Melatonin ہائی بلڈ پریشر والے چوہوں کے گردوں میں T لیمفوسائٹ کی دراندازی کو روکتا ہے، جو کہ زیادہ نمک والی خوراک سے پیدا ہوتا ہے، CXCR3 Ligand Chemokines کے اظہار کو روک کر

مزید معلومات کے لیے:ali.ma@wecistanche.com

ایریل بیئر¹، راون خشاب²، یہوناتن شرابی^1,2,3، ایہود گراسمین^1,2,3اور Avshalom Leibowitz^1,2,3,*

¹میڈیسن ڈی، چیم شیبا میڈیکل سنٹر، تل ہاشومر 5262000، اسرائیل؛ arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS)؛ Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (ای جی)² Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com³سیکلر فیکلٹی آف میڈیسن، تل ابیب یونیورسٹی، تل ابیب 6997801، اسرائیل*

خلاصہ: پچھلے مطالعہ میں، ہم نے اس کا مظاہرہ کیاmelatoninروکتا ہےگردہآکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرکے نمک کی حوصلہ افزائی ہائی بلڈ پریشر ماڈل میں نقصان۔ ہم نے قیاس کیا کہ اس اثر میں میلاٹونن کی امیونوموڈولیٹری خصوصیات شامل ہیں۔ Vivo Study-Dahl میں نمک سے حساس (DSS) چوہوں کو فیڈ نارمل چاؤ، زیادہ نمک والی خوراک (HSD)، یا HSD اورmelatonin(30 ملی گرام/کلوگرام/دن) ان کے پانی میں آٹھ ہفتے۔گردےفلو سائٹومیٹری (CD3 پلس CD4 پلس اور CD3 پلس CD8 پلس) اور لیمفوسائٹ کیموآٹریکٹنٹ (بنیادی طور پر CXCL) کے ذریعے فوری طور پر لیمفوسائٹ تنہائی اور خصوصیت کے لیے کاٹا گیا تھا۔کیموکائنز) جین ایکسپریشن اسٹڈیز۔ وٹرو اسٹڈی چوہا میں، میسنجیل سیلز (RMC) کو بغیر اور اس کے ساتھ زیادہ نمک والے میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا۔melatonin. ایک HSD کنٹرول کے مقابلے میں CD4 پلس اور CD8 پلس T لیمفوسائٹس کی اہم رینالین فلٹریشن سے وابستہ تھا۔ میلاٹونن نے ڈرینل لیمفوسائٹ کی دراندازی کو نمایاں طور پر کم کیا۔ HSD نے CXCL کے mRNA اظہار میں نمایاں اضافہ کیا۔کیموکائنز.ایچ ایس ڈی میں میلاٹونن شامل کرنے سے یہ اثر ختم ہو گیا۔ نمک کے ساتھ RMC خلیوں کا علاج کرنے سے CXCL10 اور CXCL11 کے اظہار میں اضافہ ہوا لیکن CXCL9 نہیں۔ شامل کرناmelatoninثقافتی میڈیا نے اس اضافے کو روکا۔ میلاٹونن کے ساتھ ایچ ایس ڈی سے کھلائے گئے چوہوں کا علاج کرنے سے رینل لیمفوسائٹ کیموآٹریکٹنٹ ایم آر این اے کے اظہار میں کمی آئی اور اس کا تعلق رینل ٹی لیمفوسائٹ کی دراندازی کو نمایاں طور پر کم کرنے سے ہے۔ سالٹ مے کا براہ راست اثر کیموکین پیدا کرنے والے گردوں کے خلیوں پر پڑتا ہے، جو میلاٹونن کے علاج سے ختم ہو جاتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:melatonin; نمک؛ T-lymphocytes؛ ہائی بلڈ پریشر؛گردہ; CXCL 9; CXCL 10; سی ایکس سی ایل 11

1. تعارف

ہائی بلڈ پریشر (HTN) ایک اہم قابل ترمیم قلبی خطرہ عنصر ہے۔ آبادی کی عمر بڑھنے کی وجہ سے، HTN کا پھیلاؤ مسلسل بڑھ رہا ہے، جو کہ ایڈوانس میں 30 فیصد تک پہنچ رہا ہے [1]۔ مختلف طبی علاج کے اختیارات کے باوجود، دنیا بھر میں HTN کا کنٹرول ناقص ہے۔ بے قابو HTN کے نتائج تباہ کن ہیں، جو صحت عامہ پر بہت زیادہ منفی اثرات مرتب کر رہے ہیں [2]۔

HTN کے روگجنن میں مختلف طرز عمل، ماحولیاتی اور جینیاتی عوامل شامل ہیں۔ مغربی غذاوں میں نمک کی زیادہ مقدار کو HTN میں ایک اہم شراکت دار کے طور پر ملوث کیا گیا ہے اور اس کا تعلق بیماری اور اموات میں اضافے سے ہے۔ رہنما خطوط اور عوامی اقدامات عام آبادی کے لیے نمک کی مقدار کو کم کرنے کی تجویز کرتے ہیں۔ تاہم، ہر فرد اس پابندی سے فائدہ نہیں اٹھا سکتا، کیونکہ نمک کی حساسیت کو HTN سے جوڑنے والی پیتھوفیسولوجی پوری طرح سے سمجھ میں نہیں آئی ہے اور اسے بہتر میکانکی سمجھ کی ضرورت ہے [3]۔ اس طرح، HTN کی بہتر تفہیم اور کنٹرول کے لیے نئی حکمت عملی بہت اہم ہے، جس سے تحقیق کے نئے پیراڈائمز کو فوری ضرورت ہے۔

ضروری HTN کے روگجنن میں سوزش اور آکسیڈیٹیو تناؤ شامل پایا گیا ہے۔ ان عملوں کو شروع کرنے اور جاری رکھنے والے محرکات کے لیے تحقیق کرتے ہوئے، بہت سے تجرباتی HTN ماڈلز انکولی مدافعتی ردعمل کی شمولیت کا مشورہ دیتے ہیں [4]۔

پر کلک کریں۔Cistanche کے فوائد اور گردے کے کام کے لیے مضر اثرات

HTN سے انکولی قوت مدافعت کو جوڑنے کے اشارے 1960 کی دہائی سے پہلے ہی موجود ہیں۔ تاہم، حال ہی میں، مدافعتی نظام کی بہتر تفہیم کے ساتھ، اس سمت میں پیشرفت حاصل کی جا سکتی ہے۔ Guzik et al کا ایک اہم مطالعہ۔ ظاہر کیا کہ اینجیوٹینسن (Ang) II یا deoxycorticosterone (DOC) نمک HTN کو rag1−/−چوہوں میں ختم کر دیا گیا تھا، جن میں T اور B لیمفوسائٹس کی کمی ہے، اور T کی گود لینے والی منتقلی، لیکن B خلیات نہیں، BP کے ردعمل کو بحال کر سکتے ہیں [5]۔ اس مقالے کے بعد سے، زیادہ تر عام جانوروں کے ماڈلز میں HTN کے روگجنن سے متعلق مختلف اپنانے والے استثنیٰ کے اجزاء پائے گئے۔ نمک کی حوصلہ افزائی HTN ماڈل میں ٹی خلیوں کے کردار کا بھی بڑے پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے۔ ان وٹرو اسٹڈیز سے پتہ چلتا ہے کہ نمک ٹی سیلز کی تفریق کو TH17 سیلز میں دھکیل سکتا ہے [6]۔ ہائی سالٹ ڈائیٹ- (HSD) حوصلہ افزائی والے HTN ماڈلز میں بہت سے Vivo کام کرتے ہیں، جیسے asin Dhal salt-sensitive (DSS) چوہے، وسیع پیمانے پر گردوں کے T خلیات کی دراندازی کو ظاہر کرتے ہیں [7-9]۔

