Aspergillus Oryzae اور Aspergillus Cristatus کے ساتھ خمیر شدہ چاول کوجی کی میٹابولائٹ پروفائلنگ اور اینٹی ایجنگ سرگرمی: ایک تقابلی مطالعہ Ⅱ
May 09, 2023
3. بحث
چاول کے مختلف حصے، جیسے کہ بھوسی، چوکر، ایمبریو، اور اینڈوسپرم، سطح سے لے کر اندرونی حصے تک، مختلف کیمیائی مرکبات ہوتے ہیں (26)۔ خاص طور پر، چاول کی چوکر مختلف پر مشتمل ہےفینولک ایسڈاورflavonoids، جو نمائش کے لیے جانا جاتا ہے۔اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔اس کے علاوہ، چاول کے خلیے کی دیوار ایک arabinoxylan ساخت پر مشتمل ہے جس میں xylose، arabinose، ferulic acid، اور ferulic acid (27] شامل ہیں۔ چاول کے خلیے کی دیوار میں گھسنا عام طور پر مشکل ہوتا ہے، اور چاول کی کوجی آسانی سے داخل ہونے کا فائدہ فراہم کرتی ہے۔ چاول کے خلیوں کی دیوار مختلف انزائمز جیسے کہ پروٹیز اور گلوکوسیڈیس انوکولم جرثوموں سے (24. اس لیے چاول کی کوئیtyrosinase روکنے والی سرگرمی کی اعلی سطحاوراینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاںاس کے خام مال سے زیادہ کیونکہ اس میں قیمتی افزودہ مرکبات ہوتے ہیں (28.
Cistanche Antioxidant سرگرمی کے بارے میں مزید معلومات حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔
ہم نے چاول کوجی کے لیے میٹابولومکس اپروچ کی پیروی کی جس کو دو مختلف فلیمینٹس فنگس کے ساتھ خمیر کیا گیا، جس نے انزائم کی سرگرمی، میٹابولائٹس کی پیداوار، اور بایو ایکٹیویٹیز میں اہم فرق کو واضح کیا۔ مختلف خامروں کی سرگرمیاں جیسے کہ a-amylase، &glucosidase، اور -glucosidase کی طرف سے تیار کردہ A. cristatus اور A. oryzae میں ابال کے وقت کے ساتھ اضافہ ہوتا ہے (شکل 3)۔ چونکہ یہ انزائمز arabinoxylan کی ساخت کو توڑ دیتے ہیں، دونوں نمونوں میں مختلف فینولک ایسڈز کو چاول کے خلیے کی دیوار سے الگ کر دیا گیا، جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔ یہ فینولک ایسڈ ممکنہ اینٹی آکسیڈینٹ ہیں جو آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتے ہیں 291۔ اس طرح، اینٹی آکسیڈنٹ سرگرمیاں اور TPC پرکھ میں اضافہ ہوا ہے۔ فینولک ایسڈ کے مواد میں اضافہ ہونے کے ساتھ ابال کے وقت میں اضافہ (اعداد و شمار 2 اور 4) خاص طور پر، RAC میں RAO کے مقابلے میں flavonoids کی مقدار زیادہ ہے کیونکہ اس میں -glucosidase کی اعلی سطح ہوتی ہے، جو چاول کے خلیوں کی دیوار سے -glycosidic ربط کو ہائیڈولائز کرتا ہے۔ چاول کی کوجی میں A. cristatus کی نشوونما۔ چاول کے خلیے کی دیوار سے الگ ہونے کے علاوہ-گلوکوسیڈیز فلاوونائڈ گلوکوسائیڈ فارم کو ایک ایگلی کون کی شکل میں ہائیڈولائز کرتا ہے جس میں اینٹی آکسیڈینٹ کی اعلیٰ سرگرمی ہوتی ہے 30]۔ فلاوونائڈ گلوکوسائیڈ فارم اور اگلیکون فارم میں اضافہ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں جیسے ABTS، DPPH FRAP، اور TFC کو بڑھاتا ہے، جو RAC کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو متاثر کر سکتا ہے، جیسا کہ ارتباط کے نیٹ ورک کے نقشے میں دکھایا گیا ہے (شکل 4)۔ اس رجحان کو ایک پچھلی تحقیق میں بھی دیکھا گیا تھا جس میں گلوکوسائیڈ آئسوفلاوونز کی بائیو ٹرانسفارمیشن کو اگلیکونز سے ظاہر کیا گیا تھا اور سویا بین کے خمیر شدہ وقت کے مطابق اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں بڑھتے ہوئے پیٹرن کو دکھایا گیا تھا۔ کرسٹیٹس [311.
