زچگی کے خود کار طریقے سے غیر فعال وائرس کی ویکسینیشن سوروں میں PRRSV کے لیے قوت مدافعت کو بڑھاتی ہے حصہ 1

خلاصہ:

زچگی سے حاصل شدہ قوت مدافعت خنزیر میں اولاد کی بقا اور کامیابی کے لیے ایک اہم جز ہے تاکہ گردش کرنے والے پیتھوجینز جیسے کہ ٹائپ 2 پورسین ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV-2) سے محفوظ رہے۔

اس مطالعے کا مقصد گلٹوں سے خنزیروں میں اینٹی PRRSV مدافعتی کی منتقلی کی تحقیقات کرنا ہے جنہوں نے اکیلے ترمیم شدہ لائیو وائرس (MLV) حاصل کیا (علاج (TRT) 0)، یا دو میں سے کسی ایک کے ساتھ مل کر غیر فعال ویکسین (AIVs، TRT 1 پلس 2)۔ ان گلٹس کے خنزیروں کو دو ہفتے کی عمر میں آٹوجینس PRRSV-2 تناؤ کے ساتھ چیلنج کیا گیا تھا اور ان کے انکولی مدافعتی ردعمل (IR) کا 4 ہفتوں کے بعد ٹیکہ لگانے (dpi) تک جائزہ لیا گیا تھا۔

سیسٹیمیٹک مزاحیہ اور سیلولر IR کا تجزیہ پری فیرو گلٹس میں، piglets میں، پری انوکولیشن، اور 2 اور 4 wpi پر کیا گیا تھا۔ دونوں AIVs نے پھیپھڑوں کی پیتھالوجی میں کمی اور بڑھتے ہوئے وزن سے سوروں کی جزوی طور پر حفاظت کی۔ TRT 1 نے piglet viremia کو بھی کم کیا، جس کی بہترین وضاحت AIV کی حوصلہ افزائی سے گلٹس میں اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے اور ان کی سوروں میں منتقلی سے ہوتی ہے۔ خنزیروں میں، ٹیکہ لگانے سے پہلے، بنیادی نظامی IFN پروڈیوسر CD21 پلس B خلیات تھے۔ 0 سے 4 wpi تک، ان B خلیات کے کردار میں کمی آئی اور CD4 T خلیات بنیادی نظامی IFN- پروڈیوسر بن گئے۔

اچھے زندہ وائرس سے مراد ایسے وائرس ہیں جو بیماری کا سبب نہیں بنتے اور ان کا انسانی جسم کی قوت مدافعت سے ایک خاص تعلق ہوتا ہے۔ زندہ وائرس مدافعتی ردعمل پیدا کرنے کے لیے انسانی مدافعتی نظام کو متحرک کر سکتے ہیں، اس طرح انسانی قوت مدافعت میں اضافہ ہوتا ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ انسانی جسم زندہ وائرس سے متاثر ہونے کے بعد، یہ کچھ ثالث اور سائٹوکائنز جاری کرے گا، جو مدافعتی خلیات کو فعال کر سکتے ہیں، مدافعتی نظام کے کام کو فروغ دے سکتے ہیں، اور جسم کی وائرس کے خلاف مزاحمت کرنے کی صلاحیت کو بڑھا سکتے ہیں۔

اس کے علاوہ، سومی اور قابل عمل وائرس بھی مسابقتی طور پر خلیات پر قبضہ کر سکتے ہیں، جس سے پیتھوجینز کے لیے حملہ کرنا اور دوبارہ پیدا ہونا مشکل ہو جاتا ہے، اس طرح انسانی جسم کو دوسرے انفیکشن سے بچانا پڑتا ہے۔ لہٰذا، مناسب سومی اور زندہ وائرس کا انفیکشن انسانی قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے، لیکن ضرورت سے زیادہ انفیکشن بیماری کا باعث بن سکتا ہے۔ اس لیے روزمرہ کی زندگی میں لوگوں کو زندہ وائرس کے انفیکشن پر قابو پانے اور صحت مند طرز زندگی کے ذریعے قوت مدافعت کو بہتر بنانے پر توجہ دینی چاہیے۔ اس نقطہ نظر سے، ہمیں قوت مدافعت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche نمایاں طور پر قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔ گوشت کی راکھ مختلف قسم کے حیاتیاتی طور پر فعال اجزاء پر مشتمل ہوتی ہے، جیسے پولی سیکرائڈز، دو مشروم اور ہوانگلی وغیرہ۔ یہ اجزاء مدافعتی نظام کے مختلف افعال کو متحرک کرسکتے ہیں۔ سیل جیسے خلیات، ان کی مدافعتی سرگرمی میں اضافہ.

cistanche کے صحت سے متعلق فوائد پر کلک کریں۔

پھیپھڑوں میں، CD8 T خلیات پرائمری تھے اور CD4 T خلیات ثانوی IFN- پروڈیوسر تھے، بشمول پورکین CD8 −CCR7− CD4 T خلیات کا ایک نیا ذیلی سیٹ، ممکنہ طور پر CD4 TEMRA خلیات کے درمیان فرق۔ خلاصہ طور پر، یہ مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ زچگی کی AIV ویکسینیشن PRRSV کے خلاف پہلے سے دودھ چھڑانے والے سوروں کے تحفظ کو بہتر بنا سکتی ہے-2; یہ خنزیروں میں غیرجانبدار اینٹی باڈیز کی منتقلی کی اہمیت کو ظاہر کرتا ہے، اور یہ خنزیروں میں دو نئے مدافعتی خلیوں کے ذیلی سیٹوں کو متعارف کرواتا ہے—IFN- CD21 پلس B خلیات اور CD8 −CCR7− CD4 T خلیات۔

