ملٹی کمپوننٹ پرائم بوسٹ کلیمیڈیا ٹریکومیٹس ویکسینیشن رجیم اینٹی باڈی اور ٹی سیل کے ردعمل کو دلاتی ہے اور غیر انسانی پرائمیٹ ماڈل میں انفیکشن کی کلیئرنس کو تیز کرتی ہے۔

جنسی طور پر منتقلی کے خلاف ایک ویکسین تیار کرنا بین الاقوامی ترجیح ہے۔کلیمائڈیا ٹریکومیٹس انفیکشنانفیکشن کے مسلسل عالمی پھیلاؤ کا مقابلہ کرنے کے لیے۔ دیبہترین امیونائزیشنحکمت عملی اب بھی مکمل طور پر واضح ہونا باقی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد جائزہ لینا تھا۔حفاظتی ٹیکوں کی حکمت عملیایک غیر انسانی پریمیٹ (NHP) ماڈل میں۔ Cynomolgus macaques (Macaqua fascicularis) کو مختلف کثیر اجزاء کے بعد حفاظتی ٹیکے لگائے گئے تھے۔پرائم بوسٹ امیونائزیشننظام الاوقات اور اس کے بعد نچلے جننانگ کی نالی میں C. trachomatis SvD کے ساتھ چیلنج کیا گیا۔ امیونائزیشن اینٹیجنز میں CAF01 یا ایلومینیم ہائیڈرو آکسائیڈ، MOMP DNA اینٹیجن، اور MOMP ویکٹر اینٹیجنز (HuAd5 MOMP اور MVA MOMP) کے ساتھ ملحق ریکومبیننٹ پروٹین اینٹیجن CTH522 شامل ہیں۔

روک تھام کے لیے جڑی بوٹیوں کی سیستانچ حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔کلیمائڈیا ٹریکومیٹس انفیکشن

تمام اینٹیجن کنسٹرکٹس انتہائی امیونوجینک بڑھاتے ہوئے اہم سیسٹیمیٹک C. trachomatis-specific IgG ردعمل تھے۔ خاص طور پر، CTH522 پروٹین کے ٹیکے لگائے گئے گروپوں نے سیرم میں ایک تیز اور مضبوط pecificsIgG اٹھایا۔ MOMP کے اندر مخصوص B سیل ایپیٹوپس کی میپنگ سے پتہ چلتا ہے کہ تمام ویکسین شدہ گروپ، MOMP کے متغیر ڈومینز (VD) کے قریب یا اس کے اندر تسلیم شدہ ایپیٹوپس، تمام جانوروں میں VD4 کے مستقل ردعمل کے ساتھ۔ مزید برآں، تمام ویکسین شدہ گروپوں کا سیرم وٹرو میں SvD، SvE، اور SvF دونوں کو بے اثر کر سکتا ہے۔ اندام نہانی اور آکولر میوکوسا پر اینٹی باڈی کے ردعمل کی عکاسی ہوتی ہے، جس میں آئی جی جی کی قابل شناخت سطح ظاہر ہوتی ہے۔ ویکسین نے C. trachomatis کے لیے مخصوص سیل ثالثی ردعمل کو بھی آمادہ کیا، جیسا کہ وٹرو محرک اور پردیی خون کے مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) کے انٹرا سیلولر سائٹوکائن سٹیننگ کے ذریعے دکھایا گیا ہے۔ عام طور پر، پروٹین (CTH522) ویکسین شدہ گروپوں نے ایک کثیر فعلی CD4 T سیل ردعمل قائم کیا، جبکہ DNA اور Vector ویکسین شدہ گروپوں نے بھی CD8 T سیل ردعمل قائم کیا۔ C. trachomatis SvD کے ساتھ اندام نہانی کے چیلنج کے بعد، کئی ٹیکے لگائے گئے گروپوں نے دکھایاانفیکشن کی تیز رفتار کلیئرنس، لیکن خاص طور پر ڈی این اے گروپ، کو حاصل کرنے کے لیے CAF01 کے ساتھ ملحق CTH522 کے ساتھ بڑھا۔متوازن CD4/CD8ٹی سیل ردعمل ایک کے ساتھ مل کرآئی جی جی کا جواب، دکھایاانفیکشن کی تیز رفتار کلیئرنس.

کلیدی الفاظ ویکسین، انفیکشن،امیونولوجی، بیکٹیریا، CD4/CD8 لیمفوسائٹس،کلیمائڈیا ٹریچومیٹس

تعارف

جینٹل کلیمیڈیا ٹریچومیٹس انفیکشن سالانہ اندازے کے مطابق دنیا بھر میں 131 ملین نئے کیسز کا باعث بنتے ہیں (1) اور ممکنہ طور پر اس کی وجہ سے صحت کا ایک بڑا مسئلہ بنتا ہے۔شدید پیچیدگیاںجیسے pelvicسوزش کی بیماری, ایکٹوپک حمل، اوربانجھ پن(2، 3)۔ اینٹی بائیوٹکس اب بھی C. trachomatis کے انفیکشن کا موثر علاج پیش کرتے ہیں۔ تاہم، چونکہ 75 فیصد تک کیسز میں انفیکشن غیر علامتی ہوتا ہے،زیادہ تر انفیکشن کا علاج نہیں کیا جاتا ہے۔، اور ٹرانسمیشن میں خلل نہیں پڑتا ہے (3)۔ عام طور پر اس بات پر اتفاق کیا جاتا ہے کہ کلیمائڈیا انفیکشن کے مسلسل پھیلاؤ کے خلاف سب سے مؤثر ہتھیار ایک حفاظتی ویکسین ہے (4)۔

