Gao-Zi-Yao پرانے اچانک ہائی بلڈ پریشر والے چوہوں میں سیکھنے اور یادداشت کے فنکشن کو بہتر بناتا ہے حصہ 2
Feb 19, 2024
تجرباتی جانور
نانجنگ اینیمل ماڈل سنٹر سے بارہ ماہ کے اور آٹھ ہفتے کے نر سپانٹینیوس ہائی بلڈ پریشر چوہے (SHR) خریدے گئے تھے۔
8-ہفتہ پرانے مردوں اور یادداشت کے درمیان ایک مضبوط رشتہ ہے۔ اس عرصے کے دوران، نر مخلوق کا دماغ تیزی سے ترقی کر رہا ہے، اور اس کے نیوران کے درمیان رابطے آہستہ آہستہ بڑھ رہے ہیں، جس کے نتیجے میں اس کی یادداشت کی نشوونما متاثر ہوتی ہے۔
تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ نر مخلوق کی یادداشت عمر کے ساتھ ساتھ بہتر ہوتی رہتی ہے۔ اس سے نہ صرف ان کی بقا اور تولید پر خاصا اثر پڑتا ہے بلکہ انہیں ماحول سے بہتر طور پر ہم آہنگ ہونے اور نئے چیلنجوں سے نمٹنے میں بھی مدد ملتی ہے۔
لہذا، ہمیں نوجوان مردوں کو مختلف قسم کی فائدہ مند سرگرمیوں میں حصہ لینے کے لیے فعال طور پر حوصلہ افزائی کرنی چاہیے، جیسے کہ پہیلیاں حل کرنا، نئی مہارتیں سیکھنا، اور نئے شعبوں کی تلاش۔ یہ سرگرمیاں ان کے دماغ کو متحرک کرتی ہیں، جس سے وہ تیزی سے نشوونما پاتے ہیں اور ان کی یادداشت کی صلاحیتوں کو بہتر بناتے ہیں۔
اس کے ساتھ ساتھ ہمیں نوجوان نر مخلوق کے لیے موزوں ماحول اور ماحول بھی فراہم کرنا چاہیے۔ انہیں محفوظ اور قریب محسوس کرنا ان کے دماغ کی نشوونما کو فروغ دے سکتا ہے اور ان کی یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے۔
مختصراً، ہمیں نوجوان مردوں کی یادداشت کو بہتر بنانے میں مدد کرنے کے لیے ہر ممکن کوشش کرنی چاہیے تاکہ وہ ہوشیار، زیادہ پر اعتماد اور قابل مخلوق بنیں۔ یہ نہ صرف ان کی ذاتی ترقی کے لیے سازگار ہے بلکہ پوری نسل کی خوشحالی اور بقا کے لیے بھی ہے۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے، اور Cistanche deserticola نمایاں طور پر یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے، کیونکہ Cistanche deserticola میں اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی انفلامیٹری، اور اینٹی ایجنگ اثرات ہوتے ہیں، جو دماغ میں آکسیڈیٹیو اور سوزش کے رد عمل کو کم کرنے میں مدد کر سکتے ہیں، اس طرح دماغ کی حفاظت کرتا ہے۔ اعصابی نظام کی صحت. اس کے علاوہ، Cistanche deserticola عصبی خلیوں کی نشوونما اور مرمت کو بھی فروغ دے سکتا ہے، اس طرح عصبی نیٹ ورکس کے رابطے اور کام کو بڑھاتا ہے۔ یہ اثرات یادداشت، سیکھنے اور سوچنے کی رفتار کو بہتر بنانے میں مدد کر سکتے ہیں، اور ادراک کی خرابی اور نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کی نشوونما کو بھی روک سکتے ہیں۔
یادداشت کو بڑھانے کے لیے سپلیمنٹس جاننے پر کلک کریں۔
اس ماڈل میں، ہائی بلڈ پریشر 4 ماہ کی عمر میں 6 ماہ کی عمر تک دماغی مائیکرو ویسکولیچر میں ہائی بلڈ پریشر سے متعلق تبدیلیوں کی ظاہری شکل کے ساتھ شروع ہوتا ہے [37]۔
چوہوں کو معیاری حفظان صحت کے ساتھ بہترین حالات میں رکھا گیا تھا، 12/12 لائٹ/ڈارک سائیکل کے ساتھ 25 ڈگری کے درجہ حرارت پر رکھا گیا تھا، اور معیاری چوہوں کے چاؤ اور پانی کے اشتیاق کے ساتھ کھلایا گیا تھا۔
تمام طریقہ کار SoochowUniversity کی طرف سے قائم کردہ جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے رہنما خطوط کے مطابق منظور کیے گئے اور انجام دیے گئے، جو ہماری پچھلی رپورٹ کے مطابق ہے[35]۔