مطلوبہ الفاظ:

زچگی کی ویکسینیشن؛ خود کار طریقے سے غیر فعال ویکسین؛ استثنیٰ کی منتقلی؛ مزاحیہ مدافعتی ردعمل؛ سیل ثالثی مدافعتی ردعمل؛ ٹی خلیات؛ PRRSV; سوائن IFN - B خلیات پیدا کرنے والے؛ CD4 TEMRA خلیات۔

1. تعارف

ستنداریوں میں زچگی سے ماخوذ قوت مدافعت (MDI) ایک خوفناک سمفنی ("ہم آہنگی کی پیچیدگی"—[1]) ہے۔ اس نظام میں، یا سمفنی میں، ایک ماں اپنی اولاد کو مدافعتی تحفظ (عارضی اور/یا پائیدار) یا تو حمل کے دوران نال کے ذریعے، پیدائش کے بعد میمری رطوبتوں کے ذریعے، یا دونوں [2] منتقل کرتی ہے: انسان حمل کے دوران امیونوگلوبولینز حاصل کرتا ہے اور آخر کار ماں کے ذریعے۔ رطوبتیں [3]؛ کتے اور چوہا حمل کے دوران اور میمری رطوبت کے ذریعے امیونوگلوبولینز حاصل کرتے ہیں، اور خنزیر اور دیگر مویشی صرف امیونوگلوبولینز میمری رطوبت کے ذریعے حاصل کرتے ہیں۔

دیگر پرجاتیوں کی طرح، سوروں کو یہ MDI امیونوگلوبلینز، مدافعتی خلیات، اور مدافعتی سے متعلق دیگر مالیکیولز کی شکل میں ملتا ہے [4,5]۔ اگرچہ مختلف بویوں سے امیونوگلوبلین حاصل کیے جا سکتے ہیں (= کراس فوسٹرنگ)، صرف حیاتیاتی مائیں کامیابی کے ساتھ مدافعتی خلیات کو اپنی اولاد میں منتقل کر سکتی ہیں [5]، اور سوروں میں کولسٹرم کی مقدار سے شرح اموات میں نمایاں کمی واقع ہوتی ہے اور کارکردگی بہتر ہوتی ہے [6] ] ان مدافعتی خلیوں میں B خلیات [7]، نیز مختلف T-cell ذیلی سیٹ-CD4، CD8، اور بنیادی طور پر T-cell ریسیپٹر (TCR) - δ T خلیات [8] شامل ہیں۔

ان T-سیل ذیلی سیٹوں کو پھر ان کے تفریق کے مرحلے اور ہومنگ پیٹرن کی بنیاد پر مزید ممتاز کیا جا سکتا ہے۔ خنزیروں میں، CD8 زنجیر کا استعمال CD8 − naïve کو CD8 پلس اینٹیجن کے تجربہ کار یا میموری CD4 T خلیات [9–11] سے فرق کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ کیموکین ریسیپٹر (CCR) 7 کا اظہار مزید CCR7 پلس لمف نوڈ ہومنگ کو CCR7− پیریفرل ٹشو ہومنگ ٹی سیلز [12] سے ممتاز کرتا ہے۔ ایک مشترکہ CD8/CCR7 تجزیہ کے ساتھ، پھر ہم متعدد مختلف T-cell ذیلی سیٹوں میں فرق کر سکتے ہیں: CD8 −CCR7 پلس naïve CD4 T خلیات، CD8 پلس CCR7 پلس سنٹرل میموری (TCM) CD4 T خلیات، اور CD8 پلس CCR7− انفیکٹر میموری (TEM) ) CD4 T خلیات؛ پیریفرل ٹشو ہومنگ CCR7− اور لمف نوڈ ہومنگ CCR7 پلس CD8 T خلیات، اور CD8 −CCR7−، CD8 پلس CCR7−، اور CD8 پلس CCR7 پلس TCR-δ T خلیات۔
جب کہ ہم نے پہلے اطلاع دی تھی کہ پورسین TCR-δ T خلیات اپنے TCR-ہم منصبوں کے مقابلے میں الٹا ہومنگ پیٹرن رکھتے ہیں، ان مختلف ذیلی سیٹوں کے مخصوص کردار کو ابھی بیان کرنا باقی ہے [13]۔ دونوں، مدافعتی خلیوں کے سبسیٹ اور اینٹی باڈیز کو مختلف پیتھوجینز سے بچانے کے لیے اولاد میں منتقل کیا جاتا ہے [4,5]۔

کئی دہائیوں سے، خنزیر کے لیے سب سے زیادہ تباہ کن روگجن پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV، [14,15]) رہا ہے۔ PRRSV کی دو اہم اقسام موجود ہیں— قسم 1 اور 2 (PRRSV-1 اور 2)؛ ان کی اعلی تنوع اور مدافعتی صلاحیتیں PRRSV کو ایک مشکل بیماری بناتی ہیں، جس کی وجہ سے سوائن کی صنعت کو زبردست معاشی نقصان ہوتا ہے [16] اور اب تک، جبکہ ویکسین PRRSV کے خلاف جزوی تحفظ فراہم کرتی ہیں، لیکن وہ اس بیماری پر مکمل طور پر قابو نہیں پا سکے ہیں۔

