ہائپوکسک میسنچیمل اسٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز CPT1A ثالثی فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن کو بحال کرکے اسکیمیا – ریپرفیوژن انجری کے بعد رینل ایفبروسس کو بہتر بناتے ہیں۔

خلاصہ

1. پس منظر

رینل فبروسس گردے کی دائمی بیماریوں کا ایک عام پیتھولوجیکل عمل ہے جو متعدد عوامل کی وجہ سے ہوتا ہے۔ mesenchymal اسٹیم سیلز کا ہائپوکسک پریٹریٹمنٹ مختلف بیماریوں میں خفیہ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز (MSC-EVs) کی افادیت کو بڑھا سکتا ہے، لیکن یہ واضح نہیں ہے کہ آیا وہ رینل فبروسس کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ تازہ ترین تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن (FAO) کی بازیابی رینل فبروسس کو کم کر سکتی ہے۔ اس مطالعے میں، ہمارا مقصد یہ جانچنا تھا کہ آیا MSC ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز (Hypo-EVs) کے ساتھ ہائپوکسک پریٹریٹمنٹ رینل فبروسس کو بحال کرنے اور بنیادی میکانزم کی تحقیقات کے لیے FAO کو بہتر بنا سکتا ہے۔

2. طریقے

ہائپو-ای وی کو ہائپوکسیا-پریٹریٹڈ ہیومن نال سے ماخوذ MSC (hP-MSC) سے الگ تھلگ کیا گیا تھا، اور Norm-EVs کو عام حالات میں مہذب HP-MSC سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ ہم نے Vivo میں اسکیمیا – ریپرفیوژن (I/R) سے متاثر رینل فبروسس ماڈل کا استعمال کیا۔ چوہوں کو سرجری کے فوراً بعد PBS، Hypo-EVs، یا Norm-EVs کے ساتھ انجکشن لگایا گیا اور سرجری کے بعد 1 دن۔ گردے کے نقصان کی تشخیص کے لیے رینل فنکشن، گردے کی پیتھالوجی، اور رینل فبروسس کا جائزہ لیا گیا۔ میکانکی تلاش کے لیے، ویوو میں فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن (FAO)، مائٹوکونڈریل مورفولوجیکل تبدیلی، اے ٹی پی کی پیداوار، اور مائٹوکونڈریل ماس پروٹین کا پتہ چلا۔ وٹرو میں مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت اور رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی پیداوار کی تحقیقات کی گئیں۔

3. نتائج

ہم نے پایا کہ Hypo-EVs گردوں کے ڈھانچے کو پہنچنے والے نقصان کی بازیابی، رینل فنکشن کی بحالی، اور رینل فبروسس میں کمی پر اعلیٰ علاج کا اثر دیتے ہیں۔ دریں اثنا، Hypo-EVs نے FAO کلیدی شرح کو محدود کرنے والے انزائم کارنیٹائن palmitoyl-transferase 1A (CPT1A) کے اظہار کو بحال کرکے گردے میں مائٹوکونڈریل FAO کو بڑھایا۔ میکانکی طور پر، مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کی بہتری، مائٹوکونڈریل ڈھانچے کی مرمت، مائٹوکونڈریل ماس اور اے ٹی پی کی پیداوار کی بحالی، آکسیڈیٹیو تناؤ کی روک تھام، اور مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں اضافہ، جزوی طور پر ہائپو-ای وی کے اثرات کی وضاحت کرتا ہے جو مائٹوکونڈریل/مائٹوکونڈریل میں بہتری لاتا ہے۔ R نقصان۔

4. نتائج

Hypo-EVs CPT1A-ثالثی مائٹوکونڈریل FAO کو بحال کرکے رینل فبروسس کو دباتے ہیں، جس کے اثرات مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کے ضابطے کے ذریعے حاصل کیے جا سکتے ہیں۔ ہمارے نتائج رینل فبروسس کے لیے سیل فری تھراپی کی ترقی کے لیے مزید میکانزم کی مدد فراہم کرتے ہیں۔

5. مطلوبہ الفاظ

Mesenchymal سٹیم سیل، Hypoxic، Extracellular vesicles، Mitochondrial، Fatty acid oxidation، Renal fibrosis.

Cistanche سپلیمنٹ خریدنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

تعارف

دائمی گردے کی بیماری (CKD) ایک شدید بیماری ہے جو انسانی صحت کے لیے خطرہ ہے اور یہ ایک اہم عالمی عوامی مسئلہ بھی ہے۔ CKD کے عالمی واقعات، پھیلاؤ، اور موت نمایاں ہیں، اور بڑھ رہی ہیں، اور دنیا بھر میں بالغوں میں پھیلاؤ تقریباً 10 فیصد ہے [1، 2]۔ رینل اسکیمیا ریپرفیوژن (I/R) کی چوٹ رینل فبروسس اور ترقی پسند CKD [3، 4] سے وابستہ ہے۔ رینل فبروسس کو ایک عام پیتھولوجیکل عمل سمجھا جاتا ہے جو CKD اور آخری مرحلے کے گردوں کی بیماری کا باعث بنتا ہے۔ تاہم، فی الحال کوئی مؤثر علاج موجود نہیں ہے جو فبروسس کو کامیابی سے روکتا ہے یا اس کو ریورس کرتا ہے [5]۔

Mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز (MSC-EVs) کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ وہ CKD [6–9] کے کئی preclinical ماڈلز میں دوبارہ تخلیقی اور antifibrotic کردار ادا کرتے ہیں۔ تاہم، MSC-EVs کی کم پیداوار سیل فری علاج کی بڑے پیمانے پر پیداوار کے لیے ایک محدود عنصر ہے [10]۔ ہائپوکسیا کی پیشگی شرط MSCs کی پیراکرائن سرگرمیوں کو متحرک کرتی ہے اور EVs کے فنکشن اور پیداوار کو بڑھاتی ہے اور اسے EVs کی علاج کی صلاحیت کو بہتر بنانے کے لیے ایک انجینئرنگ نقطہ نظر سمجھا جاتا ہے [11, 12]۔ ایک حالیہ مطالعہ نے اشارہ کیا کہ ہائپوکسیا سے پہلے سے مشروط MSCs گردوں کے فبروسس اور سوزش کو روکنے میں غیر علاج شدہ MSCs سے زیادہ اہم ہیں [13]۔ تاہم، رینل فبروسس میں ہائپوکسیا سے پہلے سے مشروط MSC سے ماخوذ ای وی کا کردار ابھی تک قائم نہیں ہوا ہے۔

رینل فبروسس کے پیتھولوجیکل میکانزم کا بہت سے حالیہ مطالعات میں جائزہ لیا گیا ہے [14-16]، خاص طور پر میٹابولک ریگولیشن کے شعبے میں [17]۔ یہ بات مشہور ہے کہ قربت والے نلی نما خلیے (PTCs) گردے میں سب سے زیادہ توانائی مانگنے والے خلیات ہیں اور tubulointerstitial fibrosis بڑھنے میں مرکزی کردار ادا کرتے ہیں [18, 19]۔ فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن (FAO) PTCs کا بنیادی توانائی کا ذریعہ ہے [19, 20]۔ جینوم وائیڈ ٹرانسکرپٹوم اسٹڈیز کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ FAO سے متعلقہ کلیدی میٹابولک انزائمز اور ٹرانسکرپشن ریگولیٹرز کے اظہار میں انسانی اور ماؤس ماڈلز میں ٹیوبولوئنٹرسٹیشل فبروسس [20] کے ساتھ واضح طور پر کمی واقع ہوئی ہے۔ اس کے علاوہ، فیٹی ایسڈ میٹابولزم کو بحال کرنا چوہوں کو ٹیوبلوانٹرسٹیشل فبروسس [17، 20] سے بچا سکتا ہے۔ ایک حالیہ تحقیق نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ کلیدی شرح کو محدود کرنے والے انزائم کارنیٹائن palmitoyl-transferase 1A (CPT1A) کی حد سے زیادہ کارکردگی گردوں کے نلی نما اپکلا خلیوں میں FAO کو بڑھا سکتی ہے، سوزش کے ثالثوں کے اظہار کو کم کر سکتی ہے، اور تین تجرباتی ماڈلز میں فبروسس کے نمایاں خاتمے کا باعث بن سکتی ہے۔ ] لہذا، FAO کے ٹارگٹڈ علاج فبروسس میں کمی کے لیے ممکنہ طور پر مؤثر علاج کی حکمت عملی ہو سکتی ہے۔

