قبل از وقت خنزیروں میں گٹ، قوت مدافعت اور دماغ کی نشوونما کے لیے دودھ کا اوسٹیوپونٹن

مزید معلومات کے لیے plz رابطہ کریں۔david.wan@wecistanche.com

خلاصہ

بچوں کے فارمولے میں دودھ آسٹیوپونٹن (OPN) کی کمی جزوی طور پر بچوں کو پلائے جانے والے فارمولے یا ماں کے دودھ کے درمیان ترقیاتی فرق کا سبب بن سکتی ہے۔ ہم اس سائز کو اپ ووٹ دیتے ہیں جس میں دودھ کی خوراک بوائین دودھ کے ساتھ ملتی ہے۔او پی اینگٹ، قوت مدافعت، اور دماغ کی نشوونما کو بہتر بناتا ہے اور اسے قبل از وقت پگ ماڈل میں آزمایا۔ سیزیرین سیکشن (90 فیصد حمل) کے ذریعے پیش کیے جانے والے قبل از وقت خنزیروں کو کچے گائے کا دودھ (CON, n=19) یا وہی خوراک OPN (46 mg/(kg:d)، n{ کی جسمانی لحاظ سے متعلقہ خوراک کے ساتھ ضمیمہ کی گئی تھی۔ {3}})۔ مطالعہ کے دوران طبی نتائج، نظامی قوت مدافعت، اور اعصابی ترقی سے متعلق اختتامی نکات کا اندازہ لگایا گیا، اور 19 ویں دن گٹ کے ٹشوز کو جمع کیا گیا۔ گروتھ پیٹرن، ابتدائی موٹر ڈیولپمنٹ، اور زیادہ تر نظامی مدافعتی پیرامیٹرز OPN اور کے درمیان ایک جیسے تھے۔CONخنزیر OPN خنزیروں میں CON پگز کے مقابلے ولس ٹو کریپٹ کا تناسب زیادہ تھا اور دن 8 پر مونوسائٹ اور لمفوسائٹ کی تعداد زیادہ تھی۔ گٹ ہاضمہ اور جاذب افعال اور علمی کارکردگی (T-maze ٹیسٹ) OPNand CON خنزیر کے درمیان ایک جیسے تھے۔ آخر میں، غذائی ضمیمہ کے ساتھاو پی اینبیسل بوائین دودھ کی سطح سے اوپر گٹ کی ساخت اور نظامی قوت مدافعت میں معمولی بہتری آئی جس کا علمی کارکردگی پر کوئی اثر نہیں ہوا۔ فوری طور پر نوزائیدہ مدت میں زیادہ سے زیادہ موافقت کو محفوظ بنانے کے لیے بچوں کے فارمولے میں OPN کی کم سے کم سطحوں کا تعین ہونا باقی ہے۔

مطلوبہ الفاظ: osteopontin; حیاتیاتی دودھ پروٹین؛ قبل از وقت نوزائیدہ؛ آنتوں کی صحت؛ نظامی استثنیٰ؛ دماغ کی ترقی؛ ادراک

Cistanche کے بارے میں مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

شیر خوار فارمولوں میں بایو ایکٹیو پروٹین کی سطح کو بہتر بنانے سے بچوں کو دودھ پلانے والے فارمولے اور ماں کے دودھ کے درمیان نشوونما اور بیماری کے خلاف مزاحمت میں اچھی طرح سے قائم فرق کو کم کرنے میں مدد مل سکتی ہے[1-3]۔ Osteopontin (OPN) ایک تیزابی پروٹین ہے جس میں ہائی گلائکوسیلیشن اور فاسفوریلیشن ہے جو فوری طور پر نوزائیدہ دور میں نشوونما کو متحرک کرنے کے لیے اہم سمجھا جاتا ہے اور یہ ابتدائی انسانی دودھ میں وافر مقدار میں موجود ہوتا ہے[4-6]۔ OPN دودھ کی ارتکاز پرجاتیوں کے درمیان نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہے، اور انسانی دودھ میں بھی ماؤں کے درمیان انفرادی فرق زیادہ ہوتا ہے۔ دودھ پلانے کی مدت کے دوران کمی ایک مستقل مشاہدے کے باوجود لگتا ہے [5,7]۔ ایک ملٹی سینٹر مطالعہ میں، درمیانی OPN کی سطح 160 mg/L تھی تقریباً 13 ہفتے بعد از پیدائش [7]۔ انسانی دودھ میں OPN کی سب سے اوپر 25 فیصد سطح 230-495 mg/L تھی، جو کہ بوائین دودھ (~18 mg/L) یا بچوں کے فارمولوں (~9 mg/L) کے لیے رپورٹ کردہ اوسط درجے سے بہت زیادہ ہے[ 4]۔ فی الحال، بوائین دودھ OPN تجارتی طور پر قابل رسائی ہے اور اس وجہ سے اسے بچوں کے فارمولے میں شامل کیا جا سکتا ہے تاکہ انسانی دودھ میں پائی جانے والی سطحوں کے برابر ہو۔

OPN میں انتہائی محفوظ ارجنائن-گلائسین-ایسپارٹیٹ (RDG) انٹیگرین-بائنڈنگ سائٹ کی وجہ سے، حیاتیاتی اثرات تمام پرجاتیوں میں ایک جیسے ہونے کی توقع کی جا سکتی ہے [8]۔ RDG تسلسل پر مشتمل ٹکڑا انٹیگرین بائنڈنگ موٹف [9] کے قریب گلائکوسیلیشنز کی وجہ سے خرابی کے خلاف انتہائی مزاحم ہے، اس طرح گٹ میں دیسی دودھ OPN کی حیاتیاتی صلاحیت کی حمایت کرتا ہے۔ وٹرو میں، دودھ OPN آنتوں کے خلیوں کے پھیلاؤ کو متحرک کرنے اور لیکٹو فیرن (LF) کے ساتھ ایک کمپلیکس کے حصے کے طور پر اینٹی بیکٹیریل سرگرمیاں کرنے کے قابل ہے، جو ایک اور اہم بایو ایکٹیو دودھ پروٹین [10,11] ہے۔ آنتوں میں دودھ کے OPN کے فائدہ مند اثرات کو Vivo میں بھی دکھایا گیا ہے۔ نوزائیدہ ریشس بندروں میں آنتوں کی نشوونما کو بوائین دودھ OPN کے ذریعہ بہتر بنایا گیا ہے اور OPN کے اضافی فارمولے سے کھلائے جانے والے جانوروں کا جیجنل ٹرانسکرپٹوم دودھ پلانے والے ہم منصبوں کی طرح تھا [12]۔ غذائی دودھOPN اثرات، دونوں مقامی طور پر آنتوں میں اور ساتھ ہی ساتھ بچوں میں معمولی آنتوں کے جذب کے بعد نظامی طور پر، جزوی طور پر اینڈوجینس او ​​پی این لیولز [5,13,14] کو متحرک کرنے کی صلاحیت سے منسوب کیا گیا ہے۔ OPN جسم کے زیادہ تر بافتوں اور سیالوں میں پایا جاتا ہے جہاں یہ خلیوں کے پھیلاؤ، منتقلی، آسنجن، اور آپسنائزیشن [8,10,15,16] میں حصہ لینے کے علاوہ بائیو منیرلائزیشن اور امیون ماڈیولیشن جیسے مختلف افعال انجام دیتا ہے۔ OPN Th1/Th2 بیلنس کو منظم کرنے کے لیے جانا جاتا ہے، جو کہ نوزائیدہ بچوں میں Th2 پولرائزیشن کی طرف متوجہ ہوتا ہے [17]۔ OPN سائٹوکائن جیسی خصوصیات رکھتا ہے اور IL-12 اظہار اور IL-10، Th2cytokine کی پیداوار کو روک کر میکروفیجز [18] میں Th1 قسم کی قوت مدافعت کو متحرک کر سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، OPN دماغی پختگی کی حمایت کر سکتا ہے، ممکنہ طور پر ماں کا دودھ پلانے والے بچوں کے مقابلے میں فارمولہ پلائے جانے والے بچوں میں بہتر علمی افعال میں حصہ ڈالتا ہے [19-21]۔ اس کی حمایت میں، OPN سے کھلائے گئے ماؤس کے پپوں نے سیکھنے کی بہتر صلاحیت اور مائیلینیشن سے متعلق پروٹین کی اعلیٰ سطح ظاہر کی، بشمول مائیلین بنیادی پروٹین اور مائیلین سے وابستہ گلائکوپروٹین، اور OPN نے بھی وٹرو میں مائیلینیشن کو بڑھایا [14,22,23]۔ سوروں کی اصطلاح میں، کئی دماغی علاقے بوائین دودھ OPN کے ساتھ غذائی ضمیمہ کے بعد رشتہ دار حجم میں اضافے سے متاثر ہوئے لیکن ادراک کے پیرامیٹرز پر کوئی اثر نہیں دیکھا گیا [24]۔