ویکسین کی دو اہم اقسام PRRSV — تبدیل شدہ لائیو وائرس (MLV) ویکسینز اور غیر فعال ویکسین، بنیادی طور پر خودکار غیر فعال ویکسین (AIVs) سے تحفظ کے لیے دستیاب ہیں۔ تاہم، دونوں اقسام کو اپنے چیلنجوں کا سامنا ہے۔

انتہائی امیونوجینک MLV ویکسین تیار کرنے میں طویل وقت کا مطلب ہے کہ وہ عام طور پر فارم میں مروجہ PRRSV تناؤ سے زیادہ متضاد ہوتی ہیں، اور جب کہ AIVs کو ان فارم میں مروجہ تناؤ کے خلاف ہدایت کی جاتی ہے، ان کی غیر فعال نوعیت انہیں عام طور پر کم امیونوجینک بناتی ہے۔

یہ چیلنجز خاص طور پر نوجوان خنزیروں میں تحفظ کی کمی کا باعث بنتے ہیں جو کہ تین عوامل سے منسوب کیے جا سکتے ہیں: پہلا، PRRSV کی زیادہ تبدیلی کی شرح متضاد تحفظ کو محدود کرتی ہے، لہذا یہ MLV ویکسین کی افادیت کو کم کرتی ہے۔ دوسرا، اس کی مدافعتی صلاحیت کمزور ویکسین کو محدود کرتی ہے (مثال کے طور پر، AIVs) اور حفاظتی مدافعتی ردعمل کی شمولیت میں اس کی تاخیر نوجوان خنزیر کو خاص طور پر حساس بنا دیتی ہے [17]۔ اور تیسرا، PRRSV کے خلاف مدافعتی ردعمل کے بارے میں ہماری سمجھ، خاص طور پر سوروں میں، محدود ہے۔ لونگ اور لنی نے PRRSV [18,19] کے مدافعتی ردعمل کی عمومی تفہیم کے حوالے سے ایک اچھا جائزہ پیش کیا۔

بنیادی طور پر PRRSV کے لیے ویکسین کے ذریعے مدافعتی قوت قائم کرنے کے لیے بڑھے ہوئے وقت کی بنیاد پر، سوائن بنانے والے اکثر گلٹس اور سوز کو ٹیکہ لگاتے ہیں تاکہ خنزیروں میں قوت مدافعت کی منتقلی کو ممکن بنایا جا سکے۔ PRRSV-1 قسم کے خلاف کمرشل MLV کا استعمال کرتے ہوئے زچگی کی ویکسینیشن پر تحقیق نے 2 یا 3-ہفتہ پرانے خنزیروں کی ویکسینیشن میں رکاوٹ نہیں ڈالی اور اس نے خنزیروں کو ہیٹرولوجس چیلنج سے جزوی طور پر تحفظ فراہم کیا [20]۔ ویکسینیشن کی اس حکمت عملی نے PRRSV-1-مخصوص IgG، IgA، اور انٹرفیرون (IFN) - کولسٹرم اور ویکسین شدہ بویوں کے دودھ میں خارج ہونے والے خلیات کی حوصلہ افزائی کی۔ یہ IFN پیدا کرنے والے خلیے اینٹی وائرل ردعمل میں انتہائی اہم ہیں، بشمول PRRSV [19,21]۔
اس ویکسینیشن نے سیرم اینٹی PRRSV IgG کی حوصلہ افزائی بھی کی، جو چھ ہفتے کی عمر کے بعد بغیر ٹیکے لگائے گئے سوروں کے لیے قابل شناخت تھا اور چیلنج سے پہلے ویکسین شدہ سوروں میں مستحکم رہا۔ ابھی تک، IFN- secreting خلیات کو پہلے سے دودھ چھڑانے والے piglets میں پس منظر کی سطح سے ممتاز نہیں کیا جا سکتا ہے [22]۔ اگرچہ MLVs کا استعمال ایک صنعتی معیار ہے، MLV پرائم اور AIV فروغ دینے والی ویکسینیشن کا مشترکہ ویکسینیشن طریقہ MLVs اور AIVs کو آزادانہ طور پر استعمال کرنے کے ہر منفی پہلو پر قابو پانے کے لیے امید افزا لگتا ہے۔

لہذا، اس مطالعے کا بنیادی مقصد نہ صرف یہ طے کرنا تھا کہ آیا، بلکہ یہ بھی کہ دو مختلف AIVs (علاج (TRT) 1 پلس 2) کے ساتھ زچگی کی ویکسینیشن اکیلے صنعت کے معیاری MLV ویکسینیشن کو کیسے فروغ دے سکتی ہے (TRT 0 )، ابتدائی PRRSV2 چیلنج سے اولاد کی بہتر حفاظت کے لیے۔ اس مقصد کے لیے، ہم نے ان گلٹس میں ویکسین سے متاثر مزاحیہ اور سیل ثالثی مدافعتی (CMI) کے ردعمل کا مطالعہ کیا اور ہم نے 2 ہفتے کی عمر میں ان گروپوں میں سے ہر ایک کے اندر گلٹس سے ابتدائی دودھ چھڑانے والوں کو چیلنج کیا۔ ان خنزیروں کے نظامی اور مقامی مدافعتی ردعمل کی پیروی 2-4 ہفتوں تک کی گئی۔

ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ AIV بوسٹ ویکسینیشن 2 ہفتے کی عمر میں PRRSV چیلنج سے خنزیروں کے تحفظ کو بہتر بنا سکتی ہے اور ہم بنیادی مدافعتی میکانزم کی بھی نشاندہی کرتے ہیں اور ان نوجوان خنزیروں میں اینٹی PRRSV مزاحیہ اور CMI ردعمل کو نمایاں کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، ہم نے خنزیروں میں سیل کی دو نئی اقسام کا پتہ لگایا: (1) CD8 −CCR7− CD4 T خلیات جو کہ IFN کی پیداوار میں مضبوطی سے حصہ ڈالتے ہیں برونکولوولر لیویج (BAL)-ممکنہ CD4 TEMRA خلیات، اور (2) ایک بڑا ذریعہ مخالف PRRSV ردعمل خاص طور پر piglets میں — IFN- B خلیات پیدا کرنے والے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 مطالعہ ڈیزائن، جانور، اور نمونہ پروسیسنگ

اس مطالعے کا مقصد PRRSV-2 کے خلاف دودھ چھڑانے والے سوروں میں حفاظتی استثنیٰ پر مختلف زچگی PRRSV2 ویکسینیشن سیریز کے اثر کا جائزہ لینا تھا۔ مطالعہ سے پہلے، نارتھ کیرولائنا کی ایک پورک کمپنی سے گردش کرنے والا PRRSV-2 تناؤ (پابندی کے ٹکڑے کی لمبائی پولیمورفزم (RFLP)، 1-7-4) کو الگ تھلگ اور دو آزاد حیاتیاتی سائنس کمپنیوں کے ذریعے پھیلایا گیا تھا۔ انہوں نے دو الگ الگ خودکار ویکسین تیار کیں۔ دونوں ویکسین مختلف ملکیتی اجزاء پر مشتمل تھیں لیکن ایک ہی غیر فعال 1-7-4 PRRSV-2 تناؤ پر مشتمل تھیں۔ اس مطالعہ کا ڈیزائن تصویر 1 میں دکھایا گیا ہے۔

فرونگ سے پہلے دونوں ویکسینیشن چار خوراکوں کی ایک سیریز میں اندرونی طور پر لگائی گئی تھیں: نارتھ کیرولائنا پورک کمپنی کارپوریٹ ویکسینیشن شیڈول کے ذریعہ، ایک تجارتی بونے والے فارم میں 46 PRRSV-2 منفی گلٹس کو Ingelvac PRRS MLV ویکسین (Boehringet Vrenicamed Ingelvac) کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ GmbH، جرمنی) افزائش سے نو ہفتے پہلے۔ اس مطالعے کے دوران مستقل اصطلاحات کو برقرار رکھنے کے لیے، اندراج شدہ جنسی طور پر بالغ خواتین خنزیروں کو (یہاں گلٹ کے طور پر بیان کیا گیا ہے) کو گلٹ کہا جائے گا یہاں تک کہ ان کی افزائش اور پیدائش کے بعد بھی (جسے عام طور پر سوز کہا جاتا ہے)۔ افزائش سے چار ہفتے پہلے، سیرم کے لیے تمام گلٹس سے خون کے نمونے اکٹھے کیے گئے اور پھر گلٹس کو تین علاجوں میں الاٹ کیا گیا: TRT 0 (صرف ایم ایل وی ویکسینیشن)؛ TRT 1 (MLV ویکسینیشن کے علاوہ آٹوجینس (1-7-4) غیر فعال ویکسین کی 4 خوراکیں 1)؛ یا TRT 2 (MLV ویکسینیشن پلس آٹوجینس (1-7-4) غیر فعال ویکسین 2 کی 4 خوراکیں)۔

Gilts that did not breed were dropped from the study. 3 weeks before farrowing, blood was collected from pregnant gilts for the isolation of serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). At this point, five gilts remained in both TRT 0 and TRT 2; nine gilts remained in TRT 1. Within these gilts, we selected three gilts per group to provide the piglets for the challenge study. The selected gilts had an adequate litter size (>7) اور سب سے زیادہ سیرم فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن (FFN) ٹائٹر (بنیادی مدافعتی معیار) اور سب سے زیادہ CD4 T-cell IFN- رسپانس (ثانوی مدافعتی معیار) ان کے گروپ کے اندر AIV چیلنج تناؤ کے خلاف۔ TRT 1 پلس 2 کے لیے، یہ FFN ٹائٹرز 1:4 سے 1:128 تک ہیں۔ چونکہ TRT {{10}} میں AIV سٹرین کے خلاف کوئی ٹائٹرز نہیں تھے، اس لیے ہم نے سب سے زیادہ اینٹی MLV ٹائٹرز والے گلٹس کا انتخاب کیا۔ یہ ٹائٹرز 1:16 سے 1:32 تک تھے۔ تمام منتخب گِلٹس کے اندر IFN- ردعمل کل CD4 T سیلز کے 0.09–0.21 فیصد تک ہے۔

ان میں سے ہر ایک گلٹ نے چیلنج اسٹڈی کے لیے چار سور فراہم کیے ہیں۔ 2 ہفتے کی عمر میں (= 0 ہفتوں کے بعد انفیکشن، wpi)، سب سے زیادہ اوسط لیٹر وزن والے چار خنزیروں کو چیلنج اسٹڈی کے لیے منتخب کیا گیا اور نارتھ کیرولینا اسٹیٹ یونیورسٹی کی بائیوسیکیوریٹی لیول 2 ہاؤسنگ سہولیات میں منتقل کیا گیا ( NCSU) لیبارٹری اینیمل ریسورسز (LAR) (Raleigh، North Carolina). یہاں، وہ بے ترتیب طور پر ایک ہی کمرے میں چھ قلموں میں سے ایک کو تفویض کیے گئے تھے۔ دو سور فی علاج ہر قلم میں رکھے گئے تھے (ایک فی گلٹ)۔ خلاصہ طور پر، مطالعہ میں کل 36 خنزیر تھے جن میں فی علاج گروپ میں 12 سور تھے۔