مائٹوکونڈریا FAO کو ریگولیٹ کرنے میں ایک ناگزیر کردار ادا کرتا ہے۔ پچھلے مطالعہ نے اشارہ کیا کہ astragaloside IV عمر بڑھنے کے دوران mitochondrial سرگرمی کو منظم کرکے FAO کو بڑھا سکتا ہے [22]۔ مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کی تباہی گردے کی بیماری کی ابتدائی چوٹ، چوٹ لگنے کے بعد غیر معمولی مرمت، اور CKD کے روگجنن میں اہم کردار ادا کرتی ہے [23، 24]۔ جسمانی اور پیتھولوجیکل حالات کے تحت، مختلف میکانزم مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے کے لیے مربوط ہوتے ہیں، بشمول اینٹی آکسیڈینٹ دفاع، مائٹوکونڈریل ڈی این اے کی مرمت، مائٹوکونڈریل فیوژن اور فیوژن، مائٹوکونڈریل آٹوفیجی، اور مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس [25]۔ متعدد مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ MSC-EVs مائٹوکونڈریل ڈی این اے کو مستحکم کرکے مائٹوکونڈریل نقصان کو کم کر سکتے ہیں، مائٹوکونڈریل فیوژن کو روک سکتے ہیں، اور شدید گردے کی چوٹ میں مائٹوکونڈریل اینٹی آکسیڈینٹ ڈیفنس اور اڈینوسین ٹرائی فاسفیٹ (ATP) کی پیداوار کو متحرک کر سکتے ہیں۔ . پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ Hypo-EVs کے علاج سے angiogenesis، پھیلاؤ، اور ہجرت کو فروغ دینے، اور Norm-EVs کے علاج [29-31] کے مقابلے میں سوزش اور اپوپٹوسس کو روکنے پر بہتر اثرات مرتب ہوتے ہیں۔ بہر حال، محققین نے حتمی طور پر اس بات کا تعین نہیں کیا ہے کہ آیا فائبروسس میں Hypo-EVs کے علاج کے نتائج مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس پر منحصر ہیں۔

اس مطالعے کے مقاصد تھے (1) یہ دریافت کرنا کہ آیا MSCs سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر vesicles (Hypo-EVs) کا ہائپوکسک پری ٹریٹمنٹ بہتر اینٹی فبروسس اثر رکھتا ہے۔ (2) اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا Hypo-EVs CPT1A-ثالثی FAO کو بڑھا کر اسکیمیا ریپرفیوژن سے متاثرہ فائبروسس کو کم کرتے ہیں۔ (3) جانچنے کے لیے کہ آیا FAO پر Hypo-EVs کا حفاظتی اثر مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کے ضابطے سے متعلق ہے۔

Cistanche پاؤڈر

طریقے

1. سیل کلچر اور ہائپوکسیا پیشگی شرط

انسانی نال سے ماخوذ MSC (hP-MSC) انسٹی ٹیوٹ آف فاؤنڈیشن، چائنیز اکیڈمی آف میڈیکل سائنسز کے ذریعہ فراہم کیا گیا تھا اور 10 فیصد کے ساتھ Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12, Gibco) میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا۔ فیٹل بوائین سیرم (FBS، کارننگ) 100 U/mL پینسلن − سٹریپٹومائسن (Gibco) کے ساتھ ضمیمہ اور 5 فیصد CO2 ماحول میں 37 ڈگری پر برقرار رکھا جاتا ہے۔ hP-MSC کے 60 فیصد –70 فیصد سنگم تک پہنچنے کے بعد، کلچر میڈیا کو exosome-depleted FBS (SBI, 50A-1) سے بدل دیا گیا اور 37 ڈگری، 5 فیصد CO2، 21 فیصد O2 یا 1 پر کلچر کیا گیا۔ فیصد O2، 94 فیصد N2، اور 5 فیصد CO2 اضافی 48 گھنٹے کے لیے۔ اس کے بعد EVs کی تنہائی کے لیے میڈیم جمع کیا گیا، اور MSC (1 فیصد O2) کے ہائپوکسک پریٹریٹمنٹ سے جمع کی گئی EVs کو Hypo-EVs کہا گیا، اور عام MSC (21 فیصد O2) کو Norm-EVs کہا گیا۔ مزید تجربات کے لیے صرف hP-MSC حصئوں 6-10 سے استعمال کیا گیا تھا۔

2. سیل کلچر اور علاج

ہیومن رینل پروکسیمل ٹیوبلر اپیتھیلیل (HK-2, ATCC, USA) سیلز DMEM/F12 میں 10 فیصد FBS کے ساتھ کلچر کیے گئے تھے اور 100 U/mL penicillin−streptomycin کے ساتھ ضمیمہ کیے گئے تھے۔ خلیوں کو 5 فیصد CO2 پر مشتمل مرطوب ماحول میں 37 ڈگری پر برقرار رکھا گیا۔ ہم نے وٹرو میں CKD کی نقل کرنے کے لیے دو طریقے استعمال کیے ہیں۔ سیل ہائپوکسیا / ری آکسیجنیشن (H/R) ماڈل کو انجام دیا گیا جیسا کہ پہلے بتایا گیا تھا [32]۔ مختصراً، HK-2 خلیات کو ہائپوکسک حالت (37 ڈگری، 1 فیصد O2، 94 فیصد N2، اور 5 فیصد CO2) کے لیے گلوکوز اور سیرم فری میڈیم میں 12 گھنٹے کے لیے ہائپوکسک چوٹ کا سامنا کرنا پڑا۔ اس کے بعد، میڈیم کو تبدیل کر دیا گیا، اور خلیات کو 24 گھنٹے دوبارہ آکسیجنیشن کے لیے نارمل حالت (21 فیصد O2) کے تحت رکھا گیا۔ تجرباتی ڈیزائن کے مطابق کنٹرول گروپ کو عام حالت (21 فیصد O2) کے تحت مہذب کیا گیا تھا۔ ایک اور طریقہ یہ تھا کہ HK-2 خلیوں کو ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر بیٹا-1 (TGF- 1) کے ساتھ 48 گھنٹے کے لیے 10 ng/mL کی حتمی حراستی پر انکیوبیٹ کیا جائے جیسا کہ پہلے بتایا گیا ہے [13]۔ ری آکسیجنیشن یا TGF- 1- محرک وقت کے دوران Norm-EVs یا Hypo-EVs (100 ug/mL غذائیت والے میڈیم) کو خلیوں میں شامل کیا گیا۔