بہت سے جسمانی عملوں میں،melatoninبلڈ پریشر ریگولیشن کے ساتھ شمولیت کسی حد تک بدیہی ہے. بلڈ پریشر کا سرکیڈین پیٹرن میلاتون اور ایچ ٹی این کے حوالے سے وسیع تحقیق کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ ماضی میں بہت سے کام، انسانوں اور تجرباتی ماڈلز میں، میلاٹونن کی کم سطح کو HTN سے منسلک کرتے ہیں [10]۔ کچھ طبی اعداد و شمار موجود ہیں جو یہ بتاتے ہیں کہ میلاٹونن سپلیمنٹ سے HTN کا علاج ہو سکتا ہے، خاص طور پر رات کے HTN والے مریضوں کے لیے [11]۔ تاہم، ان اعداد و شمار کی عدم مطابقت یہ سوال اٹھاتی ہے کہ آیا غیر سرکیڈین میلاٹونن خصوصیات بھی بلڈ پریشر کے ضابطے میں شامل ہیں۔

میلاٹونن کی سوزش اور اینٹی آکسیڈیٹیو خصوصیات نے تجویز کیا ہے کہ میلاٹونن مدافعتی نظام کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ ابھرتے ہوئے ڈیٹا نے ٹی سیل کی نشوونما، ایکٹیویشن، تفریق اور میموری میں میلاٹونن سگنلنگ کے کردار کو متاثر کیا ہے۔ اس کے ثبوت موجود ہیں۔melatoninجھلی اور جوہری رسیپٹرز ٹی خلیوں پر موجود ہیں [12,13]۔میلاٹوننمدافعتی ردعمل میں شامل بہت سے سائٹوکائنز کی پیداوار کو متاثر کرتا ہے، جیسے کہ انٹرفیرون (IFN) - جو Th1 ردعمل کا محور ریگولیٹر ہے [14]۔

آکسیڈیٹیو تناؤ اور ٹی سیل ردعمل، کچھ محققین کے مطابق، HTN اور اعضاء کے ہائی بلڈ پریشر کو پہنچنے والے نقصان کو فروغ دینے میں کام کرتے ہیں [15]۔ ہمارے پچھلے کام میں، ہم نے اس کا مظاہرہ کیا۔melatoninمقامی (گردوں کے) آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے اور نمک سے حساس HTN چوہا ماڈل (DSS ماڈل) میں نمک کی حوصلہ افزائی رینل فبروسس اور پروٹینوریا کو روکتا ہے [16]۔ چونکہ آکسیڈیٹیو تناؤ کا HTN سے وابستہ اڈاپٹیو امیونریسپونس میں ایک اہم کردار ہے، اس لیے ہم نے قیاس کیا کہ میلاٹونن کی امیونوموڈولیٹری خصوصیات HSD-حوصلہ افزائی HTN میں اس کے حفاظتی کردار کے لیے ذمہ دار ہیں۔

اس مطالعے کا مقصد اس بات کا جائزہ لینا ہے کہ آیاmelatoninنمک کی حوصلہ افزائی ٹی سیل ردعمل کو کم کرتا ہے اور اس اثر کے ذمہ دار میکانزم کو واضح کرتا ہے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 جانور اور اسٹڈی پروٹوکول

اسٹڈی پروٹوکول کو اسرائیل میں شیبا میڈیکل سینٹر میں ادارہ جاتی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ جسمانی وزن کی پیمائش اور ہر جانور کی نقل و حرکت اور صحت کے حالات کے لیے روزانہ عام مشاہدے کے ذریعے ان کی صحت کی حالت کی نگرانی کی گئی۔ 14 hlight/10 h تاریک سائیکل کے ساتھ 22 ◦C پر باقاعدہ پنجروں میں جانوروں کی سہولت میں رکھا گیا (فی پنجرے میں دو چوہے)۔ چوہوں کو نمک کی عام خوراک پر برقرار رکھا گیا تھا اور پانچ دن کی موافقت کی مدت کے لئے ایڈ لیبٹم پینے کے لئے نلکوں کا پانی دیا گیا تھا۔ اس کے بعد چوہوں کو 8 ہفتے کی مدت میں خوراک کے مطابق تین گروپوں (n=8) میں تقسیم کیا گیا۔ اخلاقیات کمیٹی کے مطابق جن جانوروں میں بیماری اور تکلیف کی علامات ظاہر ہوتی ہیں ان کی قربانی دی جانی تھی۔

کنٹرول گروپ کو معیاری چوہا چاؤ خوراک (2018 SC؛ Teklad Envigo, Madison, WI, USA) اور نلکے کا پانی کھلایا گیا۔ زیادہ نمک والی خوراک (HSD) گروپ کو ایک مماثل افزودہ نمکین خوراک (4 فیصد) (TD.120485؛ Teklad Envigo, Madison, WI, USA) اور نلکے کا پانی، اورmelatoninگروپ کو ان کے پینے کے پانی میں میلاٹونن (M5250؛ سگما، ریہووٹ، اسرائیل) (30 ملی گرام/کلوگرام/دن) کے ساتھ وہی افزودہ نمک والی خوراک (4 فیصد) کھلائی گئی۔ جسمانی وزن اور پانی کی کھپت کو وقتاً فوقتاً ناپا جاتا تھا۔ میلاٹونن کی صحیح مقدار کو ہر ایک پنجرے کے پانی کی مقدار میں تحلیل کیا گیا تھا تاکہ ہر جانور کو صحیح خوراک فراہم کی جا سکے۔ دن صفر کی تعریف HSD اور melatonin کی کھپت شروع کرنے کے دن کے طور پر کی جاتی ہے۔ مطالعہ کے اختتام پر، چوہوں کو 3 فیصد آئسو فلورین (پچھلے پاؤں نچوڑنے سے بے ہوشی کی گہرائی کی تصدیق) کے ساتھ گہری بے ہوشی کے ذریعے قربانی دی گئی اورگردےکھیتی تھیں. دونوں گردے نکالے گئے اور ہیم کاٹ دیا گیا۔ گردے فلو سائٹومیٹری تجزیہ کے لیے لیے گئے تھے سوائے کئی حصوں کے جنہیں فوری طور پر ہٹا دیا گیا اور مائع N2 میں اسنیپ فریز کر دیا گیا اور −80 ◦C پر محفوظ کر لیا گیا۔ RNA نکالنے کے لیے منجمد ٹشوز کا استعمال کیا جاتا تھا۔

Cistanche-گردے کی بیماری کی علامات

2.2 ریئل ٹائم کوانٹیٹیو ریورس ٹرانسکرپشن پی سی آر

جینوں کے mRNA اظہار کی سطح کا پتہ لگایا گیا تھا۔گردہٹشو بذریعہ ریئل ٹائم مقداری ریورس ٹرانسکرپٹیس پی سی آر (qRT-PCR)۔ نیوکلیو اسپن RNA کٹ (MACHERY-NAGEL, Düren, Germany) کا استعمال کرتے ہوئے گردے کے ٹشو سے ٹوٹل RNA نکالا گیا تھا۔ اپلائیڈ بایو سسٹم ہائی کیپیسٹی cDNAReverse ٹرانسکرپشن کٹ (Applied Bio Systems, Foster City, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ریورس ٹرانسکرپشن کیا گیا تھا۔ پاور SYBR گرین پی سی آر ماسٹر مکس (اپلائیڈ بایو سسٹم، وارنگٹن، یو کے) اور اپلائیڈ بایو سسٹم 7500 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے qRT-PCR کے رد عمل کا مظاہرہ کیا گیا۔ سائیکلنگ کے حالات یہ تھے: 0.20 منٹ کے لیے 95 ◦C کا پہلا سنگل مرحلہ اور پھر 95 ◦C پر 3 s کے لیے پگھلنے کے مرحلے کے 40 چکر اور 60 ◦C پر 30 s کا توسیعی مرحلہ۔ 40 سائیکلوں کے اختتام پر، ایک پگھل کرویسٹیج انجام دیا گیا تھا. رائبوسومل پروٹین لیٹرل اسٹالک سبونائٹ P0 (Rplp0) mRNA کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ پرائمر ٹیبل 1 میں درج ہیں۔

جدول 1۔ اس تحقیق میں استعمال ہونے والے چوہوں کے پرائمر کی فہرست۔

2.3۔ گردے سے ٹی سیلز کی تنہائی

رینل کیپسول کو ہٹانے کے بعد، دوگردےRPMI 1640 میں 100 µm سیل سٹرینر کے ذریعے 2 mL سرنج کے پلنجر کے ساتھ کیما بنایا گیا اور چھیڑا گیا جس میں 2 mML-glutamine، 10 فیصد FBS، 10 ug/mL DNase 1 (سٹیم سیلز ٹیکنالوجیز، کیمبرج ایم اے، , USA) اور 0.1 فیصد کولیگنیز قسم IV (CLS 4، Worthington Decatur, AL, USA)۔ محلول کو 37 ◦C پر 25 منٹ تک سینک دیا گیا۔ واشنگ سلوشن (DPBS/2 فیصد FBS/2 mM EDTA) پھر 45 mL تک پہنچنے کے لیے گردے کے ہوموجنیٹ میں شامل کیا گیا اور اسے 70 µm سیلسٹرینر کے ذریعے فلٹر کیا گیا۔ محلول کو 400×g/7 منٹ پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا۔ اور گولی کو 5 ملی لیٹر واشنگ سلوشن میں معطل کیا گیا اور اسے 40 µm سیل سٹرینر اور 400×g/7 منٹ کے رینٹری فیوجیڈیٹ کے ذریعے فلٹر کیا گیا۔ گولی کو 3 ملی لیٹر FBS (10 mM EDTA) اور پرتوں والے ہسٹوپیک-1083 (سگما، ریہووٹ، اسرائیل) میں دوبارہ معطل کیا گیا، اور بریک بند ہونے کے ساتھ ہی 20 ◦C 400×g/30 منٹ پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ ہسٹوپیک کے اوپر موجود مونو نیوکلیئر سیل پرت کو ہٹا دیا گیا، دو بار واشنگ سلوشن سے دھویا گیا، اور فلو سائیٹومیٹرک تجزیہ کے لیے 5 ملی لیٹر واشنگ سلوشن میں معطل کر دیا گیا۔

2.4 فلو سائٹومیٹری

ہر گروپ سے،گردے5 سے 7 چوہوں کا تجزیہ کیا گیا۔ ہر نمونے کے لیے، 1 × 106 سیلز لیے گئے۔ الگ تھلگ mononuclear خلیات ایکسٹرا سیلولر مارکر کے ساتھ لگائے گئے تھے: اینٹی CD3 (تھرمو فشر سائنٹیفک کیٹ# 12-0030-82, RRID:AB_465493) اور اس کا آئسو ٹائپ کنٹرول (تھرمو فشر سائنٹیفک کیٹ# 12-4742-41, RRID :AB_10753770), اینٹی CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) اور اس کا آاسوٹائپ کنٹرول (تھرمو فشر سائنٹیفک کیٹ# 17-4724-81, RRID: AB_470188), اینٹی CD8 (تھرمو فشر سائنٹیفک کیٹ# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) اور اس کا آئسو ٹائپ کنٹرول (تھرمو فشر سائنٹیفک کیٹ# 25-4714-80,RRID: AB_657914)۔ FlowJo سافٹ ویئر (FlowJo, RRID: SCR-008520) کا استعمال کرتے ہوئے تمام سیلز کا تجزیہ فلو سائٹومیٹری (BD FACSCalibur Flow Cytometry System, RRID: SCR_000401) کے ذریعے کیا گیا۔

Cistanche-گردے کی تقریب

2.5 سیل کلچر

میسنجیئل چوہا سیل لائن، RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506)، ATCC® سے حاصل کیا گیا تھا۔ سیل کو Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagle میڈیم (01-055-1A, Biological Industries, Beit HaEmek, Israel) میں 4 mM L-glutamine کے ساتھ 1.5 g/L سوڈیم بائکاربونیٹ اور 4.5 g/L گلوکوز کے ساتھ ایڈجسٹ کیا گیا تھا اور اس کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تھا۔ 0.4 mg/mLG418 اور 15 فیصد فیٹل بووائن سیرم۔ میلاتون سگما (M5250 Rehovot، اسرائیل) سے حاصل کیا گیا تھا۔ ایک 250 ایم ایمmelatoninاسٹاک ایتھنول میں بنایا گیا تھا۔ سیلز کو نارمل یا زیادہ نمک (میڈیم میں 80 mM NaCl شامل کرنے) کے بغیر یا میلاٹونن (0.5 mM) کے ساتھ حالات میں کلچر کیا گیا تھا۔ NaCl کو میڈیم میں شامل کرنے سے 45 منٹ پہلے میلاٹونن کے علاج کا وقت مقرر کیا گیا تھا۔ تمام تجربات 6 کنویں پلیٹوں میں تھے جن میں 3 × 105 سیل فی کنواں تھے اور 6 آزاد ٹرائلز کے ذریعے انجام پائے تھے۔

2.6۔ شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کو اوسط کے طور پر پیش کیا جاتا ہے ± SEM شماریاتی تجزیے IBMSPSS Statistics، RRID: SCR_019096 کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے۔ تغیرات کا یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) اور پوسٹ ہاک ٹوکی طریقہ نے گروپوں کے درمیان فرق کا جائزہ لیا۔ ریئل ٹائم کیو پی سی آر ڈیٹا کا ڈیٹا اسسٹ، RRID: SCR_014969 کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔

3. نتائج

3.1 میلاٹونن HSD استعمال کرنے والے چوہوں کی حفاظت کرتا ہے۔

اس تحقیق کے دوران چوہوں کی عمر 4-13 ہفتے تھی۔ اس عمر میں، چوہوں کی تندرستی وزن میں اضافے سے ظاہر ہوتی ہے جسے کنٹرول گروپ نے ظاہر کیا تھا [17]۔ تاہم، HSD گروپ 30 دن اور اس کے اضافے پر ایک سطح مرتفع پر پہنچ گیا۔melatoninHSD کو اس رجحان کو بہتر بنایا (شکل 1A)۔ ایچ ایس ڈی گروپ نے اعلیٰ شرح اموات کی نمائش کی، جہاں 50 فیصد چوہے مر گئے یا ان کی طبی حالت تھی جس کے لیے تجرباتی مدت کے دوران، جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی کے قوانین کے مطابق یوتھناسیا کی ضرورت تھی۔ میلاٹونن سپلیمنٹس نے چوہوں کی اموات کو نمایاں طور پر روکا، جہاں تجرباتی مدت کے اختتام پر آٹھ میں سے صرف ایک چوہوں کی موت 58ویں دن ہوئی (شکل 1B)۔

شکل 1.میلاٹوننHSD میں بہتر بلڈ پریشر اور بقا۔ DSS چوہوں کا HSD کے ساتھ melatonin کے ساتھ اور بغیر 9 ہفتوں تک علاج کیا گیا۔ زیادہ نمک والی غذا نے 36 ویں دن سے جسمانی وزن کو کم کیا اور میلاٹونن نے اس اثر کو معتدل کیا (A)۔ HSD نے دن 40 سے شرح اموات میں اضافہ کیا۔ میلاٹونن کے ساتھ HSD-fedrats کا علاج ان کی بقا کو بہتر بناتا ہے۔ (ب)۔ (n=8) *-p سے کم یا اس کے برابر 0.05 نمک اور نمک کے علاوہ میلاٹونن بمقابلہ کنٹرول۔ #-p 0.05 نمک سے کم یا اس کے برابر بمقابلہ کنٹرول اور نمک پلس میلاٹونن۔ HSD - زیادہ نمک والی خوراک۔

