کاسمیٹک فارمولیشنز کے لیے بریوری کے بائی پروڈکٹس سے نئے اینٹی آکسیڈینٹ اجزاء

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ:اس کام کا مقصد مختلف قسم کے ہینڈ کرافٹ بیئرز (ایگو، آلٹر، فیاٹ لکس، ٹریپلو مالٹو، یوبی، اور مائیر) کے کل فینول مواد اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا جائزہ لینا تھا، نیز ابتدائی مواد (مالٹ، ہاپس، اور خمیر)، درمیانی مصنوعات، اور فضلہ کی مصنوعات (خرچ شدہ مالٹ، ہاپس، اور خمیر)، جدید کاسمیٹک فارمولیشنز میں ان کے استعمال کے پیش نظر۔ ابتدائی اور خرچ شدہ نمونے پانی یا 70 ڈگری الکحل سے لیے گئے تھے۔ تمام پکنے والی مصنوعات کا کل فینول مواد (Folin Ciocalteau Essay) زیر تفتیش مصنوعات پر منحصر ہے۔ سب سے زیادہ قدریں سٹارٹنگ ہاپس میں پائی گئیں (تقریباً 93 سے 155 ملی گرام GAE/g تک، نکالنے والے سالوینٹس کے مطابق)، مالٹ شروع کرنے اور تیزی سے شروع کرنے میں درمیانی قدریں، اور wort میں سب سے کم قدریں پائی گئیں۔ حتمی بیئرز میں فینول کا کل مواد ان فینول سے نکلتا ہے جو مختلف اجزاء، یعنی ابتدائی مالٹس، ہاپس اور خمیر سے نکالے گئے تھے، لیکن خرچ شدہ مصنوعات میں اب بھی غیر معمولی قدریں دیکھی گئیں۔cistanche تنااینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی تشخیص کے لیے استعمال کیے جانے والے طریقہ کار، ٹرالوکس ایکوئیلنٹ اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (DPPH)، فیرک آئن ریڈونگ اینٹی آکسیڈینٹ پیرامیٹر (FRAP)، اور ریڈیکل کیٹیشن اسکیوینگنگ ایکٹیویٹی اور ریڈونگ پاور (ABTS) نے نتائج کو سخت متاثر کیا۔ عام طور پر، نتائج فینول کے کل مواد کے لیے مشاہدہ کیے گئے رجحان کی عکاسی کرتے ہیں: کہ بیئر تمام ابتدائی اجزاء سے پیدا ہونے والے فینول سے آہستہ آہستہ افزودہ ہوتے ہیں، اور یہ کہ خرچ شدہ مصنوعات اب بھی غیر نہ ہونے کے برابر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی رکھتی ہیں۔ یہ نوٹ کرنا دلچسپ ہے کہ فضلہ خمیر اکثر ابتدائی مواد کے مقابلے میں اعلی اقدار کو ظاہر کرتا ہے؛ یہ اندازہ لگایا جا سکتا ہے کہ خمیر شراب بنانے کے دوران بیئر سے فینول جذب کرنے کے قابل ہے۔ پراسیسنگ فوڈز سے حاصل ہونے والے فضلہ کے استحصال میں دلچسپی کو مدنظر رکھتے ہوئے، فضلہ الٹر بریوری کی مصنوعات کی حیاتیاتی سرگرمی کا اندازہ کیراٹینوسائٹس (مالٹ، ہاپ، اور خمیر کے خرچ شدہ مصنوعات) کے سیل کلچر پر کیا گیا ہے۔ keratinocyte HaCaT خلیات میں ابتدائی ان وٹرو اسیسز خرچ کیے گئے عرقوں کی ممکنہ بایو ایکٹیویٹی کا اندازہ لگانے کے لیے کیے گئے تھے۔ خرچ کیے گئے عرقوں میں سے، خرچ شدہ ہاپ اور خمیر کے عرق نے مائٹوکونڈریل سرگرمی کو بہتر بنانے اور HaCaT خلیوں میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو روکنے کی صلاحیت ظاہر کی، جلد کی عمر بڑھنے کی دو خصوصیات۔ آخر میں، یہ مطالعہ اس بات کا ثبوت پیش کرتا ہے کہ ہاتھ سے تیار کیے گئے بیئروں کا فضلہ جلد کی عمر بڑھانے والی کاسمیٹکس کی تیاری کے لیے فینول کا ایک دلچسپ ذریعہ ہو سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:کرافٹ بیئر؛ پینے کی مصنوعات؛ کل فینول مواد؛ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی؛ cytotoxicity؛ مخالف عمر رسیدہ

