کیوں Retinoic Acid Receptor Responder1 Glomerular بیماریوں کی نشوونما کو فروغ دے سکتا ہے؟

Retinoic Acid Receptor Responder1 نیوکلیئر فیکٹر-kB سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے گلومیرولر بیماریوں کی نشوونما کو فروغ دیتا ہے۔

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

کٹجا مولر-ہیک بارتھ 1,2، دینا ڈباگھی 1،2، ایمینوئل چارن 1،2، سونیا زامبرانو 1،2، گیلیم جینوو 1،3، زیڈان لی 1،3، اینیکا ورنرسن4، مارک لال5 اور جاکو پیٹرکا 1،2

1 KI/AZ انٹیگریٹڈ کارڈیو میٹابولک سنٹر، Karolinska Institutet Karolinska University Hospital, Huddinge, Stockholm, Sweden; 2 شعبہ لیبارٹری میڈیسن، ڈویژن آف پیتھالوجی، Karolinska Institutet Karolinska University Hospital, Huddinge, Stockholm, Sweden; 3 شعبہ طب Huddinge, Karolinska Institutet Karolinska University Hospital, Huddinge, Stockholm, Sweden; 4 شعبہ کلینیکل سائنسز، انٹروینشن اینڈ ٹیکنالوجی، ڈویژن آف رینل میڈیسن، کیرولنسکا انسٹی ٹیوٹ، اسٹاک ہوم، سویڈن؛ اور 5 بایو سائنس رینل، ریسرچ، اینڈ ارلی ڈیولپمنٹ کارڈیو ویسکولر، رینل اینڈ میٹابولزم (سی وی آر ایم)، آر اینڈ ڈی بائیو فارماسیوٹیکل، آسٹرا زینیکا، گوتھنبرگ، سویڈن

کڈنی انٹرنیشنل (2021) 100، 809–823؛ https://doi.org/10.1016/ j.kint.2021.05.036

کاپی رائٹ ª 2021، بین الاقوامی سوسائٹی آف نیفرولوجی۔ Elsevier Inc کے ذریعہ شائع کیا گیا ہے۔ یہ CC BY لائسنس کے تحت ایک کھلا رسائی والا مضمون ہے۔

خط و کتابت: Jaakko Patrakka، شعبہ لیبارٹری میڈیسن، ڈویژن آف پیتھالوجی، Karolinska Institutet، Blickagången 6, SE-141 57 Huddinge, Sweden۔ ای میل: jaakko.patrakka@ki.se موصول 27 جولائی 2020؛ نظر ثانی شدہ 11 مئی 2021؛ 20 مئی 2021 کو قبول کیا گیا؛ 18 جون 2021 کو آن لائن شائع ہوا۔

مطلوبہ الفاظ: گلومیرولرendothelial سیل; NF-kB; پوڈو سائیٹ; نایاب 1

زیادہ تر میں سوزش کے راستے چالو ہوتے ہیں۔glomerular بیماریوںلیکن ان کو گردے کے ٹشو میں چلانے والے مالیکیولر میکانزم کو کم معلوم ہے۔ ہم نے شناخت کی۔retinoic ایسڈریسیپٹر ریسپنڈر 1 (Rarres1) صحت مند گردوں میں انتہائی پوڈوسیٹ سے بھرپور پروٹین کے طور پر۔ پوڈوسیٹ مخصوص ناک آؤٹ جانوروں کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ گلوومیرولس فلٹریشن رکاوٹ کی معمول کی نشوونما یا دیکھ بھال کے لئے Rarres1 کی ضرورت نہیں تھی اور اس نے گلوومیرولونفرائٹس کے ماڈل میں گردے کی بیماری کے نتائج کو تبدیل نہیں کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہم نے آئی جی اے اور ذیابیطس گردے کی بیماری کے ساتھ ساتھ اے این سی اے سے وابستہ ویسکولائٹس میں گلوومیرولر اور پیریٹیوبلر کیپلیری اینڈوتھیلیل خلیوں میں Rarres1 اظہار کی شمولیت کا پتہ لگایا۔ عوامی طور پر دستیاب آر این اے ڈیٹا سیٹس کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ Rarres1 اظہار کی شمولیت گردے کی دائمی بیماریوں میں ایک عام سالماتی طریقہ کار تھا۔ ایک مشروط دستک ان ماؤس لائن، خاص طور پر اینڈوتھیلیل خلیوں میں Rarres1 کو زیادہ متاثر کرتی ہے، گردے کی کوئی واضح فینوٹائپ نہیں دکھاتی ہے۔ تاہم، اوور ایکسپریشن نے گلوومیرولونفرائٹس کے ماڈل میں گردے کے نقصان کے بڑھنے کو فروغ دیا۔ اس کے مطابق، مشروط ناک آؤٹ چوہوں، جن میں اینڈوتھیلیل سیلز میں Rarres1 کی کمی تھی، بیماری کے ماڈل میں جزوی طور پر محفوظ تھے۔ میکانکی طور پر، Rarres1 نے ٹرانسکرپشن فیکٹر نیوکلیئر فیکٹر-kB سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے رسیپٹر ٹائروسین کناز Axl کو چالو کرکے سوزش اور فائبروسس کو فروغ دیا۔ اس طرح، endothelial خلیات میں Rarres1 اظہار کی شمولیت انسانی glomerulopathies میں ایک مروجہ مالیکیولر میکانزم ہے اور ایسا لگتا ہے کہ نیوکلیئر فیکٹر-kB سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے سوزش اور fifibrosis کو چلانے میں اس کا روگجنک کردار ہے۔

ترجمہی بیان

ہم نے اپ گریجشن کی نشاندہی کی۔retinoic ایسڈعام انسانی گلوومیرولوپیتھیوں کے اینڈوتھیلیل سیلز (ECs) میں ریسیپٹر ریسپانڈر پروٹین 1 (Rarres1)۔ ایسا لگتا ہے کہ شامل کرنے میں روگجنک کردار ہے۔glomerular بیماریجیسا کہ glomerulonephritis کی بڑھوتری (i) خاص طور پر ECs میں Rarres1 کو اوور ایکسپریس کرنے والے ماؤس میں بڑھ گئی تھی، اور (ii) EC- مخصوص Rarres1 ناک آؤٹ لائن میں بہتر ہوئی تھی۔ Rarres1 گردے کی بیماریوں میں مائکرو واسکولر نقصان کا پتہ لگانے کے لیے بائیو مارکر ہو سکتا ہے اور ممکنہ طور پر ایک نیا علاج کا ہدف ہے۔

گلومیرولر بیماریعمل اختتامی مرحلے گردوں کی بیماری کی ایک بڑی وجہ ہیں۔ ذیابیطس نیفروپیتھی (DN) عالمی سطح پر آخری مرحلے کے گردوں کی بیماری کی سب سے عام وجہ ہے، جب کہ IgA nephropathy (IgAN) سب سے زیادہ مروجہ بنیادی گلوومیرولونفرائٹس (GN) ہے۔ فیشن اس میں گلوومیرولر اینڈوتھیلیل سیلز (جی ای سیز) کی ایکٹیویشن، ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کی توسیع، میسنجیئل سیلز کا پھیلاؤ، پوڈوکیٹ کو نقصان، اور آخر کار پوڈو سائیٹ کا نقصان شامل ہے۔

انسانی گردوں کی بایڈپسیوں میں عالمی ٹرانسکرپٹ پروفائلنگ اسٹڈیز نے گلوومیرولر عوارض میں ایک مضبوط اشتعال انگیز دستخط ظاہر کیا ہے، 4–7 اور ماؤس اسٹڈیز نے ثابت کیا ہے کہ نیوکلیئر فیکٹر-kB (NF-kB) کی ایکٹیویشن اور ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر-b (TGF-b) سگنلنگ پاتھ ویز بیماری کے بڑھنے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ 8,9 اہم بات یہ ہے کہ NF-kB پاتھ وے کی فارماسیوٹیکل ٹارگٹنگ کے جانوروں کے ماڈلز میں رینو پروٹیکٹو اثرات ہوتے ہیں، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہ راستہ علاج کے لیے ایک ممکنہ ہدف ہے۔glomerular بیماریوں.10,11 پوڈو سائیٹس میں، ہم نے حال ہی میں G پروٹین کے ساتھ مل کر ریسیپٹر کلاس C گروپ 5 ممبر B کی شناخت NF-kB – ثالثی سوزشی ردعمل کے ماڈیولر کے طور پر کی۔ . درحقیقت، NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن GECs میں انسانی گردے کی بہت سی بیماریوں میں پائی جاتی ہے۔ 13,14 GECs میں NF-kB ایکٹیویشن میں شامل مالیکیولر میکانزم کو بخوبی سمجھا جاتا ہے۔

Retinoic Acid Receptor Responder1 کی ترقی کو فروغ دے سکتا ہے۔گلومیرولر بیماریاں

اس مطالعے میں، ہم نے انسان کے مالیکیولر دستخطوں کا تجزیہ کیا۔glomerular بیماریوںاور کی شمولیت کی نشاندہی کی۔retinoic ایسڈGECs میں ریسیپٹر ریسپانڈر 1 (Rarres1) اظہار DN، IgAN، اور اینٹی نیوٹروفیل سائٹوپلاسمک آٹوانٹی باڈی (ANCA) سے وابستہ ویسکولائٹس میں ایک عام سالماتی دستخط کے طور پر۔ اینڈوتھیلیل سیلز (ECs) میں Rarres1 اظہار کے ایکٹیویشن/غیر فعال ہونے کے ساتھ ماؤس لائنوں میں ہونے والے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ GN کے ماؤس ماڈل میں اس شمولیت کا روگجنک کردار ہے۔ میکانکی طور پر، Rarres1 ریسیپٹر ٹائروسین کناز Axl کو متحرک کرتا ہے، جس کے نتیجے میں NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کیا جاتا ہے۔ ہم Rarres1 کو مائکرو واسکولر نقصان کے ایک نئے بائیو مارکر کے طور پر تجویز کرتے ہیں جو اس کے لیے ایک پرکشش علاج کا ہدف ہو سکتا ہے۔glomerular بیماریاشتعال انگیز ردعمل کو ماڈیول کرکے عمل۔

تصویر 1|(جاری ہے) (ج) بیک اسپن تجزیہ جو مورین گردے کے ٹشو کے RNAseq ڈیٹا میں خاص طور پر پوڈوکیٹس (PD) میں Rarres1 اظہار دکھاتا ہے (Woroniecka et al.6 سے ڈیٹا)۔ (d) انسانی نمونوں سے الگ تھلگ ٹب اور گلوم میں Rarres1 کی متعلقہ mRNA کی سطح۔ ٹب کے مقابلے میں Glom میں Rarres1 اظہار کی گنا تبدیلی کے طور پر ڈیٹا کا اظہار کیا جاتا ہے۔ *P < 0.05="" بمقابلہ="" ٹب۔="" (e)="" عام="" مضامین="" سے="" انسانی="" گلوومیرولی="" میں="" پوڈوکیٹس="" کے="" ذریعہ="" rarres1="" اظہار="" (سبز)="" کی="" نمائندہ="" کنفوکل="" fl="" فلوروسینٹ="" مائکروسکوپک="" امیج۔="" (f)="" نمائندہ="" کنفوکل="" مائکروسکوپک="" امیجز="" جو="" انسانی="" مضامین="" سے="" پوڈوسائٹس="" میں="" rarres1="" کا="" اظہار="" دکھاتی="" ہیں۔="" ویمنٹن="" کو="" بڑے="" عمل="" کے="" لیے="" مارکر="" کے="" طور="" پر="" اور="" نیفرین="" کو="" پوڈوسیٹس="" کے="" پاؤں="" کے="" عمل="" کے="" لیے="" مارکر="" کے="" طور="" پر="" استعمال="" کیا="" جاتا="" تھا۔="" cd31="" کو="" اینڈوتھیلیل="" سیلوں="" کے="" مارکر="" کے="" طور="" پر="" استعمال="" کیا="" جاتا="" تھا،="" اور="" ⍺-ہموار="" پٹھوں="" کے="" ایکٹین="" (⍺sma)="" کو="" میسنجیل="" سیل="" مارکر="" کے="" طور="" پر="" استعمال="" کیا="" جاتا="" تھا۔="" بارز="50/10" ملی="" میٹر۔="" ڈیٹا="" کا="" مطلب="" ±="" sem="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ="" 2="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