کئی سالوں کی تحقیق کے باوجود ابھی تک کوئی ویکسین مارکیٹ میں نہیں آئی ہے۔ یہ جزوی طور پر C. trachomatis کے پیچیدہ بائی فازک طرز زندگی کی وجہ سے ہے۔ C. trachomatis کا منفرد بائفاسک لائف سائیکل، جس میں ایک خلوی اور ایکسٹرا سیلولر مرحلہ ہوتا ہے، مدافعتی نظام کو چیلنج کرتا ہے۔ یہ خیال کیا جاتا ہے کہ حفاظتی استثنیٰ سیرو ٹائپ مخصوص اینٹی باڈیز (5–13) کے علاوہ سیل میڈیٹیڈ امیون (CMI) ردعمل پر مشتمل ہونا چاہیے۔ مزید یہ کہ جننانگ کی نالی میں بلغمی قوت مدافعت پیدا کرنا ویکسین کے لیے ایک اضافی چیلنج ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم نے این ایچ پی کلیمیڈیا انفیکشن ماڈل میں ویکسین کی مختلف حکمت عملیوں کا تجربہ کیا۔ ان حکمت عملیوں کا مقصد اینٹی باڈیز، CD4 T خلیات، اور/یا CD8 T سیل ردعمل پیدا کرنا ہے۔ اس کے علاوہ، کچھ ویکسین کا مقصد میوکوسل ردعمل پیدا کرنا ہے۔ اس تحقیق کے لیے چنے گئے اینٹیجنز میجر آؤٹر میمبرین پروٹین پر مبنی تھے۔ سب سے پہلے، ایک متفقہ MOMP Antigen (Con E) جو کہ تقریباً 1500 سیروور E ompA سیکوینسز پر مبنی ہے، سب سے زیادہ مروجہ C. trachomatis strains (14) کے خلاف ہائی ایپیٹوپ کوریج فراہم کرنے کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ دوم، ایک مصنوعی فیوژن پروٹین، CTH522، استعمال کیا گیا تھا۔ CTH522 MOMP کا ایک دوبارہ پیدا کرنے والا، انجنیئرڈ ورژن ہے، جس میں چار جینٹل Ct سروورز (D, E, F, اور G) (11) سے VD4 علاقوں کے ہیٹرولوگس امیونور پیٹس پر مشتمل ہے۔ ریکومبیننٹ فیوژن پروٹین کے پیچھے حکمت عملی یہ ہے کہ حفاظتی ایپیٹوپس پر وسیع ردعمل پیدا کریں اور کراس سیروور تحفظ (11) کی حوصلہ افزائی کریں۔

موجودہ تجربے کی ایک اور اہم خصوصیت CTH522 کا متوازی تشخیص دو واضح طور پر مختلف معاون نظاموں (AlOH اور CAF01) میں تھا، جو ایک انٹراناسل بوسٹر کے ساتھ مل کر تھا۔ اس امتزاج کا چوہوں اور چھوٹے خنزیروں میں تجربہ کیا گیا ہے جہاں یہ اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کے اعلی ٹائٹرز، IFN-g پیدا کرنے والے CD4 پلس T خلیات، اور جننانگ C. trachomatis انفیکشن کی تیز رفتار کلیئرنس (11–13) کے ذریعے انتہائی امیونوجینک ثابت ہوا ہے۔ ، 15)۔ مزید برآں، اس موازنہ نے حال ہی میں پہلی بار انسانی طبی آزمائش کی عکاسی کی جس میں دونوں فارمولیشنز امیونوجینک ثابت ہوئیں، اور جہاں CAF01 سیرم اینٹی باڈیز اور Th1 سیل ثالثی مدافعتی ردعمل (16) کو غیرجانبدار کرنے میں بہتر تھا۔ مضبوط سیلولر مدافعتی ردعمل پیدا کرنے کے لیے، اور خاص طور پر CD8 T سیل کے ردعمل کو CD4 T سیل کے ردعمل کے ساتھ ملا کر، جانوروں کے کچھ حصے کو Adeno ویکٹر pAL1112 (HuAd{19}MOMP) کے ساتھ پرائمنگ کے بعد CT522/CAF01 امیونوجن کے ساتھ بڑھایا گیا۔ ایم وی اے پوکس ویکٹر، یا پلاسمڈ ڈی این اے pcDNA3.1 MOMP کون ای اینٹیجن فراہم کرتا ہے (14، 17)۔ تینوں ویکٹرز نے NHPs میں امیونوجینک ثابت کیا ہے، اور حال ہی میں یہ دکھایا گیا ہے کہ ان تینوں ویکسینز اور حتمی بوسٹر ویکسینیشن کو ملانے والی ایک امیونائزیشن حکمت عملی جس میں ایڈجوانٹڈ پروٹین اینٹیجن-حوصلہ افزائی اعلی مدافعتی ردعمل ہے اور ایک ماؤس C میں انٹراواجینل C. trachomatis کی کلیئرنس کو مستقل طور پر بڑھایا ہے۔ trachomatis انفیکشن ماڈل (14).

موجودہ مطالعے میں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ غیر انسانی پریمیٹ (NHP) ماڈل میں پروٹین ویکسینز، ڈی این اے ویکسینز، اور ریکومبیننٹ وائرل ویکٹر ویکسین دونوں کے ساتھ ملٹی کمپوننٹ امیونائزیشن کی حکمت عملیوں کے مختلف امتزاج کا نتیجہ الگ الگ مدافعتی ردعمل ہوتا ہے۔ مزید برآں، ہم مشاہدہ کرتے ہیں کہ ڈی این اے پرائمنگ اور پروٹین (CTH522/CAF01) کا استعمال کرتے ہوئے کلیمائڈیا ٹریچومیٹس کے ساتھ جینیاتی چیلنج کے بعد تیز رفتار بیکٹیریل کلیئرنس کو بڑھایا۔

نتائج

ویکسینیشن کے تمام نظام محفوظ ثابت ہوئے اور اہم نظامی اینٹی باڈی ردعمل کی حوصلہ افزائی کی۔

مجموعی طور پر 30 سائینومولگس میکاک کو مختلف پرائم بوسٹ ویکسینیشن رجیم کے بعد ٹیکہ لگایا گیا جس میں پروٹین، ڈی این اے، اور ویکٹر ویکسین اور انتظامیہ کے مختلف راستے شامل ہیں، جیسا کہ شکل 1 اور ضمنی اعداد و شمار 6-10 میں دکھایا گیا ہے۔ مطالعہ کے دوران تمام جانور صحت مند رہے اور حفاظتی ٹیکوں کے لیے قابل پیمائش منفی اثرات پیدا نہیں ہوئے۔ اس کے علاوہ، ہم نے جانوروں کے وزن یا درجہ حرارت میں کوئی اہم اتار چڑھاؤ نہیں دیکھا (ضمنی اعداد و شمار 1، 2)۔

حفاظتی ٹیکوں کے بعد مقررہ وقت پر، سیرم کو جمع کیا گیا اور سیرم میں CTH522 مخصوص IgG کی سطحوں کا ELISA کے ذریعے جائزہ لیا گیا۔ تمام 5 ٹیکے لگائے گئے گروپوں نے ایک اہم سیرم CTH522 IgG ردعمل قائم کیا (شکل 2)۔ تاہم، 5 ٹیکے لگائے گئے گروپوں میں حرکیات قدرے مختلف تھے۔ CTH522/AlOH پلس IN، CTH522/CAF01، اور CTH522/CAF01 پلس IN گروپس میں موجود تمام جانوروں نے صرف 1 انٹرماسکلر (IM) امیونائزیشن کے بعد ایک اہم IgG ٹائٹر اٹھایا، اور IgG ٹائٹر آخری نمونے لینے والے پوائنٹ (اعداد و شمارA2) تک اہم رہا۔ سی)۔ ڈی این اے پلس سی ٹی ایچ 522 اور ویکٹر پلس سی ٹی ایچ 522 گروپس میں سیرم آئی جی جی کی سطح میں قدرے آہستہ اضافہ ہوا، جہاں تمام جانوروں کو بالترتیب ہفتہ 8 اور ہفتہ 4 میں سیرو کنورٹ کیا گیا تھا (اعداد و شمار 2 ڈی، ای)۔

CTH522/AlOH پلس IN، CTH522/CAF01 پلس IN، اور CTH522/CAF01 گروپس نے ہفتہ 16 میں 3rd IM بوسٹر ویکسین کے بعد سیرم IgG میں نمایاں اضافہ کیا (اعداد و شمار 2A C)۔ ڈی این اے پلس CTH522 اور ویکٹر پلس CTH522 گروپوں نے ہفتہ 20 میں پروٹین/CTH522/CAF01 IM بوسٹر کے بعد سیرم IgG کی سطح میں نمایاں اضافہ کیا (اعداد و شمار 2D، E)۔ سیرم اینٹی باڈی ردعمل میں CTH522 کے ساتھ تین بار IM ویکسینیشن کے بعد CAF01 یا AlOH معاون (اعداد و شمار 2A، B) کے ساتھ تیار کیے جانے کے بعد اور CTH522/AlOH پلس اور IN میں انٹراناسل (IN) غیر منسلک بوسٹر حفاظتی ٹیکوں کے بعد کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا۔ CTH522/CAF01 پلس IN گروپس نے سیرم IgG اینٹی باڈی ٹائٹرز (اعداد و شمار 2A، B) میں کوئی خاص اضافہ نہیں کیا۔

سیرم IgG ردعمل کے حرکیات اندام نہانی کے سیالوں میں حرکیات/ سطحوں کی عکاسی کرتے ہیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ اندام نہانی کی سطح پر پائے جانے والے اینٹی باڈیز گردش سے حاصل کیے جانے کا امکان ہیں۔ اسی طرح، آکولر آئی جی جی لیولز نے بھی سیرم آئی جی جی لیولز کی پیروی کی اور جیسا کہ سیرم میں مشاہدہ کیا گیا، ظاہر ہوا کہ ڈی این اے/ویکٹر گروپس میں آئی ایم بوسٹر نے آکولر آئی جی جی ٹائٹر (ضمنی شکل 3) میں اضافہ کیا۔

سیرم اینٹی باڈی ردعمل MOMP ترتیب میں متغیر ڈومینز 1، 3، اور 4 کے خلاف ہدایت کی جاتی ہیں

سیرم اینٹی باڈیز کے ذریعہ مخصوص ایپیٹوپ کی شناخت کی مزید وضاحت، مختلف ویکسینیشن حکومتوں کے بعد، اگلی جانچ کی گئی۔ سیرم کا تجزیہ ہفتہ 24 میں کیا گیا، یعنی گروپ 1 اور 2 میں انٹراناسل بوسٹر ویکسین کے بعد، اور DNA اور ویکٹر گروپس (گروپ 4 اور 5) میں IM بوسٹر ویکسین کے بعد۔ یہ تجزیے ایک پیپٹائڈ سرنی کے ساتھ کیے گئے تھے جس میں CTH522 کا احاطہ کیا گیا تھا، جس میں 14 امینو ایسڈ اوورلیپ کے ساتھ 15 میر پیپٹائڈس شامل تھے۔

تصویر 1 اسٹڈی ڈیزائن۔ اعداد و شمار گروپوں، ویکسینز اور انتظامیہ کے راستے (انٹرماسکلر، آئی ایم، یا انٹراناسل، IN) کو ظاہر کرتا ہے۔

تصویر 2 (A-F) سیرم CTH522 IgG اینٹی باڈی ردعمل۔ Cynomolgus macaques کو مختلف پرائم بوسٹ رجیم (n=5 فی گروپ) کے بعد حفاظتی ٹیکے لگائے گئے اور ہر دوسرے ہفتے سیرم اکٹھا کیا گیا۔ سیرم میں مخصوص CTH522 IgG اینٹی باڈیز کا اندازہ ELISA کے ذریعے کیا گیا تھا اور یہاں log10 پیمانے پر ٹائٹر کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ سرمئی تیر کے نشان ویکسین کی نشاندہی کرتے ہیں۔ ہر لائن ایک جانور کی نمائندگی کرتی ہے۔ شماریاتی اہمیت کو ستارے *p < 0.05 اور **p <0.01 سے ظاہر کیا جاتا ہے۔

عام طور پر، تسلیم شدہ پیپٹائڈس MOMP کے متغیر ڈومینز (VDs 1,3,4) کے قریب اور اندر واقع تھے۔ CTH522/AlOH گروپ نے VD2 کے علاقے کی کچھ پہچان بھی ظاہر کی۔ تمام جانوروں نے VD4 خطے کے خلاف ایک مضبوط ردعمل قائم کیا جس میں محفوظ غیر جانبدار VD4 ایپیٹوپ (11) شامل ہے۔ ڈی این اے گروپ نے VDs (شکل 3) کے اندر سب سے تنگ شناخت ظاہر کی، جبکہ ویکٹر گروپ نے قدرے وسیع تر شناخت کا نمونہ دکھایا۔ CTH522/CAF01 اور CTH522/AlOH گروپس نے خاص طور پر SvF اور SvG کے خلاف وسیع ترین پہچان ظاہر کی۔

سیرم اینٹی باڈیز وٹرو میں SvD، SvE، SvF کو بے اثر کرنے کے قابل تھیں۔

اس کے ہدف کے خلیات کے C. trachomatis کے ذریعے انفیکشن کو روکنے کے لیے ویکسین کی حوصلہ افزائی اینٹی باڈیز کی صلاحیت کا جائزہ لینے کے لیے، ایک ان وٹرو نیوٹرلائزیشن پرکھ کی گئی۔ اس پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے SvD، SvE، اور SvF دونوں کی غیرجانبداری کی جانچ کی۔ ہفتہ 24 سے سیرم پرکھ کے لئے استعمال کیا گیا تھا، اور بولی گروپ سے سیرم ایک کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا. تمام پانچ ٹیکے لگائے گئے گروپوں نے تینوں سروورز کو بے اثر کرنے کی صلاحیت دکھائی (شکل 4)۔ SvD کے مقابلے میں CTH522/AlOH پلس IN گروپ نے سب سے زیادہ 50 فیصد نیوٹرلائزیشن ٹائٹر دکھایا، جب کہ SvE کے مقابلے میں DNA/CTH522 گروپ، جس کے بعد CTH522/AlOH پلس IN گروپ نے سب سے زیادہ نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز دکھائے۔ اگرچہ تمام گروپس SvF کو بے اثر کرنے کے قابل تھے، SvD اور SvE کے مقابلے اس سروور کے خلاف تمام گروپوں کے لیے 50 فیصد نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز قدرے کم تھے۔ ویکٹر پلس CTH522 گروپ نے تمام ویکسین والے گروپوں میں سب سے کم 50 فیصد نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز دکھائے۔

ویکسینیشن کے مختلف نظاموں نے الگ الگ ٹی سیل پروفائلز کی حوصلہ افزائی کی۔

ویکسینیشن کی حوصلہ افزائی ٹی سیل ردعمل کا اندازہ کرنے کے لئے، PBMCs کو مطالعہ کی مدت کے دوران جمع کیا گیا تھا اور cryopreserved کیا گیا تھا. ہفتہ 0/بیس لائن اور ہفتہ 22 سے PBMCs کو پیپٹائڈ پولز (MOMP) کے ساتھ دوبارہ متحرک کیا گیا تھا اور انٹرا سیلولر سائٹوکائن سٹیننگ (ICS) اور ساتھی سائٹومیٹری کے ذریعہ انٹرا سیلولر سائٹوکائنز کے لئے جانچا گیا تھا۔ PBMCs کو درج ذیل سیل مارکروں کے لیے داغ دیا گیا تھا: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137، اور سائٹوکائنز: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }اے گیٹنگ کی حکمت عملی ضمنی اعداد و شمار 4، 5 میں دکھائی گئی ہے۔ MOMP پیپٹائڈ پول کے ساتھ PBMCs کے محرک نے ایک اہم ردعمل پیدا کیا۔ IL2، IFN-g، اور TNF-a کے امتزاج کا اظہار کرنے والے اینٹیجن مخصوص CD154 پلس CD4 پلس T خلیات کا فیصد تمام ٹیکے لگائے گئے گروپوں میں آخری امیونائزیشن (W22) کے 2 ہفتوں بعد بڑھ گیا (شکل 5)۔ ان T خلیات کی اکثریت اس لحاظ سے ملٹی فنکشنل تھی کہ انہوں نے کئی سائٹوکائنز کا اظہار کیا۔ سائٹوکائنز تیار کرنے والے اینٹیجن مخصوص CD137 پلس CD8 T خلیات کا فیصد صرف DNA اور ویکٹر گروپ (W22) میں بڑھایا گیا، (شکل 6، CD137 پلس CD8 پلس T خلیات کی کثیر فعالیت کو ظاہر کرتا ہے)۔ میں

تصویر 3 ہفتہ 24 میں سیرم ایپیٹوپ میپنگ۔ مختلف پرائم بوسٹ رجیم (n=5 فی گروپ) کے بعد سائینومولگس میکاک کو حفاظتی ٹیکے لگائے گئے اور سیرم ہفتہ 24 میں اکٹھا کیا گیا۔ CTH522 15میر اوورلیپنگ پر پیپٹائڈ سرنی IgG ردعمل پیپٹائڈس کو ہر گروپ کے لیے درمیانی سگنل کے طور پر پیش کیا جاتا ہے جس میں VD1 پیپٹائڈس (اورینج)، VD2 (سبز)، VD3 (نیلے) اور VD4 سے SvD، E، F اور G (سرخ) رنگوں میں نمایاں ہوتے ہیں۔

تصویر 4 C. trachomatis SvD، SvE، اور SvF کی وٹرو سیرم کو نیوٹرلائزیشن میں۔ Cynomolgus macaques کو مختلف پرائم بوسٹ رجیم (n=5 فی گروپ) کے بعد حفاظتی ٹیکے لگائے گئے اور امیونائزیشن شیڈول (ہفتہ 24) کو ختم کرنے کے بعد سیرم جمع کیا گیا۔ C. trachomatis SvD, SvE، اور SvF کو ہر جانور کے سیرم کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا اور انفیکشن کو روکنے کے لیے سیرم اینٹی باڈیز کی صلاحیت کا اندازہ اینٹی باڈی-بیکٹیریا کے مرکب کو HaK خلیوں پر لگا کر اور شمولیت کے لیے داغ لگا کر کیا گیا تھا۔ بلیک لائن SvD دکھاتی ہے، گرے لائن SvE دکھاتی ہے اور گہرے سرمئی نقطے والی لائن SvF دکھاتی ہے۔ نقطے والی سرخ لکیر ہر سیروور کے باہمی 50 فیصد نیوٹرلائزیشن ٹائٹر کی نشاندہی کرتی ہے۔

تصویر 5 CD4 T سیل کے جوابات۔ ملٹی فنکشنل تجزیہ ہفتہ 22۔ سائٹوکائن کی پیداوار CD4 پلس T خلیات کے ذریعہ ICS کے ذریعہ پرکھا گیا۔ MOMP کی طرف سے اوورلیپنگ پیپٹائڈس کے تالابوں کے ساتھ محرک کے بعد ملٹی فنکشنل ردعمل کی نمائندگی کی جاتی ہے۔ ہر پائی کا سائز CD154 پلس CD4 پلس T خلیات کے فیصد کے تناسب سے ہے جو کم از کم ایک سائٹوکائن کا اظہار کرتے ہیں، بشمول IFN-g، TNF-a، اور IL-2، اور IFN-g ظاہر کرنے والے خلیوں کے تناسب اور /یا TNF-a اور/یا IL-2 سائٹوکائنز ہر پائی میں دکھائے جاتے ہیں۔