3. MSC-EVs تنہائی اور شناخت

MSC سے ماخوذ EVs کو تفریق الٹرا سینٹرفیوگریشن طریقہ استعمال کرتے ہوئے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ مختصراً، کلچر میڈیم کو مندرجہ ذیل 4 ڈگری پر سینٹرفیوج کیا گیا: 10 منٹ کے لیے 500×g، 2 پر،000×g 20 منٹ کے لیے، اور 10،000×g 30 منٹ کے لیے میڈیم کو 0 کے ذریعے فلٹر کیا گیا تھا۔{11}}μm فلٹر سے پہلے 100 پر الٹرا سینٹرفیوگریشن،000×g 2 گھنٹے کے لیے۔ آخر کار، EV چھروں کو PBS میں دوبارہ معطل کر دیا گیا اور آلودہ کرنے والے پروٹینوں کو خارج کرنے کے لیے اضافی 2 گھنٹے کے لیے الٹرا سینٹرفیوج کیا گیا، اور پھر پیوریفائیڈ ای وی کو PBS میں کاٹا گیا اور مزید استعمال کے لیے −80 ڈگری پر محفوظ کر لیا گیا۔ Norm-EVs اور Hypo-EVs کے پروٹین کی تعداد کی جانچ بائی سینچونینک ایسڈ پروٹین پرکھ (BCA، تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، MA، USA) کے ذریعے کی گئی۔ ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی (TEM) کا استعمال کرتے ہوئے EVs کی مخصوص کرہ نما بیلیئر جھلی کی ساخت دیکھی گئی۔ ویسٹرن بلوٹنگ کا استعمال EVs کے معیار کو جانچنے کے لیے کیا گیا تھا، اور EVs کے سائز کی تقسیم کو ڈائنامک لائٹ سکیٹرنگ (DLS) کے ذریعے جانچا گیا تھا۔

Cistanche tubulosa

4. جانوروں کے تجربات

نر C57BL/6 SPF چوہوں (7-9 ہفتے پرانے) کو Sibeifu تجرباتی جانوروں کی سائنس اور ٹیکنالوجی (بیجنگ، چین) کے ذریعے فراہم کیا گیا تھا اور تجربے سے پہلے چینی PLA جنرل ہسپتال میں جانوروں کے مرکز میں 4 دن کے لیے ان کو موافقت کے ساتھ کھلایا گیا تھا۔ چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: کنٹرول، فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS)، Norm-EVs، اور Hypo-EVs گروپس۔ PBS، Norm-EVs، اور Hypo-EVs گروپوں کے چوہوں کو رینل اسکیمیا ریپرفیوژن کا نشانہ بنایا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [33، 34]۔ مختصراً، چوہوں کو پینٹوباربیٹل (50 ملی گرام/کلوگرام) کے ذریعے انٹراپریٹونیل انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی۔ ماؤس کے گردے کے اوپر والے بالوں کو صاف کیا گیا تھا اور پھر دو طرفہ رینل پیڈیکل ویسلز کو بے نقاب کیا گیا تھا۔ رینل اسکیمیا کو دلانے کے لیے، بائیں گردے کی شریان کو 30 منٹ کے لیے نان ٹرامیٹک ویسکولر کلیمپ کے ساتھ کلیمپ کیا گیا اور دائیں گردے کو بیک وقت نکال دیا گیا۔ اس کے بعد، کلیمپ کو جاری کرکے ریفرفیوژن کا آغاز کیا گیا۔ کلیمپ ہٹانے کے بعد ریفرفیوژن کو یقینی بنانے کے لیے گردوں کو 5 منٹ تک دیکھا گیا۔ آپریشن کے دوران آپریٹنگ ٹیبل اور کمرے کا درجہ حرارت 37 ڈگری پر برقرار رکھا گیا۔ علاج کے ماڈلز میں، 100 ug Norm-EVs یا Hypo-EVs 0.15 mL PBS سالوینٹس میں بالترتیب Norm-EVs اور Hypo-EVs گروپوں میں سرجری اور دن (D) 1 پوسٹ سرجری کے فوراً بعد ٹیل ویین انجیکشن کے ذریعے لگایا گیا۔ پی بی ایس کا ایک ہی حجم پی بی ایس گروپ میں دم رگ کے انجیکشن کے ذریعہ لگایا گیا تھا۔ چوہوں کو سرجری کے بعد D 2، D 7 اور D 14 پر مارا گیا (تصویر 1a)۔

5. MSC-EVs انٹرنلائزیشن

اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا زخمی گردوں کے ذریعے EVs کو اندرونی بنایا جا سکتا ہے۔ ای وی پر لیبل لگانے کے لیے دل (یزین) فلورسنٹ سٹیننگ کی گئی تھی۔ Te Norm-EVs یا Hypo-EVs (200 ug) جو PBS کے 100 μL میں تحلیل ہو گئے تھے انہیں 4 μM دل کے ساتھ 37 ڈگری پر 1 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد غیر باؤنڈ رنگوں کو ایک exosome اسپن کالم (انویٹروجن) کا استعمال کرتے ہوئے ہٹا دیا گیا۔ Di/Norm-EVs اور Dil/Hypo-EVs کو PBS میں بعد کے استعمال کے لیے معطل کر دیا گیا تھا۔ Dil/Norm-EVs یا Dil/HypoEVs (100 ug) سرجری کے فوراً بعد دم کی رگ کے ذریعے اسکیمیا – ریپرفیوژن انجری (I/R) ماڈل چوہوں میں نس کے ذریعے انجکشن لگائے گئے تھے جیسا کہ اوپر بتایا گیا ہے۔ 1، 3، 5 اور 7 دنوں میں، چوہوں کو فوری طور پر لیونگ امیج سافٹ ویئر 4.4 (پرکن ایلمر) کا استعمال کرتے ہوئے امیج کیا گیا۔ مزید برآں، گردوں کو D 7 پر آپٹیکل امیجنگ سسٹم پر جمع اور مشاہدہ کیا گیا۔ تمام بایولومینیسینس امیجنگ (BLI) سگنلز کو دلچسپی کے علاقوں (ROIs) کی اوسط چمک سے ماپا گیا۔

6. ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (TEM)

گردے کے ٹشو کا کل 1 ملی میٹر 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائڈ (پی ایچ 7.4) میں 24 گھنٹے کے لیے 4 ڈگری پر طے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ٹشو کو 2–3 گھنٹے کے لیے 1 فیصد اوسمیم ایسڈ کے ساتھ طے کیا گیا، ایسٹون اور ایتھنول سے پانی کی کمی، اور ایپوکسی رال کے ساتھ سرایت کی گئی۔ اس کے بعد، الٹرا مائیکروٹوم کو 60 nm کی موٹائی کے ساتھ الٹرا تھین حصوں کو تیار کرنے کے لیے استعمال کیا گیا، جو پھر 3 فیصد یورینیل ایسیٹیٹ اور لیڈ سائٹریٹ سے داغے ہوئے تھے۔ آخر میں، اس حصے کو ایک TEM (جاپان) کے تحت دیکھا گیا۔

7. رینل فنکشن کا تجزیہ

D 3 کو دم کی رگ سے خون کا نمونہ جمع کیا گیا تھا، اور چوہوں میں خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) کی سطح کو مناسب کٹ (Bioassay) کا استعمال کرتے ہوئے جانچا گیا تھا۔

8. رینل ہسٹوپیتھولوجی کی تشخیص

رینل ٹشوز کو 48 گھنٹے کے لیے 10 فیصد فارملین میں طے کیا گیا، پیرافین میں سرایت کیا گیا، 3 μm موٹائی پر سیکشن کیا گیا، معیاری پروٹوکول کے ذریعے میسن سٹیننگ ریجنٹس سے داغ دیا گیا، اور مائکروسکوپ (اولمپس، ٹوکیو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے مشاہدہ کیا گیا۔ امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے کولیجن جمع کرنے کے علاقے کی فیصد کا حساب لگایا گیا۔ اسکورنگ کے لیے فی جانور کم از کم 10 بے ترتیب نان اوورلیپنگ فیلڈز تھے۔

9. امیونو ہسٹو کیمسٹری

پیرافین ایمبیڈڈ گردے کے حصوں کو 20 منٹ کے لیے سوڈیم سائٹریٹ بفر (پی ایچ 6، ایپیٹوپ ریٹریول سلوشن 1) کے ساتھ ہیٹ میڈیٹڈ اینٹیجن بازیافت کا استعمال کرتے ہوئے پہلے سے علاج کیا گیا، اس کے بعد 4 ڈگری پر راتوں رات پرائمری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیشن کیا گیا۔ اس کے بعد حصوں کو بایوٹینیلیٹڈ سیکنڈری اینٹی باڈی کے ساتھ لگایا گیا تھا، اور 3,3'-diaminobenzidine (DAB) کو کروموجن کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد حصوں کو ہیماتوکسیلین کے ساتھ مقابلہ کیا گیا اور آپٹیکل مائکروسکوپ سے مشاہدہ کیا گیا۔ استعمال شدہ بنیادی اینٹی باڈیز درج ذیل تھیں: CPT1A (ab128568، Abcam)، اور Vimentin (ab92547، Abcam)۔

10. امیونو فلوروسینس

خلیات یا بافتوں کو 5 منٹ کے لیے 0.2 فیصد Triton X-100 کے ساتھ پارگمیبلائز کیا گیا، بھیڑوں کے سیرم کے ساتھ 30 منٹ تک بلاک کیا گیا، اور ہموار پٹھوں کے ایکٹین ( -SMA، 1:200، 55135، پروٹینٹیک) یا کولیجن I (1:100, ab270993, Abcam) اینٹی باڈی 16–18 گھنٹے کے لیے 4 ڈگری پر، اس کے بعد 1 گھنٹے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر Cy3-conjugated سیکنڈری اینٹی باڈی (سرخ) کے ساتھ انکیوبیشن۔ DAPI کے ساتھ نیوکلی کا مقابلہ کیا گیا تھا۔ ٹشو سیکشنز کے فلورسنٹ داغ کو کنفوکل فلوروسینس مائکروسکوپی کے ذریعہ امیج کیا گیا تھا۔

11. مغربی بلوٹنگ تجزیہ

گردوں، خلیات، یا EVs کے چھرے RadioImmune Precipitation Assay (RIPA) lysis بفر میں لیس کیے گئے تھے جس میں phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF) شامل تھے، اور سینٹرفیوگریشن کے بعد حاصل ہونے والے سپرنٹنٹ سسپنشن کو BCA پروٹین پرکھنے والی Fishmoisher کٹ (BCA) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ اسی معیار کے پروٹین کے نمونے (20 ug/ لین) کو 10 فیصد یا 12 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ – پولی کریلامائڈ جیل (SDS-PAGE) میں شامل کیا گیا اور پھر SDS-PAGE جیل سے جھلیوں میں منتقل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 1X کیسین محلول کے ساتھ جھلی کو 2 گھنٹے کے لیے بلاک کر دیا گیا اور پھر درج ذیل پروٹین کے خلاف 4 ڈگری پر بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا: -SMA (ab7817، Abcam)، vimentin (ab92547، Abcam)، glyceraldehyde 3- فاسفیٹ ڈیہائیڈروجنیز (GAPDH، 60004-1- Ig، Proteintech)، ایکٹین (20536-1-AP، Proteintech)، PGC1 (ab191838، Abcam)، CPT1A (ab128568، Abcam)، succinate dehydrogenase پیچیدہ آئرن سلفر BSDH subunit , 10620-1-AP, Proteintech), cytochrome c oxidase subunit IV (COXIV, ab202554, Abcam), اور ATPB (17247-1-AP, Proteintech)۔ اس کے بعد اس جھلی کو اسی ثانوی اینٹی باڈی کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 1.5 گھنٹے کے لیے لگایا گیا اور تین بار دھویا گیا۔ امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے تصاویر کا تجزیہ کیا گیا۔

12. مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (RT‑qPCR)

سب سے پہلے، RNA کو Trizol reagent (Invitrogen) کا استعمال کرتے ہوئے lysed خلیات یا گردے کے ٹشو سے نکالا گیا، اور پھر RNA کو ReverTra Ace qPCR RT کٹ (Toyobo) کا استعمال کرتے ہوئے کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق cDNA میں ترکیب کیا گیا۔ مقداری ریئل ٹائم پولیمریز چین کا رد عمل SYBR سلیکٹ ماسٹر مکس (لائف ٹیکنالوجیز) اور RT-qPCR ڈیٹیکشن سسٹم (ABI) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ مندرجہ ذیل جینوں کے پرائمر کی ترکیب کی گئی: PPAR فارورڈ TTTGCCAAGGCTATCCCAGG، ریورس GTCACAGAACGGGCTTCCTCA،

PGC1 فارورڈ AATGCAGCGGTCTTAGCACT، ریورس CTGAGCAGGGACGTCTTTGT، ACOX2 TCATCCAACGTGACCCAGTG، ریورس CAG CAAGGACTCTGTCAGCA، CPT2 فارورڈ CATCGT ACCCACCATGCACT، ریورس CTCCCTTTGCTGTCATCATCATCAT، ریورس CTCCTTGCTGTCATCAT، ریورس GCTTAATTTGACTCAACACGGGA، اور ہر ٹارگٹ جین کے اظہار کو 18S جین کے ذریعہ معمول بنایا گیا تھا اور 2−ΔΔCT کے ذریعہ شمار کیا گیا تھا۔ طریقہ

13. مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کی پیمائش

JC-1 (بیو ٹائم) کا استعمال کرتے ہوئے مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل (MMP) کا پتہ لگایا گیا۔ سب سے پہلے، JC-1 سٹیننگ ورکنگ سلوشن ہر 50 μL JC-1 (200X) کے لیے 8 ملی لیٹر الٹرا پیور پانی شامل کر کے حاصل کیا گیا، جسے مکمل طور پر تحلیل کرنے کے لیے پرتشدد طریقے سے گھمایا گیا، اور پھر 2 ملی لیٹر JC{{ 7}} سٹیننگ بفر (5X) شامل کیا گیا۔ دوسرا، چھ تاکوں والی پلیٹ کے خلیوں کو پی بی ایس میں دو بار دھویا گیا، اور پھر 1 ملی لیٹر JC-1 سٹیننگ ورکنگ سلوشن شامل کیا گیا اور 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر 20 منٹ کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ آخر میں، خلیات کو دوبارہ PBS سے دھویا گیا۔ ، اور سیل کلچر سلوشن کا 2 ملی لیٹر شامل کیا گیا۔ بصری تصاویر فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کی گئیں۔

Cistanche کیپسول

14. مائٹوکونڈریل ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کا پتہ لگانا

مائٹوکونڈریل آر او ایس جنریشن کو فلوروسینس مائکروسکوپی کے ذریعہ مائٹو ایس او ایکس ریڈ (تھرمو فشر سائنٹیفک) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ MitoSOX ریجنٹ ورکنگ سلوشن (20 mL, 5 μM) کو چھ تاکوں والی پلیٹوں میں خلیوں کو ڈھانپنے کے لیے شامل کیا گیا، جس کے بعد MitoSOX Red کے ساتھ 10 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر داغ دیا گیا۔ پھر، خلیوں کو پی بی ایس سے تین بار دھویا گیا، اور فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے بصری تصاویر حاصل کی گئیں۔

15. اے ٹی پی کا پتہ لگانا

ATP کی پیداوار کا تعین مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق Enhanced ATP Assay Kit (Beyotime, China, Cat. No: S0027) کے ذریعے کیا گیا تھا۔

16. شماریاتی تجزیہ

گراف پیڈ پرزم 7 (لا جولا، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے مقدار اور گراف کا تجزیہ کیا گیا اور اوسط ± معیاری غلطی کے طور پر پیش کیا گیا۔ متعدد گروپوں کے درمیان فرق کا تجزیہ تغیر کے تجزیہ (ANOVA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اور شماریاتی اہمیت P < 0.05 پر سیٹ کی گئی۔

بحث

اس مطالعہ میں، ہم نے رینل فبروسس میں FAO پر توجہ مرکوز کی، اور ہم نے FAO کے میٹابولک انزائمز (CPT1A) اور ٹرانسکرپشن ریگولیٹرز (PGC1، PPAR) کی نشاندہی کی، جس نے اشارہ کیا کہ Hypo-EVs فبروٹک کڈنی میں فیٹی ایسڈ میٹابولزم کی خرابی کو ریورس کر سکتے ہیں۔ /R مزید یہ کہ، ہم نے پایا کہ Hypo-EVs CPT1A-ثالثی FAO پر گہرا اثر ڈالتے ہیں، جو جزوی طور پر مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کے ضابطے سے منسوب ہے۔

حالیہ برسوں میں، مطالعات کی بڑھتی ہوئی تعداد نے CKD کے vivo ماڈلز میں MSC-EVs کے گردوں کے حفاظتی اثر کی اطلاع دی ہے اور دستیاب اعداد و شمار کی ایک چھوٹی سی مقدار نے یہ ظاہر کیا ہے کہ EVs اپنے والدین کے MSC کے مقابلے رینو پروٹیکشن میں بہتر یا یکساں طور پر موثر تھے [43] . CKD میں MSC-EVs کا علاج اپنے ابتدائی دور میں ہے، اور پیچیدہ طریقہ کار کو پوری طرح سے ظاہر نہیں کیا گیا ہے۔ AKI CKD کے اہم عوامل میں سے ایک ہے، جو گردوں کی آخری مرحلے کی بیماری کا باعث بنتا ہے [44]، اور گردوں کی I/R کی چوٹ AKI کے لیے ایک اہم عنصر ہے، اس لیے ہم ممکنہ مالیکیولر میکانزم کو ننگا کرنے کے لیے I/R حوصلہ افزائی فبروسس ماڈل کا انتخاب کرتے ہیں۔ MSC-EVs رینل فبروسس کو کیسے روکتا ہے۔

MSC-EVs کی کم پیداوار سیل فری علاج کی بڑے پیمانے پر پیداوار کے لیے ایک محدود عنصر ہے۔ اس طرح، EVs کی پیداوار بڑھانے کے لیے مختلف ممکنہ طریقوں کا مطالعہ کیا گیا ہے، بشمول MSC ثقافت کے حالات کی اصلاح، تین جہتی ایکسٹرا سیلولر میٹرکس پر مبنی اسکافولڈز، اور EVs کے بایوجنسیس کا ضابطہ [10]۔ ان میں سے، ایم ایس سی کی ہائپوکسک کنڈیشنگ مختلف بیماریوں میں ای وی کے علاج کے اثر کو بڑھانے کا ایک درست طریقہ ہے، جیسے ہڈیوں کے فریکچر کی شفا یابی [30]، ذیابیطس کے زخم کا علاج [29]، اور مایوکارڈیل مرمت [45]۔ ہمارا مطالعہ ایم ایس سی کے ذریعہ خفیہ کردہ ای وی کی ہائپوکسیا سے بڑھی ہوئی کارروائی کا ثبوت فراہم کرتا ہے۔ مزید برآں، ہم یہ بھی ظاہر کرتے ہیں کہ ہائپوکسک پیشگی مشروط MSC سے ماخوذ EVs میں I/R کی حوصلہ افزائی CKD میں Norm-EVs سے زیادہ اینٹی فبروسس اور رینل حفاظتی اثر ہوتا ہے۔ Norm-EVs کے مقابلے Hypo-EVs میں miRNAs کے ڈیٹا کو اچھی طرح سے رپورٹ کیا گیا ہے۔ متعدد مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ miRNA مواد بہت سی بیماریوں میں Hypo-EVs کے فائدہ مند اثرات کے لئے ذمہ دار تھا [30, 46]۔ Norm-EVs کے مقابلے میں، 215 miRNAs کو اپ ریگولیٹ کیا گیا اور 369 miRNAs کو ایڈیپوز سے ماخوذ Hypo-EVs میں کم کیا گیا، جو بنیادی طور پر سیل میٹابولزم، تفریق، اور TGF- فنکشن کو منظم کرتے ہیں [29]۔ تاہم، وہ طریقہ کار جس کے ذریعے Hypo-EVs میٹابولزم کے کام کو منظم کرتا ہے CKD میں بخوبی سمجھا جاتا ہے۔ ادب کا ایک بڑا حصہ اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ FAO گردے کے فبروسس میں کم ہوتا ہے اور اس کے روگجنن میں حصہ ڈالتا ہے [47]۔ رپورٹس سے مطابقت رکھتے ہوئے، ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ FAO سے متعلقہ کلیدی میٹابولک انزائمز (CPT1A، CPT2، اور ACOX2) اور FAO ٹرانسکرپشن ریگولیٹری عوامل (PPAR اور PGC1) کے جین ایکسپریشن میں I/R کی وجہ سے رینل فبروسس میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے۔

مزید یہ کہ لپڈ میٹابولزم کی بحالی رینل فبروسس کے علاج کے لیے ایک ممکنہ حکمت عملی ہے [48]۔ گردے کی نلیوں میں سی پی ٹی 1 اے کا اوور ایکسپریشن ایف اے او میں فنکشن کے حصول میں ایک اہم معاون ہے اور اس کے نتیجے میں مائٹوکونڈریل ڈیسفکشن، ٹی ای سی تفریق، اور سی کے ڈی جانوروں کے ماڈلز میں سوزش کو روک کر رینل فنکشن اور فائبروسس کے تحفظ میں مدد ملتی ہے [21]۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ Hypo-EVs I/R-حوصلہ افزائی فبروسس میں خراب شدہ FAO کو اچھی طرح سے ریورس کر سکتے ہیں، جس سے پتہ چلتا ہے کہ رینل فبروسس میں Hypo-EVs کے علاج کے اثرات جزوی طور پر FAO کو بحال کرنے کا نتیجہ ہیں۔

رینل پی پی اے آر سگنلنگ میں خرابی نے ایف اے او پاتھ وے کی سرگرمی کو کم کیا اور رینل فبروسس کی نشوونما کو بڑھایا [49]۔ phenofibrate کی انتظامیہ، ایک PPAR agonist، نے CKD [50, 51] میں فیٹی آکسیڈیشن کی خرابی اور tubulointerstitial fibrosis کو بحال کیا۔ پی جی سی-1 مائٹوکونڈریل ایف اے او کی صلاحیت کے ٹرانسکرپشن کنٹرول میں پی پی اے آر کا ایک کو ایکٹیویٹر ہے [39]۔ ہم نے تفتیش کی کہ آیا HypoEVs PPAR سگنلنگ کو بڑھا سکتے ہیں اور I/R چوٹ میں FAO کو بحال کر سکتے ہیں۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Norm-EVs اور Hypo-EVs کے درمیان PGC-1 اور PPAra کے اظہار میں کوئی واضح فرق نہیں تھا۔ لہذا، اس عمل کی موجودگی کو فروغ دینے والے دیگر عوامل ہونا ضروری ہے. مائٹوکونڈریا سیل کے لیے توانائی پیدا کرنے کے لیے FAO کا پاور ہاؤس ہے [52]۔ گردے کے فبروسس کے روگجنن میں مائٹوکونڈریل dysfunction اہم ہے [53]۔ مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کی بحالی گردے کی چوٹ کو روکنے اور گردے کی مرمت کو تیز کرنے کے لیے ایک امید افزا علاج کی حکمت عملی کے طور پر ابھری ہے [25]۔ حالیہ مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ MSC-EVs کا AKI کی وجہ سے ہونے والے مائٹوکونڈریل نقصان پر حفاظتی اثر پڑتا ہے، جو مائٹوکونڈریل فریگمنٹیشن کو کم کر کے، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کو معمول پر لا کر، اور mtDNA ڈیلیٹ کرنے اور mitochondrial OXPHOS کے نقائص کو تبدیل کر کے TECs کو توہین سے بچاتا ہے۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Hypo-EVs کے علاج سے غیر معمولی مائٹوکونڈریل مورفولوجی شفٹ، مائٹوکونڈریل ماس میں اضافہ، اور فائبروٹک گردوں میں مائٹوکونڈریل فنکشن میں اضافہ ہوا۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ FAO پر Hypo-EVs کے اثرات مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو منظم کرکے حاصل کیے جاسکتے ہیں۔

ہمارے مطالعے میں کچھ حدود ہیں۔ مثال کے طور پر، ہمارا ڈیٹا ظاہر کرتا ہے کہ Hypo-EVs کے I/R چوٹ والے چوہوں میں Norm-EVs کے مقابلے بہتر اینٹی فائبروٹک اثرات ہوتے ہیں۔ تاہم، ہم نے Norm-EVs اور Hypo-EVs کے درمیان مشمولات کے امتیازی اظہار کا تعین نہیں کیا اور اس مخصوص انداز کا بھی اندازہ نہیں کیا جس کے ذریعے Hypo-EVs اس مطالعے میں مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو متاثر کرتے ہیں۔

Cistanche کے فوائد

نتائج

خلاصہ طور پر، ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ Hypo-EVs CPT1Amediated FAO کو بحال کرکے رینل فبروسس کو نمایاں طور پر روکتے ہیں، اور یہ اثرات مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو ریگولیٹ کرکے حاصل کیے جاسکتے ہیں۔ ہمارے نتائج رینل فبروسس کے لیے سیل فری تھراپی کی ترقی کے لیے مزید مکینیکل مدد فراہم کرتے ہیں۔

حوالہ جات

1. Kalantar-Zadeh K, Jafar TH, Nitsch D, Neuen BL, Perkovic V. گردے کی دائمی بیماری۔ لینسیٹ 2021؛398(10302):786–802۔

2. Xie Y, Bowe B, Mokdad AH, Xian H, Yan Y, Li T, Maddukuri G, Tsai CY, Floyd T, Al-Aly Z. بیماری کے عالمی بوجھ کا تجزیہ عالمی، علاقائی اور قومی سطح پر روشنی ڈالتا ہے۔ 1990 سے 2016 تک گردے کی دائمی بیماری کے وبائی امراض کے رجحانات۔ کڈنی انٹ۔ 2018؛94(3):567–81۔

3. رونکو سی، بیلومو آر، کیلم جے اے۔ گردے کی شدید چوٹ۔ لینسیٹ 2019؛394(10212):1949–64۔

4. Zheng Z, Li C, Shao G, Li J, Xu K, Zhao Z, Zhang Z, Liu J, Wu H. Hippo-YAP/ MCP-1 ثالثی نلی نما خرابی کی مرمت کے بعد گردوں کی ناکامی کی بحالی میں سوزش کو فروغ دیتی ہے۔ اسکیمک AKI سیل ڈیتھ ڈس۔ 2021؛ 12(8):754۔

5. Yan H, Xu J, Xu Z, Yang B, Luo P, He Q. رینل فبروسس کے علاج کے اہداف کی وضاحت: روگجنن کی حیاتیات کا استحصال۔ بایومیڈ فارماکوتھر۔ 2021؛ 143:112115۔

6. شی زیڈ، وانگ کیو، ژانگ وائی، جیانگ ڈی۔ بون میرو میسینچیمل اسٹیم سیلز کے ذریعہ تیار کردہ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز رینل فبروسس کو کم کرتے ہیں، جزوی طور پر UUO چوہے کے ماڈل میں RhoA/ROCK کے راستے کو روک کر۔ سٹیم سیل وہاں رہتا ہے۔ 2020؛ 11(1):253۔

7. خولیا ایس، ہیریرا سانچیز ایم بی، سیڈرینو ایم، پاپاڈیمیٹریو ای، ٹپارو ایم، ڈیریگیبس ایم سی، برونو ایس، اینٹیکو ایف، بریزی ایم ایف، کوئزن بیری پی جے، کیموسی جی میسینچیمل اسٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز امیلوریٹک ایسڈ انڈیلیوریٹک ایسڈ میں نیوریسٹرو پیتھری۔ . فرنٹ سیل دیو بائیول۔ 2020؛ 8:188۔

8. Birtwistle L، Chen XM، Pollock C. Mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز گردوں کی چوٹ سے بچاؤ کے لیے۔ Int J Mol Sci. 2021؛ 22(12):6596۔

9. ہوانگ وائی، یانگ ایل میسینچیمل اسٹیم سیلز اور گردے کی بیماریوں کے خلاف تھراپی میں ایکسٹرا سیلولر ویسکلز۔ سٹیم سیل وہاں رہتا ہے۔ 2021؛12(1):219۔

10. Phan J, Kumar P, Hao D, Gao K, Farmer D, Wang A. انجینئرنگ mesenchymal اسٹیم سیلز کو بہتر بنانے کے لیے ان کی exosome افادیت اور سیل فری تھراپی کے لیے پیداوار۔ جے ایکسٹرا سیل ویسیکلز۔ 2018؛ 7(1):1522236۔

11. Bister N، Pistono C، Huremagic B، Jolkkonen J، Giugno R، Malm T. Hypoxia اور extracellular vesicles: طریقوں، vesicular cargo، and functions پر ایک جائزہ۔ جے ایکسٹرا سیل ویسیکلز۔ 2020؛ 10(1): e12002۔

12. یانگ وائی، لی ای ایچ، یانگ زیڈ۔ ہائپوکسیا کنڈیشنڈ میسنچیمل اسٹیم سیل ٹشو ری جنریشن ایپلی کیشن میں۔ ٹشو انجن پارٹ بی ریویو 2021۔

13. Ishiuchi N, Nakashima A, Doi S, Yoshida K, Maeda S, Kanai R, Yamada Y, Ike T, Doi T, Kato Y, Masaki T. Hypoxia کے لیے پیشگی شرط والے mesenchymal اسٹیم سیلز رینل فبروسس اور اسکیمیا ریپرفیوژن میں سوزش کو روکتے ہیں۔ چوہے سٹیم سیل وہاں رہتا ہے۔ 2020؛ 11(1):130۔

14. Panizo S, Martinez-Arias L, Alonso-Montes C, Cannata P, Martin-Carro B, Fernandez-Martin JL, Naves-Diaz M, Carrillo-Lopez N, Cannata-Andia JB۔ دائمی گردے کی بیماری میں فائبروسس: روگجنن اور نتائج۔ Int J Mol Sci. 2021؛22(1):408۔

15. ہمفریز بی ڈی۔ رینل فبروسس کے میکانزم۔ اینو ریو فزیول۔ 2018؛ 80:309–26۔

16. نستاس MV، Zeng-Brouwers J، Wygrecka M، Schaefer L. ٹارگٹنگ رینل فبروسس: میکانزم اور منشیات کی ترسیل کے نظام۔ Adv Drug Deliv Rev. 2018;129:295–307۔

17. Zhao X، Kwan JYY، Yip K، Liu PP، Liu FF. فبروسس تھراپی کے لئے میٹابولک ڈس ریگولیشن کو نشانہ بنانا۔ نیٹ ریو ڈرگ ڈسکو۔ 2020؛ 19(1):57–75۔

18. Qi R، Yang C. رینل نلی نما اپکلا خلیات: چوٹ کے بعد tubulointerstitial fibrosis کا نظرانداز ثالث۔ سیل ڈیتھ ڈس۔ 2018؛ 9(11):1126۔

19. گیون ایل ایس۔ رینل فبروسس: قریبی نلی کی اولین حیثیت۔ میٹرکس بائیول۔ 2018؛ 68:248–62۔

20. Kang HM, Ahn SH, Choi P, Ko YA, Han SH, Chinga F, Park AS, Tao J, Sharma K, Pullman J, Bottinger EP, Goldberg IJ, Susztak K. گردوں کے نلی نما اپکلا خلیوں میں خراب فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن گردے فبروسس کی نشوونما میں کلیدی کردار ہے۔ نیٹ میڈ. 2015؛21(1):37–46۔

21. Miguel V, Tituana J, Herrero JI, Herrero L, Serra D, Cuevas P, Barbas C, Puyol DR, Marquez-Exposito L, Ruiz-Ortega M, Castillo C, Sheng X, Susztak K, Ruiz-Canela M, Salas-Salvado J, Gonzalez MAM, Ortega S, Ramos R, Lamas S. Renal tubule Cpt1a اوور ایکسپریشن مائٹوکونڈریل ہومیوسٹاسس کو بحال کرکے گردے کے فبروسس سے بچاتا ہے۔ جے کلین انویسٹ۔ 2021;131(5):e140695۔

22. Luo Z, Wang Y, Xue M, Xia F, Zhu L, Li Y, Jia D, Chen S, Xu G, Lei Y. Astragaloside IV mitochondrial سرگرمی کو نشانہ بنانے کے ذریعے عمر رسیدہ چوہوں کے جگر میں چربی کے تحول کو بہتر بناتا ہے۔ جے سیل مول میڈ۔ 2021؛25(18):8863–76۔

23. بھارگوا پی، شنیل مین آر جی۔ گردے میں مائٹوکونڈریل انرجیٹکس۔ نیٹ ریو نیفرول۔ 2017؛ 13(10):629–46۔

24. جیانگ ایم، بائی ایم، لی جے، ژی وائی، سو ایس، جیا زیڈ، ژانگ اے مائٹوکونڈریل ڈیسفکشن اور اے کے آئی سے سی کے ڈی کی منتقلی۔ ایم جے فزیول رینل فزیول۔ 2020;319(6): F1105–16۔

25. Tang C, Cai J, Yin XM, Weinberg JM, Venkatachalam MA, Dong Z. گردے کی چوٹ اور مرمت میں Mitochondrial کوالٹی کنٹرول۔ نیٹ ریو نیفرول۔ 2021؛17(5):299–318۔

26. Zhao M, Liu S, Wang C, Wang Y, Wan M, Liu F, Gong M, Yuan Y, Chen Y, Cheng J, Lu Y, Liu J. Mesenchymal سٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر vesicles mitochondrial نقصان اور سوزش کو کم کرتے ہیں۔ مائٹوکونڈریل ڈی این اے کو مستحکم کرکے۔ ACS نینو۔ 2021؛15(1):1519–38۔

27. Cao H, Cheng Y, Gao H, Zhuang J, Zhang W, Bian Q, Wang F, Du Y, Li Z, Kong D, Ding D, Wang Y. mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر vesicles کی vivo ٹریکنگ میں بہتری رینل اسکیمیا ریپرفیوژن انجری میں مائٹوکونڈریل فنکشن۔ ACS نینو۔ 2020;14(4):4014–26۔

28. Gu D, Zou X, Ju G, Zhang G, Bao E, Zhu Y. Mesenchymal stromal خلیات اخذ کردہ extracellular vesicles miR-30 کے ذریعے mitochondrial fission کی روک تھام کے ذریعے شدید گردوں کی ischemia-reperfusion کی چوٹ کو کم کرتے ہیں۔ سٹیم سیلز انٹ 2016;2016:2093940۔

29. Wang J, Wu H, Peng Y, Zhao Y, Qin Y, Zhang Y, Xiao Z. ہائپوکسیا ایڈیپوز سٹیم سیل سے ماخوذ exosomes ذیابیطس کے زخم کے اعلیٰ معیار کے علاج کو فروغ دیتے ہیں جس میں PI3K/Akt راستوں کو چالو کرنا شامل ہے۔ جے نینو بائیو ٹیکنالوجی۔ 2021;19(1):202۔

30. Liu W, Li L, Rong Y, Qian D, Chen J, Zhou Z, Luo Y, Jiang D, Cheng L, Zhao S, Kong F, Wang J, Zhou Z, Xu T, Gong F, Huang Y, Gu C, Zhao X, Bai J, Wang F, Zhao W, Zhang L, Li X, Yin G, Fan J, Cai W. Hypoxic mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ exosomes miR کی منتقلی سے ہڈیوں کے فریکچر کی شفا کو فروغ دیتے ہیں{{2} } ایکٹا بائیو میٹر۔ 2020؛ 103:196-212۔

31. Rong Y, Zhang J, Jiang D, Ji C, Liu W, Wang J, Ge X, Tang P, Yu S, Cui W, Cai W. چھوٹے ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز کی ہائپوکسک پریٹ ٹریٹمنٹ اوسٹیو ارتھرائٹس میں کارٹلیج کی مرمت میں ثالثی کرکے miR{ {1}}a-5p. ایکٹا بائیو میٹر۔ 2021؛ 122:325-42۔

32. Yang C, Chen Z, Yu H, Liu X. Telomeric Silencing میں خلل پیدا کرنے والے کی روک تھام 1-جیسے PI3K/AKT-Mediated آکسیڈیٹیو تناؤ کو بلاک کرکے Reperfusion Injury-Induced Fibrosis. ڈرگ ڈیس ڈیول تھیر۔ 2019؛ 13:4375–87۔

33. Qian Y, Qian C, Xie K, Fan Q, Yan Y, Lu R, Wang L, Zhang M, Wang Q, Mou S, Dai H, Ni Z, Pang H, Gu L. P2X7 رسیپٹر سگنلنگ سوزش کو فروغ دیتا ہے۔ رینل پیرینچیمل خلیات جو اسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ میں مبتلا ہیں۔ سیل ڈیتھ ڈس۔ 2021؛12(1):132۔

34. Hu MC, Shi M, Gillings N, Flores B, Takahashi M, Kuro OM, Moe OW. ریکومبیننٹ الفا کلوتھو گردے کی شدید سے دائمی بیماری کے بڑھنے اور یوریمک کارڈیو مایوپیتھی کے لیے پروفیلیکٹک اور علاج معالجہ ہو سکتا ہے۔ کڈنی انٹ۔ 2017؛91(5):1104–14۔

35. Dubois V, Eeckhoute J, Lefebvre P, Staels B. انرجی ہومیوسٹاسس میں PPAR آئیسو ٹائپس کی الگ لیکن تکمیلی شراکت۔ جے کلن انویسٹیگ۔ 2017؛127(4):1202–14۔

36. Desvergne B، Wahli W. Peroxisome proliferator-activated receptors: میٹابولزم کا جوہری کنٹرول۔ Endocr Rev. 1999;20(5):649–88۔

37. Libby AE، Jones B، Lopez-Santiago I، Rowland E، Levi M. صحت اور بیماری کے دوران گردے میں نیوکلیئر ریسیپٹرز۔ Mol پہلوؤں میڈ. 2021؛ 78:100935۔

38. Bougarne N، Weyers B، Desmet SJ، Deckers J، Ray DW، Staels B، De Bosscher K. لپڈ میٹابولزم اور سوزش میں PPARalpha کے مالیکیولر ایکشن۔ Endocr Rev. 2018;39(5):760–802۔

39. ویگا آر بی، ہس جے ایم، کیلی ڈی پی۔ کو ایکٹیویٹر PGC-1 پیروکسوم پرولیفیریٹر ایکٹیویٹڈ ریسیپٹر الفا کے ساتھ جوہری جینز کے ٹرانسکرپشن کنٹرول میں تعاون کرتا ہے جو مائٹوکونڈریل فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن انزائمز کو انکوڈنگ کرتا ہے۔ مول سیل بائیول۔ 2000؛ 20(5):1868–76۔

40. Li SY، Susztak K. گردے کی بیماری میں پیروکسوم پرولیفریٹر ایکٹیویٹڈ ریسیپٹر گاما کوایکٹیویٹر 1alpha (PGC-1alpha) کا کردار۔ سیمین نیفرول۔ 2018؛38(2):121–6۔

41. Fransen M, Lismont C, Walton P. پیروکسوم مائٹوکونڈریا کنکشن: کیسے اور کیوں؟ Int J Mol Sci. 2017؛ 18(6):1126۔

42. Aparicio-Trejo OE, Avila-Rojas SH, Tapia E, Rojas-Morales P, Leon-Contreras JC, Martinez-Klimova E, Hernandez-Pando R, Sanchez-Lozada LG, Pedraza Chaverri J. دائمی خرابی اور mitochendrial mitochondrial bebe -آکسیڈیشن فولک ایسڈ کے ذریعے تجرباتی AKI سے CKD منتقلی کو فروغ دیتی ہے۔ فری ریڈک بائول میڈ۔ 2020؛ 154:18-32۔

43. ایرین اے، لرمین ایل او۔ گردے کی دائمی بیماری کے لیے Mesenchymal اسٹیم/اسٹرومل سیل سے ماخوذ ایکسٹرا سیلولر ویسکلز: کیا ہم ابھی تک وہاں ہیں؟ ہائی بلڈ پریشر. 2021؛78(2):261–9۔

44. Kurzhagen JT, Dellepiane S, Cantaluppi V, Rabb H. AKI: CKD کی ترقی اور ترقی کے لیے ایک تیزی سے تسلیم شدہ خطرے کا عنصر۔ جے نیفرول۔ 2020؛33(6):1171–87۔

45. Zhu J, Lu K, Zhang N, Zhao Y, Ma Q, Shen J, Lin Y, Xiang P, Tang Y, Hu X, Chen J, Zhu W, Webster KA, Wang J, Yu H. Myocardial reparative functions mesenchymal اسٹیم سیلز کے exosomes کو nSMase2- منحصر طریقے سے microRNA-210 کی منتقلی کے ذریعے خلیوں کے ہائپوکسیا کے علاج سے بڑھایا جاتا ہے۔ Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2018؛ 46(8):1659–70۔

46. ​​Zhu LP, Tian T, Wang JY, He JN, Chen T, Pan M, Xu L, Zhang HX, Qiu XT, Li CC, Wang KK, Shen H, Zhang GG, Bai YP. ہائپوکسیا سے پیدا شدہ mesenchymal اسٹیم سیل سے ماخوذ exosomes miR-125b کے ذریعے دل کی مرمت میں سہولت فراہم کرتے ہیں myocardial infarction میں سیل کی موت کی ثالثی روک تھام۔ تھرانوسٹکس۔ 2018؛ 8(22):6163–77۔

47. Xie YH, Xiao Y, Huang Q, Hu XF, Gong ZC, Du J. فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن کے فروغ کے ذریعے گردے کے فائبروسس میں CTRP6/AMPK کے راستے کا کردار۔ یور جے فارماکول۔ 2021؛ 892:173755۔

48. Chen YY، Chen XG، Zhang S. رینل فبروسس کے خلاف لپڈ میٹابولزم ماڈیولیشن کی نشہ آوری۔ ایکٹا فارماکول گناہ۔ 2021۔

49. چنگ کے ڈبلیو، لی ای کے، لی ایم کے، اوہ جی ٹی، یو بی پی، چنگ ایچ وائی۔ PPARalpha اور فیٹی ایسڈ آکسیڈیشن پاتھ وے کی خرابی عمر بڑھنے کے دوران رینل فبروسس کو بڑھا دیتی ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2018؛ 29(4):1223–37۔

50. ہان ایس ایچ، ملاگا-ڈیگیز ایل، چنگا ایف، کانگ ایچ ایم، تاؤ جے، ریڈی کے، سوزتک کے۔ گردوں کے نلی نما اپکلا خلیوں میں ایل کے بی 1 کو حذف کرنا میٹابولزم کو تبدیل کرکے سی کے ڈی کی طرف لے جاتا ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2016؛27(2):439–53۔

51. Jao TM, Nangaku M, Wu CH, Sugahara M, Saito H, Maekawa H, Ishimoto Y, Aoe M, Inoue T, Tanaka T, Staels B, Mori K, Inagi R. PPARalpha کی ATF6alpha کی کمی لیپوٹوکسائٹی سے متاثرہ ٹیوبولوئنٹر کو فروغ دیتی ہے۔ فائبروسس کڈنی انٹ۔ 2019؛95(3):577–89۔

52. Spinelli JB، Haigis MC. سیلولر میٹابولزم میں مائٹوکونڈریا کی کثیر جہتی شراکت۔ نیٹ سیل بائیول۔ 2018؛ 20(7):745–54۔

53. Chung KW, Dhillon P, Huang S, Sheng X, Shrestha R, Qiu C, Kaufman BA, Park J, Pei L, Baur J, Palmer M, Susztak K. Mitochondrial نقصان اور STING پاتھ وے کا فعال ہونا گردوں کی سوزش کا باعث بنتا ہے۔ اور فائبروسس. سیل میٹاب۔ 2019؛ 30(4):784–99۔

Zhumei Gao1,2, Chuyue Zhang1,3, Fei Peng1, Qianqian Chen1, Yinghua Zhao4, Liangmei Chen5, Xu Wang1 اور Xiangmei Chen1,2

1 شعبہ نیفرولوجی، چینی PLA جنرل ہسپتال کا پہلا میڈیکل سنٹر، چائنیز پیپلز لبریشن آرمی کا نیفرولوجی انسٹی ٹیوٹ، گردے کی بیماریوں کی اسٹیٹ کلیدی لیبارٹری، گردے کی بیماریوں کے لیے نیشنل کلینکل ریسرچ سینٹر، بیجنگ کلیدی لیبارٹری آف گردے کی بیماریوں کی تحقیق، بیجنگ، چین۔

2 شعبہ نیفروپیتھی، جیلن یونیورسٹی کا دوسرا ہسپتال، چانگچون، چین۔

3 کڈنی ریسرچ انسٹی ٹیوٹ، نیشنل کلینیکل ریسرچ سینٹر برائے جراثیمی اور نیفرولوجی ڈویژن، سچوان یونیورسٹی کا ویسٹ چائنا ہسپتال، چینگدو، چین۔

4 سکول آف کلینیکل میڈیسن، سنگھوا یونیورسٹی، بیجنگ، چین۔

5 شعبہ نیفرولوجی، جنان یونیورسٹی، گوانگزو، چین کا پہلا منسلک ہسپتال۔