زیادہ نمک کی مقدار اور اس کے جنگلی چوہوں میں قدرتی گٹ مائکروبیوم پر اثرات

1. تعارف

ممالیہ جانوروں کی آنت ایک پیچیدہ اور متنوع بیکٹیریل کمیونٹی کے ذریعہ نوآبادیاتی ہے، جو میزبان کے ساتھ مل کر ایک نازک علامتی تعلق پیدا کرتی ہے [1,2]۔ یہ بیکٹیریل کمیونٹی میزبان کے لیے مفید بہت سے افعال انجام دیتی ہے، بشمول میٹابولک، امیونو موڈیولٹنگ، اور ٹرافک فنکشنز [3–7] اور گٹ مائکرو بائیوٹا کی ساخت زندگی کے دوران بدل سکتی ہے، میزبان کی مخصوص ضروریات اور فزیالوجی کے مطابق [1,8، 9]۔ آنتوں کی صحت کو فروغ دینے والے بیکٹیریا کے بہت سے فائدہ مند افعال انیروبک ابال سے حاصل شدہ میٹابولائٹس [10-13] کے ذریعہ ثالثی کرتے ہیں اور dysbiotic حالات میزبان صحت [2,11,14,15] کو نمایاں طور پر متاثر کرسکتے ہیں۔ صحت پر طرز زندگی کے اثرات کی بڑھتی ہوئی تشویش نے گٹ مائکرو بائیوٹا کی شمولیت اور اس کے مترجم مضمرات میں سائنسی دلچسپی میں اضافہ کیا ہے [16,17]۔ درحقیقت، گٹ مائکرو بائیوٹا دونوں خارجی (مثلاً طرز زندگی، خوراک، اور طبی علاج) اور اندرونی (مثلاً میزبان جینیات، مدافعتی اور میٹابولک ضوابط) عوامل [8,18–20] سے تشکیل پاتا ہے۔ یہ عام طور پر تسلیم کیا جاتا ہے کہ خارجی عناصر پر اثر اثرات مرتب کر سکتے ہیں، جس میں غذا گٹ مائکرو بائیوٹا کی ساخت اور فنکشن کو متاثر کرنے میں اہم کردار ادا کرنے والے عوامل میں سے ایک ہے [1,2,21]۔ مغربی غذائی اجزاء، جیسے نمک کی زیادہ مقدار، مدافعتی نظام کو متاثر کرکے اور گٹ مائکروبیوٹا اور بیماری کو تبدیل کرکے میزبان ہومیوسٹاسس کو نقصان پہنچانے کے لیے جانا جاتا ہے [18,22–37]۔ مورین گٹ مائکروبیوٹا میں، ایک اعلی نمک والی خوراک (HSD) صحت کو فروغ دینے والے بیکٹیریا کی کمی سے منسلک ہے جسے شارٹ چین فیٹی ایسڈز (SCFA) کے پروڈیوسر کے طور پر جانا جاتا ہے جیسے کہ Lactobacillus spp.، Bifidobacterium، Blautia اور Faecalibaculum [28, 29,38–41]، اککرمینسیا کی کثرت میں اضافے کے ساتھ، ایک اور موقع پرست ایس سی ایف اے پروڈیوسر جو مختلف ماڈل سسٹمز میں میزبان استثنیٰ اور بیماری کو متاثر کرتا دکھایا گیا ہے [42,43]۔ مورین جانوروں کے ماڈل اکثر اس بات کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں کہ غذائی عوامل کس طرح گٹ مائکرو بائیوٹا، مدافعتی نظام اور بیماری کو تشکیل دے سکتے ہیں [29,44–46]۔ اگرچہ روایتی لیبارٹری چوہوں (CLM) کا استعمال اب بھی بہت سے مطالعات کے لیے ایک درست آپشن ہے، لیکن یہ بعض اوقات گٹ مائکرو بائیوٹا فوکسڈ ایپلی کیشنز [47–49] کا صحیح ترجمہ کرنے میں ناکام رہتا ہے۔ مثال کے طور پر، سوزش والی آنتوں کی بیماری (IBD) اور موٹاپا کے مورین ماڈلز میں امیونولوجیکل اور میٹابولومکس ریسرچ کو گٹ مائکرو بائیوٹا اسٹڈیز [50] کے ترجمہی نتائج کی خراب پیش گوئی کرنے کے لئے دکھایا گیا تھا۔ یہ ان ماڈل سسٹمز میں بہت سے موروثی اختلافات کی وجہ سے ہو سکتا ہے، جیسے کہ مختلف گٹ اناٹومی، جینیات، اور فزیالوجی [16,50]۔ تاہم، مائیکرو بائیوٹا امیون تعاملات کا مطالعہ کرنے کے لیے CLM کے استعمال کا ایک اور مسئلہ CLM میں گٹ بیکٹیریل کمپوزیشن کا گھریلو بنانا ہے، جو جنگلی چوہوں [51] کے مقابلے CLM گٹ مائکرو بائیوٹا کی پیچیدگی اور لچک کو کم کرنے کی عکاسی کرتا ہے۔ جراثیم کش اور کنٹرول شدہ ماحول کی ضرورت کو ممکنہ پیتھوجینز اور پرجیویوں کی کم موجودگی کا سامنا ہے، جس کے نتیجے میں یہ خیال کیا جاتا ہے کہ جنگلی چوہوں [51-53] کے مقابلے میں CLM میں کم "تعلیم یافتہ" مدافعتی نظام کا باعث بنتا ہے۔ اس مسئلے کو حل کرنے کے لیے، جنگلی مورین ماڈل C57BL/6 چوہوں سے ماخوذ جنین کی جنگلی چوہوں میں منتقلی کے ذریعے تیار کیا گیا تھا تاکہ جنگلی سے ماخوذ گٹ مائیکرو بائیوٹا حاصل کیا جا سکے، تاکہ امیونولوجیکل گٹ مائکرو بائیوٹا اسٹڈیز کے ترجمے کے مسئلے پر قابو پایا جا سکے [54]۔ اس ماؤس ماڈل میں شامل حالیہ مطالعات نے CLM [54,55] کے مقابلے میں تجرباتی امیونو تھراپیوں کی ترجمہی قدر کی پیش گوئی کرنے میں اعلیٰ نتائج ظاہر کیے ہیں۔ مزید یہ کہ، جنگلی گٹ مائکرو بائیوٹا سی ایل ایم کے مقابلے میں اینٹی بائیوٹکس کے علاج اور زیادہ چکنائی والی غذا کے لیے زیادہ مزاحم اور لچکدار تھا، جو انسانوں میں زیادہ پیچیدہ صورتحال کے مقابلے میں ہے [54,55]۔ تاہم، گٹ مائکروبیوٹا، مدافعتی نظام، اور CLM میں مختلف بیماریوں کے ماڈلز پر HSD کے قائم ہونے والے اثرات کے باوجود، قدرتی، جنگلی ماخوذ گٹ مائکروبیٹا پر زیادہ نمک کی مقدار کے اثرات نامعلوم ہیں۔ اس مطالعے میں، ہم نے جنگلی چوہوں کے مقابلے میں مختلف گٹ بیکٹیریل ایکو سسٹم کمپوزیشن اور CLM کے پیش گوئی کرنے والے افعال پر HSD کے اثر کا جائزہ لیا۔

