تجارتی سفید کرنے والی کریموں میں ہائیڈروکوئنون کے تعین کے لیے انتہائی حساس اور ماحولیاتی طور پر پائیدار ریورسڈ فیز HPTLC طریقہ

رابطہ:ali.ma@wecistanche.com

محمد ایچ القرنی 1، پرواز عالم 1، فیاض شکیل 2، احمد اول فودا 1 اور سلطان الشہری 2،*

خلاصہ: ہائیڈروکوئنون(HDQ) ایک قدرتی ڈیپگمنٹنگ ایجنٹ ہے، جو عام طور پر جلد کو رنگنے والی تیاریوں میں استعمال کیا جاتا ہے۔ ایچ ڈی کیو کوانٹیفیکیشن کے تجزیاتی طریقوں کی حفاظت اور ہریالی پر پچھلے لٹریچر میں غور نہیں کیا گیا تھا۔ لہذا، چار مختلف کمرشل میں ایچ ڈی کیو تخمینہ کے لیے ایک انتہائی حساس اور ماحولیاتی طور پر سبز الٹ فیز ہائی پرفارمنس پتلی پرت کرومیٹوگرافی (RP-HPTLC) پر مبنی پرکھ قائم کی گئی تھی۔سفید کرناکریم (CWCs)۔ بائنری ایتھنول واٹر(60:40, v·v−1) مرکب کو سبز سالوینٹ سسٹم کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ HDQ کا تخمینہ 291 nm پر لگایا گیا تھا۔ موجودہ RP-HPTLC پر مبنی پرکھ 20–2400 این جی بینڈ−1 رینج میں لکیری تھی۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ پتہ لگانے اور کوانٹیفیکیشن ڈیٹا کی بنیاد پر انتہائی حساس تھا۔ توثیق کے دیگر پیرامیٹرز، جیسے درستگی، درستگی، اور مضبوطی، بھی HDQ کے تعین کے لیے موزوں تھے۔ زیادہ سے زیادہ HDQ مقداریں CWC A (1.23 فیصد w·w−1) میں حاصل کی گئیں اس کے بعد CWC C (0.81 فیصد w·w−1) CWC D (0.43 فیصد w·w−1)، اور CWC B (0.37 فیصد w·w·) w−1)۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے تجزیاتی گریننس (اتفاق) اسکور کا تخمینہ 0.91 لگایا گیا تھا، جو موجودہ RP-HPTLC پرکھ کی بہترین سبز خصوصیات کی نشاندہی کرتا ہے۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ موجودہ تجزیاتی طریقہ اپنی تجارتی فارمولیشنوں میں ایچ ڈی کیو کی مقدار کے لیے انتہائی حساس اور ماحولیاتی طور پر پائیدار ہے۔

مطلوبہ الفاظ:متفقhydroquinone; ماحولیاتی طور پر پائیدار RP-HPTLC؛ توثیق

Cistanche اقتباسآزاد ریڈیکلز کو ختم کر سکتا ہے اور ٹائروسینیز کے جمع ہونے کو روک سکتا ہے۔

پر کلک کریں۔سفیدی کے لیے Cistanche اثرات

1. تعارف

ہائیڈروکوئنون(HDQ) ایک قدرتی مرکب ہے، جو میلاسما (انسانی جلد میں میلانین کے زیادہ جمع ہونے کی وجہ سے پیدا ہونے والی بیماری) کے علاج کے لیے جلد کے متعدد تجارتی فارمولیشنوں میں موجود ہے [1,2]۔ یہ ایک طاقتور depigmenting ایجنٹ ہے اور ٹائروسینیز [3] کے متبادل کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ یہ انسانی جلد کے ہائپر پگمنٹیشن [4,5] کے علاج میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والے ایجنٹوں میں سے ایک ہے۔ کمرشل سکن ٹوننگ فارمولیشنز میں ایچ ڈی کیو کا موثر ارتکاز 1.5 سے 2 تک ہوتا ہے۔{11}} فیصد w·w−1[6]۔ ایچ ڈی کیو کی زیادہ ارتکاز (5 فیصد w·w−1 سے اوپر) انسانوں کی جلد میں مقامی جلن اور لیوکوڈرما کا سبب بنتی ہے [5,6]۔ اس کے متنازعہ ضمنی اثرات کی وجہ سے، بہت سے ممالک نے HDQ پر پابندی لگا دی ہے۔سفید کرناحالات کی تشکیل میں ایجنٹ [7]۔ اس کے باوجود، کئی طبی تحقیقات نے مختلف حفاظتی اثرات کا مشورہ دیا ہے۔ایچ ڈی کیومختلف جلد کے ہائپر پیگمنٹری عوارض جیسے میلاسما، فریکلز، لینٹائنز وغیرہ کے انتظام میں۔ [8,9]۔ ایچ ڈی کیو کے فوائد اور خطرات دونوں پر غور کرتے ہوئے، مختلف کمرشل سکن ٹوننگ فارمولیشنز میں اس کا مقداری تجزیہ ضروری ہے۔