RAO میں a-glucosidase سرگرمی کی ایک اعلی سطح ہے جو a-glycosidic ربط کو ختم کرتی ہے اور گلوکوز کے اعلی مواد کو خود بخود پیدا کرتی ہے۔ اس حقیقت کے علاوہ کہ گلوکوز فنگس کے لیے کاربن کا بنیادی ذریعہ ہے، RAC میں، گلوکوز کی سطح ابال کے بعد کم ہوئی کیونکہ یہ ثانوی میٹابولائٹس کی ترکیب کے لیے استعمال کیا جاتا تھا جیسے اوروگلوسن مشتق، جو مخصوص روغن مرکبات ہیں جو A. cristatus کے ذریعہ تیار کیے جاتے ہیں، A. اورزنے پچھلے مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ اوروگلوسن مشتقات ڈی پی پی ایچ میں سرگرمی رکھتے ہیں اور ان کو ممکنہ اینٹی آکسیڈینٹ مرکبات کے طور پر فرض کیا جاتا ہے [32]۔ مزید برآں، ٹوٹی ہوئی چاول کی سیل کی دیوار انزائمز کو چاول کے اندرونی حصوں میں داخل ہونے کی اجازت دے سکتی ہے [24]۔ لہذا، چاول کی بیرونی دیوار سے بغیر کسی رکاوٹ کے زیادہ سے زیادہ میٹابولائٹس کو آزادانہ طور پر نکالا جا سکتا ہے۔
RAO اور RAC دونوں کی بایو ایکٹیویٹیز اور میٹابولائٹس کے درمیان ارتباط کے نیٹ ورک کے نقشے میں (شکل 4)، عام رجحانات یہ تھے کہ flavonoids، نامیاتی تیزاب، شوگر کے مشتقات، اور فیٹی ایسڈز کو بائیو ایکٹیویٹی میں ممکنہ معاون کے طور پر تجویز کیا گیا تھا۔ Flavonoids اور phenolic acids مشہور اینٹی آکسیڈنٹس ہیں اور مختلف افعال کے حوالے سے ان کے بہت سے فوائد ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنے کی ان کی صلاحیت کی وجہ سے، وہ کھانے کے معیار کو بڑھانے اور جلد کی عمر کو بہتر بنانے کے لیے استعمال ہوتے ہیں [33]۔ مزید برآں، ایک پچھلی تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ فیٹی ایسڈز اور اینٹی آکسیڈنٹس جلد کی عمر کی روک تھام اور انتظام کے لیے ہم آہنگی کا اثر پیدا کر سکتے ہیں [34]۔
دوسری طرف، اوروگلوسن اور لائسو فاسفولیپڈ مشتقات RAC [35] میں میٹابولائٹس میں اضافی معاون کے طور پر کام کرتے ہیں۔ اوروگلوسن مشتقات میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں ہوتی ہیں، جیسا کہ اوپر بتایا گیا ہے، اور اس لیے ہم فرض کرتے ہیں کہ ان میں جلد کے دباؤ کو دور کرنے کے لیے آزاد ریڈیکل چین کے رد عمل کو ختم کرنے کی صلاحیت ہے۔ Yahagi et al. یہ ظاہر کیا کہ lysophospholipids جلد کی رکاوٹ اور جلد میں ہائیڈریشن کے افعال سے وابستہ عوامل کے اظہار کو بڑھا کر جلد کی نمی کو برقرار رکھ سکتا ہے [36]۔ صحت مند جلد کے لیے موئسچرائزیشن ایک اہم عنصر ہے کیونکہ خشکی جلد کی خرابی کو جنم دیتی ہے جس کی خصوصیات کھردری، کھردری جلد اور باریک جھریاں ہوتی ہیں [37,38]۔ ہمارا اندازہ ہے کہ آر اے او کی نسبت آر اے سی میں ابال کے آخری مرحلے پر اوروگلوسن اور لائسو فاسفولیپڈز کے جلد کے انسداد عمر کے بہتر اثرات ہوتے ہیں۔ زاؤ وغیرہ۔ ثابت ہوا کہ فوزہوان اینٹوں والی چائے، جس میں غالب فنگس A. کرسٹیٹس شامل ہے، ROS کو بجھانے اور Nrf2 سگنلنگ جھرنوں کو متحرک کرنے کے ذریعے فوٹو گرافی کو روک سکتی ہے [21]۔ لہذا، ہم فرض کرتے ہیں کہ RAC بالواسطہ راستوں سے کام کر کے RAO کے مقابلے میں زیادہ عمر مخالف صلاحیت پیش کرتا ہے جیسے کہ وافر نمی اور جلد کے لیے بہتر حالات کا قیامآزاد بنیاد پرست کشیدگی سے نجات.
مجموعی طور پر، ہم سمجھتے ہیں کہ بڑھا ہوا فیٹی ایسڈ، فینولک ایسڈ، فلیوونائڈز، لائسو فاسفولیپڈز، اور ہائیڈروکوئنز اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کو بڑھا سکتے ہیں اور ایلسٹن اور کولیجن کے RNA اظہار کو بہتر بنا سکتے ہیں، نیز MMP-1 کے RNA اظہار کو دبا سکتے ہیں۔ ابال ان مرکبات نے انوکولم فنگس کے مطابق میٹابولائٹس میں تبدیلی کے مختلف نمونوں کی نمائش کی اور مختلف حیاتیاتی سرگرمیوں کو متاثر کیا۔ اس مطالعے نے میٹابولومکس اپروچ کا استعمال کرتے ہوئے ایک ہی Aspergillus genus کی مختلف انواع کے درمیان مجموعی میٹابولزم میں فرق کو واضح کیا۔ اس کے علاوہ، مختلف انزائم سرگرمیوں نے مختلف میٹابولائٹس کی پیداوار کو متاثر کیا اور RAO اور RAC میں مختلف حیاتیاتی سرگرمیاں پیدا کیں۔
4. مواد اور طریقے
4.1 کیمیکل اور ری ایجنٹس
4.2 نمونہ کی تیاری اور نکالنا
کوجی مولڈز A. oryzae KCCM 11372 (کورین کلچر سینٹر آف مائیکرو آرگنزم، KCCM؛ جمہوریہ کوریا) اور A. cristatus (Aspergillus cristatus Cosmax-GF Cosmax BTI R&I سنٹر؛ Seongnam, Korea) کو چاولوں کے ابال کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔ . ہر مائکروجنزم کو مالٹ ایکسٹریکٹ ایگر (مالٹ ایکسٹریکٹ، 20 جی؛ گلوکوز، 20 جی؛ پیپٹون، 1 جی؛ ایگر، 20 جی/ ایل) 28 ◦C پر برقرار رکھا گیا۔ کوجی کی تیاری کے لئے ابال کے اقدامات کے بائیو پروسیس کو لی ایٹ ال سے ڈھال لیا گیا تھا۔ [11]۔ A. oryzae اور A. cristatus کے ساتھ خمیر شدہ چاول کوجی کے نمونے ہر 2 دن بعد (دن 0 سے 8 دن تک) کاٹے جاتے تھے اور مزید تجزیوں تک گہری منجمد حالت (−80 ◦C) میں محفوظ کیے جاتے تھے۔ تمام نمونے دو حیاتیاتی نقلوں کے ساتھ تیار کیے گئے تھے۔
چاول کوجی کے نمونے نکالنے کا طریقہ لی ایٹ ال سے اخذ کیا گیا تھا۔ معمولی ترمیم کے ساتھ [11]۔ مختصراً، 80 فیصد آبی ایتھنول (40 ملی لیٹر) ڈال کر اور کمرے کے درجہ حرارت پر آربیٹل شیکر (200 rpm برائے 24 گھنٹے) پر ہلچل کر کے منجمد خشک چاول کے کوجی کے نمونے (5 جی) نکالے گئے۔ نمونوں کو 10،000 rpm پر 5 منٹ کے لیے 4◦C پر سنٹر فیوگریشن کرنے کے بعد، سپرنٹنٹس کو 0.22 µm Millex GP فلٹر (Merck Millipur, Billerica, MA, USA) کے ساتھ فلٹر کیا گیا۔ فلٹر شدہ نمونے کے نچوڑوں کو سپیڈ ویکیوم کنسنٹریٹر (ہانیل، سیول، کوریا) کا استعمال کرتے ہوئے خشک کیا گیا تھا اور نکالنے کی پیداوار کا اندازہ کرنے کے لیے خشک وزن کی پیمائش کی گئی تھی۔
4.3 GC–TOF–MS تجزیہ
نکالے گئے چاول کوجی کے نمونوں کے اخذ کرنے کے اقدامات تھے جیسا کہ لی ایٹ ال نے بیان کیا ہے۔ [11]۔ GC–TOF–MS تجزیہ ایک Agilent 7890GC سسٹم (Santa Clara, CA, USA) پر Pegasus HT TOF-MS (Leco Corporation, St. Joseph, MI, USA) کے ساتھ کیا گیا تھا۔ کیریئر گیس (ہیلیم) کو RTx-5MS (30 میٹر لمبائی × 0.25 ملی میٹر اندرونی قطر، J&W Scientific, Folsom, CA, USA) کے ساتھ 1.5 mL/منٹ کی مستقل بہاؤ کی شرح پر استعمال کیا گیا تھا۔ انجیکٹر اور آئن سورس کا درجہ حرارت بالترتیب 250 اور 230 ◦C پر برقرار رکھا گیا۔ تندور کا درجہ حرارت 2 منٹ کے لیے 75 ◦C پر برقرار رکھا گیا اور پھر 15 ◦C/min پر 300 ◦C تک بڑھا دیا گیا، جو 3 منٹ تک برقرار رہا۔ پھر، 1 µL نمونے کو m/z 50–800 کی بڑے پیمانے پر اسکین رینج کے ساتھ انجکشن لگایا گیا۔ تمام نمونے کے تجزیے تین تجزیاتی نقل کے ساتھ کیے گئے تھے۔
4.4 UHPLC–LTQ–Orbitrap–MS تجزیہ