2. مواد اور طریقے

2.1 جانور اور خوراک

جنگلی قسم کے C57BL/6 چوہے (7–8 ہفتے کی عمر کی خواتین، n=20) دریائے چارلس سے خریدے گئے تھے اور معیاری حالات میں یونیورسٹی آف ہاسلٹ کے جانوروں کی سہولت میں رکھے گئے تھے۔ جنگلی چوہے (C57BL/6 جینیاتی پس منظر، نر n=12 اور مادہ n=11) [54] کو معیاری حالات کے تحت UHasselt کی جانوروں کی سہولت میں رکھا گیا تھا۔ ہیسلٹ یونیورسٹی (ID201618A4V1, ID202235) میں جانوروں کے تجربات کی اخلاقی کمیٹی (ECAE) کے ذریعہ جانوروں کے مطالعے کی منظوری دی گئی۔ چوہوں کو درجہ حرارت پر قابو پانے والے کمرے (21–23 ◦C) میں (4 چوہے/پنجرہ) 12:12 گھنٹے کی روشنی/تاریک روشنی کے چکر کے ساتھ رکھا گیا تھا۔ مندرجہ ذیل پیوریفائیڈ غذا Ssniff (Soest, Germany) سے خریدی گئی تھیں: 0.5% NaCl/کنٹرول ڈائیٹ (E15430-04)، اور 4% NaCl/HSD (E15431-34)۔ HSD کے لیے، جانوروں کو E15431-34 کے علاوہ پینے کے پانی میں 1% NaCl دیا گیا، جیسا کہ [28] میں بیان کیا گیا ہے۔ CLM چوہوں کو کنٹرول گروپ (n=10) اور HSD (n=10) کے درمیان یکساں طور پر تقسیم کیا گیا تھا۔ جنگلی چوہوں کے لیے، نر اور مادہ افراد کو بھی کنٹرول اور HSD غذائی گروپوں میں یکساں طور پر تقسیم کیا گیا تھا (کنٹرول کے لیے 6 مرد، HSD کے لیے 6 مرد، کنٹرول کے لیے 5 خواتین، اور HSD کے لیے 6 خواتین)۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

2.2 ڈی این اے نکالنا

مائکروبیل ڈی این اے نکالنے کو [28] میں بیان کیا گیا ہے، QIAmp فاسٹ ڈی این اے اسٹول منی کٹ (کیجین، ہلڈن، جرمنی) کے ترمیم شدہ پروٹوکول کا استعمال کرتے ہوئے۔ مختصراً، ایک 2-mL Eppendorf میں fecal pellets کو شامل کیا گیا تھا جس میں 0.5 ملی میٹر شیشے کے موتیوں کی مالا اور 1.5 ملی لیٹر لیسیز بفر (ASL) (کیجین، ہلڈن، جرمنی) شامل تھے۔ مالا مارنے کا استعمال چھروں کی مکینیکل ہم آہنگی انجام دینے کے لئے کیا گیا تھا۔ مکمل نکالنے کو کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق معمولی ترمیم کے ساتھ انجام دیا گیا تھا (پروٹینیس K انکیوبیشن ٹائم کو 70 ◦C پر 2 گھنٹے تک طول دینا)۔ NanoDrop ND-1000 سپیکٹرو فوٹومیٹر (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA) کا استعمال کرتے ہوئے DNA کی حراستی کا اندازہ کیا گیا اور 16S rRNA جین امپلیفیکیشن سے پہلے −20 ◦C پر ذخیرہ کیا گیا۔

2.3۔ 16S rRNA جین پرورش اور ترتیب

16S rRNA جین کی ترتیب کو V4 ریجن (F515/R806) کے لیے مخصوص پرائمر کا استعمال کرکے بڑھایا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [56]۔ مختصراً، 25 این جی ڈی این اے فی پی سی آر ری ایکشن (30 µL) (KAPA HiFi HotStart ReadyMix, Roche, Basel, CH, USA) 98 ◦C پر 30 s کے لیے استعمال کیا گیا، اس کے بعد 25 سائیکل (98 ◦C پر 10 s) C، 55 ◦C پر 20 s، اور 72 ◦C پر 20 s)۔ رد عمل سہ رخی میں کیے گئے، فی نمونہ جمع کیے گئے، اور مقناطیسی مالا پر مبنی کلین اپ سسٹم (Agencourt AMPure XP، Beckman Coulter، Brea، CA، USA) کے ذریعے صاف کیے گئے۔ لائبریری کی تیاری ایک محدود سائیکل پی سی آر کے ذریعے نیکسٹرا ٹیکنالوجی (Nextera XT Index Kit, Illumina, San Diego, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے اشاریہ شدہ لائبریری حاصل کرنے کے لیے کی گئی، اس کے بعد دوسرا AMPure XP مقناطیسی موتیوں کی صفائی کا مرحلہ۔ اس کے بعد انڈیکسڈ نمونوں کو 4nM کے اسی ارتکاز پر معمول بنایا گیا، پول کیا گیا، اور کمپنی پروٹوکول (Illumina, Inc., San Diego, CA, USA) کے مطابق 2 × 300 bp پیئر اینڈ پروٹوکول کے ساتھ Illumina MiSeq پلیٹ فارم PE300 پر ترتیب دیا گیا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2.4 16S rRNA جین سیکوینسنگ ڈیٹا کی پروسیسنگ اور شماریاتی تجزیہ

