الٹراساؤنڈ کی مدد سے نکالنے والے مونگ پھلی کے چھلکے سے الگ تھلگ بائیو ایکٹیو مرکبات کے جلد کی سفیدی اور جھریوں کے خلاف اثرات

رابطہ:ali.ma@wecistanche.com

دا ہائے گیم 1، جی وو ہانگ 1، جون ہی کم 1 اور جن وو کم 1،2،3،*

خلاصہ:جوابی سطح کے طریقہ کار کو الٹراساؤنڈ اسسٹڈ ایکسٹرکشن (UAE) کے حالات کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا تاکہ انحصار متغیرات کی بیک وقت اصلاح کی جا سکے، بشمول DPPHradical scavenging activity (RSA)، ٹائروسینیز ایکٹیویٹی انہیبیشن (TAI)، اور مونگ پھلی کے کولیگنیس ایکٹیویٹی انہیبیشن (CAI)۔ اہم متغیرات کے اثرات بشمول نکالنے کا وقت (50~550 منٹ، X1)، نکالنے کا درجہ حرارت (260~940 ◦C , X2)، اور ایتھنول کا ارتکاز (0.0 فیصد ~99.5 فیصد ,X3) کو بہتر بنایا گیا۔ ہر حالت سے تجرباتی اقدار کی بنیاد پر، کواڈریٹک ریگریشن ماڈلز بہترین حالات کی پیشین گوئی کے لیے اخذ کیے گئے تھے۔ آزاد متغیر کا عددی تعین (R2) 0.89~0.96 کی حد میں تھا، جو ظاہر کرتا ہے کہ ریگریشن ماڈل پیشین گوئی کے لیے موزوں ہے۔ UAE کے بہترین حالات کی پیشن گوئی کرنے کے لیے سپر امپوزنگ طریقہ کی بنیاد پر، نکالنے کا وقت 31.2 منٹ، نکالنے کا درجہ حرارت 36.6 ◦C، اور 93.2 فیصد ایتھنول کی حراستی کی نشاندہی کی گئی۔ ان حالات کے تحت، 74.9 فیصد کی RSA، 50.6 فیصد کی TAI، اور 86.8 فیصد کی CAI کی پیشین گوئی کی گئی، جو تجرباتی اقدار کے ساتھ اچھے معاہدے کو ظاہر کرتی ہے۔ ایک ریورس ٹرانسکرپشن پولیمریز چین کے رد عمل سے پتہ چلتا ہے کہ مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق میں ایم آر این اے کی سطح میں کمی واقع ہوئی ہے۔ٹائروسینیزB16-F0 خلیوں میں متعلقہ پروٹین-1 اور میٹرکس میٹالوپروٹینیز-3 جین۔ لہذا، ہم نے شناخت کیاجلد کو سفید کرنااور پروٹین کے ساتھ ساتھ جین کے اظہار کی سطح پر مونگ پھلی کے چھلکے کے عرقوں کے شکن مخالف اثرات، اور نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ مونگ پھلی کے چھلکے کے لیے ایک موثر کاسمیٹک مواد ہے۔جلد کو سفید کرنااور جھریوں کے خلاف اثرات۔ اس تحقیق کی بنیاد پر، مونگ پھلی کے چھلکے، جسے ایک ضمنی پروڈکٹ سمجھا جاتا تھا، صحت مند کھانے، ادویات اور کاسمیٹکس کی نشوونما کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:مونگ پھلی کے خول؛ اصلاح؛جلد کو سفید کرنا; جھوریاں کو ختم کرنے والی؛ اینٹی آکسیڈینٹٹائروسینیز; collagenase انسانی ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین-1 (TRP-1)؛ میٹرکس میٹالوپروٹینیس (MMP)

نامیاتی کے لیے کلک کریں۔cistanche whitening skincare products.

1. تعارف

میلانین ایک بھورے یا سیاہ رنگ کا پولیمر روغن ہے جو ایپیڈرمس میں میلانوسائٹس کے میلانوسومس سے ترکیب کیا جاتا ہے۔ اس کا بنیادی کام جلد کی حفاظت کے لیے الٹرا وائلٹ (UV) شعاعوں کو روکنا ہے۔ متبادل طور پر، اس کی ضرورت سے زیادہ پیداوار پگمنٹ ڈارکننگ کا سبب بن سکتی ہے، جیسے میلاسما، مولز اور عمر کے دھبے [1–3]۔ ٹائروسینیز ایک بڑا انزائم ہے جو آٹو آکسیڈیشن اور پولیمرائزیشن ری ایکشنز کو اتپریرک کرتا ہے، جس کے ذریعے ٹائروسین ڈائی ہائڈروکسی فینیلالینائن کے ذریعے ڈوپاکوئنون میں تبدیل ہوتا ہے اور ڈوپاکرومیڈورنگ میلانین بائیو سنتھیسز [4] کے ذریعے میلانین پیدا کرتا ہے۔ اس طرح، یہ بڑے پیمانے پر کی روک تھام کے ذریعے میلانین کی پیداوار کو کم کرنے یا کم کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ٹائروسینیزکاسمیٹکس کے سفیدی اثر کو بڑھانے کے لیے سرگرمی [5]۔ تیز رفتار صنعت کاری اور کلورو فلورو کاربن کے بڑھتے ہوئے استعمال نے زمین کی حفاظتی اوزون تہہ کو بری طرح نقصان پہنچایا، اس طرح UV کی زیادہ مقدار زمین تک پہنچتی ہے اور جلد کو بے نقاب کرتی ہے۔ UV تابکاری میں یہ اضافہ نتیجتاً انسانی جسم میں ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی فعال نسل پیدا کرتا ہے، جیسے سپر آکسائیڈ anions، ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈز اور ہائیڈروکسیل ریڈیکلز۔ ایسی انواع نے ٹائروسین کے مسلسل آکسیکرن کو فروغ دیا ہے، جس کے نتیجے میں میلانین کی پیداوار میں اضافہ ہوا ہے۔ اس سلسلے میں، مطالعہ فعال طور پر کی روک تھام پر کئے جاتے ہیںٹائروسینیزسرگرمی کے ساتھ ساتھ ترقی کے لیے ROS کو ہٹاناجلد کو سفید کرناایجنٹس [6]۔ کولیجن ایک بڑا خلوی میٹرکس ہے جو 90 فیصد جلد پر مشتمل ہوتا ہے۔ کولیجن جلد کی حفاظت کرتا ہے اور لچک دیتا ہے اور جلد کی میکانکی سختی، مزاحمت، جوڑنے والے بافتوں کی پابندی، اور خلیات کے پھیلاؤ اور تفریق میں شامل ہوتا ہے [7]۔ پروٹین جو ایکسٹرا سیلولر میٹرکس بناتے ہیں، جیسے کہ کولیجن، کولیجینیز، جیسے میٹرکس میٹالوپروٹینیز (MMP) کے ذریعے گل جاتے ہیں، جس کی وجہ سے جھریاں پڑتی ہیں، لچک میں کمی آتی ہے، اور جلد کا جھکاؤ ہوتا ہے [8]۔ مختلف قسم کے MMPs جن کا اظہار ROShydrolyze کولیجن چین، جلد کے جوڑنے والے بافتوں کو کرتے ہیں، اور اس کی غیر معمولی کراس لنکنگ پیدا کرتے ہیں تاکہ کولیجن کی سڑن کو بڑھایا جا سکے اور جھریوں کی تشکیل کو تیز کیا جا سکے [9]۔ اس وجہ سے، میلانین کی پیداوار کی روک تھام اور کولیجن کی سڑن کو آر او ایس کی نسل میں کمی کے ذریعے جلد کی سفیدی اور جھریوں کی روک تھام کے لیے بنیادی توجہ مرکوز کی گئی ہے [10]۔آربوٹین، کوجک ایسڈ، اور لینولینک ایسڈ، کو سفید کرنے والی کاسمیٹکس کے طور پر اور ریٹینول، گیلیٹ، اینڈڈینوسین، اینٹی کے طور پر۔ -شیکن کاسمیٹکس، حالیہ برسوں میں بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے. تاہم، ان مواد کا استعمال محدود ہے، روشنی اور حرارت کی موجودگی میں ان کے عدم استحکام کے ساتھ ساتھ جلد کی جلن اور کانٹیکٹ ڈرمیٹیٹائٹس [11] سمیت منفی ردعمل کے پیش نظر۔ روایتی سفیدی اور اینٹی شیکن اجزاء کی خامیوں پر قابو پانے کے لیے قدرتی اینٹی آکسیڈنٹس میں بڑھتی ہوئی دلچسپی کے ساتھ، پودوں سے حاصل کیے گئے عرقوں کو جلد کے لیے موزوں اور محفوظ بنانے کے لیے بایو ایکٹیو مرکبات تیار کرنے کے لیے فعال طور پر استعمال کیا گیا ہے۔سفید کرنااور شکن مخالف کاسمیٹکس [12,13]۔

نکالنے کے مختلف طریقے ہیں جو فی الحال پودوں سے بائیو ایکٹیو مرکبات کو نکالنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں۔ تاہم، قدرتی ذرائع، خاص طور پر پودوں سے بائیو ایکٹیو مرکبات کا اخراج بنیادی طور پر سالوینٹس، گرم پانی، اور سوکسہلیٹ نکالنے کے طریقوں کے ذریعے کیا گیا ہے، جس میں مختلف خرابیاں ظاہر کی گئی ہیں، بشمول کم نکالنے کی کارکردگی، اجزاء کی سڑن، کم استحکام، اور آپریشن کی زیادہ لاگت۔ [14]۔ اس طرح، نکالنے کے طریقوں کا حال ہی میں تجربہ کیا گیا ہے، بشمول الٹراساؤنڈ کی مدد سے، مائکروویو کی مدد سے، اور سپر کریٹیکل نکالنے [15]۔ خاص طور پر، الٹرا ساؤنڈ تقریباً 20 کلو ہرٹز یا اس سے زیادہ کی تعدد کے ساتھ ایک ساؤنڈ ویو ہے، جس کے نتیجے میں کمپریشن، کاویٹیشن، مائع کی andrarefaction ہوتی ہے، اس طرح زیادہ سے زیادہ نکالنے کی کارکردگی حاصل کرنے کے لیے مختصر وقت میں مالیکیولر موشن زیادہ سے زیادہ ہوتا ہے [16]۔ مزید برآں، الٹراساؤنڈ فائدہ مند ہے، کیونکہ اس کا مختصر نکالنے کا وقت بائیو ایکٹیو مرکبات کے گلنے کو کم کرتا ہے اور اسے اینٹی آکسیڈنٹ کے ساتھ قدرتی اجزاء کو نکالنے کے لیے ایک مؤثر طریقہ کے طور پر جانچا جاتا ہے،سفید کرنا، اور بہت سے پودوں اور جڑی بوٹیوں سے جھریوں کے خلاف خصوصیات [17]۔ الٹراساؤنڈ اسسٹڈ ایکسٹرکشن (یو اے ای) کی کارکردگی کو بڑھانے کے لیے ایکسٹریکشن کنڈیشن آپٹیمائزیشن ضروری ہے، اور آپٹیمائزیشن کا عمل یا تو تجرباتی یا شماریاتی طریقوں سے انجام دیا جا سکتا ہے۔ روایتی ون فیکٹر-ایٹ-ا-وقت طریقہ، تمام متغیرات کے ساتھ مستقل اور تبدیل ہوتے رہتے ہیں۔ ایک وقت میں صرف ایک عنصر، انٹرایکٹو اثرات کا تعین کرنے میں حدود رکھتا ہے اگر یہ ایک ملٹی ویریٹ تجربہ ہے۔ دوسری طرف، RSM ملٹی ویریٹی تجربات میں متغیرات کے درمیان ارتباط کے بارے میں شماریاتی معلومات فراہم کرتا ہے، کم سے کم نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے موثر تجربات کے ساتھ ساتھ ریگریشن ماڈل کی تاثیر اور موزوںیت کا جائزہ لینے کے لیے اہم ریاضیاتی اور شماریاتی تکنیک۔ مختلف آر ایس ایم ڈیزائن، جیسے مکمل فیکٹریل ڈیزائن، باکس-بیہنکن ڈیزائن، اور مرکزی جامع ڈیزائن (CCD)، بڑے پیمانے پر استعمال کیے گئے ہیں۔ ان میں سے، سی سی ڈی بہت کارآمد ہے اور اس طرح تجرباتی متغیر اثرات اور مجموعی تجرباتی غلطی کے بارے میں بہت زیادہ معلومات فراہم کرتا ہے، جس میں مطلوبہ رنز کی کم از کم تعداد ہوتی ہے قدرتی مصنوعات سے مختلف اینٹی آکسیڈینٹس اور دیگر میٹابولائٹس نکالنے کے حالات۔

مونگ پھلی (Arachis hypogaea) ایک سالانہ پودا ہے جس کا تعلق پھلیوں کے خاندان سے ہے۔ یہ دنیا کے 50 سے زائد ممالک میں اگائی جاتی ہے، بشمول جنوبی کوریا، بھارت، چین اور امریکہ [19]۔ مونگ پھلی پروٹین (25 فیصد)، لپڈس (47 فیصد)، اور کاربوہائیڈریٹس (16 فیصد) کے ساتھ ساتھ معدنیات، وٹامنز، نیاسین، غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈز، اینڈولیک ایسڈز [20] کے بھرپور ذرائع ہیں۔ انہیں یا تو بغیر پروسیس شدہ یا پروسیس شدہ مصنوعات کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، بشمول نٹ، مکھن، اور کوکنگ آئل۔ ایک اندازے کے مطابق دنیا کی سالانہ مونگ پھلی کی پیداوار مجموعی طور پر 4.1 ملین ٹن ہے اور یہ کہ مونگ پھلی کے خول کا حصہ مونگ پھلی کے کل وزن کا 35 فیصد ~ 40 فیصد ہے [21]۔ ایک اندازے کے مطابق 1.5 ملین ٹن سے زیادہ مونگ پھلی کے چھلکے ہر سال ضمنی مصنوعات کے طور پر ضائع کیے جاتے ہیں۔ تاہم، یہ دیکھتے ہوئے کہ مونگ پھلی کے چھلکوں کا صرف ایک حصہ جانوروں کی خوراک کے طور پر استعمال ہوتا ہے اور یہ کہ ان میں سے زیادہ تر جلی ہوئی یا زمین سے بھری ہوئی ہیں، جس سے تلف کرنے کے اخراجات اور ماحولیاتی مسائل پیدا ہوتے ہیں، ضمنی مصنوعات کے مسئلے پر قابو پانے کے لیے مونگ پھلی کے چھلکوں کا استعمال کرتے ہوئے اعلیٰ قیمتی مواد تیار کرنا ضروری ہے۔ ] اینٹی آکسیڈینٹس پر پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ مونگ پھلی کی جلد کے عرقوں کی سوزش اور موٹاپا مخالف سرگرمیوں کی اطلاع دی گئی ہے [23,24]۔ تاہم، ابھی تک، بہتر بنانے کے لیے فنکشنل کاسمیٹک مواد کی تیاری پر کوئی تحقیق نہیں ہوئی ہے۔سفید کرنااور مونگ پھلی کے چھلکوں سے بایو ایکٹیو مرکبات کا استعمال کرتے ہوئے جھریوں کے خلاف اثرات۔ لہذا، اس مطالعہ نے مونگ پھلی کے چھلکے سے بائیو ایکٹیو مرکبات کو الٹراساؤنڈ اسسٹڈ ایکسٹریکشن (UAE) کو استعمال کرکے نکالا تاکہ ان کے اینٹی آکسیڈینٹ، سفیدی اور شکن مخالف اثرات کی تصدیق کی جا سکے اور اس کے علاوہ رسپانس سرفیس میتھڈ (RSM) کا استعمال کرتے ہوئے متحدہ عرب امارات کی ایک بہترین حالت پیش کی اور نچوڑ کی فعالیت کو بڑھایا۔ کھانے، کاسمیٹکس اور طبی اجزاء کے طور پر اس کے استعمال کے امکان کی تصدیق کرنے کے لیے۔

2. نتائج اور بحث

2.1 آر ایس ایم ماڈلز کو فٹ کرنا

اس کام میں، نکالنے کا درجہ حرارت، نکالنے کا وقت، اور ایتھنول کی ارتکاز کو CCD کے بنیادی متغیرات کے طور پر منتخب کیا گیا تھا تاکہ UAE کو متاثر کرنے والے اہم متغیرات کا تعین کرنے کے لیے ابتدائی ون فیکٹر-ایٹ-ایک-وقت تجربہ استعمال کیا جا سکے (ٹیبل 1)۔

اس کے بعد، 17 تجرباتی رنز بنائے گئے، بشمول 3 ریپلیکیٹس سینٹر پوائنٹ پر 3-متغیرات اور 5 لیول CCD کا استعمال کرتے ہوئے۔ غیر واضح تغیر کے اثرات کو کم کرنے کے لیے تجرباتی ترتیب کو بے ترتیب بنا کر تجرباتی غلطیوں کو کم کیا گیا تھا۔ DPPH ریڈیکل سکیوینجنگ ایکٹیویٹی (RSA) کے تجرباتی اور پیش گوئی شدہ نتائج،ٹائروسینیزسرگرمی روکنا (TAI)، اور کولیگنیس سرگرمی روکنا (CAI) ٹیبل 2 میں دکھایا گیا ہے۔

CCD تجرباتی حالات کے 17 تجرباتی رنز اور تجرباتی نتائج کے درمیان ارتباط کا تعین کرنے کے لیے، ان 3 متغیرات کی بہترین سطح کی پیشین گوئی کرنے کے لیے متعدد ریگریشن ماڈل تجویز کیے گئے تھے۔ تجرباتی اعداد و شمار پر متعدد رجعت کے تجزیے کو لاگو کرنے سے، منحصر متغیرات (Y) اور آزمائشی متغیرات کا تعلق درج ذیل چوکور رجعت مساوات (ٹیبل 3) سے تھا۔

تغیرات کا تجزیہ (ANOVA) تجرباتی ڈیٹا کا تجزیہ کرنے کے لیے ایک شماریاتی امتحان ہے۔ یہ ڈیٹاسیٹ میں کل تغیرات کو اجزاء کے حصوں میں تقسیم کرتا ہے جو تغیر کے مخصوص ذرائع سے منسلک ہوتے ہیں تاکہ متغیر اجزاء کا اندازہ لگانے کے لیے ماڈلر کے متغیرات پر ایک مفروضے کی جانچ کی جا سکے [25]۔ رسپانس سطح کا تجزیہ اور ANOVA کو قابلیت کا تعین کرنے، ماڈل کی اصطلاحات کی شماریاتی اہمیت کا اندازہ لگانے اور تجرباتی اعداد و شمار کے ریاضیاتی ماڈلز کو فٹ کرنے کے لیے کام کیا گیا تھا جس کا مقصد جوابی متغیرات کے لیے مجموعی علاقے کو بہتر بنانا تھا [26]۔ جیسا کہ ماڈل کے ذریعہ قائم کیا گیا ہے، ریگریشن ماڈلز کے ذریعے تجرباتی اور پیشین گوئی شدہ جوابات کے درمیان تعلق کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہونے والے ارتباطی گتانک (R2) 0.8862~0.9622 کی حد میں تھے۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ تجزیہ کردہ پروسیس وی ایبلز 88.6 فیصد سے زیادہ آزاد متغیرات کی وضاحت کرتے ہیں۔ ڈیزائن-ماہر سافٹ ویئر کو کواڈریٹک ریگریشن مساوات کے گتانک کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا اور ANOVA کے ذریعے ماڈل کی مناسبیت کی جانچ کی گئی تھی۔ چوکور رجعت کی مساوات کی یک جہتی عددی قدر کے مطابق جدول 4 میں درج ہیں اور آزاد متغیرات کے بنیادی اثر میں ترجیحی ترتیب ایتھنول کا ارتکاز (X3) > نکالنے کا درجہ حرارت (X2) > نکالنے کا وقت (X1) ہے۔

2.2 RSA پر نکالنے کی شرائط کا اثر

جدول 2 متحدہ عرب امارات کے مختلف حالات کے مطابق RSA کے تجرباتی اعداد و شمار کو ظاہر کرتا ہے۔ سب سے زیادہ RSA کی شناخت درج ذیل نکالنے کی شرائط کے تحت کی گئی تھی: نکالنے کا وقت 550 منٹ، نکالنے کا درجہ حرارت 60۔{10}} ◦C، اور ایتھنول کا ارتکاز 5۔ 0۔{18}} فیصد (رن #10)۔ سب سے کم RSA 7.6 فیصد، 30۔{28}} منٹ کے نکالنے کے وقت کے تحت، نکالنے کا درجہ حرارت 60.0 ◦C، اور ایتھنول کا ارتکاز 0.0 فیصد، کو تجرباتی قدر کے طور پر شناخت کیا گیا (رن #13) . متعدد رجعت تجزیہ کو لاگو کرتے ہوئے، تجرباتی اعداد و شمار اور جوابات کا تعلق چوکور رجعت مساوات (ٹیبل 3) سے تھا۔ شماریاتی تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ ریگریشن ماڈل کا R2 0.9308 (p=0.0027) تھا، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ یہ مساوات تجرباتی حالات کے نتائج کے 93.0 فیصد کی وضاحت کر سکتی ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ماڈل انتہائی اہم تھا اور درست پیشین گوئی کے لیے استعمال کیا جا سکتا تھا۔ ردعمل کی تقریب.

RSA پر دوسرے متغیرات کی مقررہ سطحوں پر انفرادی UAE متغیر کے اثر کی پیشین گوئی کی گئی ہے اور شکل 1a میں دکھایا گیا ہے۔ RSA کا رجحان بڑھتا ہے اور پھر کم ہوتا ہے کیونکہ تمام UAEvariables میں اضافہ ہوتا ہے۔ ایتھنول کے ارتکاز کا RSA پر تین UAE متغیرات میں سب سے زیادہ اثر پڑا، جبکہ نکالنے کا وقت اور نکالنے کا درجہ حرارت RSA پر سب سے کم اثر رکھتا ہے۔ یہ نتیجہ ANOVA کے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے جس میں RSA پر ایتھنول کے ارتکاز نے زیادہ اہم اثر (p=0.0002) دکھایا جیسا کہ جدول 4 میں دکھایا گیا ہے۔ RSA پر آزاد متغیر کے درمیان تعامل کا اثر 3D کا استعمال کرتے ہوئے تصور کیا گیا تھا۔ ردعمل کی سطح کے منحنی خطوط ایتھنول کے ارتکاز کی مقررہ سطح (شکل 2A) پر نکالنے کا درجہ حرارت اور نکالنے کا وقت بیک وقت تبدیل کیا گیا تھا۔ جیسے جیسے دو متغیرات (نکالنے کے درجہ حرارت اور وقت) میں اضافہ ہوا، RSA زیادہ سے زیادہ سطح تک بڑھ گیا اور پھر دوبارہ کم ہوا۔ سب سے زیادہ RSA 56.1 ◦C کے ایک نکالنے والے درجہ حرارت پر حاصل کیا گیا تھا، جس کی وجہ سے پتہ چلتا ہے کہ 56.1 ◦C تک درجہ حرارت پر پودوں کی دیوار کے اجزاء، جیسے لگنن کی تباہی کے ساتھ، اینٹی آکسیڈنٹ صلاحیتوں کے ساتھ بایو ایکٹیو مرکبات، جیسے پولیفینول، کے اخراج میں اضافہ ہوتا ہے۔ تاہم، اعلی درجہ حرارت پر، اینٹی آکسیڈینٹ اجزاء کے گلنے یا پولیمرائزیشن کی وجہ سے RSA میں کمی واقع ہوئی تھی۔ شکل 2B، C سے پتہ چلتا ہے کہ RSA نکالنے کے وقت یا درجہ حرارت سے نمایاں طور پر متاثر نہیں ہوا تھا، جب کہ RSA نمایاں طور پر ایتھنول کے ارتکاز سے متاثر ہوا تھا، جو کہ 61.0 فیصد ایتھنول حراستی میں سب سے زیادہ تھا اور جس میں دوبارہ کمی واقع ہوئی۔ یہ نتیجہ کم ایٹ ال کے لیسپیڈیزا کونیٹا کے گرم پانی نکالنے کے تجربے سے مطابقت رکھتا ہے۔ جس میں RSA نکالنے کے درجہ حرارت کے مقابلے ایتھنول کے ارتکاز سے زیادہ متاثر ہوا تھا، اور RSA زیادہ سے زیادہ 60 فیصد ~ 70 فیصد کی ایتھنول حراستی کی حد میں تھا [27]۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ متحدہ عرب امارات میں مونگ پھلی کے چھلکے نکالنے کے لیے بائنری سالوینٹ (پانی اور ایتھنول) کی نکالنے کی کارکردگی زیادہ موثر ہے۔

2.3۔ TAI پر نکالنے کی شرائط کا اثر

ٹائروسینیزایک انزائم ہے جو epidermis کے تہہ خانے کی تہہ میں ٹائروسین کو آکسائڈائز کر کے میلانین کی پیداوار کو فروغ دیتا ہے اور اس انزائم کی روک تھام کو بڑھانے کے لیے ضروری ہے۔جلد کو سفید کرنا [28]. The TAI of peanut shell extracted via UAE, according to 17 extraction conditions, ranged from 0.34% to 51.8% (Table 2). Based on experimental values, the relationship between independent variables (X1, X2, X3) and the dependent variable (TAI) was modeled using quadratic regression equations as shown in Table 3. To evaluate the agreement between the experimental and predicted values derived by the quadratic regression models, the goodness-of-fit of the model was evaluated based on ANOVA. The R2 was 0.9622, which is close to 1 and indicates a high degree of correlation between the experimental and predicted values. p-value is used as a tool to evaluate the significance of each coefficient and interactions between each independent variable. The UAE variables will be more significant if the p-value becomes smaller and significance was confirmed at the level of p < 0.05 [29,30]. In evaluating the effects of independent variables, the significance was determined in the order of ethanol concentration (p < 0.0001) >نکالنے کا درجہ حرارت (p < {{0}}.0598) > نکالنے کا وقت (p <0.4329)، جس نے اس بات کی تصدیق کی کہ TAI میں ایتھنول کے ارتکاز کا اثر سب سے زیادہ اہم تھا۔

TAI پر متحدہ عرب امارات کے حالات کے اثر کا موازنہ کرنے کے لیے، مرکزی نقطہ پر دو متغیرات کو طے کر کے TAI پر انفرادی متغیرات کے اثر کو جانچنے کے لیے ہنگامہ خیز پلاٹ کا استعمال کیا گیا۔ جیسا کہ شکل 1b میں دکھایا گیا ہے، TAI نے پچھلے RSA تجربات کے مقابلے میں ایک مختلف نمونہ دکھایا؛ ایتھنول کے ارتکاز میں اضافے کے ساتھ اس میں اضافہ ہوا، جبکہ نکالنے کے وقت نے TAI کو نمایاں طور پر متاثر نہیں کیا۔ ایتھنول ارتکاز کے ساتھ TAI کے نمایاں متناسب اضافے کی وضاحت ANOVA کے نتائج سے کی جا سکتی ہے۔ TAI ایتھنول کے ارتکاز کی بنیادی اصطلاح (X3)، اور (p < 0="" سے="" نمایاں="" طور="" پر="" متاثر="" ہوا="" تھا۔="" 3d="" رسپانس="" سطح="" کا="" منحنی="" خطوطی="" رجعت="" کی="" مساوات="" اور="" tai="" کے="" نتائج="" کی="" تصویری="" نمائندگی="" ہے،="" جیسا="" کہ="" نکالنے="" کا="" درجہ="" حرارت="" (x1)،="" نکالنے="" کا="" وقت="" (x2)،="" اور="" ایتھنول="" ارتکاز="" (x3)="" سے="" متاثر="" ہوتا="" ہے۔="" شکل="" 3a="" tai="" پر="" نکالنے="" کے="" وقت="" اور="" ایتھنول="" کے="" ارتکاز="" کے="" تعامل="" کے="" اثر="" کو="" تصور="" کرتا="" ہے۔="" نتیجہ="" نے="" اس="" بات="" کی="" تصدیق="" کی="" کہ="" نکالنے="" کے="" وقت="" نے="" tai="" پر="" کوئی="" خاص="" اثر="" نہیں="" دکھایا،="" جبکہ="" ایتھنول="" کی="" حراستی="" کا="" tai="" کے="" ساتھ="" مضبوط="" متناسب="" تعلق="" تھا۔="" اسی="" طرح،="" جیسا="" کہ="" شکل="" 3b="" میں="" دکھایا="" گیا="" ہے،="" tai="" نکالنے="" کے="" درجہ="" حرارت="" کی="" نسبت="" ایتھنول="" کے="" ارتکاز="" پر="" زیادہ="" انحصار="" کرتا="" تھا="" اور="" ایتھنول="" کی="" ارتکاز="" بڑھ="" کر="" 99.5="" فیصد="" تک="" سب="" سے="" زیادہ="" tai="" حاصل="" کی="" گئی۔="" uae="" کے="" حالات="" کی="" زیادہ="" سے="" زیادہ="" tai="" کی="" تلاش="" میں،="" tai="" کی="" زیادہ="" سے="" زیادہ="" شرائط="" کی="" قدریں="" 3{{20}}.0="" منٹ،="" 26.3="" ◦c،="" اور="" 99.5="" فیصد="" ہونے="" کی="" پیش="" گوئی="" کی="" گئی="" تھی۔="" یہ="" نتیجہ="" ناکامورا="" ایٹ="" ال="" کے="" ذریعہ="" رپورٹ="" کردہ="" جیسا="" ہی="" ہے۔="" لیموں="" کے="" پتوں="" کی="" حیاتیاتی="" سرگرمی="" پر="" ایک="" مطالعہ="" میں،="" جب="" 20.0="" فیصد="" ~="" 80.0="" فیصد="" ایتھنول="" کو="" نکالنے="" والے="" سالوینٹس="" کے="" طور="" پر="" استعمال="" کیا="" گیا،="" تو="" ایتھنول="" کے="" ارتکاز="" میں="" اضافے="" کے="" جواب="" میں="" tai="" نے="" تناسب="" میں="" اضافہ="" کیا="" اور="" 80="" فیصد="" ایتھنول="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" نکالنے="" میں="" زیادہ="" سے="" زیادہ="" قدر="" ظاہر="" کی۔="" اس="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" ایتھنول="" کی="" زیادہ="" ارتکاز="" کا="" استعمال="" بائیو="" ایکٹیو="" مرکبات="" کو="" نکالنے="" میں="" فائدہ="" مند="">جلد کو سفید کرنامونگ پھلی کے چھلکوں یا دوسرے پودوں سے اثر۔

2.4 CAI پر نکالنے کی شرائط کا اثر

Collagen is the most abundant protein in mammals and the main structural component of the extracellular matrix with gly-pro-hyp repeating units longer than 1400 amino acids. Collagenase is an enzyme that breaks down peptide bonds of collagen that form skin, bones, tendons, and ligaments. The collagen present in the dermis is decomposed by collagenase, which causes skin wrinkles and reduces skin elasticity; therefore, it is necessary to reduce the activity of collagenase to prevent skin wrinkles [32,33]. The optimization of the UAE condition was performed to maximize the CAI of peanut shell extract. A total of 17 runs were needed for optimizing the three individual variables and the experimental data of CAI obtained under experimental sets were 25.2%~92.3% (Table 2). Based on the 17 experimental runs, by applying multiple regression analysis on the experimental data, response and independent variables were related by the following quadratic regression equation in terms of the coded parameters given in Table 3. Then, ANOVA was applied to determine the regression coefficients, statistical significance, and to fit the mathematical models. The mean-square values were calculated by dividing the sum of the squares of each variation source by their degrees of freedom, and a 95% confidence level (α = 0.05) was applied to determine the statistical significance in the analysis of the quadratic model. The ANOVA results confirmed that R2 of the quadratic regression equation was 0.8862 and that the p-value was 0.0134, which is less than the significance level (p < 0.05), thus indicating a good model of fit and statistical significance for predicting CAI values. In the primary term, the X2 and X3 showed significant effects and the interaction effect terms were significant in the X1X2 and X2X3 (p < 0.05). The effect of UAE conditions on CAI production was confirmed to be in the order of: extraction temperature (p = 0.0236) >ایتھنول کا ارتکاز (p=0.0240) > نکالنے کا وقت (p=0.8505)، اس طرح یہ ظاہر کرتا ہے کہ نکالنے کے درجہ حرارت اور ایتھنول کی حراستی کا اثر CAI پر اہم تھا۔

شکل 1c ایک ہنگامہ خیز پلاٹ دکھاتا ہے جس میں دو متغیرات طے کیے گئے ہیں اور اس نے CAI پر ایک متغیر کے اثر کا تصور کیا۔ CAI پر تینوں متغیرات کے اثرات ایک جیسے دکھائے گئے تھے، اور تینوں متغیرات نے نمایاں اثرات دکھائے اور ان میں اضافہ ہوا اور بعد میں CAI میں کمی آئی کیونکہ ہر آزاد متغیر میں اضافہ ہوا۔ ہمارے مطالعے میں، 3D سطحی ردعمل کے منحنی خطوط کو کواڈراٹک ریگریشن مساوات (شکل 4) کا استعمال کرتے ہوئے CAI میں دو آزاد متغیرات کے تعامل کو دیکھنے کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ جب ایتھنول کا ارتکاز مرکز کے مقام پر طے کیا گیا تھا، CAI پر نکالنے کے وقت اور درجہ حرارت کے اثر کو شکل 4A میں جانچا گیا تھا۔ جیسا کہ دو متغیرات ایک ساتھ تبدیل ہوئے، CAI 33.4 منٹ اور 76.8 ◦C تک بڑھ گیا اور 92.8 فیصد کی زیادہ سے زیادہ CAI کے بعد دوبارہ کم ہوا۔ جیسا کہ شکل 4B, C میں دکھایا گیا ہے، 64.3 فیصد ایتھنول کے ارتکاز پر CAI کی سب سے زیادہ قدر تھی، جو بعد میں بتدریج کم ہونے کے رجحان کو ظاہر کرتی ہے، جس سے پتہ چلتا ہے کہ 64.3 فیصد ایتھنول پر مشتمل ایک بائنری سالوینٹ نکالنے والے سالوینٹ کے طور پر زیادہ موزوں ہے۔ یہ نتیجہ پچھلی تحقیق سے مطابقت رکھتا ہے جس میں بتایا گیا تھا کہ پانی اور ایتھنول کے بائنری سالوینٹس نے Oostachys japonica سے بائیو ایکٹیو مرکبات کے اخراج میں پانی سے زیادہ CAI ظاہر کیا، جس سے پتہ چلتا ہے کہ 50 فیصد ایتھنول نکالنے میں زیادہ فائدہ مند ہوگا۔جلد کو سفید کرنااجزاء [34]۔ quadraticregression ماڈل کے ذریعہ پیش گوئی کی گئی مونگ پھلی کے خول کے عرق کی زیادہ سے زیادہ CAI 94.5 فیصد تھی، جو 45.1 منٹ کے نکالنے کے وقت، 93.6 ◦C کے نکالنے کا درجہ حرارت، اور 42.3 فیصد ایتھنول کے ارتکاز کے تحت حاصل کیا گیا تھا۔ ہمارے مطالعے میں حاصل کردہ CAI 94.5 فیصد تھا، جو Oh et al کے ذریعہ رپورٹ کردہ سبز چائے کے عرقوں کی CAI اقدار کے 39.4 فیصد اور 40.3 فیصد اثرات کے دو گنا سے زیادہ ہے۔ [35]۔

2.5 نکالنے کی بہترین شرائط

اینٹی آکسیڈینٹ،جلد کو سفید کرنااور شکن مخالف اثرات کاسمیٹکس کے تمام اہم افعال ہیں اور یہ ضروری ہے کہ ایسے حالات حاصل کیے جائیں جو متحدہ عرب امارات کے حالات کو بہتر بنانے میں بیک وقت ان تینوں افعال کو زیادہ سے زیادہ کر سکیں۔ شکل 5 ایک اصلاحی طریقہ کار کو دکھاتا ہے جو ایک ہی وقت میں RSA (Y1) TAI (Y2) اور CAI (Y3) کو زیادہ سے زیادہ کر سکتا ہے اور ایک کواڈریٹک ریگریشن مساوات کے ذریعے اخذ کردہ کنٹور گراف کی ہر ایک بہترین حالت کو اوور لیپ کر سکتا ہے۔ تین متغیرات کی اصلاح کے لیے آزاد متغیرات کی حدیں 5 کے نکالنے کے وقت تک محدود تھیں۔{6}}~550 منٹ، نکالنے کا درجہ حرارت 26۔{10}~94۔ . انفرادی بہترین نکالنے کے حالات کے مطابق، UAE کے بہترین حالات نکالنے کا وقت 31.2 منٹ، نکالنے کا درجہ حرارت 36.6 ◦C، ایتھنول کا 93.2 فیصد، اور مندرجہ بالا شرائط کے تحت، RSA کا 74.9 فیصد، TAI کا 50.6 فیصد، اور CAI کا 86.8 فیصد پیش گوئی کی گئی تھی۔ جب پیشن گوئی شدہ RSA، TAI، اور CAI اقدار کا توثیق کے لیے تجربے سے حاصل کردہ اقدار سے موازنہ کیا گیا، توثیق کے ٹیسٹ کی قدریں پیش گوئی کی گئی قدروں سے ملتی جلتی تھیں، جہاں یہ قدریں بالترتیب 78.2 فیصد، 52.3 فیصد اور 87.7 فیصد تھیں۔

2.6۔ SE اور UAE کا موازنہ

UAE کے نکالنے کی تاثیر کی تصدیق کرنے کے لیے، ہم UAE اور Soxhlet نکالنے (SE) تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے تیار کردہ مونگ پھلی کے خول کے عرق کا RSA، TAI، اور CAI کا موازنہ کرتے ہیں۔ جب SE کو عام SE حالات کے تحت 99.5 فیصد ایتھنول کا استعمال کرتے ہوئے 70 ◦C پر نکالنے کے وقت کے 4 گھنٹے کے لیے کیا گیا تو RSA، TAI، اور CAI 75.5 فیصد، 60.2 فیصد، اور 74.4 فیصد پائے گئے، جو کہ نہیں تھے۔ UAE کی بہترین حالت کے تحت حاصل کردہ نتائج سے بہت مختلف۔ تاہم، جب SE حالات متحدہ عرب امارات کے 31.2 من اور 93.2 فیصد ایتھنول کی بہترین شرائط کے برابر مقرر کیے گئے تھے، RSA، TAI، اور CAI میں بالترتیب 62.0، 28.3، اور 45.6 فیصد کی کمی واقع ہوئی، زیادہ سے زیادہ حالات میں متحدہ عرب امارات کے مقابلے۔ مونگ پھلی کے چھلکوں سے مفید مواد تیار کرنے میں الٹراساؤنڈ کے فائدے کو کم سالوینٹ کی کھپت اور کم نکالنے کے وقت کی وجہ سے اعلی پیداوار اور صنعت کاری کے لیے موزوں عمل کے طور پر جانچا گیا۔

2.7۔ MMP-3 اور TRP-1 کا mRNA اظہار

ممالیہ میلانوسائٹس میں، میلانوجینیسیس اور کولیجن ہائیڈولیسس کو بالترتیب TRP اور MMP جینز کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے، اور TRP{{0} اور MMP-3 melanogenesis اور collagen hydrolysis کے ریگولیشن کے لیے مینجینز کے طور پر جانے جاتے ہیں۔ لہٰذا، B16-F0 خلیات کے پورے سیل لائسیٹس پر RT-PCR تجزیہ کیا گیا اور بہترین حالات میں متحدہ عرب امارات سے تیار کردہ مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق کا اثر (31.2 منٹ، 36.6 ڈگری، 93.2 فیصد) MMP-3 اور TRP-1 کے mRNA اظہار پر مطالعہ کیا گیا۔ جیسا کہ شکل 6 سے ظاہر ہوتا ہے، مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق نے B16-F0 خلیوں میں MMP-3 اور TRP-1 کے اظہار کو نمایاں طور پر کم کر دیا جب مونگ پھلی کے ساتھ جین کے اظہار کے تجربات کیے گئے۔ شیل نکالنے کی حراستی کی حد 0~1 ملی گرام/ملی لیٹر۔ مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق نے نمایاں طور پر MMP-3 اور TRP-1 اظہار کو 6 تک کم کیا۔{24}}گنا اور 8۔{26}}گنا، بالترتیب 10 ملی گرام۔ /mL یہ نتائج بتاتے ہیں کہ مونگ پھلی کے چھلکے کا عرق B16F0 خلیوں میں کولیجن کے انحطاط کو روکتا ہے MMP 3 کے غیر فعال ہونے سے MMP-1 کے غیر فعال ہونے سے اور MMP-9 [36] کے تعاون میں مداخلت کرتا ہے۔ موجودہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ پودوں کے نچوڑوں کے ساتھ علاج نے فاسفوریلیٹ ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ پروٹین کناز (ERK) کے ذریعہ مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) کے اظہار کو روک دیا۔ اس طرح، مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق کے ذریعے میلانین کی پیداوار کے روکنے والے اثر کو اس کی روک تھام سے منسوب کیا جاتا ہے۔ٹائروسینیزERK اور MITF [37] کے اظہار کی روک تھام کے ذریعے سرگرمی۔ اس طرح، مونگ پھلی کے چھلکے کے نچوڑ نے TRP-1 اور MMP-3 کے mRNA اظہار کی سطح کو کم کیا، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق میں کولیجینولیسس اور میلانوجینیسیس پر مضبوط روک تھام کی سرگرمیاں ہوتی ہیں جو اسے ایک بہترین کاسمیٹک مواد بناتی ہیں۔جلد کو سفید کرنااور اینٹی شیکن اثرات۔

3. مواد اور طریقے

3.1 مواد اور ری ایجنٹس

مونگ پھلی کے چھلکے نونگہیپ مارٹ (گوچانگ، جیون بک، کوریا) سے 2019 مارچ میں خریدے گئے تھے اور چھلکے 60 ◦C پر خشک تندور (FC 49، لیب ہاؤس، سیول، کوریا) کا استعمال کرتے ہوئے 24 گھنٹے تک خشک کیے گئے تھے۔ خشک وزن مسلسل رہا. سوکھی مونگ پھلی کے چھلکوں کو فوڈ پروسیسر (ہانیل HMF-3800، سیول، کوریا) کا استعمال کرتے ہوئے پلورائز کیا گیا اور پھر 600 µmsieve سے گزرا۔ ایتھنول سامچون کیمیکل سے خریدا گیا تھا (95.0 فیصد v/v، سیول، کوریا)۔ Folin–Ciocalteu reagent، gallic acid (97 فیصد)، اور quercetin مرک (Kenilworth, NJ, USA) سے خریدے گئے تھے۔ 2،2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)، ascorbic acid، اور 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) سگما-الڈرچ (سینٹ لوئس، سے خریدا گیا تھا) MO، USA)۔ اس تجربے میں استعمال ہونے والے تمام کیمیکل تجزیاتی گریڈ کے تھے اور سگما-الڈرچ سے خریدے گئے تھے۔ تمام سٹاک سلوشنز aMilli-Q پیوریفیکیشن سسٹم (ملی پور، برلنگٹن، VT، USA) کا استعمال کرتے ہوئے پیوریفائیڈ ڈیونائزڈ پانی کے ذریعے تیار کیے گئے تھے۔

3.2 الٹراساؤنڈ کی مدد سے نکالنے اور Soxhlet نکالنے

پاؤڈر شدہ مونگ پھلی کے خول (1 جی) کو نکالنے کے برتن میں رکھا گیا تھا، ہر ایک میں 10 ملی لیٹر سالوینٹس اور ورٹیکس مکسر (VM-10، Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) کا استعمال کرتے ہوئے ملایا گیا تھا۔ 1 منٹ الٹراسونک ایکسٹریکٹر (250 W, SD-D250H, Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) میں ایک بیرونی ریفریجریٹڈ باتھ سرکولیٹر (CDRC8, Daihan Scientific Co., Ltd., Wonju, Korea) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ ) ڈیجیٹل ٹائمر اور درجہ حرارت کنٹرولر کے ساتھ۔ نکالنے کو ڈیجیٹل ٹائمر اور درجہ حرارت کنٹرولر سے لیس الٹراسونک ڈیوائس کے ساتھ انجام دیا گیا تھا۔ نمونے کو مختلف تجرباتی دورانیے اور درجہ حرارت کے لیے 40 کلو ہرٹز کی ورکنگ فریکوئنسی پر سونیکیٹ کیا گیا تھا۔ پھر، ایکسٹریکٹ کو 10،000 rpm پر 10 منٹ (236R, Labogene, Seoul, Korea) پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سینٹرفیوگریشن کے بعد، نمونے کے حجم کو 5 ملی لیٹر تک بنایا گیا تھا اور تجزیہ سے پہلے 0.2 µmmembrane فلٹر کے ذریعے فلٹر کیا گیا تھا۔ Soxhlet نکالنے کے لیے، مونگ پھلی کے پاؤڈر کے خول (5 گرام) کو مسلسل 100 mL کے ساتھ 99.5 فیصد ایتھنول کا استعمال کرتے ہوئے 4 گھنٹے (8 سائیکل) کے لیے زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت 70 ◦C Soxhlet اپریٹس میں نکالا گیا۔ انگور کے بیجوں سے تیل نکالنے میں الٹراساؤنڈ کی مدد سے نکالنے والی تکنیک کو بہت کارآمد ثابت کیا گیا تھا، الٹراساؤنڈ کا فائدہ تیل اور پولی فینول دونوں کے لیے نکالنے کے روایتی طریقوں کے مقابلے میں، یکساں تھا کیونکہ تیل/پولی فینول کی پیداوار کم سالوینٹس کے استعمال کے ساتھ حاصل ہوتی ہے۔ نکالنے کا وقت.

3.3 تجرباتی نمونہ

تجرباتی ڈیزائن CCD، RSM کی ایک قسم کا استعمال کرتے ہوئے تجرباتی رنز کی تعداد کو کم کرنے اور عوامل کے درمیان تعامل کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ TheDesign-Expert® سافٹ ویئر 8۔{2}} (State-Ease, City, MN, USA) کو تجربات کے ڈیزائن، ڈیٹا کے تجزیے، اور نکالنے کے حالات کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا تاکہ اینٹی آکسیڈینٹ والے بائیو ایکٹیو مرکبات کو زیادہ سے زیادہ نکالا جا سکے۔جلد کو سفید کرنا، اور مونگ پھلی کے خول سے شکن مخالف اثرات۔ تجربات کو CCD کے مطابق ڈیزائن کیا گیا تھا، پیش کردہ تین آزاد متغیرات کی حد اور مرکز نقطہ کی اقدار ابتدائی تجربات کے نتائج (ٹیبل 1) پر مبنی تھیں۔ CCD کا اطلاق مونگ پھلی کے خولوں سے RSA، TAI، اور CAI سمیت زیادہ سے زیادہ ردعمل کے لیے UAE کے بہترین حالات کی پیش گوئی کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ آزاد متغیر کے طور پر، منتخب کردہ تین متغیرات نکالنے کا وقت (X1)، نکالنے کا درجہ حرارت (X2)، اور ایتھنول کی حراستی (X3) تھے۔ تولیدی صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے مرکزی پوائنٹس پر تین نقل کے ساتھ کل 17 تجرباتی رنز بنائے گئے۔ کواڈریٹک ریگریشن ماڈل کا استعمال تجرباتی ڈیٹا کو فٹ کرنے کے لیے کیا گیا تھا اور جوابی متغیرات کی پیشین گوئی کے لیے لاگو کیا گیا تھا، جیسا کہ مساوات (1) میں دکھایا گیا ہے:

Y= 0 جمع 1X1 جمع 2X2 جمع 3X3 جمع 11X12 جمع 22X22 جمع 33X32 جمع 12X1X2 جمع 13X1X3 جمع 23X2X3 (1)

جہاں Y پیشین گوئی شدہ جواب ہے؛ 0 مستقل ہے (انٹرسیپٹ)؛ 1، 2، اور 3 لکیری اثر کی اصطلاحات کے لیے ریگریشن گتانک ہیں؛ 11، 22، اور 33 چوکور اثرات کی اصطلاحات ہیں۔ اور 12، 13، اور 23 بالترتیب تعامل اثر کی اصطلاحات ہیں۔ ایک رسپانس سرفیس تجزیہ اور ANOVA کو ریگریشن گتانکوں اور ماڈل کی اصطلاحات کی شماریاتی اہمیت کا تعین کرنے اور تجرباتی [38] کے ریاضیاتی ماڈل کے مطابق کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

3.4 DPPH ریڈیکل سکیوینگنگ ایکٹیویٹی (RSA)

مونگ پھلی کے خول کے عرق کا RSA جیسا کہ پریرا کیرو ایٹ ال نے بیان کیا ہے۔ [39]۔ 0 کا حل۔{7}}میتھانول (95 فیصد) میں 1 ایم ایم ڈی پی پی ایچ تیار کیا گیا اور 0.25 ملی لیٹر پتلا عرق میں 1.25 ملی لیٹر شامل کیا گیا۔ RSA نے 20 منٹ کے انکیوبیشن کے بعد UV-Visspectrophotometer (UV1650PC، Shimadzu، Kyoto، Japan) کا استعمال کرتے ہوئے 517 nm پر جاذبیت کی پیمائش کرنے کا عزم کیا تھا۔ خالی پانی آست پانی کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا اور RSA کا حساب ذیل کے مطابق کیا گیا تھا۔(مساوات (2)):

RSA (فیصد)={1 −Abs (نمونہ) /Abs (کنٹرول) }× 100 (2)

3.5 Tyrosinase سرگرمی روکنا (TAI)

TAI کو ترمیم شدہ طریقہ کے مطابق انجام دیا گیا تھا L-DOPA کو سبسٹریٹ کے طور پر Jo et al۔ [40]۔ نمونوں کو 200 µL L-DOPA اور 200 µL پوٹاشیم فاسفیٹ بفر (pH 6.8) اور 200 µL کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ٹائروسینیز(125 U/mL) کو ٹیسٹ ٹیوب میں شامل کیا گیا اور 37 ◦C پر 20 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ نمونہ جاذبیت کو UV-Vis spectrophotometer کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm پر ماپا گیا اور نتائج کا موازنہ کنٹرول سے کیا گیا۔ ہر ارتکاز کے لیے، انزائم کی سرگرمی کو بغیر کسی روکنے والے کے بفر کا استعمال کرتے ہوئے تھیسس کے مقابلے میں فیصد کے طور پر شمار کیا گیا تھا، اور TAI کا حساب درج ذیل فارمولے کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ (مساوات (3)):

TAI (فیصد)={1 −Abs (کنٹرول) − Abs (نمونہ) /Abs (کنٹرول)} × 100 (3)

جہاں Abs (کنٹرول) بفر پلس کولیجینیز کا جذب ہے؛ Abs (نمونہ) بفر پلس کولیجینیز جمع نمونہ/معیاری کا جذب ہے۔

3.6۔ کولیجینیس سرگرمی روکنا (CAI)

نچوڑ کے CAI کی پیمائش Wünsch اور Heindrich [41] کے طریقوں میں ترمیم کرکے کی گئی۔ سبسٹریٹ، 4-phenylazobezyloxylcarbonyl-Pro-Leu-Gly Pro-Arg (FALGPA)، کو 10 mL بفر میں 1.2 mg/mL میں تحلیل کیا گیا اور پھر 125 µL حل شامل کیا گیا اور 60 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 37 ◦C پر۔ کولیجینیز کو بفر میں 0.4 ملی گرام/ملی لیٹر میں تحلیل کیا گیا تھا، اور بفر کے حل میں 75 µL انزائم محلول شامل کیا گیا تھا۔ تھینزائم-سبسٹریٹ مکسچر کو پانی کے غسل میں 37 ◦C پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا اور 75 μL 20 فیصد سائٹرک ایسڈ (w/v) شامل کرکے رد عمل کو روک دیا گیا۔ 1.5 ملی لیٹر ethylacetate شامل کرنے کے بعد، ethyl acetate کی تہہ کو الگ کر دیا گیا اور جاذبیت کو 320 nm پر ماپا گیا۔ مندرجہ ذیل فارمولے کے مطابق انحبیشن کا فیصد شمار کیا گیا۔

CAI (فیصد)={1 - [Abs (کنٹرول) − Abs (نمونہ)] /Abs (کنٹرول)} × 100 (4)

جہاں Abs (کنٹرول) بفر پلس کولیجینیز کا جذب ہے؛ Abs (نمونہ) بفر پلس کولیجینیز پلس نمونہ/معیاری کا absorbance ہے۔

3.7 سیل لائنوں کی دیکھ بھال اور ثقافت

میلانین پیدا کرنے والا B16-F0 میلانوما سیل کوریا سیل لائن بینک (KCLB, Chongno, Seoul, Korea) سے حاصل کیا گیا تھا اور اسے Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) فیٹل بوائین سیرم (FBS، 10 فیصد، ویلجین، گیونگسان، کوریا) اور پینسلن-اسٹریپٹومائسن (سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) کے اینٹی بائیوٹک محلول کے ساتھ ضمیمہ۔ Trypsin-EDTA (Gibco, Grand Island, NY, USA) خلیوں کے ٹرپسنائزیشن کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ استعمال ہونے والا تمام مواد سیل کلچر گریڈ کا تھا۔

3.8۔ ریورس ٹرانسکرپشن پولیمریز چین ری ایکشن (RT-PCR)

RT-PCR کو MMP-3 اور TRP-1 جین اظہار کی سطحوں سے وابستہ تبدیلیوں کی پیمائش کرنے کے لیے انجام دیا گیا تھا۔سفید کرنااور شکن مخالف اثرات، B16-F0 خلیات کو سیرم فری ڈی ایم ای ایم میں مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق کے مختلف ارتکاز کے ساتھ اچھی طرح سے ایک24- پلیٹ میں کلچر کیا گیا اور 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ غیر علاج شدہ سیل کنٹرول کو انہی حالات میں برقرار رکھا گیا تھا جیسا کہ تجربے کے دوران ٹیسٹ شدہ گروپ۔ خلیوں سے آر این اے الگ تھلگ AccuPrep® یونیورسل RNA ایکسٹرکشن کٹ (Bioneer, Daejeon, Korea) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ AmfiRiert Platinum cDNA سنتھیس MasterMix (GenDEPOT, Barker, TX, USA) کا استعمال کرتے ہوئے تکمیلی DNA کی ترکیب کی گئی تھی۔ RT-PCR تجزیہ ایم آر این اے کی سطح کا تعین کرنے کے لیے CFX 96 ٹچ PCR سسٹم (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ استعمال شدہ پرائمرس مندرجہ ذیل تھے: MMP-3 سینس، {{10}}AGTTTGGTGTCGCGGAGCAC-30 اور اینٹی سینس، 50-TACATGAGCGCGCTTCCGGCAC-30; اور TRP-1 سینس، 50-GCTGCAGGAGCCTTTCTTTCTC 30 اور اینٹی سینس، 50-AAGACGCTGCACTGCTGGTCT-30۔ مندرجہ ذیل سائیکلنگ کی شرائط کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ جینوں کو بڑھانے کے لیے اوپر بیان کردہ پرائمر کا ایک مناسب سیٹ استعمال کیا گیا تھا: 5 منٹ کے لیے 94 ◦C، اس کے بعد 5 s کے لیے 95 ◦C پر 25 سائیکل، 30 s کے لیے 60 ◦C (forMMP-3) ، اور 30 ​​سیکنڈ کے لیے 60 ◦C (TRP-1 کے لیے)، اور 30s کی توسیع کے لیے 72 ◦C۔ PCR پروڈکٹس کو 1 فیصد ایگروز جیل پر الیکٹروفورس کیا گیا، ایتھیڈیم برومائیڈ سے داغ دیا گیا، اور جیل Doc TM XR پلس سسٹم اور کوانٹیٹی ون سافٹ ویئر 2.0 (Bio-Rad, Hercules, CA,USA) کا استعمال کرتے ہوئے تصور کیا گیا۔ ایک ہاؤس کیپنگ پروٹین، -ایکٹین، کو لوڈنگ کنٹرول کے طور پر اس مفروضے کے ساتھ استعمال کیا گیا تھا کہ ان پروٹینوں کے اظہار کی سطح مستقل رہتی ہے۔

4. نتائج

اس مطالعہ میں، تکمیلی نقطہ نظر کو مونگ پھلی کے چھلکوں کے زرعی ضمنی مصنوعات سے حیاتیاتی مادوں کی بازیابی اور استعمال کے لیے استعمال کیا گیا تاکہ متعدد استعمال کے ساتھ اضافی قدر والے اجزاء تیار کیے جاسکیں۔ سب سے پہلے، ہم نے متحدہ عرب امارات کے عمل کو بہتر بنا کر اینٹی آکسیڈینٹ، جلد کو سفید کرنے، اور جھریوں کے خلاف اثرات کے ساتھ بائیو ایکٹیو مرکبات کی نکالنے کی کارکردگی کو بڑھانے کی کوشش کی۔ لہذا، اس مطالعہ نے متحدہ عرب امارات کو بائیو ایکٹیو مرکبات کی موثر پیداوار کے لیے استعمال کیا۔جلد کو سفید کرنااور مونگ پھلی کے چھلکوں سے شکن مخالف اثرات اور RSA، TAI، اور CAI کو بیک وقت زیادہ سے زیادہ کرنے کے لیے اعدادوشمار پر مبنی اصلاح کا اطلاق ہوتا ہے۔ UAE کے حالات کو CCD کا استعمال کرتے ہوئے بہتر بنایا گیا تھا اور اس بات کی تصدیق کی گئی تھی کہ مونگ پھلی کے چھلکوں سے بائیو ایکٹیو مرکبات کے اخراج میں سالوینٹ اور ارتکاز کے انتخاب پر غور کیا جانا چاہیے۔ ردعمل کی سطحوں کو اوور لیپ کرتے ہوئے، تین منحصر متغیرات کے منحنی خطوط، نکالنے کا وقت 31.2 منٹ، نکالنے کا درجہ حرارت 36.6 ◦C، اور 93.2 فیصد کی اینڈتھنول کی ارتکاز متحدہ عرب امارات کے بہترین حالات ہونے کا تعین کیا گیا۔ اس بات کی تصدیق کی گئی ہے کہ مونگ پھلی کے چھلکے کے عرق کا RSA بہت زیادہ ہے اور TAI اور CAI میں اضافے کی توقع کی جا سکتی ہے، جو کہجلد کو سفید کرنااور بالترتیب اینٹی شیکن اثرات۔ متحدہ عرب امارات کے حالات کی اصلاح نے مونگ پھلی کے چھلکوں میں بائیو ایکٹیو مادوں کی پیداوار میں اضافے اور مونگ پھلی کے چھلکوں کے عرق کی سفیدی اور شکن مخالف سرگرمیوں کی تصدیق کی ہے۔ٹائروسینیزاور collagenase سرگرمی میں کمی۔ اس کی بنیاد پر، ایم ایم پی اور ٹی آر پی کے اظہار کی سطح پر مونگ پھلی کے چھلکوں کے اثرات کا جائزہ لیا گیا تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ آیا ان کے جین کے اظہار کی سطح پر سفیدی اور شکن مخالف اثرات ہیں۔ mRNA اظہار کے ساتھ ساتھ MMP-3 اور TRP-1 کے پروٹین اظہار کی روک تھام۔ لہذا، مونگ پھلی کے چھلکے کا عرق موثر ثابت ہوا ہے۔سفید کرنااور پروٹین کے اظہار اور جین کی سطح پر جھریوں میں بہتری۔ مونگ پھلی کے چھلکے کا عرق، متحدہ عرب امارات کا استعمال کرتے ہوئے، اعلیٰ اینٹی آکسیڈنٹ سرگرمی اور بہترین جلد کو سفید کرنے اور جھریوں کے خلاف اثرات رکھتا ہے، جس سے مونگ پھلی کے خول کو قدرتی کاسمیٹک اور کھانے کے اجزاء کے طور پر بڑی صلاحیت ملتی ہے۔ مزید برآں، یہ خیال کیا جاتا ہے کہ UAE کا استعمال کرتے ہوئے بائیو ایکٹیو مرکبات کی تیاری کا استعمال کاسمیٹکس، خوراک، اور دواسازی کے مواد کی پیداوار کے لیے کمرشلائزیشن کے عمل پر لاگو کیا جا سکتا ہے، روایتی عمل کے مقابلے زیادہ پیداواری پیداوار اور کم پروسیسنگ لاگت کے پیش نظر۔