طریقے

آر این اے نکالنا اور ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن

Glomeruli کو الگ تھلگ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔ 15 RNA کو TRIzol reagent (Invitrogen) اور RNeasy Kit (Qiagen Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ iScript cDNA Synthesis Kit کا استعمال cDNA بنانے کے لیے کیا گیا تھا۔ مقداری پولیمریز چین کا رد عمل CFX96 ٹچ ریئل ٹائم پی سی آر ڈیٹیکشن سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix (Bio-Rad) کے ساتھ کیا گیا۔ استعمال شدہ پرائمر ضمنی جدول S1 میں درج ہیں۔ متعلقہ اظہار کی سطحوں کا حساب 2-DDCT طریقہ استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

سیل کلچر

Human podocytes were cultured as described.16 JetPEI transfection reagent (Polyplus-transfection SA) was used for stable transfection of pRP[Exp]-CMV>hRARRES1[ORF011242]:T2A: Bsd – plasmid (VectorBuilder Inc. Clones puromycin (Merck KGaA) کے انتخاب کے تحت پھیل گیا ہے۔ Axl/Rarres1 کے لیے مختصر مداخلت کرنے والے RNA (siRNA) کی منتقلی Origenes سے siRNA کی منتقلی C3M کے ساتھ کی گئی تھی۔ siRNA کے بعد JetPEI ٹرانسفیکشن ری ایجنٹ (Polyplus-transfection SA) کے ساتھ TGF-b1 محرکات (کلچر میڈیم میں 10 ng/ml) کے ساتھ پیچیدگی۔ l)۔

کیوں Retinoic Acid Receptor Responder1 ترقی کو فروغ دے سکتا ہے۔گلومیرولر بیماریاں؟

مغربی دھبہ

خلیوں کو RIPA lysis بفر کے ساتھ لیس کیا گیا تھا جو پروٹیز / فاسفیٹیس انہیبیشن کاک ٹیلز (روچے) کے ذریعہ ضمیمہ کیا گیا تھا۔ جوہری حصوں سے پروٹین کو نیوکلیئر ایکسٹریکٹ کٹ (ایکٹو موٹف یورپ) کا استعمال کرتے ہوئے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ لائسیٹس کو 4 فیصد -12 فیصد ٹریس-گلائسین سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ – پولی کریلامائڈ جیل (انویٹروجن) پر الگ کیا گیا تھا اور پولی وینیلائڈین ڈائی فلورائڈ جھلیوں (بائیو ریڈ) میں منتقل کیا گیا تھا۔ جھلیوں کو 5 فیصد بوائین سیرم البومین (مرک) کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا۔ پرائمری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیشن راتوں رات کی گئی تھی (ضمنی جدول S2 میں اینٹی باڈیز)۔ ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس کنججٹیڈ سیکنڈری اینٹی باڈیز اور کلیریٹی ویسٹرن ای سی ایل سبسٹریٹ (بائیو ریڈ) سگنلز کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ مغربی دھبے کے تجزیے کم از کم دو بار کیے گئے۔

سیٹو ہائبرڈائزیشن میں آر این اے

آر این اے اسکوپ کے تجزیے مینوفیکچرر کے پروٹوکول (ACD) کے مطابق پیرافین میں ایمبیڈڈ انسانی گردوں میں کیے گئے تھے۔ استعمال شدہ تحقیقات NPHS1 - کیٹ نمبر 416071-C2، PECAM1 - کیٹ نمبر 487381-C3، اور RARRES1 - نیوکلیوٹائڈز کو نشانہ بنانے والی اپنی مرضی کے مطابق تحقیقات تھیں۔ }}۔

گردے کی چوٹ کا اندازہ

ماؤس البومین ELISA Kit (Albuwell M؛ Ethos Biosciences) اور QuantiChrom Creatinine Assay Kit (BioAssay Systems) کا استعمال کرتے ہوئے پیشاب کی البومین اور کریٹینائن کے تناسب کی جانچ کی گئی۔ گردے کے ٹشوز کو 10 فیصد غیر جانبدار بفرڈ فارملین محلول میں طے کیا گیا تھا اور پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا، اس کے بعد کٹنگ اور متواتر ایسڈ-شِف سٹیننگ۔ الیکٹران مائکروسکوپی 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائڈ میں طے شدہ نمونوں میں کی گئی تھی۔

Immunostainings

پیرافین ایمبیڈڈ ٹشوز کو 24 گھنٹے کے لیے فارملین میں رکھا گیا تھا۔ پانچ مائیکرو میٹر کے حصوں کو یا تو Tris-ethylenediamine tetraacetic acid buffer (10 mM Tris base، 1 mM ethylenediaminetetraacetic ایسڈ بفر سلوشن، 005 فیصد درمیان میں ڈیپرافینائز کیا گیا تھا اور مائکروویو سے علاج کیا گیا تھا۔ 20، پی ایچ 9۔0) یا سوڈیم سائٹریٹ بفر (10 ایم ایم سوڈیم سائٹریٹ، 0.05 فیصد ٹوین 20، پی ایچ 6.0)، اس کے بعد 0.3 فیصد ٹریٹن ایکس-100 کے ساتھ پارمیبلائزیشن اور بلاک 10 فیصد نارمل گوٹ سیرم، 3 فیصد ہائیڈروجن پیرو آکسیڈیز، اور ویکٹر بلاکنگ کٹ (ویکٹر لیبارٹریز) کے ساتھ۔ سلائیڈز ڈی اے بی پیرو آکسیڈیز (ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز) سبسٹریٹ کٹ، 3،30 -ڈامینوبینزائڈائن (ویکٹر لیبارٹریز) کا استعمال کرتے ہوئے تیار کی گئیں۔

منجمد حصوں کے لیے، ایسیٹون سے طے شدہ حصوں کو 0.1 فیصد ٹوین 20 کے ساتھ پارمیبلائز کیا گیا تھا اور 10 فیصد نارمل گوٹ سیرم کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا۔ استعمال شدہ بنیادی اینٹی باڈیز ضمنی جدول S1 میں درج ہیں۔ امیونو فلوروسینس کے لئے الیکسا فلور سیکنڈری اینٹی باڈیز مالیکیولر پروبس (لائف ٹیکنالوجیز) سے حاصل کی گئیں۔ Leica SP8 Confocal Microscope (Leica Microsystems) کا استعمال کرتے ہوئے تصاویر حاصل کی گئیں۔

انسانی نمونے۔

کیرولنسکا یونیورسٹی ہسپتال (اسٹاک ہوم، سویڈن) سے رینل بایڈپسی حاصل کی گئی۔ ان افراد کے گردے کے صحت مند کھمبوں سے کنٹرول کے نمونے حاصل کیے گئے تھے جنہوں نے ٹیومر نیفریکٹومیز کرائے تھے۔ مقامی اخلاقی کمیٹی نے مطالعہ کی منظوری دی (منظوری نمبر 2010/579-31/1، اسٹاک ہوم، سویڈن)۔

بمقابلہ کنٹرول (Ctrl.) یا ***P < {{0}}۔{13}}01="" بمقابلہ="" سی-منفی="" کنٹرول="" (سکرابل)="" (rarres1,="" n="6" ;sirarres1,="" n="4)۔" (c)="" نمائندہ="" ویسٹرن="" بلاٹ="" دستاویزات="" اور="" خلاصہ="" شدہ="" ڈیٹا="" جو="" 10="" ng/ml="" tgf-b1="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" جانے="" والے="" پوڈوسیٹس="" کے="" الگ="" تھلگ="" جوہری="" حصوں="" میں="" pp65="" کے="" رشتہ="" دار="" پروٹین="" کی="" سطح="" کو="" ظاہر="" کرتا="" ہے۔="" **p="">< 0۔="" )="" (n="3)۔" (d)="" نمائندہ="" ویسٹرن="" بلاٹ="" دستاویزات="" اور="" خلاصہ="" شدہ="" ڈیٹا="" جو="" 10="" ng/ml="" tgf-b1="" ±3="" mmol/l="" r428،="" n="2" کے="" ساتھ="" علاج="" کیے="" جانے="" والے="" پوڈوسیٹس="" کے="" الگ="" تھلگ="" جوہری="" حصوں="" میں="" pp65="" کے="" رشتہ="" دار="" پروٹین="" کی="" سطح="" کو="" ظاہر="" کرتا="" ہے۔="" (e)="" نمائندہ="" مغربی="" دھبہ="" ظاہر="" کرتا="" ہے="" کہ="" rarres1="" کا="" زیادہ="" اظہار="" axl="" کو="" جزوی="" طور="" پر="" متحرک="" کرتا="" ہے۔="" *p=""><0.05 (n="2)۔" (f)="" podocytes="" میں="" emt="" سے="" متعلقہ="" جینز="" کی="" متعلقہ="" mrna="" لیولز="" اوور="" ایکسپریسنگ="" rarres1="" (rarres1)="" یا="" کنٹرول="" podocytes="" (ctrl.)="" axl="" (siaxl)="" کے="" لیے="" sirna="" کے="" ساتھ="" منتقلی،="" si-negative="" control="" (scramble)،="" ##p=""><0.01, ##="" #p=""><0.001 بمقابلہ="" سکریبل،="" n="3،" یا="" 3="" mmol/l="" r428="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" ##p=""><0.01، ###p=""><0.001 بمقابلہ="" ctrl.،="" **p=""><0.01، ***p=""><0.001 بمقابلہ="" rarres1،="" *p=""><0.05 بمقابلہ="" rarres1،="" n="4۔" ڈیٹا="" کو="" ±="" sd="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" طالب="" علم="" کے="" ٹی="" ٹیسٹ="" کو="" 2="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" ut،="" لا="">

تصویر 3|پوڈوسیٹ مخصوص Rarres1 ناک آؤٹ (CreD/Rarres1flfl/flfl) چوہوں کا قیام۔ (a) مشروط ناک آؤٹ چوہوں کی جنریشن جس میں Rarres1 کو خاص طور پر کری-لوکس پی ری کنبینیشن سسٹم کا استعمال کرکے پوڈوسائٹس میں ختم کیا جاتا ہے۔ Exon 3 کو NPHS2-Cre-mediated recombination پر حذف کر دیا گیا ہے۔ (b) جین ٹائپنگ کی تصدیق 4 ہفتوں کی عمر میں دم کی تیاری اور پولیمریز چین کے رد عمل سے ہوئی۔ (جاری ہے)