قبل از وقت بچے (پیدائش<37 weeks="" of="" gestation)="" are="" particularly="" diet-sensitive="" due="" to="" their="" relatively="" immature="" gut,="" immune="" system,="" and="" brain.="" such="" infants="" are="" susceptible="" to="" developing="" both="" short-and="" long-term="" complications="" such="" as="" necrotizing="" enterocolitis="" (nec),="" feeding="" intolerance,="" infections,="" and="" impaired="" neurodevelopment="" [25-28].="" bovine="" milk="" opn="" supplementation="" has="" previously="" been="" shown="" to="" reduce="" nec="" severity="" in="" formula-fed="" preterm="" piglets="" [29],="" and="" other="" milk="" factors="" have="" proven="" to="" support="" brain="" structure="" and="" cognitive="" development,="" particularly="" in="" preterm="" newborns="" [30,31].="" on="" this="" background,="" we="" hypothesized="" that="" preterm="" newborns,="" fed="" a="" standard="" milk="" diet="" with="" relatively="" natural="" bioactivity,="" would="" benefit="" from="" further="" opn="" supplementation.="" following="" an="" initial="" in="" vitro="" demonstration="" of="" opn="" antimicrobial="" activity,="" we="" used="" diet-sensitive="" preterm="" pigs="" [32-34]to="" investigate="" if="" an="" opn-enriched="" bovine="" milk="" diet="" would="" improve="" gut,="" immunity,="" and="" brain="" development="" in="" the="" first="" three="" weeks="" after="" preterm="">

2. مواد اور طریقے 2.1. In Vitro Antibacterial Assay

سب سے پہلے، ایک اینٹی بیکٹیریل پرکھ [35] کی بائیو ایکٹیویٹی کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔او پی اینStaphylococcus، یعنی، ایک عام نوزائیدہ گرام پازیٹو پیتھوجین [36] کی نشوونما کو روکنے یا مارنے کی اس کی صلاحیت کا اندازہ لگا کر۔ سور کے مطالعہ میں داخلی خوراک کے لیے بنیاد کے طور پر استعمال ہونے والا وہی غیر پیسٹورائزڈ بوائین دودھ 15 منٹ کے لیے لگاتار 500×g اور 3000×8,4 ڈگری پر پگھلا اور سینٹری فیوج کیا گیا، ہر بار چکنائی کے مواد کو دور کرنے کے لیے پانی کی تہہ کی خواہش کرتے ہوئے دودھ کے پروٹین کے نقصان کو کم سے کم کرنا [37]۔ سکمڈ بوائین دودھ کی بانجھ پن کی جانچ کے بعد،او پی اینپاؤڈر(Lacprodan⑧ OPN-10, Arla Foods Ingredients, Viby, Denmark) کو 1.6 کی ارتکاز میں تحلیل کیا گیا تھا (وہی مقدار جو پہلے دن سور کے مطالعہ میں OPN دودھ میں شامل کی گئی تھی)، 2.8,5، 10 اور 20 گرام /L، 6 ٹیسٹ غذا بنانا، بشمول غیر سپلیمنٹ شدہ سکمڈ بوائین دودھ، جو تجزیہ تک -80 ڈگری پر 1 ملی لیٹر کے ایلی کوٹس میں محفوظ کیا گیا تھا۔ S.epidermidis (WT1457 [38] کے منجمد مڈ لاگ کلچر اسٹاک [35]، جو برائے مہربانی ڈاکٹر Xiaoyang Wang، یونیورسٹی آف گوتھنبرگ، سویڈن نے فراہم کیے تھے، کو پگھلا کر 3200×g پر سینٹری فیوج کیا گیا، اور انکیوبیشن سے پہلے جراثیم سے پاک نمکین میں دوبارہ معطل کر دیا گیا۔ 2، 4,6 اور 24 گھنٹے کے لیے 10 ڈگری اور 106 CFU/mL کی حسابی خوراک پر 6 ٹیسٹ غذائیں (تجارتی طور پر دستیاب پریٹرم دودھ کے فارمولے کے علاوہ، جو منفی کنٹرول کے طور پر شامل ہے [1]) 37 ڈگری پر مختلف انکیوبیشن اوقات کے بعد ٹیسٹ کی خوراک اور بچوں کے فارمولے میں ٹیکے کی حتمی خوراک اور بیکٹیریا کی افزائش کا تعین کیا گیا تھا [35]۔ اینٹی بیکٹیریل پرکھ کے آزاد سہ رخی انجام دیئے گئے۔

2.2 جانور اور تجرباتی ڈیزائن

تمام جانوروں کے طریقہ کار کو ڈینش اینیمل ایکسپیریمنٹ انسپکٹوریٹ کی طرف سے جاری کردہ لائسنس (لائسنس نمبر 2014-15-0201-00418) کے تحت منظور اور انجام دیا گیا تھا۔ دو تجارتی طور پر نسل کے بونے سے اڑتالیس خنزیر (ڈینش لینڈریسیکس یارک شائر ڈیوروک) تقریباً 90 فیصد حمل (مکمل مدت: 117 ± 2 ڈی) میں سیزرین سیکشن کے ذریعے قبل از وقت زندہ کیے گئے تھے۔ کامیاب بحالی کے بعد اور جب بھی زچگی کی بے ہوشی سے بے ہوشی کی گئی تھی، والدین کی غذائیت (PN) کو سہولت فراہم کرنے کے لیے ایک اندرونی نال آرٹیریل کیتھیٹر کی سرجیکل جگہ کا تعین اور داخلی تغذیہ (EN) کو سہولت فراہم کرنے کے لیے ایک اوروگیسٹرک فیڈنگ ٹیوب کو انجام دیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے۔ دوبارہ زندہ کرنے میں ناکامی کی وجہ سے پیدائش کے فوراً بعد چھ پِگلٹس کو ایتھانائز کیا گیا تھا اور اس کے نتیجے میں انہیں مطالعے سے خارج کر دیا گیا تھا۔ مجموعی طور پر، بیالیس خنزیروں کی جنس اور پیدائشی وزن کے مطابق درجہ بندی کی گئی اور دو گروپوں میں سے ایک کو تفویض کیا گیا: ایک گروپ جو خام گائے کا دودھ وصول کرتا ہے جس کو OPN(OPN, n=21) ​​کے ساتھ ملایا جاتا ہے اور ایک کنٹرول گروپ جو غیر اضافی خام گائے حاصل کرتا ہے۔ دودھ (CON, n=21)(شکل 1)۔ غیر فعال حفاظتی ٹیکوں کو محفوظ کرنے کے لیے پہلے 24 گھنٹے کے اندر نال کیتھیٹر کے ذریعے زچگی کے پلازما کو 3 بولس (کل 25 ملی لیٹر/کلوگرام) میں ملایا گیا۔ 19 دنوں کے مطالعے کے دوران سوروں کو انفرادی طور پر پالا گیا۔ دن 1-5 سے انہیں ہوادار گرم انکیوبیٹرز (پہلے 24 گھنٹے کے دوران آکسیجن کے علاوہ) میں پالا گیا، اور 5 اور 11 دن انہیں بڑے پنجروں میں منتقل کر دیا گیا۔ تمام طبی تفتیش کاروں کو تجرباتی مدت کے دوران غذا کے علاج سے اندھا کردیا گیا تھا۔

2.3۔ غذائیت اور کھانا کھلانا

تمام خنزیروں کو کھلائی جانے والی داخلی خوراک مقامی جرسی گائے کے ڈیری فارم سے دو بیچوں میں جمع کیے گئے اور -20 ڈگری پر ذخیرہ کیے گئے غیر پیسٹورائزڈ انٹیکٹ بوائن دودھ پر مبنی تھی۔ گائے کے دودھ کو معدنیات اور وٹامنز (15g/L پیڈیاٹرک سیراوٹ، نیوٹریشیا، یوٹریچٹ، نیدرلینڈز) اور الیکٹرولائٹس (6 جی/ایل ریوولائٹ نیوٹریشن، گونر کجیمز اے پی ایس، کوپن ہیگن، ڈنمارک) سے مضبوط کیا گیا تھا۔ یہ دودھ کی بنیاد CON گروپ میں سوروں کے لیے مکمل داخلی خوراک کے طور پر کام کرتی ہے۔ OPN گروپ میں خنزیروں کے لیے، بوائین دودھ کی بنیاد کو ایک درمیانی ضمیمہ پر بوائین دودھ OPN(Lacprodan⑧ OPN-10) کے ساتھ مزید ضمیمہ کیا گیا تھا۔او پی این319 mg/L(IQR 272-445) کا ارتکاز 46 mg/(kg·day) کی روزانہ مقررہ اضافی OPN خوراک حاصل کرنے کے لیے۔ ارتکاز OPN کی انسانی دودھ کی حد کے اندر ہے [4]۔ جمع شدہ بوائین دودھ میں OPN کا ارتکاز 91 mg/L تھا جیسا کہ مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (LC-MS/MS، Alphalyse A/S، Odense، Denmark) سے ماپا جاتا ہے۔ OPN کی سپلیمنٹری خوراک کو انسانی دودھ کی حد کے اونچے حصے کے اندر منتخب کیا گیا تھا تاکہ بوائین دودھ پر قابو پانے والی خوراک سے معقول فرق حاصل کیا جا سکے۔ داخلی غذا کی روزانہ کی تیاری کی جاتی تھی اور استعمال تک 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جاتا تھا (<24 h).="" pigs="" received="" gradually="" increasing="" volumes="" of="" en="" from="" 32="" ml/(kg.="" day)="" on="" day="" 1="" to="" 180ml/(kg:="" day)on="" day="" 15="" and="" until="" euthanasia.="" the="" enteral="" diets="" were="" given="" as="" boluses.="" during="" the="" daytime,="" the="" boluses="" were="" given="" every="" second="" hour,="" and="" during="" the="" night="" every="" third="" hour="" until="" day="" 9.="" thereafter,="" the="" feeding="" frequency="" was="" reduced="" to="" every="" third="" hour,="" day="" and="" night.="" the="" en="" was="" given="" through="" the="" orogastric="" feeding="" tube="" until="" day="" 5="" when="" pigs="" were="" taught="" to="" drink="" from="" troughs.="" the="" pn="" was="" given="" as="" a="" continuous="" infusion="" in="" decreasing="" amounts="" from="" days="" 1-8="" (144-148="" ml/(kg.="" day))to="" counterbalance="" the="" small="" enteral="" volumes="" the="" piglets="" can="" cope="" with.="" the="" pn="" solution="" was="" a="" commercially="" available="" human="" parenteral="" nutrition="" product="" (kabiven,="" fresenius="" kabi,="" uppsala,="" sweden)="" adjusted="" to="" the="" requirements="" of="" piglets="" as="" previously="" described="" [32].="" after="" removal="" of="" the="" orogastric="" feeding="" tube="" on="" day="" 11="" and="" onwards,="" all="" pigs="" had="" free="" access="" to="">