KSL11

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

کرافٹ بیئر امریکہ اور یورپ میں تیزی سے مقبول ہوا ہے [1، معیشت کے لیے اہم اثرات کے ساتھ [3]۔ اس کامیابی کو مختلف ذائقوں اور خوشبووں کے ساتھ نئے بیئر چکھنے میں صارفین کی دلچسپی [2] اور بیئر کے اعتدال پسند استعمال کے صحت کے فوائد پر توجہ [4] سے ہوا ہے۔

تجارتی بیئرز کے برعکس، کرافٹ بیئر غیر فلٹر شدہ اور غیر پیسٹورائزڈ ہوتے ہیں، اور اس طرح ان کی حسی خصوصیات پینے کے عمل سے غیر تبدیل شدہ رہتی ہیں۔ اس کے علاوہ، صحت کے لیے مفید مادے، جیسے اینٹی آکسیڈنٹس، کو بھی بچایا جا سکتا ہے۔

کمرشل بیئرز اور ان کی فضلہ مصنوعات کا پہلے ہی ان کی اینٹی آکسیڈنٹ خصوصیات کے لیے جائزہ لیا جا چکا ہے۔ زاؤ وغیرہ۔[5] نے 34 کمرشل بیئرز کے فینول پروفائلز اور متعلقہ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کا تعین کیا، اور مجموعی اور انفرادی فینولک مواد اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں نمایاں فرق پایا۔cistanche tubulosa فوائد اور ضمنی اثراتسب سے زیادہ پرچر فینولک مرکبات گیلک اور فیرولک ایسڈ تھے۔ اسی عرصے میں، Ribeiro Tafulo et al. [6] نے متعدد سپیکٹرو فوٹومیٹرک طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے 27 دیگر تجارتی بیئروں کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا تعین کیا۔ اسی سال، پیازون وغیرہ نے 2010[7 گھریلو بیئر پر ایک مطالعہ میں، Farcas et al. خام مال (مالٹ اور ہاپ) سے شروع ہونے والے اور برآمد شدہ فضلہ کے ساتھ ختم ہونے والے پورے پیداواری عمل کے دوران پولی فینول کے مواد اور اینٹی آکسیڈینٹ کی مجموعی سرگرمی کا تعین کیا۔ انہوں نے ظاہر کیا کہ خام مال میں ابتدائی زیادہ کل پولی فینول مواد اور اینٹی آکسیڈنٹ سرگرمی مالٹ کی موجودگی کی وجہ سے تھی اور یہ کہ بیئر میں گزرتے وقت پولی فینول کے کل مواد میں زبردست کمی واقع ہوئی اور بیئر کی حتمی مصنوعات میں مالٹ اور خرچ شدہ مالٹ میں خرچ ہوا۔ خمیر کا تجزیہ نہیں کیا گیا۔

KSL12

Cistanche مخالف عمر رسیدہ کر سکتے ہیں

مالٹ سے حاصل ہونے والے اینٹی آکسیڈینٹ مرکبات کو زاؤ اور ساتھی کارکنوں نے ثابت کیا، جنہوں نے مالٹنگ جو کی کئی اقسام میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی اور کل فینول مواد کو دکھایا۔ دیگر مصنفین نے چار قسم کے کمرشل بیئر سے سینتالیس فینول مرکبات کی نشاندہی کی، مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے ایک الیکٹرو اسپرے آئنائزیشن ہائبرڈ لکیری آئن ٹریپ کواڈروپول آربیٹریپ ماس اسپیکٹرومیٹری تکنیک [10]۔ حال ہی میں، کرافٹ بیئرز میں کم مالیکیولر-وزن فینولک اور نائٹروجن مرکبات کی شناخت HPLC-ESI-MS/MS تجزیہ [11] کے ذریعے حاصل کی گئی۔ مصنفین نے فینولک اور نائٹروجن مرکبات کے مطابق بیئر کی اقسام، جیسے IPA، Lager، اور Weiss میں فرق کرنے کی کوشش کی، لیکن بیئر کی مختلف اقسام کے درمیان ان مرکبات میں کوئی خاص فرق نہیں پایا۔

