی آکسیڈنٹ رد عمل میں حصہ لے سکتا ہے بلکہ جھلی کے نظام کی سالمیت کی حفاظت کے لیے جھلی کے لپڈ کو بھی براہ راست کم کر سکتا ہے۔ دیگر GPXs کے مقابلے میں، PHGPx کا حجم کم اور ہائیڈروفوبیسیٹی زیادہ ہے۔ بہت سی رپورٹوں نے یہ ثابت کیا ہے کہ خلیوں میں PHGPx اوور ایکسپریشن اینڈوجینس (مثال کے طور پر عمر رسیدہ) fl اور exogenous (مثلاً ماحولیاتی) پیرو آکسیڈیشن نقصان کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے۔ PHP واحد انزائم ہے جو براہ راست PL-PUFA کو کم کر سکتا ہے۔ متعلقہ ہائیڈروکسیل مرکبات میں جھلی کا OOH، اس طرح پیرو آکسیڈیشن کو ختم کرنے اور حیاتیاتی جھلی کو پیرو آکسیڈیشن کے نقصان سے بچاتا ہے4647۔ PL-PUFA-OOH کے مواد میں اضافہ زوال کے مرحلے کے دوران کنٹرول گروپ میں خلیے کی جھلی کے نقصان کی وجہ تھا، جو ایک شیطانی چکر بن گیا اور خلیے کی سنسنی کو تیز کر دیا۔ اس تحقیق میں، ROS اور MDA کے مواد (تصویر 2) کنٹرول گروپ میں T.thermophila کی کلچر ٹائم میں اضافہ کے ساتھ اضافہ ہوا۔ مورفولوجیکل مشاہدے کے ذریعے زوال کے مرحلے میں جھلی میں سنگین اخترتی نظر آئی۔ تاہم، جب G. lucidun aqueous extract کو شامل کیا گیا تو PHGPx کے اظہار کو باقاعدہ بنایا گیا۔ اس طرح، جھلی پر PL-PUFA-OOH غیر زہریلا PL-PUFA-OH میں تبدیل ہو گیا تھا، اور جھلی کے ڈھانچے کے استحکام کو لوگاریتھمک مرحلے اور زوال کے مرحلے دونوں میں بڑھایا جاتا ہے۔ امونیا سلور سٹیننگ اور TEM کے ذریعے جھلی کے مشاہدے کے مطابق، یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ G.lucidum aqueous extract نمو کے عمل کے دوران خلیے کی جھلی میں داخل ہوا۔ خلیے کی جھلی پر یہ مرمتی اثر G. lucidum aqueous extract کے فعال مادوں کو cytoplasm میں داخل کرنے اور T. thermophila کے میٹابولزم کو فروغ دینے اور عمر مخالف اثرات کو حاصل کرنے کے لیے نیوکلئس اور mitochondria کی جھلی کی ساخت کی حفاظت کر سکتا ہے۔ جیسا کہ lKEGG افزودگی کے نتائج سے ظاہر ہوتا ہے، بڑی تعداد میں امتیازی جین میٹابولک راستوں میں مرکوز ہیں۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ G. lucidum aqueous extract glutathione کے میٹابولزم اور سیل کی عمر بڑھنے سے پیدا ہونے والے زہریلے پیرو آکسائیڈز کے خاتمے کے لیے فائدہ مند تھا۔

عام طور پر، G. lucidum aqueous extract نے GPX فیملی میں سیلینیم پر منحصر انزائم PHGPx کے اظہار کو فروغ دیا۔ PHGPx سرگرمی میں اضافہ نہ صرف Vivo میں آکسیڈیٹیو تناؤ کے ردعمل کو کم کر سکتا ہے بلکہ حیاتیاتی جھلی کے لپڈ جمع کو خاص طور پر اور مؤثر طریقے سے کم کر سکتا ہے اور جھلی کی سالمیت کو برقرار رکھتا ہے (تصویر 7)۔ نتیجتاً، G. lucidum aqueous extract میں موجود فعال مادے برقرار جھلی کے ذریعے خلیات میں داخل ہوتے ہیں اور ان کے میٹابولزم کو فروغ دیتے ہیں۔ اس نے اینٹی ایجنگ کے اثر کو حاصل کرنے کے لیے ایک نیک سائیکل بنایا۔

یہ مضمون Scientifc رپورٹس سے ماخوذ ہے۔ (2022) 12:3139|https://doi.org/10.1038/s41598-022-06985-z