3.2 میلاٹونن ایچ ایس ڈی کی وجہ سے گردے کے ٹی سیل کی دراندازی کو روکتا ہے۔

ہم خلیات کو سے الگ تھلگ کرتے ہیں۔گردہاور انہیں ٹی سیل مارکر، CD3 پر گیٹ کر دیا۔ سی ڈی 3 پلس سیلز کو سی ڈی 4 اور سی ڈی 8 پر گیٹ کیا گیا تھا۔ CD3 پلس CD4 پلس اور CD3 پلس CD8 پلس دونوں HSD میں نمایاں طور پر زیادہ تھے (بالترتیب 5.18 ± 1.62 اور 4.6 ± 0.75 فیصد، بالترتیب) کنٹرول (0.16 ± {{18}) }۔{20}}2اور 0.95 ± 0.15 فیصد بالترتیب) اورmelatoninایچ ایس ڈی کی تکمیل نے سی ڈی 3 پلس سی ڈی 4 پلس اور سی ڈی 3 پلس سی ڈی 8 پلس سیل کو کنٹرول لیول پر واپس کردیا (0.68 ± 0.21 اور 1.37 ± 0.45، بالترتیب) (شکل 2A-D)۔

تصویر 2. میلاٹونن ٹی سیلز میں دراندازی کو روکتا ہے۔گردہ. ٹی خلیوں کو چوہوں کے گردوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور انہیں CD3 کے لئے گیٹ کیا گیا تھا۔ CD3-مثبت خلیات کو CD4 اور CD8 کے لیے گیٹ کیا گیا تھا۔ میلاٹونن (C) نے CD3 پلس CD4 پلس اور CD3 پلس CD8 پلس دونوں کو کم کیا جیسا کہ HSD کے مقابلے میلاٹونن (B) کے بغیر کنٹرول گروپ (A) سے کوئی فرق نہیں ہے۔ تمام چوہوں کا تجزیہ (D) (n=7–8) میں دکھایا گیا ہے۔ HSD - زیادہ نمک والی خوراک۔ *-p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{15}}5 بمقابلہ کنٹرول۔ #-p نمک پلس میلاٹونن کے مقابلے میں 0.05 سے کم یا اس کے برابر۔

3.3 میلاٹونن کچھ گردے کی کیموکینز کو کم کرتا ہے جو HSD میں اپریگولیٹ تھے۔

سوزش کے ؤتکوں میں ٹی خلیوں کی بھرتی کو مقامی کیموکین ایکسپریشن کے ذریعہ منظم کیا جاتا ہے۔ لہذا، ہم نے چوہوں میں دو کیموکین خاندانوں کے اظہار کی پیمائش کی۔گردے: کیموکائن (CXC motif) ligand (CXCL) فیملی اور کیموکائن (C-Cmotif) ligand (CCL) فیملی۔

سی ایکس سی ایل فیملی کے لیے، سی ایکس سی ایل 9، 10، اور 11 جو ٹی سیلز پر سی ایکس سی آر 3 ریسیپٹر کا استعمال کرتے ہوئے ٹی سیلز کو اپنے ٹارگٹ ٹشوز کی طرف راغب کرتے ہیں، ایچ ایس ڈی چوہوں میں نمایاں طور پر اپ گریڈ کیے گئے تھے۔ کی تکمیلmelatoninایچ ایس ڈی کے لیے ان کے اظہار کو کنٹرول کی سطح پر واپس لے آیا۔ سی ایکس سی ایل 1 اور 16 کے لیے بھی یہی پیٹرن پایا گیا۔

CCL فیملی کے لیے، CCL 2، 4، 12، 17، 19، اور CX3CL1 نے HSD میں کوئی اپ گریجولیشن نہیں دکھایا۔ HSD میں CCL3 کو اپ گریڈ کیا گیا تھا، لیکن غذا میں میلاٹونن کے اضافے سے کوئی خاص تبدیلی نہیں پائی گئی۔ سی سی ایل 7 کے لیے، ایچ ایس ڈی میں ایک اہم اپ گریجشن اور اس کے اضافے کے ساتھ نمایاں کمیmelatoninHSD کا پتہ چلا (شکل 3B)۔

شکل 3. کی اپ گریجشنگردے کیکیموکائنزHSD میں melatonin کے ساتھ اور بغیر۔ کیموکائن (CXC شکل) ligand (CXCL) فیملی (A)، کیموکین (CC motif) ligand family، اور CX3CL1 (B) کا اظہار چوہوں میں طے کیا گیا تھا۔ (n=7–8) *-p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{11}}5 بمقابلہ کنٹرول۔ #-p نمک پلس میلاٹوننگ کے مقابلے میں 0.05 سے کم یا اس کے برابر۔ HSD - زیادہ نمک والی خوراک۔

3.4 میلاٹونن کا براہ راست اثر RMC Mesangial سیل لائن پر

اس کے بعد ہم نے CXCL9، 10، اور 11 پر توجہ مرکوز کی جو رسیپٹر CXCR3 سے منسلک ہو کر T خلیوں کو اپنی طرف متوجہ کرتے ہیں۔ ہم نے ان کے اظہار کا تعین کیا۔کیموکائنزRMC خلیوں میں جو ایک چوہا میسنجیل سیل لائن ہیں۔

ہم نے خلیوں کا علاج 80 mM NaCl کے بغیر اور 0.5 mM کے ساتھ کیا۔melatonin. NaCl کے اس ارتکاز نے CXCR10 کے اظہار میں 2.4 ± 0 کا نمایاں اضافہ کیا۔{4}}کنٹرول کے مقابلے میں گنا، اور 0.5 mM میلاٹونن کے اضافے میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ یہ ایکسپریشن 1.4 ± 0۔{10}} کنٹرول کے مقابلے میں گنا (شکل 4A)۔ CXCL11 کے لیے، 80 mM NaCl نے اظہار میں نمایاں طور پر 3 ± 0 کا اضافہ کیا۔{16}}کنٹرول کے مقابلے میں گنا، اور 0.5 mM میلاٹونن کے اضافے نے اس اظہار کو نمایاں طور پر 1.8 ± 0 تک کم کردیا۔{22 }} کنٹرول کے مقابلے میں گنا (شکل 4B)۔ RMC خلیوں میں CXCL9 کا پتہ نہیں چلا۔

شکل 4. نمک نے CXCL10 اور CXCL11 ایکسپریشن کو ایک میسنجیئل سیل لائن میں اپ ریگولیٹ کیا جہاں میلاٹونین ٹریٹمنٹ نے اس کے اظہار کو کم کیا۔ RMC (چوہوں کی میسنجیل سیل لائن) کا علاج 0.5 ایم ایم میلاٹونن کے ساتھ اور بغیر نمک کے 80 ایم ایم کے ساتھ کیا گیا۔ سی ایکس سی ایل 10 ( اے) اور سی ایکس سی ایل 11 ( بی) کو نمک کے علاج اور اس کے اضافے کے ذریعہ الگ کردیا گیا تھا۔melatoninاس اپ گریجشن کو کم کریں۔ گراف 6 آزاد ٹرائلز پیش کرتے ہیں۔ *-p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{5}}01 بمقابلہ کنٹرول #-p 0 سے کم یا برابر۔{14}}05 بمقابلہ نمک 80 mM اور melatonin 0.5 mM۔ $-p 0.05 سے کم یا اس کے برابر بمقابلہ نمک 80 ایم ایم اور میلاٹونن 0.5 ایم ایم۔

4. بحث

کا فائدہ مند اثرmelatoninHTN پر پچھلے مطالعات میں ظاہر کیا گیا تھا اور علاج کے خلاف مزاحم HTN [18] کے لئے ممکنہ کارروائی کے طور پر تجویز کیا گیا تھا۔ اپنے پہلے مطالعہ میں، ہم نے آکسیڈیٹیو تناؤ پر توجہ مرکوز کی اور انکشاف کیا کہ میلاٹونن ایچ ایس ڈی کی وجہ سے آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے انکولی مدافعتی اثر پر توجہ مرکوز کی اور دکھایا کہ میلاٹونن HSD سے کھلائے گئے چوہوں کی بقا کو بہتر بناتا ہے۔ یہ اثر گردے میں دراندازی کرنے والے ٹی خلیوں میں کمی اور اس کی کمی سے منسلک ہے۔گردہکیموکین اظہار