تصویر 3|(جاری ہے) (c) نمائندہ مغربی دھبہ جو پوڈوسیٹ مخصوص Rarres1 ناک آؤٹ (Creþ/Rarres1flfl/flfl) چوہوں سے الگ تھلگ گلوومیرولی میں Rarres1 کے کم ہونے والے اظہار کو ظاہر کرتا ہے۔ (d) Rarres1 کا پوڈوسائٹ مخصوص نقصان نیفروٹوکسک سیرم (NTS) کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہوں میں البومینوریا کی سطح کو متاثر نہیں کرتا ہے جیسا کہ چوہوں کے مختلف گروپوں میں پیشاب البومین سے کریٹینائن کے تناسب سے تجزیہ کیا گیا ہے (NTS-ctrl., n {{1{{) 15}}}–7؛ NTS-Rarres1_cKO، n - 7)۔ (e) چوہوں کے مختلف گروہوں میں عام گلوومیرولر ڈھانچے کی تبدیلیوں کو ظاہر کرنے والے فوٹو مائیکروگرافس اور مقدار۔ گلومیرولر گھاووں کی نشاندہی متواتر ایسڈ – شیف – داغ والے حصوں میں کی گئی تھی۔ #P < 0۔{25}}001="" بمقابلہ="" غیر="" علاج="" شدہ="" کنٹرول="" (ctrl.)="" (ctrl.,="" n="" -="" 6;="" nts-ctrl.,="" n="" -="" 9;="" nts-rarres1_cko،="" n="9)۔" (f)="" ٹرانسمیشن="" الیکٹران="" مائیکروسکوپی="" تجزیہ="" کے="" ذریعہ="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" نمائندہ="" فوٹومیکروگرافس="" اور="" اوسط="" گلوومرولر="" بیسمنٹ="" میمبرین="" (gbm)="" کی="" موٹائی="" اور="" سلٹس="" کی="" تعداد="" فی="" ملی="" میٹر="" gbm۔="" ##p=""><0.01, ###p=""><0.001, ####p=""><0.0001 بمقابلہ="" غیر="" علاج="" شدہ="" کنٹرول="" (ctrl.,="" n="3;" nts-ctrl.,="" n="4;" nts-rarres{="" {33}}cko،="" n="6)۔" ڈیٹا="" کا="" مطلب="" ±="" sem="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" 3="" یا="" اس="" سے="" زیادہ="" کے="" گروپوں="" کے="" لیے="" متعدد="" موازنہ="" کے="" لیے="" ٹکی="" کے="" پوسٹ="" ٹیسٹ="" کے="" بعد="" تغیر="" کا="" یک="" طرفہ="" تجزیہ="" استعمال="" کیا="" گیا۔="" اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

ماؤس لائنیں

C57Bl/6J پس منظر کے ساتھ Floxed Rarres1 چوہے (Rarres1flfl/flfl; Cygen) پوڈوسن (B6.Cg-Tg [NPHS2-cre] 295Lbh/J; جیکسن لیبارٹری) اور Tie2 cre چوہے (B6.Cg-Tg( Tek-cre)12Flv/J) سیل کے لیے مخصوص ناک آؤٹ چوہوں کو پیدا کرنے کے لیے۔ GT(ROSA)26Sortm1(CAG-Rarres1-T2A EGFP)/J چوہوں کو خاص طور پر ECs میں Rarres1 اظہار کو فعال کرنے کے لیے ایک ٹائی2-کری لائن کے ساتھ عبور کیا گیا۔ طریقہ کار جانوروں کے تمام مطالعات متعلقہ رہنما خطوط اور ضوابط کے مطابق پری کلینیکل لیبارٹری (کیرولنسکا انسٹی ٹیوٹ) میں کیے گئے تھے اور تحقیقی جانوروں کی دیکھ بھال کی اخلاقی کمیٹی (Linköpings djurförsöksestiska nämd؛ DNR 1336) کے ذریعہ منظور شدہ تھے۔

نیفروٹوکسک سیرم (NTS) - چوہوں میں حوصلہ افزائی نیفروپیتھی

سات سے 9-ہفتہ پرانے چوہوں کو 50 ملی لیٹر کمپلیٹ فریونڈز ایڈجوانٹ (مرک) ایس سی موصول ہوا، اس کے بعد این ٹی ایس انجکشن (iv؛ 6 ملی لیٹر/کلوگرام جسمانی وزن؛ پروبیٹیکس انکارپوریٹڈ) دن 4.18 کو 3، 7 پیشاب جمع کیا گیا۔ انجیکشن کے 10، اور 14 دن بعد، اور چوہوں کو 14 دن میں مارا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

شماریاتی تجزیہ Prism 9 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔{1}} سافٹ ویئر (GraphPad)۔

اعداد و شمار کو پہلے نارملٹی کے لیے جانچا گیا تھا (شاپیرو-ولک ٹیسٹ)۔ جب تقسیم Gaussian تھی، ڈیٹا کا تجزیہ پیرامیٹرک ٹیسٹ (2 گروپوں کے لیے طالب علم کا ٹی ٹیسٹ، اور 2 سے زیادہ گروپوں کے لیے ٹوکی کے پوسٹ ٹیسٹ کے ساتھ فرق کا تجزیہ) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ جب تقسیم گاوسی نہیں تھی، نان پیرامیٹرک ٹیسٹ (2 سے زیادہ گروپوں کے لیے ڈن کے پوسٹ ٹیسٹ کے ساتھ فریڈمین ٹیسٹ اور 2 گروپوں کے لیے Mann-Whitney U ٹیسٹ) استعمال کیے گئے۔ اختلافات کو اہم سمجھا گیا جب P <>

نتائج

Rarres1 کا اظہار پوڈوسائٹس کے ذریعہ کیا جاتا ہے۔

ہم نے پہلے مورین اور انسانی گردے کے ٹشو میں Rarres1 کے اظہار کے انداز کا اندازہ کیا۔ پولیمریز چین کے رد عمل کے تجزیوں سے پتہ چلتا ہے کہ ماؤس رینل کارٹیکس (شکل 1a اور b6) کے tubulointerstitial fraction کے مقابلے میں Rarres1 کو گلوومیرولر میں نمایاں طور پر زیادہ ظاہر کیا جاتا ہے۔ مورین گردے کے ٹشو کے سنگل سیل آر این اے کی ترتیب کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ Rarres1 کا اظہار خصوصی طور پر پوڈوسیٹس (شکل 1c) کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ انسانوں میں، Rarres1 کو گلوومیریلر ٹشو (شکل 1d) میں بھی افزودہ کیا گیا تھا۔ عام انسانی گردے کے ٹشو کے امیونو فلوروسینس میں، Rarres1 نے گلومیرولی (شکل 1e) میں ایک اعلی سگنل دکھایا۔ دوہرے داغوں سے پتہ چلتا ہے کہ Rarres1 کیپلیری لوپس میں نیفرین ری ایکٹیویٹی کے "باہر" واقع تھا، جو پوڈوسائٹ ایکسپریشن (شکل 1f) کی تجویز کرتا ہے۔ ویمنٹن کے ساتھ اجتماعیت نے بڑے عملوں کو لوکلائزیشن کا اشارہ کیا۔ EC مارکر CD31 یا mesangial marker -smooth muscle actin (شکل 1f) کے لیے کوئی اوورلیپنگ ری ایکٹیویٹی نہیں دیکھی گئی۔

Rarres1 ریسیپٹر ٹائروسین کناز ایکسل کے ذریعے NF-kB اور TGF-b1 سگنلنگ کو فروغ دیتا ہے۔

Podocytes میں Rarres1 کے کردار کو واضح کرنے کے لیے، ہم نے لافانی انسانی podocytes میں اس کے اظہار کی سطحوں میں ہیرا پھیری کی۔ 16 Rarres1 کی سطحوں کو پوڈو سائیٹس میں نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا جو کہ انسانی Rarres1 cDNA سے مستحکم طور پر منتقل کیے گئے تھے اور Rarresting{{5}Figure} کے ساتھ منتقلی کے بعد نیچے کو منظم کیا گیا تھا۔ 2a)۔ Rarres1 کے اوور ایکسپریشن نے اپیٹیلیل-mesenchymal منتقلی سے متعلق جینوں کے اظہار کو بڑھاوا دیا، جبکہ endogenous Rarres1 کی کمی کا الٹا اثر ہوا (شکل 2b)۔ چونکہ NF-kB سگنلنگ کا اپیٹیلیل-میسینچیمل منتقلی میں ایک اہم کردار ہے جس کی وجہ سے GN میں فائبروسس اور سوزش ہوتی ہے، ہم نے وٹرو میں TGF-b1 – حوصلہ افزائی NF-kB سگنلنگ ایکٹیویشن کی پیمائش کی۔ Rarres1 اوور ایکسپریشن نے بیس لائن پر اور TGF-b1 محرک (شکل 2c) کے بعد NF-kB پاتھ وے کی ایکٹیویشن میں اضافہ کیا۔ جیسا کہ Rarres1 کو ریسیپٹر tyrosine kinase Axl کو چالو کرنے کی اطلاع دی گئی ہے، اور اس طرح سے سوزش چھاتی کے کینسر میں NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کو فروغ دیتا ہے، 20 ہم نے اندازہ کیا کہ آیا Axl گردے کے ٹشو میں Rarres1 کا ممکنہ فعال شراکت دار ہے۔ TGF-b1–حوصلہ افزائی NF-kB ایکٹیویشن کو R428 کے ذریعے روکا جا سکتا ہے، Axl kinase21,22 (Figure 2d) کا ایک منتخب چھوٹے مالیکیول روکنے والا، اور Rarres1 کا اوور ایکسپریشن Axl kinase (Figure2) کی تشکیلاتی ایکٹیویشن کے ساتھ مثبت طور پر منسلک ہے۔ R428 کے ساتھ Axl کی سرگرمی کی کمی لیکن siRNA کے ذریعے Axl کے جین کو خاموش نہ کرنا اپکلا-میسینچیمل منتقلی سے متعلق جینوں کے Rarres1-حوصلہ افزائی اظہار کو کم کر سکتا ہے، جیسا کہ کم mRNA کی سطح (شکل 2f) سے ظاہر ہوتا ہے۔ قابل غور بات یہ ہے کہ NF-kB راستوں کی کوئی ایکٹیویشن کا پتہ نہیں چلا (ضمنی اعداد و شمار S1)۔ اس طرح، Rarres1 نے Axl kinase کو چالو کرنے کے ذریعے کلچرڈ پوڈوسیٹس میں NF-kB سگنلنگ کو فروغ دیا۔

کیوں Retinoic Acid Receptor Responder1 Glomerular بیماریوں کی نشوونما کو فروغ دے سکتا ہے؟

Podocytes میں Rarres1 کا غیر فعال ہونا گلوومیریولر اسامانیتاوں کا باعث نہیں بنتا یا اینٹی گلومیریلر بیسمنٹ میمبرین (GBM) GN ماڈل میں نیفروپیتھی کے نتائج کو تبدیل نہیں کرتا ہے۔

Vivo میں Podocytes میں Rarres1 کے کردار کا تجزیہ کرنے کے لیے، ہم نے ایک ناول Rarres1flfl/flfl (floxed) ماؤس لائن تیار کی اور Podocin-Cre Rarres1flfl/flfl چوہے (Creþ/Rarres1flfl/flfl) تیار کرنے کے لیے اسے podocin-Cre چوہوں کے ساتھ عبور کیا۔ )۔ فلوکسڈ / کری ایللیس کے جین ٹائپس کی شناخت کان کی جین ٹائپنگ (شکل 3b) کے ذریعہ کی گئی تھی۔ tubulointerstitial اور glomerular fractions کے ساتھ ساتھ جگر کے ٹشووں کے پولیمریز چین کے رد عمل کے تجزیے نے خاص طور پر glomerulus (ضمنی اعداد و شمار S2A) میں exon 3 کے حذف ہونے کی تصدیق کی، اور Rarres1 پروٹین کی سطح گلومیرولی میں Creflure/miflreflar (mileflure) سے کم ہوگئی۔ 3c)۔

تصویر 4|گردے کی دائمی بیماری والے مریضوں میں گلومیرولر اور پیریٹیوبلر کیپلیری اینڈوتھیلیل سیلز میں Rarres1 کی اپ گریجشن۔ (a) ذیابیطس نیفروپیتھی (DN)، vasculitis، IgA nephropathy (IgAN) کے مریضوں سے الگ تھلگ گلوومیرولی کے مائیکرو رے ڈیٹا میں Rarres1، collagen1a2 (COL1A2)، اور نیفرین (NPHS1) جین اظہار کا تجزیہ اور کنٹرول (Ctrl.) موضوع۔ 4,6,24–26 *P < 0۔{14}}5,="" **p="">< 0۔{24}}1,="" ***p="">< 0="" 001="" بمقابلہ="" کنٹرول="" مضامین۔="" (b)="" dn="" (n="5)" اور="" کنٹرولز="" (n="5)" والے="" مریضوں="" سے="" الگ="" تھلگ="" گلومیرولی="" میں="" rarres1،="" col1a2،="" اور="" nphs1="" جینز="" کے="" لیے="" مقداری="" پولیمریز="" چین="" رد="" عمل="" کا="" تجزیہ۔="" **p="">< 0.01،="" ***p=""><0.001 بمقابلہ="" کنٹرول="" مضامین۔="" (c)="" dn،="" vasculitis،="" igan،="" اور="" کنٹرول="" مریضوں="" سے="" الگ="" تھلگ="" نلی="" نما="" فریکشن="" کے="" مائیکرو="" رے="" ڈیٹا="" میں="" rarres1="" اور="" col1a2="" جین="" اظہار="" کا="" تجزیہ۔="" *p=""><0.05، **p=""><0.01، ***p=""><0.001 بمقابلہ="" کنٹرول="" مضامین۔="" (d)="" کنٹرولز="" اور="" dn="" (n="5)،" اینٹی="" نیوٹروفیل="" سائٹوپلاسمک="" آٹوانٹی="" باڈی="" (anca)="" vasculitis="" (n="4)،" اور="" igan="" (n="5)" والے="" مریضوں="" سے="" انسانی="" رینل="" کارٹیکل="" ٹشو="" میں="" rarres1="" امیونو="" ہسٹو="" کیمیکل="" سٹیننگ="" کے="" نمائندہ="" فوٹو="" مائکروگرافس۔="" n="5)۔" تیر="" rarres1-مثبت="" پوڈوکیٹس="" (کنٹرول)="" اور="" اینڈوتھیلیل="" سیل="" (ecs)="" (dn،="" igan،="" اور="" vasculitis)="" کی="" نشاندہی="" کرتے="" ہیں۔="" (جاری="">

تصویر 4|(جاری ہے) (ای) نمائندہ کنفوکل مائکروسکوپک امیجز جو ڈی این والے مریضوں کے گلومیرولی میں Rarres1 کا اظہار دکھاتی ہیں۔ CD31 کو ECs کے مارکر کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ بارز=50/10 ملی میٹر۔ (f) RNAscope کی نمائندہ کنفوکل FL فلوروسینٹ تصویریں DN والے مریضوں کے نلی نما حصے میں PECAM1-کو ایکسپریسنگ سیلز میں Rarres1 جین کا اظہار دکھاتی ہیں۔ ڈیٹا کا اظہار بطور مطلب ± SEM کیا جاتا ہے۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ 2 گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ بارز=50/10 ملی میٹر۔ اس تصویر کو دیکھنے کو بہتر بنانے کے لیے، براہ کرم www.kidney-international.org پر اس مضمون کا آن لائن ورژن دیکھیں۔

Creþ/Rarres1flfl/flfl چوہے مینڈیلین وراثت کے متوقع تناسب پر پیدا ہوئے تھے اور وہ قابل عمل اور زرخیز تھے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ گردے کنٹرول لیٹر میٹس (Cre-/Rarres1flfl/flfl) سے الگ نہیں تھے جیسا کہ معمول کی روشنی اور الیکٹران مائکروسکوپک امتحان (ضمنی اعداد و شمار S2B اور C) کے ذریعہ تجزیہ کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، کریþ/Rarres1flfl/flfl چوہوں (ضمنی اعداد و شمار S2D) میں پوڈوسائٹ پروٹین نیفرین اور سیناپٹوپوڈین کی تقسیم متاثر نہیں ہوئی۔

Vivo میں گردے کی چوٹ میں Rarres1 کے کردار کو واضح کرنے کے لیے، Creþ/Rarres1flfl/flfl کا علاج NTS کے ساتھ کیا گیا جو GBM، البومینوریا، اور پروگریسو GN میں IgG کے ذخائر کی طرف لے جاتا ہے۔ چوہے (شکل 3d)۔ ہلکے خوردبینی امتحان سے متاثرہ گلوومیرولی (شکل 3e) کے تناسب میں کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا۔ الیکٹران مائیکروسکوپی نے جی بی ایم یا پاؤں کے عمل کی افزائش کی موٹائی میں کوئی فرق نہیں دکھایا، اور ایسا لگتا ہے کہ جی ای سی دونوں گروپوں میں یکساں طور پر متاثر ہوئے ہیں (شکل 3f)۔ پوڈوسائٹ مارکر نیفرین، ڈبلیو ٹی 1، اور سینپٹوپوڈن دونوں گروپوں میں یکساں انداز میں متاثر ہوئے تھے (ضمنی اعداد و شمار S3A)۔ نیز ، CD31 کا استعمال کرتے ہوئے ECs کے داغ لگانے سے گروپوں کے مابین گلومیرولی یا پیریٹیوبلر کیپلیریوں میں کوئی فرق نہیں دکھایا گیا (ضمنی اعداد و شمار S3B اور C)۔ اس کے علاوہ، این ٹی ایس (ضمنی اعداد و شمار S4) کے ساتھ علاج کیے جانے والے دونوں گروپوں میں فائبروسس اور سوزش سے متعلق جین کا اظہار اسی طرح بلند ہوا تھا۔

Rarres1 اظہار گردے کی دائمی بیماری (CKD) میں گلومیرولر اور پیریٹیوبلر کیپلیری ECs میں حوصلہ افزائی کرتا ہے۔

CKD میں Rarres1 کے کردار کو دریافت کرنے کے لیے، ہم نے عوامی طور پر دستیاب RNA ڈیٹا سیٹس میں اس کے اظہار کا تجزیہ کیا۔ ہم نے DN، ANCA سے وابستہ vasculitis، اور IgAN (شکل 4a)، 4,6,24–26 کے مریضوں سے الگ تھلگ گلوومیرولی میں نمایاں طور پر بلند Rarres1 کی سطح کا مشاہدہ کیا جبکہ دیگر پوڈوسیٹ سے وابستہ جینز، مثال کے طور پر، نیفرین، غیر معمولی طور پر نیچے یا غیر معمولی طور پر نیچے تھے۔ . DN (n=5) والے مریضوں سے الگ تھلگ گلوومیرولی کے ہمارے مقداری پولیمریز چین رد عمل کے تجزیے نے Rarres1 اظہار (شکل 4b) کی شمولیت کی توثیق کی۔ پوڈوکیٹس کے نقصان کی وجہ سے، پوڈوکیٹ جینز کا اظہار عام طور پر ترقی پسندی میں کم ہوتا ہے۔glomerular بیماریوں,6 اور گلوومیرولر Rarres1 اور نیفرین ایکسپریشن کے تناسب میں ڈی این بمقابلہ صحت مند گلوومیرولی (شکل 4b) میں تقریباً 20-گنا اضافہ ہوا ہے۔ Rarres1 کے اظہار کو DN، ANCA سے وابستہ vasculitis، اور IgAN (شکل 4c) میں tubulointerstitial ٹشو ڈیٹا سیٹس میں بھی بڑھا دیا گیا تھا۔8–11۔

اگلا، ہم نے DN (n ¼ 5)، IgAN (n ¼ 5)، اور ANCA سے وابستہ ویسکولائٹس (n ¼ 4) والے مریضوں سے گردوں کے بایپسی میں امیونو ہسٹو کیمیکل طور پر Rarres1 اظہار کا تجزیہ کیا۔ بیمار گلوومیرولی میں، Rarres1 سٹیننگ GECs میں مقامی لگ رہا تھا جیسا کہ کیپلیری دیواروں (شکل 4d، insets) کے اندرونی چہرے پر مدافعتی عمل سے دکھایا گیا ہے، جبکہ پوڈوسیٹس سے سگنل کمزور دکھائی دیتے ہیں۔ tubulointerstitial space میں، peritubular capillaries (شکل 4d، insets) میں داغ کا پتہ چلا، جو EC اظہار کی تجویز کرتا ہے۔ CD31 کے ساتھ ڈبل امیونو لیبلنگ نے گلومیرولی اور پیریٹیوبلر کیپلیریوں (شکل 4e) دونوں میں ECs میں لوکلائزیشن کی توثیق کی۔ اسی طرح، ڈبل آر این اےسکوپ تجربات نے DN (شکل 4f) میں PECAM1 mRNA کے ساتھ Rarres1 mRNA کی اجتماعیت کو دکھایا۔ ایک ساتھ مل کر، گلوومرولر اور پیریٹیوبلر کیپلیری ای سی میں Rarres1 اظہار کی شمولیت CKD میں ایک عام رجحان تھا۔

ECs میں Rarres1 کو اوور ایکسپریس کرنے والی ماؤس لائن کی تخلیق اور خصوصیت

جیسا کہ Rarres1 انسانی CKD میں شامل ہوتا ہے، ہم نے ایک ناول ٹرانسجینک ماؤس لائن تیار کی جس میں Rarres1 cDNA کو CAG پروموٹر کے تحت Rosa26 لوکس میں متعارف کرایا گیا، 27 اسپلائس قبول کرنے والی سائٹس کے درمیان ایک lox-STOP-lox کیسٹ کے ساتھ (شکل 5a)۔ Rarres1_Tie2_KI چوہوں کو پیدا کرنے کے لیے لائن کو ٹائی2-کری لائن کے ساتھ کراس کیا گیا تھا، اور چوہوں کی شناخت نوکن اور کری ایللیس (شکل 5a) کے لیے کان کی جین ٹائپنگ کے ذریعے کی گئی تھی۔ Rarres1_Tie2_KI چوہوں نے گردے کے ٹشو (شکل 5b) میں Rarres1 پروٹین کی نمایاں طور پر بڑھی ہوئی سطح کو ظاہر کیا، اور FACS کی ترتیب والے GFP-مثبت میں Rarres1 mRNA اظہار کے تجزیہ کے ذریعے کامیاب ناککن حکمت عملی کی مزید توثیق کی گئی۔ GECs (شکل 5c)۔

ہم نے Rarres1_Tie2_KI چوہوں کے گردے فینوٹائپ کیے اور عمر کے مماثل گروپوں میں چوہوں کو کنٹرول کیا۔ ہلکے خوردبینی معائنے سے، گردے کی مورفولوجی Rarres1_ٹائی2_KI چوہوں سے کنٹرول لیٹر میٹس (شکل 5d) میں الگ نہیں تھی۔ اسی طرح، الیکٹران مائکروسکوپی نے ایک غیر تبدیل شدہ GBM موٹائی اور پوڈوسیٹ پاؤں کے عمل کی چوڑائی (شکل 5e) کو دکھایا۔ مزید برآں، پوڈوسائٹ مارکر نیفرین اور سینپٹوپوڈن کا اظہار Rarres1 overexpressing glomeruli (شکل 5f) میں متاثر نہیں ہوا۔ قابل غور بات یہ ہے کہ دوسرے بڑے اعضاء نے میکروسکوپی یا خوردبینی طور پر کوئی واضح اسامانیتا نہیں دکھائی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔

تصویر 5|اینڈوتھیلیل سیل کے لیے مخصوص Rarres1 knockin (Rarres1_Tie2_KI) چوہوں کا قیام۔ (a) مشروط دستک چوہوں کی ایک نسل جس میں Rarres1 اظہار خاص طور پر کری-لوکس پی ری کنبینیشن سسٹم کا استعمال کرکے اینڈوتھیلیل سیلز (ECs) میں آمادہ کیا جاتا ہے۔ ٹائی2-کری چوہوں کو چوہوں کے ساتھ کراس کیا گیا تھا جس میں ٹارگٹنگ ویکٹر (Rarres1_casetteþ) کا اظہار کیا گیا تھا، جس میں splice کے درمیان ایک lox-STOP-lox کیسٹ شامل تھی (جاری ہے)

تصویر 5|(جاری ہے) قبول کرنے والی سائٹس اور CAG پروموٹر کے تحت Rarres1 cDNA، جو Rosa26 لوکس میں متعارف کرایا گیا تھا، کی شناخت کان کی جین ٹائپنگ کے ذریعے کی گئی۔ جین ٹائپنگ کی تصدیق 4 ہفتوں کی عمر میں کان کی تیاری اور پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) سے ہوئی۔ (b) نمائندہ مغربی دھبہ جو EC-specific Rarres1 knockin (Rarres1_Tie2_KI) چوہوں سے رینل پرانتستا میں Rarres1 کے بڑھتے ہوئے اظہار کو ظاہر کرتا ہے۔ **P < 0۔{17}}1="" بمقابلہ="" کنٹرول="" (ctrl.="" پرکھ).="" (c)="" الگ="" تھلگ="" ecs="" میں="" rarres1="" کے="" لیے="" مقداری="" pcr۔="" **p=""><0.01 بمقابلہ="" کنٹرول="" (cre-="" arres1_tie2_ki,="" n="3،" طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ)۔="" (d)="" متواتر="" تیزاب="" –="" شِف="" –="" داغ="" دار="" حصوں="" کے="" نمائندہ="" فوٹومیکروگرافس="" جو="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" مخصوص="" گلوومیرولر="" ڈھانچے="" کو="" دکھاتے="" ہیں۔="" (e)="" ٹرانسمیشن="" الیکٹران="" مائیکروسکوپی="" تجزیہ="" (طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ)="" کے="" ذریعے="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" نمائندہ="" فوٹومیکروگرافس="" اور="" اوسط="" گلوومرولر="" بیسمنٹ="" میمبرین="" (gbm)="" کی="" موٹائی،="" اور="" سلٹس="" کی="" تعداد="" فی="" mm="" gbm۔="" (f)="" نمائندہ="" کنفوکل="" مائیکروسکوپک="" امیجز="" جو="" ec="" مخصوص="" rarres1="" ناک="" ان="" چوہوں="" (rarre1_tie2_ki)="" اور="" ctrl="" میں="" پوڈوسیٹ="" مخصوص="" مارکر="" synaptopodin="" اور="" نیفرین="" کا="" اظہار="" دکھاتی="" ہیں۔="" چوہوں.="" بارز="10" ملی="" میٹر۔="" ڈیٹا="" کا="" مطلب="" ±="" sem="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

ECs میں Rarres1 کی شمولیت Axl ایکٹیویشن کو ریگولیٹ کرکے NF-kB سگنلنگ پاتھ وے اور نیفروپیتھی کے نتائج کو تبدیل کرتی ہے۔

اس بات کا اندازہ کرنے کے لیے کہ آیا ECs میں Rarres1 کا اظہار بیماری کے بڑھنے کو ماڈیول کرتا ہے، ہم نے GN کو ٹرانسجینک چوہوں اور ان کے لیٹر میٹس میں NTS کے ایک انجیکشن سے آمادہ کیا۔ Rarres1_- Tie2_KI چوہوں نے 3 دن کے بعد کنٹرول کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ البیومینوریا کی سطح تیار کی، جبکہ البومینوریا میں 7، 10 اور 14 دنوں میں کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا (شکل 6a)۔ شامل کرنے کے 14 دن بعد ہسٹولوجک تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ Rarres1_Tie2_KI چوہوں میں زیادہ گلوومیریلر تبدیلیاں نہیں تھیں، جیسے کہ سکلیروٹک اور کریسنٹ گھاو (شکل 6b)۔ الیکٹران خوردبینی تشخیص نے ظاہر کیا، تاہم، Rarres1_Tie2_KI چوہوں (شکل 6c) میں نمایاں طور پر موٹا جی بی ایم اور زیادہ پاؤں کے عمل کو ختم کرنا۔ مزید برآں، Rarres1_Tie2_KI چوہوں نے گردے کی پرانتستا (شکل 6d) میں ہموار پٹھوں کے ایکٹین کی بڑھتی ہوئی سطح کو ظاہر کیا۔ پوڈو سائیٹ مارکر نیفرین، سینپٹوپوڈن، اور ڈبلیو ٹی 1 کے تجزیے نے گہرا کمی ظاہر کی جس میں تفریق اور پوڈوسائٹس کے نمایاں نقصان کی تجویز پیش کی گئی (شکل 6d)۔ اہم بات یہ ہے کہ، Rarres1_Tie2_KI glomeruli نے کنٹرول جانوروں کے مقابلے میں کم WT1-مثبت پوڈو سائیٹس دکھائے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ EC-اظہار شدہ Rarres1 پوڈو سائیٹ کے نقصان کو فروغ دے رہا تھا۔ نیز، Rarres1_Tie2_KI گلومیرولی (شکل 6e) میں مزید فائبرن تھرومبی کا پتہ چلا۔ اس کے مطابق، Rarres1_-Tie2_KI چوہوں میں مختلف سوزش، fifibrosis، اور رینل نلی نما چوٹ سے متعلق جینوں کے اظہار کو نمایاں طور پر اپ گریڈ کیا گیا تھا جیسا کہ Il کے لیے ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن تجزیہ سے دکھایا گیا ہے۔ -1بی ٹا، Col1a1، TGF-b1، اور گردے کی چوٹ کا مالیکیول-128 گردے کے کارٹیکس ٹشو میں (شکل 6f)۔ تاہم، گروپوں کے درمیان خون میں یوریا نائٹروجن اور S-creatinine کی قدروں میں کوئی فرق نہیں پایا گیا (شکل 6g)۔ نیز ، CD31 کا استعمال کرتے ہوئے ECs کے داغ لگانے سے گروپوں کے مابین گلومیرولی یا پیریٹیوبلر کیپلیریوں میں کوئی فرق نہیں دکھایا گیا (ضمنی اعداد و شمار S5A اور B)۔ ایک ساتھ مل کر، Rarres1 اظہار کی EC مخصوص شمولیت نے NTS-حوصلہ افزائی نیفروپیتھی میں گلوومرولر پیتھالوجی کو بڑھا دیا۔

میکانکی طور پر، ہم نے تجزیہ کیا کہ آیا ECs میں Rarres1 اوور ایکسپریشن نے Vivo میں Axl اور NF-kB سگنلنگ کی ایکٹیویشن کو فروغ دیا، جیسا کہ ہمارے ان وٹرو مشاہدات (شکل 2) کی طرح ہے۔ NTS کے ساتھ علاج کیے گئے Rarres1_Tie2_KI اور کنٹرول چوہوں دونوں نے Axl سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن کی نمائش کی جیسا کہ Axl فاسفوریلیشن میں اضافہ (شکل 6h) سے دکھایا گیا ہے۔ تاہم، یہ ایکٹیویشن Rarres1_- Tie2_KI چوہوں (شکل 6h) میں زیادہ اہم تھی۔ اسی کے مطابق، ان چوہوں میں NF-kB پاتھ وے ایکٹیویشن کو فروغ دیا گیا جیسا کہ گلوومیرولی (شکل 6i) میں pP65-مثبت نیوکلی کی تعداد سے دکھایا گیا ہے۔ جب pP65 کی سطح مغربی بلاٹنگ کے ذریعہ ماپا گیا تھا، تو ہم نے NF-kB پاتھ وے ایکٹیویشن کے لیے اسی طرح کے رجحان کا پتہ لگایا حالانکہ یہ اہم نہیں تھا، ممکنہ طور پر ایک آؤٹ لیئر (ضمنی اعداد و شمار S5C) کی وجہ سے۔

ECs میں Rarres1 کا غیر فعال ہونا اینٹی GBM گلوومیرولونفرائٹس ماڈل میں گلوومیرولر نقصان کو کم کرتا ہے۔

CKD میں EC سے ماخوذ Rarres1 کے روگجنک کردار کی توثیق کرنے کے لیے، ہم نے ایک ماؤس لائن تیار کی جس میں Rarres1 کو ECs میں Tie2-Cre (شکل 7a) کا استعمال کرتے ہوئے حذف کر دیا گیا تھا۔ فلوکسڈ اور کری ایللیس کے جین ٹائپس کی شناخت کان کی جین ٹائپنگ (شکل 7b) کے ذریعہ کی گئی تھی۔ NTS سے علاج شدہ چوہوں میں Rarres1 کو اپ گریڈ کرنے کا رجحان تھا، جسے Rarres1_Tie2_KO چوہوں (شکل 7c) میں ختم کر دیا گیا تھا۔ چوہوں نے گردوں کی کوئی واضح اسامانیتا نہیں دکھائی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ NTS کے انجیکشن نے Rarres1_Tie2_KO اور کنٹرولز (شکل 7d) میں ملتے جلتے البومینیوریا کو جنم دیا۔ تاہم، انڈکشن کے 14 دن بعد ہسٹولوجک تجزیہ نے Rarres1_- ٹائی2_KO چوہوں (شکل 7e) میں گلوومیرولر تبدیلیاں ظاہر کیں۔ الیکٹران مائیکروسکوپی میں، Rarres1_Tie2_KO چوہوں نے GBM (شکل 7f) کے پاؤں کے کم ہونے اور گاڑھے ہونے کے عمل کو دکھایا۔ امیونوسٹیننگ نے asma، nephrin، یا synaptopodin (شکل 7g) کے لیے کوئی خاص فرق نہیں دکھایا۔ تاہم، WT1-مثبت پوڈوسائٹس کی تعداد Rarres1_Tie2_KO چوہوں (شکل 7g) میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ پی پی 65 کے لیے سٹیننگ نے Rarres1_ٹائی2_KO گلومیرولی میں مثبت نیوکلی کی تعداد میں کمی کو ظاہر کیا جو NF-kB سگنلنگ پاتھ وے (شکل 7h) کی شمولیت کا مشورہ دیتا ہے۔

تصویر 6|(جاری) ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی کے ذریعے چوہوں کے مختلف گروپوں میں اوسط گلوومیرولر بیسمنٹ میمبرین (GBM) کی موٹائی اور سلٹس کی تعداد فی ملی میٹر GBM تجزیہ سیکشنز (Ctrl., n=4; NTS-ctrl., n { {3}}؛ NTS-Rarres1_Tie2_KI، n=12)۔ (d) نمائندہ کنفوکل مائیکروسکوپک امیجز جو چوہوں کے مختلف گروہوں سے گردے میں نیفرین، سینپٹوپوڈن، ⍺-ہموار پٹھوں کی ایکٹین (⍺Sma)، اور WT1 کے تاثرات دکھاتی ہیں۔ بارز {{10}/10 ملی میٹر۔ ⍺Sma–مثبت ایریا کو فی کارٹیکل کراس سیکشن میں شمار کیا گیا تھا، اور WT1 کو فی گلومیرولس (Ctrl., n=2; NTS-ctrl., n=3; NTS-Rarres{{18}) شمار کیا گیا تھا۔ }ٹائی2_KI، n {{20}})۔ (e) گلوومیرولی میں فائبرن تھرومبی کی موجودگی جیسا کہ ٹرائیکوم سٹیننگ (گنتی فی گلومیرولر کراس سیکشن) کے ذریعے پتہ چلا (Ctrl., n=3; NTS-ctrl., n=4; NTS-Rarres{{ 26}ٹائی2_KI، n=5)۔ (f) NTS-علاج شدہ چوہوں (Ctrl., n=4; NTS-ctrl., n=6) کے رینل کورٹیکس میں مختلف سوزش، فائبروسس، اور رینل نلی نما چوٹ سے متعلق جینوں کی متعلقہ mRNA سطح –10؛ NTS-Rarres1_ٹائی2_KI، n=6–10)۔ (g) NTS-ctrl میں سیرم کریٹینائن اور خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) کی سطح۔ (n=3) اور NTS-Rarres1_Tie2_KI (n=3) چوہے۔ (h) نمائندہ ویسٹرن بلاٹ دستاویزات اور خلاصہ شدہ ڈیٹا جو NTS-علاج شدہ چوہوں کے مختلف گروپوں (NTS-ctrl., n=4; NTS-Rarres1_ میں رینل کارٹیکس میں Paxil کے رشتہ دار پروٹین کی سطح کو ظاہر کرتا ہے۔ ٹائی2_KI، n=5)۔ (i) NTS سے علاج شدہ چوہوں کے مختلف گروپوں سے گردوں کے کارٹیکل ٹشو میں pP65 امیونو ہسٹو کیمیکل داغ کے نمائندہ فوٹو میکروگراف۔ pP65-مثبت نیوکلی فی گلوومیرولی کو چوہوں کے مختلف گروپوں میں مقدار کا تعین کیا گیا تھا (Ctrl., n=7; NTS-ctrl., n=8; NTS-Rarres1_ٹائی 2_KI، n=14)۔ EC مخصوص Rarres1 ناک ان چوہے (Rarres1_Tie2_KI چوہے)؛ Rarres1 کیسٹ والے چوہے اور بغیر Cre expression (Ctrl.) کو بطور کنٹرول استعمال کیا گیا۔ #P <0.05، ##p=""><0.01، ###p=""><0.001 بمقابلہ="" غیر="" علاج="" شدہ="" کنٹرول="" (ctrl.)،="" *p=""><0.05 بمقابلہ="" nts-="" علاج="" شدہ="" کنٹرول="" (nts-ctrl.)="" ڈیٹا="" کا="" مطلب="" ±="" sem="" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ="" 2="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" 3="" یا="" اس="" سے="" زیادہ="" کے="" گروپوں="" کے="" لیے="" متعدد="" موازنہ="" کے="" لیے="" ٹکی="" کے="" پوسٹ="" ٹیسٹ="" کے="" بعد="" تغیر="" کا="" یک="" طرفہ="" تجزیہ="" استعمال="" کیا="" گیا۔="" اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

بحث

Rarres1 کی شناخت سب سے پہلے جلد کے بیڑے کی ثقافتوں میں کی گئی تھی جس کا علاج tazarotene29 کے ساتھ کیا گیا تھا اور اسے پروسٹیٹ کینسر سیل لائنوں میں یلغار کو دبانے والے کے طور پر کام کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے۔ . تفصیل سے، Rarres1 Axl کے پروٹیزوم پر منحصر انحطاط کو روک کر Axl کو مستحکم کرتا ہے۔ مزید برآں، SUM149 خلیوں میں Rarres1 کی کمی Axl کے اظہار کو کم کرتی ہے اور NF-kB کو غیر فعال کر دیتی ہے، جس سے چھاتی کے کینسر کے سوزش کے خلیوں پر حملہ کم ہوتا ہے۔ چوہے کے پھیپھڑوں کے فائبروسس ماڈل میں اور ہیپاٹک سٹیلیٹ سیلز کے فائبروجینک ایکٹیویشن کے دوران تجویز کیا گیا ہے۔

ابتدائی طور پر، Rarres1 نے ہماری دلچسپی کو بڑھایا کیونکہ یہ پوڈوسیٹ خلیوں میں بہت زیادہ افزودہ تھا۔ ہم یہ دکھا سکتے ہیں کہ Rarres1 نے Axl-mediated NF-kB پاتھ وے ایکٹیویشن کے ذریعے پوڈوسیٹس میں سوزش اور منافع بخش سگنلنگ کو فروغ دیا۔ دوسری طرف، پوڈوسیٹ مخصوص ناک آؤٹ جانور صحت مند حالات کے ساتھ ساتھ جی این کے ماؤس ماڈل کے کنٹرول کے مقابلے میں کوئی واضح فرق ظاہر کرنے میں ناکام رہے۔ یہ معاوضہ دینے والے میکانزم کی وجہ سے ہو سکتا ہے کیونکہ NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کو متعدد مالیکیولز اور حیاتیاتی عمل سے منظم کیا جاتا ہے۔

ذیابیطس کے مریضوں کی مالیکیولر پروفائلنگ نے اشارہ کیا کہ Rarres1 کو DN میں گلوومیرولر اور پیریٹیوبلر کیپلیری ای سی میں شامل کیا گیا تھا۔ اہم بات یہ ہے کہ نیفروپیتھی کے بغیر ذیابیطس کے مریضوں میں ECs میں Rarres1 اظہار کا پتہ نہیں چلا۔ لہذا، ہم قیاس کرتے ہیں کہ Rarres1 ذیابیطس مائکروواسکولر بیماری کے لئے ایک نیا مارکر ہو سکتا ہے، اور پلازما اور پیشاب کے نمونوں میں مطالعہ ایک غیر حملہ آور بائیو مارکر کے طور پر Rarres1 کی فزیبلٹی کو تلاش کرنے کے لئے اشارہ کیا جاتا ہے. ہم نے IgAN اور vasculitis کے مریضوں میں بھی Rarres1 کی شمولیت کی نشاندہی کی۔ یہ قیاس کرنا پرکشش ہے کہ Rarres1 کا ان گلوومیرولوپیتھیز میں روگجنک کردار ہے اور یہ بیماری کے بڑھنے میں معاون ہے۔ عملی طور پر، ہم نے دکھایا کہ ECs میں Rarres1 کی شمولیت نے GN کے ایک مورن ماڈل میں گردوں کی چوٹ کو بڑھایا، جبکہ ECs میں Rarres1 کے غیر فعال ہونے سے چوٹ میں بہتری آئی۔ فینوٹائپیکل تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ ECs میں Rarres1 کو زیادہ متاثر کرنے والے چوہوں میں پوڈوسائٹس متاثر ہوئے تھے۔ یہ Podocytes پر Rarres1 کا براہ راست اثر ہو سکتا ہے کیونکہ Rares کی ایک حل پذیر شکل بیان کی گئی ہے۔

اس سے پہلے، اینڈوتھیلیل NF-kB ایکٹیویشن کو vasculitis میں گردے کی بیماری کی نشوونما میں روگجنک کردار ادا کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ 13 خاص طور پر، کریسنٹک GN کے ماڈل میں اینڈوتھیلیل NF-kB پاتھ وے کی روک تھام نے ترقی کو منسوخ کر دیا۔ Axl inhibitors کو تجرباتی اینٹی GBM ورم گردہ میں فائدہ مند دکھایا گیا ہے۔ سب سے زیادہ منتخب چھوٹے مالیکیول روکنے والے، R428 کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہوں نے گردے کے افعال کے نمایاں تحفظ کو ظاہر کیا اور سوزش والی سائٹوکائن کی پیداوار میں کمی واقع ہوئی۔glomerular بیماریعمل تاہم، چونکہ Axl اور NF-kB دونوں پورے جسم میں متعدد مختلف سیلولر عمل کو ماڈیول کر رہے ہیں، اس لیے یہ CKD میں دواسازی کے ہدف کے لیے اچھے امیدوار ہونے کا امکان نہیں ہے۔ Rarres1 گردے سے وابستہ زیادہ ہدف فراہم کر سکتا ہے۔

ٹائی2-Cre کو ہیماٹوپوائٹک سیلز کی ذیلی آبادی میں اظہار خیال کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے۔ 34 ان میں سے کچھ خلیے NTS-حوصلہ افزائی ماڈل میں سوزش کے ردعمل کو تبدیل کر سکتے ہیں، اور اس لیے ہم اس بات کو خارج نہیں کر سکتے کہ ہیماٹوپوائٹک سیل سے ماخوذ Rarres1 ٹائی2-Cre لائنوں میں بیماری کا بڑھنا۔ تاہم، جیسا کہ ہم نے مدافعتی خلیوں میں دراندازی کرنے میں کوئی واضح Rarres1 اظہار نہیں پایا، ہم سمجھتے ہیں کہ اس کا امکان کم ہے۔

جب یہ مخطوطہ تیاری میں تھا، Chen et al.32 نے Rarres1 کی ایک حل پذیر شکل کی اطلاع دی جو فروغ دیتی ہے۔glomerular بیماریترقی انہوں نے ہماری طرح، عام انسانی گلوومیرولر بیماریوں میں Rarres1 کی اپ گریجشن کی نشاندہی کی۔ مطالعہ ہمارے اس کھوج کی حمایت کرتا ہے کہ Rarres1 اظہار میں اضافہ رینل فنکشن میں کمی کے ساتھ تعلق رکھتا ہے۔انسانی glomerular بیماری. تاہم، ہمارے نتائج کے برعکس، انہوں نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ Rarres1 کی اپ گریجشن پوڈوسیٹس میں حد سے زیادہ اظہار کی وجہ سے تھی۔ ہم اس امکان کو خارج نہیں کر سکتے، لیکن ہمیں انسانی بیماریوں میں ECs میں Rarres1 اظہار کی ایک الگ شمولیت کا پتہ چلا۔ ہمارے نتائج کی وضاحت کرنے والا ایک طریقہ کار یہ ہوسکتا ہے کہ پوڈوسیٹس کے ذریعہ تیار کردہ Rarres1 کی حل پذیر شکل GECs کے ذریعہ لی جاتی ہے۔ تاہم، وہ نتائج جو ہم نے ECs میں Rarres1 mRNA کو سیٹو ہائبرڈائزیشن کے ذریعے پایا اور یہ کہ Rarres1 کو peritubular capillary ECs میں بھی شامل کیا گیا تھا اس خیال کی مضبوطی سے تائید کرتے ہیں کہ گردوں کی بیماریوں میں Rarres1 کا اظہار بنیادی طور پر endothelial اصل کا ہے۔

تصویر 7|Rarres1 کا اینڈوتھیلیل مخصوص خاتمہ نیفروٹوکسک سیرم (NTS) – علاج شدہ چوہوں میں گردوں کی چوٹ کو کم کرتا ہے۔ (a) مشروط ناک آؤٹ چوہوں کی جنریشن جس میں Rarres1 کو خاص طور پر کری-لوکس پی ری کنبینیشن سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے اینڈوتھیلیل سیلز میں ختم کیا جاتا ہے۔ Exon 3 کو Tie2-Cre-mediated recombination پر حذف کر دیا گیا ہے۔ (b) جین ٹائپنگ کی تصدیق دم کی تیاری اور پولیمریز چین کے رد عمل سے ہوئی (جاری ہے)

تصویر 7|(جاری ہے) 4 ہفتے کی عمر۔ (c) نمائندہ مغربی بلاٹ دستاویزات اور خلاصہ ڈیٹا جو NTS-علاج شدہ چوہوں (NTS-ctrl., n=4; NTS-Rarres1_ کے مختلف گروپوں میں رینل پرانتستا میں Rarres1 کے رشتہ دار پروٹین کی سطح کو ظاہر کرتا ہے۔ ٹائی2_KO, n=4) اور غیر علاج شدہ چوہوں (Ctrl.]، n {{10}} کو کنٹرول کریں۔ **P < 0۔{59}}1۔="" (d)="" nts="" علاج="" پر="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" uacr="" (پیشاب="" البومین="" سے="" کریٹینائن="" کا="" تناسب)="" (ctrl.,="" n="7–11;" rarres1_tie2_ko,="" n="" {="" {19}}–8)۔="" (e)="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروہوں="" میں="" عام="" گلوومیرولر="" ڈھانچے="" کی="" تبدیلیوں="" کو="" ظاہر="" کرنے="" والے="" فوٹو="" مائیکروگرافس="" اور="" مقدار۔="" گلومیرولر="" گھاووں="" کی="" شناخت="" متواتر="" ایسڈ-شِف="" –="" داغ="" والے="" حصوں="" میں="" کی="" گئی="" تھی="" (ctrl.,="" n="3;" nts-treated="" control="" [nts-ctrl.],="" n="12;" nts="" rarres1_ٹائی{="" {27}}ko،="" n="8)۔" (f)="" ٹرانسمیشن="" الیکٹران="" مائیکروسکوپی="" تجزیہ="" سیکشنز="" (ctrl.,="" n="6;" nts-ctrl)="" کے="" ذریعے="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" اوسط="" گلوومیرولر="" بیسمنٹ="" میمبرین="" (gbm)="" کی="" موٹائی="" اور="" سلٹس="" کی="" تعداد="" فی="" ملی="" میٹر="" gbm="" کے="" نمائندہ="" فوٹومیکروگرافس="" اور="" مقدار۔="" ,="" n="13;" nts-rarres1_tie2_ko,="" n="16)۔" (g)="" نمائندہ="" کنفوکل="" مائکروسکوپک="" امیجز="" جو="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروہوں="" سے="" گردے="" میں="" نیفرین،="" سینیپٹوپوڈن،="" ہموار="" پٹھوں="" کی="" ایکٹین="" (sma)="" اور="" wt1="" کے="" تاثرات="" دکھاتی="" ہیں۔="" بارز="50/10" ملی="" میٹر۔="" sma-مثبت="" ایریا="" کا="" شمار="" فی="" کارٹیکل="" کراس="" سیکشن="" (nts-ctrl.,="" n="8;" nts-rarres1_tie2_ko,="" n="4)" کیا="" گیا="" تھا۔="" (h)="" nts="" سے="" علاج="" شدہ="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" سے="" گردوں="" کے="" کارٹیکل="" ٹشو="" میں="" pp65="" امیونو="" ہسٹو="" کیمیکل="" داغ="" کے="" نمائندہ="" فوٹومیکروگرافس۔="" pp65-مثبت="" نیوکلی="" فی="" گلوومیرولی="" کو="" چوہوں="" کے="" مختلف="" گروپوں="" میں="" مقدار="" کا="" تعین="" کیا="" گیا="" تھا="" (nts-ctrl.,="" n="7;" nts-rarres1_tie2_ko,="" n="" {{="" 56}})۔="" ####p=""><0.001 بمقابلہ="" غیر="" علاج="" شدہ="" ctrl.،="" *p=""><0.05 بمقابلہ="" nts-ctrl۔="" ڈیٹا="" کا="" اظہار="" بطور="" ذریعہ="" کیا="" جاتا="" ہے="" ±="" sem۔="" طالب="" علم="" کا="" ٹی="" ٹیسٹ="" 2="" گروپوں="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا۔="" 3="" یا="" اس="" سے="" زیادہ="" کے="" گروپوں="" کے="" لیے="" متعدد="" موازنہ="" کے="" لیے="" ٹکی="" کے="" پوسٹ="" ٹیسٹ="" کے="" بعد="" تغیر="" کا="" یک="" طرفہ="" تجزیہ="" استعمال="" کیا="" گیا۔="" اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

اس مطالعہ میں چند حدود ہیں جن کو تسلیم کیا جانا چاہیے۔ سب سے پہلے، ان وٹرو اسٹڈیز پوڈوسائٹس میں کی گئی ہیں، جبکہ ویوو میں ہم نے ای سی میں اظہار کو جوڑ دیا۔ لہذا، ہم براہ راست Rarres1 کو ECs میں Axl ایکٹیویشن سے جوڑ نہیں سکتے۔ دوسرا، جہاں ہم پوڈو سائیٹس میں NF-kB سگنلنگ کی Rarres1- حوصلہ افزائی (Axl-dependent) ایکٹیویشن کی شناخت کر سکتے ہیں، ہم نے اس عمل کے پیچھے مالیکیولر میکانزم کی چھان بین نہیں کی۔ پچھلی دریافت کو دریافت کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے کہ Rarres1 اپنے پروٹیزوم پر منحصر انحطاط کو روک کر ایکسل ایکٹیویشن کو فروغ دیتا ہے۔ آخر میں، ہم نے اپنے ناک آؤٹ/-ان جانوروں کو صرف NTS-حوصلہ افزائی نیفروپیتھی ماڈل کے ساتھ چیلنج کیا۔ لہذا، جانوروں کے ماڈلز میں مزید مطالعات کا اشارہ دیا گیا ہے کہ آیا Rarres1 کا بیماری کے دیگر عملوں میں بھی روگجنک کردار ہے یا نہیں۔

خلاصہ کرنے کے لیے، ہمارا مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ عام انسانی گلوومیرولوپیتھیز میں، پوڈوسیٹ سے افزودہ پروٹین Rarres1 کو ECs میں شامل کیا جاتا ہے، جس کی وجہ سے سوزش، پوڈوسیٹ انجری، اور فائبروسس ہوتا ہے۔ یہ ممکنہ طور پر ریسیپٹر ٹائروسین کناز ایکسل (شکل 7) کو چالو کرنے کے ذریعے NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کو بڑھا کر ثالثی کرتا ہے۔ Rarres1 مائکرو واسکولر چوٹ کا ایک نیا بائیو مارکر ہے اور ممکنہ طور پر CKD میں سوزش اور fifibrosis کو دبانے کے لیے ایک نیا علاج کا ہدف ہو سکتا ہے۔

انکشاف

ML AstraZeneca، Gothenburg، Sweden کا ملازم ہے۔ جے پی کی تحقیق کو AstraZeneca کی حمایت حاصل ہے۔ دیگر تمام مصنفین نے مسابقتی دلچسپیوں کا اعلان نہیں کیا۔

اعترافات

یہ مطالعہ KM-H کی طرف سے ذیابیطس کی فلاح و بہبود کے Sverige اور JP سے KI/AZ انٹیگریٹڈ میٹابولک سنٹر، Marianne och Marcus Wallenberg Foundation، Swedish Diabetes Foundation، Swedish Kidney Foundation اور Center for Innovative Medicine کے ذریعے تعاون کیا گیا۔

مصنف کی شراکتیں۔

KM-H, ML, اور JP نے تحقیق کو ڈیزائن کیا۔ KM-H, DD, EC, SZ, اور GG نے تحقیق کی۔ KM-H اور XL نے ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ AW نے انسانی نمونے فراہم کیے؛ اور KM-H اور JP نے مقالہ لکھا۔

کیوں Retinoic Acid Receptor Responder1 Glomerular بیماریوں کی نشوونما کو فروغ دے سکتا ہے؟

سپلیمنٹری میٹریل

ضمنی فائل (PDF)

ٹیبل S1۔ اس مطالعے میں ٹارگٹ جینز کے پرائمر جوڑے ریئل ٹائم RT-PCR کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔

ٹیبل S2۔ اس تحقیق میں اینٹی باڈیز استعمال کی گئیں۔ ضمنی فائل (پاورپوائنٹ)

شکل S1۔ Rarres1 اوور ایکسپریشن نان کینونیکل NF-kB سگنلنگ پاتھ وے کو چالو نہیں کرتا ہے۔ نمائندہ ویسٹرن بلاٹ دستاویز اور خلاصہ شدہ ڈیٹا یہ ظاہر کرتا ہے کہ Rarres1 کا زیادہ اظہار p100/p52 کو 10 ng/ml TGF-b1 (n=2) کے ساتھ علاج شدہ پوڈوسائٹس میں فعال نہیں کرتا ہے۔ ڈیٹا کو ± SD کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ دو گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ UT، لا علاج۔

شکل S2۔ پوڈوسیٹ مخصوص Rarres1 ناک آؤٹ (Creþ/Rarres1flfl/flfl ) چوہوں کا قیام۔ (A) نلی نما اور گلوومیرولر فریکشن کے ساتھ ساتھ جگر کے بافتوں میں روایتی پی سی آر تجزیہ۔ (B) Cre– /Rarres1flfl/flfl اور Creþ/Rarres1flfl/flfl چوہوں میں گردے کی پیتھالوجی کا ہسٹولوجیکل معائنہ (PAS-staining)۔ (C) نمائندہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکرو گرافس (TEM) اور چوہوں کے مختلف گروپس میں اوسط گلومیرولر بیسمنٹ میمبرین (GBM) موٹائی اور سلٹس کی تعداد فی ملی میٹر GBM (n=3)۔ (D) نمائندہ کنفوکل مائیکروسکوپک امیجز جو پوڈو سائیٹ سے متعلق مخصوص مارکر، Synaptopodin، اور nephrin کے اظہار کو دکھاتی ہیں، Podocyte-specific Rarres1 ناک آؤٹ (Creþ/Rarres1flfl/flfl) اور کنٹرول (Cre– /Rarres1flfl/flfl) میں۔ بار=10 ملی میٹر۔

شکل S3۔ NTS سے علاج شدہ چوہوں کے گردوں میں پوڈوسیٹ مارکر اور CD31 کے اظہار کی سطح۔ (A) NTS سے علاج شدہ Rarres1 podocyte-specific knockout چوہوں (Creþ/Rarres1flfl/flfl) اور کنٹرول littermates (Rarres1flfl/flfl) سے پوڈوسائٹس میں نیفرین، WT-1، اور Synaptopodin کے اظہار کو ظاہر کرنے والی نمائندہ کنفوکل مائکروسکوپک تصاویر flfl)۔ بار=10 ملی میٹر (NTS Cre– /Rarres1flfl/flfl , n=4; NTS-Creþ/Rarres1flfl/flfl , n=5)۔ (B) پیریٹیوبلر علاقوں میں CD31-مثبت کیپلیریوں کا تناسب۔ فی ماؤس تیس پیریٹیوبلر علاقوں کا اندازہ کیا گیا۔ (NTS Cre– /Rarres1flfl/flfl , n= 4; NTS-Creþ/Rarres1flfl/flfl، n=4)۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ۔ (C) گلومیرولی میں CD31 سگنل کی نیم مقداری اسکورنگ: 0=کوئی سگنل نہیں، 1=کمزور سگنل، 2=اعتدال پسند سگنل، 3=مضبوط سگنل۔ ہر ماؤس سے دس گلومیرولی کا اندازہ کیا گیا (NTS Cre–/ Rarres1flfl/flfl , n=4; NTS-Creþ/Rarres1flfl/flfl , n=4)۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ۔

شکل S4۔ NTS سے علاج شدہ چوہوں کے گردوں میں fifibrosis، سوزش، اور نلی نما چوٹ کے مارکروں کے لیے اظہار کی سطح۔ (A) نمائندہ کنفوکل مائکروسکوپک امیجز جو NTS سے علاج شدہ Rarres1 podocyte-specific ناک آؤٹ چوہوں (Creþ/Rarres1flfl/flfl) اور کنٹرول لیٹر میٹس (Cre– /Rarres1flfl/flfl) سے گردے میں -Sma کے تاثرات دکھاتی ہیں۔ بار=100 ملی میٹر۔ (B) NTS کے علاج شدہ چوہوں کے رینل پرانتستا میں مختلف سوزش-، fifibrosis-، اور رینل نلی نما چوٹ سے متعلق--جینز کی متعلقہ mRNA کی سطح۔ #P < 0۔{14}}5,="" ##p=""><0.01 بمقابلہ="" کنٹرول="" (ctrl.);="" اعداد="" و="" شمار="" کا="" اظہار="" بطور="" ذریعہ="" کیا="" جاتا="" ہے="" ±="" sem۔="" طالب="" علم="" کے="" ٹی="" ٹیسٹ="" کو="" 2="" گروپس="" کے="" درمیان="" موازنہ="" کے="" لیے="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا="">

شکل S5۔ NTS سے علاج شدہ گردوں میں C31 اور فعال P65 کا اظہار۔ (A) پیریٹیوبلر علاقوں میں CD31-مثبت کیپلیریوں کا تناسب۔ فی ماؤس تیس پیریٹیوبلر علاقوں کا جائزہ لیا گیا (NTS Cre–/ Rarres1flfl/flfl, n=4; NTS Creþ/Rarres1flfl/flfl, n=4)۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ۔ (B) گلوومیرولی میں CD31 سگنل کی نیم مقداری اسکورنگ: 0=کوئی سگنل نہیں، 1=کمزور سگنل، 2=اعتدال پسند سگنل، 3 =مضبوط سگنل۔ ہر ماؤس سے دس گلومیرولی کا جائزہ لیا گیا (NTS Cre –/Rarres1flfl/flfl, n =4; NTS-Creþ/Rarres1flfl/flfl, n= 4)۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ۔ (C) نمائندہ ویسٹرن بلاٹ دستاویزات اور خلاصہ شدہ ڈیٹا جو NTS کے علاج شدہ چوہوں اور غیر علاج شدہ کنٹرولز (ctrl.) (ctrl., n=3; NTS-ctrl) کے مختلف گروپوں میں رینل پرانتستا میں pP65 کے رشتہ دار پروٹین کی سطح کو ظاہر کرتا ہے۔ , n=9; NTS-Rarres1_Tie2_KI, n=10)۔ ڈیٹا کا مطلب ± SEM کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ 2 گروپوں کے درمیان موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

حوالہ جات

1. Reidy K، Kang HM، Hostetter T، Susztak K. ذیابیطس گردے کی بیماری کے مالیکیولر میکانزم۔ جے کلین انویسٹ۔ 2014؛ 124:2333–2340۔

2. لائی کے این، تانگ ایس، شینا ایف، وغیرہ۔ آئی جی اے نیفروپیتھی۔ نیٹ ریو ڈس پرائمرز۔ 2016؛ 2:16001۔

3. Lal MA، Patrakka J. ناول گردے کے علاج کو تیار کرنے کے لیے پوڈو سائیٹ بائیولوجی کو سمجھنا۔ فرنٹ اینڈو کرینول (لوزین)۔ 2018؛ 9:409۔

4. Ju W, Greene C, Eichinger F, et al. انسانی بیماری میں نقل کی سطح پر سیل کی قسم کی مخصوصیت کی وضاحت کرنا۔ جینوم ریس 2013؛ 23:1862–1873۔

5. Ju W, Nair V, Smith S, et al. گردے کی دائمی بیماری کے بائیو مارکر کے طور پر ایپیڈرمل نمو کے عنصر کی ٹشو ٹرانسکرپٹوم سے چلنے والی شناخت۔ سائنس ٹرانسل میڈ۔ 2015؛ 7:316ra193۔

6. Woroniecka KI، Park A، Mohtat T، et al. انسانی ذیابیطس گردے کی بیماری کا ٹرانسکرپٹوم تجزیہ۔ ذیابیطس. 2011؛60:2354–2369۔

7. وگنس جے ای، پٹیل ایس، شیڈن کے، وغیرہ۔ NFkappaB عمر بڑھنے والے گلوومیرولس میں سوزش، جمنا، اور فائبروسس کو فروغ دیتا ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2010؛ 21:587–597۔

8. پراکورا این، کاواداس پی، کورمان آر، وغیرہ۔ NFkappaB حوصلہ افزائی پیریوسٹن GN میں گردوں کی چوٹ کو فروغ دینے کے لئے انٹیگرین-بیٹا 3 سگنلنگ کو چالو کرتا ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2017؛ 28:1475–1490۔

9. Chang AS، Hathaway CK، Smithies O، Kakoki M. ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر-beta1 اور ذیابیطس نیفروپیتھی۔ ایم جے فزیول رینل فزیول۔ 2016;310:F689–F696۔

10. Mudge SJ، Paizis K، Auwardt RB، et al. غیر فعال ہیمن ورم گردہ کے آٹولوگس مرحلے میں پوڈوسائٹس کے ذریعہ نیوکلیئر فیکٹر کپا بی کو چالو کرنا۔ کڈنی انٹ۔ 2001؛ 59:923-931۔

11. Tomita T، Takano M، Tomita R، et al. NFkappaB کے لیے ٹرانسکرپشن فیکٹر ڈیکو ریمیٹائڈ گٹھیا سے حاصل ہونے والے سائنوویئل سیلز میں سائٹوکائن اور آسنجن مالیکیول کے اظہار کو روکتا ہے۔ ریمیٹولوجی (آکسفورڈ)۔ 2000؛ 39:749-757۔

12. Zambrano S, Möller-Hackbarth K, Li X, et al. GPRC5b اشتعال انگیز ردعمل کو ماڈیول کرتا ہے۔glomerular بیماریوںNF-kappaB پاتھ وے کے ذریعے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2019؛ 30:1573–1586۔

13. Choi M, Schreiber A, Eulenberg-Gustavus C, et al. Endothelial NF-kappaB ناکہ بندی ANCA کی حوصلہ افزائی GN کو منسوخ کرتی ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2017؛ 28:3191–3204۔

14. Zheng L، Sinniah R، Hsu SI. انسانی لیوپس ورم گردہ اور ایک اور غیر پھیلاؤ پروٹینورک گلوومیرولوپیتھی میں متحرک NF-kappaB کا گلوومیرولر اظہار۔ Virchows Arch. 2006؛ 448:172-183۔

15. Takemoto M, He L, Norlin J, et al. گردے کے گلوومیرولس کی نشوونما اور کام میں ملوث جینوں کی بڑے پیمانے پر شناخت۔ ای ایم بی او جے 2006؛ 25:1160–1174۔

16. سلیم ایم اے، اے ہیر ایم، ریزر جے، وغیرہ۔ ایک مشروط طور پر لافانی انسانی پوڈوسیٹ سیل لائن جو نیفرین اور پوڈوسن اظہار کا مظاہرہ کرتی ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2002؛ 13:630-638۔

17. Kisanuki YY، Emoto N، Ohuchi T، et al. اینڈوتھیلیل سیل مخصوص اینڈوتھیلین 1 ناک آؤٹ چوہوں میں کم بلڈ پریشر۔ ہائی بلڈ پریشر. 2010؛ 56:121–128۔

18. McAdoo SP، Pusey CD. اینٹی glomerular تہہ خانے کی جھلی کی بیماری. کلین جے ایم سوک نیفرول۔ 2017؛ 12:1162–1172۔

19. Qi XM، Wang J، Xu XX، et al. FK506 ذیابیطس کے چوہوں میں پوڈوسیٹ نیفرین اور پوڈوسن اظہار کو بہتر بنانے کے ذریعے البومینوریا کو کم کرتا ہے۔ Inflamm Res. 2016؛ 65:103–114۔

20. Wang X، Saso H، Iwamoto T، et al. TIG1 Axl kinase کو چالو کرنے کے ذریعے سوزش چھاتی کے کینسر کی نشوونما اور بڑھنے کو فروغ دیتا ہے۔ کینسر ریس 2013؛ 73:6516–6525۔

21. ہالینڈ SJ، Pan A، Franci C، et al. R428، Axl kinase کا ایک منتخب چھوٹے مالیکیول روکنے والا، ٹیومر کے پھیلاؤ کو روکتا ہے اور میٹاسٹیٹک بریسٹ کینسر کے ماڈلز میں بقا کو طول دیتا ہے۔ کینسر ریس 2010؛70:1544–1554۔

22. Myers SH، Brunton VG، Uniti-Broceta A. AXL inhibitors in cancer: a medicinal chemistry perspective. جے میڈ کیم۔ 2016؛ 59:3593–3608۔

23. Salant DJ، Darby C، Couser WG. چوہوں میں تجرباتی جھلیوں والی گلوومیرولونفرائٹس۔ الگ تھلگ گلوومیرولی اور پورے جانوروں میں گلومیرولر مدافعتی ڈپازٹ کی تشکیل کا مقداری مطالعہ۔ جے کلین انویسٹ۔ 1980؛ 66:71-81۔

24. Berthier CC، Bethunaickan R، Gonzales-Rivera D، et al. کراس پرجاتی ٹرانسکرپشن نیٹ ورک تجزیہ مورین اور انسانی لیوپس ورم گردہ میں مشترکہ سوزش کے ردعمل کی وضاحت کرتا ہے۔ جے امیونول۔ 2012؛ 189:988–1001۔

25. گریسن پی، ایڈی ایس، تارونی جے، وغیرہ۔ گردے کی نایاب بیماریوں میں میٹابولک راستے اور امیونومیٹابولزم۔ این ریم ڈس۔ 2018؛ 77: 1226–1233۔

26. Liu P، Lassen E، Nair V، et al. ٹرانسکرپٹومک اور پروٹومک پروفائلنگ آئی جی اے نیفروپیتھی میں میسنجیئل سیل فنکشن کی بصیرت فراہم کرتی ہے۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2017؛ 28:2961–2972۔

27. Niwa H, Yamamura K, Miyazaki J. ایک ناول یوکرائیوٹک ویکٹر کے ساتھ ہائی ایکسپریشن ٹرانسفیکٹنٹس کے لیے موثر انتخاب۔ جین 1991؛ 108:193-199۔

28. Loefflfler I، Wolf G. ذیابیطس نیفروپیتھی میں اپیٹیلیل سے میسینچیمل منتقلی: حقیقت یا افسانہ؟ خلیات 2015؛ 4:631–652۔

29. ناگپال ایس، پٹیل ایس، آسانو اے، وغیرہ۔ Tazarotene-indused gene 1 (TIG1)، ایک ناولretinoic ایسڈجلد میں رسیپٹر کے جواب دینے والا جین۔ جے انویسٹ ڈرمیٹول۔ 1996؛ 106:269-274۔

30. Jing C, El-Ghany M, Beesley C, et al. پروسٹیٹ کارسنوماس میں Tazarotene-حوصلہ افزائی جین 1 (TIG1) کا اظہار اور ٹیومرجینیٹی سے اس کا تعلق۔ جے نیٹل کینسر انسٹی ٹیوٹ۔ 2002؛ 94:482–490۔

31. ٹیوفیل اے، بیکر ڈی، ویبر ایس این، وغیرہ۔ جگر کے فائبروسس میں بنیادی ریگولیٹر کے طور پر RARRES1 کی شناخت۔ جے مول میڈ (برل)۔ 2012؛ 90:1439–1447۔

32. چن اے، فینگ وائی، لائی ایچ، وغیرہ۔ گھلنشیل RARRES1 پوڈوسیٹ اپوپٹوس کو فروغ دینے کے لیے اکساتا ہے۔glomerular بیماریترقی جے کلین انویسٹ۔ 2020؛ 130:5523–5535۔

33. Zhen Y، Lee IJ، Finkelman FD، Shao WH. Axl ریسیپٹر ٹائروسین کناز کی ٹارگٹڈ روکنا اینٹی GBM-حوصلہ افزائی لیوپس نما ورم گردہ کو کم کرتا ہے۔ جے آٹومیمون۔ 2018؛ 93:37–44۔

34. Tang Y، Harrington A، Yang X، et al. قدیم اور حتمی ہیماٹوپوائٹک خلیوں میں Tie2þ نسب کی شراکت۔ پیدائش 2010؛ 48:563–567