ویکسینیشن کی وجہ سے اندام نہانی C. trachomatis SvD انفیکشن کی تیز رفتار کلیئرنس

ویکسین کی وجہ سے مدافعتی ردعمل کی حفاظتی افادیت کا جائزہ لینے کے لیے، جانوروں کو 5x107 IFUs C. trachomatis SvD کے ساتھ اندام نہانی کے انفیکشن کے ساتھ چیلنج کیا گیا۔ ٹیکہ لگانے کے بعد، اندام نہانی کے کلیمائڈیل بوجھ کا تعین اندام نہانی کے جھاڑو (شکل 7) میں کلیمائڈیل ڈی این اے کے پی سی آر کا پتہ لگانے سے کیا گیا تھا۔ ڈی این اے پلس CTH522/CAF01 گروپ اور ویکٹر پلس CTH522 گروپ میں ہفتہ 5 تک، CAF01/CTH522 گروپ میں ہفتہ 6 اور CTH522/Alum پلس میں ہفتہ 8 تک تمام جانوروں میں انفیکشن صاف ہو گیا تھا۔ گروپ میں (شکل 7)۔ کنٹرول گروپ میں، ہفتے 8 میں، 80 فیصد جانوروں نے انفیکشن کو صاف کر دیا تھا اور 9 ہفتے میں 1 جانور PCR مثبت رہا۔ CTH522/CAF01 پلس IN گروپ میں IN بوسٹر نے تحفظ میں اضافہ نہیں کیا (شکل 7)۔ لاگ رینک (مانٹیل-کاکس) ٹیسٹ، تمام گروپس کا موازنہ کرنے سے P ویلیو 0,0994 ظاہر ہوئی، اور ہر گروپ کا انفرادی طور پر کنٹرول گروپس سے موازنہ کرنے سے، صرف DNA-CTH522 گروپ نے P ویلیو 0.05 (P) سے کم ظاہر کی۔ قدر=0.0257)۔

بحث

موجودہ مطالعہ سیلولر امیونٹی (CD4 اور CD8) کو مزاحیہ استثنیٰ کے ساتھ ملا کر اور MOMP پر مبنی کلیمیڈیا ویکسین کے ساتھ انکولی استثنیٰ کے فینوٹائپ کو تیار کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا۔ ہم دونوں پروٹین ویکسین (CTH522، Con E)، DNA ویکسین اور ریکومبیننٹ وائرل ویکٹر (MVA MOMP)، اور اڈینو ویکٹر پر مبنی ویکسین کے ساتھ مشترکہ کثیر اجزاء کی حفاظتی حکمت عملیوں کی مدافعتی صلاحیت اور حفاظتی افادیت کا جائزہ لیتے ہیں۔ NHP) ماڈل۔

اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ تمام حفاظتی نظام امیونوجینک تھے اور ایک سیلولر اور مزاحیہ ردعمل دونوں کی حوصلہ افزائی کرتے ہیں جس میں اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے پر مشتمل ہوتا ہے (اعداد و شمار 2-4)۔ CAF01 یا AlOH کے ساتھ تیار کردہ پروٹین ویکسین CTH522 نے سیسٹیمیٹک اینٹیجن مخصوص IgG (شکل 2) کی تیزی سے شمولیت کو دکھایا۔ ہم نے AlOH اور CAF01 سے منسلک ویکسینز کی طرف سے حوصلہ افزائی کے ردعمل کے درمیان کوئی اہم فرق نہیں دیکھا، جو ان معاونین (16) کے ساتھ انسانوں میں مشاہدہ کردہ ردعمل کے ساتھ متفق ہے. ڈی این اے اور ویکٹر ویکسینیشن رجیموں نے اینٹیجن مخصوص سیسٹیمیٹک اینٹی باڈیز کے اہم ٹائٹرز کو بھی متاثر کیا، جس میں پروٹین بوسٹر امیونائزیشن (شکل 2) کے بعد واضح طور پر اضافہ ہوا۔ ہمارے نتائج کے ساتھ اتفاق کرتے ہوئے، چوہوں میں ایک پچھلی تحقیق نے یہ بھی ظاہر کیا کہ پروٹین کی ویکسینیشن کی حکومتوں نے ڈی این اے اور ویکٹر ویکسین اینٹیجنز کے مقابلے میں اینٹیجن مخصوص اینٹی باڈی کی سطح کو بڑھایا اور ان گروپوں کے لیے ٹائٹرز کو بھی موثر طریقے سے بڑھایا (15)۔

MOMP میں چار VDs ہوتے ہیں جو Ct کی متعدی شکل کی سطح پر ظاہر ہوتے ہیں یہ علاقے اینٹی باڈی پر منحصر قوت مدافعت کا بنیادی ہدف ہیں، دونوں کو بے اثر کرنے والی اینٹی باڈیز اور Fc ریسیپٹر ثالثی استثنیٰ (18) کے ذریعے۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ویکسین سے متاثرہ غیر جانبدار سیرم کی اپنانے والی منتقلی نے C. trachomatis انفیکشن (6, 11, 19-21) کے بعد ابتدائی بیکٹیریل شیڈنگ کو واضح طور پر کم کیا۔ اس طرح، اینٹی باڈیز ابتدائی انوکولم کو بے اثر کرنے/کنٹرول کرنے میں کردار ادا کرتی نظر آتی ہیں، شاید سیلولر امیونٹی کے تعاون سے۔ تفصیلی B سیل ایپیٹوپ میپنگ کے ذریعے، ہمیں ویکسین کے تمام گروپس میں VD ریجنز 1، 3، 4 کی پہچان ملی۔ ڈی این اے اور ویکٹر گروپس نے بھی VD1، 3 اور 4 علاقوں کو تسلیم کیا۔ تاہم، ان گروپوں نے CAF01 اور AlOH گروپس کے مقابلے ان VDs کے اندر قدرے کم شناخت ظاہر کی، جو شاید اس بات کی عکاسی کرتا ہے کہ ویکٹر گروپس میں Con E اینٹیجن SvF اور G کے VD4 خطے پر مشتمل نہیں ہے (شکل 3)۔ VD4 خطے کی شناخت SvD، SvE، اور SvF کے خلاف غیر جانبدار اینٹی باڈیز کو آمادہ کرنے کے لیے تمام ویکسین کی حکمت عملیوں کی صلاحیت سے منسلک ہے۔

CAF01 اور AlOH میں CTH522 کے ساتھ والدین کے حفاظتی ٹیکوں نے جننانگ کی نالی میں میوکوسل اینٹی باڈیز (IgG) کی نمایاں سطحوں اور آنکھ اور سطحوں کو سیرم ٹائٹرز کے ساتھ منسلک کیا (ضمنی شکل 3، ہفتہ 18)۔ اکیلے ڈی این اے اور ویکٹر ویکسین نے میوکوسل آئی جی جی کو آمادہ نہیں کیا، جو صرف پروٹین کے مقابلے میں کم سیرم ٹائٹرز کی عکاسی کرتا ہے۔ تاہم، CTH522/CAF01 IM بوسٹر کے بعد، یہ گروپ سیرم Ab میں نمایاں اضافہ کرتے ہیں۔ سطح اور اندام نہانی اور آنکھ دونوں کی IgG، صرف پروٹین کے برابر (ضمنی شکل 3، ہفتہ 18)۔ مختلف پرائمنگ ایڈجونٹ سسٹمز (AlOH اور CAF01) میں CTH522 کی متوازی تشخیص جس کے بعد اینٹیجن کے ساتھ دو بار انٹراناسل بوسٹنگ کا میوکوسل اینٹی باڈی کی سطح پر کوئی اثر نہیں پڑا (ضمنی شکل 3، ہفتہ 22)۔ اس طرح مجموعی طور پر سیرم آئی جی جی کی سطح تمام گروپوں کے میوکوسا پر ظاہر ہوتی ہے۔ ایک حالیہ انسانی فیز-I ٹرائل نے AlOH اور CAF01 میں CTH522 کے متوازی تشخیص کا بھی جائزہ لیا، جس کے بعد دو بار انٹراناسل بوسٹنگ ہوئی۔ یہاں میوکوسل آئی جی جی ٹائٹرز بھی سیرم آئی جی جی حراستی (16) کے ساتھ اچھی طرح سے منسلک ہیں۔ تاہم، NHP ماڈل میں پائے جانے والے نتائج کے برعکس، انسانی آزمائش نے CAF01 گروپ میں IN کو بڑھانے کا اثر دکھایا، جس کے نتیجے میں IgG اور IgA دونوں کی سطح بلند ہوئی۔ بدقسمتی سے، موجودہ مطالعے میں IgA کی تشخیص ممکن نہیں تھی، محدود مواد اور پرکھ میں استعمال ہونے والے کراس ری ایکٹنگ سیکنڈری اینٹی باڈی کے نتیجے میں غلط مثبت سگنلز کی وجہ سے۔ دونوں مطالعات میں VaxINator ڈیوائس کا استعمال کیا گیا، جو ناک کی دوائیوں کو بلغمی جذب کے لیے ایٹمائز کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ تاہم، انسانوں کی ناک کی گہا NHP کی نسبت بہت زیادہ کشادہ ہے اور یہ قیاس کیا جا سکتا ہے کہ یہ اینٹیجن کی تقسیم اور اخراج کو بھی متاثر کر سکتا ہے۔

انسانوں اور چوہا دونوں میں متعدد مطالعات نے Th1 T سیل کی قوت مدافعت اور انفیکٹر سائٹوکائن IFN-g (8, 22–27) کی اہمیت کو ظاہر کیا ہے۔ اس کے برعکس، CD8 T خلیات (28–33) کے لیے حفاظتی کردار کے بارے میں کم معلوم ہے۔ تمام ویکسین گروپس نے CD4 T خلیات کی حوصلہ افزائی کی، لیکن صرف DNA اور Vector گروپوں نے CD8 T سیل کا ردعمل دکھایا (اعداد و شمار 6 اور 7)۔ سائٹوکائنز کی پیمائش کی بنیاد پر، CD8 T خلیات CD4 T خلیات کے مقابلے میں محدود تعداد میں ذیلی سیٹوں پر مشتمل تھے، جنہیں 6 یا اس سے زیادہ ذیلی سیٹوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، جن میں سے اکثر نے کئی سائٹوکائنز تیار کیں (شکل 7)۔ CD4 T خلیات نے CD8 T خلیات سے زیادہ IL-2-اظہار کرنے والے ذیلی سیٹ دکھائے، جس میں بنیادی طور پر صرف ایک IL-2-اظہار کرنے والا سب سیٹ شامل تھا، جس نے IFN-g اور TNF- کے ساتھ مل کر IL-2 کا اظہار کیا۔ a (شکل 6)۔ CD8 T خلیوں پر ایک بڑی آبادی کا غلبہ تھا جو صرف IFN-g پیدا کرتا تھا، جبکہ دوسرے غالب CD8 T سیل سبسیٹ نے IFN-g اور TNF-a دونوں تیار کیے تھے۔ CD4 T خلیات اور CD8 T خلیوں کے درمیان یہ سائٹوکائن پیٹرن اس کے برعکس نہیں ہے جو چوہوں میں دیکھا گیا ہے، جب ویکسین کی حکمت عملیوں کی جانچ کی جاتی ہے جو CD4 اور CD8 T خلیات (34) دونوں کو آمادہ کرنے کے قابل ہوتی ہے۔

اسی طرح کی حکمت عملی جس میں ڈی این اے ویکسینیشن شامل ہے جس کے بعد MOMP پروٹین (35) کے مدافعتی محرک کمپلیکس (ISCOM) کو بڑھا کر کلیمائڈیا موریڈیرم پھیپھڑوں کے انفیکشن کے خلاف مضبوط تحفظ فراہم کیا گیا۔ اس مطالعہ میں، DNA MOMP (یا MOMP/ISCOMS) نے نمایاں طور پر کم تحفظ پیدا کیا (35)۔ ایک اور تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ ڈی این اے MOMP پلاسمڈ کے ساتھ چوہوں کی ویکسینیشن، بغیر کسی سبونائٹ ویکسین کے، جننانگ C. trachomatis چیلنج (36) کے خلاف حفاظت کرنے میں ناکام رہی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ DNA حکمت عملی کو CD4 T خلیات اور اینٹی باڈیز پیدا کرنے والی سبونائٹ ویکسین کے ساتھ اضافی ہونے سے فائدہ ہوتا ہے۔ . واضح رہے کہ ڈی این اے ویکسین نے انسانی کلینیکل ٹرائلز میں نسبتاً کم امیونوجنیسیٹی پروفائلز دکھائے ہیں، جن کو مستقبل کے مطالعے میں حل کرنا پڑ سکتا ہے (37)۔

اگرچہ اس تحقیق میں استعمال ہونے والی Ct انفیکشن کی خوراک انسانوں میں قدرتی انفیکشن کے تجربہ کردہ خوراک سے زیادہ ہے، لیکن اس کا انتخاب اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کیا گیا تھا کہ تمام جانور متاثر ہوئے ہیں، جو کہ ہر گروپ میں جانوروں کی چھوٹی تعداد کو مدنظر رکھتے ہوئے اہم ہے۔ خوراک پچھلے مطالعات میں استعمال ہونے والی خوراک کے مطابق ہے، جو 106 سے 108 (38، 39) تک تھی۔ ہمارے ماڈل میں خوراک کو کم کرنے سے انفیکشن لینے کے حوالے سے تغیر میں اضافہ ہوا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ بار بار دی گئی کم خوراکیں بھی استعمال کی گئی ہیں (40، 41)۔ تاہم، یہ ایک بہترین پروٹوکول نہیں ہے جب مقصد ویکسین کی حفاظتی کارکردگی کو جانچنا ہو، خاص طور پر اگر قدرتی استثنیٰ انفیکشن پروٹوکول کے مکمل ہونے سے پہلے تحفظ میں ثالثی کر رہا ہو۔ یہ قیاس کیا جا سکتا ہے کہ زیادہ خوراک استعمال کرنے کے لیے مدافعتی ردعمل کی ضرورت پڑ سکتی ہے جس میں مدافعتی نظام کے تمام بازو شامل ہوتے ہیں، جیسے کہ اینٹیجن مخصوص CD4 T خلیات، CD8 T خلیات کے ساتھ ساتھ اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنا، تاکہ بیکٹیریا کو کم کرنے کے قابل ہو سکے۔ سطح یہ اس بات کی بھی وضاحت کرے گا کہ کیوں تمام گروپوں میں غیر جانبدار اینٹی باڈیز کی حوصلہ افزائی تمام گروپوں میں اہم تحفظ کا باعث نہیں بنی [حالانکہ ہم نے زیادہ تر گروپوں میں ابتدائی تحفظ کا رجحان دیکھا ہے، جہاں اینٹی باڈیز کا کردار ادا کرنے کے بارے میں سوچا جاتا ہے (شکل 7)] . ہم فی الحال ایک زیادہ جسمانی طور پر متعلقہ ماڈل تیار کرنے کی کوشش کر رہے ہیں۔

ایک ساتھ لے کر، ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ CTH522 اینٹیجن ملٹی CAF01 یا AlOH میں تیار کیا گیا ہے جو NHPs میں ملٹی فنکشنل T سیلز اور اینٹی باڈیز کو بے اثر کر سکتا ہے۔ مزید برآں، ہمارے نتائج نے تجویز کیا کہ ڈی این اے ویکسین اور CTH522/CAF01 سبونائٹ ویکسین پر مشتمل ایک ہیٹرولوگس ویکسین کی حکمت عملی ایک کثیر جہتی مدافعتی ردعمل کو شامل کرنے کے لیے ایک امید افزا ویکسین کی حکمت عملی کی نمائندگی کرتی ہے جس میں مضبوط CD4 اور Tcell کے ردعمل کے ساتھ مل کر Abs کو بے اثر کرنے کی اعلی سطح ہے۔ C. trachomatis انفیکشن کی کلیئرنس کو نمایاں طور پر تیز کر سکتا ہے۔

مزید کے لیے پوچھیں:

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: علاوہ 86 15292862950

ویسٹینچ شاپ

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop