Glutathione میٹابولزم تربیت یافتہ استثنیٰ کو شامل کرنے میں معاون ہے۔

خلاصہ:

پیدائشی مدافعتی نظام ہیٹرولوگس میموری کی خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے، جو ثانوی چیلنج کے لیے مضبوط ردعمل کی خصوصیت ہے۔ تربیت یافتہ استثنیٰ کہلانے والے اس رجحان کا انحصار پیدائشی مدافعتی خلیوں کی ایپی جینیٹک اور میٹابولک ری وائرنگ پر ہوتا ہے۔ چونکہ ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی پیداوار تربیت یافتہ استثنیٰ فینوٹائپ سے وابستہ ہے، ہم نے قیاس کیا کہ ROS کی بڑھتی ہوئی سطح اور مرکزی انٹرا سیلولر ریڈوکس مالیکیول گلوٹاتھیون تربیت یافتہ استثنیٰ کو شامل کرنے میں کردار ادا کرتے ہیں۔ یہاں ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ تربیت یافتہ استثنیٰ کے ان وٹرو ماڈل میں ROS کی فارماسولوجیکل روکنا سیل ردعمل کو متاثر نہیں کرتا تھا۔ گلوٹاتھیون کی سطحوں کی ترمیم نے انسانی مونوکیٹس میں سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار کو کم کردیا۔ گلوٹاتھیون میٹابولزم میں شامل جینوں میں سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفزم (SNPs) تربیت یافتہ استثنیٰ پر proinflammatory cytokine کی پیداواری صلاحیت میں تبدیلیوں سے وابستہ پائے گئے۔

نیز، پلازما گلوٹاتھیون کا ارتکاز سابق ویوو IL-1 کی پیداوار کے ساتھ مثبت طور پر وابستہ تھا، جو تربیت یافتہ استثنیٰ کا ایک بایو مارکر ہے، جو BCG کے ٹیکے لگائے جانے والے افراد کے مونوسائٹس کے ذریعے تیار کیا جاتا ہے۔ آخر میں، glutathione میٹابولزم تربیت یافتہ استثنیٰ کو شامل کرنے میں شامل ہے، اور مستقبل کے مطالعے کو انسانی بیماریوں میں اس کے عملی نتائج کو تلاش کرنے کی ضرورت ہے۔

انسانی قوت مدافعت بہت اہم ہے کیونکہ یہ ہمیں بیماریوں اور انفیکشن سے بچاتی ہے۔ مدافعتی نظام ایک پیچیدہ نظام ہے جو بہت سے مختلف خلیوں، ؤتکوں اور اعضاء پر مشتمل ہے۔ وہ اندر اور باہر مختلف پیتھوجینز سے نمٹنے کے لیے مل کر کام کرتے ہیں۔ تحقیق میں، ہم نے پایا کہ Cistanche deserticola polysaccharide اور verbascoside دل اور دماغ کے بافتوں کے انزائمز کی سرگرمی کو بہتر بنا سکتے ہیں اور پیٹ کی گہا کو مضبوط بنا سکتے ہیں۔ خلیات کے phagocytic فعل اور lymphocytes کے پھیلاؤ کے ردعمل کے قوت مدافعت کو بہتر بنانے پر واضح اثرات مرتب ہوتے ہیں۔

cistanche deserticola سپلیمنٹ پروڈکٹ پر کلک کریں۔

مطلوبہ الفاظ:

glutathione؛ تربیت یافتہ استثنیٰ؛ میکروفیجز میٹابولزم؛ پیدائشی مدافعتی میموری.

1. تعارف

کچھ عرصہ پہلے تک، انکولی استثنیٰ کو میزبان دفاع کا واحد جزو سمجھا جاتا تھا جس کی خصوصیت میموری کو برقرار رکھنے، T اور B سیل کے ردعمل کو مخصوص اینٹیجن کے مطابق بنانے کی صلاحیت سے ہوتی ہے۔

تاہم، حالیہ تحقیق کے ایک بڑھتے ہوئے جسم نے بھی ہیٹرولوجس میموری کی خصوصیات کو پیدائشی مدافعتی نظام سے منسوب کیا ہے، ایک عمل جسے تربیت یافتہ استثنیٰ کہا جاتا ہے [1]۔ Candida albicans، فنگل سیل دیوار کے جزو -glucan، یا یہاں تک کہ جراثیم سے پاک محرکات جیسے آکسیڈائزڈ کم کثافت لیپوپروٹین (ox-LDL) کے سامنے مختصر مدت کے لیے سامنے آنے والے مونوکیٹس، ایک غیر متعلقہ ثانوی محرک پر سوزش کے حامی سائٹوکائنز کی بہتر پیداوار کو ظاہر کرتے ہیں۔ ابتدائی محرک کو ہٹا دیا گیا ہے [2,3]۔

اس کے علاوہ، وبائی امراض کے مطالعے سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ تپ دق کے خلاف Bacillus Calmette-Guérin (BCG) کی ویکسینیشن پیدائشی مدافعتی خلیوں کے antimicrobial فعل کو بڑھاتی ہے، اس کے نتیجے میں غیر متعلقہ انفیکشن کے خلاف غیر مخصوص تحفظ پیدا کرتی ہے اور اموات کی شرح کو کم کرتی ہے [4]۔

تربیت یافتہ استثنیٰ کی جڑ ایپی جینیٹک تبدیلیوں میں ہے جو خلیے کی نقلی مشینری کے لیے سوزش کے حامی ردعمل کے جینز کی رسائی کو ماڈیول کرتی ہے۔ تربیت یافتہ فطری مدافعتی خلیوں میں ایپی جینیٹک ری وائرنگ کے ساتھ میٹابولک تبدیلیاں ہوتی ہیں جو گلیکولیسس، آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن، اور کولیسٹرول بائیو سنتھیسس [5,6] جیسے راستوں کو فروغ دیتی ہیں۔ ان راستوں سے اخذ کردہ میٹابولائٹس مالیکیولز اور کوفیکٹرز کو سگنل دے رہے ہیں جو بدلے میں کرومیٹن میں ترمیم کرنے والے انزائمز کی سرگرمی کو ماڈیول کر سکتے ہیں۔ Glutathione (GSH) ایک اہم اینٹی آکسیڈینٹ ہے جو انٹرا سیلولر ریڈوکس توازن کو محفوظ رکھتا ہے اور اسے ایپی جینیٹک تبدیلیوں میں حصہ ڈالنے کا مشورہ دیا گیا ہے [7]۔

اس کے علاوہ، وہ محرکات جو تربیت یافتہ قوت مدافعت پیدا کرتے ہیں، جیسے کہ BCG اور oxLDL، ثانوی محرک [8-10] پر میکروفیجز کے ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی پیداوار میں اضافہ کرتے ہیں۔ ہم نے قیاس کیا کہ تربیت یافتہ میکروفیجز کی بڑھتی ہوئی میٹابولک سرگرمی ROS کی سطح میں بھی اضافہ کرے گی اور GSH کو ماڈیول کرے گی، جس کے نتیجے میں تربیت یافتہ قوت مدافعت کے ردعمل کی طاقت متاثر ہوگی۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 انسانی پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMC) اور مونوسائٹس کی تنہائی

صحت مند عطیہ دہندگان سے بفی کوٹ تحریری باخبر رضامندی کے بعد حاصل کیے گئے تھے (سینکوئن بلڈ بینک، نجمگین، نیدرلینڈز)۔ اخلاقی منظوری CMO Arnhem-Nijmegen (NL32 357.091.10) سے حاصل کی گئی تھی۔ تنہائی فکول-پاک (جی ای ہیلتھ کیئر، چلفونٹ سینٹ جائلز، یو کے) پر تفریق کثافت سینٹرفیوگریشن کے ذریعہ انجام دی گئی تھی۔ اس کے بعد، monocytes کی الگ تھلگ ایک ہائپر-osmotic Percoll (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) کثافت گریڈینٹ سینٹرفیوگریشن کے ساتھ کی گئی اور ایک بار پائروجن فری کولڈ فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) سے دھویا گیا۔ سیلز کو دوبارہ معطل کیا گیا اور بعد میں RPMI 1640 ڈچ ترمیم شدہ میڈیم (انویٹروجن، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) میں 5 µg/mL gentamicin (Centraform، Etten-Leur، نیدرلینڈز)، 2 mM Glutamax، Waltham، USA، USA کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا۔ )، اور 1 ایم ایم پائروویٹ (گبکو)۔ زیادہ سے زیادہ پاکیزگی کو یقینی بنانے کے لیے، پرکول سے الگ تھلگ مونوسائٹس کو پولی اسٹیرین فلیٹ نچلی پلیٹوں (کارننگ، سگما-الڈریش، نیویارک، نیو یارک، یو ایس اے) پر 37 ◦C 5 فیصد CO2 پر 1 گھنٹے کے لیے چھوڑ دیا گیا اور پھر گرم PBS سے ایک بار دھویا گیا۔

2.2 وٹرو تربیت یافتہ امیونٹی ماڈل میں

پیروی کرنے والے مونوکیٹس کو مہذب کیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [11]۔ مختصراً، 105 مونوسائٹس کو فلیٹ نیچے والی پلیٹوں (گرینر، کریمسمینسٹر، آسٹریا) پر سیڈ کیا گیا اور 1 µg/mL -glucan یا 5 µg/mL BCG ویکسین (انٹر ویکس، ٹورنٹو، آن، کینیڈا میں) سے لگایا گیا۔ RPMI 10 فیصد انسانی پولڈ سیرم کے ساتھ۔ -1,3-(D)-glucan ( -glucan) Candida albicans سے برائے مہربانی پروفیسر ڈیوڈ ولیمز (کالج آف میڈیسن، جانسن سٹی، TN، USA) نے فراہم کیا تھا۔

جب اشارہ کیا گیا تو، خلیوں کو {{0}}.5µM diphenyleneiodonium (DPI)، 50µM a-tocopherol (AT) (Sigma-Aldrich)، 0.5 µM ascorbic acid (AA)، 1 mM N-acetyl کے ساتھ پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ cysteine ​​(NAC) (Sigma-Aldrich)، یا 100 µM DL-buthionine sulfoximine (BSO) (Sigma-Aldrich) - گلوکن کے اضافے سے پہلے 1 گھنٹے کے لیے۔ 24 گھنٹے کے بعد، خلیات کو گرم پی بی ایس سے ایک بار دھویا گیا اور 5 دنوں کے لیے 10 فیصد پولڈ انسانی سیرم کے ساتھ RPMI میں فرق کرنے کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ ثقافت کے 3 دن پر میڈیم کو تازہ دم کیا گیا۔ دن 6 پر، میکروفیجز کو 10 ng/mL Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS؛ serotype 055:B5، Sigma-Aldrich) کے ساتھ اضافی 24 گھنٹے کے لیے بحال کیا گیا۔

2.3 رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی مقدار

مونوکیٹس/میکروفیجز کو 2 گھنٹے، 24 گھنٹے، یا 6 دن کے لیے کلچر کیا گیا، دھویا گیا، ٹھنڈے پی بی ایس کے ساتھ الگ کیا گیا، اور پی بی ایس میں 5 µM H2DCFDA (لائف ٹیکنالوجیز، والتھم، MA، USA) کے ساتھ 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 37 ◦C خلیوں کا تجزیہ بہاؤ سائٹوومیٹری (سائٹو فلیکس، بیک مین کولٹر، بریا، سی اے، یو ایس اے) کے ذریعے کیا گیا۔ کالوزا 2.1 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ سیل ایگریگیٹس کو فارورڈ سکیٹر (ایف ایس سی) - اونچائی بمقابلہ ایف ایس سی ایریا پلاٹ کی بنیاد پر گیٹ آؤٹ کیا گیا تھا اور مونوسائٹ / میکروفیج آبادی کو ایف ایس سی اور سائیڈ سکیٹر (ایس ایس سی) کے مطابق گیٹ کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے اور فریڈمین کے ٹیسٹ کے بعد ڈن کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ تجزیہ کیا جاتا ہے۔ 0.05 سے نیچے ایک p-قدر شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا، جیسا کہ ستارے (* p <0.05) سے ظاہر ہوتا ہے۔

2.4 وٹرو میں متحرک انسانی مونوسائٹس کا آر این اے سیکوینسنگ ڈیٹا

وٹرو ٹو -گلوکان میں سامنے آنے والے مونوکیٹس کے جین ایکسپریشن کا تجزیہ پہلے شائع شدہ RNA-seq ڈیٹا [12] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ مختصراً، PBMCs کو Ficoll-Paque (GE Healthcare) میں سینٹرفیوگریشن کے ذریعے الگ تھلگ کر دیا گیا تھا۔ مونوکیٹس کو CD3 پلس (T خلیات)، CD19 پلس (B خلیات)، اور CD56 پلس (NK خلیات) مثبت خلیات (Miltenyi Biotech، Bergisch Gladbach، Germany) کے لیے موتیوں کے ساتھ منفی انتخاب کا استعمال کرتے ہوئے پاک کیا گیا۔ وٹرو تربیت یافتہ قوت مدافعت کے ماڈل میں بیان کردہ اور 5 µg/mL -glucan کے سامنے آنے کے بعد خلیوں کی ثقافت کی گئی۔ نمائش کے بعد مونوکیٹس 4 گھنٹے اور 24 گھنٹے پر جمع کیے گئے تھے۔ اینٹی آکسیڈینٹ رسپانس اور گلوٹاتھیون میٹابولزم سے متعلق جینز کو ان وٹرو مونوسائٹ ٹو میکروفیج تربیت یافتہ امیونٹی ماڈل میں نمایاں طور پر متحرک جین (p < 0.05, FC > 2.5, RPKM > 1) کی فہرست سے نکالا گیا تھا۔ ڈیٹا کو -گلوکان اور غیر محرک مونوسائٹس کے ساتھ علاج کیے جانے والے مونوسائٹس کے درمیان تناسب کے لاگ 10 کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔

2.5 گلوٹاتھیون کی مقدار

انٹرا سیلولر کم (GSH) اور آکسائڈائزڈ (GSSG) glutathione کا مقداری تجزیہ جوہری مقناطیسی گونج (NMR) سپیکٹروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [13]۔

مختصراً، گروتھ میڈیم کو ہٹا دیا گیا اور مہذب خلیوں کو گرم PBS (37 ◦C) سے دھویا گیا اور میٹابولزم کو روکنے کے لیے مائع نائٹروجن سے بجھایا گیا۔ خلیوں کو بعد میں پلیٹوں سے کھرچ دیا گیا اور میتھانول/کلوروفارم/پانی کے ٹھنڈے (−80 ◦C) محلول کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا، 8.1:0.9:1 (vol/vol/vol) . نچوڑ کو خشک برف پر کم از کم 30 منٹ کے لیے منجمد رکھا گیا اور بعد میں 18،{{1{{30}}}×g پر 20 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ −4 ◦C پر۔ پروٹین کی گولی پروٹین کی مقدار کے لیے رکھی گئی تھی جب کہ انٹرا سیلولر میٹابولائٹس پر مشتمل سپرنٹینٹس کو نائٹروجن کی ہلکی ندی کے نیچے خشک کیا گیا تھا اور NMR کے نمونے خشک مواد کو 0.22 ملی لیٹر 0.15 ایم فاسفیٹ بفر (پی ایچ 7.4) کے ساتھ ڈیوٹریٹڈ پانی میں تحلیل کرکے تیار کیے گئے تھے۔ mM trimethylsilyl propionic-d4-سوڈیم نمک NMR حوالہ اور مقدار کے داخلی معیار کے طور پر۔ ہر نمونے کے لیے 1D 1H NMR سپیکٹرم 14.1 T (600 MHz for 1H) Bruker Avance II NMR پر جمع کیا گیا تھا، noesygppr1d پلس سیکوینس (Topspin v3.0, Bruker Biospin Ltd, Karlsruhe, Germany) کا استعمال کرتے ہوئے۔ تمام سپیکٹرا پر عملدرآمد کیا گیا تھا اور گلوٹاتھیون کی مقدار درست کرنے کے لیے Chenomx NMR سویٹ 8.4 (Chenomx NMR suite, v8.0, Edmonton, AB, Canada) میں درآمد کیا گیا تھا۔

تمام ارتکاز کو ہر نمونے کے کل پروٹین ماس میں معمول بنایا گیا تھا۔ مؤخر الذکر کو بفر (1:1، 1 فیصد SDS: 8M یوریا (0.25M Tris pH:8)) میں سونیکیشن کے ساتھ تحلیل کرکے مقدار درست کی گئی۔ اس کے دستی کے مطابق PierceTM BCA پروٹین پرکھ کٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی حراستی کی پیمائش کی گئی۔

2.6۔ In Vitro اور In Vivo میں جینیاتی اور میٹابولک تجزیہ کے لیے تربیت یافتہ قوت مدافعت کے ماڈل

ان وٹرو ماڈل میں، ایڈورنٹ مونوسائٹس کو کلچر میڈیم کے ساتھ صرف منفی کنٹرول کے طور پر، 2 µg/mL of -1,3-(D)-گلوکن یا 5 µg/mL BCG (300BCG کوہورٹ) : BCG-Bulgaria strain, Intervax, Canada), 24 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر 10 فیصد پولڈ انسانی سیرم کی موجودگی میں۔ دن 6 پر، خلیوں کو 24 گھنٹے کے لیے 200 µL RPMI یا LPS 10 ng/mL (سیرو ٹائپ 055: B5؛ سگما-الڈرچ) کے ساتھ دوبارہ متحرک کیا گیا۔

ان ویوو ماڈل میں، صحت مند بالغوں کو بائیں بازو کے اوپری حصے میں 0.1 ملی لیٹر BCG کی معیاری خوراک کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا، اور خون 14 سے پہلے اور ویکسینیشن کے 90 دن بعد جمع کیا گیا تھا۔ ہر دورے میں، 5 × 105 PBMCs کو گرمی سے ہلاک ہونے والے Staphylococcus aureus (106 CFU/mL) کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی یا 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ◦C پر غیر محرک چھوڑ دیا گیا۔ 24 گھنٹے کے محرک کے بعد دونوں ماڈلز میں خفیہ سائٹوکائنز کی پیمائش کی گئی تھی، اور تربیتی محرکات کی وجہ سے سائٹوکائن کی ردعمل میں گنا اضافہ تربیت یافتہ استثنیٰ کے لیے ایک پیمائش کے طور پر استعمال کیا گیا تھا [14]۔

2.7۔ جینیاتی تجزیہ

جینیاتی تجزیہ ہیومن فنکشنل جینومکس پروجیکٹ [15] سے مغربی یورپی نسل کے صحت مند افراد کے ایک گروپ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ 300BCG گروپ نیدرلینڈز کے 325 بالغوں پر مشتمل ہے (44 فیصد مرد اور 56 فیصد خواتین، عمر کی حد 18-71 سال)۔ مطالعہ کی منظوری مقامی اخلاقیات کمیٹی CMO ریجن Arnhem-Nijmegen, NL58553 نے دی تھی۔{16}}91.16۔ Illumina سے تجارتی طور پر دستیاب SNP چپ، Infinium Global Screening Array MD v1۔{18}} کا استعمال کرتے ہوئے افراد کے DNA نمونے (n=325) کو جین ٹائپ کیا گیا۔ آپٹیکل 0.7۔{23}} ڈیفالٹ سیٹنگز کے ساتھ جین ٹائپ کالنگ کے لیے استعمال کیا گیا تھا [16]۔ 0.99 سے کم یا اس کے برابر کال کی شرح والے نمونے خارج کردیئے گئے تھے، جیسا کہ ہارڈی وائنبرگ توازن (HWE) 0.0001 سے کم یا اس کے برابر، اور معمولی ایلیل فریکوئنسی (MAF) سے کم یا برابر 0.001 تک۔ جینوٹائپ ہارمونائزر [17] کا استعمال کرتے ہوئے 1000 جینوم ریفرنس پینل کے خلاف مختلف قسموں کے اسٹرینڈز کو جوڑا گیا اور ان کی شناخت کی گئی۔ اس کے بعد ہم نے مشی گن امپیوٹیشن سرور پر ہیومن ریفرنس کنسورشیم (HRC r11 2016) کو بطور ریفرنس پینل استعمال کیا، اور ہم نے گنتی کے معیار کے لیے R2 <0.3، اور MAF <5 فیصد کے ساتھ جینیاتی متغیرات کو فلٹر کیا۔ [18]، جس کے نتیجے میں QTL میپنگ کی پیروی کے لیے تقریباً 4 ملین سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفزم (SNPs) بنتے ہیں۔ 300 BCG کوہورٹ کے کل 267 افراد کے لیے وٹرو سے تربیت یافتہ استثنیٰ کے ردعمل پر جین ٹائپ اور سائٹوکائن ڈیٹا دونوں حاصل کیے گئے۔ تین نمونوں کو دواؤں کے استعمال کی وجہ سے خارج کر دیا گیا تھا (جن میں سے ایک کی شناخت جینیاتی آؤٹ لیئر کے طور پر کی گئی تھی)، اور ایک نمونہ مطالعہ کے دوران ٹائپ 1 ذیابیطس کے آغاز کی وجہ سے تھا۔

سب سے پہلے، تربیت یافتہ اور غیر تربیت یافتہ خلیوں کے درمیان سائٹوکائن کی پیداوار کی گنا تبدیلی کو تربیت یافتہ قوت مدافعت کے ردعمل کی پیمائش کے طور پر لیا گیا تھا۔ سائٹوکائن کی تقسیم کے معیار کی جانچ کے بعد اور جینیاتی آؤٹ لیرز کو چھوڑنے کے بعد، ہم نے سائٹوکائن پروڈکشن کی فولڈ تبدیلی کی تقسیم کو درست کرنے کے لیے عمر اور جنس کے ساتھ لکیری ریگریشن ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے جینی ٹائپ ڈیٹا میں سائٹوکائن پروڈکشن کی لاگ میں تبدیل شدہ فولڈ تبدیلیوں کو میپ کیا۔ ہم نے تربیت یافتہ استثنیٰ کے ردعمل کو متاثر کرنے والے تجویزاتی مقداری خاصیت لوکی (QTL) ایسوسی ایشن کی نشاندہی کرنے کے لیے p <9.99 × 10−3 کا کٹ آف استعمال کیا۔ ویوو کے تربیت یافتہ امیونٹی ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، کل 296 افراد کے لیے جین ٹائپ اور سائٹوکائن ڈیٹا حاصل کیا گیا۔

ان وٹرو QTL میپنگ کے لیے بیان کردہ آؤٹ لیرز کے علاوہ، شام کے 18 ٹیکے لگائے گئے افراد کو خارج کر دیا گیا، جس کے نتیجے میں QTL میپنگ سے پہلے 278 نمونے سامنے آئے۔ سب سے پہلے، خام سائٹوکائن کی سطح کو لاگ میں تبدیل کیا گیا تھا اور دوروں کے درمیان سائٹوکائن کی پیداوار کے تناسب کو سائٹوکائن کی پیداوار کے گنا تبدیلی کے طور پر لیا گیا تھا۔ سائٹوکائن پروڈکشن کی فولڈ تبدیلی کو عمر اور جنس کے ساتھ لکیری ریگریشن ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے جینی ٹائپ ڈیٹا پر نقشہ بنایا گیا تھا۔ ہم نے تربیت یافتہ استثنیٰ کے ردعمل کو متاثر کرنے والی تجویز کردہ QTL ایسوسی ایشن کی نشاندہی کرنے کے لیے p <9.99 × 10−3 کا کٹ آف استعمال کیا۔ R-package Matrix-eQTL سائٹوکائن QTL میپنگ کے لیے استعمال کیا گیا تھا [19]۔

2.8۔ میٹابولومکس تجزیہ

بی سی جی ویکسینیشن سے پہلے 300 بی سی جی کوہورٹ کے افراد کی میٹابولائٹ لیول کی پیمائش کی گئی۔ میٹابولک خصوصیات کی پیمائش اور تشریح جنرل میٹابولکس (زیورخ، سوئٹزرلینڈ) نے فلو انجیکشن ٹائم آف فلائٹ ماس (فلو-انجیکشن TOF-M) سپیکٹرو میٹری [20] کے ذریعے کی تھی۔ انسانی میٹابولائٹس ڈیٹا بیس (HMDB) کے مطابق غیر ھدف شدہ میٹابولائٹس کی تشریح کی گئی تھی۔ تمام میٹابولومک پیمائش ڈپلیکیٹس میں کی گئی تھی، اور ہر نمونے کے لیے فی میٹابولائٹ کی اوسط قدر کا حساب لگایا گیا تھا۔ اسپیئر مین کے ارتباط کا تجزیہ میٹابولائٹس اور سابق ویوو سائٹوکائن فولڈ تبدیلیوں پر ویکسینیشن سے پہلے کے ردعمل کے بارے میں کیا گیا تھا۔ Glutathione کی سطح اور جینیاتی تجزیہ میں شناخت کی گئی دلچسپی کے SNPs کے درمیان تعلق کو جانچنے کے لیے، عمر اور جنس کے ساتھ ایک لکیری ریگریشن تجزیہ ہر SNP کے لیے covariates کے طور پر کیا گیا تھا۔

2.9 سائٹوکائن کی مقدار اور تجزیہ

سائٹوکائن کی پیداوار کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے IL{{0}}، IL-6، اور TNF (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) کے لیے تجارتی ELISA کٹس کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر پیش کیا جاتا ہے اور اس کا تجزیہ دو طرفہ بار بار اقدامات ANOVA کے ساتھ کیا جاتا ہے جس کے بعد Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ ہوتے ہیں۔ 0.05 سے نیچے ایک p-قدر شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا، جیسا کہ ستارے (* p <0.05) سے ظاہر ہوتا ہے۔

3. نتائج

3.1 -گلوکان- اور بی سی جی کی حوصلہ افزائی سے تربیت یافتہ استثنیٰ ایک مستقل رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کی پیداوار کو متحرک کرتا ہے۔

ROS کی بڑھتی ہوئی رہائی کو پہلے تربیت یافتہ استثنیٰ فینوٹائپ [21] کی خصوصیت کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔ 2 گھنٹے اور 24 گھنٹے کے لیے گلوکن یا بی سی جی کے سامنے آنے والے مونوکیٹس ROS میں اضافہ کرتے ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ یہ اضافہ کلچر میڈیا (شکل 1A) میں 5 دن آرام کرنے کے بعد برقرار اور موجود تھا۔ بہتر ROS کی سطح 24 گھنٹے (شکل 1B) کے لئے -گلوکان کے سامنے آنے والے مونوکیٹس میں مختلف اینٹی آکسیڈینٹ جینوں کی نقل کی تبدیلیوں کے ساتھ ہوتی ہے۔ Mitochondrial superoxide dismutase SOD2 اور مختلف تھائیول پر مشتمل مالیکیولز کو اپ ریگولیٹ کیا جاتا ہے، یعنی thioredoxin-dependent peroxide reductases 1-6 (PRDX 1-6) اور سلفیریڈوکسین 1 (SRXN1)۔ thioredoxin (TXN) اور thioredoxin reductase (TXNRD) کا اظہار، متعلقہ thiol پر مشتمل ROS scavengers، کو بھی بڑھایا جاتا ہے۔

چترا 1. تربیت یافتہ مونوسائٹس کی بڑھتی ہوئی ROS سطح ان کی پروینفلامیٹری سائٹوکائن کی بہتر پیداوار میں حصہ نہیں ڈالتی ہے۔ (A) ROS کی سطح 2 h، 24 h، اور 6 دن میں monocytes کے -glucan اور BCG کے سامنے آنے کے بعد (n=6/9 عطیہ دہندگان، 2/3 آزاد تجربوں سے جمع ہوئے۔ فریڈمین ٹیسٹ ڈن کا متعدد موازنہ ٹیسٹ) . (B) غیر محرک خلیوں کے مقابلے میں 24 گھنٹے تک -گلوکان کے سامنے آنے والے مونوسائٹس میں اینٹی آکسیڈینٹ دفاع میں شامل جینوں کے اظہار کی سطح۔ اظہار log10(تناسب) کے بطور پیش کیا گیا ہے۔ TNF اور IL-6 (C) 0.5µM DPI (n=6 عطیہ دہندگان کے ساتھ 1 گھنٹہ پہلے علاج کے بعد -glucan سے تربیت یافتہ میکروفیجز کے ذریعہ تیار کیا گیا، 2 آزاد تجربوں سے جمع کیا گیا) اور (D ) 1 mM NAC، 50 µM AT یا 0.5 µM AA (n=6 عطیہ دہندگان، دو آزاد تجربوں سے جمع کیے گئے، دو طرفہ ANOVA، Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ)۔ (مطلب ± SEM، * p <0.05)۔

تاہم، نہ تو بڑے ROS پروڈیوسر NADPH آکسیڈیز کو diphenyleneiodonium (DPI) کے ساتھ روکنا اور نہ ہی -glucan کے ساتھ انکیوبیشن سے پہلے اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیولز -tocopherol (AT) اور ascorbic acid (AA) کے اضافے نے، میکروفیج کی بڑھتی ہوئی ردعمل کو ماڈیول کیا۔ اس فارماسولوجیکل اپروچ (شکل 1C، D) کے ذریعے ایل پی ایس کی بحالی کے 24 گھنٹے بعد -گلوکان، ٹی این ایف، اور IL-6 سراو کے سامنے آنے والے میکروفیجز میں ترمیم نہیں کی گئی۔

تاہم، صرف DPI کی نمائش نے LPS محرک پر IL-6 کی پیداوار میں اضافہ کیا۔ (شکل 1C)۔ عام ROS سکیوینجر N-acetyl cysteine ​​(NAC) کے ساتھ پہلے سے علاج کرنے سے TNF اور IL-6 کی پیداوار میں کمی واقع ہوئی جب صرف گلوکن کے سامنے آنے والے خلیوں کے مقابلے میں (شکل 1D)۔ ایک ساتھ مل کر، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ ROS کی بڑھتی ہوئی پیداوار -glucan-حوصلہ افزائی تربیت یافتہ استثنیٰ کی بڑھتی ہوئی سائٹوکائن کی پیداوار میں معمولی کردار ادا کرتی ہے۔ اس کے علاوہ، تربیت یافتہ استثنیٰ برقرار رکھنے سے ROS کی سطح سیلولر اینٹی آکسیڈینٹ گلوٹاتھیون کی ماڈیولیشن سے منسلک ہو سکتی ہے، کیونکہ NAC نہ صرف ایک ROS سکیوینجر ہے بلکہ گلوٹاتھیون کی ترکیب کے پیش خیمہ کے طور پر بھی کام کر سکتا ہے۔

3.2 Glutathione میٹابولزم تربیت یافتہ مدافعتی ردعمل کو متاثر کرتا ہے۔

24 گھنٹے تک -گلوکان کے سامنے آنے والے مونوکیٹس گلوٹاتھیون (جی ایس ایس جی) کی آکسیڈائزڈ شکل کی اعلی سطح کو ظاہر کرتے ہیں، جو اس وقت کے مقام پر پائے جانے والے اعلی ROS کی سطح سے ہے (شکل 2A)۔ آرام کی مدت کے بعد، glutathione (GSH) کی کم شکل میں تربیت یافتہ میکروفیجز میں اضافہ ہوتا ہے، جس میں آکسیڈائزڈ شکل کی ارتکاز میں کوئی تبدیلی نہیں ہوتی ہے۔

شکل 2. گلوکوان کی نمائش پر گلوٹاتھیون کی سطح کو ماڈیول کیا جاتا ہے۔ (A) 1 µg/mL -glucan کے ساتھ 24 گھنٹے کی نمائش کے بعد اور آرام کی مدت کے 5 دن بعد (n=4 عطیہ دہندگان، دو آزاد تجربوں سے جمع کیے گئے) کے بعد مونوکیٹس میں گلوٹاتھیون انٹرا سیلولر لیول کو کم اور آکسائڈائز کیا گیا۔ (B) monocytes میں glutathione میٹابولزم میں ملوث جینوں کا اظہار -glucan کے سامنے 4 گھنٹے اور 24 گھنٹے تک۔ اظہار log10(تناسب) کے بطور پیش کیا گیا ہے۔ (C) TNF اور IL-6 -glucan-trained macrophages کے ذریعہ 100 µM BSO (n=9 عطیہ دہندگان کے ساتھ 1 گھنٹہ پہلے علاج کے بعد تیار کیا گیا، تین آزاد تجربوں سے جمع کیا گیا، * p <0.05 دو طرفہ ANOVA , Sidak کے متعدد موازنہ ٹیسٹ) (مطلب ± SEM)۔

وہ جین جو شرح کو محدود کرنے والے انزائم گلوٹامیٹ سیسٹین لیگیس (GCLC اور GCLM) کے ذیلی یونٹس کے لیے انکوڈ کرتے ہیں کنٹرول مونوسائٹس کے مقابلے میں گلوکن محرک کے بعد 4 گھنٹے پر اظہار میں اضافہ دکھاتے ہیں۔ Glutathione reductase (GSR)، glutathione peroxidase 7 (GPX7)، اور glutaredoxin خاندان (GLRX, 2, 5) کے خامروں کو بھی 24 گھنٹے کے ٹائم پوائنٹ (شکل 2B) پر الگ کر دیا جاتا ہے، جو کہ نہ صرف ترکیب میں اضافے کی تجویز کرتا ہے بلکہ اس سے بھی زیادہ ہوتا ہے۔ glutathione ری سائیکلنگ کی شرح. -گلوکان کی نمائش سے پہلے بوتھیونین سلفوکسیمائن (BSO) کے ساتھ GCL کی سرگرمی کو فارماسولوجیکل طور پر روکنا LPS کی بحالی (شکل 2C) کے بعد IL-6 کی پیداوار میں کمی کا باعث بنتا ہے۔ اس طرح، glutathione کی سطحوں کی exogenous modulation، یا تو پیشگی NAC کے اضافے سے تکمیل، یا BSO کے ساتھ انزائم GCL کو بلاک کر کے اس کی کمی، ثانوی محرک کے لیے -glucan کی بڑھتی ہوئی ردعمل کو کم کر دیتی ہے۔

مزید تفتیش کرنے کے لیے کہ آیا glutathione میٹابولزم میں شامل جینوں میں جینیاتی تغیر تربیت یافتہ قوت مدافعت کو متاثر کرتا ہے، QTL میپنگ 325 صحت مند افراد کے ایک گروپ کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ ہم نے جانچ کیا کہ کیا معمولی ایلیل فریکوئنسی (MAF) > 0.05 کے ساتھ عام SNPs glutathione میٹابولزم کے لیے متعلقہ جینز میں monocytes کے proinflammatory cytokine کی پیداواری صلاحیت میں تبدیلیوں سے منسلک تھے -glucan اور BCG میں وٹرو ٹریننگ (شکل 3A، سی)۔

اسی طرح، ہم نے 278 صحت مند افراد (شکل 3B، C) کی BCG ویکسینیشن کے ذریعے حوصلہ افزائی کی جانے والی ویوو تربیت یافتہ قوت مدافعت پر ان جینیاتی تغیرات کے اثرات کا بھی جائزہ لیا۔ glutathione میٹابولزم میں شامل جینوں کی 250 kb کی کھڑکی کے اندر کئی SNPs کو تربیت کے بعد IL-1، TNF، اور IL-6 کی رطوبت کو اپ گریجولیشن کے ساتھ تجویز کیا گیا تھا (p-value <9.99 × 10−3 ) (شکل 3A، B)۔

اسی گروہ میں، ہم نے بی سی جی ویکسینیشن سے پہلے گلوٹاتھیون میٹابولزم میں شامل پلازما میٹابولائٹس کی پیمائش کی۔ ان وٹرو اور ان ویوو کے تجزیوں میں شناخت شدہ SNPs نمایاں طور پر گردش کرنے والی گلوٹاتھیون ارتکاز (p-value < 0.05) (شکل 3D) سے وابستہ تھے۔ مزید برآں، ہم نے پلازما گلوٹاتھیون کے ارتکاز اور سابق ویوو IL-1 کی پیداوار کے درمیان 90 دن بعد ہیٹرولوگس محرک Staphylococcus aureus (شکل 3E) میں وٹرو کی نمائش کے بعد BCG ویکسینیشن کے درمیان ایک مثبت تعلق پایا۔ BCG ویکسینیشن کے ذریعے IL-1 کی پیداوار کا اپ ریگولیشن بھی گلوٹاتھیون میٹابولزم میں شامل دیگر میٹابولائٹس کی گردش کرنے والے ارتکاز کے ساتھ مثبت طور پر منسلک ہے، جیسے میتھیونین، سیسٹین، گلوٹامیٹ، اور گلائسین (شکل 3E)۔ مجموعی طور پر، Glutathione میٹابولزم میں شامل جین جن میں QTLs پر مشتمل فطری ہیٹرولوجس ردعمل، LPS (Figure 3A) یا S. aureus (Figure 3B) سے، اور گلوٹاتھیون سیرم کی سطح اور سابق vivo IL-1 کی پیداوار کے درمیان ارتباط، دونوں کی طرف اشارہ کرتے ہیں۔ تربیت یافتہ استثنیٰ کے قیام میں اس راستے کا کردار۔

شکل 3. Glutathione تربیت یافتہ قوت مدافعت کی خصوصیات سے وابستہ ہے۔ گلوٹاتھیون میٹابولزم میں شامل جینز اور (A) -گلوکان اور وٹرو میں تربیت یافتہ مونوکیٹس کے ذریعہ سائٹوکائن کی پیداواری صلاحیت کی شدت اور گلوٹاتھیون میٹابولزم میں شامل جینوں کے ساتھ میپ کیے گئے SNPs کے درمیان ایسوسی ایشن کی p-values ​​(p <9.99 × 10−3 ) کا ہیٹ میپ۔ BCG (n=251 صحت مند رضاکار برائے IL-6 اور n=238 صحت مند رضاکار برائے TNF ) اور (B) vivo BCG تربیتی ردعمل میں (n {{10}} صحت مند رضاکار)۔ (C) فی تجزیہ سب سے کم پی ویلیو SNP کا باکس پلاٹ (rs7768134, rs35568915)۔ (D) rs2233294 (GPX3) اور rs10136944 (GLRX5, n=302) کے لیے جین ٹائپ کے ذریعے ترتیب شدہ گلوٹاتھیون پلازما کی سطح (عمر اور جنس کے لیے درست) دکھانے والے باکس پلاٹ۔ ہر SNP کے لیے p-value ایک لکیری ریگریشن ماڈل سے اخذ کی گئی ہے جس میں دلچسپی کے SNP کو بطور خود مختار متغیر اور glutathione (عمر اور جنس کے لیے درست کیا گیا ہے) بطور منحصر متغیر ہے۔ (E) پی بی ایم سی سے ماخوذ ایس اوریئس انڈسڈ IL-6، IL-1، اور TNF ردعمل کی فولڈ تبدیلیوں کے مقابلے میں glutathione میٹابولزم میں شامل بیس لائن پر گردش کرنے والے میٹابولائٹس کے درمیان اسپیئر مین کا ارتباط 14 یا 90 دن کے بعد بی سی جی ویکسینیشن بیس لائن (n=297 صحت مند رضاکاروں) کے مقابلے میں۔ جدول ہر ارتباط کے لیے اسپیئر مین کا rho پیش کرتا ہے، اور سرخ رنگ کے ارتباط اہم مثبت ارتباط کو نمایاں کرتے ہیں (* p <0.05, ** p <0.01)۔ دن 0 کے مقابلے میں 90 دنوں میں گلوٹاتھیون کے ارتکاز اور IL-1 کی پیداوار کے فولڈ تبدیلی کے درمیان ارتباط کو سکیٹر پلاٹ میں ایک مثال کے طور پر دیا گیا ہے۔

4. بحث

میکروفیج پلاسٹک کے خلیات ہیں جو اپنے فینوٹائپ کو مختلف ماحولیاتی محرکات کے مطابق ڈھال لیتے ہیں۔ تربیت یافتہ میکروفیجز ایک اعلی توانائی میٹابولزم پر انحصار کرتے ہیں، جس میں گلائکولیسس، ٹی سی اے سائیکل، اور آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن شامل ہے، تاکہ سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار میں اضافہ [6,22] کے ساتھ ردعمل پیدا کیا جا سکے۔

سائٹوکائن کی پیداوار کے علاوہ، تیز رفتار آر او ایس کی پیداوار کے ساتھ آکسیڈیٹیو برسٹ میں اضافہ بی سی جی سے تربیت یافتہ میکروفیجز [8] میں ہوتا ہے۔ بی سی جی سے علاج شدہ چوہوں سے الگ تھلگ سپلینک نیوٹروفیل بھی ROS کی پیداوار میں اضافہ ظاہر کرتے ہیں [23]۔ بڑھے ہوئے میٹابولک ریٹ اور آکسیڈیٹیو برسٹ کو ماؤنٹ کرنے کی بڑھتی ہوئی صلاحیت کے مطابق، ہم نے مشاہدہ کیا کہ -گلوکان یا بی سی جی کے سامنے آنے والے مونوکیٹس اور میکروفیج بیسل ROS کی پیداوار میں اضافے کو ظاہر کرتے ہیں۔ ROS کی رہائی میں اسی طرح کے اضافے کی اطلاع پہلے oxLDL سے تربیت یافتہ monocytes [9] میں دی گئی تھی۔ ROS پیتھوجینز کی کلیئرنس میں انفیکٹر افعال رکھتا ہے لیکن یہ سگنل کی نقل و حمل میں بھی ثالثی کر سکتا ہے [24]۔ ROS پیدا کرنے والے اینزائم NOX کی فارماسولوجیکل روکنا یا اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیولز -ٹوکوفیرول اور ایسکوربک ایسڈ کے ساتھ علاج -گلوکان میں سائٹوکائن کی بڑھتی ہوئی پیداوار کو کم نہیں کرتا ہے۔ تاہم، ROS سکیوینجر NAC نے TNF کی پیداوار کو -glucan کے ذریعے بڑھایا، جو تربیت یافتہ استثنیٰ میں ROS کے ممکنہ کردار کی نشاندہی کرتا ہے۔

دلچسپ بات یہ ہے کہ NAC نہ صرف ایک اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیول ہے، بلکہ یہ گلوٹاتھیون کے پیش خیمہ کے طور پر بھی کام کرتا ہے، جو مرکزی اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیول ہے۔ دو بڑے سیلولر ریڈوکس سسٹمز ہیں، پائریڈائن نیوکلیوٹائڈس، جیسے این اے ڈی پلس/این اے ڈی ایچ، اور تھیول سسٹمز، جن میں گلوٹاتھیون اور تھیوریڈوکسینز شامل ہیں۔ تربیت یافتہ میکروفیجز [22] میں تفریق کی مدت کے بعد گلوکین سے ظاہر ہونے والے مونوکیٹس میں NAD پلس/NADH تناسب کو مسلسل بڑھایا جاتا ہے، جیسا کہ ہم ROS کی سطح کے لیے رپورٹ کرتے ہیں۔ یہاں ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ GSH ارتکاز کو تربیت یافتہ استثنیٰ میں بھی ماڈیول کیا جاتا ہے۔

سب سے زیادہ حیرت انگیز طور پر، GSH-کم شدہ شکل کا ارتکاز صرف مختلف تربیت یافتہ میکروفیجز میں بڑھایا جاتا ہے، جبکہ آکسائڈائزڈ GSSG کی سطح مستحکم ہوتی ہے۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ تربیت یافتہ میکروفیجز نے GSH اسٹورز میں اضافہ کیا ہے، جو NAD plus/NADH کے برعکس ROS کی مستقل پیداوار کے ساتھ شراکت نہیں کرتے ہیں۔ صحت مند افراد (300BCG) کے جینیاتی اور میٹابولک تجزیے سے تربیت یافتہ قوت مدافعت میں گلوٹاتھیون میٹابولزم کی شراکت کو مزید تقویت ملتی ہے۔ جی ایس ایچ سے متعلقہ جین کے اندر عام جینیاتی پولیمورفزم وٹرو میں اور ویوو میں تربیت یافتہ استثنیٰ (p <9.99 × 10−3) پر سائٹوکائن کی پیداوار کی شدت کو متاثر کرتے پائے گئے۔ مزید برآں، ان میں سے دو کیو ٹی ایل لوکی، chr5 پر GPX3 اور chr14 پر GLRX5، GSH پلازما ارتکاز (p <0.05) سے وابستہ پائے گئے۔

GSH ایک اینٹی آکسیڈینٹ مالیکیول ہے، لیکن یہ مختلف ایپی جینیٹک میکانزم کے ذریعے جین کے اظہار کو منظم کرنے کے لیے بھی جانا جاتا ہے۔ جی ایس ایچ مترجم کے بعد کی تبدیلیوں میں حصہ لیتا ہے، جیسا کہ نیوکلیوزوم پروٹین ہسٹون H3 کے S-glutathionylation میں مشاہدہ کیا گیا ہے، اور یہ میتھیونین پاتھ وے سے چلتا ہے جو بالآخر s-adenosyl methionine (SAM) کی پیداوار کا باعث بنتا ہے۔ بدلے میں، SAM ڈی این اے اور ہسٹون میتھیلیشن کے لیے استعمال ہونے والا بڑا میتھائل ڈونر ہے [7]۔ ٹی سی اے سائیکل میٹابولائٹ فومریٹ تربیت یافتہ میکروفیجز میں جمع ہوتا ہے، اور اس کا مشتق مونومیتھائل فومریٹ تربیت یافتہ مدافعتی فینوٹائپ کو اکساتا ہے [5]۔ ایسٹروسائٹس میں، مشتق ڈائمتھائل فومریٹ کی شدید نمائش انٹرا سیلولر جی ایس ایچ کو ختم کردیتی ہے لیکن بعد کے پوائنٹس پر کل جی ایس ایچ کو بڑھاتی ہے [25]۔ تربیت یافتہ استثنیٰ ایپی جینیٹک تبدیلیوں کے ذریعہ لنگر انداز ہوتا ہے جو طویل مدتی یادداشت فراہم کرتا ہے [26]۔ یہاں سے مشاہدہ کیا گیا تربیت یافتہ میکروفیجز کے GSH مواد میں اضافہ ہو سکتا ہے کہ پیدائشی مدافعتی یادداشت کے قیام کے لیے ضروری ایپی جینیٹک ری وائرنگ کو آسان بنا سکے۔

یہاں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ گلوٹاتھیون کی فارماسولوجیکل موڈیولیشن اور سیل کی ریڈوکس سٹیٹس میکروفیج کے ہیٹرولوگس ردعمل کو کم کرتی ہے، جیسا کہ BSO یا NAC کے -glucan سے بڑھے ہوئے سائٹوکائن کی پیداوار پر اثر سے دیکھا جاتا ہے۔ اس کے علاوہ، صحت مند افراد کے ایک گروہ میں، GSH میٹابولزم تربیت یافتہ قوت مدافعت کے خصائص سے وابستہ ہے۔ GSH میٹابولزم کے ذریعے تشکیل پانے والے تربیت یافتہ قوت مدافعت کے طریقہ کار کو مزید دریافت کرنا باقی ہے، لیکن میٹابولک اور ایپی جینیٹک مناظر دونوں کی ممکنہ شمولیت اس میٹابولک مرکز کو مستقبل کے مطالعے میں تحقیق کرنے کے لیے ایک دلچسپ راستہ بناتی ہے۔ یہ بصیرت تربیت یافتہ استثنیٰ کے میٹابولک اور ایپی جینیٹک وائرنگ کو کھولنے میں معاون ہے، جس سے صحت اور بیماری پر فطری قوت مدافعت کے اثرات کو بہتر طور پر سمجھنے میں مدد ملتی ہے۔ بالآخر، ایک بہتر تفہیم ان بیماریوں میں تھراپی کے نئے اہداف کی شناخت میں مدد کرے گی جن کی خصوصیات پیدائشی مدافعتی عمل کی بے ضابطگی ہے۔

مصنف کی شراکتیں:

تصورات: AVF اور JD-A. طریقہ کار: AVF، VACMK، VM اور JCA-B.، MAG؛ رسمی تجزیہ: AVF، VACMK، VM، اور JCA-B۔ تفتیش AVF, JCA-B., SK, LCJdB, SJCFMM, VPM, اور BN؛ ڈیٹا کیوریشن: AVF، VACMK، VM، اور BN؛ تحریر - اصل مسودہ کی تیاری، AVF؛ تحریر - جائزہ اور ترمیم: تمام شریک مصنفین؛ نگرانی: MAG، MGN، اور JD-A. فنڈنگ ​​کا حصول: MAG اور MGN تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔

فنڈنگ:

جے ڈی اے۔ نیدرلینڈز آرگنائزیشن فار سائنٹیفک ریسرچ (VENI گرانٹ 09150161910024) کی حمایت حاصل ہے۔ ایم جی این ERC ایڈوانسڈ گرانٹ (833247) اور نیدرلینڈز آرگنائزیشن فار سائنٹیفک ریسرچ کے اسپینوزا گرانٹ سے تعاون کیا جاتا ہے۔ AVF کو Fundação para a Ciência ea Tecnologia (FCT, Ph.D. گرانٹ PD/BD/135449/2017) سے تعاون حاصل ہے۔ JCAB کو کولمبیا میں سائنس، ٹیکنالوجی، اور اختراع کے انتظامی محکمے، COLCIENCIAS کی گرانٹ سے تعاون حاصل ہے (756/2016 پر کال کریں)۔ BN کو NHMRC (آسٹریلیا) انوسٹی گیٹر گرانٹ (APP1173314) سے تعاون حاصل ہے۔

ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان:

300BCG مطالعہ کی منظوری مقامی اخلاقیات کمیٹی CMO ریجن Arnhem-Nijmegen، NL58553.091.16 نے دی تھی۔

باخبر رضامندی کا بیان:

اخلاقی کمیٹی Arnhem-Nijmegen (nr. 2010-104) کی منظوری کے مطابق، مطالعہ میں شامل تمام مضامین سے باخبر رضامندی حاصل کی گئی تھی۔

ڈیٹا کی دستیابی کا بیان:

اس مطالعہ میں پیش کردہ آر این اے کی ترتیب کا ڈیٹا NCBI جین ایکسپریشن اومنیبس میں الحاق نمبر GSE85243 کے تحت دستیاب ہے۔

اعترافات:

مصنفین 300BCG مطالعہ میں حصہ لینے کے لیے تمام رضاکاروں کا شکریہ ادا کرنا چاہیں گے۔

مفادات میں تضاد:

MGN TTxD کا سائنسی بانی ہے۔ باقی مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔ فنڈرز کا مطالعہ کے ڈیزائن میں کوئی کردار نہیں تھا۔ ڈیٹا کو جمع کرنے، تجزیہ کرنے، یا تشریح میں؛ مخطوطہ کی تحریر میں، یا نتائج شائع کرنے کے فیصلے میں۔

حوالہ جات

1. نیٹیا، ایم جی؛ Domínguez-Andrés, J.; بیریرو، ایل بی؛ چاواکیس، ٹی. دیوانگاہی، ایم. Fuchs, E.; جوسٹن، LAB؛ وین ڈیر میر، جے ڈبلیو ایم؛ Mhlanga, MM; Mulder, WJM; ET رحمہ اللہ تعالی. تربیت یافتہ قوت مدافعت اور صحت اور بیماری میں اس کے کردار کی تعریف۔ نیٹ Rev. Immunol. 2020، 20، 375–388۔ [کراس ریف]

2. کوئنٹن، جے؛ سعید، ایس. مارٹینز، جے ایچ اے؛ Giamarellos-Bourboulis, EJ; Ifrim, DC; لوگی، سی. جیکبز، ایل۔ جانسن، ٹی. کولبرگ، بی جے؛ Wijmenga، C.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. Candida albicans انفیکشن monocytes کے فعال ری پروگرامنگ کے ذریعے دوبارہ انفیکشن کے خلاف تحفظ فراہم کرتا ہے۔ سیل ہوسٹ مائکروب 2012، 12، 223–232۔ [کراس ریف]

3. بیکرنگ، ایس. کوئنٹن، جے؛ جوسٹن، ایل اے؛ وان ڈیر میر، جے ڈبلیو؛ نیٹیا، ایم جی؛ Riksen، NP آکسائڈائزڈ کم کثافت لیپو پروٹین طویل مدتی پروینفلامیٹری سائٹوکائن کی پیداوار اور فوم سیل کی تشکیل کو Epigenetic Reprogramming of Monocytes کے ذریعے اکساتی ہے۔ ارٹر تھروم واسک بائول 2014، 34، 1731–1738۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

4. بینن، سی ایس؛ نیٹیا، ایم جی؛ سیلن، ایل کے؛ Aaby, P. A Small Jab-A Big Effect: Nonspecific Immunomodulation by Vaccines. رجحانات Immunol. 2013، 34، 431–439۔ [کراس ریف]

5. آرٹس، آر جے ڈبلیو؛ نوواکوچ، بی. ٹیر ہورسٹ، آر۔ کاروالہو، اے. Bekkering, S.; لچھمنداس، ای۔ Rodrigues, F.; سلویسٹری، آر. چینگ، ایس سی؛ وانگ، SY؛ ET رحمہ اللہ تعالی. Glutaminolysis اور Fumarate Accumulation Immunometabolic اور Epigenetic پروگراموں کو تربیت یافتہ استثنیٰ میں مربوط کرتا ہے۔ سیل میٹاب۔ 2016، 24، 807–819۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. کیٹنگ، ایس. گرو، ایل. وین ڈیر ہیجڈن، سی. Rodriguez, H.; Dos Santos, J.; Fanucchi, S.; اوکابی، جے؛ Kn، H.؛ وین پفیلن، جے؛ ہیلڈر، ایل۔ ET رحمہ اللہ تعالی. Set7 Lysine Methyltransferase Beta-Glucan کے ذریعہ تربیت یافتہ استثنیٰ کے لئے ضروری آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن میں پلاسٹکٹی کو منظم کرتا ہے۔ سیل کا نمائندہ 2020، 31، 107548۔ [CrossRef] [PubMed]

7. گارسیا-گیمنیز، جے ایل؛ Romá-Mateo، C.؛ Pérez-Machado, G.; پیرو چووا، ایل۔ پالارڈو، ایف وی بیماری میں ایپی جینیٹک میکانزم کے ضابطے میں گلوٹاتھیون کا کردار۔ فری ریڈک۔ بائول میڈ. 2017، 112، 36–48۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

8. بیکرنگ، ایس. بلاک، بی اے؛ جوسٹن، LAB؛ Riksen، NP؛ وین کریول، آر. Netea, MG In Vitro تجرباتی ماڈل انسان میں تربیت یافتہ پیدائشی قوت مدافعت۔ کلین ویکسین امیونول۔ 2016، 23، 926–933۔ [کراس ریف]

9. سہرابی، وائی. لگاشے، ایس ایم ایم؛ Schnack، L.؛ Godfrey, R.; Kahles, F.; Bruemmer, D.; والٹنبرگر، جے؛ Findeisen, HM mTOR منحصر آکسیڈیٹیو تناؤ انسانی مونوکیٹس میں oxLDL- حوصلہ افزائی تربیت یافتہ پیدائشی قوت مدافعت کو منظم کرتا ہے۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 2019، 9، 3155۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

10. وان ڈیر ہیجڈن، سی ڈی سی سی؛ کیٹنگ، ST؛ گرو، ایل. جوسٹن، LAB؛ نیٹیا، ایم جی؛ Riksen، NP Aldosterone تربیت یافتہ استثنیٰ پیدا کرتا ہے: فیٹی ایسڈ کی ترکیب کا کردار۔ کارڈیواسک۔ Res. 2020، 116، 317–328۔ [کراس ریف]

11. Domínguez-Andrés, J.; آرٹس، آر جے ڈبلیو؛ Bekkering, S.; بحرار، ایچ. بلاک، بی اے؛ ڈی بری، ایل سی جے؛ برونو، ایم؛ بلوٹ، Ö. ڈیبیسرون، PA؛ Dijkstra, H.; ET رحمہ اللہ تعالی. پیروکار انسانی مونوکیٹس میں تربیت یافتہ استثنیٰ کی وٹرو انڈکشن۔ اسٹار پروٹو۔ 2021، 2، 100365۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. نواکووچ، بی. حبیبی، ای. وانگ، S.-Y.؛ آرٹس، آر جے ڈبلیو؛ داور، آر. Megchelenbrink, W.; کم، بی؛ کزنیٹسووا، ٹی. کوکس، ایم؛ Zwaag، J.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. -گلوکان ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی امیونولوجیکل رواداری کی ایپی جینیٹک حالت کو تبدیل کرتا ہے۔ سیل 2016, 167, 1354–1368.e14۔ [کراس ریف]

13. Kostidis, S.; اڈی، آر ڈی؛ موریو، ایچ. Mayboroda, OA; Giera، M. ممالیہ خلیوں کے انٹرا اور ایکسٹرا سیلولر میٹابولزم کا مقداری NMR تجزیہ: ایک سبق۔ مقعد چم ایکٹا 2017، 980، 1–24۔ [کراس ریف]

14. کوکن، VACM؛ ڈی بری، ایل سی جے؛ Mourits, VP; Moorlag, SJCFM; واک، جے؛ Cirovic, B.; آرٹس، آر جے ڈبلیو؛ جیگر، ایم؛ Dijkstra, H.; Lemmers, H.; ET رحمہ اللہ تعالی. انسانوں میں BCG ویکسینیشن جنس پر منحصر طریقے سے نظامی سوزش کو روکتی ہے۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 2020، 130، 5591–5602۔ [کراس ریف]

15. انسانی فنکشنل جینومکس پروجیکٹ۔ آن لائن دستیاب: http://www.humanfunctionalgenomics.org/site/ (19 اپریل 2021 کو رسائی)۔

16. شاہ، ٹی ایس؛ لیو، جے زیڈ؛ فلائیڈ، جے اے بی؛ مورس، جے اے؛ Wirth, N.; بیریٹ، جے سی؛ اینڈرسن، CA OptiCall: نایاب، کم تعدد اور عام متغیرات کے لیے ایک مضبوط جین ٹائپ کالنگ الگورتھم۔ بایو انفارمیٹکس 2012، 28، 1598–1603۔ [کراس ریف]

17. ڈیلن، پی.؛ بونڈر، ایم جے؛ وان ڈیر ویلڈے، کے جے؛ ویسٹرا، ایچ جے؛ وانڈر، ای. ہینڈرکسن، ڈی۔ فرینک، ایل. Swertz، MA جینوٹائپ ہارمونائزر: جین ٹائپ ڈیٹا انٹیگریشن کے لیے خودکار اسٹرینڈ الائنمنٹ اور فارمیٹ کنورژن۔ BMC Res. نوٹس 2014، 7۔ [کراس ریف]

18. McCarthy, S.; داس، ایس. Kretzschmar, W.; Delaneau, O.; لکڑی، اے آر؛ تیومر، اے. کانگ، ایچ ایم؛ Fuchsberger, C.; Danecek، P.؛ تیز، K.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. 64,976 ہاپلوٹائپس کا ایک حوالہ پینل جینی ٹائپ انپٹیشن کے لیے۔ نیٹ جینیٹ 2016، 48، 1279–1283۔ [کراس ریف]

19. شبالین، اے اے میٹرکس ای کیو ٹی ایل: بڑے میٹرکس آپریشنز کے ذریعے الٹرا فاسٹ ای کیو ٹی ایل تجزیہ۔ بایو انفارمیٹکس 2012، 28، 1353–1358۔ [کراس ریف]

20. Fuhrer, T.; ہیر، ڈی. Begemann، B.؛ زیمبونی، این۔ ہائی تھرو پٹ، فلو انجیکشن ٹائم آف فلائٹ ماس سپیکٹرومیٹری کے ذریعے سیلولر نچوڑ کی درست ماس ​​میٹابولوم پروفائلنگ۔ مقعد کیم 2011، 83، 7074–7080۔ [کراس ریف]

21۔ کلافتی، ایل۔ کورٹزلیس، آئی۔ Schulte-schrepping, J.; ورجینس، پی. Mitroulis, I. Granulopoiesis کی پیدائشی مدافعتی تربیت اینٹی ٹیومر سرگرمی کو فروغ دیتی ہے۔ سیل 2020, 183, 771–785.e12۔ [کراس ریف]

22. چینگ، ایس سی؛ کوئنٹن، جے؛ کریمر، RA؛ Shepardson, KM; سعید، ایس. کمار، وی. Giamarellos-Bourboulis, EJ; مارٹینز، جے ایچ اے؛ راؤ، این اے؛ آغاجانیرفاہ، اے. ET رحمہ اللہ تعالی. MTOR- اور HIF-1 -تعلیم یافتہ استثنیٰ کی میٹابولک بنیاد کے طور پر ثالثی ایروبک گلائکولائسز۔ سائنس 2014، 345، 1250684۔ [کراس ریف]

23. Moorlag, SJCFM; Rodriguez-Rosales, YA; گیلارڈ، جے؛ Fanucchi, S.; Theunissen, K.; نوواکوچ، بی. ڈی بونٹ، سی ایم؛ نیگیشی، وائی۔ فوک، ای ٹی؛ کلفتی، ایل۔ ET رحمہ اللہ تعالی. BCG ویکسینیشن انسانی نیوٹروفیلز کی طویل مدتی فنکشنل ری پروگرامنگ کی حوصلہ افزائی کرتی ہے۔ سیل ریپ. 2020، 33۔ [کراس ریف]

24. Forrester, SJ; کیکوچی، ڈی ایس؛ Hernandes, MS; Xu, Q.; Griendling, KK میٹابولک اور سوزش سگنلنگ میں رد عمل آکسیجن پرجاتیوں. سرک Res. 2018، 122، 877–902۔ [کراس ریف]

25. برینن، ایم ایس؛ Matos, MF; لی، بی؛ Hronowski, X.; گاو، بی؛ Juhasz، P.؛ روڈس، کے جے؛ سکینون، آر ایچ ڈائمتھائل فومریٹ اور مونوتھیل فومریٹ KEAP1، NRF2 ایکٹیویشن، اور وٹرو میں گلوٹاتھیون کی کمی پر امتیازی اثرات ظاہر کرتے ہیں۔ PLOS ONE 2015, 10, e0120254۔ [کراس ریف]

26. کافمین، ای. سانز، جے؛ ڈن، جے ایل؛ خان، این. Mendonça, LE; Pacis, A.; Tzelepis, F.; پرنیٹ، ای. ڈومین، اے. گرینیئر، J.-C.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. BCG ہیماٹوپوائٹک اسٹیم سیلز کو تپ دق کے خلاف حفاظتی پیدائشی قوت مدافعت پیدا کرنے کی تعلیم دیتا ہے۔ سیل 2018, 172, 176–190.e19۔ [کراس ریف]

انیسہ وی فریرا 1,2،*، ویلری اے سی ایم کوکن 1،3،4، واسیلیکی ماتزاراکی 1، سارانتوس کوسٹیڈیس 5، جوآن کارلوس الارکون-بیریرا 5، ایل شارلٹ جے ڈی بری 1، سیمون جے سی ایف ایم مورلاگ پی 1، موریٹس 1، بورس نواکووچ 6,7، مارٹن اے گیرا 5، میہائی جی نیتیا 1,8 اور جارج ڈومینگیز-اینڈریس۔

1 ڈپارٹمنٹ آف انٹرنل میڈیسن اور ریڈباؤڈ سنٹر برائے متعدی امراض (RCI)، Radboud University Nijmegen Medical Center, 6500 HB Nijmegen, The Netherlands;

Valerie.Koeken@radboudumc.nl (VACMK)؛ Vasiliki.Matzaraki@radboudumc.nl (VM)؛

Charlotte.deBree@radboudumc.nl (LCJdB)؛ Simone.Moorlag@radboudumc.nl (SJCFMM)؛

Vera.Mourits@radboudumc.nl (VPM)؛ Mihai.Netea@radboudumc.nl (MGN)۔

2 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar (ICBAS), Universidade do Porto, 4050-313 Porto, Portugal.

3 TWINCORE، Helmholtz-Centre for Infection Research (HZI) اور ہنور میڈیکل سکول (MHH)، 30625 Hannover، جرمنی کے درمیان ایک مشترکہ منصوبہ۔

4 مرکز برائے انفرادی انفیکشن میڈیسن (CiiM)، شعبہ کمپیوٹیشنل بائیولوجی برائے انفرادی انفیکشن میڈیسن، Helmholtz-Centre for Infection Research (HZI) اور ہنور میڈیکل اسکول (MHH)، 30625 Hannover، جرمنی کے درمیان ایک مشترکہ منصوبہ۔

5 سینٹر فار پروٹومکس اینڈ میٹابولومکس، لیڈن یونیورسٹی میڈیکل سینٹر (LUMC)، 2333 ZA لیڈن، نیدرلینڈز؛ s.kostidis@lumc.nl (SK); jcalarcon_barrera@lumc.nl (JCA-B.);m.a.giera@lumc.nl (MAG)

6 ایپی جینیٹکس ریسرچ، مرڈوک چلڈرن ریسرچ انسٹی ٹیوٹ، پارک ویل، VIC 3052، آسٹریلیا؛boris.novakovic@mcri.edu.au۔

7 ڈیپارٹمنٹ آف پیڈیاٹرکس، یونیورسٹی آف میلبورن، میلبورن، VIC 3052، آسٹریلیا۔

8 شعبہ برائے جینومکس اینڈ امیونوریگولیشن، لائف اینڈ میڈیکل سائنسز انسٹی ٹیوٹ (LIMES)، یونیورسٹی آف بون، 53115 بون، جرمنی۔

* خط و کتابت: anaisa.validoferreira@radboudumc.nl (AVF)؛ Jorge.dominguezandres@radboudumc.nl (JD-A.); ٹیلی فون: جمع 31-2436-16636 (JD-A.)

For more information:1950477648nn@gmail.com