نکالے گئے چاول کوجی کے نمونوں کا تجزیہ الٹرا ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی لکیری ٹریپ کواڈروپول آربٹریپ ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (UHPLC–LTQ–Orbitrap–MS/MS) کا استعمال کرتے ہوئے ثانوی میٹابولائٹس کے لیے کیا گیا تھا جسے Kwon et al نے بیان کیا ہے۔ [39]۔ ہر نمونے کو Phenomenex KINETEX® C18 کالم (100 mm 2.1 mm، 1.7 m پارٹیکل سائز؛ Torrance, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا گیا تھا۔ مثبت اور منفی دونوں آئن طریقوں میں ماس سپیکٹرا اور فوٹوڈیوڈ سرنی کی حد کو بالترتیب m/z 100−1000 اور 200−600 nm کے لیے بنایا گیا تھا۔
4.5 ڈیٹا پروسیسنگ اور شماریاتی تجزیہ
خام GC–TOF–MS اور UHPLC–LTQ–Orbitrap–MS/MS ڈیٹا کو بالترتیب Leco ChromaTOF اور Thermo Xcalibur سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے netCDF (*.cdf) فارمیٹ میں تبدیل کیا گیا۔ متعلقہ نیٹ CDF (*.cdf) فائلوں کو MetAlign (13 جولائی 2021) تک رسائی حاصل کی گئی) لی ایٹ ال کے بیان کردہ پروٹوکولز کا استعمال کرتے ہوئے سافٹ ویئر کی ثالثی ڈیٹا پروسیسنگ کا نشانہ بنایا گیا۔ [11,24]۔ ماس سپیکٹرو میٹرک ڈیٹا، جو مناسب چوٹی ماس (m/z)، برقرار رکھنے کے اوقات (منٹ) اور متغیر کے طور پر چوٹی کے علاقے کی معلومات کی نمائندگی کرتا ہے، کا جائزہ SIMCA-P پلس 12 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔{13}} سافٹ ویئر (Umetrics, Umea, سویڈن) کثیر تغیراتی شماریاتی تجزیہ کے لیے۔ پرنسپل جزو تجزیہ (PCA)، جزوی کم از کم مربع امتیازی تجزیہ (PLS-DA)، اور آرتھوگونل جزوی کم از کم مربع امتیازی تجزیہ (OPLS-DA) سے پہلے، ڈیٹا سیٹس کو لاگ میں تبدیل کیا گیا تھا، اور چاول کوجی کا موازنہ کرنے کے لیے یونٹ کے تغیر کو چھوٹا کیا گیا تھا۔ مختلف فنگس کے ساتھ خمیر شدہ. PASW شماریات 18 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) کو تغیر کے یک طرفہ تجزیے کے ذریعے اہم فرق (< 0.05 کی p-value) کو جانچنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ارتباط کے نقشے کے لیے۔ میٹابولائٹس کے درمیان ارتباط کے نیٹ ورک کا نقشہ جس میں پیئرسن کے ارتباطی گتانک کی قیمت 0.5 سے زیادہ ہے اور بائیو ایکٹیویٹیز کو سائٹوسکیپ سافٹ ویئر (https://www.cytoscape.org/ (13 جولائی 2021 کو حاصل کیا گیا)) کے ساتھ بنایا گیا تھا۔ عارضی میٹابولائٹس کی شناخت مالیکیولر وزن اور سالماتی ساخت، برقرار رکھنے کا وقت، بڑے پیمانے پر ٹکڑے کو ملا کر کی گئی تھی۔
پیٹرن، اور ادب اور ہماری اندرون خانہ لائبریری سے الٹرا وایلیٹ (UV) ڈیٹا کا جذب
4.6 انزیمیٹک سرگرمیوں کا تعین
پچھلے مطالعات [25,40,41] کے مطابق -amylase، -glucosidase، اور -glucosidase کے لئے انزیمیٹک سرگرمی کی جانچ کی گئی تھی۔ ہر چاول کوجی کے نمونے کی 10 جی مقدار کو 90 ملی لیٹر پانی میں 120 بجے اور 25 ◦ سینٹی گریڈ پر 1 گھنٹے کے لیے ایک مداری شیکر پر ہلا کر نکالا گیا۔ نمونوں کو فلٹر کرنے کے بعد، سپرنٹنٹس کو انزائم کی سرگرمیوں کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔
4.7 اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں اور کل فینولک اور فلاوونائڈ مواد کا تعین
چاول کے کوجی کے نمونوں کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے، اے بی ٹی ایس، ڈی پی پی ایچ، فیرک کو کم کرنے والی اینٹی آکسیڈینٹ پاور (ایف آر اے پی)، کل فینولک مواد (ٹی پی سی)، اور کل فلاوونائڈ مواد (ٹی ایف سی) اسیس کو سہ رخی میں کیا گیا۔