ابھی حال ہی میں [12]، 20 فینولک مرکبات، مثال کے طور پر، گیلک ایسڈ، کیٹیچن، کیفیک ایسڈ، quercetin، xanthohumol، اور humulone، کو مختلف کرافٹ بیئرز، ورٹس، پینے کے شروع کرنے والے اجزاء (جو مالٹ، ہاپ، اور خمیر) میں منتخب کیا گیا اور ان کی مقدار درست کی گئی۔ )اور ضمنی مصنوعات (جو کی بھوسی، خرچ شدہ ہاپ، اور خرچ شدہ خمیر)۔cistanche tubulosa اقتباساس تحقیق سے یہ معلوم ہوا کہ تمام نمونوں میں اہم فرق موجود ہے اور یہ کہ بیئر کی ساخت کا انحصار رسید اور پینے کے عمل پر ہے۔ بیئر کے فینولک مرکبات بنیادی طور پر جو کے مالٹ سے نکلتے ہیں، اور دلچسپ بات یہ ہے کہ خمیر دیگر ذرائع سے فینولک مرکبات کو جذب کرنے کے قابل تھا۔

اس طرح، اگر کوئی دنیا بھر میں کرافٹ بیئر مارکیٹ کی تیز رفتار نمو پر غور کرے تو بیئر کی پیداوار سے ضائع ہونے والی مصنوعات میں اینٹی آکسیڈینٹس کی تشخیص بہت اہمیت کی حامل ہو سکتی ہے۔

صحت کی مصنوعات جیسے کاسمیٹکس اور/یا سپلیمنٹس تیار کرنے کے لیے بریوری کی ضمنی مصنوعات کا استحصال بیئر کی پیداوار کی پائیداری کو بڑھانے میں مدد کرے گا۔ اس مطالعے کے متعدد مقاصد ہیں: مختلف قسم کے اطالوی کرافٹ بیئرز (لیگر، امبر، ٹرپل مالٹ، سرخ اور سیاہ) کی کل فینول مواد اور اینٹی آکسیڈنٹ سرگرمی کا جائزہ لیں، اور ان کی پیداوار کے درمیانی حصے کے ساتھ ساتھ ان کی فضلہ مصنوعات کا بھی جائزہ لیں۔ اس طرح آلٹر بریوری سے فضلہ کے اخراج کی حیاتیاتی سرگرمی کا انسانی کیراٹینوسائٹس پر جائزہ لیا گیا۔ اس سے کاسمیٹک فارمولیشنز کے لیے بریوری کے ضمنی پروڈکٹس سے نئے اجزاء سے فائدہ اٹھانے کے نئے اور دلچسپ مواقع کھلتے ہیں۔

2. تجرباتی

2.1۔مواد

1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH),2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ), (±){{9 }ہائیڈروکسی-2,5,7،8-ٹیٹرامیتھائل کرومین-2-کاربو آکسیلک ایسڈ(TROLOX)،2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline{{20} } سلفونک ایسڈ) ڈائمونیم نمک (98 فیصد TLC) (ABTS)، گیلک ایسڈ، سوڈیم کاربونیٹ مونوہائیڈریٹ ACS ریجنٹ، سوڈیم ایسیٹیٹ اور ایتھنول (ایتھنول مطلق گریڈ) سگما-الڈرچ (سٹین ہائیم، جرمنی) سے خریدے گئے تھے۔ مینگنیج (IV) آکسائڈائز ایکٹیویٹڈ (90 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) اور فولن-سیوکالٹیو کا فینول ریجنٹ فلوکا (بچس، سوئٹزرلینڈ) سے خریدا گیا تھا۔ اینہائیڈروس سوڈیم ایسیٹیٹ اور اینہائیڈروس آئرن (III) کلورائڈ JTBaker (سینٹر ویلی، PA، USA) سے خریدا گیا تھا اور اینہائیڈروس سوڈیم کاربونیٹ کارلو ایربا (میلان، اٹلی) سے خریدا گیا تھا۔ تمام سالوینٹس اور ری ایجنٹس تجزیاتی گریڈ کے تھے۔ الٹرا پیور پانی گریڈینٹ ملی-کیو (ملی پور، مولشیم، فرانس) نے تیار کیا تھا۔ سٹارٹنگ میٹریل، ہینڈ کرافٹ بیئرز، ورٹس، اور ان کے فضلہ کی مصنوعات برریفیسیو کولیسی (اپیکچیو، اٹلی) کے ذریعے فراہم کی گئیں۔

موجودہ مطالعے میں جن بیئر کی چھان بین کی گئی ہے ان کی تفصیلی خصوصیات جدول 1 میں فراہم کی گئی ہیں۔ شروع ہونے والے مالٹ اور ہاپس کی قسم نے تمام بیئروں میں بنیادی فرق کا تعین کیا۔ پانچ مختلف سٹارٹنگ مالٹس استعمال کیے جا سکتے ہیں، اکثر مکس اور مختلف تناسب میں۔ پرلے اور ساز ہاپس کو ان کی مختلف خوشبوؤں کے لیے مختلف تناسب میں استعمال کیا جاتا ہے۔ ایک ہی خمیر، Saccharomyces Cerevisiae، تمام بیئروں کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، جو کہ تمام اعلی خمیر کی قسمیں تھیں۔ مختلف امتزاج سے مختلف قسم کے بیئر (لیگر، امبر، ٹرپل مالٹ، سرخ اور سیاہ) حاصل ہوتے ہیں جن میں الکحل کی مقدار 6۔{3}} سے 9 تک ہوتی ہے۔{5}} فیصد V/V۔

2.2. نمونہ کی تیاری

تجزیوں سے پہلے، ابتدائی مواد (مالٹ، ہاپس، اور خمیر)، بیئر، ورٹس، اور فضلہ (خرچ مالٹ، ہاپ، اور خمیر) کو ان کی جسمانی حالت کے مطابق مختلف عملوں کا نشانہ بنایا جاتا تھا، جنہیں ٹھوس، مرطوب خشک کیا جا سکتا تھا۔ ٹھوس، یا ٹربائڈ مائع (ٹیبل 2)۔

مرطوب ٹھوس اور مائعات کو سب سے پہلے {{0}} ڈگری کے درجہ حرارت اور 0.03 بار کے دباؤ پر لائو فلائزیشن کا نشانہ بنایا گیا (فری زون 1 لیٹر بینچ ٹاپ سیریز 77,400 فریز ڈرائر، LABCONCO، Kansans City, MO, USA)۔ خشک ٹھوس کو کٹر ملر میں گھسائی کرنے کا نشانہ بنایا گیا۔ اس کے بعد، تمام نمونوں کو نکالنے کا نشانہ بنایا گیا تھا. نمونے کی مقدار کو احتیاط سے تولا گیا اور اسے 100 ملی لیٹر سالوینٹس (پانی یا 70 ڈگری ایتھنول) میں تقسیم کیا گیا۔ نتیجے میں مائع کو Erlenmeyer فلاسک میں رکھا گیا تھا، جسے پھر احتیاط سے بند کر دیا گیا تھا۔ نمونوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 24 گھنٹے کے لیے مقناطیسی طور پر ہلایا گیا، پھر 12،000 rpm پر 20 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے غیر حل شدہ ذرات (Zetalab CNZ-140HE، Padova، Italy) پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سٹوریج کے بہترین حالات کو یقینی بنانے کے لیے نمونوں کو سکرو کیپ (BD Falcon TM, BD Biosciences, Bedford, MA, USA) کے ساتھ 50 ملی لیٹر پولی تھیلین کی شیشیوں میں-20 ڈگری پر لائفائلائز کیا گیا اور اسٹور کیا گیا۔

2.3۔ کل فینول مواد کا تعین

نمونوں کے کل فینول مواد (TPC) کا تعین Folin-Ciocalteu spectrophotometric طریقہ [13] کے مطابق کچھ ترمیم کے ساتھ کیا گیا تھا [14]۔ مختصراً، تمام منجمد خشک مصنوعات 10 mg mL-1 کے ارتکاز میں لمبے حل تیار کرنے کے لیے استعمال کی گئیں۔ اس محلول کا 50 μL ایلی کوٹ 150 μL Folin-Ciocalteu کے فینول ری ایجنٹ میں شامل کیا گیا، 1∶4 کو پانی سے ملایا گیا۔ پھر، Na2CO3 سیر شدہ محلول کا 50 μL شامل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، مائکروپلیٹ ریڈر (FLUOstar Omega، BMG Labtech GmbH، Ortenberg، Germany) کا استعمال کرتے ہوئے ہر کنویں کی جاذبیت 765 nm پر طے کی گئی۔ پیمائش کا موازنہ گیلک ایسڈ (GA) کے انشانکن معیاری حل سے کیا گیا تھا، اور نتائج کو ملی گرام گیلک ایسڈ کے مساوی (GAE) فی گرام ضمنی پروڈکٹ (mg GAE/g) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

2.4 اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا اندازہ

کرافٹ بیئر اور ضمنی مصنوعات کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا اندازہ 11-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی،2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline) کی پیمائش کے ذریعے کیا گیا تھا۔ سلفونک ایسڈ Trolox(6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid) کو انشانکن معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ اقدار کو IC50 کے فنکشن کے طور پر نمونے کے mmol Trolox مساوی/g کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا، جس کی تعریف ابتدائی DPPH، ABTS، یا آئرن کے ارتکاز میں 50 فیصد کمی کا سبب بننے کے لیے ضروری جانچ شدہ مواد کے ارتکاز کے طور پر کی گئی تھی۔

2.5 ٹرالوکس مساوی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (DPPH) کا اندازہ

ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کا اندازہ مائکروپلیٹ تجزیاتی پرکھ کے ذریعے پہلے شائع شدہ طریقوں [15] کے مطابق کچھ ترمیم کے ساتھ کیا گیا تھا [16]۔ مختصراً، نمونے کا 50 ul aliquot (10 mg mL- کا ارتکاز) اور معیار کو 150 μL DPPH میں مطلق ایتھنول میں 96-کنویں مائکرو ٹائٹر پلیٹ （BD FalconM）37 ڈگری پر انکیوبیشن کے بعد شامل کیا گیا۔ C 20 منٹ کے لئے، مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ہر کنویں کی جاذبیت کا تعین 517 nm پر کیا گیا تھا۔ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا حساب لگایا گیا تھا اور مساوات (1) [17] کے مطابق Trolox کی مقدار کے مقابلے میں ظاہر کیا گیا تھا جہاں Ao اور A بالترتیب کنٹرول نمونے اور نچوڑ کے نمونوں کی موجودگی میں 517 nm پر DPPHe ریڈیکل حل کے جذب ہیں۔

KSL13

2.6۔ریڈیکل کیٹیشن اسکیوینگنگ ایکٹیویٹی اور کم کرنے والی طاقت (ABTS)

ABTS پرکھ پچھلے طریقہ کار کے بعد انجام دیا گیا تھا [18] اور ایک 96-کنویں مائکرو لیٹر پلیٹ پرکھ پر لاگو کیا گیا تھا۔ ABTS9 پلس محلول (5 mM) ABTS کو MnO کے ساتھ آکسائڈائز کر کے تیار کیا گیا تھا، اندھیرے میں 30 منٹ تک پانی میں۔ نمونہ اور معیاری کے مختلف ارتکاز کا 50 μL ایلی کوٹ （Trolox） کو ABTS* محلول کے 150 μL میں شامل کیا گیا تھا۔ ایک 96- ویل مائکرو ٹائٹر پلیٹ (BD Falcone)۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ہر کنویں کی جاذبیت 734 nm پر طے کی گئی۔ مساوات (2)[17] کے مطابق قدروں کا حساب لگایا گیا اور ان کا اظہار بمقابلہ Trolox رقم کے مطابق کیا گیا جہاں A اور A بالترتیب کنٹرول نمونے اور نچوڑ کے نمونوں کی موجودگی میں 734 nm پر OHe ریڈیکل محلول کی جاذبیت ہیں۔

2.7۔ Ferric-Long-Reducing Antioxidant Parameter (FRAP)

کرافٹ بیئر/بائی پروڈکٹس کی FRAP قدروں کا تعین پہلے شائع شدہ طریقہ [19] کے مطابق کیا گیا تھا، کچھ ترامیم کے ساتھ [20]۔ FRAP ریجنٹ مندرجہ ذیل تین حلوں کو ملا کر تیار کیا گیا تھا۔

1.50 mL0.3M ایسیٹیٹ بفر pH3.6(1.23 گرام سوڈیم ایسیٹیٹ 50mL پانی میں تیزابیت

acetic ایسڈ کے ساتھ؛

2. 5 ایم ایم ٹی پی ٹی زیڈ(24،6-ٹرائپائریڈیل-ایس-ٹرائزین)(15.6mg)40mM HCl میں؛ 40 mM HCl میں 5 mM FeCl3·6 H2O (16.2 mg) کا 3.5 mL

FRAP ری ایجنٹ کو استعمال سے پہلے 37 ڈگری پر گرم کیا گیا تھا۔ 25 μL نمونے کے علی کوٹس (10 mg mL-l کے ارتکاز میں حل) کو ایک 96-کنویں پلیٹ (BD Falcon) کے کنوؤں میں سہ رخی میں شامل کیا گیا تھا۔ پرکھ کا آغاز ہر کنویں میں 175uL FRAP ریجنٹ شامل کرکے کیا گیا تھا۔ پلیٹ کو فوری طور پر FLUOstar Omega پلیٹ ریڈر میں 30s کے لیے ہلایا گیا اور رد عمل کو 10 منٹ تک چلنے دیا گیا جس کے بعد پلیٹ کو پلیٹ ریڈر (593 nm) پر پڑھا گیا۔ ٹرولوکس کا ایک حوالہ حل بیک وقت چلایا گیا تھا اور لکیری ریگریشن کے ذریعہ انشانکن وکر پیدا کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔cistanche tubulosa کے جائزےمعیاری وکر 25 اور 800 uM Trolox (TE) کے درمیان لکیری تھا۔ نتائج کا اظہار um Trolox مساوی (TE) gI نمونے میں کیا گیا۔

KSL14

2.8۔ سیل کلچر ایس

انسانی keratinocyte سیل لائن، HaCaT، معمول کے مطابق Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagles Medium (DMEM) میں اگائی جاتی تھی، جس میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم (FBS)، 2 mM L-glutamine، 50 U/mL پنسلین، اور 50 ug/mL ڈگری میں strepcin/m3 ڈگری 5 فیصد CO2 کے ساتھ ایک مرطوب انکیوبیٹر۔ سائٹوٹوکسیٹی، مائٹوکونڈریل سرگرمی، اور انٹرا سیلولر آر او ایس کی تشکیل کا اندازہ کرنے کے لیے، HaCaT خلیات کو 2×10* سیلز/کنویں پر 96-کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ تمام تجربات 24 گھنٹے انکیوبیشن کے بعد 5 فیصد CO2 میں 37 ڈگری پر کیے گئے۔ HaCaT خلیات کے ساتھ تجربات کے لیے، خرچ کیے گئے عرقوں کے اسٹاک سلوشنز کو پانی میں 60 mg/mL پر تیار کیا گیا تھا۔ اس کے بعد سٹاک سلوشنز کو ایک مکمل میڈیم میں پتلا کر دیا گیا تاکہ خرچ شدہ عرقوں کی مطلوبہ مقدار حاصل کی جا سکے۔

2.9 سائٹوٹوکسیٹی اور مائٹوکونڈریل سرگرمی

سیل کی قابل عملیت کا اندازہ {{{{10}}}}(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl کی کمی سے کیا گیا تھا۔ -2H-tetrazolium bromide(MTT) اس کے ناقابل حل فارمازان کے لیے، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [21]۔ مختصراً، HaCaT خلیات کا 24 گھنٹے تک نچوڑ کے مختلف ارتکاز (0003-3 mg/mL) کے ساتھ 37 ڈگری میں 5 فیصد CO2 پر علاج کیا گیا۔ (0.5mg/mL) 2 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری میں 5 فیصد CO2 پر۔ HBSS کے ساتھ دھونے کے بعد، فارمازان کرسٹل isopropanol میں تحلیل ہو گئے تھے۔ ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTORTM X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے فارمازان کی سطح (570 nm، ریفرنس فلٹر 690 nm) کی پیمائش کی گئی۔ سیل کی عملداری کو کنٹرول خلیوں کی فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

Mitochondrial سرگرمی کا تعین MTT کے ذریعے کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا، معمولی تبدیلیوں کے ساتھ۔ غذائی اجزاء کے بغیر نمکین محلول) 5 فیصد CO میں 37 ڈگری پر 0.03 mg/mL ایکسٹریکٹ کی موجودگی میں۔cistanche UKاس کے بعد، علاج کو MTT سے 2 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری میں 5 فیصد CO2 پر تبدیل کیا گیا۔ HBSS کے ساتھ دھونے کے بعد، فارمازان کرسٹل isopropanol میں تحلیل ہو گئے تھے۔ فارمازان کی سطحیں جو مائٹوکونڈریل سرگرمی سے منسلک ہیں (570 nm، حوالہ فلٹر 690 nm) ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTORTM X3 (PerkinElmer) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ مائٹوکونڈریل سرگرمی کو کنٹرول خلیوں کی فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

2.10.انٹرا سیلولر ROS کی تشکیل

رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی تشکیل کا اندازہ فلوروسینٹ پروب 2'-7'dichlorodihydrofluorescein diacetate (H, DCF-DA) کے ذریعے کیا گیا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [23](HaCaT خلیات کا علاج 2 گھنٹے کے لیے 0 کے ساتھ کیا گیا تھا۔ . کمرے کے درجہ حرارت پر، H2CF-DA محلول کو 30 منٹ کے لیے H-O2（100 μM） کے محلول سے تبدیل کیا گیا۔ HaCaT خلیات کے ایک متوازی سیٹ کو H2Oz اور 0.03 mg/mL ایکسٹریکٹ کے ساتھ 30 منٹ تک علاج کیا گیا۔ ROS کی تشکیل یہ تھی ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTORTM X3 (PerkinElmer) کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس، AUF (485 nm پر اتیجیت اور 535 nm پر اخراج) کی صوابدیدی اکائیوں کے لحاظ سے ماپا جاتا ہے۔ ڈیٹا کو غیر علاج شدہ خلیات (یعنی، AUF) کے مقابلے ROS کی تشکیل میں ایک گنا اضافے کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ غیر علاج شدہ خلیوں کے Hoz/AUF کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں کا) 2.11. شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کو کم از کم تین آزاد تجربوں کے اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ شماریاتی تجزیہ ڈنیٹ یا بونفرونی پوسٹ ہاک ٹیسٹ اور طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ساتھ ایک طرفہ ANOVA کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، جیسا کہ مناسب ہے۔ p میں اختلافات کو اہم سمجھا جاتا تھا۔<0.05. analyses="" were="" performed="" using="" graphpad="" prism="" software="" (version="" 5.0;="" graphpad="" software,="" la="" jolla,="" ca,="" usa)="" on="" a="" windows="">

ٹھیک ہے کمرے کے درجہ حرارت پر انکیوبیشن کے 30 منٹ کے بعد، H2CF-DA محلول کو 30 منٹ کے لیے H-O2（100 μM） کے محلول سے بدل دیا گیا۔ HaCaT خلیوں کے ایک متوازی سیٹ کا علاج H2Oz اور 0.03 mg/mL ایکسٹریکٹ کے ساتھ 30 منٹ تک کیا گیا۔ ملٹی لیبل پلیٹ ریڈر VICTORTM X3 (PerkinElmer) کا استعمال کرتے ہوئے ROS کی تشکیل کو فلوروسینس، AUF (485 nm پر اتیجیت اور 535 nm پر اخراج) کی صوابدیدی اکائیوں کے لحاظ سے ماپا گیا۔ اعداد و شمار کا اظہار ROS کی تشکیل بمقابلہ علاج نہ کیے جانے والے خلیات میں ایک گنا اضافے کے طور پر کیا جاتا ہے (یعنی، علاج نہ کیے جانے والے خلیوں کے Hoz/AUF کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں کا AUF)۔

2.11 شماریاتی تجزیہ

یہ مضمون کاسمیٹکس 2021، 8، 96 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/cosmetics8040096 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics

کرکومین بطور ممکنہ اینٹی ایجنگ قدرتی مرکب: دماغ پر توجہ مرکوز کریں۔