تاریخی اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ HSD استعمال کرنے والے DSS چوہے شدید HTN تیار کرتے ہیں اور شرح اموات کی زیادہ نمائش کرتے ہیں [19]۔ ڈاہل نے خود ماڈل قائم کرتے ہوئے بتایا کہ جب ڈی ایس ایس چوہوں کو دودھ چھڑانے کے وقت (21-23 دن کی عمر میں) HSD (8 فیصد NaCl) پر رکھا گیا تھا، تو انہوں نے تیزی سے HTN تیار کیا اور نمک کھلانے کے 16ویں ہفتے تک سب کی موت ہو گئی [20]۔ بعد میں، کشیدگی میں کچھ ترمیم کے بعد، Rapp et al. رپورٹ کیا کہ تمام چوہے HSD (8 فیصد NaCl) کے آٹھ ہفتوں کے اندر مر چکے تھے [21]۔ ہمارے مطالعے میں چوہوں کی شرح اموات بہت زیادہ تھی لیکن پھر بھی 100 فیصد تک نہیں پہنچی، شاید ان کی خوراک میں نمک کی کم فیصد (4 فیصد) کی وجہ سے۔ بہر حال، یہ ظاہر ہے کہmelatoninسپلیمنٹ نے شرح اموات کو نمایاں طور پر روکا۔

4-13 ہفتوں کی عمر میں وزن بڑھنا چوہوں کی تندرستی کا نشان ہے۔ DSS ratsoriginate Sprague Dawley سے ہوتا ہے، جو کہ ایک اچھی خاصیت والا تناؤ ہے۔ چوہوں کی عمر میں جو ہم نے اپنے تجربات میں استعمال کیا، چوہوں کا وزن مستقل طور پر بڑھتا ہے [22]۔ بہت سے جانوروں کے مطالعے میں، وزن میں کمی کو تجربات کے "اختتام پوائنٹس" میں سے ایک سمجھا جاتا ہے [23]۔ متعدد مطالعات سے یہ واضح ہے کہ DSS چوہوں میں HSD کے نتیجے میں کنٹرول کے مقابلے میں وزن میں اضافے کی شرح کم ہوتی ہے [24,25]۔ ان مطالعات کے مطابق، ہم نے گروپوں کے درمیان وزن کے فرق کو بھی دیکھا۔ یہاں، HSD کے چار ہفتوں کے بعد چوہوں کا وزن نہیں بڑھا۔ میلاٹونن نے ایچ ایس ڈی کے اس اثر کو بھی روک دیا، کیونکہ جن چوہوں کا میلاٹونن کے ساتھ علاج کیا گیا تھا ان کا وزن مسلسل بڑھتا رہا، حالانکہ وہ کنٹرول سے کم تھا۔

کی صلاحیتmelatoninجانوروں کے ماڈلز میں بلڈ پریشر کو کم کرنے کا طریقہ 20 ویں صدی کے آخر میں دریافت ہوا تھا [26-28]۔ اس کے بعد سے، یہ کئی دوسرے ماڈلز میں رپورٹ کیا گیا ہے، جیسے کہ ایک اعلی فرکٹوز خوراک بے ساختہ ہائی بلڈ پریشر والے چوہوں میں میٹابولک سنڈروم پیدا کرتی ہے [29,30]۔ اس شعبے میں ہمارے مطالعے نے سب سے پہلے یہ ظاہر کیا ہے کہ میلاٹونن اعضاء کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے اور اموات کو کم کرکے نمک کی حوصلہ افزائی HTN میں کردار ادا کرتا ہے۔

اس مطالعہ میں، ہم نے دکھایا ہے کہ ایک HSD ٹی لیمفوسائٹ کی دراندازی کو اکساتا ہے۔گردہ، ایک ایسا عمل جسے ڈی ایس ایس چوہوں میں بنیادی طور پر میٹسن کے گروپ [31–33] کے ذریعہ بیان کیا گیا ہے۔ DSS ماڈل میں دراندازی کے اس عمل کے اہم کردار کو حالیہ مطالعے سے ظاہر کیا گیا ہے جس نے مشاہدہ کیا ہے کہ T-cell کی کمی والے DSS چوہوں سے محفوظ ہیں۔ HTN کی حوصلہ افزائی ایک HSD اور ایک splenocyte کی منتقلی نمک کے حساس HTN کو بڑھا دیتی ہے [34]۔

میلاٹونن مختلف پہلوؤں سے ٹی خلیوں کو متاثر کر سکتا ہے (جائزہ کے لیے دیکھیں [35])۔ اس تحقیق نے پہلی بار دکھایا ہے۔melatoninCD4 پلس اور CD8 پلس Tcells دونوں کی کشش کو کم کرتا ہے۔گردہHSD میں میلاٹونن کا یہ اثر اس ماڈل میں اس کے فائدہ مند اثر کی نشاندہی کرنے والا طریقہ کار ہو سکتا ہے۔

T سیل کی دراندازی کو کم کرنے کے لیے melatonin کی صلاحیت کو تجرباتی autoimmune encephalomyelitis (EAE) چوہوں کے ماڈل میں بیان کیا گیا ہے۔ EAE میں، melatonin کو CNS [36,37] میں CD4 پلس T خلیات اور Th17 خلیوں کی دراندازی کو کم کرنے کے لیے دکھایا گیا تھا۔

ایک مخصوص ٹشو کی طرف T سیل کی کشش بنیادی طور پر مقامی اعلیٰ ارتکاز کے ذریعے منظم ہوتی ہے۔کیموکائنزجو کیموٹیکٹک سائٹوکائنز ہیں جو نقل مکانی کے نمونوں اور مدافعتی خلیوں کی پوزیشننگ کو کنٹرول کرتی ہیں۔ دو بڑے کیموکائن فیملیز جو ٹی سیل میں دراندازی کا باعث بنتی ہیں وہ ہیں CXC موٹف لیگنڈ (CXCL) اور CC موٹف ligand (CCL) کیموکین فیملیز [38]۔

گردے کی خرابی کو بہتر بنانے کے لیے سیستانچ

ہمارے مطالعے میں، ہمیں HSDand to کے لیے CCL فیملی کے ردعمل میں کوئی مستقل نمونہ نہیں ملاmelatonin. نو میں سےکیموکائنزاس خاندان میں، صرف سی سی ایل 7 اور سی ایل ایل 21 کو ایچ ایس ڈی، اور میلاٹونن سپلیمینٹیشن میں کمی کی وجہ سے اپنے اظہار کو بڑھانے کے لیے دیکھا گیا۔ ایک HSD نے CCL3 کے اظہار میں اضافہ کیا، لیکن میلاٹونن سے علاج کیے گئے چوہوں میں کوئی کمی نہیں پائی گئی۔ اسی ماڈل میں ایک حالیہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ HSD CCL2 کو اپ گریڈ کرتا ہے۔گردہRNA-Seq طریقہ استعمال کرکے [39]۔ تاہم، اس مطالعہ نے خوراک شروع کرنے کے بعد 3 اور 21 دن کی سطح کا تجربہ کیا۔ ہمارے مطالعے میں، ہم نے آٹھ ہفتوں کے بعد سطحوں کا تجربہ کیا۔ یہ ممکن ہے کہ HSD کی مدت کے دوران کیموکین کا اظہار بدل جائے۔

اس کے برعکس، زیادہ تر CXCL خاندان کی سطح، بشمول CXCL 1، 9، 10، 11، اور 16، HSD سے علاج شدہ چوہوں میں اضافہ ہوا اورmelatoninضمیمہ نے اس اضافہ کو ختم کر دیا۔ صرف CXCL12 نے HSD کے جواب میں کوئی اضافہ نہیں دکھایا۔

CXCL9, CXCL10, اور CXCL11، جس کا نام "interferon-inducible CXC chemokine ریسیپٹر 3 ligands" ہے، IFN- کے ذریعہ حوصلہ افزائی کی گئی ہے اور یہ CXC کیموکین ریسیپٹر 3 (CXCR3) کے ligands ہیں۔ Vivo میں مطالعات نے ہدف کے عضو [40-42] میں ٹی لیمفوسائٹس کو چالو کرنے اور بھرتی کرنے میں ان کی اہمیت کو ظاہر کیا ہے۔ یون وغیرہ۔ انسانی ہائی بلڈ پریشر والے مریضوں میں ٹی خلیوں کی گردوں کی دراندازی اور تینوں CXCR3 کی بلند گردشی سطح دونوں سے ظاہر ہوتا ہے۔کیموکائنز، یہ تجویز کرتا ہے کہ CXCR3 اور اس کے ligands انسانی HTN میں شامل T خلیوں کے لئے متعلقہ ہیں [43]۔ ایک اور تحقیق نے یہ ثابت کیا ہے کہ ہائی بلڈ پریشر والے مریضوں میں CXCL10 بلند ہوتا ہے، اور اس کی سطح ان کے بلڈ پریشر کی قدروں سے منسلک ہوتی ہے [44]۔

ان مطالعات کی وجہ سے، ہم نے CXCL9، CXCL10، اور CXCL11 پر توجہ مرکوز کی۔ ہم نے mesangial rat cell line کو کلچر کیا اور 80 mM NaCl اور 0.5 mM melatonin کے ساتھ ان کا علاج کیا۔ ہم نے پایا کہ CXCL 10 اور 11 خلیات میں اپ ریگولیٹ ہیں اور میلاٹونن اس بلندی کو ختم کر دیتا ہے۔ ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ CXCL 10 اور 11 کو بلند کرنے میں نمک کا اثر، اور اس کے الٹا اثرmelatonin، دونوں کو براہ راست mesangial خلیوں میں پایا گیا تھا۔ اس کے برعکس، ان خلیوں میں CXCL9 کا پتہ نہیں چلا۔

ہمارے مطالعہ کی حدود ہیں۔ ہمارے FACS کے نتائج میں، CD3 پلس میں سے بہت سے CD4 اور CD8 دونوں کے لیے دوگنا منفی تھے۔ 2010 [31] سے میٹسن کے مطالعے میں بھی یہی نتائج دیکھے گئے۔ تاہم، میٹسن کے گروپ کے حالیہ مطالعے میں، CD3 پلس CD{{6}CD8-خلیات بہت کم تھے [32,33,45,46]۔ ڈبل منفی CD3 خلیوں میں نمایاں کمی CD45 مارکر کو شامل کرنے اور صرف ان خلیوں کا تجزیہ کرنے کا نتیجہ ہو سکتی ہے جو CD45 مثبت تھے، جو میٹسن کے بعد کے مطالعے میں کیا گیا تھا۔ یہ ممکن ہے کہ CD3 پلس CD4-CD8- کی بڑی آبادی ایک نمونہ ہو۔ تاہم، CD3 پلس CD4 پلس اور CD3 پلس CD8 پلس سیل کی آبادی کے لیے کوئی نمونہ معلوم نہیں ہے۔

5. نتائج

آخر میں، زیادہ نمک والی غذا کا تعلق ٹی سیل میں دراندازی سے ہے۔گردےڈی ایس ایس چوہوں کی نمک نے گردے میں مخصوص ٹی سیل کیموٹریکٹینٹس کے اظہار میں بھی اضافہ کیا۔ کے ساتھ علاجmelatonin(30 ملی گرام / کلوگرام / دن) نے ان اثرات کو ختم کردیا (melatoninCXCL3 ligand chemokine اظہار میں کمی کے ساتھ گردے میں T خلیات کی HSD کی حوصلہ افزائی سے دراندازی کو کم کرتا ہے)۔

ہمارا ان وٹرو مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ نمک اور میلاٹونن کیموآٹریکٹنٹ اظہار کو براہ راست متاثر کرکے کنٹرول کرسکتے ہیں۔گردہخلیات

مصنف کی شراکتیں: Conceptualization, AL; رسمی تجزیہ، AB اور RK؛ تفتیش، RK؛ طریقہ کار، AB اور AL؛ تحریر - اصل مسودہ، AB اور AL؛ تحریر—جائزہ اور ترمیم، YSand EG تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔

فنڈنگ: اس تحقیق کو کوئی بیرونی فنڈنگ ​​نہیں ملی۔

ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: اسٹڈی پروٹوکول کو شیبا میڈیکل سنٹر، پروٹوکول نمبر 1219/19/ANIM اور وزارت صحت پروٹوکول نمبر 16418 میں ادارہ جاتی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

باخبر رضامندی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔

ڈیٹا کی دستیابی کا بیان: اس مطالعے میں پیش کردہ ڈیٹا متعلقہ مصنف کی درخواست پر دستیاب ہے۔

اعترافات: مصنفین زیہاوا شبتائی کی بہترین تکنیکی مدد اور مائیکل کانوسکی کی ادارتی خدمات کے لیے شکریہ ادا کرتے ہیں۔

مفادات کے تصادم: مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

حوالہ جات

1. اولسن، MH؛ انجیل، SY؛ اسماء، ایس. Boutouyrie، P.؛ برگر، ڈی. Chirinos, JA; Damasceno, A.; ڈیلس، سی. Gimenez-Roqueplo, AP;Hering, D.; ET رحمہ اللہ تعالی. موجودہ اور آنے والی نسلوں پر بڑھے ہوئے بلڈ پریشر کے عالمی بوجھ سے نمٹنے کے لیے ایک کال ٹو ایکشن اور لائف کورس کی حکمت عملی: ہائی بلڈ پریشر پر لانسیٹ کمیشن۔ لینسیٹ 2016، 388، 2665–2712۔ [کراس ریف]

2. O'Brien, E. The Lancet Commission on Hypertension: موجودہ اور آنے والی نسلوں پر بڑھے ہوئے بلڈ پریشر کے عالمی بوجھ کو حل کرنا۔ جے کلین ہائپر ٹینس 2017، 19، 564–568۔ [کراس ریف]

3. O'Donnell، M.؛ مینٹے، اے۔ یوسف، ایس سوڈیم کی مقدار اور قلبی صحت۔ سرک Res. 2015، 116، 1046–1057۔ [کراس ریف]

4. Schiffrin، EL چھوٹی شریانوں کو دوبارہ بنانے کا طریقہ کار، ہائی بلڈ پریشر میں اینٹی ہائپرٹینسیو تھراپی اور مدافعتی نظام۔ کلین۔ تفتیش کریں۔ میڈ. 2015, 38, E394–E402۔ [کراس ریف]

5. گوزیک، ٹی جے؛ ہوچ، NE؛ براؤن، KA؛ میک کین، ایل اے؛ رحمان، اے. Dikalov, S.; گورونزی، جے؛ ویانڈ، سی. ہیریسن، انجیوٹینسن II-حوصلہ افزائی ہائی بلڈ پریشر اور عروقی خرابی کی پیدائش میں ٹی سیل کا ڈی جی کردار۔ J. Exp. میڈ. 2007، 204، 2449–2460۔ [CrossRef][PubMed]

6. Kleinewietfeld, M.; منزیل، اے. Titze, J.; کواکان، ایچ. یوسف، این. لنکر، RA؛ مولر، ڈی این؛ ہافلر، ڈی اے سوڈیم کلورائد پیتھوجینک TH17 خلیوں کی شمولیت سے آٹومیمون بیماری۔ فطرت 2013، 496، 518–522۔ [کراس ریف]

7. میٹسن، ڈی ایل؛ لنڈ، ایچ. گو، سی؛ روڈملر، این. Geurts, AM; جیکب، ایچ. ڈیہل نمک سے حساس چوہوں میں جین 1 کو چالو کرنے والے ریکومبینیشن کا جینیاتی تغیر ہائی بلڈ پریشر اور گردوں کے نقصان کو کم کرتا ہے۔ ایم۔ جے فزیول۔ ریگول. عدد۔ کمپ فزیول 2013، 304، 407–414[کراس ریف]

8. میٹسن، ڈی ایل میں مدافعتی خلیات کی دراندازیگردہنمک سے حساس ہائی بلڈ پریشر اور گردوں کی چوٹ میں۔ ایم۔ جے فزیول۔ رین Physiol.2014, 307. [CrossRef] [PubMed]

9. لو، ایکس۔ کرولی، نمک حساس ہائی بلڈ پریشر اور رینل ڈیمیج میں ایس ڈی کی سوزش۔ کرر Hypertens Rep. 2018, 20. [CrossRef][PubMed]

10. بیکر، جے؛ Kempinski، K. کا کردارmelatoninبلڈ پریشر ریگولیشن میں: ایک منسلک اینٹی ہائی بلڈ پریشر ایجنٹ۔ کلین ختم Pharm.Physiol. 2018، 45، 755–766۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

11. گراسمین، ای. لاوڈن، ایم؛ زیسپیل، N. رات کے خون کے دباؤ پر میلاٹونن کا اثر: بے ترتیب کنٹرول ٹرائلز کا میٹا تجزیہ۔ واسک ہیلتھ رسک مینیگ۔ 2011، 7، 577–584۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. پوزو، ڈی. ڈیلگاڈو، ایم؛ فرنانڈیز-سانتوس، جے ایم؛ کالوو، جے آر؛ گومریز، آر پی؛ Martin-Lacave، I.؛ اورٹیز، جی جی؛ گیریرو، چوہا تھائمس اور تلی سے لیمفوسائٹس کے T اور B ذیلی سیٹوں میں Mel1a-melatonin ریسیپٹر mRNA کا JM اظہار۔ فاسب جے آف۔ پبلی Fed.Am Soc ختم بائول 1997، 11، 466–473۔ [کراس ریف]

13. گوریرو، جے ایم؛ پوزو، ڈی. García-Mauriño, S.; اوسونا، سی۔ Molinero، P.؛ کالوو، JR جورکات کے خلیوں میں میلاٹونن کے ذریعے بہتر آئی ایل-2 کی پیداوار میں جوہری رسیپٹرز کی شمولیت۔ این۔ NY Acad. سائنس 2000، 917، 397–403۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. فاریز، ایم ایف؛ Mascanfroni, ID; Méndez-Huergo, SP; Yeste, A.; مروگیان، جی؛ گارو، ایل پی؛ Balbuena Aguirre, ME; پٹیل، B. Ysrraelit، MC؛ Zhu, C.; ET رحمہ اللہ تعالی.میلاٹوننایک سے زیادہ سکلیروسیس کے دوبارہ لگنے کے موسم میں حصہ ڈالتا ہے۔ سیل 2015, 162, 1338–1352[CrossRef] [PubMed]

15. کرابو، اے۔ فونٹانا، وی. ڈی فاریہ، اے پی سی؛ لوپیرینا، آر. Galindo, CL; وو، جے؛ Bikineyeva, AT; Dikalov, S.; Xiao, L.; چن، ڈبلیو. DC isoketal-modified پروٹین T خلیات کو چالو کرتے ہیں اور ہائی بلڈ پریشر کو فروغ دیتے ہیں۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 2014، 124، 4642–4656۔ [CrossRef][PubMed]

16. Leibowitz, A.; وولکوف، اے. وولوشین، K.؛ شیمیش، سی. Barshack، I.؛ Grossman, E. Melatonin روکتا ہےگردہآکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرکے اعلی نمکین غذا سے متاثر ہائی بلڈ پریشر ماڈل میں چوٹ۔ J. Pineal Res. 2016، 60، 48–54۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

17. ہاکنز، پی. مورٹن، ڈی بی؛ برمن، او۔ ڈینیسن، این. Honess، P.؛ جیننگز، ایم؛ لین، ایس. مڈلٹن، وی. Roughan, JV; ویلز، ایس، وغیرہ۔ لیبارٹری جانوروں کی فلاح و بہبود کی تشخیص کے لیے پروٹوکول کی وضاحت اور نفاذ کے لیے ایک گائیڈ: BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW جوائنٹ ورکنگ گروپ آن ریفائنمنٹ کی گیارہویں رپورٹ۔ لیب انیم 2011، 45، 1-13۔ [کراس ریف]

18. سمکو، ایف۔ Reiter, RJ; پولس، ایل.میلاٹوننمزاحم ہائی بلڈ پریشر کے قدامت پسند علاج میں عقلی متبادل کے طور پر۔ 2019، 42، 1828–1831۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

19. ریپ، جے پی ڈہل نمک کے لیے حساس اور نمک مزاحم چوہے ہائی بلڈ پریشر 1982، 4، 753–763۔ [کراس ریف]

20. Dahl، LK؛ Knudsen, KD; ہین، ایم اے؛ Leitl, GJ دائمی اضافی نمک کے استعمال کے اثرات۔ خوراک میں تغیرات کے ذریعہ چوہے میں تجرباتی ہائی بلڈ پریشر کی تبدیلی۔ سرک Res. 1968، 22، 11-18۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

21. ریپ، جے پی؛ ڈینی، ایچ۔ دہل نمک کے لیے حساس اور نمک کے خلاف مزاحمت کرنے والے چوہوں کے نسلی تناؤ کی نشوونما اور خصوصیات۔ ہائپر ٹینس 1985,7، 340–349۔ [کراس ریف]

22. برور، ایم. گریس، ایم. کوٹز، سی ایم؛ کویا، V. مختلف ذرائع سے حاصل کردہ اسپراگ ڈولی چوہوں کی نشوونما کی خصوصیات کا تقابلی تجزیہ۔ لیب انیم ریس 2015، 31، 166–173۔ [کراس ریف]

23. ٹالبوٹ، ایس آر؛ Biernat, S.; بلیچ، اے. وین ڈجک، آر ایم؛ ارنسٹ، ایل. ہیگر، سی. ہلگرز، SOA؛ کوگل، بی؛ کوسکا، آئی۔ کوہلا، اے. et al. جسمانی وزن میں کمی کو انسانی نقطہ نظر کے طور پر بیان کرنا: ایک اہم تشخیص۔ لیب اینیم 2020، 54، 99–110۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. Geschka, S.; Kretschmer, A.; شارکوسکا، وائی۔ Evgenov، OV؛ لارنز، بی؛ Hucke, A.; ہوچر، بی۔ Stasch، J.-P. گھلنشیل guanylatecyclase محرک فائبروٹک ٹشو کو دوبارہ تشکیل دینے سے روکتا ہے اور نمک سے حساس دہل چوہوں میں بقا کو بہتر بناتا ہے۔ PLOS ONE 2011, 6,e21853۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. وانگ، وائی. Mu, JJ; لیو، ایف کیو؛ رین، KY؛ Xiao, HY; یانگ، زیڈ؛ یوآن، زیڈ وائی نمک کی حوصلہ افزائی اپیٹیلیل سے میسینچیمل منتقلی Dahlsalt حساس چوہوں میں بلند فشار خون پر منحصر ہے۔ براز جے میڈ بائول Res. Rev. Bras. پیسکویسا میڈ۔ ای بائیول۔ 2014، 47، 223-230[کراس ریف]

26. ہومز، SW؛ سوگڈن، ڈی پروسیڈنگز: میلاٹونن کا اثر چوہے میں پائنیالیکٹومی سے متاثرہ ہائی بلڈ پریشر پر۔ Br J. Pharm.1976, 56, 360P–361P.

27. زانوبونی، اے. Zanoboni-Muciaccia، W. pinealectomized چوہوں میں تجرباتی ہائی بلڈ پریشر۔ لائف سائنس. 1967، 6، 2327–2331۔ [کراس ریف]

28. زانوبونی، اے. Forni, A.; Zanoboni-Muciaccia، W. زانوسی، سی۔ شریانوں کے بلڈ پریشر اور چوہے میں خوراک اور پانی کی مقدار پر پائنالیکٹومی کا اثر۔ J. Endocrinol. تفتیش کریں۔ 1978، 1، 125-130۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

29. Pechánová, O.; زیچا، جے؛ پولس، ایل. زینبی، ڈبلیو. ڈوبیسووا، زیڈ۔ Kojsová, S.; Jendeková, L.; Sládková، M.؛ Dovinová, I.; سمکو، F.؛ وغیرہ قائم ہائی بلڈ پریشر والے بالغوں میں بے ساختہ ہائی بلڈ پریشر والے چوہوں میں N-acetylcysteine ​​اور melatonin کا ​​اثر۔ یور جے فارمکول 2007، 561، 129–136۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

30. Leibowitz, A.; پیلگ، ای. شرابی، وائی۔ شبطائی، ز. شمیس، اے. گراسمین، ای کا کردارmelatoninمیٹابولک سنڈروم والے چوہوں میں ہائی بلڈ پریشر کے روگجنن میں۔ ایم۔ J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]

31. ڈی میگوئل، سی. داس، ایس. لنڈ، ایچ. Mattson، DL T lymphocytes ثالثی ہائی بلڈ پریشر اورگردہدہل نمک کی حساسیت میں نقصان۔ ایم۔ جے فزیول۔ ریگول. عدد۔ کمپ فزیول 2010, 298, R1136–R1142۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

32. ایونز، ایل سی؛ پیٹرووا، جی. کرتھ، ٹی. یانگ، سی. بوکوی، جے ڈی؛ میٹسن، ڈی ایل؛ Cowley, AW بڑھتا ہوا پرفیوژن پریشر ڈاہل سالٹ حساس چوہے میں رینل ٹی سیل کی دراندازی کو چلاتا ہے۔ ہائی بلڈ پریشر 2017، 70، 543–551۔ [کراس ریف]

33. ابیس بطاد، جے ایم؛ الشیخ، اے جے؛ پین، ایکس۔ Fehrenbach، DJ؛ ڈیسنجر، جے ایچ؛ لنڈ، ایچ. رابرٹس، ایم ایل؛ کریگل، اے جے؛ Cowley, AWJ;Kidambi, S.; ET رحمہ اللہ تعالی. دہل نمک کے ساتھ حساس ہائی بلڈ پریشر، رینل ڈیمیج، اور ٹی لیمفوسائٹ ٹرانسکرپٹوم پر غذائی اثرات۔ ہائپرٹینس 2019, 74, 854–863۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

34. Fehrenbach, DJ; ڈیسنجر، جے ایچ؛ لنڈ، ایچ. زماج، جے؛ Mattson، DL Splenocyte کی منتقلی نمک حساس ہائی بلڈ پریشر inrats کو بڑھاتا ہے. ختم فزیول 2020، 105، 864–875۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

35. رین، ڈبلیو. لیو، جی؛ چن، ایس. ین، جے؛ وانگ، جے؛ ٹین، بی؛ وو، جی؛ بازر، ایف ڈبلیو؛ پینگ، وائی۔ لی، ٹی. ET رحمہ اللہ تعالی. ٹی خلیوں میں میلاٹونن سگنلنگ: افعال اور استعمال۔ J. Pineal Res. 2017، 62۔ [کراس ریف]

36. Álvarez-Sánchez, N.; Cruz-Chamoro, I.; López-González, A.; Utrilla, JC; فرنانڈیز-سانتوس، جے ایم؛ Martínez-López, A.; لارڈون، پی جے؛ گوریرو، جے ایم؛ Carrillo-Vico, A. Melatonin T-ایفیکٹر/ریگولیٹری توازن کو تبدیل کر کے تجرباتی آٹو امیون انسیفالومائلائٹس کو کنٹرول کرتا ہے۔ دماغی سلوک۔ امیون 2015، 50، 101–114۔ [کراس ریف]

37. چن، ایس جے؛ ہوانگ، S.-H.؛ چن، جے ڈبلیو؛ وانگ، K.-C.؛ یانگ، Y.-R.؛ لیو، پی ایف؛ لن، جی-جے؛ Sytwu, H.-K.میلاٹوننانٹرلییوکن 10 کے اظہار کو بڑھاتا ہے اور کیموٹیکسس کو دباتا ہے تاکہ حالت میں سوزش کو روکا جا سکے اور تجرباتی آٹو امیونسفالومائلائٹس کی شدت کو کم کیا جا سکے۔ انٹر امیونو فارماکول۔ 2016، 31، 169–177۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

38. گریفتھ، جے ڈبلیو؛ سوکول، سی ایل؛ چمک، ADکیموکائنزاور کیموکین ریسیپٹرز: میزبان دفاع اور قوت مدافعت کے لیے خلیات کی پوزیشننگ۔ Rev. Immunol. 2014، 32، 659–702۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

39. الشیخ، AJ؛ ڈیسنجر، جے ایچ؛ Abais-Bttad, JM; Fehrenbach، DJ؛ یانگ، سی. Cowley, AWJ; Mattson، DL CCL2 نمک حساس ہائی بلڈ پریشر کے دوران ابتدائی رینل لیوکوائٹ کی دراندازی میں ثالثی کرتا ہے۔ ایم۔ جے فزیول۔ رین فزیول 2020, 318, F982–F993۔ [CrossRef][PubMed]

40. لیو، ایل. کالہان، ایم کے؛ ہوانگ، ڈی. Ransohoff، RM کیموکین ریسیپٹر CXCR3: ایک غیر متوقع معمہ۔ کرر اوپر۔ دیو Biol.2005, 68, 149–181. [کراس ریف] [پب میڈ]

41. Groom, JR; Luster، AD CXCR3 ligands: بے کار، باہمی تعاون اور مخالفانہ افعال۔ امیونول۔ سیل بائیول۔ 2011، 89,207–215۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

42. وان ریمڈونک، K.؛ وان ڈین سٹین، PE؛ Liekens, S.; وان ڈیمے، جے؛ Struyf، S. CXCR3 ligands بیماری اور علاج میں۔ سائٹوکائن گروتھ فیکٹر Rev. 2015, 26, 311–327۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

43. یون، جے سی؛ یو، ایچ ٹی؛ لم، بی جے؛ کوہ، ایم جے؛ لی، جے؛ چانگ، D.-Y.؛ چوئی، وائی ایس؛ لی، ایس ایچ؛ کانگ، ایس ایم؛ جنگ، وائی۔ ET رحمہ اللہ تعالی. امیونوسینسنٹ سی ڈی 8 پلس ٹی سیل اور سی ایکس سی کیموکین ریسیپٹر ٹائپ 3کیموکائنزانسانی ہائی بلڈ پریشر میں اضافہ ہوا ہے. ہائپر ٹینس 2013, 62, 126-133[CrossRef] [PubMed]

44. اسٹمپف، سی۔ Auer, C.; یلماز، اے. Lewczuk، P.؛ Klinghammer, L.; شنائیڈر، ایم. ڈینیل، ڈبلیو جی؛ Schmieder, RE; گارلیچز، Th1 chemoattractant interferon-gamma-inducible protein (IP) 10 کی CDSerum کی سطح ضروری ہائی بلڈ پریشر کے مریضوں میں بلند ہوتی ہے۔ Hypertens Res. 2011، 34، 484–488۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

45. روڈملر، این پی؛ لنڈ، ایچ. Priestley, JRC; Endres, BT; پروکوپ، جے ڈبلیو؛ جیکب، ایچ جے؛ Geurts, AM; کوہن، ای پی؛ Mattson، SH2B3 (LNK) کا ڈی ایل اتپریورتن، ہائی بلڈ پریشر کے لیے جینوم وائڈ ایسوسی ایشن اسٹڈی کا امیدوار، دہل نمک حساس ہائی بلڈ پریشر کو سوزشی ماڈیولیشن کے ذریعے کم کرتا ہے۔ ہائپرٹین 2015، 65، 1111–1117۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

46. ​​ویڈ، بی. پیٹرووا، جی. میٹسن، ڈی ایل اینجیوٹینسن II-حوصلہ افزائی ہائی بلڈ پریشر اور Dahlsalt حساس چوہوں میں گردوں کو پہنچنے والے نقصان میں مدافعتی عوامل کا کردار۔ ایم۔ جے فزیول۔ ریگول. عدد۔ کمپ فزیول 2018, 314, R323–R333۔ [کراس ریف] [پب میڈ]