ABTS اور FRAP اسیس لی ایٹ ال کے بیان کردہ طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ [24]۔ مختصراً، 0.7 ± 0۔{31}}2 پر 750 nm (180 µL) کی حتمی جاذبیت حاصل کرنے کے لیے ABTS سٹاک محلول کو کشید شدہ پانی سے پتلا کیا گیا۔ ہر نمونے کے عرق (20 µL) میں ایک 96-کنویں پلیٹ میں شامل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 6 منٹ تک رد عمل ہونے دیا گیا۔ اسپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 750 nm پر ماپا گیا۔ FRAP پرکھ کے لیے، 300 mM ایسیٹیٹ بفر (pH 3.6)، 20 mM آئرن (III) کلورائیڈ، اور 10 mM 2,4,6-tripyridyl-S-triazine (TPTZ) محلول 40 mM HCl میں مرکب (10:1:1، v/v/v) تیار کیا گیا تھا۔ نمونہ (10 µL) کو 300 µL FRAP ری ایجنٹ کے ساتھ ملایا گیا تھا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 6 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ جذب 570 nm پر ماپا گیا۔ DPPH پرکھ ون ایٹ ال سے ڈھلنے والے طریقہ کے بعد کی گئی تھی۔ [42]، جہاں DPPH اسٹاک محلول کا 180 µL (ایتھنول میں 0.2 mM) چاول کی 20 µL کوجی کے ساتھ دو مختلف فنگل عرقوں کے ساتھ 96-کنویں پلیٹوں میں ملایا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 20 منٹ تک رد عمل ظاہر کرنے کی اجازت دی گئی۔ اندھیرے میں. ڈی پی پی ایچ کے ذریعہ آزاد ریڈیکل جذب 515 nm پر ماپا گیا۔ ABTS، FRAP، اور DPPH کے نتائج کو ٹرولوکس مساوی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (TEAC) ارتکاز (mM) فی ملیگرام کوجی کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ معیاری ارتکاز کے منحنی خطوط 0.0078 mM سے 1 mM TEAC تک ہیں۔
ٹی ایف سی اور ٹی پی سی اسسیس کے لئے، لی ایٹ ال کے ذریعہ استعمال کردہ ایک طریقہ۔ [25] کی پیروی کی گئی۔ TFC پرکھ کے لیے، چاول کے ہر کوجی کے نمونے کے 20 µL کو 1 N NaOH کے 20 µL اور 180 µL کا 90 فیصد ڈائیتھیلین گلائکول میں ملایا گیا تھا۔ ایک 96- اچھی پلیٹ۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 60 منٹ تک مرکب کے انکیوبیشن کے بعد، جذب 405 nm پر ماپا گیا۔ ٹی ایف سی کو نارنگن مساوی (NE) ارتکاز (mM) فی ملیگرام کوجی کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔ معیاری حراستی وکر 0.0027 اور 0.3445 mM NE کے درمیان لکیری تھا۔ TPC پرکھ کے تجزیہ کے لیے، ہر نمونے کے 20 µL کو 100 µL 0.2 N Folin–Ciocalteu reagent کے ساتھ 96-کنویں پلیٹوں میں کمرے کے درجہ حرارت پر 6 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 7.5 فیصد سوڈیم کاربونیٹ (Na2CO3) محلول کا 80 µL مرکب میں شامل کیا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 60 منٹ تک رد عمل ظاہر کرنے کی اجازت دی گئی۔ آخر میں، جاذبیت کا اندازہ 750 nm پر کیا گیا۔ نتائج کو 0.0230–2.9391 mM GE کی معیاری ارتکاز کی حد میں گیلک ایسڈ مساوی (GE) ارتکاز (mM) فی ملی گرام کوجی کے طور پر ظاہر کیا گیا ہے۔
4.8 سیل کلچرز
4.9 ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن
سیل کے چھروں سے کل آر این اے کو الگ کرنے اور اس کی مقدار درست کرنے کے لیے، ٹرائزول ریجنٹ استعمال کیا گیا، اور تجزیہ سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ cDNA کی ترکیب 20 µL کے کل رد عمل کے حجم میں کی گئی تھی۔ رد عمل کا مرکب 2 µg کل RNA، oligo (dT)، اور ریورس ٹرانسکرپشن پریمکس پر مشتمل ہے درج ذیل رد عمل کی شرائط کے تحت: 45 ◦C 45 منٹ کے لیے، اس کے بعد 5 منٹ کے لیے 95 ◦C۔ RT-PCR کو جین کے اظہار کی مقدار کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور نتائج کا بعد میں StepOne PlusTM سسٹم سافٹ ویئر (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے بعد ABI 7300 آلے میں پری مکسڈ ROX (اپلائیڈ بایو سسٹم، فوسٹر سٹی، CA، USA) اور پرائمر (Bioneer، Daejeon، Korea) کے ساتھ SYBR گرین PCR ماسٹر مکس کا استعمال کرتے ہوئے RT-PCR ایمپلیفیکیشنز کیے گئے۔ ردعمل کے حالات حسب ذیل تھے: 10 منٹ کے لیے 95 ◦C پر آغاز، اس کے بعد 15 s کے لیے 95 ◦C، 30 s کے لیے 60 ◦C، اور 40 سائیکلوں کے لیے 30 s کے لیے 72 ◦C. ایکٹین کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔
آخر میں، چاول کوجی نے مختلف میٹابولائٹس اور بائیو ایکٹیویٹیز کی پیداوار کو دکھایا جو مختلف ایسپرگیلس پرجاتیوں کے مطابق استعمال کیا جاتا ہے۔ کے اعلی درجےflavonoidsاور آر اے سی میں اوروگلوسن مشتقات کے نتیجے میں زیادہ اضافہ ہوا۔اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیRAO کے مقابلے میں۔ اس کے علاوہ، فیٹی ایسڈ کے synergistic اثرات اوراینٹی آکسیڈینٹ مرکباتدونوں کوجی میں پائے جانے والے آر این اے اظہار سے وابستہ تھے۔جلد کی عمر مخالف عنصر. RAC میں پائے جانے والے Auroglaucin مشتقات اور lysophospholipids بھی ایسے امیدوار تھے جن کا تعلقجلد کی عمر مخالف عوامل کا آر این اے اظہار. لہٰذا، اگرچہ چاول کوجی کو ایک ہی جینس (Aspergillus) کے ارکان کا استعمال کرتے ہوئے خمیر کیا جاتا ہے، لیکن مختلف انواع کے لیے انزائم کی سرگرمیوں اور میٹابولائٹس میں نمایاں فرق موجود ہیں، اور وہ اثر انداز ہوتے ہیں۔حیاتیاتی سرگرمیاںجیسا کہاینٹی آکسیڈینٹاورمخالف عمر کی سرگرمیاں. لہذا، یہ مطالعہ جامع بصیرت فراہم کرتا ہے، ساتھ ہی ساتھ ٹیکہ جرثوموں کے عقلی انتخاب کے لیے منطق
میٹابولومکس، کوجی کی تجارتی پیداوار کے معیار کو بہتر بنانے کے لیے۔
اضافی مواد:ذیل میں آن لائن دستیاب ہیں، شکل S1: چاول کے لیے PLS-DA سکور پلاٹ (A,B) اور OPLS-DA سکور پلاٹ (C)کوجیکے ساتھ خمیرAspergillus cristatusیاA. oryzaeUHPLC–LTQ–Orbitrap MS/MS (A,C) اور GC–TOF–MS (B) سے حاصل کیے گئے تھے۔، ٹیبل S1: چاول سے نمایاں طور پر الگ الگ میٹابولائٹس کی فہرست۔کوجیمختلف کے ساتھAspergillus spp. خمیر کے دوران UHPLC–LTQ–Orbitrap-MS/MS، ٹیبل S2: چاول سے نمایاں طور پر الگ الگ میٹابولائٹس کی فہرستکوجیمختلف کے ساتھAspergillus spp. ابال کے دوران GC-TOF-MS کی طرف سے شناخت کی گئی، شکل S2: بایو ایکٹیویٹیز (جلد کے خلیات کا اثر اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی) اور چاول کا ارتباط کا نقشہکوجیکے ساتھ خمیرAspergillus cristatusیاA. oryzaeپیئرسن کے ارتباط کے گتانک کے مطابق میٹابولائٹس۔ ہر مربع پیئرسن کے ارتباطی عددی اقدار (r) کی نشاندہی کرتا ہے۔
مصنف کی شراکتیں:تصوراتی، CL اور SL؛ طریقہ کار، HL، SL، SK (Seoyeon Kyung) اور JR؛ توثیق، HL، SL اور SK (Seoyeon Kyung)؛ رسمی تجزیہ، HL اور SK (Seoyeon Kyung)؛ تفتیش، HL اور SL؛ وسائل، JR، SK (Seunghyun Kang) اور MP؛ تحریر - اصل مسودہ کی تیاری، HL؛ تحریر - جائزہ اور ترمیم، HL اور SL؛ تصور، HL؛ نگرانی، SL اور CL؛ پروجیکٹ انتظامیہ، SK (Seunghyun Kang)، MP، اور CL؛ فنڈنگ کا حصول، CL تمام مصنفین نے شائع شدہ کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔مخطوطہ کا ورژن.
فنڈنگ:اس کام کو کوریا کے انسٹی ٹیوٹ آف پلاننگ اینڈ ایویلیوایشن فار ٹکنالوجی ان فوڈ، ایگریکلچر اینڈ فاریسٹری (IPET) نے زرعی مائیکرو بایوم آر اینڈ ڈی پروگرام (دی اسٹریٹجک انیشیٹو فار مائیکرو بایومس ان ایگریکلچر اینڈ فوڈ) کے ذریعے تعاون کیا، جس کی مالی اعانت وزارت زراعت، خوراک اور دیہی ہے۔ امور (MAFRA) (گرانٹ نمبر 918011-04-3-HD020)۔ مزید برآں، اس کام کو کوریا انسٹی ٹیوٹ آف پلاننگ اینڈ ایویلیوایشن فار ٹکنالوجی ان فوڈ، ایگریکلچر، فاریسٹری (IPET) نے ہائی ویلیو ایڈڈ فوڈ ٹیکنالوجی ڈیولپمنٹ پروگرام کے ذریعے سپورٹ کیا، جس کی مالی اعانت وزارت زراعت، خوراک اور دیہی امور (MAFRA) نے فراہم کی۔ (گرانٹ نمبر 318027-04-3-HD030)
ڈیٹا کی دستیابی کا بیان:اس مطالعے میں پیش کردہ ڈیٹا کی درخواست پر دستیاب ہے۔اسی مصنف
اعترافات:اس تحقیق کو کونکوک یونیورسٹی ریسرچر فنڈ نے تعاون کیا۔2020.