2.4 طبی تشخیص اور بافتوں کا مجموعہ

مطالعہ کی پوری مدت کے دوران، خنزیر کی قریب سے نگرانی کی گئی (کم از کم ہر 3 گھنٹے) اور کلینیکل اسکور روزانہ دو بار تفویض کیے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [33]۔ کلینکل اشارے پر، متعلقہ علاج شروع کیے گئے، مثلاً، انٹرماسکولر اینالجیزکس کی انتظامیہ (میلوکسیکم: میٹاکیم، 5 ملی گرام/ملی لیٹر بوہرنگر انگل ہائیم، انگل ہائیم ایم رائن، جرمنی یا بٹورفینول: ٹوربوجیسک ویٹ، 10 ملی گرام/ملی گرام، اینزپینی، پارٹنی، 10 ملی گرام/ملی گرام) USA).علاج کے جواب میں کمی کی صورتوں میں، خنزیروں کو euthanized کیا گیا۔ جسمانی وزن ہر روز ناپا جاتا تھا، اور جسمانی وزن میں اوسطاً اضافہ g/(kg.d) کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے، فارمولے کے مطابق شمار کیا جاتا ہے: (پیدائش کے وقت وزن)/(اوسط جسمانی وزن × زندگی بھر)۔ دن میں دو بار، پاخانے کو درج ذیل اسکور کیا جاتا تھا: 1 (پختہ پاخانہ)، 2 (نرم/پیسٹی فیسس)، 3 (کریمی ملا)، اور 4 (اسہال)۔ پانی کی کمی سے بچنے کے لیے اسہال کی صورت میں کھانا کھلانے کے درمیان ایک زبانی الیکٹرولائٹ محلول (Revolyte Nutrition) دیا گیا۔ پروفیلیکٹک اورل اینٹی بائیوٹکس (میٹرو نیڈازول: فلیگائل، 40 ملی گرام/ملی لیٹر، سانوفی-ایونٹس، پیرس، فرانس؛ اموکسیلن، 500 ملی گرام، کلوولینک ایسڈ کے ساتھ، 125 ملی گرام: بائیوکلاوڈ، سینڈوز جی ایم بی ایچ، کوپن ہیگن، ڈنمارک؛ گینٹامیسن، گینٹاکن، ایم 5/4 ایم جی۔ , Scanvet, Fredensborg, Denmark) نال آرٹیریل کیتھیٹر کو ہٹانے کے بعد دن میں دو بار دن 8-10 سے دیا گیا تھا۔ زبانی اینٹی بائیوٹکس کا ایک ہی مجموعہ اشارے پر، علاج کے طور پر دیا گیا تھا۔ یوتھناسیا سے 60 منٹ پہلے 19 دن، خنزیروں کو ان کی متعلقہ خوراک کا آخری معیاری بولس دیا گیا۔ خنزیروں کو زولازیپام/ٹائلیٹامائن (Zoletil 50,25 mg/mL zolazepam اور 25 mg/mL tiletamine, Virbac, Carros, France), ketamine (Ketaminol, 50 mg/mL, MSD Animal Health, Kenworth NJ) کے انٹرماسکولر انجیکشن سے بے ہوشی کی گئی۔ , USA) اور butorphanol (Torbugesic Vet)، اور اس کے بعد ان کو سوڈیم پینٹوباربیٹل (Euthanimal، 400 mg/mL، Scanvet) کے ساتھ انٹرا کارڈیک انجیکشن کے ذریعے ایتھانائز کیا گیا۔ ایتھناسیا کے فوراً بعد، اندرونی اعضاء کو توڑا گیا اور ان کا وزن کیا گیا، پورے اعضاء اور مخصوص اعضاء کے علاقے (مثلاً، مکمل/خالی پیٹ، چھوٹی آنت، بڑی آنت، سارا دماغ، دماغی علاقے، جگر، تلی، گردے، پھیپھڑے، اور دل)۔ دماغی پانی کے حصے کا اندازہ 50 ڈگری پر 14 دن تک پانی کی کمی سے پہلے اور بعد میں بائیں دماغی نصف کرہ کے وزن سے لگایا گیا تھا۔ معدے کے پانچ خطوں میں سے ہر ایک (پیٹ، قریبی چھوٹی آنت (Prox)، درمیانی چھوٹی آنت (Mid)، ڈسٹل چھوٹی آنت (Dist)، اور بڑی آنت) کا میکروسکوپی طور پر جائزہ لیا گیا اور NEC سکور [39] تفویض کیا گیا۔ ہر معدے کے علاقے سے بافتوں کے نمونے اکٹھے کیے گئے اور مائع نائٹروجن میں اسنیپ فریز کیے گئے یا 4 فیصد فارملڈہائیڈ میں فکس کیے گئے اور مزید تجزیوں تک -80 ڈگری پر محفوظ کیے گئے۔ مطالعہ کے ڈیزائن اور نتائج کو شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔

2.5 آنتوں کے میوکوسا کی ساخت اور برش بارڈر انزائم کی سرگرمیاں

چھوٹی آنت میں میوکوسا کے ڈھانچے کا اندازہ پراکس، مڈ اور ڈسٹ ٹشوز کے ہسٹولوجی سلائسز کی ولس کی اونچائی اور کریپٹ گہرائی کی پیمائش کرکے کیا گیا تھا جو پیرافارمیلڈہائڈ میں طے کیے گئے تھے اور ہیماتوکسیلین اور eosin سے داغے ہوئے تھے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [40]۔ پراکس، مڈ، اور ڈسٹ سیکشنز کی نقل کے کی-67 کے لیے امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ کا استعمال چھوٹی آنت کے میوکوسا میں انٹروسائٹ پھیلاؤ کا اندازہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [41]۔ ہر ایک نقل کی چار تصاویر ایک لائٹ مائیکروسکوپ (آرتھو پلین، لیٹز، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے منظم انداز میں حاصل کی گئی تھیں، جو کیمرہ اور 10× معروضی لینس سے منسلک تھیں۔ تصویری تجزیہ Fiji: Image](NIH Image, Bethesda, Maryland) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا اور Ki-67-مثبت داغ والے مرکزے کے کل رقبے کو کل نیوکلی ایریا کے ایک حصے کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔ 6 برش بارڈر انزائمز (مالٹیز، سوکراس، لییکٹیس، امینو پیپٹائڈیس این (اے بی این)، امینو پیپٹائڈیس اے (اے پی اے)، اور ڈیپپٹائڈیل پیپٹائڈیس IV (ڈی پی پی آئی وی)) کی سرگرمی کا تعین سپیکٹرو فوٹومیٹری [42] کا استعمال کرتے ہوئے درمیانی ٹشو ہوموجینیٹس میں کیا گیا تھا۔

2.6.Blood Biochemistry, Hematology, and Systemic Immunity

بائیو کیمسٹری اور ہیمیٹولوجیکل پیرامیٹرز کے خون کے نمونوں کا تجزیہ سی سیکشن کے دوران نال کی ہڈی سے 1 دن، پیٹنٹ نال آرٹیریل کیتھیٹرز، یا متبادل طور پر جگولر رگ سے، اور 19 دن کو یوتھناسیا کے دوران کارڈیک پنکچر سے کیا گیا۔ ہیپرینائزڈ بلڈ ویکیوٹینر (BDDiagnostics، Oxford, UK) کے ذریعے حاصل کردہ بائیو کیمسٹری کے لیے پلازما کا سینٹرفیوگریشن (2500×g, 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری) کے بعد ADVIA 1800 کیمسٹری سسٹم (سیمنز ہیلتھ کیئر GmbH، جرمنی، ایرلانجین) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ EDTA-coated blood vacutainer (BD Diagnostics) کے ذریعے حاصل کردہ ہیماتولوجی اور مدافعتی خلیوں کی تعداد کے لیے مکمل خون کا تجزیہ ADVIA 2120i ہیماٹولوجی سسٹم (Siemens Healthcare GmbH) کے ذریعے کیا گیا۔

