Cistanche سالسا سیل کلچر میں Phenylethanoid Glycoside Biosynthesis میں شامل ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ ریسپانسیو ESTs کی شناخت

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

جے چن وغیرہ

خلاصہ
ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ ایک موثر ابیوٹک ایلیسٹر ہے جو پودوں میں ثانوی میٹابولائٹ بائیو سنتھیسس کو آمادہ کر سکتا ہے۔ ہم دکھاتے ہیں کہ نمک برداشت کرنے والے دواؤں کے پودے کی سیل معطلی کی ثقافت میںCistancheسالسا، بایو ایکٹیو اجزاء کی پیداوارphenylethanoidglycosidesH2O2 علاج کے بعد (PeGs) میں اضافہ کیا گیا۔ PeGs سے متعلق جینوں کی شناخت کے لیے(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس H2O2 سے متاثر ہوا، ہم نے H2O2 ریسپانسیو جینز کی ایک سوپریشن سبٹریکٹیو ہائبرڈائزیشن لائبریری بنائی۔Cistancheسالساسیل لائن اور 105 اظہار شدہ ترتیب ٹیگز (ESTs) اور 85 جینوں کی نشاندہی کی۔ EST لائبریری کے فنکشنل تشریح اور جین آنٹولوجی کے تجزیوں میں مختلف تناؤ کے ردعمل، ثانوی میٹابولائٹس کے بایو سنتھیسز، اور ٹرانسکرپشنل ریگولیشن سے متعلق جینز دکھائے گئے۔ ان میں سے، ہم نے PeGs سے متعلق دو جینوں کی نشاندہی کی۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس پاتھ وے (4-کوماریٹ کوانزائم اے لیگیس اور سنامیٹ 4-ہائیڈروکسیلیس)، اور دو WRKY ٹائپ ٹرانسکرپشن عوامل۔ H2O2 علاج کے بعد منتخب جینوں کے تاثرات کا تجزیہ RT-qPCR نے کیا۔ PeG کی ابتدائی بڑھی ہوئی نقل(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)علاج کے بعد بایو سنتھیسز پاتھ وے جینز نے انکشاف کیا کہ H2O2 نے PeGs کی حوصلہ افزائی کی۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)اس کے کلیدی جینوں کے اپ ریگولیشن کے ذریعے بائیو سنتھیسس۔
اضافی مطلوبہ الفاظ: cinnamate-4-hydroxylase, 4-coumarate coenzyme A ligase, suppression subtractive hybridization.Cistancheسالسا. phenylethanoidglycosides.

تعارف

CistancheسالساHaloxylos ammodendrun کی جڑ پر ایک بارہماسی پودا پرجیوی ہے، اور یہ مغربی چین کے صحرائی علاقے میں اگتا ہے۔ صدیوں سے،Cistancheپرجاتیوں کو روایتی جڑی بوٹیوں کی دوائی کے طور پر استعمال کیا گیا ہے (Wang et al. 2012)۔ بایو ایکٹیو اجزاء ہیں۔phenylethanoidglycosides(PeGs) جس کا رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی کلیئرنس، تابکاری سے تحفظ، قوت مدافعت بڑھانے، اور عمر بڑھنے کے خلاف غیر معمولی اثر ہوتا ہے (Nan et al. 2013)۔ PeGs(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں حیاتیاتی ترکیبCistancheفینی لالینین (تصویر 1 سپلائی) سے شروع کیا جاتا ہے اور ترکیب شدہ کیفیک ایسڈ کو مزید گلائکوسلیٹ کیا جاتا ہے تاکہ مختلف PeGs بن سکیں۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)(Wang et al. 2012)۔ تین اہم PeGs(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)، echinacoside، acteoside، اور 2'-acetylacteoside، کو سب سے زیادہ فعال اجزاء سمجھا جاتا ہےCistanche(Kobayashi et al. 1984)۔ میں ان کے مواد کو بڑھانے کے لئےCistancheسیل کلچر، مختلف ایلیسیٹرز کا تجربہ کیا گیا ہے جن میں chitosan، putrescine، Ag plus، اور osmotic stress (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu and Cheng 2008) شامل ہیں۔ تاہم، PeGs میں شامل جین(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں حیاتیاتی ترکیبCistanche, بنیادی طور پر phenylalanine میٹابولزم پاتھ وے جینز کی شاذ و نادر ہی شناخت کی گئی ہے۔ Cistanche deserticola (Hu et al. 2011) میں حال ہی میں صرف ایک جین کو انکوڈنگ کرنے والے phenylalanine ammonia-lyase (PAL) کی شناخت کی گئی تھی۔ دیگر جینز کی انکوڈنگ، مثال کے طور پر، سنامیٹ-4-ہائیڈروکسیلیس (C4H)، جو کہ دار چینی کو کمریک ایسڈ میں تبدیل کر سکتا ہے، اور 4-کوماریٹ کوینزائم اے لیگیس (4CL)، جو لگنن اور فلاوانوائڈز کے لیے ایک ضروری جین ہے۔ biosyntheses، میں نہیں پایا گیا ہےCistanche.
ہم نے سیل کلچر کا استعمال کیا۔CistancheسالساPeGs کا مطالعہ کرنا(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس اور متعلقہ جین کا اظہار۔ ہم نے PeGs پر ایک موثر ایلیسٹر H2O2 کے اثر کی بھی چھان بین کی۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)حیاتیاتی ترکیب مزید برآں، PeGs میں شامل ابتدائی ذمہ دار جینوں کو تلاش کرنے کے لیے(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس، ہم نے H2O2-ریسپانسیو جینز کی cDNA لائبریری بنانے کے لیے Suppression subtractive hybridization (SSH) کیا۔

تصویر 1. H2O2 علاج کے بعد RT-qPCR کے ذریعے متعین جین کا رشتہ دار اظہار۔ CsWRKY1 - WRKY ٹرانسکرپشن فیکٹر (Contig07), CsC4H1 - cinnamate 4-hydroxylase (Contig09), Cs4CL1 - 4-کوماریٹ: ligase (Contig03)، CsHSP1 - ہیٹ شاک پروٹین 70 kDa (Contig 01)، اور CsSOD1 - سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (Contig16)۔ خلیوں کا 80 ug dm-3 H2O2 کے ساتھ مائع میڈیم میں 2 گھنٹے تک علاج کیا گیا اور اظہار کا موازنہ پانی سے علاج کیے گئے کنٹرول سے کیا گیا۔ مطلب پلس - تین حیاتیاتی تکرار کا SD؛ * - پی <0.05، **="" -="" پی=""><>

مواد اور طریقے

CS2001 سیل لائن کی پنکھڑیوں سے قائم کی گئی تھی۔Cistancheسالسا(CA Mey.) Neimenggu صوبے میں بیک جمع کیا گیا اور ذیلی ثقافت کی گئی۔ ثقافت کا طریقہ پہلے شائع شدہ پروٹوکول کی طرح تھا (Liu et al. 2007)۔ عام طور پر، ایک ٹھوس مراشیج اور اسکوگ (1962؛ MS) میڈیم ذیلی ثقافت کے لیے اور ایک مائع میڈیم پی جی کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس (یہ 30 g dm-3 گلوکوز اور 20 mg dm-3 indole-3-acetic acid کے ساتھ ضمیمہ شدہ MS میڈیم تھا)۔ H2O2 کے علاج کے لیے، 50 ± 0.2 g خلیات تیزی سے بڑھنے کے دورانیے میں، عام طور پر 20 سے 30 دن بعد انہیں ٹھوس میڈیم میں ذیلی کلچر کرنے کے بعد، 250 cm3 Erlenmeyer فلاسک میں 50 cm3 مائع میڈیم میں ٹیکہ لگایا جاتا تھا۔ اور مختلف H2O2 ارتکاز کے ساتھ یا اس کے بغیر اندھیرے میں مہذب۔ پی جیز(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)H2O2 کے ذریعہ 10 d انڈکشن کے بعد مواد کا تجزیہ اس طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا جو پہلے شائع ہوا تھا (Liu et al. 2007) میتھانول گریڈینٹ ایلیوشن کے ساتھ ریورس فیز ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی پر مبنی تھا۔

H2O2 کے علاج کے 2 گھنٹے بعد خلیات کو درمیانے درجے سے فلٹر پیپر کے ذریعے Büchner فنل کے ذریعے اکٹھا کیا گیا، اور پھر انہیں مائع نائٹروجن میں منجمد کر کے پاؤڈر بنا دیا گیا۔ سیل پاؤڈر کے ہر 2 جی کو 1 cm3 2-mercaptoethanol، 1 cm3 of 200 g dm{{10}} sarcosyl کے مرکب کا استعمال کرتے ہوئے لیس کیا گیا، اور GTC بفر کا 8 cm3 (5 M guanidinium isothiocyanate, 62.5 mM Tris-HCl, pH 8.0, 6.25 mM EDTA, pH 8.0, 5 mM thiourea, and 10 mM dithiothreitol)۔ اس کے بعد خلیوں کو برف پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، پھر 8.5 M CH3COOK، pH 6.0 کا 1/3 حجم شامل کیا گیا، اور خلیوں کو برف پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر 15 منٹ کے لیے 15 000 g پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ . کل آر این اے کو تیز کرنے کے لئے سپرنٹنٹ کو آئسوپروپینول کے مساوی حجم میں شامل کیا گیا تھا۔ مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق کل RNA کو RNeasy منی کٹ (کیجین، ہلڈن، USA) کے ذریعے مزید صاف کیا گیا۔ میسنجر آر این اے کو اولیگوٹیکس ایم آر این اے مڈی کٹ (کیجین) کا استعمال کرتے ہوئے کل آر این اے سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔

phenylethanoidglycosidesمیںCistancheسالسا

ایک SSH لائبریری کنٹرول سے تیار کی گئی تھی اور 30 ​​فیصد H2O2- نے سیل کے نمونے حاصل کیے 2 گھنٹے بعد PCR- سلیکٹ cDNA گھٹانے والی کٹ (کلونٹیک، ماؤنٹین ویو، USA)۔ لائبریری کی تعمیر کے لیے، جیل پیوریفیکیشن کٹ (کیجین) کا استعمال کرتے ہوئے مصنوعات کو الگ سے صاف کیا گیا اور ٹی اے کلوننگ کٹ (ٹیانجن، بیجنگ، چین) کا استعمال کرتے ہوئے پی جی ای ایم ویکٹر میں کلون کیا گیا۔ T7 پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے آزاد کلون کے پلازمیڈ کو الگ تھلگ اور ترتیب دیا گیا تھا۔ لائبریری سے تمام اظہار شدہ ترتیب ٹیگ (EST) تسلسل (ویکٹر کی ترتیب کو ہٹانے کے ساتھ) CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3) کے ساتھ کنٹیگ اسمبلی کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ ESTs کو کنٹیگس اور سنگلٹن میں گروپ کیا گیا تھا۔ وہ NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov) پر BLASTx پروگرام کا استعمال کرتے ہوئے ہومولوجی تلاش کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ اس کے بعد Blast2GO (http://www. blast2go.com) کا استعمال کرتے ہوئے جین آنٹولوجی (GO) اصطلاحات کے مطابق ترتیب کو تشریح، تجزیہ اور درجہ بندی کیا گیا۔
ریئل ٹائم مقداری پولیمریز چین ری ایکشن (RT-qPCR) بسٹن ایٹ ال کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ (2009)۔ سی ڈی این اے کے نمونے کل آر این اے کے 0.5 یو جی سے پرائم اسکرپٹ آر ٹی ریجنٹ کٹ (ٹاکارا، ڈالیان، چین) کا استعمال کرتے ہوئے ترکیب کیے گئے تھے۔ RT-qPCR کو SYBR Premix Ex Taq II اور ROX plus کٹس (Takara) کا استعمال کرتے ہوئے ABI 7300 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم (اپلائیڈ بایو سسٹم، فوسٹر سٹی، USA) پر تین تکنیکی نقلوں کے ساتھ کیا گیا۔ Takara کی فراہم کردہ ہدایات کے مطابق پرائمر آن لائن Primer3 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ڈیزائن کیے گئے تھے۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والے پرائمر ٹیبل 1 میں درج ہیں۔ جین کے تاثرات کو 18S RNA میں معمول بنایا گیا تھا، جس کا اظہار تمام نمونوں میں مستحکم تھا۔

R ورژن 3.1.1 کا استعمال کرتے ہوئے نتائج کا تجزیہ کیا گیا، طلباء کے ٹی ٹیسٹ سے اختلافات کی اہمیت کی تصدیق کی گئی۔

نتائج

ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ نے تینوں اہم PeGs کی بایو سنتھیسز کی حوصلہ افزائی کی۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میںCistancheسالسامعطلی والے خلیات (ٹیبل 1) لیکن خلیوں کی نشوونما پر کوئی واضح اثر نہیں ہوتا ہے (تصویر S2)۔ 10 ug dm-3 H2O2 ٹریٹمنٹ (P < 0.05)="" کے="" بعد="" echinacoside="" کے="" مواد="" میں="" پہلے="" ہی="" اضافہ="" ہوا،="" 20="" ug="" dm="" کے="" بعد="" زیادہ="" اضافہ="" ریکارڈ="" کیا="" گیا۔="" -3="" h2o2="" علاج="" (p=""><0.01)، اور="" سب="" سے="" زیادہ="" اضافہ="" 40،="" 80،="" اور="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" علاج="" کے="" بعد="" ہوا۔="" اسی="" طرح="" کے="" نتائج="" ایکٹیوسائیڈ="" کے="" لیے="" دکھائے="" گئے="" ہیں،="" لیکن="" اس="" کا="" مواد="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" علاج="" کے="" بعد="" عروج="" پر="" ہے۔="" 2'-acetylacteoside="" کی="" حیاتیاتی="" ترکیب="" h2o2="" علاج="" کے="" لیے="" کم="" حساس="" تھی۔="" اس="" کے="" مواد="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" (p=""><0.05) 40="" ug="" dm-3="" سے="" زیادہ="" h2o2="" ارتکاز="" پر="" تھا۔="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" علاج="" کے="" بعد،="" تینوں="" اہم="" pegs="" کی="">(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)کنٹرول پر نمایاں طور پر اضافہ ہوا (P < 0.01)۔="" لہذا،="" اس="" ارتکاز="" کو="" مزید="" تجربات="" میں="" استعمال="" کیا="">
ابتدائی ریسپانسیو جینز کے لیے افزودہ لائبریری بنانے کے لیے جو H2O2 کے ذریعے اپ ریگولیٹ ہوتے ہیں، ہم نے cDNA کا استعمال کیاCistancheسالسامعطلی کے خلیوں کا علاج 80 ug dm-3 H2O2 کے ساتھ 2 گھنٹے کے لیے کیا گیا۔ SSH لائبریری میں سنگل پاس سیکوینسنگ 129 ریکومبیننٹ کلون نے ویکٹر سیکوینس کے اخراج کے بعد 105 صاف ESTs حاصل کیے۔ یہ واضح ESTs CAP3 کے ذریعہ اسمبلی کے لئے استعمال کیے گئے تھے ، اور 18 کونٹیگس اور 67 سنگل ٹن تیار کیے گئے تھے (ٹیبل 2)۔ اس طرح، اس لائبریری میں 85 جین الگ تھلگ تھے۔ کلین 105 ESTs کی اوسط لمبائی 527 bp تھی، جو تسلسل کی مماثلت پر مبنی فنکشنل درجہ بندی کے لیے کافی ہے۔

phenylethanoidglycosidesمیںCistancheسالسا

لائبریری میں حاصل کردہ تمام 85 جین BLASTx کے ذریعے GenBank کے غیر فالتو پروٹین ڈیٹا بیس کے خلاف ترتیب کی مماثلت کے لیے بازیافت کیے گئے تھے (E-value Less than or equal to 0.001)۔ اکیس جینز نے ڈیٹا بیس میں کوئی ہٹ نہیں دکھایا، ہو سکتا ہے کہ وہ مخصوص ہوں۔Cistancheسالسا. BLASThits کے ساتھ نتائج مزید GO اور KEGG پاتھ وے کی افزودگی کے تجزیوں کے لیے Blast2GO سافٹ ویئر میں درآمد کیے گئے تھے۔ BLAST ہٹ کے ساتھ 64 جینوں میں سے، 50 کو دوسری پرجاتیوں کے ہم جنس جینوں کی تفصیل کے مطابق بیان کیا گیا تھا۔ تشریح شدہ جینوں کا نام BLAST ہٹ کی تفصیل کے مطابق رکھا گیا تھا۔ GO تجزیہ (تصویر 3 سپلائی) سے پتہ چلتا ہے کہ ان 50 جینوں میں، محرکات کے ردعمل میں 14 جینز شامل تھے، اور میٹابولک عمل سے متعلق 30 سے ​​زیادہ جینز (ٹیبلز 1 اور 2)۔ ان جینوں میں سے، دو PeG بائیو سنتھیسس پاتھ وے جین ہومولوگس کو توقع کے مطابق الگ تھلگ کر دیا گیا: 4-کوماریٹ کوئنزائم اے لیگیس (جس کا نام Cs4CL1: Contig03 ہے) اور cinnamate 4-hydroxylase (جس کا نام CsC4H1: Contig14 ہے)۔ مزید، RT-qPCR کو H2O2 علاج کے بعد لائبریری سے جینوں کے حوصلہ افزائی اظہار کی تصدیق کے لیے انجام دیا گیا۔

اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ SSH لائبریری سے شناخت شدہ ضروری جین H2O2 علاج کے لیے جوابدہ تھے، دو PeGs کے تاثرات(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)بایو سنتھیسس پاتھ وے سے متعلق جینز (Cs4CL1، CsC4H1)، دو ROS انڈسڈ جینز (CsSOD1: Contig 16، CsHSP1: CISTH099)، اور ایک WRKY فیملی ٹرانسکرپشن فیکٹر جیسا جین (CsWRKY1: Contig CR-07 کے بعد علاج کیا گیا) H2O2 کے ساتھ (تصویر 1)۔ CsC4H1، Cs4CL1، CsSOD1، اور CsWRKY1 اظہار کو بالترتیب H2O2 کے 2 گھنٹے بعد 15- گنا، 3- گنا، 45- گنا، اور 4- گنا سے زیادہ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ علاج. H2O2 علاج کے بعد CsHSP1 کے اظہار کو صرف 1.8 گنا تبدیل کیا گیا تھا۔
H2O2 علاج کے بعد CsWRKY1، CsC4H1، اور Cs4CL1 کے تاثرات کا ٹائم کورس RT-qPCR (تصویر 2) کے ذریعے مزید تجزیہ کیا گیا۔ CsC4H1 اور Cs4CL1 اظہارات میں بہت زیادہ اضافہ ہوا (بالترتیب 80- گنا اور 50- گنا سے زیادہ) 16-h علاج کے بعد اور پھر 32 گھنٹے کے بعد نیچے ریگولیٹ کیا گیا۔ CsWRKY1 کے اظہار کو 4 گھنٹے پر 20- گنا سے زیادہ ریگولیٹ کیا گیا اور پھر اس کے بعد 8 گھنٹے سے کم ہوا (تصویر 2)۔

تصویر 2. 80 ug dm-3 H2O2 کے ساتھ علاج کے بعد مختلف اوقات میں CsWRKY1 (A)، CsC4H1 (B) اور Cs4CL1 (C) کا رشتہ دار اظہار۔ تاثرات کو ایک کنٹرول میں معمول بنایا گیا تھا۔ (پانی کے ساتھ علاج). مطلب پلس - تین حیاتیاتی تکرار کا SD؛ * - پی < 0.05،="" **="" -="" پی=""><>

بحث

ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ ایک معروف پلانٹ ایلیسٹر ہے جو پودوں پر مختلف اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔ ROS کی طرح، یہ سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز، کیٹالیس، پیرو آکسیڈیز وغیرہ پر مشتمل ROS سکیوینجنگ سسٹم کو آمادہ کر سکتا ہے، اور یہ نمک، آسموٹک، اور پانی کی کمی کے بہاو سگنل کے طور پر کام کرتا ہے۔

دباؤ (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014)۔ یہ تجویز کیا گیا تھا کہ پودوں میں H2O2 جنریشن کے ساتھ ثانوی میٹابولائٹ بائیو سنتھیس بھی شامل ہےCistancheسالساسیل ثقافت. جیسا کہ توقع کی گئی ہے، ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ PeGs(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں biosynthesisCistanche سالساH2O2 علاج (ٹیبل 1) کے بعد سیل کلچر کی حوصلہ افزائی کی گئی۔ تین اہم PeGs کا مواد(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)H2O2 کے علاج کے بعد اضافہ ہوا جو PeGs بایو سنتھیسس میں اس کے اہم کردار کی نشاندہی کرتا ہے۔ SSH لائبریری میں افزودہ جینز نے مزید PeGs پر اس کا اثر تجویز کیا۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں biosynthesis انڈکشنCistanche سالسا.

بہت سے مشہور H2O2-ردعمل والے جین، جیسے ascorbate peroxidase (CISTH069، Karyotou and Donaldson 2005)، h-quinone oxidoreductase (CISTH125، Bello، et al. 2001)، CsSOD1، CsHSP1 (Al.2001) اور بیماری کے خلاف مزاحمت کے جوابی جینز (Contig10, Nanda, et al. 2010), SSH لائبریری میں افزودہ کیے گئے تھے (ٹیبل 3، ٹیبل 2 سپلائی)۔ H2O2 علاج کے بعد حوصلہ افزائی اظہار کے ساتھ ان میں سے کچھ مخصوص ROS ریسپانسیو جینز کی مزید تصدیق RT-qPCR (تصویر 1 اور 2) سے ہوئی جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہاں ایک قابل SSH لائبریری تعمیر کی گئی تھی۔ اس لائبریری میں دو PeG بائیو سنتھیسس پاتھ وے جینز، CsC4H1 اور Cs4CL1 بھی پائے گئے اور یہ دونوں جین ایکسپریشنز H2O2 کے علاج سے وقت پر منحصر طریقے سے پیدا ہوئے (تصویر 2)۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ H2O2 علاج نے PeGs کی حوصلہ افزائی کی۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)PAL پاتھ وے جینز کے ریگولیشن کے ذریعے جینیاتی سطح پر بایو سنتھیسز۔ تاہم، SSH لائبریری میں PAL اور دیگر بہاو PeGs بائیو سنتھیسس جینز (Wang et al. 2012) کی شناخت نہیں کی گئی تھی۔ اس کی وجہ یہ ہو سکتی ہے کہ لائبریری کو کافی ترتیب نہیں دیا گیا ہے۔ CsC4H1 اور Cs4CL1 حوصلہ افزائی اظہار اور H2O2 علاج کے بعد بڑھے ہوئے PeGs بائیو سنتھیسس کے درمیان تعلق کو مزید تجزیہ کے ذریعے واضح کیا جانا چاہیے۔

H2O2 کے علاج سے متاثر PAL پاتھ وے جین کے علاوہ، دو WRKY فیملی ٹرانسکرپشن فیکٹرز (CsWRKY1, CsWRKY2) SSH لائبریری (ٹیبل 3 اور ٹیبل 2 سپلائی) میں پائے گئے، اور ایک CsWRKY1 حوصلہ افزائی اظہار کی تصدیق PCR-RTq سے ہوئی۔ . اس کا اظہار دو PAL پاتھ وے جین، Cs4CL1 اور CsC4H1 (تصویر 2) کے اظہار سے پہلے H2O2 علاج کے لیے جوابدہ تھا۔ پچھلے مطالعات سے، چاول میں کچھ WRKY ٹرانسکرپشن عوامل اور PAL پاتھ وے جینز کا مشترکہ اظہار دیکھا گیا ہے (Gupta et al. 2012)۔ مزید برآں، PAL جین کے اظہار کو OsWRKY03 اوور ایکسپریشن اتپریورتی (Liu et al. 2005) میں ریگولیٹ کیا جاتا ہے۔ مذکورہ بالا دو WRKY فیملی ٹرانسکرپشن عوامل بھی PeGs میں شامل ہو سکتے ہیں۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں حیاتیاتی ترکیبCistancheسالسا. دلچسپ بات یہ ہے کہ پانی کی کمی سے متعلق ESTs (CISTH067, CISTH064) SSH لائبریری میں پائے گئے، جو یہ تجویز کر سکتے ہیں کہ H2O2 کا علاج پانی کی کمی سے متعلق ردعمل والے جینوں کے اظہار سے تھا۔Cistancheسالساجیسا کہ دوسرے پودوں میں مشاہدہ کیا گیا ہے (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013)۔ ایک گبریلین (GA) سگنلنگ سے متعلق جین، gibberellin ریسیپٹر gid1b-like (CISTH092) کی شناخت SSH لائبریری میں کی گئی تھی جس کا مطلب یہ ہے کہ GA سگنلنگ اور H2O2 علاج کا تعلق ہے۔Cistancheسالساجو کہ جو میں بھی رپورٹ کیا گیا تھا (Bahin et al. 2011)۔ تاہم، اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے کہ آیا ان جینز کا تعلق PeGs سے ہے۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)حیاتیاتی ترکیب اوپر بیان کردہ جینوں کے علاوہ، یہاں تعمیر کردہ SSH لائبریری بھی BLAST ہٹ کے ساتھ یا اس کے بغیر جین پیش کرتی ہے۔ یہ C. سالسا پر H2O2 اثر کے بارے میں ہماری سمجھ کو بہتر بناتا ہے اور سب سے پہلے PeGs بائیو سنتھیسس میں شامل اس کے جینز کی معلومات فراہم کرتا ہے۔

آخر میں، ہم نے PeGs پر H2O2 کے اثر کا اندازہ کیا۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں شامل کرناCistancheسالساسیل ثقافت. SSH لائبریری H2O2 علاج کے بعد تعمیر کی گئی تھی، اور RT-qPCR کے ذریعے منتخب جینوں کے اظہار کی تصدیق کی گئی تھی۔ دو PeG بایو سنتھیسس پاتھ وے سے متعلق جینز اور دیگر H2O2-ریسپانسیو جینز کی نشاندہی کی گئی۔ یہ نتائج H2O2-حوصلہ افزائی PeGs کے بارے میں ہماری سمجھ کو بڑھا دیں گے۔(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)میں حیاتیاتی ترکیبCistancheسالساسالماتی سطح تک، جین کی ہیرا پھیری کے لیے معلومات فراہم کرتا ہے۔CistancheسالساPeGs کو بہتر بنانے کے لیے سیل کلچرز(phenylethanoidگلائکوسائیڈز)پیداوار

منجانب: 'Cistanche سالسا سیل کلچر میں phenylethanoid glycoside biosynthesis میں شامل ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ ریسپانسیو ESTs کی شناخت' بذریعہجے چن وغیرہ۔

--- بائیولوجیا پلانٹرم 59 (4): 695-700، 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

حوالہ جات

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: رد عمل والی آکسیجن پرجاتیوں اور ہارمونل سگنلنگ پاتھ ویز کے درمیان کراسسٹالک جو میں اناج کے غیر فعال ہونے کو منظم کرتا ہے۔ - پلانٹ سیل ماحول. 34: 980-993، 2011۔
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: ہیٹ شاک پروٹین (Hsp) سے پیدا ہونے والی ری ایکٹیو آکسیجن کی انواع Hsp70 کی پیداوار اور Hsp میں حصہ ڈالتی ہیں{{1} آرٹیمیا فرانسسکانا میں روگجنک وائبریوس کے خلاف ثالثی حفاظتی استثنیٰ۔ --.دیو کمپ امیونول۔ 46: 470-479، 2014۔
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H کا اظہار: HeLa خلیات میں quinone oxidoreductase 1  ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ اور ترقی کے مرحلے کا کردار۔ --.جے بائل n. کیم 276: 44379-44384، 2001۔
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR اور RT-qPCR کی معیاری کاری۔ --.جنیٹ n. انج. بائیو ٹیکنالوجی خبر 29: 40-43، 2009۔
چینگ، ایکس وائی، وی، ٹی، گو، بی، این، آئی ڈبلیو، لیو، سی زیڈ:Cistanchedeserticola سیل معطلی ثقافتیں:phenylethanoidglycosidesبایو سنتھیسس اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔ - پروسیس بائیو کیم۔ 40: 3119-3124، 2005۔
چینگ، XY، Zhou، HY، Cui، X.، Ni، W.، Liu، CZ کی بہتریphenylethanoidglycosidesمیں حیاتیاتی ترکیبCistancheڈیزرٹیکولا سیل سسپینشن کلچرز بذریعہ چیٹوسن ایلیسٹر۔ - J. بائیو ٹیکنالوجی 121: 253-260، 2006۔
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisic acid پانی کے دباؤ کی وجہ سے مونگ پھلی میں ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کی پیداوار میں ثالثی کرتا ہے۔ --.بائول پودا. 57: 555-558، 2013۔
گپتا، ایس کے، را، آئی اے کے، کنور، ایس ایس، چاند، ڈی، سنگھ، این کے، شرما، ٹی آر: واحد فنکشنل بلاسٹ ریزسٹنس جین Pi54 چاول میں ایک پیچیدہ دفاعی طریقہ کار کو متحرک کرتا ہے۔ - J. exp. بوٹ 63: 757-772، 2012۔
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: سے فینیلالینین امونیا لیز جین کی سالماتی خصوصیاتCistanchedeserticola --.مول n. بائول Rep. 38: 3741-3750، 2011۔
کار، آر کے: پانی کے تناؤ پر پودوں کے ردعمل: رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کا کردار۔ - پلانٹ سگنل سلوک 6: 1741-1745، 2011۔
کیریوٹو، کے.، ڈونلڈسن، آر پی: ایسکوربیٹ پیرو آکسیڈیس، گلائی آکسیسومل جھلیوں میں ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کی صفائی کرنے والا۔ --.قوس ہ n. بائیو کیم۔ بائیوفیس۔ 434: 248-257، 2005۔
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: کے اجزاء پر مطالعہcistancheہربا ہے. 4. 2 نئے فینیلپروپینائڈ گلائکوسائیڈز، سیستانوسائیڈ-سی، اور سیستانوسائیڈ-ڈی کی تنہائی اور ساخت۔ --.کیم n. فارم۔ بیل. 32: 3880-3885، 1984۔

لیو، سی زیڈ، چینگ، ایکس وائی: کا اضافہphenylethanoidglycosidesکی سیل ثقافتوں میں بایو سنتھیسسCistancheآسموٹک تناؤ کے ذریعہ deserticola۔ - پلانٹ سیل ریپ. 27: 357-362، 2008۔
لیو، JY، Guo، ZG، Zeng، ZL: کی بہتر جمعphenylethanoidglycosidesکی معطلی ثقافت کو پیشگی کھانا کھلانے کی طرف سےCistancheسالسا. - بائیو کیم۔ انج. J. 33: 88-93، 2007۔
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03، ایک چاول ٹرانسکرپشن ایکٹیویٹر جو OsNPR1 کے اوپر والے دفاعی سگنلنگ پاتھ وے میں کام کرتا ہے۔ - سیل ریس. 15: 593-603، 2005۔
مراشیگ، ٹی.، سکوگ، ایف.: تمباکو کے ٹشو کلچر کے ساتھ تیز رفتار ترقی اور بائیوسیز کے لیے ایک نظر ثانی شدہ میڈیم۔ - فزیول پودا. 15: 473-497، 1962۔
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:فینی لیتھانائیڈglycosidesکے تنوں سے سوزش کی سرگرمیوں کے ساتھCistancheصحرائی تاریم میں مہذب۔ - Fitoterapia 89: 167-174، 2013۔
نندا، اے کے، اینڈریو، ای، مارینو، ڈی، پاؤلی، این، ڈاننڈ، سی: پودوں اور مائکروجنزم کے ابتدائی تعامل کے دوران ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز۔ - J. انٹیگر. پلانٹ بائیول۔ 52: 195-204، 2010۔
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: کی بہتر پیداوارphenylethanoid glycosidesکی سیل کلچر کو پیشگی کھانا کھلانے کے ذریعےCistanchedeserticola - پروسیس بائیو کیم۔ 40: 3480-3484، 2005a۔
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: کی بہتر پیداوارphenylethanoidglycosidesکی طرف سےCistancheڈیزرٹیکولا سیلز سیفٹر رائزر کے ساتھ اندرونی لوپ ایئر لفٹ بائیوریکٹر میں کلچر کیے گئے ہیں۔ - انزائم مائکروبیول۔ ٹیک 36: 982-988، 2005b۔
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Castilleja tenuiflora کی جڑوں سے ان وٹرو ہاسٹوریم کی اناٹومیکل اور ہسٹو کیمیکل خصوصیات۔ --.بائول پودا. 58: 164-168، 2014۔
ستیہراج، جی، سری نواسن، ایس، کم، وائی جے، لی، او آر، پروین، ایس، بلوسامی، ایس آر، خورولراگچا، اے، یانگ، ڈی سی: ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کی آمیزش سے نمک کی برداشت میں اضافہ ہوتا ہے جس سے دفاع سے متعلق پروٹین کو چالو کیا جاتا ہے۔ Panax ginseng CA میئر۔ --.مول n. بائول Rep. 41: 3761-3771، 2014۔
شمٹ، آر، میولیٹ، ڈی، ہبرٹن، ایچ ایم، اوباٹا، ٹی، ہوفگن، آر، فرنی، اے آر، فِسہن، جے، سیگنڈو، بی ایس، گائیڈرونی، ای، شیپرز، جے ایچ ایم، مولر-روبر، B.: نمکین ERF1 نمک کے تناؤ کے ابتدائی ردعمل کے دوران رد عمل آکسیجن پرجاتیوں پر منحصر سگنلنگ کو منظم کرتا ہے۔
چاول میں - پلانٹ سیل 25: 2115-2131، 2013۔
وانگ، ٹی، ژانگ، XY، Xie، WY:Cistanchedeserticola YC Ma، "صحرا Ginseng": ایک جائزہ. - عامر جے ٹھوڑی میڈ. 40: 1123-1141، 2012۔
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS نمک کے دباؤ کے تحت چاول کے پتوں کی چادروں میں ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ جمع کرنے کا نمونہ۔ --.بائول پودا. 50: 469-472، 2006۔
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 خشک سالی کے تناؤ کے ردعمل کو منظم کرتا ہے اور نیلی روشنی سے متاثرہ سٹومیٹل اوپننگ Arabidopsis میں رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کے جمع ہونے کو روکنا۔ - پلانٹ فزیول۔ 162: 1030-1041، 2013۔