حوالہ جات
1. سانلیئر، این. گوکسن، بی بی؛ سیزگین، AC خمیر شدہ کھانوں کے صحت کے فوائد۔ تنقید Rev. Food Sci. نٹر 2019، 59، 506–527۔ [کراس ریف]
2. یو، K.-W.؛ لی، S.-E.؛ چوئی، ایچ ایس؛ Suh, HJ; را، کے ایس؛ چوئی، جے ڈبلیو؛ ہوانگ، J.-H. کورین روایتی میجو سے الگ تھلگ Aspergillus oryzae CJCM-4 کا استعمال کرتے ہوئے چاول کوجی کی تیاری کے لیے اصلاح۔ فوڈ سائنس۔ بائیو ٹیکنالوجی 2012، 21، 129-135۔ [کراس ریف]
3. یانگ، وائی؛ زیا، وائی۔ لن، ایکس۔ وانگ، جی؛ ژانگ، ایچ. Xiong, Z.; یو، ایچ. یو، جے؛ Ai, L. اعلی ایتھنول رواداری اور ابال کی سرگرمی کے ساتھ خمیر خمیر بنا کر چینی چاول کی شراب میں ذائقہ پروفائلز کو بہتر بنانا۔ خوراک Res. انٹر 2018، 108، 83–92۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
4. اچیکاوا، ای. ہیراتا، ایس. Hata, Y.; یازاوا، ایچ. تمورا، ایچ. کنیوکے، ایم؛ Iwashita, K.; ہیراتا، D. چاول کوشیتانری سے بنی جاپانی الکحل مشروبات میں میٹابولائٹس پر کوجی اسٹارٹر کا اثر۔ بائیوسی بائیو ٹیکنالوجی بائیو کیم۔ 2020، 84، 1714–1723۔ [کراس ریف]
5. Phetpornpaisan، P.؛ Tippayawat، P.؛ جے، ایم؛ Sutthanut, K. ایک مقامی تھائی cultivar چپچپا سیاہ چاول کی چوکر: امیونو موڈیولیشن، سیل کی قابل عملیت اور کولیجن کی ترکیب، اور میٹرکس میٹالوپروٹینیز-2 اور-9 روک میں فعال مرکبات کا ذریعہ۔ جے فنکٹ۔ کھانے کی اشیاء 2014، 7، 650–661۔ [کراس ریف]
6. کم، اے جے؛ چوئی، جے این؛ کم، جے؛ کم، ایچ وائی؛ پارک، SB؛ Yeo, SH; چوئی، جے ایچ؛ لیو، کے ایچ؛ لی، CH میٹابولائٹ پروفائلنگ اور چاول کوجی کی حیاتیاتی سرگرمی Aspergillus strains کے ذریعے خمیر شدہ۔ J. مائکروبیول۔ بائیو ٹیکنالوجی 2012، 22، 100-106۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
7. ایمز، بی این؛ شیگیناگا، ایم کے؛ ہیگن، ٹی ایم آکسیڈنٹس، اینٹی آکسیڈینٹس، اور عمر بڑھنے کی انحطاطی بیماریاں۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 1993, 90, 7915–7922۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
8. والکو، ایم؛ Leibfritz, D.; مونکول، جے. کرونین، ایم ٹی؛ مزور، ایم. ٹیلسر، جے فری ریڈیکلز، اور عام جسمانی افعال اور انسانی بیماری میں اینٹی آکسیڈنٹس۔ انٹر جے بائیو کیم۔ سیل بائیول۔ 2007، 39، 44–84۔ [کراس ریف]
9. اترا، بی۔ سنگھ، اے وی؛ زمبونی، پی. مہاجن، RT آکسیڈیٹیو تناؤ اور نیوروڈیجینریٹیو امراض: اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم اینٹی آکسیڈینٹ علاج کے اختیارات کا جائزہ۔ کرر نیوروفرماکول۔ 2009، 7، 65-74۔ [کراس ریف]
10. ین، G.-C.؛ چانگ، Y.-C.؛ Su, S.-W. اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی اور چاول کوجی کے فعال مرکبات Aspergillus candidus کے ساتھ خمیر شدہ۔ فوڈ کیم۔ 2003، 83، 49-54۔ [کراس ریف]
11. لی، ڈی ای؛ لی، ایس؛ سنگھ، ڈی. جنگ، ای ایس؛ شن، ایچ ڈبلیو؛ چاند، بی ایس؛ لی، CH براؤن-، سفید-، اور دیوہیکل ایمبریو-چاول کے ساتھ کوجی ابال کے لیے وقت سے حل شدہ تقابلی میٹابولوم۔ فوڈ کیم۔ 2017، 231، 258–266۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
12. جرار، ایم. بہل، ایس. شاہین، این. فاطمہ، اے. Nasab, R. مصنوعی طور پر تصویر کی عمر کے انسانی ڈرمل فبروبلاسٹ سیل لائنوں کے ایلسٹین ریشوں پر ریٹینول اور الفا ہائیڈروکسی ایسڈ کے اینٹی ایجنگ اثرات۔ انٹر J. Med Health Biomed. فارم۔ انج. 2015، 7، 328۔