خون کے ٹی سیل سبسٹس، نیوٹروفیل فگوسائٹوسس فنکشن، اور ایکس ویوو بلڈ ٹول نما ریسیپٹر (TLR) محرک کے ذریعے مدافعتی صلاحیتوں کا مطالعہ کرنے کے لیے نظامی استثنیٰ سے متعلق اسسیسز ہیپرینائزڈ بلڈ ویکیٹینر (بی ڈی ڈائیگنوسٹک) میں جمع کیے گئے خون کے مکمل نمونوں پر کیے گئے تھے۔ دن؛ دن 8 نال آرٹیریل کیتھیٹرز سے یا متبادل طور پر جگولر رگ سے اور دن 19 جوگولر رگ سے۔ بلڈ ٹی سیل سبسیٹ کی خصوصیت کی پیمائش کی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [43]۔ مختصراً، اریتھروسائٹس کو 1 X BD FACS لائزنگ سلوشن (BD بایوسینسز، فرینکلن لیکس، NJ، USA) کا استعمال کرتے ہوئے لیس کیا گیا اور لیوکوائٹس کو 4 ڈگری میں 30 منٹ تک فکسیشن/ پارمیبلائزیشن بفر (انویٹروجن، کارلسباد، کیلیفورنیا) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ پارمیبلائزیشن بفر (انویٹروجن) کے ساتھ دھونے کے بعد، خلیات کو پورسائن سیرم (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کے ساتھ اندھیرے میں 15 منٹ 4 ڈگری کے لیے بلاک کر دیا گیا اور اس کے بعد چار فلوروسینٹ لیبل والے مونوکلونل اینٹی باڈیز سے داغے گئے۔ PE-Cy7-کنجوگیٹڈ ماؤس اینٹی پگ CD3 اینٹی باڈی (کلون BB23-8E6-8C8، BD بایو سائنسز)، FITC-conjugated ماؤس اینٹی پگ CD4 اینٹی باڈی (کلون MIL17، بایو- Rad Laboratories، Hercules، California)، PE-conjugated ماؤس اینٹی پگ CD8 اینٹی باڈی (کلون MIL12، Bio-Rad Laboratories) اور APC-conjugated rat anti-mouse FOXP3 اینٹی باڈی (کلون JFK-16s, ThermoFisher Scientific)۔ نمونوں کا تجزیہ BD ایکوری C6 فلو سائٹو میٹر (BDBiosciences) اور T-cells کی آبادی (CD3 پلس لیمفو سائیٹس)، سائٹوٹوکسک T-cells (CD3 پلس CD4-CD8 پلس لیمفوسائٹس)، مددگار T-cells ( سی ڈی 3 پلس سی ڈی 4 پلس سی ڈی8- لیمفوسائٹس) اور ریگولیٹری ٹی سیلز (سی ڈی 3 پلس سی ڈی 4 پلس فاکس پی 3 پلس لیمفوسائٹس) کی شناخت کی گئی تھی۔ خون کے نیوٹروفیلز کے فاگوسائٹک فنکشن کا تجزیہ فلو سائٹومیٹری کے ذریعے کیا گیا تھا۔ nm)بائیو پارٹیکلز فیگوسائٹوسس کٹ فار فلو سائٹومیٹری (تھرمو فشر سائنٹیفک)34]۔ فگوسائٹک کی شرح نیوٹروفیل آبادی (پی ایچروڈو پلس) میں فگوسائٹوسس لگانے والے نیوٹروفیلز کی فیصد سے ظاہر کی گئی تھی اور نیوٹروفیلز کی فاگوسائٹک صلاحیت کو میڈین فلوروسینٹ شدت (MFI) سے ظاہر کیا گیا تھا۔ جی ویوورام کے نظامی سوزش کے ردعمل کا اندازہ کرنے کے لیے۔ منفی بیکٹیریل چیلنج، 294 μL مکمل خون TLR4 agonist （lipopolysaccharide (LPS), E.coli O127:B8, Sigma Aldrich, St. Louis, MI, USA) کے ساتھ 5 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری، 5 فیصد CO، کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ اس کے بعد محرک اور غیر محرک خون کو 2000×g، 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر سینٹرفیوج کیا گیا، اور ELISA (Porcine Specific Duoset Kits, R&D) کے ذریعے ٹیومر نیکروسس فیکٹر (TNF)- اور Interleukin (IL)-10 کے لیے پلازما سپرنٹنٹس کا تجزیہ کیا گیا۔ سسٹمز، ابنگڈن، یوکے)، مینوفیکچرر کے رہنما خطوط پر عمل کرتے ہوئے پلازما کے نمونے تجزیہ سے پہلے 2-2.5 بار پتلا کیے گئے تھے۔ اوسط سائٹوکائن کی سطح اور تناسب کے حساب کتاب کے لیے معیاری حد میں سائٹوکائن جذب کی سطح کے ساتھ صرف نمونے شامل کیے گئے تھے۔ تاہم، سائٹوکائن کے جذب کی سطح کے ساتھ نمونے سب سے کم معیار سے نیچے لیکن خالی سے زیادہ تھے، ان کو پلیٹ میں سب سے نچلی سطح کے نصف کی صوابدیدی قدر دی گئی اور شماریاتی تجزیہ میں شامل کیا گیا۔

2.7۔ ابتدائی موٹر ڈیولپمنٹ، رویہ، اور ادراک

پیدائش کے بعد پہلے کھڑے ہونے اور پہلے چلنے کا وقت موٹر مہارت کے بنیادی حصول کے تخمینے کے طور پر ماپا گیا۔ ہر گھر کے پنجرے کے اوپر نصب موشن حساس انفراریڈ کیمرے دن 1 سے 21:00 بجے تک سور کی موٹر سرگرمی کو مسلسل ریکارڈ کر رہے تھے جب خنزیر کو زچگی کی بے ہوشی کی دوا سے 11 ویں دن تک مکمل طور پر بازیافت کیا گیا تھا[33]۔ ایک گھنٹہ کے دوران فعال وقت کا اوسط تناسب دن کے وقت (9:00 بجے سے 9:{10}} بجے تک) اور رات کے وقت (9:{12 سے) 12-گھنٹوں کے وقفوں کی ریکارڈنگ سے لگایا گیا تھا۔ }} pm سے 9:00 am).ہر سور کے تحقیقی رویے کا اندازہ نویں دن ایک کھلے میدان کے میدان (1.2m×1.2m) میں پرندوں کے نظارے سے ویڈیو کیمرہ ریکارڈنگ کے ساتھ کیا گیا تھا۔ بے ترتیب ترتیب میں سوروں کے ساتھ 20} منٹ کی ریکارڈنگ کا دورانیہ۔ خنزیر کو دو نابینا مبصرین کے ذریعہ چار معروضی پیرامیٹرز کی بنیاد پر ایک حقیقی وقت کا مجموعی اسکور تفویض کیا گیا تھا: فرش سے رابطہ، دیوار سے رابطہ، فرار کی کوششیں، اور متعدد چالیں۔ حاصل شدہ ویڈیوز کا بعد میں EthoVision XT10 (Noldus انفارمیشن ٹیکنالوجی، Wageningen، The Netherlands) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ نتائج ہر سور کے لئے کل فاصلہ منتقل اور رفتار کا حساب لگایا گیا تھا۔ مناسب بصری نشوونما اور عادت کی مدت کے بعد، معیاری مقامی T-maze cognition test [44] کا استعمال کرتے ہوئے، دنوں 12-18 کے دوران ہر سور کے مقامی ادراک کا اندازہ بے ترتیب ترتیب میں کیا گیا۔ ہپپوکیمپس پر منحصر سیکھنے اور یادداشت کا ایک دن میں 1-2 حصول کے دوران تجربہ کیا گیا، ہر ایک 10 ٹرائلز پر مشتمل تھا۔ اضافی بھولبلییا بصری اشارے کا استعمال خنزیروں کے لیے مقررہ دودھ کے انعام کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ انا پر مبنی ردعمل کے طریقہ کار سے بچنے کے لیے خنزیر کی متبادل ابتدائی پوزیشنیں استعمال کی گئیں اور دودھ کو انعام کے دونوں بازوؤں میں رکھا گیا۔ ولفیکٹری سگنلز کو چھپانے کے لیے، دودھ اگرچہ صرف ایک بازو میں ہی قابل رسائی تھا۔ فی حصول کے درست انتخاب کی تعداد ایک معیاری مرحلے کے دوران ریکارڈ کی گئی تھی ( حصول 1-6، دن 12-17) اور ایک الٹنے کے مرحلے ( حصول 7-9، ​​دن 17-18)۔ الٹنے کے مرحلے میں، دودھ کے انعام کو مخالف بازو میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ کم از کم 80 فیصد درست انتخاب (10 آزمائشوں میں سے 8 درست انتخاب) کو سیکھنے کے معیار کے طور پر بیان کیا گیا تھا [30]۔

