رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

Cistanche deserticola کے سیل معطلی کلچر میں فنگل ایلیسٹر کے ذریعہ phenylethanoid glycosides کی پیداوار میں بہتری

Cui-tao Lu¹,∗ & Xing-guo Mei²

مطلوبہ الفاظ Cistanche deserticola، فنگل ایلیسٹر،phenylethanoid glycoside، پلانٹ سیل کلچر

خلاصہ
جب، ترقی کے 15 ویں دن، سے ایک ایلیٹرفوسیریم سولانی40 ملی گرام l میں شامل کیا گیا۔^-1 کوCistanche deserticolaسیل سسپینشن کلچرز، ایکیناکوسائیڈ، ایکٹیوسائیڈ، اور کل کے موادphenylethanoid glycosides(PeGs) تمام مہذب خلیوں میں اگلے 27 دن میں 100 فیصد سے بڑھ کر 15 ملی گرام تک^-1خشک wt، 9 mg-1 dry wt اور 57 mg g^-1 خشک wt، بالترتیب. حتمی بایوماس (1.3 ملی گرام خشک ڈبلیو ٹی ملی لیٹر^-1) متاثر نہیں ہوا تھا۔

Cistanche deserticola

تعارف

Cistanche deserticolaایم اے (Orobanchaceae)، چین کی ایک مقامی جڑی بوٹی روایتی ادویات میں وسیع پیمانے پر استعمال ہوتی ہے جس میں مختلف علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جس میں سکون آور یا مدافعتی ردعمل کو تیز کرنے والے کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے (Hsu et al. 1995, Chang et al. 1995)۔فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز(PeGs) اہم بایو ایکٹیو میٹابولائٹس ہیں۔Cistanche deserticola(Xiong et al. 2000) اور بہت سے اجزاء جیسے echinacoside، acteoside، cisacteoside، isoacteoside، 2-acetylacteoside، cistanoside A، اور osmanthuside B (Wang et al. 2000) پر مشتمل ہیں۔ ان مصنوعات کی بڑھتی ہوئی مانگ اور میں تیزی سے کمی کے ساتھCistanche deserticolaپودے، سیل کلچر پیداوار کا ایک پرکشش متبادل ذریعہ ہوگا۔ بہت سے ایلیسیٹرز (خاص طور پر فنگل ایلیسیٹرز) پلانٹ سیل کلچر میں میٹابولائٹ کی پیداوار کو بڑھا سکتے ہیں (Wang et al. 2001)۔ لی وغیرہ۔ (1998) نے پایا کہ Fusarium solani کا ایک فنگل ایلیسٹر دونوں کے جڑ کے نظام سے الگ تھلگ ہے۔Cistanche deserticolaاور اس کا میزبان Halaxylon ammodendron، کالی آف میں امینو ایسڈ کے مواد کو بہتر بنا سکتا ہے۔Cistanche deserticolaلیکن اس کالس لائن میں پی جی کے مواد کی تبدیلیوں کا ان کے مطالعے میں ذکر نہیں کیا گیا۔ اس مقالے میں، کل PeGs اور دو اہم بایو ایکٹیو PeGs (echinacoside اور acteoside) کے بائیو سنتھیسز پر F. solani کے ایک ایلیسٹر کے اثرات اور سیل کی نشوونما کی تبدیلیوں پر سسپینشن کلچر کا مطالعہ کیا گیا۔Cistanche deserticola.

مواد اور طریقے

پلانٹ سیل ثقافتیں
Callus کے ترازو سے پیدا کیا گیا تھا۔Cistanche deserticolaاور گیمبورگ کے B5 میڈیم (1968) پر برقرار رکھا گیا جس میں 0.5 ملی گرام انڈول-3-ایسٹک ایسڈ ایل^-1، 2 ملی گرام کینیٹین ایل^-1,اور 1 جی کیسین ہائیڈرولائزیٹ ایل^-1. نس بندی سے پہلے پی ایچ کو 6 میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ تمام تجربات 250 ملی لیٹر شیک فلاسکس میں کیے گئے، ہر ایک روٹری شیکر (120 rpm اور 25 ڈگری) پر اندھیرے میں 100 ملی لیٹر میڈیم پر مشتمل ہے۔ انوکولم تقریبا 100 جی تازہ wt l تھا۔^-1.

cistanche deserticola کے موثر مواد--phenylethanoid glycoside

فنگل ایلیسٹر کی تیاری

فنگس کے تناؤ کی علیحدگی، Fusarium solani، اور فنگل elicitor کی تیاری جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (Li et al. 1998، Yu et al. 2001)۔ 15 ویں دن کو شیک فلاسک کلچرز میں فنگل ایلیسٹر کی مختلف مقداریں (کاربوہائیڈریٹ مساوی) شامل کی گئیں (کلچر کی مدت 42 دن تھی)۔

بایوماس جمع اور عملداری پرکھ
شیک فلاسک کے خلیوں کو آست پانی سے دھویا جاتا تھا اور مستقل وزن تک منجمد کرکے خشک کیا جاتا تھا۔ اس طرح خشک wt کا تعین کیا گیا تھا۔ خلیے کی قابل عملیت (خلیہ کی آبادی میں قابل عمل خلیوں کی فیصد) کا تعین 2,3،5-ٹریفینائل ٹیٹرازولیم کلورائیڈ (ٹوول اینڈ مازور 1975) کی کمی سے کیا گیا تھا۔

phenylethanoid glycosideکیcistanche deserticola

echinacoside، acteoside، اور کل کے مواد کا تعینphenylethanoid glycosides(پی جیز)
PeGs کو نکالنا Du & Liu (1993) کے طریقہ کار کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ منجمد خشکCistanche deserticolaخلیوں کو 70 فیصد (v/v) ایتھنول کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ ایتھنول کا حصہ مرتکز تھا، پانی سے سیر شدہ ایتھائل ایسیٹیٹ سے کم کیا گیا تھا، اور پھر پانی سے سیر شدہ این-بوٹانول کے ساتھ لیچ کیا گیا تھا۔ n-butanol فریکشن کو مرتکز کیا گیا، پانی میں تحلیل کیا گیا، ایک میکروپور رال کالم (AB-8، نانکائی یونیورسٹی، تیانجن، چین کی کیمیائی مصنوعات) میں بھرا گیا، اور یکے بعد دیگرے پانی اور میتھانول سے ملایا گیا۔ میتھانول کا حصہ اکٹھا کیا گیا تھا اور پی ای جی کے کل مواد کا تعین 334 nm پر معیاری کے طور پر echinacoside استعمال کرکے کیا گیا تھا۔ Echinacoside اور acteoside کا تعین نووا پاک C18 کالم (250 × 4.6 mm) کو HPLC سسٹم (پانی) میں UV ڈیٹیکٹر (334 nm) کے ساتھ استعمال کرکے کیا گیا تھا۔

نتائج

بائیو ماس کے جمع ہونے اور کل PeGs بائیو سنتھیسز پر فنگل ایلیسٹر کا اثر سیل بایوماس پر فنگل ایلیسٹر کے اثرات اور پی جی کی کل جمع خوراک شامل کردہ خوراک (کاربوہائیڈریٹ کے مساوی) پر منحصر ہے۔ جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے، ایلیسٹر کی کم خوراکیں خشک ڈبلیو ٹی کے لیے سازگار تھیں۔Cistanche deserticolaخلیات چوٹی ایلیسٹر کے ساتھ 20 ملی گرام ایل پر تھی۔^-1(1.76 ملی گرام خشک ڈبلیو ٹی ملی لیٹر دینا^-1).
20 ملی گرام l کے درمیان فنگل ایلیسٹر کے ذریعہ کل PeGs کے جمع کو نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا۔^-1اور 80 ملی گرام ایل^-1. 40 mg l-1 پر ایلیسٹر نے سب سے زیادہ پیداوار حاصل کی (57 mg g^-1)، جو نان ایلیسٹر کنٹرول کلچر میں حاصل ہونے والے دو گنا سے زیادہ تھا۔ مزید تجربے میں 40 ملی گرام 1 پر فنگل ایلیسٹر کا استعمال کیا گیا۔^-1.

تصویر 1. خشک سیل کا وزن اور سسپنشن سیل کلچر میں کل پی جی کا جمعCistanche deserticolaفنگل ایلیسٹر کی مختلف خوراکوں کے جواب میں۔ 15 تاریخ کو میڈیم میں ایک فنگل ایلیسٹر شامل کیا گیا۔ مزید 27 دن کے بعد نمونے لیے گئے۔ ▲، حتمی خشک سیل وزن؛ ◆، PeG کا کل مواد۔ قدریں سہ رخی نتائج کا ذریعہ ہیں اور ایرر بارز معیاری انحراف کی نمائندگی کرتے ہیں۔

سیل کی نشوونما اور پی جی جی بائیو سنتھیس کا ٹائم کورس
شکل 2 سیل کی قابل عملیت اور PeGs (echinacoside اور acteoside) کے حیاتیاتی ترکیب کو ظاہر کرتی ہے جب ثقافتوں کو 40 mg l کا نشانہ بنایا گیا تھا۔^-1فنگل ایلیسٹر 15 تاریخ کو کلچر کے بعد کے 27 دن میں، ایکینہکوسائیڈ اور ایکٹیوسائیڈ، دو اہم بایو ایکٹیو پی ای جیCistanche deserticolaدونوں میں کافی اضافہ ہوا۔ 39 ویں دن زیادہ سے زیادہ جمع دونوں حاصل کیے گئے، 14.7 ملی گرام جی تک پہنچ گئے۔^-1خشک ڈبلیو ٹی اور 8.9 ملی گرام جی^-1 خشک wt، بالترتیب. ایلیسٹر سے علاج شدہ ثقافتوں اور کنٹرول کے مابین سیل کی عملداری میں نمایاں فرق نہیں دیکھا گیا۔

تصویر 2. معطلی سیل کلچر میں سیل کی قابل عملیت اور ایکناکوسائیڈ اور ایکٹیوسائیڈ بائیو سنتھیسسCistanche deserticolaعلاج کے بعد 40 ملی گرام l^-1فنگل نکالنے والا. فنگل ایلیسٹر کو 15 ویں دن کو میڈیم میں شامل کیا گیا تھا۔ ◇, echinacoside-control; ●، ایلیسٹر کے ساتھ ایکٹیوسائیڈ کا علاج؛○،

ایکٹیوسائیڈ کنٹرول؛ ▲، سیل وائبلٹی-ایلیکیٹر کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے؛ △، سیل وائبلٹی-کنٹرول۔ قدریں سہ رخی نتائج کا ذریعہ ہیں اور ایرر بارز معیاری انحراف کی نمائندگی کرتے ہیں۔

بحث

فنگس سے اخذ کردہ بہت سے اجزاء (خلیہ کی دیوار کے ٹکڑے، پولی سیکرائڈز، اولیگوساکرائڈز، گلائکوپروٹینز، وغیرہ) پودوں کے خلیوں کی بہت سی انواع کے ساتھ ثانوی میٹابولائٹ کی پیداوار میں مختلف فنگل ایلیسیٹرز کے طور پر استعمال ہوتے رہے ہیں۔ اس مقالے میں، فنگس تناؤ Fusarium solani سے homogenate (بنیادی طور پر پولی سیکرائڈز پر مشتمل) جڑ کے نظام سے الگ تھلگCistanche deserticolaاور Halaxylon ammodendron کو سیل کلچر میں PeGs بائیو سنتھیسس کے لیے ایک موثر ایلیسٹر کے طور پر دکھایا گیا تھا۔Cistanche deserticola. خلیوں میں پی جی کی ترکیب کو متحرک کرنے کے لئے اس ایلیسٹر کا استعمال نہ صرف اہم تھا بلکہ اس کی نمائش کے فورا بعد ہی نمائش کی گئی تھی۔ یہ نتیجہ پلانٹ سیل کلچر (Wang et al. 2001) سے متعلق کچھ سابقہ ​​مطالعات سے متفق ہے۔

لی ایٹ ال کے پچھلے مطالعہ میں۔ (1998)، جب ایف سولانی کی طرف سے ایک فنگس ایلیسٹر کو کلچر میڈیم میں شامل کیا گیا تو اس کے بیجوں سے کالس پیدا ہوا۔Cistanche deserticolaبعد میں طویل مدتی ذیلی ثقافت میں زندہ رہ سکتا ہے، اور iridoids کی پیداوار کو بڑھایا جا سکتا ہے۔ اس نے اشارہ کیا کہ مہذب خلیات جب مائکروجنزموں کے ذریعہ حملہ کرتے ہیں تو بیماری کے خلاف مزاحمت کے ثانوی میٹابولائٹس کی ترکیب کرسکتے ہیں۔ اگرچہ ہمارے تجربے میں iridoids کا تعین نہیں کیا گیا تھا، ہم نے دکھایا ہے کہ F. solani کے پولی سیکرائڈز کو PeGs کی تیاری میں مؤثر فنگل ایلیسٹر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔Cistanche deserticolaخلیات

cistanche deserticola کے موثر مواد--phenylethanoid glycoside

منجانب: ' کی بہتریphenylethanoid glycosidesسیل سسپینشن کلچر میں فنگل ایلیسٹر کے ذریعہ پیداوارCistanche deserticolaبذریعہ Cui-tao Lu¹,∗ & Xing-Guo Mei²

----بائیو ٹیکنالوجی کے خطوط 25: 1437–1439، 2003۔ © 2003 کلوور اکیڈمک پبلشرز۔ نیدرلینڈز میں چھپی۔

حوالہ جات

چانگ وائی، وو ایچ، وانگ ایس این، چینگ ایچ سی (1995) کے مضبوط اثرات کا مطالعہCistanche deserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. اور Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight۔ چین جے چن۔ میٹر میڈ. 26: 143–146۔
ڈو این ایس، لیو جے ایل (1993) کا تعینphenylethanoid glycosidesمیںCistanche deserticolaمیکروویسیکولر رال سپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعہ۔ نیٹ پیداوار Res. ترقی کرنا۔ 5: 30–33۔

گیمبورگ او ایل، ملر آر اے، اوجیما کے (1968) سویا بین جڑ کے خلیوں کی معطلی ثقافتوں کی غذائیت کی ضروریات۔ ختم سیل ریس 50: 151–158۔

Hsu WH, Chu SH, Sheng LC, Yuan KW, Mao CN (1995) کیمیائی اجزاء اور فارماسولوجیکل اثرات کا مطالعہCistanche deserticolaایم اے اور Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. ٹھوڑی روایت۔ جڑی بوٹی منشیات 26: 143–146۔

Li S, Wu X, Dong XC, Zheng X, Zheng JH, Lou ZC (1998) امائنو ایسڈ کے مواد پر فوزیریم سولانی کے ایلیسٹر کا اثرCistanche deserticolaہمیں بلائیں. چائنا جے نارتھ ویسٹ فارم۔ 13: 247–248۔
Towill LE, Mazur P (1975) پودوں کی بافتوں کی ثقافتوں کے لیے 2,3،5-ٹریفینیلٹرازولیئم کلورائیڈ کی قابل عمل پرکھ کے طور پر کمی کا مطالعہ۔ کر سکتے ہیں۔ جے بوٹ 53: 1097–1102۔
وانگ سی جی، وو جے وائی، میئی ایکس جی (2001) فنگل ایلیسیٹیشن اور درمیانی تجدید کے ذریعہ ٹیکسس چنینسس سیل کلچر میں ٹیکسول کی پیداوار اور اخراج میں اضافہ۔ اپل مائکروبیول بائیو ٹیکنالوجی 55: 404–410۔
Wang YM، Zhang SJ، Luo GA، Hu YN، Hu JP، Liu L، Zhu Y، Wang HJ (2000) کا تجزیہphenylethanoid glycosideLC/ESI- MS/MS کے ذریعے جڑی بوٹیوں Cistanchis کے نچوڑ میں۔ ایکٹا فارم۔ گناہ 35: 839–842۔
Xiong QB، Yasuhiro Tezukay، Takuji Kaneko، Li HY، Le Quan Tran، Koji Hase، Tsuneo Namba، Shigetoshi Kadota (2000) فعال میکروفیجز میں phenylethanoids کے ذریعے نائٹرک آکسائیڈ کی روک تھام۔ یور جے فارم۔ 400: 137–144۔
یو ایل جے، لین ڈبلیو زیڈ، کن ڈبلیو ایم، سو ایچ بی (2001) ٹیکسس چنینسس کے سیل سسپنشن کلچرز میں فنگل ایلیسٹر سے متاثرہ جھلی لپڈ پیرو آکسیڈیشن اور ٹیکسول کی پیداوار پر سیلیسیلک ایسڈ کے اثرات۔ پروک بائیو کیم۔ 37: 477–482۔