13. بولا، ایس آر؛ الصبیعی، AM؛ الجندن، آر وائی؛ بالاکرشنا، جے پی؛ راوی، پی کے؛ ویراراگھون، وی پی؛ پلئی، اے اے؛ گولاپلی، ایس ایس آر؛ جوزف، جے پی؛ سوراپنی، کے ایم ان وٹرو زخم بھرنے کی طاقت ارسٹولوچیا ساکاٹا کے میتھانولک پتی کے عرق کی ممکنہ طور پر کولیجن-1 اظہار پر اس کے محرک اثر سے ثالثی کی گئی ہے۔ ہیلیون 2019، 5، e01648۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
14. مینکے، ایم سی؛ نوباری، سی کے؛ شنزر، ایس. والرٹ، ایچ. Lademann, J.; ڈارون، ME جلد کے کولیجن I/Elastin انڈیکس پر زبانی طور پر لیے گئے Carotenoid-Rich Curly Kale Extract کا اثر۔ غذائی اجزاء 2017، 9، 775۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
15. مجید، ایم. بھٹ، بی۔ آنند، ایس. شیوکمار، اے. پالیوال، پی. گیتھا، KG UV-حوصلہ افزائی ROS کی روک تھام اور عام انسانی ڈرمل فائبرو بلاسٹس میں Phyllanthus emblica extract کے ذریعے کولیجن کو نقصان۔ جے کاسمیٹ۔ سائنس 2011، 62، 49-56۔ [پب میڈ]
16. مسعودہ، ایم. موراتا، کے. ناروتو، ایس. Uwaya, A.; Isami, F.; Matsuda، H. میٹرکس میٹالوپروٹینیز-1 مورنڈا سائٹریفولیا کے بیجوں کے عرق کی روک تھام کرنے والی سرگرمیاں اور UVA سے شعاع شدہ انسانی ڈرمل فائبرو بلاسٹس میں اس کے اجزاء۔ بائول فارم۔ بیل. 2012، 35، 210-215۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
17. Seo, Y.-K.; جنگ، S.-H. گانا، K.-Y.؛ پارک، J.K. پارک، C.-S. UV-حوصلہ افزائی عام جلد کے فائبرو بلاسٹس پر خمیر شدہ چاول کی چوکر کے عرق کا اینٹی فوٹوگرافی اثر۔ یور خوراک Res. ٹیکنالوجی. 2010، 231، 163–169۔ [کراس ریف]
18. گوفو، ص. Trindade، H. چاول کے اینٹی آکسیڈنٹس: فینولک ایسڈز، فلیوونائڈز، اینتھوسیاننز، پروانتھوسیانائیڈنز، ٹوکوفیرولز، ٹوکوٹرینولز، -اوریزانول، اور فائیٹک ایسڈ۔ فوڈ سائنس۔ نٹر 2014، 2، 75–104۔ [کراس ریف]
19. Bechman, A.; فلپس، آر ڈی؛ چن، جے ابال اور ذخیرہ کرنے کے دوران چاول اور جو کوجی کی منتخب طبعی خصوصیات اور انزائم سرگرمی میں تبدیلیاں۔ جے فوڈ سائنس 2012، 77، M318–M322۔ [کراس ریف]
20. کانگ، ڈی. ایس یو، ایم؛ Duan, Y.; ہوانگ، Y. Eurotium cristatum، Fuzhuan brick tea سے ایک ممکنہ پروبائیوٹک فنگس، گٹ مائکرو بائیوٹا کو ماڈیول کر کے چوہوں میں موٹاپے کو کم کرتا ہے۔ فوڈ فنکشن۔ 2019، 10، 5032–5045۔ [کراس ریف]
21. زاؤ، ص. عالم، ایم بی؛ لی، ایس ایچ پروٹیکشن آف UVB-حوصلہ افزا فوٹو گرافی بذریعہ Fuzhuan-Brick Tea Aqueous Extract بذریعہ MAPKs/Nrf2- میڈیٹڈ ڈاؤن ریگولیشن آف MMP-1۔ غذائی اجزاء 2018, 11, 60۔ [CrossRef] [PubMed]
22. Hur, SJ; لی، SY؛ کم، وائی سی؛ چوئی، آئی۔ کم، جی بی پودوں پر مبنی کھانوں میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی پر ابال کا اثر۔ فوڈ کیم۔ 2014، 160، 346–356۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
23. Zhou, S.-D.; Xu, X.; Lin, Y.-F.; Xia, H.-Y.; ہوانگ، ایل. ڈونگ، ایم ایس HPLC-PDA-Triple-TOF-MS/MS-ABTS سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے Eurotium cristatum کے ساتھ خمیر شدہ Angelica dahurica میں مفت ریڈیکل سکیوینگنگ مرکبات کی آن لائن اسکریننگ اور شناخت۔ فوڈ کیم۔ 2019، 272، 670–678۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
24. لی، ایس. لی، ڈی ای؛ سنگھ، ڈی. لی، CH میٹابولومکس نے چاول کوجی ابال کی طرف بہترین اناج پری پروسیسنگ (ملنگ) کو ظاہر کیا۔ جے ایگرک فوڈ کیم۔ 2018، 66، 2694–2703۔ [کراس ریف]
مزید کے لیے پوچھیں:
ای میل:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: علاوہ 86 15292862950