2.8۔ شماریاتی تجزیہ

شماریاتی سافٹ ویئر R (ورژن 3.6۔{2}}) تمام شماریاتی تجزیوں کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اینٹی بیکٹیریل پرکھ کے لیے، انکیوبیشن کے 2-24 گھنٹے کے دوران 6 ٹیسٹ غذاؤں اور بچوں کے فارمولے کے درمیان S. نمو میں فرق، ٹیکے کی خوراک، وقت، اور ٹیسٹ ڈائیٹ کے ساتھ ایک لکیری مخلوط اثرات کے ماڈل (Ime فنکشن) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ /فارمولا بطور فکسڈ اثرات (بشمول آخری دو کے درمیان تعامل) اور تجرباتی مدت کو ایک بے ترتیب اثر کے طور پر، اس کے بعد ہر وقت پوائنٹ پر جوڑے کے لحاظ سے موازنہ (ls کا مطلب ہے پیکیج)۔ سور کے مطالعے سے مسلسل بار بار کی جانے والی پیمائش (یعنی، جسمانی وزن، گھر کے پنجرے کی سرگرمی، مقامی ٹی بھولبلییا ادراک ٹیسٹ میں درست انتخاب، اور کئی خطوں میں ناپے جانے والے چھوٹے آنتوں کے پیرامیٹرز) کا ایک لکیری مکسڈ ایفیکٹ ماڈل (می فنکشن) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ ایک بے ترتیب اثر کے طور پر مناسب ارتباط کی ساخت اور سور بھی شامل ہے۔ پیکیج نے ہر چھوٹی آنت کے علاقے میں بعد میں موازنہ کرنے کی سہولت فراہم کی۔ ایک کاکس متناسب خطرے کا ماڈل (فنکشن) مسلسل ٹائم ٹو ایونٹ ڈیٹا کے لیے استعمال کیا گیا تھا (یعنی، موٹر کی بنیادی مہارتوں کا حصول اور پہلی بار اسہال کے ساتھ پیش ہونا)۔ ایک سے زیادہ لکیری ریگریشن ماڈل (ایل ایم فنکشن) کا استعمال کرتے ہوئے دیگر تمام مسلسل ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ ایک سے زیادہ موازنہ کی جانچ کے لیے درست کرنے اور خاندان کے لحاظ سے غلطی کی شرح کو کنٹرول کرنے کے لیے ہولم کی اصلاح کا اطلاق خون کے بائیو کیمسٹری کے تمام ڈیٹا پر کیا گیا تھا۔ مجرد ٹائم ٹو ایونٹ ڈیٹا (یعنی، خنزیروں کا فیصد جو T-maze سیکھنے کے معیار تک پہنچ گیا) کا تجزیہ ایک عام متعدد لکیری ریگریشن ماڈل (فنکشن) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جس میں بائنومیل ردعمل اور ایک تکمیلی لاگ لاگ لنک ہے۔ مطالعہ سے پہلے جنس، گندگی، اور پیدائشی وزن کی شناخت حیاتیاتی طور پر متعلقہ ممکنہ کنفاؤنڈرز کے طور پر کی گئی تھی اور اس طرح مذکورہ بالا تمام ماڈلز میں فکسڈ اثرات کے طور پر شامل کیے گئے تھے۔ مزید برآں، تمام بلڈ بائیو کیمسٹری اور ہیماتولوجیکل پیرامیٹرز کے لیے، گروپ رینڈمائزیشن سے پہلے دن 1 کو ناپے گئے بیس لائن لیولز کو متعلقہ متعدد لکیری ریگریشن ماڈلز میں فکسڈ اثرات کے طور پر شامل کیا گیا تھا۔ لکیری ریگریشن ماڈلز کی ماڈل کی توثیق باقیات اور فٹ شدہ اقدار کی نارملیت اور ہم جنس پرستی کے گرافیکل ڈسپلے کے ذریعہ کی گئی تھی، اور ان مفروضوں کو پورا کرنے کے لیے ڈیٹا ٹرانسفارمیشن (لاگ یا sqrt)، اگر ضرورت ہو تو انجام دی گئیں۔ ان متغیرات کے لیے جو عام تقسیم کے مطابق نہیں ہو سکتے، نان پیرامیٹرک مان-وٹنی ٹیسٹ لاگو کیا گیا تھا۔ دوٹوک جوابی متغیرات کے ساتھ ریگریشن ماڈلز کی توثیق کی گئی گڈنیس آف فٹ ٹیسٹ (پیکیج کے) کا استعمال کرتے ہوئے جمع شدہ بقایا جات کی چھان بین کر کے۔ جب تک کہ دوسری صورت میں بیان نہ کیا جائے، خام ڈیٹا کو بطور ذریعہ پیش کیا جاتا ہے ± SD اور p-values<0.05 are="" considered="" statistically="">

3. نتائج

3.1. وٹرو اینٹی بیکٹیریل پرکھ میں

مختلف ارتکاز میں OPN کے ساتھ اضافی سکمڈ بوائین دودھ کے اثرات، S. کی نشوونما اور قابل عمل ہونے پر، کا جائزہ لیا گیا اور ان کا موازنہ شیرخوار فارمولے سے کیا گیا۔ شیر خوار فارمولے کے ساتھ انکیوبیشن کے 4، 6 اور 24 گھنٹے کے بعد، ٹیکے کی خوراک (10) اور 10 ڈگری FU دونوں کے لیے بالترتیب S. ارتکاز تقریباً 10,50 اور 1 × 10 پلس گنا بڑھ گیا۔ )۔ 105 CFU (شکل 2) کی ٹیکہ کی خوراک کے ساتھ انکیوبیشن سے 4 گھنٹے پہلے 6 ٹیسٹ ڈائیٹ اور فارمولے میں کوئی فرق نہیں تھا۔ تاہم، نوزائیدہ فارمولے کے مقابلے بوائین دودھ پر مبنی ٹیسٹ غذا کا ایک بیکٹریا مار اثر واضح تھا، کیونکہ انکیوبیشن کے 1-4 گھنٹے کے دوران ان میں ایس کا ارتکاز ساکت رہا۔ انکیوبیشن کے 4 گھنٹے پر، اسی ٹیکہ کی خوراک کے بعد، فارمولے کے مقابلے تمام 6 ٹیسٹ غذاوں میں بیکٹیریا کی تعداد کم تھی (تقریباً 10 بار، p <0.01)۔ opn="" سپلیمنٹیشن="" نے="" s.="" کے="" خلاف="" خوراک="" پر="" منحصر="" طویل="" مدتی="" بیکٹیریاسٹٹک="" اثرات="" مرتب="" کیے="" کیونکہ="" 6="" گھنٹے="" کے="" انکیوبیشن="" کے="" بعد="" بیکٹیریا="" کی="" تعداد="" 4="" سب="" سے="" زیادہ="" opn="" خوراکوں="" پر="" مشتمل="" ٹیسٹ="" ڈائیٹس="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم=""><0.05,10>ٹیکہ کی خوراک)۔ صرف غیر سپلیمنٹ شدہ سکمڈ بوائین دودھ ہی بیکٹیریا کی افزائش کو روکنے کی اپنی صلاحیت کو لمحہ بہ لمحہ کھو دیتا ہے جب 6 گھنٹے تک انکیوبیشن کی جاتی ہے (105 CFU ٹیکہ کی خوراک)۔ انکیوبیشن کے 24 گھنٹے پر، فارمولے کے مقابلے تمام 6 ٹیسٹ غذاؤں میں بیکٹیریا کی تعداد کم تھی (p<001, 105="" cfu="" inoculation="" dose).="" all="" 6="" test="" diets="" exerted="" bacterial="" inhibitory="" effects="" (initially="" bactericidal)="" against="" s.,="" inoculated="" at="" 10°cfu,="" at="" all="" tested="" time=""><2 h="" of="" incubation=""><0.07,>انکیوبیشن پی کے 2 گھنٹے<>

3.2 کلینیکل اور نمو کے نتائج

42 سوروں میں سے سات خنزیر (5/21 OPN کے مقابلے 2/21 CON، p=0.4) تجربے کے آغاز میں ناپختگی سے متعلق/آئٹروجینک پیچیدگیوں کے نتیجے میں euthanized/مر گئے تھے۔<0.001). one="" litter="" received="" the="" intended="" prophylactic="" antibiotic="" treatment="" on="" day="" 8,="" whereas="" for="" the="" other="" litter,="" a="" therapeutic="" antibiotic="" treatment="" was="" initiated="" on="" day="" 5.="" the="" two="" groups="" displayed="" similar="" growth="" patterns="" with="" an="" average="" daily="" body="" weight="" gain="" of="" 33.6±4.0g/(kg·day)and="" 32.9±3.7="" g/(kg:="" day)="" for="" the="" opn="" and="" con,="" respectively="" (figure3).="" there="" were="" no="" differences="" between="" the="" two="" groups="" in="" birth="" weights,="" weights="" at="" euthanasia,="" or="" any="" of="" the="" relative="" organ="" dimensions="" (table="">

3.3 گٹ کی ساخت اور فنکشن

Villus کی اونچائی اور crypt کی گہرائی، جس کا اندازہ چھوٹی آنت کے قربت، درمیانی اور دور دراز حصوں میں کیا جاتا ہے، دونوں گروہوں (ٹیبل 2) کے درمیان یکساں تھے۔ CON کے مقابلے میں، OPN(p<0.05, figure="" 4a).="" similar="" amounts="" of="" proliferative="" enterocytes="" were="" observed="" between="" the="" two="" groups,="" indicated="" by="" the="" same="" relative="" area="" of="" ki-67="" positive="" stained="" nuclei="" in="" the="" three="" small="" intestinal="" regions="" (figure="" 4b,="" c).="" further,="" the="" gastric="" emptying="" ability="" indicated="" by="" the="" gastric="" content="" weights="" at="" euthanasia="" as="" well="" as="" the="" activity="" of="" lactase,="" maltase,="" sucrase,="" apa,="" abn,="" and="" dppiv="" measured="" in="" the="" middle="" part="" of="" the="" small="" intestine="" were="" comparable="" between="" the="" groups="" (table="">