تجربات لیبارٹری جانوروں کے استعمال کے لیے قومی ادارہ صحت کے رہنما خطوط (NIH، اشاعت نمبر 85–23، نظر ثانی شدہ 1996) کے مطابق کیے گئے۔ موجودہ مطالعہ ARRIVE رہنما خطوط کے ذریعہ رپورٹ کیا گیا ہے۔
عمر پر قابو پانے کے لیے آٹھ ہفتے پرانا SHR لاگو کیا گیا تھا (SHR-Young, n=10)۔ بارہ ماہ کے چوہوں کا علاج گاو-زی-یاو کے ساتھ یا اس کے بغیر آست پانی (اولڈ ایس ایچ آر-سی، این=10)، کم خوراک (پرانا ایس ایچ آر-ایل، این=10)، درمیانی خوراک کے لیے کیا جاتا تھا۔ (Old SHR-M, n=10), زیادہ خوراک (Old SHR-H, n=10) گیسٹرک فیڈنگ کے ذریعے۔
کم، درمیانے، اور اعلی گاو-زی-یاو کی خوراکیں 1/2-، 1- کے برابر، طبی مریض کی درخواست کے لیے تین گنا خوراکیں جسم کی سطح کے رقبے کے حساب سے شمار کی جاتی ہیں۔ Gao-Zi-Yao کو درخواست سے پہلے 5 ملی لیٹر آست پانی میں تحلیل کیا گیا تھا اور 4 ہفتوں تک ایک بار ڈیری کا انتظام کیا گیا تھا۔
ٹیل-کف طریقہ سے ہر ہفتے بلڈ پریشر اور دل کی شرح کی نگرانی کی جاتی تھی، اور ہمارے پچھلے مشاہدے کے مطابق ہر ہفتے جسمانی وزن کی بھی نگرانی کی جاتی تھی [35]۔
4 ہفتوں کے بعد، مورس واٹر بھولبلییا کا تجربہ کیا گیا، اور سوڈیم پینٹوباربیٹل (50 mg/kg ip) کے ذریعے چوہوں کو اینستھیزیا کے تحت قربان کیا گیا، مزید تجزیہ کے لیے ہپپوکیمپس ٹشو جمع کیا گیا۔ تمام تجرباتی پروٹوکول سوچو یونیورسٹی کی اخلاقیات لائسنسنگ کمیٹی کے ذریعہ منظور کیے گئے تھے۔
مورس واٹر بھولبلییا کا تجربہ
مورس واٹر بھولبلییا کا تجربہ (BW-MWM101، Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, China) کچھ ترمیم کے ساتھ پہلے بیان کیا گیا تھا [38]۔ ٹیسٹ کی منصوبہ بندی 6 دنوں کے لیے کی گئی تھی، دن 1 سے 5 تک تربیتی مدت کے لیے تھے، اور دن 6 ٹیسٹ کے نتائج کے لیے تھا۔
چوہوں نے 2 منٹ ڈیری کے لیے تربیت حاصل کی، پلیٹ فارم پر بورڈنگ کے لیے تاخیر کے وقت کے طور پر ریکارڈنگ کا وقت۔ چھٹے دن پلیٹ فارم کو ہٹا دیا گیا۔ چوہوں کو سب سے زیادہ فاصلے کے کواڈرینٹ میں ڈالا گیا اور تیراکی کی رفتار 2 منٹ تک ریکارڈ کی گئی۔
سافٹ ویئر کے ذریعہ سیکھنے اور میموری کے فنکشن کے پیرامیٹرز کا حساب لگایا گیا تھا۔
ELISA کے ذریعہ NO کے سیرم کی سطح اور سوزش کے عوامل کی پیمائش
NO (کیٹلاگ نمبر: S0023)، IL-1 (کیٹلاگ نمبر: A301BH80153)، IL-2 (کیٹلاگ نمبر:A31038348)، IL-6 (کیٹلاگ نمبر: A30681042)، andTNF- (کیٹلاگ نمبر: A38280855) تجارتی طور پر دستیاب ELISA کٹس (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzyme Research. Shanghai, China) کی پیمائش کر رہے تھے۔ تمام اقدامات کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق کیے گئے تھے۔
نسل کا داغ لگانا
چوہے کے ہپپوکیمپس ٹشو کو الگ تھلگ، فکسڈ، پیرافین ایمبیڈ کیا گیا، پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 5-10 منٹ کے لیے 1٪ ٹولیوڈین بلیو سٹیننگ سلوشن میں انکیوبیٹ کیا گیا۔ دس حصوں کو آست پانی میں دھویا گیا، 95٪ ایتھنول میں 5–30 منٹ تک بھگو دیا گیا، اور 100٪ ایتھنول میں پانی کی کمی ہوئی۔
پانی کی کمی کے بعد، ٹکڑا زائلین میں رکھا گیا تھا اور رال میڈیم کا استعمال کرتے ہوئے کور پھسل گیا تھا۔ ہپپوکیمپس کے CA1، CA2، اور ڈینٹیٹ گائرس (DG) علاقوں میں نیوران کی تعداد کا امیج جے تجزیہ پروگرام کا استعمال کرتے ہوئے مشاہدہ اور تجزیہ کیا گیا۔
سیکھنے اور میموری سے متعلق پروٹین کے لیے مغربی دھبہ
سیکھنے اور میموری سے متعلق پروٹین کے لئے مغربی دھبہ انجام دیا گیا جیسا کہ ہماری پچھلی رپورٹ میں کچھ ترمیم کے ساتھ بیان کیا گیا ہے [39]۔
Hippocampustissues کو RIPA بفر (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7.0) کے ساتھ ہم آہنگ کیا گیا تھا جس میں phenylmenthanesulfonyl fluoride (R&D Systems Inc., Minneapolis, US) شامل تھے۔ ہوموجینیٹس کو 12،000 × g پر 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر سینٹرفیوج کیا گیا۔
سیل پروٹین کو SDS-PAGE کے ذریعے الگ کیا گیا اور PVDF جھلیوں میں منتقل کیا گیا (Hybond TM-ECL؛ AmershamPharmacia Biotech, Inc.)۔ جھلیوں کو PBS میں 5% نان فیٹ دودھ اور کمرے کے درجہ حرارت پر 0.1% ٹوین-20 میں بلاک کیا گیا تھا۔
اس کے بعد دھبے پرائمری اینٹی باڈی کے ساتھ لگائے گئے: اینٹی گلوٹامیٹ ریسیپٹر 1(1:1000، Abcam، Inc.، کیٹلاگ نمبر: ab183797)، AntiNMDAR2B اینٹی باڈی (1:1000، Abcam، Inc.، کیٹلاگ نمبر: ab28373)، اینٹی فاسفو -CaMKII اینٹی باڈی (1:1000، Abcam, Inc.، کیٹلاگ نمبر: ab171095)، Antiphospho-CREB اینٹی باڈی (1:1000، Abcam، Inc.، کیٹلاگ نمبر: 32096) یا اینٹی GAPDH (سانتا کروز بائیوٹیک، انکارپوریشن، کیٹلاگ نمبر: sc-47724)۔
اس کے بعد، جھلیوں کو ثانوی اینٹی باڈی (HRPconjugated anti-rabbit Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. کیٹلاگ نمبر: ab205718) کے ساتھ 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد جھلیوں کو TBS-T کا استعمال کرتے ہوئے 15 منٹ تک تین بار دھویا گیا تاکہ کیمیلومینیسینٹ ریجنٹس (ECL، R&D Systems Inc.، Minneapolis، MN، USA) کے ساتھ 1 منٹ تک انکیوبیشن سے پہلے اضافی باڈیز کو دور کیا جا سکے۔
مزید برآں، الیکٹروفورسس جیل تجزیہ نظام (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA) کے ذریعے مدافعتی بینڈز کا پتہ چلا۔ بینڈز کی شدت کا تجزیہ امیج جے سافٹ ویئر کے ذریعے کیا گیا۔ ہدف پروٹین کی مقدار کو GAPDH اظہار کے ذریعہ معمول بنایا گیا تھا [39]۔
شماریاتی تجزیہ
SPSS 18۔{1}} سافٹ ویئر شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کو وسط کے طور پر پیش کیا جاتا ہے ±SEM Groupeddata کو تغیر کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا جاتا ہے جس کے بعد طالب علم – نیومین – کیولس ٹیسٹ ہوتا ہے۔ A Pvalue < 0.05 کو ہماری پچھلی رپورٹ میں شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا [35]۔
نتائج
سسٹولک بلڈ پریشر (SBP)، دل کی دھڑکن، اور نوجوان SHR اور بوڑھے SHR کے درمیان جسمانی وزن
یونگ ایس ایچ آر نے پرانے ایس ایچ آر کے مقابلے پہلے دو ہفتوں میں کم ایس بی پی دکھایا، پھر بعد کے تین ہفتوں میں بڑھ کر دونوں گروپوں کے درمیان کوئی فرق نہیں ہوا (تصویر 2 اے)۔
اس کے برعکس، پہلے دو ہفتوں میں دونوں گروپوں کے درمیان دل کی دھڑکن میں کوئی فرق نہیں تھا، پھر نوجوان SHR میں بعد کے تین ہفتوں میں پرانے SHR کے مقابلے میں نمایاں اضافہ ہوا (تصویر 2B)۔ نوجوان SHR نے پورے مشاہدے کے دوران پرانے SHR کے مقابلے میں کم جسمانی وزن ظاہر کیا (تصویر 2C)۔
نوجوان SHRand بوڑھے SHR کے درمیان مورس واٹر میز پیرامیٹرز
ہپپوکیمپل پر منحصر سیکھنے اور یادداشت کا تعین کرنے کے لیے، مورس واٹر میز تجربہ کیا گیا۔ پرانے SHR نے نوجوان SHR (تصویر 3A) کے مقابلے میں پہلے چار دنوں میں طویل فرار ہونے میں تاخیر دکھائی۔
ٹارگٹ کواڈرینٹ کو عبور کرنے کے اوقات نوجوان SHR (تصویر 3B) کے مقابلے پرانے ایس ایچ آر میں کم تھے۔
ٹارگٹ پلیٹ فارم کواڈرینٹ میں وقت کا فیصد نوجوان SHR (تصویر 3C) کے مقابلے میں کم انولڈ SHR تھا۔ کواڈرینٹ میں راستے کی لمبائی کا فیصد بھی پرانے SHR (تصویر 3D) کے مقابلے پرانے SHR میں چھوٹا تھا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ پرانے SHR کو علمی فعل میں خرابی ہے۔
نوجوان SHR اور بوڑھے SHR کے درمیان ہپپوکیمپس میں نیوران کی تعداد
ہپپوکیمپس کے مختلف علاقوں میں نیوران کی تعداد نسل سٹیننگ کے ذریعہ شمار کی جاتی ہے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ نوجوان SHR (تصویر 4) کے مقابلے CA1، CA2، اور پرانے SHR کے DGregions میں نیوران کی تعداد کم ہے۔
نوجوان SHR اور بوڑھے SHR کے درمیان ہپپوکیمپس میں سیکھنے اور یادداشت سے متعلق پروٹین اظہار
مغربی دھبے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ پرانے ایس ایچ آر ہپپوکیمپس میں سیکھنے اور یادداشت سے متعلق پروٹین (GluR1, NMDAR 2B, phosphorylated-CaMK II, اور phosphorylated-CREB) کا اظہار نوجوان SHRhippocampus (تصویر 5) سے کم تھا۔
پرانے SHR میں SBP، دل کی دھڑکن اور جسمانی وزن پر Gao-Zi-Yao کا اثر
اسٹیٹ بینک پر Gao-Zi-Yao کے اثرات کا تجزیہ کیا گیا۔ Gao-Zi-Yao کی کم خوراک کے ساتھ علاج پرانے SHR میں دوسرے ہفتے سے چوتھے ہفتے تک SBP میں واضح طور پر کمی واقع ہوئی ہے جبکہ کنٹرول پرانے SHR گروپ کے مقابلے میں، Gao-Zi-Yao کی درمیانی اور زیادہ خوراکیں پرانے SHR میں پہلے ہفتے سے SBP میں واضح طور پر کمی آئی ہے۔ کنٹرول پرانے SHR (تصویر 6A) کے مقابلے میں چوتھا ہفتہ۔ Tese کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Gao-Zi-Yao میں اینٹی ہائپرٹینسیس اثر کا استعمال ہوتا ہے inold SHR۔
ہم نے Gao-Zi-Yaoon دل کی شرح اور جسمانی وزن کے اثرات کے اعداد و شمار کا بھی موازنہ کیا۔ ہمارے اعداد و شمار نے ثابت کیا کہ مشاہدے کی پوری مدت کے دوران تمام گروپوں کے درمیان دل کی دھڑکن اور جسمانی وزن میں کوئی خاص فرق نہیں تھا (تصویر 6B، C)۔
پرانے SHR میں NO، IL‑1، IL‑2، اور TNF‑ کے سیرم کی سطح پر گاؤ-زی-یاو کا اثر
GAO-ZIYAO کی درمیانی اور زیادہ خوراکوں کے ساتھ علاج نے SHR کنٹرول گروپ (تصویر 7A) کی سطح کے مقابلے میں سیرم NO کی سطح میں اضافہ کیا۔ GAO-ZI-YAO کی تمام جانچ شدہ خوراکوں کے ساتھ علاج نے IL-1 , IL-2 کے سیرم لیول کو SHR کنٹرول گروپ (تصویر 7B, C) کے مقابلے میں کم کر دیا۔ تاہم، صرف GAO-ZI-YAO کی زیادہ خوراک نے TNF- (تصویر 7D) کے سیرم کی سطح کو دبایا۔
یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ GAO-ZI-YAO آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش کو منظم کر سکتا ہے۔
For more information:1950477648nn@gmail.com