خام ترتیبوں کو QIIME 2 [57] پائپ لائن کا استعمال کرتے ہوئے پروسیس کیا گیا تھا۔ لمبائی اور معیار کی فلٹرنگ (پہلے سے طے شدہ پیرامیٹرز) کے بعد، ریڈز کو فلٹر کیا گیا اور DADA2 [58] کا استعمال کرتے ہوئے آپریشنل ٹیکونومک یونٹس (OTUs) کو تفویض کیا گیا۔ ٹیکسونومک تفویض VSEARCH الگورتھم (https://github.com/torognes/vsearch؛ 9 نومبر 2022) اور سلوا ڈیٹا بیس v128 (https://www.arb-silva.de) کے ذریعے انجام دیا گیا تھا۔ 9 نومبر کو رسائی حاصل کی گئی{{40}22)۔ اس کے بعد ASV ٹیبل کو 6.147 گہرائی میں نایاب عمل کے ذریعے معمول بنایا گیا تاکہ ہر نمونہ نایاب وکر کے اختتام پر سطح مرتفع تک پہنچ جائے۔ الفا تنوع کا اندازہ دو مختلف میٹرکس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا: OTUs کی بھرپوریت (مشاہدہ)، Chao1، Shannon، Simpson، Inverse Simpson (InvSimpson) ماحولیاتی اشاریہ جات۔ بیٹا تنوع کے لیے، Bray−Curtis کی تفاوت، Jaccard کی مماثلت، اور وزنی اور غیر وزنی UniFrac میٹرکس [59] کا حساب لگایا گیا اور نمونوں کے درمیان حقیقی فاصلے کو تصور کرنے کے لیے پرنسپل کوآرڈینیٹس اینالیسس (PCoA) کے ذریعے تیار کیا گیا۔ OTU کاؤنٹ ٹیبل کو معمول پر لانے کے لیے، 6305 تسلسل فی نمونہ 100 بار کی گہرائی میں نایاب عمل کیا گیا۔ OTU ٹیکونومی اسائنمنٹ سے حاصل کردہ آؤٹ پٹ، بطور درجہ بندی ٹیبل، درجہ بندی کی سطح L2 (Phylum)، L5 (فیملی)، اور L6 (Genus) کے لیے معمول کے OTU ٹیبل کو ٹیبلز میں سمیٹنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار کے تجزیے R (https://www.R-project.org/؛ 25 نومبر 2022؛ ورژن 4.2.0 کو حاصل کیے گئے) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔ R پیکج "ویگن" (ورژن 2۔{28}}) [60] کو بیٹا ڈائیورسٹی میٹرکس بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا تاکہ PCOA یا پرنسپل کمپوننٹ اینالیسس (PCA) کے ذریعے گروپوں کے ساختی فرق کا موازنہ کیا جا سکے۔ پیکجز اور ڈیٹا کی علیحدگی کا تجربہ pseudo-F تناسب ("vegan" میں فنکشن "Adonis" کے ساتھ permutation test کے ذریعے کیا گیا۔ گروپوں کے درمیان بیٹا تنوع کے لحاظ سے علیحدگی کا تجربہ فاصلاتی میٹریسز (PERMANOVA، فنکشن "Adonis" in "vegan" کے ذریعے کیا گیا، جب کہ گروپوں کی تقسیم کے متعدد یکسانیت کے ٹیسٹ (PERMDISP) کے ذریعے فرق کی جانچ کی گئی۔ ، "vegan" میں فنکشن "betadisper")۔ ٹیکسا جو کم از کم 4 نمونوں میں موجود نہیں تھے ان کو تجزیہ سے خارج کر دیا گیا۔ ٹیکسا رشتہ دارانہ کثرت کے لحاظ سے اختلافات کا پہلے 4 گروپوں کے درمیان ابتدائی کرسکل والس ٹیسٹ کے ساتھ جائزہ لیا گیا اور پھر مندرجہ ذیل موازنہ جوڑوں کے درمیان ولکوکسن ٹیسٹ کے ساتھ مزید جانچا گیا: CLM کنٹرول بمقابلہ CLM HSD، وائلڈلنگ کنٹرول بمقابلہ وائلڈلنگ HSD، CLM کنٹرول بمقابلہ جنگلی کنٹرول، CLM HSD بمقابلہ وائلڈلنگ HSD۔ wildling اور CLM کے درمیان درجہ بندی کے فرق کی تشخیص کے لیے، Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe: https://huttenhower.sph.harvard.edu/galaxy/؛ 25 نومبر 2022 کو حاصل کیا گیا) جینس کی سطح پر اہم خصوصیات میں فرق کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ 61]۔ اس کے بعد LEfSe کے نتائج کو بار گراف کے طور پر دکھایا گیا، جس میں لکیری امتیازی تجزیہ (LDA) سکور کی حد 1.0 سے زیادہ تھی۔ جب بھی ضروری ہو، متعدد موازنہ کی p-values ​​کو Benjamini-Hochberg طریقہ سے ایڈجسٹ کیا گیا۔ غلط دریافت کی شرح (FDR) 0.05 سے کم یا اس کے برابر شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا: * p 0.05 سے کم یا اس کے برابر؛ ** p 0.01 سے کم یا اس کے برابر؛ *** p 0.001 سے کم یا اس کے برابر۔ کھانے میں مختلف NaCl مواد (0.5% اور 4% NaCl فوڈ مواد) کے مائکرو بایوم کے درمیان فنکشنل فرق کا تجزیہ PICRUST2 نے کیا، جو کہ 16s rDNA جین کی ترتیب والے ڈیٹا (https://huttenhower.sph. harvard.edu/picrust/ 29 نومبر 2022 کو رسائی حاصل کی گئی2 2.4.1) [62]۔ معیاری پیرامیٹرز (https://github.com/ picrust/picrust2/wiki/Full-pipeline-script؛ 29 نومبر 2022 کو حاصل کیا گیا) کا استعمال کرتے ہوئے DADA2 سے نمائندہ ترتیبوں اور ان کی کثرت کے جدول پر PICRUST2 پائپ لائن کا اطلاق کیا گیا تھا۔ مکمل پائپ لائن آؤٹ پٹ سے، کے ای جی جی آرتھولوجی اور میٹا سائک پاتھ ویز کے لیے میٹاجینومک پیشین گوئی میزوں کے طور پر بنائی گئی تھی، جس میں پیش گوئی کرنے والے افعال قطاروں اور نمونوں کے بطور کالم تھے، اور HSD کے نظام پر وائلڈلنگ اور CLM میں گٹ مائیکرو بائیوٹا افعال کا موازنہ کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ مائکروبیل کمیونٹی کی پیشن گوئی کرنے والے افعال جنہوں نے پہلے (PC1)، دوسرے (PC2)، اور تیسرے پرنسپل جزو (PC3) کے ذریعہ وائلڈلنگ اور CLM کے درمیان فرق میں سب سے زیادہ حصہ ڈالا، کو دو ماڈلز میں HSD کی کھپت پر مزید تجزیہ کے لیے منتخب کیا گیا۔ پیش گوئی کرنے والے فنکشن کی کثرت کے ساتھ میٹرکس کو پھر نارمل کیا گیا، سنٹرڈ لاگ تناسب (CLR) اقدار میں تبدیل کیا گیا، اور log2mean تناسب کا حساب کیا گیا (HSD/Control) وائلڈلنگ اور CLM دونوں کے لیے۔ آخر میں، log2mean تناسب کا موازنہ گروپوں کے درمیان Wilcoxon-test کے ذریعے کیا گیا اور اسے کیونیفارم پلاٹ کے طور پر بنایا گیا۔ R سافٹ ویئر میں Wilcoxon-test اور Kruskal-Wallis ٹیسٹ فنکشنز اور p اقدار کو Holm یا Benjamini-Hochberg طریقہ سے ایڈجسٹ کرتے ہوئے گروپوں کے درمیان فرق کا شماریاتی طور پر موازنہ کیا گیا۔

3. نتائج

3.1 HSD CLM اور Wildling Gut Microbiota کے تنوع اور ساخت کو متاثر کرتا ہے

چوہوں میں جنگلی ماخوذ گٹ مائکروبیل ماحولیاتی نظام پر HSD کے اثرات کی تحقیقات کے لیے، ہم نے جنگلی چوہوں اور CLM کو HSD یا کنٹرول ڈائیٹ کھلایا۔ چوہوں کو دو ہفتوں تک غذائی حکومتوں پر رکھا گیا تھا اور بعد میں 14 دن (شکل 1A) میں جمع کیے گئے آنتوں کے چھروں سے 16S RNA جین کی ترتیب کے ذریعے فیکل گٹ مائکرو بائیوٹا مرکب کی جانچ کی گئی۔ پچھلی رپورٹ کے مطابق، CLM اور جنگلی چوہوں [29] کے کنٹرول اور HSD گروپوں کے درمیان جسمانی وزن کے لحاظ سے کوئی مضبوط فرق نہیں پایا گیا۔ بیس لائن پر دو ماڈلز CLM اور جنگلی چوہوں کے درمیان مختلف گٹ مائکرو بائیوٹا کا اندازہ لگانے کے لیے، ہم نے الفا تنوع (مشاہدہ یا رچنس، چاو 1، شینن، سمپسن، اور الٹا سمپسن اشاریہ جات)، بیٹا تنوع (Bray−Curtis تفاوت)، اور اہم تخمینہ لگایا۔ درجہ بندی کے اختلافات پچھلے مطالعات کے مطابق [54]، وائلڈلنگ گٹ مائکروبیوٹا کی خصوصیت زیادہ مائکروبیل امیری (شکل 1B، تمام الفا تنوع اشاریہ جات) کے ساتھ ساتھ CLM (شکل 1C، PERMANOVA p {{9}) کے مقابلے میں ایک الگ اور زیادہ متفاوت مائکروبیل مرکب سے تھی۔ }.001 اور PERMDISP p=0.0009، وائلڈلنگ بمقابلہ CLM؛ اور شکل S1)۔ مائکروبیل دستخطوں کے لحاظ سے، CLM اور جنگلی چوہوں کے گٹ مائکروبیوٹا کو مختلف بیکٹیریل ٹیکسا (فگر S1) کی خصوصیت تھی۔ Rosshart et al کے مطابق۔ [54]، جنگلی چوہوں سے بیکٹیریل ٹیکسا کا تعلق Intestinomonas، Desulfovibrio، Tuzzerella، Oscillobacter، Orodibacter، اور پیتھوجینک جینس Helicobacter سے ہے، جو اس ماڈل کے جنگلی ماخوذ غیر گھریلو پروفائل کی خصوصیت رکھتا ہے (شکل S1)۔

شکل 1. CLM (n=10/گروپ) اور جنگلی چوہوں کے بیکٹیریل مرکب پر HSD کا اثر (n=11 جنگلی Ctrl کے لئے اور n=12 جنگلی HSD کے لئے)۔ (A) تجرباتی ڈیزائن۔ C57BL/6 CLM یا جنگلی چوہوں کو 0.5% NaCl (control, Ctrl) یا زیادہ نمک 4% NaCl (HSD) اور گٹ بیکٹیریل کمیونٹی گٹ پر کھلایا گیا جس کی خصوصیت 16S rRNA جین ایمپلیکن سیکوینسنگ ہے۔ (B) CLM اور وائلڈلنگ کے فیکل گٹ مائکرو بائیوٹا کے الفا تنوع کے لیے اشاریہ جات؛ بائیں سے دائیں، مندرجہ ذیل اشاریہ جات دکھائے گئے ہیں: مشاہدہ شدہ (OUT richness)، Chao1، Shannon، Simpson، Simpson (Inverse Simpson)۔ گروپوں کے درمیان اختلافات کا اندازہ Wilcoxon-test کے ذریعے شماریاتی طور پر کیا جاتا ہے۔ (C) CLM بمقابلہ وائلڈلنگ (اوپر)، CLM کنٹرول بمقابلہ CLM HSD (نیچے بائیں)، اور وائلڈلنگ کنٹرول بمقابلہ وائلڈنگ HSD (نیچے دائیں) کے درمیان Bray−Curtis کے تفاوت میٹرک سے بیٹا ڈائیورسٹی آرڈینیشن کا پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ پلاٹ؛ گروپوں کے درمیان علیحدگی اور یکسانیت کا حساب بالترتیب PERMANOVA اور PERMDISP ٹیسٹوں سے کیا گیا۔ * p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{14}}5; ** p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{24}}1; **** p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{31}}001۔ شکل 1. CLM (n=10/گروپ) اور جنگلی چوہوں کی بیکٹیریل ساخت پر HSD کا اثر (n=11 جنگلی Ctrl کے لئے اور n=12 جنگلی HSD کے لئے)۔ (A) تجرباتی ڈیزائن۔ C57BL/6 CLM یا جنگلی چوہوں کو 0.5% NaCl (کنٹرول، Ctrl) یا زیادہ نمک 4% NaCl (HSD) اور گٹ بیکٹیریل کمیونٹی گٹ پر کھلایا گیا جس کی خصوصیت 16S rRNA جین ایمپلیکن سیکوینسنگ سے ہے۔ (B) CLM اور وائلڈلنگ کے فیکل گٹ مائکرو بائیوٹا کے الفا تنوع کے لیے اشاریہ جات؛ بائیں سے دائیں، مندرجہ ذیل اشاریہ جات دکھائے گئے ہیں: مشاہدہ شدہ (OUT richness)، Chao1، Shannon، Simpson، Simpson (Inverse Simpson)۔ گروپوں کے درمیان اختلافات کا اندازہ Wilcoxon ٹیسٹ کے ذریعے شماریاتی طور پر کیا جاتا ہے۔ (C) CLM بمقابلہ وائلڈلنگ (اوپر)، CLM کنٹرول بمقابلہ CLM HSD (نیچے بائیں)، اور وائلڈلنگ کنٹرول بمقابلہ وائلڈنگ HSD (نیچے دائیں) کے درمیان Bray−Curtis کے تفاوت میٹرک سے بیٹا ڈائیورسٹی آرڈینیشن کا پرنسپل کوآرڈینیٹ تجزیہ پلاٹ؛ گروپوں کے درمیان علیحدگی اور یکسانیت کا حساب بالترتیب PERMANOVA اور PERMDISP ٹیسٹوں سے کیا گیا۔ * p 0.05 سے کم یا اس کے برابر؛ ** p 0.01 سے کم یا اس کے برابر؛ **** p 0.0001 سے کم یا اس کے برابر۔

HSD نے بیکٹیریل تنوع میں نمایاں کمی (فگر 1B، تمام الفا ڈائیورسٹی انڈیکس) کے ساتھ ساتھ CLM کی ساخت میں ایک اہم مائکروبیل تبدیلی کی حوصلہ افزائی کی (شکل 1C، PERMANOVA p=0.001، PERMDISP p=0 .1، CLM Ctrl بمقابلہ CLM HSD)۔ اس کے برعکس، جنگلی چوہوں کے گٹ مائکروبیوٹا کی خصوصیت HSD (شکل 1B، مشاہدہ شدہ اور Chao1 اشاریہ جات) پر اعلی تنوع کی طرف سے تھی، جو کہ CLM سے مختلف ہوتی ہے، اور وہ CLM (شکل 1C) کے مقابلے HSD پر کم واضح مائکروبیل کمپوزیشن شفٹ کی خصوصیت بھی رکھتے تھے۔ PERMANOVA p=0.001, PERMDISP p=0.5, Wildling Ctrl بمقابلہ وائلڈلنگ HSD)۔

3.2 جنگلی چوہوں کی گٹ مائکروبیل ساخت CLM کے مقابلے HSD کے خلاف زیادہ مزاحم ہے۔

وائلڈلنگ اور سی ایل ایم کے مابین بیکٹیریل ساختی اختلافات کو مزید ٹیکونومک طور پر نمایاں کیا گیا تھا۔ فیلم کی سطح پر، نسبتا کثرت کے لحاظ سے سب سے زیادہ پائی جانے والی فائیلا تھی: فرمکیوٹس (CLM: 52 ± 12%، وائلڈلنگ: 32 ± 34%)، بیکٹرائڈوٹا (CLM: 24 ± 23%، جنگلی: 57 ± 19%)، ایکٹینو بیکٹیریوٹا (CLM: 1{{10}} ± 7%، وائلڈلنگ: 0.7 ± 1.3%) اور Verrucomicrobiota (CLM: 24 ± 23%، وائلڈلنگ: 0%/نہیں پتہ چلا) (شکل 2)۔ گٹ مائکروبیل پروفائل نے جنگلی چوہوں اور CLM (شکل 2) کے درمیان آنتوں کے نمونوں میں پائے جانے والے تمام فائیلا کے لئے مزید مختلف کثرت ظاہر کی۔ خاص طور پر، کور مائیکرو بائیوٹا فائیلا فرمکیوٹس، بیکٹیرائیڈوٹا، اور ورروکومیکروبیوٹا دونوں ماڈلز (شکل 2) کے درمیان نمایاں طور پر مختلف تھے۔ مزید خاص طور پر، خاندانی سطح پر، زیادہ تر بیکٹیریا کے لیے جنگلی بمقابلہ CLM گٹ مائکرو بائیوٹا میں ایک مختلف شراکت دیکھی گئی جو پہلے HSD حساس [28] کے طور پر رپورٹ کیے گئے تھے، بشمول Lactobacillaceae، Clostridiaceae، Peptostreptococcaceae، اور Akkermansiaceae (Figure3)۔ اس کے مطابق، مذکورہ خاندانوں کے اہم ارکان کے لیے جنگلی اور CLM نمونوں کے درمیان جینس کی سطح پر اسی طرح کے رجحانات کی تصدیق کی گئی تھی۔ ان میں سب سے زیادہ نمائندہ لیکٹو بیکیلس، روزبوریا، ٹززریلا، فیکلیباکولم اور اککرمینسیا (اعداد و شمار S1 اور 4) تھے۔ CLM اور وائلڈلنگ گٹ مائکرو بائیوٹا کمپوزیشن پر HSD کے اثرات کو مزید نمایاں کرنے کے لیے، ہم نے مختلف درجہ بندی کی سطحوں پر غذائی طرز عمل کے اثرات کا بھی تجزیہ کیا۔ فیلم کی سطح پر، HSD سے علاج شدہ CLM گٹ مائکرو بائیوٹا کی خاصیت Firmicutes کی نمایاں کمی اور Verrucomicrobiota (شکل 2) کی افزودگی سے تھی، لیکن جنگلی نمونوں میں HSD سے کوئی بھی بڑا فائیلا متاثر نہیں ہوا تھا (شکل 2)۔ خاندانی سطح پر، CLM گٹ مائکرو بائیوٹا کی خاصیت لییکٹک ایسڈ پیدا کرنے والے بیکٹیریا جیسے کہ Lactobacillaceae کے ساتھ ساتھ SCFA کے پروڈیوسر جیسے Peptostreptococcaceae اور Clostridiaceae (شکل 3) کی نمایاں کمی تھی۔ مزید برآں، HSD-fed CLM میں، ہم نے Akkermansiaceae، Sutterellaceae، Defluvitaleaceae، اور Eggerthellaceae (شکل 3) میں اضافہ دیکھا۔ اس کے برعکس، HSD نے جنگلی گٹ مائکرو بائیوٹا میں مختلف بیکٹیریل خاندانوں کو متاثر کیا، ان میں سے دو انتہائی پرچر مریباکولاسی اور پریوٹیلاسی، دونوں کو HSD (شکل 3) پر بڑھایا گیا تھا۔ بیکٹیریل ماڈیولیشن جس نے CLM میں HSD-اثر میں سب سے زیادہ حصہ ڈالا اس میں جنرا Akkermansia، Parasutterella، اور Enterorhabdus کا اضافہ، ساتھ ہی Lactobacillus، Roseburia، Tuzzerella، (Eubacterium) oxidoreducens گروپ، Muribaculum (Anaerovorax4) کی کمی شامل ہے۔ روزبوریا کے علاوہ، مذکورہ بالا جنیرا میں سے کوئی بھی جنگلی گٹ مائکرو بائیوٹا میں ایچ ایس ڈی سے متاثر نہیں ہوا، جب کہ انیرووورکس جینس نے CLM (شکل 4) کے برعکس رجحان ظاہر کیا۔