3.4 خون کی بایو کیمسٹری، ہیماتولوجی، اور نظامی استثنیٰ

ہڈیوں کے خون کے نمونوں نے پہلے دن (p<0.05)of pigs="" later="" assigned="" the="" opngroup="" relative="" to="" pigs="" assigned="" the="" con="" group.="" no="" other="" immune="" cell="" counts,="" blood="" biochemistry,="" or="" hematology="" variables="" differed="" between="" the="" two="" groups="" prior="" to="" receiving="" their="" specific="" dietary="" interventions(data="" not="" shown).="" blood="" biochemistry="" variables="" measured="" on="" days="" 8="" and="" 19="" did="" not="" differ="" between="" groups(table="" s1,="" supplementary="" materials),="" and="" accompanied="" hematology="" parameters="" and="" immune="" cell="" counts="" are="" presented="" in="" table="" 3.="" compared="" with="" con="" pigs,="" opn="" pigs="" had="" a="" higher="" lymphocyte="" and="" monocyte="" count="" on="" day=""><0.05, figure="" 5a,="" b).="" the="" lymphocyte="" and="" monocyte="" count="" increased="" from="" day="" 8="" to="" day="" 19,="" with="" no="" final="" differences="" between="" the="" groups(figure="" 5a,="" b).="" the="" remaining="" immune="" cell="" counts="" and="" nonimmune-related="" hematological="" parameters="" were="" similar="" between="" opn="" and="" con="" pigs="" (table="" 3).="" innate="" and="" adaptive="" immune="" parameters="" were="" evaluated="" on="" days8="" and="" 19.="" on="" day="" 8,="" the="" blood="" neutrophil="" phagocytic="" rate="" and="" capacity="" were="" similar="" between="" opn="" and="" con="" (table="" 3).="" conversely,="" on="" day="" 19="" they="" had="" a="" higher="" frequency="" of="" neutrophils="" exerting="" phagocytosis="" compared="" with=""><0.05). the="" phagocytic="" capacity="" was="" though="" not="" different="" between="" groups="" (figure="" 5c,="" d).="" the="" t-cell="" subset="" characterization="" on="" days="" 8="" and="" 19="" did="" not="" reveal="" any="" differences="" between="" t="" helper="" cells,="" cytotoxic="" t="" cells,="" and="" regulatory="" t="" cells="" in="" the="" two="" groups="" (table="" 3).="" a="" representative="" facs="" gating="" is="" shown="" in="" figure="" s1,="" supplementary="" materials.="" the="" tlr4-mediated="" il10="" and="" tnf-α="" cytokine="" production="" of="" full="" blood="" from="" days="" 8="" and="" 19="" was="" evaluated.="" tnf-α="" and="" il10="" were="" detected="" at="" similar="" levels="" between="" opn="" and="" con="" in="" unstimulated="" plasma="" obtained="" on="" day="" 8="" and="" there="" were="" no="" group="" differences="" in="" the="" response="" to="" lps="" stimulation="" indicated="" by="" a="" similar="" tnf-α/il10="" ratio(table="" s2,="" supplementary="" materials).="" tnf-α="" was="" not="" detectable="" in="" unstimulated="" plasma="" obtained="" on="" day="" 19="" from="" either="" group.="" however,="" both="" groups="" responded="" equally="" to="" lps="" stimulation,="" indicated="" by="" similar="" tnf-α="" and="" il-10="" plasma="" levels="" (table="" s2,="" supplementary="">

3.5 دماغ کی ساختی اور فنکشنل نتیجہ

ساختی دماغ سے متعلق نتائج بشمول دماغ کے کل وزن کی مطلق اور رشتہ دار اقدار، علاقائی دماغی وزن، اور دماغی پانی کا مواد OPN اور CON گروپس (ٹیبل 4) کے درمیان ایک جیسے تھے۔ ابتدائی موٹر کی نشوونما میں کوئی فرق نہیں دیکھا گیا، کیونکہ پہلے کھڑے ہونے کا وقت، پہلی چہل قدمی، اور پہلے رضاکارانہ طور پر مکمل دودھ کے بولس کے ساتھ ساتھ گھر کے پنجروں میں فعال وقت کے تناسب کو حرکت کے لیے حساس کیمروں کے ذریعے ناپا گیا۔ {3}}، OPN اور CON (شکل 6A-D) کے درمیان ایک جیسے تھے۔ دن 9 کو کھلے میدان کے میدان میں سور کی تلاش کے رویے کا اندازہ دونوں گروپوں کے درمیان موازنہ تھا، کیونکہ مجموعی سکور، کل فاصلہ منتقل ہوا اور رفتار ایک جیسی تھی (ٹیبل 4)۔ مزید، اسی طرح کی علمی کارکردگی معیاری اور الٹ پھیر کے مرحلے کے دوران دیکھی گئی مقامی T-maze کوگنیشن ٹیسٹ میں دن 12- سے 18 (شکل 7A, B) تک 9 سے زیادہ حصولات انجام دیے گئے۔ وقت کے ساتھ ساتھ درست انتخاب کا اوسط تناسب دونوں مراحل میں دونوں گروپوں کے لیے بڑھتا گیا تمام خنزیر سیکھنے کے معیار پر پہنچ گئے، اور سیکھنے کے معیار تک پہنچنے میں لگنے والے وقت میں کوئی فرق نہیں تھا (شکل 7B)۔

4. بحث

OPN کے ملٹی فنکشنل اثرات، خاص طور پر اس کی افزائش، مدافعتی ریگولیٹری، اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمی کے لحاظ سے، لیکن ممکنہ طور پر دماغی نشوونما میں بھی، حساس نوزائیدہ اور شیرخوار بچوں کی صحت اور اعضاء کی نشوونما کو بہتر بنانے میں مدد کر سکتے ہیں۔ ابتدائی انسانی دودھ میں او پی این کی اونچی سطح اور اس کے مطابق نوزائیدہ بچوں کے OPN پلازما کی ارتکاز فوری طور پر نوزائیدہ مدت میں جب شیر خوار بچوں کو انسانی دودھ پلایا جاتا ہے تو OPN کی کافی فراہمی کی وکالت کرتی ہے۔ اس کے برعکس، بوائین دودھ اور بچوں کے فارمولوں 4 میں OPN کی کم ارتکاز دودھ کے فارمولوں کے OPN مواد کو بڑھانے کے لیے ایک موقع فراہم کرتی ہے، اور OPN کے ساتھ ضمیمہ فارمولے سے کھلائے جانے والے اور ماں کے دودھ کے درمیان موجود ترقیاتی فرق کو کم کرنے میں مدد کر سکتا ہے۔ دودھ پلانے والے بچوں کو [2,3]۔ اس مطالعے میں، ہم نے ظاہر کیا کہ OPN کو بیزل OPN مواد کے ساتھ بوائین دودھ والی خوراک میں اچھی طرح سے برداشت کیا گیا، لیکن آنتوں کی ساخت اور نظامی قوت مدافعت میں صرف معمولی بہتری دیکھی گئی، اور دماغ کی ساخت اور افعال پر مزید کوئی اثر نہیں دیکھا گیا۔ بوائین دودھ کی بنیاد کا انتخاب دودھ کے فارمولے کے مقابلے میں ایک متعلقہ بائیو ایکٹیو بیس ڈائیٹ کو محفوظ کرنے کے لیے کیا گیا تھا، جس کے اوپری حصے میں OPN کے نچلے مواد نے بھی بائیو ایکٹیویٹی کو کم کر دیا ہے۔ دودھ OPN ایک اہم حیاتیاتی طور پر فعال وہی پروٹین کے طور پر پہچانا جاتا ہے، بنیادی طور پر اس کی قوت مدافعت کو ماڈیول کرنے اور خلیوں کے پھیلاؤ کو تحریک دینے کی وجہ سے [18,45]۔ دودھ میں پائے جانے والے مثبت چارج شدہ لیکٹوفرین کے ساتھ کمپلیکس بنانے کے لیے OPN کی صلاحیت بچوں کے آنتوں میں پیتھوجینز کے خلاف دفاع میں مزید فعال خصوصیات کا اضافہ کر سکتی ہے [10]۔ OPN-lactoferrin کمپلیکس انسانی اور بوائین دودھ میں پایا جاتا ہے، لیکن انفرادی پروٹین سے بھی بن سکتا ہے [10]۔ بوائین دودھ پر مبنی غذا میں OPN کی حیاتیاتی صلاحیت کو دستاویز کرنے کے لیے، ہم نے ابتدائی طور پر جرسی سے پاک سکمڈ جرسی کے دودھ میں مختلف ارتکاز میں شامل بوائین دودھ OPN کی ان وٹرو اینٹی بیکٹیریل صلاحیت کا تجربہ کیا۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ OPN کی تکمیل شدہ دودھ کی خوراک S.epidermidis کی نشوونما کو روک کر خوراک پر منحصر انداز میں قلیل اور طویل مدتی اینٹی بیکٹیریل صلاحیت کو بروئے کار لاتی ہے، یہ ایک عام نوزائیدہ پیتھوجین ہے جو گٹ ٹرانسلوکیشن کے بعد دیر سے شروع ہونے والے سیپسس کا باعث بنتی ہے [46,47 ] یہ نوزائیدہ دودھ کی خوراک کی OPN تکمیل کے ذریعے گٹ کی نشوونما کو تیز کرنے کا موقع فراہم کرتا ہے۔ دودھ پر مبنی غذاوں میں زیادہ سے زیادہ غذائی OPN کی سطح واضح نہیں ہے، اور انسانی دودھ میں OPN مواد کی تبدیلی بہت زیادہ ہے، دونوں ماؤں اور ممالک کے درمیان، اور دودھ پلانے کی مدت کے دوران [7]۔ جانوروں کے پچھلے مطالعات میں بنیادی طور پر OPN کے بغیر کنٹرول ڈائیٹ میں OPN شامل کرنے کے اثرات کی تحقیقات کی گئی ہیں، اوسط انسانی دودھ کے مواد [14,22,24] کے مقابلے میں۔ اس preclinical سور کے مطالعہ میں، ہم نے انسانی دودھ کی اعلی سطح تک پہنچنے کے لیے بنیادی OPN لیول والی غذا میں مزید OPN شامل کرنے کے طبی متعلقہ پہلو پر توجہ مرکوز کی۔ اس مطالعہ میں OPN کے ضمیمہ نے OPN کی روزانہ خوراک کو ایک ایسی خوراک تک بڑھایا جو نسبتاً زیادہ OPN دودھ کی ارتکاز والی ماؤں کے شیر خوار بچوں میں کھانے کی نمائندگی کرتی ہے، اور اس سے بھی آگے جو عام طور پر بچوں کے فارمولے سے حاصل ہوتی ہے[4]۔ جمع کیے گئے جرسی کے دودھ میں OPN کا مواد پہلے گائے کے دودھ میں ماپا جانے والے OPN کے مقابلے زیادہ تھا۔ یہ نوٹ کرنا ضروری ہے کہ استعمال کیا گیا LC-MS/MS طریقہ پچھلے مطالعات میں استعمال ہونے والے ELISA طریقہ سے مختلف ہے [48]۔ موجودہ مطالعے میں علمی اثرات کی کمی اس حقیقت میں مضمر ہو سکتی ہے کہ کنٹرول پگ پہلے ہی 91 ملی گرام/L کی ارتکاز میں OPN وصول کر رہے ہیں، جیسا کہ جرسی کے دودھ میں فطری طور پر موجود ہے، اور اضافی OPN کی اضافی اضافی فائدہ نہیں دیتی۔ ہم نے پایا کہ OPN کے ساتھ بوائین دودھ کی تکمیل اچھی طرح سے برداشت کی گئی تھی اور گٹ اور مدافعتی پختگی پر معمولی اثرات مرتب کیے گئے تھے، جبکہ دماغی ساختی اور فنکشنل پیرامیٹرز میں کوئی تبدیلی نہیں ہوئی تھی۔ دونوں OPNand CON خنزیر نے نمو کی شرح اس سے موازنہ یا اس سے زیادہ ظاہر کی جو عام طور پر مویشیوں کے دودھ کی خوراک [49-51] کے ساتھ ملتے جلتے مطالعے میں قبل از وقت سوروں میں دیکھی جاتی ہے۔ ان قبل از وقت خنزیروں میں حاصل ہونے والے کم NEC سکور کے ساتھ ترقی کی شرح اور نسبتاً اچھی طبی حیثیت، حساس نوزائیدہ بچوں میں اعضاء کے افعال میں تبدیلیوں اور دماغی علمی نشوونما پر غذائی اثرات کو دستاویز کرنے کے لیے بہترین حالات فراہم کرتی ہے۔