During the study, four piglets died before the end of the study: three piglets from one gilt (TRT 0) died within 30 h of arrival at LAR and were dropped from the study. Additionally, one pig (TRT 2) was euthanized between weeks three and four of the study due to high fever (>106◦ F) اور جسمانی محرک کے ردعمل کی کمی۔ اس سور کو ہفتہ 3 تک تمام تجزیوں میں شامل کیا گیا تھا اور اس کے پھیپھڑوں کا پیتھالوجی کے لیے جائزہ لیا گیا تھا۔ اس جانور کے لیے necropsy میں کوئی فلو cytometry (FCM) تجزیہ نہیں ہوا۔

دودھ چھڑانے اور NCSU میں پہنچنے کے ایک دن بعد، تمام خنزیروں کو 1 × 105.5 PRRSV-2 وائرل ذرات (خودکار تناؤ 1-7-4) 1 ملی لیٹر 1X فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS، Corning، Corning) میں داخل کرکے ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ NY، USA) (500 µL/نتھنا)، 30 سیکنڈ تک سوپائن پوزیشن میں برقرار رہے اور اپنے قلم پر واپس آگئے۔ آدھے جانور 2 ڈی پی آئی پر اور باقی جانور 4 ڈی پی آئی پر قربان کئے گئے۔ necropsy میں، BAL، پھیپھڑوں، اور tracheobronchial لمف نوڈس (TrBr LNs) کو جمع کیا گیا اور اس پر کارروائی کی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [13]۔

ٹیکہ لگانے سے پہلے نمونے لینے (0 wpi) اور پھر ہفتہ وار، جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ سیرم کو سیرم سیپریٹر ٹیوبز (SST) ٹیوبوں (Becton Dickinson (BD) Biosciences، San Jose, CA, USA) میں جمع کیا گیا تھا اور پی بی ایم سی تنہائی کے لیے خون ہیپرین ٹیوبز (بی ڈی بایوسینسز) میں جمع کیا گیا تھا۔ اینیمل ہاؤسنگ نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ گائیڈ برائے تحقیق جانوروں کے لیے تھی۔ خنزیر کو پانی تک لامحدود رسائی حاصل تھی، انہیں ایک عبوری دودھ چھڑانے والی خوراک کھلائی گئی، پھر روزانہ دو بار باقاعدہ خوراک، اور 12-گھنٹہ روشنی/تاریک چکر کے ساتھ 83 ◦F پر برقرار رکھا گیا۔ تجرباتی طریقہ کار کو NC اسٹیٹ یونیورسٹی انسٹیٹیوشنل اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی (IACUC) ID# 17-166A (29 نومبر 2017) نے منظور کیا تھا۔

2.2 وائرس کا پھیلاؤ، ٹائٹریشن، اور تشخیص

PRRSV-2 وائرل الگ تھلگ (تناؤ، 1-7-4) کو RPMI-1640 میں PRRSV-منفی پورسائن الیوولر میکروفیجز (PAMs) پر پھیلایا گیا تھا، 1× L-glutamine کے ساتھ (کارننگ، کارننگ، NY) , USA) 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS) (VWR, Radnor, PA, USA) اور 1X اینٹی بائیوٹک-اینٹیمائکوٹک (کارننگ) (جسے RPMI-مکمل کہا جاتا ہے) T-75 فلاسکس میں تقریباً 30 گھنٹے کے لیے فراہم کیا گیا (سارسٹیڈ، نمبربریچٹ، جرمنی) جب تک سائٹوپیتھک اثر نہیں دیکھا گیا۔ فلاسکس کو ایک بار منجمد پگھلایا گیا تھا اور سپرنٹنٹ کو 10 منٹ کے لئے 4 ◦C پر 2200 g پر کاتا گیا تھا۔ وائرس کو مرتکز کرنے کے لیے، سپرنٹنٹ کو پھر 36 ملی لیٹر نلجین سینٹری فیوج ٹیوبز (تھرمو فشر سائنٹیفک، روچیسٹر، NY، USA) میں منتقل کیا گیا اور اسے سوروال 100S الٹرا سینٹری فیوج (سوروال، تھرمو فشر سائنٹیفک)، نیو ٹاؤن، CT، USA میں کاتا گیا۔ ,000 g 4 ◦C پر 2 گھنٹے کے لیے۔

سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیا گیا، اور گولی کو میڈیا میں دوبارہ معطل کر دیا گیا (RPMI مکمل) اور 100 µL aliquots میں −80 ◦C پر محفوظ کر دیا گیا۔ وائرل اسٹاک سلوشنز کے ٹشو کلچر انفیکشن ڈوز 50 (TCID50) ٹائٹرز کا تعین PAMs کو استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (اسپیئر مین – کاربر TCID50 طریقہ تشخیصی ٹیسٹوں کے OIE مینوئل کے مطابق [عالمی ادارہ برائے حیوانات صحت، پہلے آفس انٹرنیشنل ڈیس ایپیزوٹیز )، "باب 2.8.7 پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم"، ٹیر مین، نمبر مئی 2015، 2015]۔

2.3۔ ویرمیا

الگ تھلگ سیرم کا تجزیہ نارتھ کیرولائنا پورک کمپنی کی تشخیصی لیبارٹری نے ریورس ٹرانسکرپشن کوانٹیٹیٹو پولیمریز چین ری ایکشن (RT qPCR) کے ساتھ 5X MagMAX پیتھوجین RNA/DNA کٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک) اور VetMAX PRRSV qPCR Kiter (ایف پی سی آر) کے ساتھ کیا تھا۔ آئیووا سٹیٹ یونیورسٹی ویٹرنری ڈائیگنوسٹک لیبارٹری (ISU VDL, Ames, IA, USA) کے ذریعہ طے شدہ طور پر ویکسین شدہ گلٹ سیرم PRRSV- منفی (qPCR) تھا۔ PRRSV کے لیے PRRSV-منفی (Ctneg=37) سمجھی جانے والی Ct قدر سے نمونے کی Ct قدر کو گھٹا کر ∆Ct اقدار کا حساب لگایا گیا: ∆Ct=37 − Ctx۔

2.4 اینٹی باڈی کی توثیق اور مثبت نمونوں کا تعین غیر جانبدار کرنا

گلٹس اور خنزیر کے سیرم کے نمونے ساؤتھ ڈکوٹا اسٹیٹ یونیورسٹی اینیمل ریسرچ اینڈ ڈائیگنوسٹک لیبارٹری (بروکنگز، ایس ڈی) کو بھیجے گئے جنہوں نے FFN اور 1-7-4 ٹیکہ لگانے والے تناؤ کا استعمال کرتے ہوئے PRRSV-2 کو نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی (NA) کا تعین مکمل کیا۔ ایک مثبت نتیجہ فلوروسینٹ فوکس بنانے والی اکائیوں کی تعداد میں 90 فیصد یا اس سے زیادہ کمی کے ساتھ سب سے زیادہ سیرم کی کمزوری ہے [23]۔

2.5 Necropsy کے طریقہ کار، اسکورنگ، اور ٹشو سیل الگ تھلگ

Necropsy (2 یا 4 wpi) میں، جانوروں کو یوتھاسول کے مہلک انٹراوینس انجیکشن (کوویٹریس، MW، 390 mg/mL pentobarbital، 50 mg phenytoin/mL) کے ذریعے قربان کیا گیا۔ پھر، پھیپھڑوں، thymus، اور TrBr LNs کی کٹائی کی گئی۔

پھیپھڑوں کے لیے، ڈورسل اور وینٹرل تصاویر لی گئیں۔ پھیپھڑوں کو 1 × پی بی ایس کے ساتھ برونکیل الیوولر لیویج (BAL) کو جمع کرنے کے لئے فلش کیا گیا تھا اور ہسٹولوجی کے لئے کل پانچ نمونے لئے گئے تھے: ایک ایک دائیں اور بائیں کاڈل لابس، دائیں اور بائیں درمیانی لابس اور پھر ایکسیسری لوب سے۔ ہسٹولوجی کے نمونے Formaldehyde/Zn fixative (الیکٹران مائیکروسکوپی سائنسز، Hatfield، PA) میں 24 گھنٹے کے لیے طے کیے گئے، 70 فیصد ایتھنول میں منتقل کیے گئے، اور ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) سے داغے گئے۔ داغدار سلائیڈز (ہسٹولوجی) اور پھیپھڑوں کی تصاویر (مجموعی پیتھالوجی) ISU VDL کو بھیجی گئی تھیں اور ایک ویٹرنری تشخیصی پیتھالوجسٹ نے اسکور کیا تھا جو علاج اور گردے کی تاریخوں سے اندھا ہو گیا تھا۔ پھیپھڑوں کے گھاووں اور بیچوالا نمونیا کی اسکورنگ کی گئی تھی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [24]۔

نمونیا سے متاثرہ پھیپھڑوں کی فیصد کے لیے پھیپھڑوں کی تصاویر کے ڈورسل اور وینٹرل ویوز کا جائزہ لیا گیا۔ خاص طور پر، نمونیا کی فیصد کا اندازہ ہر پھیپھڑوں کے لاب کے لیے بصری طور پر لگایا گیا تھا، اور پورے پھیپھڑوں کے لیے کل فیصد کا حساب پھیپھڑوں کے کل حجم کے نسبت ہر لاب کے وزنی تناسب کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ چار کرینیووینٹرل لابس میں سے ہر ایک 10 فیصد، لوازماتی لاب 5 فیصد، اور ہر دو کاڈل لابس کل پھیپھڑوں کے 27.5 فیصد کی نمائندگی کرتا ہے۔

پھیپھڑوں کے ہسٹوپیتھولوجی سیکشنز کا مائکروسکوپک گھاووں کے لیے آنکھ بند کر کے معائنہ کیا گیا اور ہر لاب کو بیچوالا نمونیا کی شدت کی بنیاد پر ایک تخمینہ اسکور دیا گیا جیسا کہ: 0=کوئی خوردبین گھاو نہیں؛ 1=کم سے کم بیچوالا نمونیا؛ 2=ہلکا بیچوالا نمونیا؛ 3=اعتدال پسند بیچوالا نمونیا؛ 4=وافر مقدار میں بیچوالا نمونیا؛ 5=شدید، ملٹی فوکل انٹرسٹیشل نمونیا؛ 6=شدید، پھیلا ہوا بیچوالا نمونیا۔ تمام جمع شدہ ٹشوز (پھیپھڑے، تھائمس اور TrBr LNs) کے لیے، ٹشو کو چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹ کر سٹینلیس سٹیل کے راؤنڈ ڈرین سٹرینرز (گرینجر، لیک فاریسٹ، IL، USA) کے ذریعے 50 ملی لیٹر ٹیوبوں میں دبایا جاتا تھا جس میں برف سے ٹھنڈا پی بی ایس ہوتا ہے۔ سنگل سیل معطلی ریشے دار جھنڈوں کو 40 µm فلٹرز (BD بایوسینس، سان جوس، CA، USA) کے ساتھ فلٹر کیا گیا تھا۔

2.6۔ پیریفرل بلڈ آئسولیشن، وائرل محرک، اور IFN- FCM سٹیننگ/تجزیہ

PBMC الگ تھلگ Ficoll-Paque density centrifugation (GE Healthcare, Uppsala, Sweden) اور SepMate-50 ml tubes (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada) کا استعمال کرتے ہوئے مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے ذریعے انجام دیا گیا تھا۔ PBMC اور سنگل سیلز معطلی سیل شمار CASY سیل کی گنتی کے نظام (Schärfe System، اب: Roche Innovatis AG، Bielefeld، Germany) پر مکمل کیے گئے تھے۔ IFN- پروڈکشن پرکھ کے لیے، 5 × 105 PBMCs اور پھیپھڑوں سے لیمفوسائٹس، اور TrBr LNs کو 100 µl RPMI میں ایک 96-کنویں گول نیچے پلیٹ (کارننگ) میں آٹھ نقلوں میں چڑھایا گیا تھا اور رات بھر آرام کیا گیا تھا۔ 37◦ C اور 5 فیصد CO2 پر انکیوبیٹر۔ اگلی صبح 100 µL RPMI مکمل جس میں PRRSV سٹرین 1-7-4 (انفیکشن کی ضرب، MOI=0.1) ہر کنویں میں شامل کیا گیا تھا۔ پلیٹیں وائرل محرک کے 24 گھنٹے کے لئے انکیوبیٹر میں واپس کردی گئیں۔

کلچر کے آخری 4 گھنٹے کے لیے، monensin (5 µg/mL، Alfa Aesar، Haverhill، MA، USA) کو سیلز سے IFN کی رہائی کو روکنے کے لیے شامل کیا گیا تھا۔ 24 گھنٹے کے انکیوبیشن کی تکمیل پر، نقلیں جمع اور داغ دار ہو گئیں جیسا کہ جدول 1 میں بتایا گیا ہے۔ CytExpert سافٹ ویئر (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے Cytoflex پر اوسطاً 276,756 سنگل زندہ لیمفوسائٹس (SLLs) ریکارڈ کیے گئے۔ ڈیٹا تجزیہ FlowJo ورژن 10.6.1 (FLOWJO LLC) کے ساتھ کیا گیا تھا۔ IFN- ردعمل کے تجزیہ کے لیے گیٹنگ کا درجہ بندی PBMC کے لیے اعداد و شمار 4 اور 5 میں اور BAL، پھیپھڑوں کے ٹشوز، اور TrBr LNs کے لیے ضمنی شکل S1 اور شکل 7 میں دکھایا گیا ہے۔

2.7۔ شماریاتی تجزیہ

گراف پیڈ پرزم 8 (گراف پیڈ سافٹ ویئر، سان ڈیاگو، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی تجزیے کیے گئے۔ مکمل ڈیٹا سیٹ والے ڈیٹا کا تجزیہ یا تو دو طرفہ (مطالعہ کے دوران) یا یک طرفہ (نیکروپسی میں) ANOVA کے ذریعے کیا گیا۔ گمشدہ ڈیٹا پوائنٹس کے ساتھ ڈیٹا (بنیادی طور پر 2 ڈی پی آئی پر 50 فیصد خنزیروں کی نیکراپسی کی وجہ سے) مخلوط اثرات کے ماڈل (محدود زیادہ سے زیادہ امکان، REML) کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ تمام متعدد موازنہ ڈنیٹ کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ کیے گئے تھے۔ ڈیٹا کی مثال وائلن پلاٹ کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی جس میں تقسیم، انفرادی پوائنٹس، میڈین (جیسا کہ قابل اطلاق، ڈیشڈ بلیک لائن)، اور 25 ویں/75 ویں وقفے (بطور قابل اطلاق، رنگین لائن) دکھائے گئے۔ گلٹ اور piglet nAb کی سطحوں کے درمیان ارتباط کے تجزیے پیئرسن کوریلیشن گتانک اور دو دم والے 95 فیصد اعتماد کے وقفے کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔

3. نتائج

3.1 مطالعہ کے ڈیزائن اور ویکسین کی افادیت—طبی علامات، ویرمیا، وزن میں اضافہ، اور پھیپھڑوں کی پیتھالوجی

مطالعہ کیا گیا جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ PRRSV ٹیکہ لگانے پر، خنزیروں میں ہلکی PRRSV علامات ظاہر ہوتی ہیں جو انفیکشن کے 3-4 دنوں کے اندر شروع ہوتی ہیں—بخار [بنیادی طور پر 1 wpi، dns پر]، سستی، کھانے کا کم استعمال، ہلکی کھانسی/چھینک آنا۔ ان علامات میں کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا اور وہ necropsy تک مختلف ڈگریوں تک برقرار رہے۔ شکل 2 ویرمیا، ہفتہ وار جسمانی وزن میں اضافے کے ساتھ ساتھ مجموعی اور ہسٹوپیتھولوجی کے اسکورز کی وضاحت کرتا ہے۔

جیسا کہ شکل 2A میں دکھایا گیا ہے، تمام خنزیر دودھ چھڑانے کے وقت PRRSV-2 منفی تھے اور PRRSV-2 کے ساتھ انٹراناسل ٹیکہ نے ایک ویرمیا پیدا کیا جو 2 wpi پر پہنچ گیا۔ اگرچہ TRT 0 اور TRT 2 کے درمیان ویرمیا میں کوئی فرق نہیں تھا، TRT 1 میں پہلے دو ہفتوں میں TRT 0 کے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ویرمیا تھا۔ تمام گروپوں میں خنزیر کے وزن میں اضافہ پہلے تین ہفتوں تک بہت یکساں تھا۔ پھر بھی، مطالعہ کے اختتام پر—اور TRT 0—TRT 2 اور TRT 1 کے مقابلے میں ہفتہ وار وزن میں نمایاں طور پر زیادہ اضافہ ہوا—شکل 2B۔ خاص طور پر، جب کہ پھیپھڑوں کے پیتھالوجی کو عام طور پر PRRSV انفیکشن میں حل کیا جاتا ہے اور اس وجہ سے 4 dpi (dns) پر گروپوں کے درمیان مماثلت تھی، دونوں زچگی AIV ویکسینیشن، لہذا TRT 1 پلس 2 نے پھیپھڑوں کی پیتھالوجی کو 2 wpi پر نمایاں طور پر کم کیا: دونوں نے فیصد کی سطح کو کم کیا۔ میکروسکوپک گھاووں اور/یا بیچوالا نمونیا (شکل 2C، D)۔ TRT 0 سے پھیپھڑوں میں میکروسکوپک پھیپھڑوں کے گھاووں کا پھیلاؤ 20–70 فیصد کے درمیان تھا ; اس کے برعکس، TRT 1 پلس 2 میں زیادہ تر خنزیروں میں پھیپھڑوں کے زخم 20 فیصد سے کم تھے—شکل 2C۔ اسی طرح، جبکہ TRT 0 سوروں سے پھیپھڑوں میں بیچوالا نمونیا کے لیے میڈین ہسٹوپیتھولوجی کا اسکور تین تھا، یہ TRT 1 کے لیے بالترتیب 1.8 اور TRT 2 کے لیے 1.2 تھا۔ TRT 0 کے مقابلے میں، یہ اہمیت کی طرف رجحان کو ظاہر کرتا ہے (p=0.07) اور AIV-ویکسین شدہ گلٹس سے خنزیروں میں پھیپھڑوں کی ہسٹوپیتھولوجی میں نمایاں کمی—Figure 2D۔ یہ اعداد و شمار یہ ظاہر کرتے ہیں کہ AIV ویکسینیشن viremia اور پھیپھڑوں کی پیتھالوجی کو نمایاں طور پر کم کر سکتی ہے، اس کے علاوہ، وہ یہ بھی ظاہر کرتے ہیں کہ PRRSV-2 کے خلاف زچگی کی AIV ویکسینیشن 2-ہفتہ پرانے خنزیر کی قوت مدافعت کو بڑھا سکتی ہے۔

3.2 زچگی کو بے اثر کرنے والی اینٹی باڈیز کی شمولیت اور ان کی سوروں میں منتقلی۔

گلٹس اور ان کی اولاد میں مزاحیہ مدافعتی ردعمل کی شمولیت کا تجزیہ NA FFN ٹائٹرز (شکل 3) کا تعین کرکے کیا گیا۔

MLV کے ساتھ تمام گروپوں کی ویکسینیشن نے NA ٹائٹرز کو چار اور 64 کے درمیان گِلٹس میں شامل کیا جس میں تین گروپوں (dns) کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ اس کے برعکس، جب کہ اکیلے MLV ویکسینیشن (TRT 0) میں ہیٹرولوگس 1-7-4 تناؤ کے خلاف NAs شامل نہیں تھے، دونوں AIV بوسٹ ویکسینیشن نے 1:16 تک (TRT 2 کے لیے) اور یہاں تک کہ 1 کے NA ٹائٹرز کی حوصلہ افزائی کی۔ :128 (TRT 1 کے لیے)—شکل 3A۔

یہ سیرم این اے زچگی کے طور پر خنزیروں میں منتقل کیے گئے تھے (شکل 3B): جب کہ TRT 0 piglets نے 0 wpi پر NA ٹائٹرز نہیں دکھائے تھے، TRT 1 اور TRT 2 piglets کے پاس سیرم NAs تھے تاکہ تناؤ 1-7-4 سے پہلے انفیکشن جو براہ راست زچگی کے NA کی سطح کے ساتھ منسلک ہے (شکل 3C, r=0.886, p < 0.0001)۔ یہ NA ٹائٹرز پہلے دو ہفتوں میں 4 wpi کے مستحکم ہونے سے پہلے کم ہوئے۔ اس کے باوجود، TRT 0 کے مقابلے میں، AIV-Vaccinated gilts (TRT 1 پلس 2) کے خنزیروں میں چیلنج سے پہلے ہی نمایاں طور پر زیادہ سیرم NA ٹائٹرز تھے اور یہ بڑھے ہوئے ٹائٹرز 2–3 wpi تک جاری رہے، اس لیے 4-5 ہفتے کی عمر تک — Figure 3B

For more information:1950477648nn@gmail.com