ایچ ڈی کیو کی مقدار درست کرنے کے لیے مختلف فارماسیوٹیکل اسیس استعمال کیے جاتے ہیں یا تو اکیلے یا دوسرے کے ساتھ مل کرسفید کرنامارکیٹ شدہ سفید کرنے والی کریموں (CWCs) میں ایجنٹ۔ الٹرا وائلٹ (UV) سپیکٹرو میٹری پر مبنی اسسیس کی ایک قسم کو تجارتی سفید کرنے والی مصنوعات (CWPs) اور دواسازی کی تیاریوں میں HDQ کے مقداری تجزیہ کے لیے دستاویز کیا گیا ہے [10-13]۔ اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) پر مبنی اسسیس کی ایک وسیع رینج کو مختلف قسم کے CWCs اور CWPs [14–23] میں اس کے ایتھرز کے ساتھ HDQ کے تعین کے لیے دستاویز کیا گیا ہے۔ ایچ ڈی کیو اور اس کے ایتھر ڈیریویٹیوز کے بیک وقت تعین کے لیے مختلف وولٹی میٹرک طریقے بھی قائم کیے گئے ہیں [24-29]۔ کچھ دیگر تجزیاتی اسسز جیسے فلو انجیکشن الیکٹرو کیمیکل [30]، مائیکلر الیکٹروکینیٹک کرومیٹوگرافی [31]، کیپلیری الیکٹرو کرومیٹوگرافی [32]، اور نانوکومپوزائٹ [33] پر مبنی اسسیس بھی اس کے لیے قائم کیے گئے ہیں۔ایچ ڈی کیواس کے ایتھر مشتقات اور دیگر کے ساتھ تجزیہسفید کرناCWPs میں ایجنٹ۔ ایچ ڈی کیو تجزیہ [34,35] کے لیے کچھ الیکٹرو کیمیکل پر مبنی نانوسینسر بھی رپورٹ کیے گئے ہیں۔ ہمارے ریسرچ گروپ [1] کے ذریعہ CWCs میں HDQ کے معیار اور مقداری تجزیے کے لیے ایک واحد نارمل فیز ہائی پرفارمنس پتلی پرت کرومیٹوگرافی (HPTLC) پر مبنی طریقہ بھی لاگو کیا گیا تھا۔

HDQ تجزیہ پر رپورٹ شدہ مضامین کے مکمل تجزیے کے بعد، یہ دیکھا گیا کہ ادب میں فارماسیوٹیکل طریقوں کی حفاظت اور ماحولیاتی پائیداری کا اندازہ نہیں لگایا گیا ہے اور نہ ہی اس پر غور کیا گیا ہے۔ اس کے علاوہ، سبز/ماحولیاتی طور پر پائیدار ریورسڈ فیز ایچ پی ٹی ایل سی (RP-HPTLC) پر مبنی اسسیس کا تخمینہ لگانے کے لیے ابھی تک استعمال نہیں کیا گیا ہے۔ایچ ڈی کیواس کے CWCs میں۔ ماحولیاتی طور پر پائیدار/سبز HPTLC پر مبنی اسسیس بہت سے فوائد پیش کرتے ہیں جیسے کہ سادگی، اقتصادیات، کم آپریشن لاگت، مختصر تجزیہ کا وقت، متعدد نمونوں کا متوازی تجزیہ، پتہ لگانے کی وضاحت، اور HPLC اور دیگر تجزیاتی طریقوں سے زیادہ ماحولیاتی زہریلا میں کمی [36–39]۔ اس کے مطابق، اس مطالعہ کے لیے HDQ کے تعین کے لیے ایک RP-HPTLC طریقہ منتخب کیا گیا تھا۔ فارماسیوٹیکل اسسیس [38-43] کے سبزہ پروفائل کی تشخیص کے لیے مختلف طریقے استعمال کیے جاتے ہیں۔ بہر حال، صرف تجزیاتی GREenness (AGREE) میٹرک نقطہ نظر سبز تجزیاتی کیمسٹری (GAC) کے تمام 12 اصولوں کو سبزی کی تشخیص کے لیے لاگو کرتا ہے [42]۔

AGREE میٹرک اپروچ کا اطلاق موجودہ RP-HPTLC طریقہ [42] کی ہریالی کی تشخیص کے لیے کیا گیا تھا۔ لہذا، موجودہ کام کا تخمینہ لگانے کے لیے ایک انتہائی حساس اور سبز/ماحولیاتی طور پر پائیدار RP-HPTLC طریقہ تیار کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ایچ ڈی کیوچار مختلف CWCs میں۔ موجودہ RP-HPTLC طریقہ کار کی ہریالی پروفائل AGREE: The Analytical Greenness Calculator کے ذریعے حاصل کی گئی تھی۔ HDQ تجزیہ کے لیے موجودہ تجزیاتی پرکھ کو بین الاقوامی کونسل برائے ہم آہنگی (ICH) Q2 (R1) کے رہنما خطوط کے مطابق درست کیا گیا تھا [44]۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 مواد

ایچ ڈی کیو کا حوالہ معیار (پاکیزگی: 99 فیصد) فلوکا کیمکا (ڈرمسٹڈٹ، جرمنی) سے حاصل کیا گیا تھا۔ HPLC گریڈ میتھانول (MeOH) اور ایتھنول (EtOH) الفا ایسر (Tewksbury, MA, USA) سے حاصل کیے گئے تھے۔ HPLC گریڈ کا پانی (H2O) ملی-کیو واٹر پیوریفائر سسٹم (E-Merck، Darmstadt، Germany) سے جمع کیا گیا تھا۔ استعمال ہونے والے دیگر سالوینٹس اور ریجنٹس تجزیاتی گریڈ کے تھے۔ HDQ کے چار مختلف CWCs جون 2021 کے مہینے میں الخرج، سعودی عرب میں فارماسیوٹیکل مارکیٹ سے حاصل کیے گئے تھے۔ایچ ڈی کیوتجربات کے آغاز سے پہلے 22 ◦C پر ٹھنڈی اور تاریک جگہ پر ذخیرہ کیا گیا تھا۔

2.2 کرومیٹوگرافی

HDQ کی RP-HPTLC ڈینسٹومیٹری کوانٹیفیکیشن اس کے حوالہ معیار اور چار مختلف CWCs میں HPTLC انسٹرومنٹ (CAMAG، Muttenz، Switzerland) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ HDQ کا مقداری تجزیہ 10 × 20 cm2 گلاس بیکڈ پلیٹوں پر کیا گیا جو RP سلیکا جیل 60 F254S پلیٹس (E-Merck, Darmstadt, Germany) کے ساتھ پہلے سے لیپت تھیں۔ آٹومیٹک سیمپلر 4 (ATS4) ایپلی کیٹر (CAMAG، جنیوا، سوئٹزرلینڈ) کا استعمال۔ نمونہ درخواست دہندہ CAMAG مائیکرو لیٹر سرنج (ہیملٹن، بوناڈز، سوئٹزرلینڈ) کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ کے مقداری تجزیہ کے لیے درخواست کی شرحایچ ڈی کیو150 nL s−1 پر مستقل رکھا گیا تھا۔ پلیٹوں کو 80 ملی میٹر کے فاصلے پر ایک خودکار ترقی پذیر چیمبر 2 (CAMAG، Muttenz، Switzerland) میں تیار کیا گیا تھا۔ HDQ تجزیہ کے لیے سبز سالوینٹ سسٹم EtOHH2O (60:40، v·v−1) تھا۔ ترقی پذیر چیمبر پہلے 22 ◦C پر 30 منٹ کے لئے موبائل مرحلے کے بخارات سے سیر ہوتا تھا۔ HDQ کا پتہ 291 nm پر ہوا۔ سلٹ کے طول و عرض 4 × 0.45 mm2 تھے اور اسکیننگ کی شرح 20 mm s−1 تھی۔ ہر تجربہ سہ رخی میں کیا گیا تھا۔ ڈیٹا پروسیسنگ کے لیے استعمال ہونے والا سافٹ ویئر WinCATs (v. 1.4.3.6336,CAMAG, Muttenz, Switzerland) تھا۔

2.3۔ ایچ ڈی کیو کیلیبریشن وکر اور کوالٹی کنٹرول کے نمونوں کی تیاری

ایچ ڈی کیو (10 ملی گرام) کی مخصوص مقدار EtOH-H2O(60:40, v·v−1) کے 100 mL گرین سالوینٹ سسٹم میں 100 µg mL−1 کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک حل حاصل کرنے کے لیے تقسیم کی گئی۔ 20–2400 ng بینڈ−1 رینج میں HDQ کی ارتکاز حاصل کرنے کے لیے EtOH-H2O (60:40, v·v−1) سسٹمز کا استعمال کرتے ہوئے اسٹاک سلوشنز کی مختلف مقداروں کو مزید کمزور کیا گیا۔ کے حاصل کردہ حلایچ ڈی کیومختلف ارتکاز پر مشتمل HPTLC پلیٹوں پر دیکھا گیا تھا۔ HDQ کے لیے HPTLC چوٹی کا علاقہ موجودہ فارماسیوٹیکل پرکھ کو استعمال کرتے ہوئے ہر HDQ حل کے لیے حاصل کیا گیا تھا۔ HDQ کا انشانکن وکر اس کے HPTLC ایریا کے خلاف HDQ ارتکاز کی منصوبہ بندی کر کے تیار کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، تین مختلف کوالٹی کنٹرول (QC) نمونے، جیسے کم QC (LQC؛ 20 ng band−1)، درمیانی QC (MQC؛ 600 ng band−1)، اور اعلی QC (HQC؛ 2400 ng band−1) نمونے موجودہ فارماسیوٹیکل پرکھ کے لیے مختلف توثیق کے پیرامیٹرز کا تعین کرنے کے لیے الگ سے حاصل کیے گئے تھے۔

2.4 CWCs میں HDQ کے تعین کے لیے نمونے کی کارروائی

ایچ ڈی کیو کو چار مختلف CWCs سے لٹریچر میں رپورٹ کردہ طریقہ کار کو اپنا کر نکالا گیا تھا [1]۔ A, B, C, اور D سمیت چار مختلف CWCs کی درست وزنی (50 g) مقداریں الگ الگ کرنے والے فنل میں منتقل کی گئیں۔ ہر CWC کو الگ کرنے والے فنل میں MeOH (3 × 70 mL) کے ساتھ 22 ◦C پر 30 منٹ کی مدت کے لیے ہلایا گیا۔ ہر CWC سے MeOH کے نچوڑ کو یکجا کیا گیا اور روٹری ویکیوم ایوپوریٹر کا استعمال کرتے ہوئے کم دباؤ کے تحت خشک ہونے کے لیے الگ سے بخارات بنایا گیا۔ حاصل شدہ باقیات کو 10 ملی لیٹر MeOH کے ساتھ دوبارہ تشکیل دیا گیا اور مزید تشخیص تک ریفریجریٹر میں محفوظ کیا گیا۔ حاصل کردہ نمونوں کو 291 nm پر موجودہ تجزیاتی طریقہ استعمال کرتے ہوئے HDQ تجزیہ کیا گیا۔

2.5 توثیق کے پیرامیٹرز

HDQ تجزیہ کے لیے موجودہ RP-HPTLC پرکھ کو ICH-Q2 (R1) کے رہنما خطوط پر عمل کرتے ہوئے مختلف توثیق کے پیرامیٹرز کے لیے درست کیا گیا تھا [44]۔ دیایچ ڈی کیواس کے ناپے ہوئے چوٹی کے رقبے کے خلاف HDQ ارتکاز کی منصوبہ بندی کرکے لکیریٹی کا اندازہ کیا گیا۔ موجودہ فارماسیوٹیکل پرکھ کے لیے 20, 40, 60, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 1200, اور 2400 ng band−1 کے 11 مختلف QC نمونوں پر HDQ لکیریٹی کا اندازہ کیا گیا۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے نظام کی کارکردگی کے پیرامیٹرز کا جائزہ ریٹارڈیشن فیکٹر (Rf)، غیر متناسب عنصر (As)، اور نظریاتی پلیٹوں کی تعداد فی میٹر (N m−1) کے لحاظ سے لگایا گیا تھا۔ Rf, As, andN m−1 MCQ (600 ng band−1) پر حاصل کیے گئے، جیسا کہ پہلے ادب میں رپورٹ کیا گیا تھا [45]۔

موجودہ RP-HPTLC طریقہ کی درستگی کا تعین فیصد ریکوری کے طور پر کیا گیا تھا۔ فیصد وصولی LQC (20 ng band−1)، MQC (600 ng band−1)، اور HQC (2400 ng band−1) پر حاصل کی گئی تھی۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ

موجودہ تجزیاتی طریقہ کی درستگی کو انٹرا/انٹر ڈے پریسجن کے طور پر جانچا گیا۔ موجودہ تجزیاتی پرکھ کے لیے اسی دن LQC، MQC، اورHQC میں HDQ کے تجزیہ سے انٹرا ڈے درستگی کا تعین کیا گیا تھا۔ موجودہ تجزیاتی پرکھ کے لیے تین مختلف دنوں پر LQC، MQC، اور HQC میں HDQ کے تجزیے سے انٹر ڈے درستگی کا تعین کیا گیا تھا [44]۔ ہر درستگی کو چھ بار ماپا گیا تھا (n=6)۔

موجودہ RP-HPTLC طریقہ کار کے لیے سبز سالوینٹس سسٹم میں کچھ چھوٹی تبدیلیاں متعارف کروا کر مضبوطی کا اندازہ لگایا گیا۔ مضبوطی کی تشخیص کے لیے، اصل EtOH H2O (60:40, v·v−1) سالوینٹ سسٹم کو EtOH-H2O (62:38, v·v−1) اور EtOHH2O (58:42, v·v−1) میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ ) سالوینٹ سسٹمز، اور مخصوص HPTLC ردعمل اور Rf اقدار کو ریکارڈ اور تشریح کی گئی [44]۔

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے حساسیت کا اندازہ ایک معیاری انحراف کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے پتہ لگانے (LOD) اور کوانٹیفیکیشن (LOQ) کی حدود کے طور پر کیا گیا تھا۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے ایچ ڈی کیو کے LOD اور LOQ کا حساب لگایا گیا، جیسا کہ لٹریچر میں رپورٹ کیا گیا ہے [44,45]۔

موجودہ فارماسیوٹیکل پرکھ کے لیے معیاری HDQ کے ساتھ CWCs A، B، C، اور D میں Rf اقدار اور HDQ کی UVspectra کا موازنہ کرکے چوٹی کی پاکیزگی/خصوصیت کا اندازہ لگایا گیا۔

2.6۔ CWCs میں HDQ کا مقداری تجزیہ

CWC A، B، C، اور D کے حاصل کردہ نمونے HPTLC پلیٹوں پر دیکھے گئے، اور ان کے TLC کے جوابات نوٹ کیے گئے۔ کے لیے چوٹی کا علاقہایچ ڈی کیوCWCs میں ریکارڈ کیا گیا تھا۔ CWCs میں موجود HDQ کے مواد کو موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے HDQ کے انشانکن وکر کو استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔

2.7۔ ہریالی کی تشخیص

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے سبز رنگ کی خصوصیات متفق میٹرک اپروچ [42] کو استعمال کرتے ہوئے حاصل کی گئیں۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے AGREE اسکورز (0.0–10) AGREE: The Analytical Greenness Calculator (ورژن0.5, Gdansk University) کا استعمال کرتے ہوئے ریکارڈ کیے گئے آف ٹیکنالوجی، گڈانسک، پولینڈ، 2020)۔

3. نتائج اور مباحثہ

3.1 طریقہ کار کی ترقی

لٹریچر کے تجزیاتی طریقوں کی بنیاد پر، یہ پایا گیا ہے کہ تجارتی کاسمیٹکس میں HDQ کے تجزیہ کے لیے ماحولیاتی طور پر پائیدار قابل/سبز RP-HPTLC طریقہ کی کمی ہے۔ اس لیے، موجودہ مطالعہ تیز رفتار، انتہائی حساس، اور ماحولیاتی طور پر پائیدار بنانے کے لیے کیا گیا تھا۔ CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے RP-HPTLC طریقہ۔

HDQ کے RP-HPTLC تجزیہ کے لیے، EtOH اور H2O کے مختلف تناسب، بشمول EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (60:40, v·v−1), EtOH-H2O (70:30، v·v−1)، EtOH H2O (80:20، v·v−1)، اور EtOH-H2O (90:10، v·v−1)، کو سبز سالوینٹ کے مجموعے کے طور پر جانچا گیا۔ HDQ تجزیہ کے لیے ایک قابل اعتماد بینڈ کی ترقی۔ سالوینٹ مرکب چیمبر سنترپتی حالات کے تحت تیار کیا گیا تھا۔ ریکارڈ شدہ ڈیٹا سے، یہ دیکھا گیا کہ EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH-H2O (80:20, v·v− 1)، اور EtOH-H2O (90:10، v·v−1) سبز سالوینٹس کے مرکب نے ایک ناقص کرومیٹوگرام پیش کیاایچ ڈی کیوایک ناقابل قبول As قدر کے ساتھ (بطور {{0}.29)۔ تاہم، EtOH-H2O (60:40, v·v−1) گرین سالوینٹس کے امتزاج نے HDQ atRf=0.83 ± 0.02 کا ایک اچھی طرح سے حل شدہ کرومیٹوگرام پیش کرتے ہوئے ایک قابل قبول قدر کے ساتھ دکھایا تھا (جیسا کہ {{ 12}}.03) (شکل 1)۔ لہذا، EtOH H2O (60:40, v·v−1) کو CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے سبز سالوینٹ مرکب کے طور پر بہتر بنایا گیا تھا۔ موجودہ RP-HPTLC طریقہ کے لئے UV- اسپیکٹرل بینڈ کو کثافت سے ریکارڈ کیا گیا تھا، اور موجودہ RP-HPTLC طریقہ کے لیے زیادہ سے زیادہ HPTLC ردعمل 291 nm پر پایا گیا تھا۔ لہذا، HDQ کا پورا تجزیہ 291 nm پر کیا گیا۔

3.2 توثیق کے پیرامیٹرز

HDQ کی مقدار کے لیے موجودہ فارماسیوٹیکل پرکھ ICH کی سفارشات پر عمل کرتے ہوئے لکیری رینج، سسٹم کی کارکردگی کے پیرامیٹرز، درستگی، درستگی، مضبوطی، حساسیت، اور چوٹی کی پاکیزگی/خصوصیت کے لیے توثیق کی گئی تھی [44]۔ موجودہ RP-HPTLC طریقہ کے لیے HDQ کے کیلیبریشن وکر کے کم سے کم مربع ریگریشن تجزیہ کے نتائج ٹیبل 1 میں پیش کیے گئے ہیں۔ایچ ڈی کیوموجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے انشانکن وکر 20–2400 ng بینڈ کی رینج میں 0.9997 کے تعین گتانک کے ساتھ لکیری تھا۔ ان اعداد و شمار نے HDQ کے ارتکاز اور اس کے ردعمل کے درمیان اچھی لکیری کا مشورہ دیا۔

موجودہ فارماسیوٹیکل طریقہ کار کے نظام کی کارکردگی کے پیرامیٹرز کا مطالعہ MQC (600 ng band−1) میں کیا گیا، اور نتائج ٹیبل 2 میں شامل ہیں۔ Rf، As، اور N m−1 قدریں موجودہ تجزیاتی طریقہ کی پیش گوئی بالترتیب 0.83 ± 0.02، 1.03 ± 0.03، اور 4987 ± 2.87 کے طور پر کی گئی تھی۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ موجودہ تجزیاتی طریقہ CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے قابل اعتماد تھا۔

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے درستگی کے تجزیہ کے نتائج ٹیبل 3 میں درج ہیں۔ موجودہ RP-HPTLC طریقہ کے لیے HDQ کی فیصد ریکوری بالترتیب LQC، MQC، اور HQC میں 101.80 فیصد، 98.16 فیصد، اور 99.38 فیصد مقرر کی گئی تھی۔ . فیصد وصولیوں کی اعلیٰ قدروں نے CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے موجودہ RP-HPTLC طریقہ کی درستگی کی نشاندہی کی۔

درستگی کا تعین تغیر کے گتانک کے فیصد (فیصد CV) کے طور پر کیا گیا تھا، اور نتائج جدول 4 میں دکھائے گئے ہیں۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے HDQ کے فیصد CVs کی پیشین گوئی 0.91، 0 کے طور پر کی گئی تھی۔ 59، اور 0.26 فیصد LQC، MQC، اور HQC پر بالترتیب، انٹرا ڈے پریسیشن کے لیے۔ موجودہ RP-HPTLC طریقہ کے لیے HDQ کے فیصد CVs کی پیش گوئی بالترتیب 0.98،{{1{12}}}.69، اور LQC، MQC اور HQC پر 0.32 فیصد کے طور پر کی گئی تھی۔ بین الاقوامی صحت سے متعلق فیصد CV کی کم قدروں نے CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے موجودہ RP-HPTLC طریقہ کی درستگی کی نشاندہی کی۔

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے مضبوطی کے تجزیے کے نتائج ٹیبل 5 میں دکھائے گئے ہیں۔ مضبوطی کے تجزیہ کے لیے فیصد CVs کی پیشین گوئی موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے 0.59–{3}}.66 فیصد کے طور پر کی گئی تھی۔ HDQ کی Rf قدریں موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے 0.82–0.84 رینج میں پائی گئیں۔ HDQ کی Rf اقدار اور کم فیصد CVs میں تنگ تبدیلیوں نے CWCs میں HDQ کی مقدار کے لیے موجودہ تجزیاتی طریقہ کی مضبوطی کو ظاہر کیا۔

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے حساسیت کو "LOD اور LOQ" کے طور پر ریکارڈ کیا گیا تھا، اور ان کی طبعی قدریں جدول 1 میں دکھائی گئی ہیں۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے "LOD اور LOQ" کی پیش گوئی 6.91 ± 0.23 اور 2 کے طور پر کی گئی تھی۔ 0.73 ± 0.68 این جی بینڈ−1، بالترتیب، کے لیےایچ ڈی کیومقدار کا تعین موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے "LOD اور LOQ" کی یہ طبعی قدریں CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے حساسیت کی نشاندہی کرتی ہیں۔

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے چوٹی کی پاکیزگی/خصوصیت کا اندازہ HDQ کے اوورلیڈ UV سپیکٹرا کا معیاریHDQ کے ساتھ چار مختلف CWCs میں موازنہ کر کے کیا گیا۔ چار مختلف CWCs میں معیاری HDQ اور HDQ کا اوورلیڈ UV سپیکٹرا شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔ معیاری HDQ اور مطالعہ شدہ CWCs میں HDQ کے لیے سب سے زیادہ کرومیٹوگرافک ردعمل موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے 291 nm پر دیکھا گیا۔ معیاری HDQ اور CWCs میں ایک جیسی UV سپیکٹرا، Rf قدریں، اور HDQ کی طول موج موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے چوٹی کی پاکیزگی/خصوصیت کی نشاندہی کرتی ہے۔

3.3 CWCs میں HDQ مشمولات کا تجزیہ

موجودہ تجزیاتی پرکھ کے قابل اطلاق کی تصدیق CWCs میں HDQ کے مقداری تخمینہ میں کی گئی۔ کا کرومیٹوگرامایچ ڈی کیوCWCs سے Rf {{0}}.83 ± 0 پر اس کے TLC اسپاٹ کا موازنہ کرکے شناخت کی گئی۔{9}}2 موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے معیاری HDQ کے ساتھ۔ موجودہ تجزیاتی پرکھ کے لیے CWCs A اور B میں HDQ کے کرومیٹوگرامس کا خلاصہ شکل 3 میں دیا گیا ہے۔ CWCs میں HDQ کے HPTLC کرومیٹوگرام خالص HDQ کے ایک جیسے تھے۔ کچھ اضافی چوٹیاں CWCs کے کرومیٹوگرامس میں بھی نمودار ہوئیں، جو شاید CWCs میں موجود مختلف ایکسپیئنٹس سے وابستہ ہوں۔ ماحولیاتی طور پر پائیدار HPTLC طریقہ Rf=0.83 پر CWCs کے دیگر اجزاء کی مداخلت کے بغیر HDQ تجزیہ کے لیے منتخب تھا۔ CWCs میں HDQ کی Rf ویلیو (0.83) معیاری HDQ ({{20}.83) سے مماثل پائی گئی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ HDQ اور کے درمیان کوئی تعامل نہیں تھا۔ CWC اجزاء۔ لہذا، ایچ ڈی کیو کرومیٹوگرام، ایل او ڈی، اور ایچ ڈی کیو تجزیہ کے موجودہ ایچ پی ٹی ایل سی طریقہ کار کے معیار پر تشکیل کے اجزاء کا کوئی اثر نہیں تھا۔ CWCs کے کرومیٹوگرامس میں اضافی چوٹیوں کی موجودگی نے اشارہ کیا کہ موجودہ RP-HPTLC طریقہ فارمولیشن اجزاء کی موجودگی میں ایچ ڈی کیو تخمینہ کے لیے قابل اعتماد تھا۔ CWCs کے HDQ مواد کا تعین HDQ کے انشانکن وکر سے کیا گیا تھا، اور نتائج جدول 6 میں شامل کیے گئے ہیں۔ جدول 6 HDQ کی لیبل شدہ مقدار اور اس کی تشکیل کے اجزاء کا خلاصہ بھی کرتا ہے۔ TheHDQ مشمولات CWC A (1.23 فیصد w·w−1) میں سب سے زیادہ تھے اس کے بعد CWC C (0.81 فیصد w·w−1), CWC D (0.43 فیصد w·w) −1)، اور CWC B (0.37 فیصد w·w−1)۔ HDQ کے ریکارڈ شدہ مواد مطالعہ شدہ CWCs میں HDQ کی لیبل شدہ رقم (200 فیصد w·w−1) سے بہت کم تھے۔ دو مختلف CWCs (A اور B) میں HDQ مواد کو بالترتیب 0.69 فیصد w·w−1 اور 0.34 فیصد w·w−1 کے طور پر ریکارڈ کیا گیا، ادب میں نارمل فیز HPTLC طریقہ استعمال کرتے ہوئے [1]۔ HDQ کے رپورٹ کردہ مواد بھی ادب میں HDQ کی لیبل شدہ رقم (200 فیصد w·w−1) سے بہت کم تھے۔ بہت سے CWCs یا CWPs کی مارکیٹنگ بالکل فطری ہونے کے دعوے کے تحت کی جاتی ہے۔ تاہم، کچھ مصنوعی کیمیکلز کو ملاوٹ کرنے والے کے طور پر تلاش کرنا عام بات ہے جس کے اثرات ایسے CWCs یا CWPs میں دھوکہ دہی کے طور پر پائے جاتے ہیں۔ اس کام میں ریکارڈ کی گئی HDQ کی مقدار اور لٹریچر میں ریکارڈ کی گئی اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ مطالعہ شدہ CWCs میں HDQ کی مقدار کم ہے اور لیبل کے دعووں سے میل نہیں کھاتی ہے [1]۔ لہذا، یہ توقع کی جاتی ہے کہ مطالعہ شدہ CWC میں ملاوٹ کے طور پر کچھ مصنوعی کیمیکل شامل ہیں۔ مجموعی طور پر، موجودہ تجزیاتی پرکھ کاسمیٹک اور دواسازی کی تیاریوں میں HDQ تجزیہ کے لیے استعمال کی جا سکتی ہے۔

3.4 ہریالی کی تشخیص

دواسازی کی سبزی کی تشخیص کے لیے مختلف طریقے استعمال کیے جاتے ہیں [38-43]۔ تاہم، صرف AGREE نقطہ نظر ہی سبزی کی تشخیص کے لیے GAC کے تمام 12 اصولوں کو استعمال کرتا ہے [42]۔ لہٰذا، موجودہ تجزیاتی طریقہ کا سبز رنگ کا پروفائل AGREE کیلکولیٹر کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا تھا۔ موجودہ تجزیاتی پرکھ کے لیے GAC کے 12 مختلف اصولوں کا استعمال کرتے ہوئے پیش گوئی شدہ AGREE اسکور کو شکل 4 میں پیش کیا گیا ہے۔ GAC کے مختلف اصولوں کے لیے The AGREE سکور درج ذیل درج کیا گیا: نمونہ علاج: 0.61تجزیاتی ڈیوائس کی پوزیشننگ: 1۔{{ 9}}نمونہ کی تیاری کے مراحل: 1۔{11}}آٹومیشن کی ڈگری: 0.80ڈیریوٹائزیشن: 1۔{15}}فضول کی مقدار: 1۔{17} }تجزیہ تھرو پٹ: 1۔{19}}توانائی کی کھپت: 1۔{21}}نمونہ علاج: 0.51 ری ایجنٹ کا ذریعہ: 1۔{25}}سالوینٹس کی زہریلا: 1۔{27}} آپریٹر کی حفاظت: 1۔{29}}

موجودہ تجزیاتی طریقہ کے لیے مجموعی طور پر AGREE اسکور کو 0.91 کے طور پر ریکارڈ کیا گیا، جو اس کے لیے بہترین سبز تجزیاتی طریقہ کی نشاندہی کرتا ہے۔ایچ ڈی کیومقدار کا تعین

4. نتیجہ

RP-HPTLC-densitometry طریقہ HDQ کے چار مختلف CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ موجودہ RP-HPTLC پرکھ کو توثیق کے مختلف پیرامیٹرز کے لیے درست کیا گیا تھا۔ موجودہ تجزیاتی طریقہ انتہائی حساس، تیز رفتار اور ماحولیاتی لحاظ سے پائیدار تھا۔ایچ ڈی کیوتجزیہ موجودہ تجزیاتی طریقہ کے AGREE سکور نے HDQ کوانٹیفیکیشن کے لیے ایک بہترین تجزیاتی پرکھ کا مشورہ دیا۔ موجودہ آرP-HPTLC طریقہ چار مختلف CWCs میں HDQ تجزیہ کے لیے موزوں تھا۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ موجودہ تجزیاتی پرکھ مختلف کاسمیٹک اور فارماسیوٹیکل تیاریوں میں HDQ تجزیہ کے لیے لاگو کی جا سکتی ہے۔