شکل 2. CLM (n=10/گروپ) کے گٹ مائکرو بائیوٹا اور جنگلی چوہوں سے بیکٹیریل فائیلا پر HSD کا اثر (n=11 جنگلی Ctrl کے لئے اور n=12 جنگلی HSD کے لئے)۔ فائلا رشتہ دار کثرت کے لحاظ سے کل ساخت کو بار پلاٹ فی ہر فرد (اوپر) اور باکس پلاٹ مخصوص فائیلا (نیچے) کے ذریعہ دکھایا گیا ہے۔ Wilcoxon-test کے ذریعہ گروپوں کے درمیان شماریاتی موازنہ کیا گیا۔ * p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{8}}5; ** p سے کم یا اس کے برابر {{10}}.01; *** p 0.001 سے کم یا اس کے برابر؛ **** p 0.0001 سے کم یا اس کے برابر۔

تصویر 3. CLM (n=10/گروپ) اور جنگلی چوہوں کے بیکٹیریل خاندانوں پر زیادہ نمک والی خوراک کے استعمال کا اثر (n=11 جنگلی Ctrl کے لیے اور n=12 جنگلی HSD کے لیے)۔ خاندانی سطح پر کل ساخت کی نمائندگی بار پلاٹ فی ہر فرد (اوپر) اور مخصوص خاندانوں کے لیے باکس پلاٹ (نیچے) سے ہوتی ہے۔ Wilcoxon-test کے ذریعہ گروپوں کے درمیان شماریاتی موازنہ کیا گیا۔ * p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{8}}5; ** p سے کم یا اس کے برابر {{10}}.01; *** p 0.001 سے کم یا اس کے برابر؛ **** p 0.0001 سے کم یا اس کے برابر۔

شکل 4. CLM (n=10/گروپ) اور جنگلی چوہوں میں بیکٹیریل جنر میں تبدیلیاں (n=11 جنگلی Ctrl کے لیے اور n=12 جنگلی HSD کے لیے)۔ جینس کی سطح پر مجموعی طور پر رشتہ دار کثرت کا حصہ ہر فرد کے لیے ایک سرکلر بار پلاٹ کے طور پر بنایا گیا ہے (سب سے اوپر) اور مخصوص نسل (نیچے) کے لیے ایک باکس پلاٹ؛ Wilcoxon-test کے ذریعہ گروپوں کے درمیان شماریاتی موازنہ کیا گیا۔ * p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{7}}5; ** p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{11}}1; *** p 0.001 سے کم یا اس کے برابر؛ **** p 0.0001 سے کم یا اس کے برابر۔

3.3 HSD CLM میں پیش گوئی کرنے والے مائکروبیل افعال کو متاثر کرتا ہے لیکن جنگلی چوہوں میں نہیں

PICRUST 2 آؤٹ پٹ نے KEGG آرتھولوجی اور MetaCyc پاتھ وے تشریحات دونوں کے لیے جنگلی HSD بمقابلہ علاج نہ کیے جانے والے جنگلی چوہوں کے مائکروبیل کمیونٹی کے افعال کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں پایا، صرف ایک استثناء کے ساتھ ATP پر منحصر ہیلیکیس کے لیے recG جین پر HSD کی حوصلہ افزائی سے بڑھے ہوئے فنکشن کے۔ KEGG آرتھولوجی (شکل 5A)۔ CLM پر HSD کا اثر KEGG آرتھولوجی کے لیے پیش گوئی کرنے والے افعال میں نمایاں کمی کی وجہ سے نمایاں تھا، ان میں جین spp (sucrose-6-phosphatase) اور pfkA (phosphofructokinase 1)، دونوں نشاستے اور سوکروز میٹابولزم میں شامل ہیں، جو کہ ایک دوسرے کے ساتھ ہے۔ پچھلے نتائج کے ساتھ [28] (شکل 5A)۔ اس کے علاوہ، HSD-fed CLM کے گٹ مائکرو بائیوٹا میں جھلی کی نقل و حمل میں شامل جینوں کے پیش گوئی کرنے والے افعال میں کمی کی خصوصیت تھی (آئرن ٹرانسپورٹ کے لیے feoB، AB 2P AB 2 permease پروٹین، AB 2A AB 2 ATP بائنڈنگ پروٹین)، glutamine biosynthesis (glnA) ، LacI فیملی ٹرانسکرپشن ریگولیٹر (lacI، galR) اور transketolase (tktA، tktB) (شکل 5A)۔ میٹا سائک پاتھ ویز کے لیے، ایچ ایس ڈی نے نائٹریٹ میں کمی (ڈینیٹریفیکیشن پاتھ وے)، گلیکٹوز انحطاط (ڈی-گلیکٹریٹ انحطاط، ڈی-گلوکریٹ کا سپر پاتھ وے اور ڈی-گیلیکٹریٹ انحطاط)، فیٹ فالٹ-پروفینٹائیل پروڈکشن (ڈی-گلیکٹریٹ انحطاط)، پیش گوئی کرنے والے افعال کے CLM گٹ مائکرو بائیوٹا کو نمایاں طور پر افزودہ کیا۔ تیزاب سے بچاؤ، بیوٹانوک ایسڈ اور امینو ایسڈ کا انحطاط (خوشبودار امائن انحطاط، L-leucine انحطاط) (شکل 5B)۔ مزید برآں، سابقہ ​​نتائج کے مطابق [28]، CLM میں HSD گٹ مائکرو بائیوٹا نے امینو ایسڈ بائیو سنتھیسز (L-alanine biosynthesis کا سپر پاتھ وے، L-lysine biosynthesis)، مخلوط تیزاب ابال، اضافی نوول دستخط کے ساتھ N- کی طرح کھو دیا ہے۔ acetylglucosamine/N-acetyl-mannosamine/N-acetylneuraminate انحطاط اور deoxyribonucleosides کا انحطاط (pyrimidine اور purine degradation, inosine5phosphate biosynthesis III) (شکل 5B)۔

شکل 5۔ جاری۔

شکل 5. CLM (n=10/گروپ) اور وائلڈلنگ (n=11 جنگلی Ctrl کے لئے اور n=12 وائلڈ HSD کے لئے) گٹ مائکرو بائیوٹا میں گٹ پیشن گوئی میٹاجینومک افعال پر HSD کا اثر۔ PICRUST2 آؤٹ پٹ KEGG آرتھولوجی تشریح (A) اور MetaCyc پاتھ ویز (B) کے لیے کیونیفارم پلاٹ کے طور پر تیار کیا گیا ہے جس کا اظہار HSD بمقابلہ Ctrl نمونوں کے درمیان پیش گوئی کرنے والے افعال کے log2 کے اوسط تناسب کے طور پر کیا گیا ہے۔ تمام شماریاتی موازنہ Ctrl بمقابلہ HSD گروپوں کے درمیان Wilcoxon-test کے ذریعے کئے گئے۔

4. بحث

پیچیدہ اور متنوع جنگلی گٹ مائکروبیوٹا بعض بیماریوں کے ماڈلز [51] اور غذائی نظاموں، جیسے زیادہ چکنائی کی مقدار [54,55] کے لیے زیادہ لچکدار جانا جاتا ہے۔ تاہم، کسی بھی پچھلے مطالعہ نے مورین جنگلی ماخوذ گٹ مائکروبیٹا پر سوڈیم کی زیادہ مقدار کے اثرات کا اندازہ نہیں لگایا ہے۔ یہاں، ہم نے پہلی بار تفتیش کی کہ HSD کس طرح CLM کے مقابلے وائلڈلنگ گٹ مائکرو بائیوٹا کو متاثر کرتا ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہمارے نتائج نے یہ ظاہر کیا کہ CLM کے مقابلے میں، جنگلی مائکرو بایوم ساختی اور پیش گوئی کرنے والے فنکشنل دونوں سطحوں پر HSD ڈسٹربنس کے خلاف زیادہ مزاحم ہے۔ یہ بات اچھی طرح سے قائم ہے کہ زیادہ نمک کا استعمال گٹ مائکرو بایوم کی ساخت اور مدافعتی ہومیوسٹاسس [25,29,31,34,63-65] کو تبدیل کرکے مختلف بیماریوں جیسے کہ قلبی یا خود سے قوت مدافعت کے امراض کے خطرے کو بڑھا سکتا ہے۔ پچھلی رپورٹس کے مطابق، CLM میں گٹ مائکرو بائیوٹا میں HSD کی حوصلہ افزائی کی جانے والی تبدیلیوں کو مائکروبیل تنوع، ساخت، اور پیشن گوئی کے افعال میں نمایاں تبدیلیوں کی خصوصیت دی گئی تھی [28]۔ صحت کو فروغ دینے والے بیکٹیریا جیسے Peptostreptococcaceae خاندان اور جینرا Lactobacillus، Roseburia، اور Tuzzerella میں CLM میں نسبتا کثرت کے لحاظ سے کمی واقع ہوئی ہے، جبکہ HSDfed گروپوں میں Akkermansia میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ ہم نے Defluvitaleaceae، Enterorhabdus، اور Parasutterella میں HSD کی اعلی رشتہ دار کثرت کا بھی پتہ لگایا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ Parasutterella genus CLM اور انسانوں دونوں کے گٹ مائکرو بائیوٹا کا ایک بنیادی جزو ہے، جہاں یہ ایک asaccharolytic اور succinate کے پروڈیوسر کے طور پر برتاؤ کرتا ہے [66]۔ Eggerthellaceae خاندان سے Enterorhabdus اور Sutterellaceae خاندان سے Parasutterella دونوں IBD [67,68] کے مریضوں میں افزودہ ہونے کے لیے جانے جاتے ہیں، مزید یہ بتاتے ہیں کہ HSD بیماری کی نشوونما کو کیسے متاثر کر سکتا ہے۔ تاہم، دلچسپ بات یہ ہے کہ جنگلی چوہوں نے HSD کی حوصلہ افزائی مائکروبیل شفٹوں، جیسے CLM کی ایک جیسی ہستی نہیں دکھائی۔ اس کے باوجود، مشاہدہ شدہ OTUs اور Chao1 میٹرکس کے لیے HSD پر جنگلی تنوع میں نمایاں اضافہ ہوا، اور صرف چند ٹیکسا ہی جنگلی گٹ مائکرو بائیوٹا کے HSD خلل میں ملوث تھے، ان میں سے Anaerovorax کا اضافہ، Eryipelatoclostridium، Roseburia، اور Lachnospiracee کی کمی کے ساتھ۔ UCG-004 جینس۔ روزبوریا واحد بیکٹیریا کا دستخط تھا جو عام طور پر متعلقہ کنٹرولز کے مقابلے HSD گروپوں کے درمیان مشترک ہوتا ہے، اس کے باوجود HSD-fed CLM کو HSD-fed wildling چوہوں کے مقابلے میں اس بیکٹیریا کی زیادہ کثرت کی خصوصیت دی جاتی ہے۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ بائٹریٹ پیدا کرنے والے بیکٹیریا جیسے روزبوریا کو السرٹیو کولائٹس کے مریضوں میں نسبتاً کم مقدار میں دکھایا گیا تھا [69] اور اس کمی کو انسانی مضامین کے IBD جینیاتی خطرے سے بھی منسلک دیکھا گیا تھا [70]۔ یہ پچھلی دریافتوں کے مطابق ہے، جہاں بیکٹیریا کی نسل میں تبدیلی جیسے روزبوریا یا لیکٹو بیکیلس کو ہائی بلڈ پریشر کے خطرے سے منسلک پایا گیا تھا، جو ممکنہ طور پر مغربی غذا سے فروغ پاتا ہے [71]۔ گٹ کی بیکٹیریل ساخت بھی گٹ کی حرکت پذیری اور فزیالوجی سے وابستہ ہے [72]۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

Anaerovorax جینس پہلے غیر معمولی گٹ فزیالوجی اور کم حرکت پذیری کے ساتھ چوہوں میں دیکھا گیا ہے [73]؛ تاہم، جنگلی چوہوں کے لیے HSD میں Anaerovorax کی افزودگی گٹ ہومیوسٹاسس اور مناسب کام کے تناظر میں اس ٹیکس کے مختلف کردار کا باعث بن سکتی ہے۔ پچھلی دریافتوں کے مطابق، ہم نے CLM [28] کے HSD گروپ میں Akkermansia جینس میں اضافہ دیکھا، جب کہ جنگلی چوہوں کا گٹ مائکروبیوٹا اس جینس سے ختم ہو گیا تھا، جو اس ماڈل پر پہلے کے مطالعے سے بھی مطابقت رکھتا ہے [51، 53-55]۔ اگرچہ اککرمینسیا جینس ایک ممکنہ پروبائیوٹک ہے کیونکہ اس کے میزبان امیونولوجیکل اور میٹابولک پروفائلز (مثلاً موٹاپا اور ٹائپ 2 ذیابیطس میں) [42,74–77] کو بہتر بنانے پر اس کے مثبت اثر کی وجہ سے، اس جینس کا کردار اس کے منفی ہونے کی وجہ سے ابھی تک واضح نہیں ہے۔ بڑی آنت کے کینسر [78]، پارکنسنز کی بیماری [79,80] اور ایک سے زیادہ سکلیروسیس کے مریضوں [81] میں طبی نتائج کے ساتھ ارتباط۔ MetaCyc پاتھ ویز [28] کے ساتھ حاصل کیے گئے ہمارے پچھلے نتائج سے ہم آہنگ، HSD پر CLM نے KEGG آرتھولوجی کے لیے نشاستے اور سوکروز میٹابولزم سے وابستہ پیش گوئی کرنے والے مائکروبیل افعال میں کمی کو ظاہر کیا۔ تاہم، HSD سے کھلائے ہوئے جنگلی چوہوں کے گٹ بیکٹیریل کمپوزیشن میں معمولی تبدیلیاں پیش گوئی کرنے والے بیکٹیریل افعال میں کوئی خاص تغیر پیدا کرنے میں ناکام رہی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ جنگلی سے ماخوذ گٹ مائکرو بائیوٹا اور میٹابولک/ماحولیاتی نیٹ ورک بہت زیادہ مستحکم ہیں اور بہت زیادہ آسانی سے ڈھال سکتے ہیں۔ CLM گٹ ماحولیاتی نظام کے مقابلے میں HSD کی حوصلہ افزائی غذائی تغیرات، جو مزید تفتیش کی ضمانت دیتا ہے۔ یہ بھی قابل ذکر ہے کہ گٹ بیکٹیریل نیٹ ورک پر گٹ فنگل کمیونٹی کا تفریق غذائی نظاموں پر ممکنہ اثر و رسوخ ہے۔ ابتدائی مطالعات نے پہلے ہی تجویز کیا ہے کہ کس طرح بیکٹیریا اور فنگس کے درمیان ممکنہ تعامل میزبان مدافعتی نظام ہومیوسٹاسس اور بیماری کی نشوونما میں ملوث ہیں [82-85]۔ اس تناظر میں، جنگلی چوہوں کے مقابلے میں ان کی کم بیکٹیریل پیچیدگی کی وجہ سے CLM مزید محدود ہے، جو متنوع گٹ مائکوبیوٹا کے قیام میں رکاوٹ بن سکتا ہے [54]۔ مستقبل کے مطالعے جنگلی ماڈل کا استعمال کرکے گٹ مائکرو بائیوٹا اور میزبان استثنیٰ کی ترتیبات میں گٹ فنگل کمیونٹیز کے شراکت کا تعین کرنے کے قابل ہوں گے۔ خلاصہ طور پر، ہمارا مطالعہ اس بارے میں ڈیٹا فراہم کرتا ہے کہ کس طرح زیادہ سوڈیم کی مقدار قدرتی، جنگلی ماخوذ گٹ مائکروبیل ماحولیاتی نظام کو متاثر کرتی ہے جو کہ CLM کی گھریلو گٹ بیکٹیریل کمیونٹی کے مقابلے میں ہے۔ ہمارے مطالعے نے یہ ظاہر کیا ہے کہ HSD جنگلی چوہوں میں بیکٹیریل ٹیکا اور گٹ مائکروبیوٹا کو اس طرح متاثر نہیں کرتا ہے جیسا کہ یہ CLM سے پالتو گٹ مائکرو بائیوٹا کے لیے کرتا ہے۔ یہ فرق، جیسا کہ پہلے دیگر غذائی رجیموں یا حالات جیسے کہ زیادہ چکنائی والی غذا [54,55] کے لیے بیان کیا گیا ہے، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ قدرتی مورین ماڈل سسٹمز میں مستقبل کی تحقیق کی ضرورت ہے تاکہ زیادہ پیچیدہ گٹ ایکو سسٹمز پر غذائی مداخلتوں کے اثرات کا دوبارہ اندازہ لگایا جا سکے۔ جیسا کہ انسانوں میں.

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا