Ibrutinib COVID-19 انفیکشن کے دوران دائمی لیمفوسائٹک لیوکیمیا کے مریضوں میں پیدائشی قوت مدافعت میں مداخلت کرتا ہے

سیویئر ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS-CoV-2) ایک نیا کورونا وائرس ہے جو دسمبر 2019 سے پوری دنیا میں پھیل رہا ہے جس کی وجہ سے کورونا وائرس بیماری 2019 (COVID-19) کی وبا پھیل رہی ہے۔ 1 COVID-19 کی خصوصیت اشتعال انگیز ردعمل کی شدید سرگرمی سے ہوتی ہے جو بیماری کی شدت اور موت کی ایک بڑی وجہ سمجھی جاتی ہے۔ COVID-19 انفیکشن کے خلاف مدافعتی ردعمل دو مراحل سے تشکیل پاتا ہے: انکیوبیشن کے مرحلے کے دوران، ایک انکولی مدافعتی ردعمل وائرس کے پھیلاؤ کو کنٹرول کر سکتا ہے اور بیماری کے بڑھنے کو روک سکتا ہے۔

قسم I انٹرفیرون (IFN-I) کی پیداوار اور عمل پیدائشی مدافعتی سیل اینٹی وائرل ردعمل کا بنیادی طریقہ کار ہے، اور یہ پیدائشی قوت مدافعت کے بنیادی تحقیقی شعبوں میں سے ایک ہے۔ میزبان کے ساتھ طویل مدتی تعاون کے دوران، وائرس نے میزبان کے ذریعے IFN-I کی پیداوار کو روکنے، چالاکی سے مدافعتی کلیئرنس سے بچنے، اور مسلسل انفیکشن قائم کرنے کے لیے ایک بہترین طریقہ کار تیار کیا ہے۔ یہ دریافت کرنا کہ کس طرح وائرس میزبان خلیے کے پیدائشی مدافعتی نظام پر حملہ کرتے ہیں، پیدائشی قوت مدافعت کے مالیکیولر میکانزم کو واضح کرنے میں مدد کرتا ہے، اور اینٹی وائرل منشیات کے اہداف کے مطالعہ کے لیے سراغ بھی فراہم کرتا ہے۔ ان کے علاوہ ہمیں اپنی قوت مدافعت کو بھی بہتر کرنے کی ضرورت ہے۔ صحت مند غذا کے علاوہ، ہم نے یہ بھی پایا کہ Cistanche قوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے۔ Cistanche polysaccharides مدافعتی ریگولیٹری کردار ادا کرنے کے لیے Cistanche کی مادی بنیاد ہیں۔ یہ لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دے سکتا ہے، جسم کے مدافعتی کام کو بہتر بنا سکتا ہے، اور مدافعتی خلیوں کو چالو کر سکتا ہے۔ ٹی سیل کی قوت مدافعت کو بڑھاتا ہے، اور ساتھ ہی ساتھ میکروفیجز کے فاگوسیٹوسس اور رطوبت کے افعال کو نمایاں طور پر بہتر بناتا ہے، اس طرح میکروفیجز کو چالو کرتا ہے اور مدافعتی سرگرمی کو منظم کرتا ہے۔

cistanche کیا ہے جاننے کے لیے کلک کریں۔

بعد کے مرحلے میں، ایک بے قابو اشتعال انگیز ردعمل بڑی طبی پیچیدگیوں کا تعین کر سکتا ہے۔ یہ ردعمل، جسے سائٹوکائن طوفان کے نام سے جانا جاتا ہے، T خلیات، قدرتی قاتل (NK) خلیات، monocytes/macrophages، neutrophils اور کسی بھی خلیے کے فعال ہونے سے پیدا ہوتا ہے جو خود وائرس میں داخل ہوتے ہیں یا وائرل پراڈکٹس کو انحطاط کرتے ہیں۔

سائٹوکائن طوفان کے دوران TNF-, IFN-, IL-1b, IL-6, IL-12, اور IL-17 انتہائی اہمیت کے حامل ہیں۔ 2 وائرل انفیکشن کے خلاف مدافعتی خلیوں کے غیر معمولی ردعمل کو دیکھتے ہوئے، شدید سانس کی تکلیف کا سنڈروم اس بیماری کا سب سے شدید اور مہلک واقعہ معلوم ہوتا ہے۔ کووڈ-19 ہیماٹولوجک خرابی کے مریضوں کے انتظام کے لیے کئی چیلنجز پیش کرتا ہے کیونکہ مریض COVID-19 کے لیے کمزور دکھائی دیتے ہیں۔ 3 دائمی لیمفوسیٹک لیوکیمیا (سی ایل ایل) مغربی ممالک میں سب سے عام لیوکیمیا ہے جو بنیادی طور پر بوڑھے لوگوں کو متاثر کرتا ہے۔ CLL مدافعتی نظام میں تبدیلیوں سے متعلق کئی طبی پیچیدگیوں کی خصوصیت ہے۔ سی ایل ایل کے مریضوں میں انفیکشن کے رجحان میں خود لیوکیمیا سے متعلق مدافعتی کمی اور علاج کی وجہ سے ہونے والے مجموعی امیونوسوپریشن کے نتائج دونوں شامل ہیں۔

اس ثبوت کو دیکھتے ہوئے، CLL کے مریض SARSCoV-2 انفیکشن کے لیے ایک اعلی خطرے والے گروپ کی نمائندگی کر سکتے ہیں اور جن مریضوں کو داخلے کی ضرورت ہے ان کا نتیجہ شرح اموات کے ساتھ خراب ہے۔ 4 جیسا کہ مختلف مطالعات سے اندازہ لگایا گیا ہے، BTK inhibitors (BTKi)، خاص طور پر ibrutinib، COVID-19 کے مریضوں میں پھیپھڑوں کی چوٹ کے خلاف ممکنہ حفاظتی اثرات مرتب کر سکتے ہیں، جو ہائپر انفلیمیٹری حالت کو بڑھاتے ہیں۔ 5,6 کچھ مختلف سابقہ ​​مطالعہ، خاص طور پر، یورپ میں کیے گئے ایک مشاہداتی مطالعہ نے ibrutinib یا BTKi کے ساتھ علاج کو COVID-19 کے دوران بہتر نتائج سے منسلک ایک عنصر کے طور پر شناخت کیا، جس میں CLL مریضوں کے مختصر ہسپتال میں داخل ہونا تھا۔

اس کے برعکس، امریکہ میں کی گئی اسی طرح کی ایک تحقیق نے اس مشاہدے کی تصدیق نہیں کی۔ اہمیت کی بات یہ ہے کہ زیادہ تر معاملات میں COVID-19 کے آغاز پر BTKi علاج میں خلل پڑا تھا۔ 4,7 اس لائن پر، اگرچہ شدید COVID-19 کے مریضوں میں اکالبروٹینیب کی آف لیبل انتظامیہ نے میزبان سوزش کے مدافعتی ردعمل میں کمی اور طبی نتائج کو بہتر کرنے کا مظاہرہ کیا تھا، ہسپتال میں داخل مریضوں میں ایکلابروٹینیب کے لیے CALAVI فیز II کا ٹرائل سانس کی علامات کے ساتھ زندہ رہنے والے اور سانس کی ناکامی سے پاک رہنے والے مریضوں کے تناسب کو بڑھانے کے بنیادی افادیت کے اختتامی نقطہ کو پورا نہیں کیا۔ 8 Ibrutinib پیدائشی اور انکولی قوت مدافعت دونوں پر ایک امیونو موڈیولیٹری عمل کا مظاہرہ کرتا ہے، Th1 پولرائزیشن کو برقرار رکھتا ہے اور ساتھ ہی، میکروفیجز کا ایک سوزش مخالف پولرائزیشن۔ 9,10۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم نے SARSCoV-2 کے انفیکشن کے دوران CLL مریضوں میں T خلیات اور مونوسائٹس کے ذریعے سائٹوکائن کے اخراج پر ibrutinib کے علاج کی ماڈیولیشن کا جائزہ لیا۔

مریضوں کے خون کے نمونے جو CLL کے لیے معیاری تشخیصی معیارات سے مماثل ہیں موڈینا ہسپتال، اٹلی کے ہیماتولوجی یونٹ سے مقامی ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کے منظور شدہ پروٹوکول کے ساتھ حاصل کیے گئے تھے اور ہیلسنکی کے اعلامیے کے اصولوں پر عمل پیرا تھے۔ پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیل (PBMC) کو الگ تھلگ کیا گیا تھا اور استعمال ہونے تک تازہ یا کریوپریزرڈ استعمال کیا گیا تھا۔ یہ مطالعہ CLL مریضوں سے الگ تھلگ نمونوں پر کیا گیا تھا جنہوں نے SARS-CoV-2 انفیکشن کا تجربہ نہیں کیا ہے۔ CLL مریضوں سے الگ تھلگ PBMC کا علاج ibrutinib یا گاڑی سے کیا گیا پھر SARS-CoV-2 Peptide Pools Protein S, S1, S plus, N, اور M (Miltenyi Biotech) کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی اور cytokine secretion assay (CSA) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ TNF- اور IFN- (Miltenyi Biotech)۔

مونوسائٹک اور ٹی سیل کی آبادی کی نشاندہی کرنے کے لیے، PBMC کو بالترتیب CD14 اور CD3 اینٹی باڈیز سے داغ دیا گیا تھا۔ سابق ویوو تجزیہ کے لیے، ibrutinib تھراپی کے 3 ماہ سے پہلے اور بعد میں CLL مریضوں سے PBMC کو جمع کر کے مائع نائٹروجن میں محفوظ کیا گیا تھا۔ PBMC کو SARS-CoV-2 Peptide Pools Protein کے ساتھ متحرک کیا گیا تھا اور monocytes یا T خلیات کی شناخت CD14 یا CD3 سے داغ لگا کر کی گئی تھی۔ TNF- اور IFN- کے سیکریشن کا تجزیہ CSA نے کیا۔ کنڈیشنڈ میڈیا کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے 1,600 rpm پر 10 منٹ کے لیے اکٹھا کیا گیا اور جانچ سے پہلے -20 ڈگری پر اسٹور کیا گیا۔ IL-6 کی سطحوں کا تعین انسانی انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کٹ کے ذریعے کیا گیا تھا جس میں اعلیٰ حساسیت (Abcam) تھی۔ تمام اعداد و شمار کو وسط کی اوسط ± معیاری غلطی کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔ شماریاتی اہمیت کا تعین کرنے کے لیے ٹی ٹیسٹ یا ولکوکسن مماثل جوڑے کے دستخط شدہ درجہ ٹیسٹ کا استعمال کیا گیا تھا (GraphPad v6, GraphPad Software Inc)۔

CLL عام طور پر مدافعتی نظام کی خرابی کی طرف سے خصوصیات ہے، جس میں دونوں پیدائشی اور انکولی مدافعتی ردعمل شامل ہیں. سب سے پہلے، ہم نے وٹرو میں SARS-CoV-2 انفیکشن کے علاج کے مریضوں سے جمع کردہ CLL میں انکولی اور پیدائشی قوت مدافعت کے اثرات کا جائزہ لیا۔ جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے، SARS-CoV-2 پیپٹائڈس کے ساتھ محرک کے بعد، ہم نے CD3 پلس T خلیات اور CD14 پلس مونوسائٹس دونوں کے ذریعہ سوزش کے حامی سائٹوکائنز کی ایک مضبوط اور نمایاں ریلیز کی پیمائش کی جس کی خصوصیت TNF- اور IFN- سراو (*P<0.05; **P<0.01). 

پھر، ہم نے تجزیہ کیا کہ کیا ibrutinib کے ساتھ علاج انفیکشن کے دوران مدافعتی ردعمل کو تبدیل کر سکتا ہے۔ Ibrutinib ٹی سیلز کو ٹارگٹ کرتا ہے Tec فیملی کناز، ITK کو ناقابل واپسی طور پر پابند کر کے، Th1 فینوٹائپ کی طرف جھکاؤ اور Th2 کی قوت مدافعت کو متاثر کرتا ہے۔ 9 ITK T-cell کی ثالثی کے مدافعتی ردعمل میں تنقیدی طور پر ملوث ہے اور اس کے اظہار کی کمی انفلوئنزا وائرس کی نقل کو متاثر کرتی ہے۔ 11 جیسا کہ شکل 1A اور B میں دکھایا گیا ہے اور آن لائن سپلیمنٹری فگر S1 ibrutinib نے TNF- رطوبت میں SARS-CoV-2 پیپٹائڈس (P=) کے ساتھ محرک کی موجودگی یا غیر موجودگی میں کوئی خاص تبدیلی کا تعین نہیں کیا۔ اہم نہیں [ns])، اس کے علاوہ، IFN- کی رطوبت، ibrutinib کے ذریعے تبدیل نہیں کی گئی تھی اور محرک کے بعد، ہمیں تھوڑا سا اضافہ ہوا (*P<0.05). Ibrutinib targets BTK in CLL-derived macrophages (nurse-like cells [NLC]) potentiating its immunosuppressive M2-skewed features. 10 BTK inhibition hampered the inflammatory response of NLC during A. fumigatus infection. 12 According to this evidence, we aimed to characterize the response of CLL monocytes to SARS-CoV-2 in the presence of ibrutinib. 

جیسا کہ اعداد و شمار 1C اور D اور آن لائن ضمنی اعداد و شمار S1 میں بتایا گیا ہے، ibrutinib نے SARS-CoV-2 (*P<0.05). IL-6 is one of the key mediators of inflammation and cytokine storm in COVID-19 patients. Therefore, we measured the amount of secreted IL-6 in conditioned media collected after stimulation with sSARS-CoV-2 peptides either in the presence or absence of ibrutinib treatment. As shown in Figure 1E, SARSCoV-2 caused an increased release of IL-6 in the conditioned media (*P<0.05) that was significantly mitigated by BTK inhibition (*P<0.05).

مزید برآں، ہم نے CLL مریضوں سے علاج سے پہلے اور 3 ماہ کے علاج کے بعد CD3 پلس اور CD14 پلس سیلز کے ردعمل کا SARS-CoV-2 سے موازنہ کرتے ہوئے سابق ویوو مماثل نمونوں کا تجزیہ کرنے کا منصوبہ بنایا۔ ہمارے ڈیٹا نے ibrutinib (شکل 2A اور B؛ آن لائن سپلیمنٹری فگر S2؛ P=ns) کے ساتھ علاج کے دوران CD3 کے ذریعہ proinflammatory cytokines کی رہائی میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دکھائی۔ اس کے برعکس، علاج کے پہلے 3 مہینوں کے دوران مانوسائٹس کے ذریعے TNF- اور IFN- کا سراو پہلے سے علاج کی حالت کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا (شکل 2C اور D؛ آن لائن سپلیمنٹری فگر S2؛ *P<0.05).

COVID-19 سے متاثرہ CLL مریضوں میں Ibrutinib کا علاج جاری رکھنا SARS-CoV-2 انفیکشن کی موجودگی میں علاج کو برقرار رکھنے یا بند کرنے کے موقع کے بارے میں ایک اہم طبی اور سائنسی بحث کو جنم دے رہا ہے۔ اس منظر نامے میں، کچھ خدشات اس ثبوت سے متعلق ہیں کہ ibrutinib کی مدافعتی سرگرمی کا تعلق علاج شدہ مریضوں میں ابتدائی طور پر ناگوار فنگل انفیکشن کی موجودگی سے ہے۔

اس وجہ سے، ibrutinib بند کرنے کا انتخاب ثانوی انفیکشن کے ممکنہ طور پر بڑھتے ہوئے خطرے اور کمزور مزاحیہ قوت مدافعت سے متعلق ہو سکتا ہے۔ 13 ہمارے نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ پھیپھڑوں کی چوٹ کو روکنے والے سائٹوکائن طوفان کو محدود کر کے CLL مریضوں میں ibrutinib کس طرح COVID{1}} پر حفاظتی اثرات مرتب کر سکتا ہے۔ ایک طرف، ibrutinib T-cell کے فنکشن کو متاثر کر سکتا ہے، T خلیات کو Th2- سے Th1 اور CD8 کے علاوہ cytotoxic آبادی کو بڑھا کر Th1 استثنیٰ کو فروغ دیتا ہے۔

دوسری طرف، BTK M1 پولرائزیشن کی طرف میکروفیج نسب کی وابستگی کے ضابطے میں شامل ہے اور ibrutinib ایک مدافعتی فینوٹائپ کی طرف بھی جھک سکتا ہے جو کہ کوکیی انفیکشن جیسے proinflammatory stimuli کے جواب میں بھی ہے۔ 12 BTK کی روک تھام، جس کا اظہار مائیلوڈ امیون سیلز کے ذریعے کیا جاتا ہے، NFkB پاتھ وے کے ذریعے سوزش والی سائٹوکائنز کی شمولیت کو متاثر کرتا ہے اور چوہوں میں BTK چھوٹے مداخلت کرنے والے RNA کے انٹراٹریچیل انجیکشن سے سیپسس سے متاثرہ شدید پھیپھڑوں کی چوٹ کے خلاف قوی تحفظ ملتا ہے، جس میں پلمونیٹری فلو میں نمایاں کمی واقع ہوتی ہے۔ اور پھیپھڑوں کے ؤتکوں میں نیوٹروفیل کی دراندازی۔ 14 انفلوئنزا اے انفیکشن کی ترتیب میں، ibrutinib سوزش کو کم کرتا ہے اور انفیکشن کے حل کو بہتر بناتا ہے۔ 15 ایسا لگتا ہے کہ ہمارے نتائج ibrutinib کے ایک حفاظتی اقدام کی بھرپور حمایت کرتے ہیں جس سے ڈرتے ہوئے سائٹوکائن طوفان کو کم کیا جائے اور اس تجویز کو برقرار رکھا جائے کہ حال ہی میں تجویز کردہ ان مریضوں میں قبل از وقت ibrutinib کو روکنے کی کوئی واضح وجوہات نہیں ہیں۔ 13

ان مشاہدات کی روشنی میں، چونکہ ایسا لگتا ہے کہ ابروٹینیب COVID-19-مخصوص مدافعتی ردعمل کو خراب نہیں کرتا ہے، اس لیے ہمارا مطالعہ CLL مریضوں میں BTKi کے جاری رہنے کے لیے ایک حیاتیاتی استدلال فراہم کرتا ہے جو COVID-19 کو تیار کرتے ہیں۔ قابل ذکر، COVID-19 کے خلاف BTKi کے ممکنہ استعمال کا ایک بہتر جائزہ کلینیکل ٹرائلز (clinicaltrials.gov شناخت کنندہ: NCT04439006, NCT04375397) میں زیر جائزہ ہے جو B-cell کی خرابی سے متاثر نہیں ہیں۔

حوالہ جات

1.Zhou P، Yang XL، Wang XG، et al. ممکنہ چمگادڑ کی اصل کے ایک نئے کورونا وائرس سے منسلک نمونیا کی وباء۔ فطرت 2020; 579(7798):270-273۔

2. Riva G، Castillo V، Tagliafico E، Trenti T، Comoli P، Luppi M. COVID-19: سائٹوکائن طوفان سے زیادہ۔ کریٹ کیئر۔ 2020؛ 24(1):549۔

3. پاسمونٹی ایف، کیٹانیو سی، آرکیینی ایل، وغیرہ۔ اٹلی میں ہیماتولوجیکل خرابی کے مریضوں میں COVID-19 کی شدت سے منسلک طبی خصوصیات اور خطرے کے عوامل: ایک سابقہ، کثیر مرکز، ہمہ گیر مطالعہ۔ لینسیٹ ہیماتول۔ 2020;7(10):e737-e745۔

4. Mato AR، Roeker LE، Lamanna N، et al. CLL والے مریضوں میں COVID-19 کے نتائج: ایک کثیر مرکز بین الاقوامی تجربہ۔ خون. 2020؛ 136(10):1134-1143۔

5.Treon SP, Castillo JJ, Skarbnik AP, et al. BTK inhibitor ibrutinib COVID-19-متاثرہ مریضوں میں پلمونری چوٹ سے حفاظت کر سکتا ہے۔ خون. 2020؛135(21):1912-1915۔

6. Thibaud S, Tremblay D, Bhalla S, Zimmerman B, Sigel K, Gabrilove J. دائمی لمفوسائٹک لیوکیمیا اور COVID-19 کے مریضوں میں بروٹن ٹائروسین کناز انحیبیٹرز کا حفاظتی کردار۔ بی آر جے ہیماتول۔ 2020;190(2):e73-e76.

7. Scarfò L، Chatzikonstantinou T، Rigolin GM، et al. دائمی لمفوسیٹک لیوکیمیا کے مریضوں میں COVID-19 کی شدت اور اموات: ERIC کا مشترکہ مطالعہ، CLL پر یورپی ریسرچ انیشیٹو، اور CLL کیمپس۔ سرطان خون. 2020؛34(9):2354-2363۔

8. Roschewski M, Lionakis MS, Sharman JP, et al. شدید COVID-19 والے مریضوں میں برٹن ٹائروسین کناز کی روک تھام۔ سائنس امیونول۔ 2020؛5(48):eabd0110۔

9. Dubovsky JA, Beckwith KA, Natarajan G, et al. Ibrutinib ITK کا ایک ناقابل واپسی مالیکیولر انابیٹر ہے جو T lymphocytes میں سلیکٹیو پریشر کو چلاتا ہے۔ خون. 2013؛122(15):2539-2549۔

10. Fiorcari S، Maffei R، Audrito V، et al. Ibrutinib دائمی لمفوسائٹک لیوکیمیا میں مونوسائٹ/میکروفیج آبادی کے کام کو تبدیل کرتا ہے۔ Oncotarget. 2016؛7(40):65968–65981۔

11. فین کے، جیا وائی، وانگ ایس، وغیرہ۔ انفلوئنزا اے وائرس اور ٹی سیلز کے درمیان تعامل میں Itk سگنلنگ کا کردار۔ جے جنرل ویرول۔ 2012;93(Pt 5):987- 997۔

12. Fiorcari S، Maffei R، Vallerini D، et al. BTK روکنا دائمی لمفوسائٹک لیوکیمیا کے مریضوں میں فنگل انفیکشن کے خلاف فطری ردعمل کو متاثر کرتا ہے۔ فرنٹ امیونول۔ 2020؛ 11:2158۔

13. Chong EA, Roeker LE, Shadman M, Davids MS, Schuster SJ, Mato AR. COVID-19 کے ساتھ کینسر کے مریضوں میں BTK روکنے والے: "فاتح وہی ہوگا جو اس افراتفری کو کنٹرول کرے گا" (نیپولین بوناپارٹ)۔ کلین کینسر ریس. 2020؛ 26(14):3514-3516۔

14. Zhou P، Ma B، Xu S، et al. برٹن کے ٹائروسین کناز کا دستک سیپسس کی وجہ سے پھیپھڑوں کی شدید چوٹ کے خلاف مضبوط تحفظ فراہم کرتا ہے۔ سیل بائیو کیم بائیوفیس۔ 2014؛70(2):1265-1275۔

15. فلورنس جے ایم، کروپا اے، بوشہری ایل ایم، ڈیوس ایس اے، میتھے ایم اے، کردوسکا اے کے۔ برٹن کے ٹائروسین کناز کو روکنا چوہوں کو مہلک انفلوئنزا کی وجہ سے پھیپھڑوں کی شدید چوٹ سے بچاتا ہے۔ Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol؟ 2018;315(1):L52-L58۔

For more information:1950477648nn@gmail.com