انسان، گائے، اور سور کے او پی این کے سلسلے میں بہت زیادہ مماثلت ہے [52]، اور او پی این کی ہر جگہ خنزیروں میں اچھی طرح سے قائم ہے۔ OPN کا اظہار مختلف قسم کے صحت مند پورسائن ٹشوز کے ذریعے کیا جاتا ہے جس کی سب سے زیادہ کثرت ileal ٹشوز میں پائی جاتی ہے [53]، لیکن پورکین دودھ کی تعداد معلوم نہیں ہے۔ ہم نے قبل از پیدائش کی سوزش [43] سے بحالی کے سلسلے میں قبل از وقت خنزیروں میں OPN سے افزودہ فارمولے کے معمولی فائدہ مند گٹ اثرات دکھائے ہیں۔ ایک ساتھ مل کر، یہ غذائی OPN ضمیمہ کے اثرات کی تحقیقات کے لیے ایک طبی نمونے کے طور پر piglet کے استعمال پر زور دیتا ہے۔ CON کی نسبت، OPN خنزیروں میں چھوٹی آنت میں ولس ٹو کریپٹ تناسب زیادہ ہوتا ہے۔ اسی طرح کے مورفولوجیکل فرق کی اطلاع 10- دن پرانے چوہوں کے پِلوں کے گرہنی کے نمونوں کی بنیاد پر دی گئی تھی جو جنگلی قسم کے ڈیموں یا OPN ناک آؤٹ ڈیموں کے ذریعے پالے جانے والے چوہوں کے دودھ والے OPN کے ساتھ اضافی چوہوں کے کتے کو کوئی OPN حاصل نہیں کرتے تھے[22]۔ پچھلے قبل از وقت پگ اسٹڈیز نے بڑھی ہوئی ولس کی اونچائیوں کو ایک بہتر غذائی اجزاء جذب کرنے کی صلاحیت کے ساتھ منسلک کیا ہے، مثال کے طور پر، galactose [51,54]، جو زیادہ سے زیادہ نشوونما کو محفوظ بنانے کے لیے اہم ہو سکتا ہے۔ پورسائن IPEC-J2 سیل لائن کا استعمال کرتے ہوئے ہم نے پہلے وٹرو میں OPN کی خوراک پر منحصر انداز میں سیل کے پھیلاؤ کو بڑھانے کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا ہے [43]۔ موجودہ مطالعہ میں OPN خنزیروں کے درمیان مشاہدہ کی گئی مجموعی آنتوں کے بلغمی ڈھانچے کی وضاحت چھوٹی آنت میں Ki-67 داغ کی بنیاد پر پھیلنے والی انٹروسائٹس میں اضافے سے نہیں کی جا سکتی ہے اور اس کے نتیجے میں ہاضمہ کے انزائم کی سرگرمیاں تبدیل نہیں ہوئیں۔ او پی این کے ضمنی فارمولے سے کھلائے ہوئے نوزائیدہ ریشس بندروں میں ابتدائی نتائج نے جیجنل جین ایکسپریشن پروفائلز کے ساتھ آنتوں کی تبدیلیوں کو دودھ پلانے والے ہم منصبوں سے زیادہ مشابہت ظاہر کیا ہے [12]۔ OPN اور CON خنزیروں میں مدافعتی خلیوں کی گنتی کے بارے میں ایک ہی ترقی کی رفتار دیکھی گئی۔ تمام مدافعتی خلیات، سوائے باسوفیل اور eosinophil کے شمار، اصطلاحی خنزیروں میں اسی طرح کی کم سطح کے ساتھ [34]، دن 8 سے دن 19 تک تعداد میں اضافہ ہوا، جو کہ دونوں گروہوں کی ممکنہ روگزنق کے لیے کافی مدافعتی ردعمل پیدا کرنے کی صلاحیت کو ظاہر کرتا ہے۔ 8ویں دن OPN خنزیروں کی گردش کرنے والی مونوسائٹ اور لیمفوسائٹ کی سطحیں CON خنزیروں کی نسبت زیادہ تھیں لیکن 19ویں دن نہیں۔ چونکہ طبی حالت دونوں گروپوں کے خنزیروں کے درمیان یکساں تھی اور NECscores کم تھے، اس لیے مونوسائٹ اور لیمفوسائٹ کی سطحیں شاید بنیادی طور پر علاج سے متعلق ہیں۔ اثرات اور OPN خنزیروں میں تیز مدافعتی نشوونما کا مشورہ دیتے ہیں۔ چھ ماہ کے بچوں کے بے ترتیب کنٹرول ٹرائل میں گردش کرنے والے مونوکیٹس کا ایک اعلی تناسب بھی دیکھا گیا جو دودھ پلانے کے کنٹرول کے مقابلے میں 65 mg/L اور 135 mg/L کے ارتکاز میں بوائین دودھ OPN کے ساتھ فارمولے وصول کرتے ہیں [55]۔ OPN اپنے ریسیپٹر کے ذریعے مدافعتی خلیوں کے ساتھ تعامل کرنے کے قابل ہے اور IL-1-فعال مونوسائٹس کے لیے کیموٹیکٹک ایجنٹ کے طور پر کام کرتا ہے، جو سوزش کے دوران جسمانی طور پر متعلقہ ہو سکتا ہے [16]۔ OPN انٹیگرین ریسیپٹر، آکس 2 کے ذریعے فگوسائٹوسس میں ثالثی کرکے پیدائشی استثنیٰ میں مزید کردار ادا کرسکتا ہے، جس کا اظہار monocytes [16] کی سطح پر ہوتا ہے۔ مونوسائٹ فنکشن پر OPN کے کردار کی تحقیقات کرنے والے مزید مطالعات اور یہ فارمولہ کھلائے جانے والے شیر خوار بچوں کے لیے ایک فائدے میں کیسے ترجمہ ہوتا ہے اس کی تحقیقات باقی ہیں۔

لمفوسائٹ کی آبادی کو مزید بیان کرنے کے لیے دن 8 اور 19 کو ٹی سیل سبسیٹ کی خصوصیت کی گئی تھی لیکن اس فوری نوزائیدہ دور میں دونوں گروپوں کے درمیان سبسیٹ فریکشن میں کوئی فرق ظاہر نہیں کیا۔ جن بچوں کو OPN (65 یا 130 mg/L) کے ساتھ انفینٹ فارمولہ ملا ہے، انھوں نے زندگی کے پہلے چھ مہینوں میں اس فیڈ بیسل فارمولے [55] کے مقابلے میں ٹی سیلز کا تناسب بڑھایا ہے۔ یہ ردعمل زندگی کے پہلے ہفتوں کے اندر پہلے سے تیار نہیں ہوسکتا ہے، یا ہمارے بنیادی بوائین دودھ میں OPN کی نسبتاً زیادہ سطح (91 mg/L) مزید تبدیلیوں کو محدود کر سکتی ہے۔ OPN اور CON کے درمیان T-cells، مددگار T-cells اور cytotoxic T-cells کی تعداد میں فرق نہیں تھا، اور اس لیے 8ویں دن دونوں گروہوں کے درمیان گردش کرنے والے لیمفوسائٹس میں فرق کی وضاحت نہیں کر سکتے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے CD3 کے لیے داغ داغے۔ CD4، CD8، اور Foxp3، اور اس بات کی چھان بین کرنا باقی ہے کہ آیا لیمفوسائٹس کی زیادہ تعداد بی سیل کی زیادہ تعداد یا قدرتی قاتل خلیوں کی بڑھتی ہوئی تعداد سے پیدا ہو سکتی ہے۔ پیدائش کے بعد نظامی قوت مدافعت کی پختگی میں Th1/Th2 توازن میں تبدیلی شامل ہے، جہاں بیکٹیریل انفیکشن کے خلاف دفاع Th1 سکیونگ کا مطالبہ کرتا ہے [17]۔ OPN سائٹوکائن جیسی خصوصیات کے ساتھ ایک طاقتور کیموٹریکٹنٹ ہے اور Th1/Th2 توازن کو منظم کرنے کے لیے جانا جاتا ہے [18]۔ اس مطالعہ میں، پیدائش کے فوراً بعد Th1/Th2 بیلنس کو غذا کے ذریعے تبدیل نہیں کیا گیا تھا جس کی نشاندہی اسی طرح کے TNF-/IL10 تناسب سے دن 8 پر ہوئی۔ چونکہ TNF-o کی سطح غیر محرک پلازما کے نمونوں میں دن 19 سے پتہ نہیں چل سکی، TNF-/IL10 اس مقام پر تناسب کا حساب نہیں لگایا جا سکتا۔ حال ہی میں، جانوروں کے ماڈلز [14,22,24] کا استعمال کرتے ہوئے مطالعہ نے بچپن کے دوران نیورو ڈیولپمنٹ میں دودھ OPN کے کردار کی تحقیقات کی ہیں۔ OPN ناک آؤٹ ماؤس ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے، انسانی دودھ کی طرح OPN کی سطحوں کے ساتھ دودھ کو غذائی OPN کی کمی والے کنٹرول کے مقابلے میں 30- دن پرانے ماؤس کے بچوں میں موٹر مہارتوں اور ہپپوکیمپس پر منحصر میموری کی صلاحیتوں کو بہتر بنانے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ غذائی دودھ سے متعلق OPN کے یہ فعال دماغی نتائج بڑھے ہوئے endogenous دماغ OPN کی سطح اور عصبی/گلیئل اینٹیجن دو خلیوں کے اولیگوڈینڈروسائٹس میں زیادہ پھیلاؤ اور تفریق سے منسلک تھے جس کی وجہ سے مائیلین سے متعلق پروٹین کے اظہار میں اضافہ ہوتا ہے۔ اسی طرح کے تجرباتی سیٹ اپ میں، جنگلی قسم کے ماؤس کے پپلوں کو OPN ناک آؤٹ ڈیموں کے ذریعے پالا گیا اور اضافی بوائین دودھ OPN（12 ug/g） نے غیر اضافی کنٹرولز [22] سے زیادہ یادداشت کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ دودھ OPN اعصابی ترقی میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور یہ کہ بوائین دودھ OPN پرجاتیوں پر اس طرح کے فائدہ مند اثرات مرتب کر سکتا ہے۔ ہم نے گروپوں کے درمیان کھلے میدان کے میدان میں بنیادی موٹر مہارتوں، گھر کے پنجرے کی سرگرمی، اور تلاشی رویے کے حصول میں اسی طرح کی ترقی پائی۔ مقامی T-maze ٹیسٹ میں گروپ پرفارمنس نے مزید اسی طرح کی ہپپوکیمپس پر منحصر سیکھنے اور یادداشت اور اس طرح علمی صلاحیتوں کی نشاندہی کی۔ ہمارے نتائج حال ہی میں کیے گئے ایک مطالعے کے مطابق ہیں جس میں دو دن پرانے اصطلاحی سوروں کا موازنہ کیا گیا ہے جو سویا پروٹین پر مبنی فارمولہ خوراک حاصل کرتے ہیں جس میں کوئی OPN نہیں ہے یا 250 mg/L بوائین دودھ OPN [24] کے ساتھ اضافی ہے۔ 30 ویں دن بعد از پیدائش کے ایک نئے آبجیکٹ کی شناخت کے کام کے دوران دو گروہوں کے درمیان صرف رویے کے محدود فرق ہی واضح تھے۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ کم از کم صحت مند، مدت سے پیدا ہونے والے خنزیروں میں، OPN دودھ کی تکمیل دماغ سے متعلق ترقی کو مزید بہتر نہیں بناتی ہے جیسا کہ ماپا جاتا ہے۔ ناول آبجیکٹ کی شناخت۔ مقامی T-maze ٹیسٹ کی طرح [44]، نوول آبجیکٹ کی شناخت کے کام کو ہپپوکیمپس پر منحصر سمجھا جاتا ہے، اور اس وجہ سے یہ رویے کے ٹیسٹ زیادہ سے زیادہ ہپپوکیمپل کی ترقی کی شرح کے وقت کے قریب زیادہ حساس ہو سکتے ہیں، جو اصطلاح میں نر اور مادہ خنزیر ہوتے ہیں۔ تقریباً بعد از پیدائش ہفتہ 8 اور 3 میں، بالترتیب [56]۔ یہ معلوم نہیں ہے کہ آیا ابتدائی زندگی میں دودھ کی OPN سپلیمنٹیشن کے بعد طویل مدتی علمی بہتری، جیسا کہ ماؤس ماڈل اسٹڈیز[14,22] میں دکھایا گیا ہے، بعد کے وقت کے نکات پر خنزیروں میں دستاویزی شکل دی جا سکتی تھی۔

ساختی دماغی نشوونما کے سلسلے میں، یہ پہلے مقناطیسی گونج امیجنگ کے ذریعے دستاویز کیا گیا تھا کہ غذائی OPN ضمیمہ نے دماغ کے علاقائی حجم کی تعداد کو معمول پر لانے کے بعد دماغ کے کل حجم میں اضافہ کیا [24]۔ اس مطالعے میں، ہمیں دماغ کے علاقائی وزن میں غذا کی وجہ سے کوئی فرق نہیں ملا، نہ مطلق وزن اور نہ ہی دماغ کے کل وزن کے نسبت۔ لہذا، ہم نے زیادہ گہرائی سے تجزیہ نہیں کیا جیسے مائیلین سے متعلق پروٹین کے جین کے اظہار کی سطح کی پیمائش کرنا، جیسے، مائیلین بنیادی پروٹین اور مائیلین سے وابستہ گلائکوپروٹین [14,23]۔ اس سے پہلے یہ دستاویز کیا گیا ہے کہ خارجی OPN میں اعصابی نقصانات کو کم کرکے اعصابی نقصان کی وجہ سے اعصابی اسکور میں بہتری آتی ہے [57I۔ مزید تحقیق کی اس بات کی تصدیق کی جاتی ہے کہ آیا دودھ OPN نظامی سوزش کی حالتوں کے دوران دماغ کو فائدہ مند ساختی اور فعال اثرات فراہم کرنے کے قابل ہے، جو اکثر قبل از وقت نوزائیدہ بچوں کو ہوتا ہے [26]۔ یہ موجودہ مطالعہ کے دائرہ کار سے باہر تھا۔

5. نتائج

حساس نوزائیدہ بچوں کے قبل از وقت پگ ماڈل میں، ہم نے دکھایا کہ اضافی بوائین دودھ OPN کے ساتھ اضافی بائیو ایکٹیو بوائین دودھ کی خوراک اچھی طرح سے برداشت کی جاتی ہے اور گٹ کی ساخت اور نظامی قوت مدافعت میں معمولی بہتری کی حوصلہ افزائی کرتی ہے، جس کا دماغ کی ساخت یا فعال نشوونما پر مزید کوئی اثر نہیں ہوتا ہے۔ بیسل بوائین دودھ سے جو کچھ حاصل ہوتا ہے اس سے اوپر OPN کے ساتھ ضمیمہ، اس طرح بچوں کو قدرتی طور پر انسانی دودھ سے جو کچھ حاصل ہوتا ہے اس کی اعلیٰ جسمانی سطح تک پہنچ جاتا ہے، اس لیے فوری طور پر نوزائیدہ دور میں حساس نوزائیدہ بچوں میں آنتوں، قوت مدافعت اور دماغ کی نشوونما پر محدود اثرات مرتب ہو سکتے ہیں۔ . سمجھوتہ کرنے والے نوزائیدہ بچوں کی نشوونما کو تحریک دینے کے لیے بوائین دودھ پر مبنی شیرخوار فارمولوں کے دودھ کے OPN ضمیمہ کے فوائد کے بارے میں مزید معلومات کا تعین ہونا باقی ہے۔