NGF کولیسٹرول میٹابولزم کو ماڈیول کرتا ہے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف نیورو پروٹیکشن دینے والے گلیل سیلز میں ApoE کے اخراج کو متحرک کرتا ہے حصہ 2
Aug 31, 2023
2.6۔ U373 کے ذریعے ApoE کا NGF-ثالثی اخراج اعصابی خلیوں کو آکسیڈیٹیو انسلٹ سے بچاتا ہے۔
جمع ہونے والے شواہد اس بات پر روشنی ڈالتے ہیں کہ ApoE آکسیڈیٹیو توہین کے لئے نیورونل لچک کو بڑھاتا ہے، اس طرح اپوپٹوسس اور نیوروڈیجنریشن کو روکتا ہے [17,18,37]۔ اس تناظر میں، ہم نے جائزہ لیا کہ آیا U373 خلیات کے ذریعے NGF کی حوصلہ افزائی ApoE سراو N1E-115 نیوران کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچا سکتا ہے۔ مکمل طور پر مختلف N1E-115 کا روٹینون کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا تھا، جو مائٹوکونڈریل کمپلیکس I کو روک کر آکسیڈیٹیو تناؤ پیدا کرتا ہے۔
اپوپٹوسس خود کو تباہ کرنے کا ایک عمل ہے، اور یہ خلیوں کے لیے مخصوص حالات میں پروگرام شدہ خود تباہی کے ذریعے جسم کے ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے کا ایک اہم طریقہ ہے۔ اپوپٹوسس زندگی کے مختلف مراحل میں مختلف کردار ادا کرتا ہے۔
حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ apoptosis اور میموری کے درمیان ایک خاص تعلق ہے۔ ہم پہلے ہی جانتے ہیں کہ میموری دماغ میں ایک پیچیدہ اعصابی عمل ہے، جس میں دماغ کے متعدد خطوں کے درمیان روابط اور ہم آہنگی شامل ہے۔ اپوپٹوسس اس اعصابی عمل میں کردار ادا کر سکتا ہے۔
ایک طرف، apoptosis غیر ضروری نیوران اور Synapses کو صاف کرکے نیوران کے نیٹ ورک ڈھانچے کو مستحکم کر سکتا ہے، نیوران کے کنکشن کو مزید بہتر بناتا ہے، اس طرح میموری کے معیار اور کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔ دوسری طرف، ضرورت سے زیادہ اپوپٹوسس دماغی خلیات کی تعداد میں کمی کا باعث بھی بن سکتا ہے، جو یادوں کے ذخیرہ اور گرفت پر منفی اثر ڈال سکتا ہے۔
لہذا، apoptosis کی مناسب سطح کو برقرار رکھتے ہوئے، ہم کئی طرز عمل اور مہارتوں کے ذریعے یادداشت کو بہتر بنا سکتے ہیں، جیسے پڑھنا، سیکھنا، ورزش کرنا، اور اپنی ذہنیت کو ایڈجسٹ کرنا۔ یہ طرز عمل اور ہنر دماغی خلیات کی نشوونما اور تعلق کو فروغ دے سکتے ہیں اور دماغی نیوران کے درمیان رابطوں اور ہم آہنگی کو متحرک کرکے میموری کے معیار اور کارکردگی کو بہتر بنا سکتے ہیں۔
آخر میں، apoptosis اور میموری کے درمیان تعلق پیچیدہ ہے. صرف مناسب apoptosis کو برقرار رکھتے ہوئے ہم اپنے دماغ کو متحرک کر سکتے ہیں اور مختلف طرز عمل اور مہارتوں کے ذریعے اپنی یادداشت کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ اس نقطہ نظر سے ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche deserticola ہماری یادداشت کو بہتر بنانے میں نمایاں طور پر ہماری مدد کر سکتا ہے، کیونکہ Cistanche deserticola نیورو ٹرانسمیٹر کے توازن کو بھی کنٹرول کر سکتا ہے، جیسے کہ acetylcholine کی سطح میں اضافہ اور ترقی کے عوامل۔ یہ مادے یادداشت کے لیے اہم ہیں۔ سیکھنے اور سیکھنے کے لیے یہ بہت ضروری ہے۔ اس کے علاوہ، گوشت کا گوشت خون کی روانی کو بھی بہتر بنا سکتا ہے اور آکسیجن کی نقل و حمل کو فروغ دیتا ہے، جو اس بات کو یقینی بنا سکتا ہے کہ دماغ کو کافی غذائی اجزاء اور توانائی ملے، اس طرح دماغی قوت اور برداشت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔
یادداشت کو بہتر بنانے کے لیے سپلیمنٹس جانیں پر کلک کریں۔
روٹینون کی نمائش کے 16 گھنٹے کے بعد، N1E-115 نیورونز کو تازہ میڈیم (Ctrl) میں کلچر کیا گیا، U373 سیلز سے کنڈیشنڈ میڈیم (U373-Ctrl)، U373 سے کنڈیشنڈ میڈیم NGF کے ساتھ 48 گھنٹے تک پہلے سے علاج کیا گیا۔ (U373-NGF)، یا ApoE-Silenced U373 سے کنڈیشنڈ میڈیم NGF کے ساتھ 48 گھنٹے (U373-NGF ApoE siRNA) کے لیے پری ٹریٹڈ۔ روٹینون پری ٹریٹمنٹ نے کنٹرول میڈیم میں کلچرڈ N1E-115 کی تعداد کو سختی سے کم کیا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ اس کیڑے مار دوا کا استعمال N1E-115 کی بقا کو شدید متاثر کرتا ہے۔
Rotenone cytotoxicity نے بھی شدید نیورائٹ کی واپسی کا تعین کیا، جیسا کہ نیورائٹس کی لمبائی سے مشاہدہ کیا جاتا ہے۔ روٹینون کے علاج سے نیورائٹ کو پہنچنے والا نقصان خاص طور پر نیورائٹ بیئرنگ سیلز کی تشخیص پر واضح ہوا، کیونکہ نیورائٹس کے ساتھ N1E-115 کی تعداد 50% تک کم ہو گئی۔ اسی طرح کے نتائج اس وقت حاصل ہوئے جب N1E-115 خلیات کو U373-Ctrl کنڈیشنڈ میڈیم میں کلچر کیا گیا، جس سے یہ معلوم ہوتا ہے کہ غیر محرک ایسٹرو سائیٹس سے ماخوذ سپرناٹینٹ کی موجودگی نیورونل سیلز کو روٹینون میڈیٹڈ زہریلا سے بچانے کے لیے کافی نہیں ہے۔ متضاد ary پر، NGF سے علاج شدہ U373 سے اخذ کردہ کنڈیشنڈ میڈیم کے استعمال نے مؤثر طریقے سے نیورونل موت کو روکا، نیز روٹینون انتظامیہ کی وجہ سے نیورائٹ بیئرنگ سیلز اور نیورائٹ کی لمبائی میں کمی (شکل 5)۔
زیادہ اہم بات یہ ہے کہ y، ApoE-Silenced U373 سیلز سے اخذ کردہ کنڈیشنڈ میڈیم مکمل طور پر U373-NGF کنڈیشنڈ میڈیم کے ذریعے حاصل ہونے والے فائدہ مند اثرات کو کھو دیتا ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ نیورو پروٹیکشن کلچر میڈیم میں NGF کی ثالثی ApoE ریلیز کے ذریعے چلایا جاتا ہے۔ خاص طور پر، NGF سے علاج شدہ U373 کے کنڈیشنڈ میڈیم نے سکیمبلڈ siRNA کے ساتھ منتقلی U373-NGF کنڈیشنڈ میڈیم کے ذریعہ کئے گئے حفاظتی اثرات کو مکمل طور پر برقرار رکھا، یہ ظاہر کرتا ہے کہ ApoE-سائلنسڈ سیلز سے کنڈیشنڈ میڈیم میں مشاہدہ کیا گیا نیورو پروٹیکشن کا نقصان مؤثر طریقے سے ApoE پر منحصر ہے۔ ڈاؤن ریگولیشن (شکل S3C)۔
تصویر 5. نیوران میں آکسیڈیٹیو تناؤ پر U373 کنڈیشنڈ میڈیم کے اثرات۔ روشن میدان میں نمائندہ تصاویر اور N1E-115 کے نیورونل مورفولوجی کا مقداری جائزہ۔ خلیات کا پہلے علاج (+) یا نہیں (−) روٹینون (0.1 µM) کے ساتھ 16 گھنٹے تک کیا گیا تھا، اور پھر تازہ DMEM (Ctrl) میں، کنٹرول U373 (U{{) سے اخذ کردہ کنڈیشنڈ میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا۔ 9}Ctrl)، NGF-پری ٹریٹڈ U373 (U373-NGF)، اور NGF-پری ٹریٹڈ U373 کو apoE (U373-NGF ApoE siRNA) کے لیے 48 گھنٹے کے لیے خاموش کر دیا گیا۔ n=5 مختلف تجربات۔ ڈیٹا کی نمائندگی کا مطلب ± SD ہے۔ شماریاتی تجزیہ کا اندازہ یک طرفہ انووا کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اس کے بعد ٹوکی کا پوسٹ ہاک ٹیسٹ۔ ** p < 0۔{23}}1، *** p < 0.001۔
کنڈیشنڈ میڈیم سے حاصل کردہ نتائج کو مضبوط کرنے کے لیے، ہم نے U373/N1E115 کو-کلچرز کا مظاہرہ کیا۔ شروع کرنے کے لئے، U373 خلیوں کا پہلے سے علاج کیا گیا تھا یا NGF کے ساتھ 48 گھنٹے تک نہیں کیا گیا تھا۔ مزید برآں، تفریق شدہ N1E-115 خلیوں کا پہلے سے علاج کیا گیا تھا یا روٹینون کے ساتھ 16 گھنٹے تک نہیں کیا گیا تھا۔ بعد ازاں، U373 میڈیم کو تازہ میڈیم سے تبدیل کر دیا گیا جس میں 0.5% FBS شامل تھا، اور N1E-115 کے ساتھ سیڈ شدہ کور سلپس کو U373 پرت پر منتقل کر دیا گیا تاکہ کو کلچر تیار کیا جا سکے (شکل 6A)۔
روٹینون ٹریٹمنٹ سے ہونے والے آکسیڈیٹیو نقصان نے کافی حد تک سیل ویابلینورائٹ بیئرنگ سیلز کو متاثر کیا اور N1E-115 اور N1E-115 کے کنٹرول کی نیورائٹ لمبائی U373-Ctrl ایسٹروسائٹس (شکل 6B) کے ساتھ مل کر۔ کنڈیشنڈ میڈیم تجربات سے ہم آہنگ، N1E-115 سیلز کو U373-NGF سیلز کے ساتھ مل کر آکسیڈیٹیو نقصان سے محفوظ رکھا گیا تھا، جبکہ U373 میں ApoE خاموشی نے NGF کے ذریعے برقرار نیورو پروٹیکشن کو ختم کر دیا تھا۔
شکل 6۔ NGF سے علاج شدہ U373 خلیوں کے ذریعہ ApoE سراو آکسیڈیٹیو تناؤ سے نیورو پروٹیکشن فراہم کرتا ہے۔ (A) ایسٹروسائٹ – نیورون کو-کلچرز کی نمائندہ اسکیم جیسا کہ مواد اور طریقوں کے سیکشن میں بیان کیا گیا ہے۔ شریک ثقافت کے قیام کے چند گھنٹوں بعد نیورائٹ بیئرنگ سیلز، نیورائٹ کی لمبائی اور سیل نمبر کا اندازہ لگایا گیا۔ (B) روشن میدان میں نمائندہ تصاویر اور N1E-115 خلیات کے نیورونل مورفولوجی کا مقداری جائزہ، جو پہلے روٹینون (0.1 µM) کے ساتھ 16 گھنٹے تک علاج کیا گیا تھا (+) یا نہیں (−)۔
N1E-115 کو پھر تازہ DMEM (Ctrl) میں رکھا گیا، یا کنٹرول U373 (U373-Ctrl)، NGF سے پہلے سے علاج شدہ U373 (U373-NGF)، اور NGF سے پہلے سے علاج شدہ U373 کو ApoE (U373-NGF ApoE siRNA) کے لیے 48 گھنٹے کے لیے خاموش کر دیا گیا۔ n=5 مختلف تجربات۔ ڈیٹا کی نمائندگی کا مطلب ± SD ہے۔ شماریاتی تجزیہ یک طرفہ انووا کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اس کے بعد ٹوکی کا پوسٹ ہاک ٹیسٹ۔ * p < 0۔{18}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.001۔
3. بحث
نیوروٹروفین سگنلنگ پاتھ ویز میں عدم توازن، نیز دماغی کولیسٹرول میٹابولزم میں تبدیلی، نیورولوجک اور نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں سے مضبوطی سے وابستہ ہیں، جیسے ریٹ سنڈروم، ایچ ڈی، الزائمر بیماری (AD)، اور پارکنسنز کی بیماری (PD) [2,38,39] . اس تناظر میں، نیوروٹروفنز کی حیاتیاتی سرگرمی پر بنیادی تحقیق کولیسٹرول میٹابولزم اور دماغی فزیو پیتھولوجی کو جوڑنے والے مالیکیولر میکانزم کو جدا کرنے کے لیے اہم ہے۔ گزشتہ چند سالوں کے دوران، ایک دلچسپ مطالعہ نے آسٹروائٹس [38] میں کولیسٹرول میٹابولزم کے ضابطے میں BDNF کے کردار کی اطلاع دی۔
اس تصور کے باوجود، ایسٹروسائٹک کولیسٹرول کے ضابطے میں NGF کی ممکنہ شمولیت کے بارے میں کوئی معلومات دستیاب نہیں ہیں۔ لہذا، اس کام میں، ہم نے کولیسٹرول میٹابولزم کے ضابطے میں NGF کے ممکنہ کردار پر توجہ مرکوز کی، خاص طور پر نیورونل تفریق اور بقا پر ApoE سراو کے اثر و رسوخ کے حوالے سے۔ U373، Astrocytoma سیل لائن جو انسانی astrocytes کے تجرباتی ماڈل کے طور پر استعمال ہوتی ہے، NGF کو مکمل طور پر جواب دینے کی صلاحیت کو برقرار رکھتی ہے، کیونکہ یہ TrkA اور p75NTR دونوں کی قابل تعریف سطحوں کا اظہار کرتی ہے۔
اہم نتائج نے اشارہ کیا کہ NGF کولیسٹرول بائیو سنتھیسس (HMGCR)، انٹرا سیلولر اسمگلنگ (NPC1)، اور سراو (ABCA1) میں شامل اہم پروٹینوں کی سطح کو اپ گریڈ کرتا ہے۔ ان واقعات کے ساتھ کلچر میڈیم میں ApoE اور کولیسٹرول لین کے ایک ساتھ اضافہ ہوتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ NGF کولیسٹرول بائیو سنتھیسز اور گلیل سیلز سے اخراج کو بڑھاتا ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ NGF اپنی نقل کو بڑھا کر ApoE پروٹین اظہار کی حوصلہ افزائی کرتا ہے [40]۔ تاہم، ہم نے انٹرا سیلولر ApoE اظہار میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دیکھی۔ اس واضح تضاد کی وضاحت کی جا سکتی ہے کیونکہ ApoE کی تعمیر کی تعریف نہیں کی جا سکتی کیونکہ NGF سے علاج شدہ UI سے اس کے بڑھتے ہوئے بہاؤ کی وجہ سے
مالیکیولر میکانزم کو بہتر طریقے سے الگ کرنے کی کوشش میں، ہم نے LM11A-31 کے ساتھ U373 کا علاج کیا اور پایا کہ p75NTR ماڈیولیٹر صرف NGF کے ذریعے ثالثی کردہ HMGCR اظہار میں اضافے کی نقل کرنے کے قابل تھا۔ HMGCR لیولز کی ماڈیولیشن میں p75NTR کی شمولیت دیگر سیل اقسام میں حاصل کیے گئے پچھلے ڈیٹا سے مطابقت رکھتی ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ یہ ریسیپٹر کولیسٹروجینک انزائمز کی نقل کو کنٹرول کرتا ہے [41]۔ تاہم، LM11A-31 نے یا تو اس مطالعے میں تجزیہ کیے گئے دیگر پروٹینز، بشمول ABCA1، یا کولیسٹرول اور ApoE کی سطحوں میں ثقافتی میڈیم میں کوئی تبدیلی نہیں کی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ p75NTR کی سلیکٹیو ماڈلن کولیسٹرول کو فروغ دینے کے لیے کافی نہیں ہے۔ NGF سے علاج شدہ خلیوں میں مشاہدہ ApoE سے بھرپور ذرات کے ذریعے اخراج۔ یہ نتائج ہمیں یہ قیاس کرنے کی طرف لے جاتے ہیں کہ NGF p75NTR اور TrkA ریسیپٹرز دونوں کی شمولیت کے ذریعے گلیل خلیوں میں کولیسٹرول میٹابولزم کو کنٹرول کرتا ہے۔
یہ بات اچھی طرح سے معلوم ہے کہ نیوروٹروفین Trk ریسیپٹرز کا پابند ہونا ERK1/2 کو متحرک کرتا ہے، اس طرح خلیے کی تفریق، پھیلاؤ، اور بقا میں شامل کئی راستوں کو منظم کرتا ہے [2,38]۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ یہ دیکھا گیا ہے کہ ERK1/2 ایکٹیویشن ABCA1 اور ApoE اظہار کو مختلف سیل اقسام میں بھی منظم کرتا ہے [38,42,43]۔ یہ نتائج، اس ثبوت کے ساتھ کہ BDNF/TrkB/ERK محور ApoE اخراج اور ABCA1 اظہار کو glial خلیات میں فروغ دیتا ہے [38]، تجویز کرتے ہیں کہ TrkA/ERK محور پر مشتمل سگنل کی منتقلی کا راستہ NGF کے اثرات کے ایک حصے کی وضاحت کر سکتا ہے۔ ہمارے مطالعہ میں.
اگرچہ نیورائٹ کی نشوونما میں کوئی تبدیلی نہیں دیکھی گئی، U373- کنڈیشنڈ میڈیم کی ملازمت اور کو کلچر تجربات کے قیام نے اشارہ کیا کہ NGF کے ذریعہ ثالثی کردہ glial خلیات سے ApoE کی بڑھتی ہوئی رطوبت آکسیڈیٹیو کی وجہ سے پیدا ہونے والے نقصان دہ نتائج کو روکنے کے لیے پرعزم ہے۔ نیورونل خلیات میں کشیدگی. سائٹوٹوکسائٹی کو دلانے کے لیے، ہم نے روٹینون کا استعمال کیا، ایک کیڑے مار دوا جو عام طور پر طبی تحقیق میں مائٹوکونڈریا سے ماخوذ ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) اور اس کے نتیجے میں apoptosis [44] کی حوصلہ افزائی کے لیے استعمال ہوتی ہے۔
ہمارے نتائج اس بات پر روشنی ڈالتے ہیں کہ NGF glial خلیات کے ذریعے ApoE کے اخراج کو متحرک کرتا ہے، جو مختلف N1E-115 خلیوں میں روٹینون انتظامیہ کے خلاف نیورو پروٹیکٹو اثرات کی ضمانت کے لیے ضروری ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ کی روک تھام میں ApoE کا کردار اچھی طرح سے دستاویزی ہے۔ مثال کے طور پر، ماؤس ماڈلز میں ApoE کی کمی دماغی بافتوں میں آکسیڈیٹیو چوٹ کو بڑھا دیتی ہے [45,46]۔ اس کے مطابق، exogenous ApoE کی انتظامیہ ثانوی گلوٹامیٹ زہریلا کا مقابلہ کرتے ہوئے ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کے علاج سے ناقابل واپسی آکسیڈیٹیو نقصان سے حفاظت کرتی ہے [18]۔ اس کے علاوہ، ApoE پر مشتمل لیپوپروٹینز ریٹنا گینگلیون نیوران [47] میں ٹرافک سپورٹ کی واپسی کی وجہ سے apoptosis کو کم کرنے میں موثر ہیں۔
ہمارے مطالعے میں، روٹینون کی ملازمت سے پتہ چلتا ہے کہ ApoE- ثالثی نیورو پروٹیکشن، جو NGF- محرک گلیل سیلز کے ذریعے فروغ پاتا ہے، PD جیسے نیوروڈیجینریٹیو حالات کے تناظر میں متعلقہ ہو سکتا ہے۔ خاص طور پر، روٹینون ڈوپیمینرجک نیورونل انحطاط کو دوبارہ پیدا کرتا ہے جیسا کہ PD میں مشاہدہ کیا گیا ہے، جانوروں کے ماڈلز اور سیل کلچر دونوں میں، بشمول N1E-115- اخذ کردہ نیوران [48–50]۔ ہم آہنگی سے، ہمارے نتائج پچھلے شواہد کی تائید کرتے ہیں جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ ApoE 6-ہائیڈروکسیڈوپامین (6-OHDA) کی انتظامیہ پر نیورو پروٹیکشن کو خارج کرتا ہے، ایک اور نیوروٹوکسن جو PD نما فینوٹائپ [51] کو پیدا کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ اجتماعی طور پر، ہمارا مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ NGF کولیسٹرول میٹابولزم کا ایک اہم ماڈیولیٹر ہے اور ApoE گلیل سیلز سے اخراج ہے۔ سب سے اہم بات یہ ہے کہ اس نیوروٹروفین کے ذریعہ فروغ پانے والے ApoE سراو میں اضافہ روٹینون سائٹوٹوکسٹی کے خلاف نیورو پروٹیکشن کو یقینی بنانے کے لیے ضروری ہے۔
BDNF بالغ دماغ میں سب سے زیادہ پرچر نیوروٹروفین ہے۔ اس ثبوت کے باوجود، یہ دکھایا گیا ہے کہ NGF نہ صرف نشوونما کے دوران بلکہ بالغوں کے مرکزی اعصابی نظام میں بھی اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔ مثال کے طور پر، NGF ہپپوکیمپل سرگرمی کو متاثر کرتا ہے اور اس کے نتیجے میں، مقامی یادداشت اور سیکھنے [52]۔ دیگر نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ NGF nigrostriatal dopaminergic neurons پر نیورو پروٹیکٹو اثر دکھاتا ہے اور یہ سرگرمی PD [53] کے لیے ناول NGF پر مبنی علاج کے طریقوں کی بنیاد رکھ سکتی ہے۔
اس تصور کے مطابق، یہ دکھایا گیا ہے کہ NGF کی پیداوار جوانی کے دوران astrocytes میں گہرائی سے منظم ہوتی ہے اور یہ نیوروئنفلامیشن، دماغی چوٹ، اور نیوروڈیجنریشن [54-56] پر ماڈیولیٹری کارروائیاں کرتی ہے۔ اس تناظر میں، مستقبل کے مطالعے میں اس بات کا جائزہ لینا دلچسپ ہوگا کہ آیا ان اثرات میں ثالثی کی جا سکتی ہے، کم از کم جزوی طور پر، NGF کے ذریعے فروغ پانے والے glial کولیسٹرول کی ماڈیولیشن کے ذریعے۔ موجودہ کام کچھ حدود پیش کرتا ہے جنہیں اگلی تجرباتی تحقیقات میں دور کیا جانا چاہیے۔ مثال کے طور پر، یہ ضروری ہو گا کہ NGF علاج اور کولیسٹرول میٹابولزم کو گلیل خلیوں میں جوڑنے والے مالیکیولر میکانزم کو بہتر طریقے سے جدا کیا جائے۔
فارماسولوجیکل ہیرا پھیری کے قابل مخصوص مالیکیولر اہداف کی نشاندہی کرنے کے لئے ایک وسیع تفہیم مفید ہے جو نیوروڈیجینریٹیو سیاق و سباق میں کام کر سکتے ہیں۔ مزید برآں، اگرچہ U373 اور N1E-115 خلیات کو بالترتیب آسٹروسائٹک اور نیورونل خصوصیات [27–29,57] کو دوبارہ پیدا کرنے کے لیے قابل انتظام سیل لائنوں کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، لیکن بنیادی سیل ثقافتوں میں ان نتائج کی مزید تصدیق ہونی چاہیے۔ اگرچہ دماغی کولیسٹرول ہومیوسٹاسس میں نیوروٹروفین سگنلنگ کی شمولیت کو مضبوط بنانے کے لیے مزید کوششیں کی جانی چاہئیں، لیکن یہ کام پہلی بار یہ ظاہر کرتا ہے کہ NGF بالواسطہ طور پر گلیل کولیسٹرول میٹابولزم کو متاثر کر کے نیورو پروٹیکشن کا کام کر سکتا ہے۔
4. مواد اور طریقے
4.1 سیل کلچر
N1E-115 نیوروبلاسٹوما سیلز اور U373 سیلز 5% CO2 پر DMEM میں ہائی گلوکوز (مرک لائف سائنس، میلان، اٹلی) میں 10% (v/v) فیٹل بووائن سیرم (FBS) (Merck Life Science) کے ساتھ کلچر کیے گئے تھے۔ ، میلان، اٹلی)، اور پینسلن/اسٹریپٹومائسن محلول کے ساتھ شامل کیا گیا۔
نیورونل تفریق پیدا کرنے کے لیے، N1E-115 سیلز کو 30% سنگم پر سیڈ کیا گیا اور 96 گھنٹے کے لیے 0.5% FBS کے ساتھ DMEM میں تبدیل کر دیا گیا۔
نیورونل تفریق پیدا کرنے کے لیے، N1E-115 سیلز کو 30% سنگم پر سیڈ کیا گیا اور 96 گھنٹے کے لیے 0.5% FBS کے ساتھ DMEM میں تبدیل کر دیا گیا۔
Astrocyte-neuron co-cultures کو Ioannou اور ساتھیوں کے بیان کردہ پروٹوکول کے مطابق ترتیب دیا گیا تھا، ترمیم کے ساتھ [59]۔ پیرافین سپیسرز کو کور سلپس پر دبایا گیا تاکہ عمل کی یقین دہانی کرائی جا سکے۔ جب خلیات ایک دوسرے کے سامنے رکھے جاتے تھے تو ہم نے میکانی نقصان کو مؤثر طریقے سے روکنے کے لیے نیورونل کور سلپس پر اسپیسرز کا استعمال کیا۔ اس کے بعد کور سلپس کو ایتھنول میں جراثیم سے پاک کیا گیا اور پولی-ڈی-لائسین (مرک لائف سائنس، میلان، اٹلی) کے ساتھ لیپت کیا گیا۔ N1E-115 کو مطلوبہ کثافت پر لیپت شدہ کور سلپس پر سیڈ کیا گیا تھا اور، ایک بار شریک ثقافت کے لیے تیار ہونے کے بعد، N1E-115 نیوران کے ساتھ کور سلپس کو اٹھانے اور انہیں نیچے کی طرف رکھنے کے لیے جراثیم سے پاک فورسپس کا استعمال کیا گیا تھا۔ {10}}U373 ایسٹروسائٹس کے ساتھ کنویں کا بیج لگایا گیا ہے۔
N1E-115 خلیوں پر پہلے سے علاج 16 گھنٹے کے لیے 0.1 µM روٹینون (Sigma-Aldrich, Milan, Italy, R8875) کے انتظام کے ذریعے کیے گئے تھے۔ کنٹرول سیلز کو ایک گاڑی کے طور پر DMSO (سیل کلچر میڈیم میں 1:1000 کمزوری) موصول ہوا۔ U373 خلیوں کا علاج NGF (Alomone Labs, Jerusalem, Israel, N-245) کے ساتھ تمام تجربات میں 48 گھنٹے کے لیے 100 ng/mL کی خوراک پر کیا گیا۔
4.2 لائسیٹ کی تیاری اور ویسٹرن بلاٹ تجزیہ
U373 سیلز کو نمونے کے بفر (0.1Tris-HClisHCl جس میں 10% SDS، پروٹیز انہیبیٹر کاک ٹیل، pH 6.8) میں ڈیوٹی سائیکل 20%، آؤٹ پٹ 3) سونیکیٹ کیا گیا تھا تاکہ ٹور کے لیے کل لیسیٹ حاصل کیا جا سکے، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [ 60,61]۔ لیملی بفر کو شامل کیا گیا تھا، اور نمونے 5 منٹ کے لیے 95 ◦C پر ڈینیچر کیے گئے تھے۔ پروٹین کے نچوڑ (بیس مائیکروگرام پروٹین) کو ایس ڈی ایس – پیج پر حل کیا گیا تھا، اور نائٹروسیلوز جھلی پر منتقلی ٹرانس بلاٹ ٹربو ٹرانسفر سسٹم (بائیوراڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی) کے ذریعے کی گئی تھی، جیسا کہ پہلے بتایا گیا تھا [62]۔
اس کے بعد، جھلی کو 1 گھنٹے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر 5% بغیر چکنائی والے خشک دودھ کے ساتھ Tris-buffered saline (25 mM Tris-HCl، 138 mM NaCl، 27 mM KCl، 0.05% درمیان{ {10}}، pH 6.8) اور درج ذیل بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ رات بھر 4 ◦C پر جانچ کی گئی: اینٹی p75NTR (سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی، ڈلاس، TX، USA، sc-271708، dilution 1:500)، اینٹی TrkA (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-118, dilution 1:500), anti-SREBP-1 (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-8984 , dilution 1:1000), anti-SREBP-2 (Abcam, Cambridge, UK, ab30682, dilution 1:1000), اینٹی HMGCR (Abcam, Cambridge, UK, ab242315، dilution 1:1000)، anti-LDLr (Abcam, Cambridge, UK, ab30532, dilution 1:500), anti-NPC1 (Novus Biologicals, Centennial, CO, USA, NB400-148, dilution 1:3000 )، antiABCA1 (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-58219, dilution 1:400), anti-ApoE (سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی, Dallas, TX, USA, sc-53570, dilution 1 :400)، اینٹی ونکولن (SigmaAldrich, Milan, Italy, V9264, dilution 1:10,000)، اور anti- -actin (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-47778, dilution 1 :10,000)۔
HRP-conjugated سیکنڈری اینٹی ماؤس یا اینٹی خرگوش اینٹی باڈیز (بائیو ریڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر جھلیوں کو یکے بعد دیگرے 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پروٹین کے پابند اینٹی باڈیز کو واضح ای سی ایل ویسٹرن بلاٹنگ (بائیو ریڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی، #1705061) کے ذریعے تصور کیا گیا تھا، اور کیمیلومینیسینس کو کیمی ڈاک ایم پی سسٹم (بائیو ریڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی) کے ذریعے رجسٹر کیا گیا تھا۔ مغربی دھبوں سے اخذ کردہ کثافت کا تجزیہ اس کے بعد ونڈوز کے لیے امیج جے ورژن 1.52t (نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ، بیتیسڈا، MD، USA) سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ونکولن یا ایکٹین کو ہاؤس کیپنگ پروٹین کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا، جو پروٹین لوڈنگ کے لیے اندرونی کنٹرول کے طور پر کام کرتے تھے۔ ڈینسٹومیٹرک حسابات صوابدیدی اکائیوں کے طور پر حاصل کیے گئے تھے، جو پروٹین بینڈ کی شدت اور متعلقہ ہاؤس کیپنگ پروٹین کے درمیان تناسب سے اخذ کیے گئے تھے۔
4.3 آئل ریڈ اے سٹیننگ
U373 سیلز کو پولی-ایل-لائسین (سگما-الڈرچ، پی6282-5MG) کنویں پلیٹوں میں لیپت کورسلپس پر سیڈ کیا گیا تھا، اور آئل ریڈ O سٹیننگ انجام دیا گیا تھا جیسا کہ پہلے بتایا گیا تھا [60]۔ مختصراً، سیلز کو پیرافارمیلڈہائیڈ (4% محلول) میں 10 منٹ کے لیے فکس کیا گیا تھا اور پی بی ایس کے ساتھ تین بار آہستہ سے کللا کیا گیا تھا۔ فکسڈ خلیوں کو 5 منٹ کے لئے 60٪ آئسوپروپینول کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر آست پانی سے دھویا گیا۔ اس کے بعد، خلیات کو 1 ملی لیٹر آئل ریڈ O ورکنگ سلوشن (سگما-الڈرچ، O1391-250ML) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ کے لیے 6-کنویں پلیٹ کو ایک مداری روٹیٹر شیکر پر رکھ کر جانچا گیا۔ داغدار محلول کے ساتھ انکیوبیشن کے بعد، اضافی داغ کو ختم کرنے کے لیے کنوؤں کو آست پانی سے تین بار دھویا گیا۔
کور سلپس کو آخر کار فلوروشیلڈ ماؤنٹنگ میڈیم (سگما-الڈرچ، ایف 6182) کے ساتھ لگایا گیا تھا، اور آئل ریڈ او آٹو فلوروسینس کو کنفوکال مائکروسکوپی (TCS SP8؛ Leica، Wetzlar، Germany) کے ذریعے تصور کیا گیا تھا۔ 63× میگنیفیکیشن اور Leica LAS X سافٹ ویئر (میلان، اٹلی) سے لیس Leica TCS SP8 کا استعمال کرتے ہوئے تصاویر کیپچر کی گئیں۔ آئل ریڈ او سٹیننگ کی مقدار کو ونڈوز کے لیے امیج جے سافٹ ویئر کے ذریعے انجام دیا گیا تھا اور فی سیل ایریا کے اوسط فلوروسینس کی شدت کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔
4.4 فلپائن سٹیننگ
فلپائن کمپلیکس (سگما-الڈرچ، F9765) کا استعمال کرتے ہوئے فلپائن کے داغ لگائے گئے تھے۔ فلپائن اسٹاک سلوشن (PBS میں 10 mg/mL) ہمیشہ استعمال سے پہلے ہی تیار کیا جاتا تھا۔ خلیوں کو پیرافارمیلڈہائڈ (4٪ حل) میں 10 منٹ کے لئے طے کیا گیا تھا اور پی بی ایس سے دھویا گیا تھا۔ پھر U373 کو کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 1 گھنٹہ کے لیے 1 ملی لیٹر فلپین ورکنگ سلوشن (0.05 ملی گرام/ایم ایل پی بی ایس) سے داغ دیا گیا۔ اس کے بعد، خلیات کو پی بی ایس کے ساتھ تین بار دھویا گیا، اور فلوروشیلڈ ماؤنٹنگ میڈیم کے ساتھ کور سلپس لگائے گئے اور فوری طور پر یووی فلٹر سیٹ (340–380 این ایم ایکسیٹیشن) کا استعمال کرتے ہوئے کنفوکال مائکروسکوپی کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ تصاویر 40X میگنیفیکیشن پر حاصل کی گئیں۔ ونڈوز کے لیے امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرکے فی سیل ایریا کے اوسط فلوروسینس کی شدت کے طور پر فلپائن کی مقدار کا حساب لگایا گیا۔
4.5 کولیسٹرول کی مقدار
کولیسٹرول کی مقدار کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے رنگین میٹرک پرکھ (کولیسٹرول کوانٹیٹیشن کٹ، MAK043، سگما-الڈرچ، میلان، اٹلی) کے ذریعے کیا گیا۔
4.6 ایلیسا
مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق ہیومن اپولیپوپروٹین E ELISA Kit (Abcam, Cambridge, UK, ab108813) کا استعمال کرتے ہوئے ثقافت میڈیم میں ApoE کی سطح کا اندازہ لگایا گیا۔
4.7 امیونو فلوروسینس
U373 خلیوں کی امیونو فلوروسینس کو پھانسی دی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [60]۔ U373 کو پیرافارمیلڈہائڈ (پی بی ایس میں 4%) میں طے کیا گیا تھا اور راتوں رات بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ جانچ پڑتال کی گئی تھی: اینٹی پی 75 این ٹی آر (سانٹا کروز بائیوٹیکنالوجی، ڈلاس، ٹی ایکس، یو ایس اے، ایس سی-271708، ڈائلیشن 1:100)، اور اینٹی ٹرک اے ( سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی، ڈلاس، TX، USA، sc-118، dilution 1:100)۔ اس کے بعد، خلیوں کو بکرے کے اینٹی ماؤس سیکنڈری اینٹی باڈی Alexa Fluor 555 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA, A28180) کے ساتھ اور بکری کے اینٹی خرگوش سیکنڈری اینٹی باڈی Alexa Fluor 488 (ThermoFisher Scientific, WaltMA, USA) کے ساتھ 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ، A27034)۔ نیوکلی کو دیکھنے کے لیے ڈی اے پی آئی سٹیننگ کی گئی تھی، اور کور سلپس کو آخر کار فلوروشیلڈ ماؤنٹنگ میڈیم کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ نمونوں کا تجزیہ کنفوکال مائکروسکوپی کے ذریعے کیا گیا، جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔
4.8 ApoE خاموشی
ApoE mRNA سائیلنسنگ U373 سیلز پر ApoE siRNA (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-29708) کا استعمال کرتے ہوئے مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق کی گئی۔ ٹرانسفیکشن کو ایک 6-کنویں کے ٹشو کلچر پلیٹ میں ترتیب دیا گیا تھا جہاں 100،000 سیل فی کنویں کو DMEM اینٹی بائیوٹک سے پاک گروتھ میڈیم میں 24 گھنٹے کے لیے FBS کے 10% کے ساتھ سیڈ کیا گیا تھا۔ ہر ایک کنویں کے لیے، siRNA ٹرانسفیکشن میڈیم (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, sc-36868) کو siRNA ٹرانسفیکشن ری ایکشن سلوشن میں شامل کیا گیا، جو siRNA ڈوپلیکس اور siRNA ٹرانسفیکشن ریجنٹ (سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی، ڈلاس، TX) کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا۔ USA، sc29528)۔ اس کے بعد خلیوں کو ایک بار siRNA ٹرانسفیکشن میڈیم سے دھویا گیا اور پہلے بنائے گئے ٹرانسفیکشن مکسچر سے ڈھانپ دیا گیا۔ اس کے بعد، کلچر پلیٹ کو 5٪ CO2 انکیوبیٹر میں 37 ◦C پر 7 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا۔
DMEM گروتھ میڈیم جس میں 20% FBS اور اینٹی بائیوٹکس (2-عام ارتکاز کو گنا کریں) کو 1:1 کے تناسب کے ساتھ ہر کنویں میں ٹرانسفیکشن مکسچر میں شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 18 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اور پھر میڈیم کو خارج کر دیا گیا تھا اور اس کی جگہ تازہ نارمل گروتھ میڈیم سے تبدیل کیا گیا تھا۔ اس آخری مرحلے کے 24 گھنٹے بعد، خلیات مزید تجربات کے لیے استعمال ہونے کے لیے تیار تھے۔ ApoE خاموشی کی کارکردگی کا اندازہ U373 خلیوں میں RT-qPCR اور سیل سپرنٹنٹ میں ELISA کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ApoE siRNA نے مؤثر طریقے سے NGF کے ذریعے ApoE انڈکشن کو روکا اگر اسکیمبل siRNA سے موازنہ کیا جائے (ApoE mRNA: 83% کمی؛ ApoE ELISA: 78% کمی)۔ خاص طور پر، siRNA خاموش ہونے پر ApoE اظہار کنٹرول U373 (ApoE mRNA: 72٪ کمی؛ ApoE ELISA: 58٪ کمی) (شکل S 3A، B) میں مشاہدہ کردہ بنیادی اظہار کی سطح سے کم تھا۔
4.9 آر این اے نکالنا اور ریئل ٹائم پی سی آر
mRNA تجزیہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بتایا گیا تھا [22,63]۔ مختصراً، کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق U373 خلیات سے کل RNA TRI Reagent (Merck Life Science, Milan, Italy) کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ ڈی این اے کا علاج (امبیون، تھرمو فشر سائنٹیفک، میلان، اٹلی) کیا گیا، اور پھر آر این اے کلین اپ کٹ (زیمو، اٹلی) کا استعمال کرتے ہوئے آر این اے کو پاک کیا گیا۔ آر این اے کو ایک اعلیٰ صلاحیت والے سی ڈی این اے ریورس ٹرانسکرپشن سیل کٹ (اپلائیڈ بائیو سسٹم، فوسٹر سٹی، سی اے، یو ایس اے) کے ذریعے یکے بعد دیگرے سی ڈی این اے میں نقل کیا گیا اور کیو پی سی آر تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا۔
apoE کے لیے qRT-PCR میں استعمال ہونے والے پرائمر تھے: فارورڈ 5 0 -GGGTCGCTTTTGGGATTACCTG-30 اور ریورس 50 -CAACTCCTTCATGTCTCGTCC3 0 ۔ qRT-PCR میں gapdh کے لیے استعمال کیے گئے پرائمر (حوالہ جین کے طور پر منتخب کیے گئے) تھے: آگے 50 - GTCTCCTCTGACTTCAACAGCG-30 اور ریورس 50 -ACCACCCTGTTGCTGTAGCCA-30۔ پگھلنے کے منحنی خطوط کی تشخیص سے درست ایمپلیکن کی پیداوار کا اندازہ لگایا گیا تھا۔ ہر حیاتیاتی نمونہ SYBR گرین آئی کیو ریجنٹ (بائیو ریڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی) کے ساتھ اور CFX کنیکٹ کا پتہ لگانے کے نظام (بائیو ریڈ لیبارٹریز، میلان، اٹلی) کے ساتھ سہ رخی میں چلایا گیا تھا۔
4.10 نیورونل مورفولوجی کا مقداری تشخیص
N1E-115 خلیات میں نیورونل مورفولوجی کا اندازہ الٹی مائکروسکوپ سے تصاویر کیپچر کرکے لگایا گیا تھا۔ مورفومیٹرک تجزیہ ونڈوز کے لیے امیج جے سافٹ ویئر کے ذریعے کیا گیا تھا، اور کل خلیات کی تعداد (کنٹرول کے فیصد کی تبدیلی کے طور پر ظاہر کی گئی ہے)، اوسط نیورائٹ کی لمبائی (کنٹرول کے فیصد کے طور پر ظاہر کی گئی ہے)، اور نیورائٹ بیئرنگ سیلز کا تخمینہ لگایا گیا تھا۔ نیورائٹ بیئرنگ سیلز کے لیے، فی فیلڈ سیلز کی کل تعداد سے مختلف سیلز کی تعداد کو تقسیم کرکے فیصد کا حساب لگایا گیا۔ N1E-115 اس وقت مختلف تھے جب ان کے پاس کم از کم ایک نیورائٹ a تھا جس کی لمبائی سوما کے قطر کے برابر یا اس سے زیادہ تھی۔ مورفولوجیکل تشخیص کم از کم پانچ آزاد تجربات پر کیا گیا تھا، جس میں کم از کم تین تصاویر کا تجزیہ کیا گیا تھا۔
4.11۔ شماریاتی تجزیہ
اس مطالعے میں پیش کیے گئے تمام نتائج کو اوسط ± SD کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا (ڈیٹا کی معیاری انحراف عام تقسیم کو Shapiro-Wilk ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے چیک کیا گیا تھا۔ جب دو تجرباتی گروپوں کا موازنہ کیا گیا تو، غیر جوڑی والے ٹیسٹ لاگو کیے گئے۔ تاہم، جب تین یا زیادہ گروپس کا موازنہ کیا گیا، تغیر کا یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) جس کے بعد Tukey کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کا استعمال کیا گیا۔ روٹینون کے تجربات کے بارے میں، جہاں دو متغیرات موجود تھے، دو طرفہ ANOVA کے بعد بونفرونی پوسٹ ٹیسٹ استعمال کیا گیا۔ p < 0.05 کو شماریاتی لحاظ سے مختلف سمجھا جاتا تھا۔ شماریاتی تجزیہ گراف پیڈ پرزم 5 (GraphPad, La Jolla, CA, USA) کو ونڈوز کے لیے استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔
مصنف کی شراکتیں:
تصوراتی، MS؛ طریقہ کار، MS اور MC؛ توثیق، MS اور MC؛ رسمی تجزیہ، ایم ایس، ایم سی، ڈی پی، اور ایم پی؛ تفتیش، ایم سی، این ایم، ایل ایل، ایم پی، اور ڈی پی؛ وسائل، MS اور VP؛ ڈیٹا کیوریشن، ایم ایس اور ایم سی؛ تحریر - اصل مسودہ کی تیاری، MS اور MC؛ تحریر — جائزہ اور ترمیم، MP، LL، DP، NM اور VP؛ تصور، MS، MC، اور MP؛ نگرانی، MS؛ پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، ایم ایس؛ فنڈنگ کا حصول، MS تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔
فنڈنگ:
اس تحقیق کو فنڈز فار ڈیپارٹمنٹل ریسرچ 2021 (یونیورسٹی آف مولیس) نے ایم ایس کو فراہم کیا تھا، اور جیروم لیجیون فاؤنڈیشن نے ایم ایس کو گرانٹس سیشن 2021a، #2043 کے لیے کال کی تھی۔
ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان:
قابل اطلاق نہیں۔
باخبر رضامندی کا بیان:
قابل اطلاق نہیں۔
ڈیٹا کی دستیابی کا بیان:
قابل اطلاق نہیں۔
اعترافات:
ہم کولیسٹرول پرکھ میں مدد کے لیے کلاڈیا ٹونی کا شکریہ ادا کرتے ہیں۔
مفادات میں تضاد:
مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔
حوالہ جات
1. Björkhem، I.؛ مینی، ایس. فوگل مین، AM برین کولیسٹرول: ایک رکاوٹ کے پیچھے لمبی خفیہ زندگی۔ شریان۔ تھروم واسک بائول 2004، 24، 806-815۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
2. کولارڈو، ایم. مارٹیلا، این. پینسابینی، ڈی. Siteni, S.; Di Bartolomeo, S.; پیلوٹینی، وی. Segatto، M. نیوروٹروفینز سیل میٹابولزم کے کلیدی ریگولیٹرز کے طور پر: کولیسٹرول ہومیوسٹاسس کے مضمرات۔ انٹر جے مول سائنس 2021، 22، 5692۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
3. گورٹز، سی.؛ موچ، ڈی ایچ؛ Pfrieger، FW ایک سے زیادہ میکانزم CNS نیوران میں کولیسٹرول سے متاثرہ synaptogenesis میں ثالثی کرتے ہیں۔ مول سیل نیوروسکی 2005، 29، 190-201۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
4. Pfenninger، KH پلازما جھلی کی توسیع: ایک نیوران کا ہرکولین کام۔ نیٹ Rev. Neurosci. 2009، 10، 251–261۔ [کراس ریف]
5. تکاموری، ایس. ہولٹ، ایم؛ سٹینیئس، کے. Lemke, EA; Grønborg، M. Riedel, D.; Urlaub، H.؛ Schenck, S.; برگر، بی؛ رنگلر، پی. ET رحمہ اللہ تعالی. اسمگلنگ آرگنیل کی مالیکیولر اناٹومی۔ سیل 2006، 127، 831–846۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
6. سوزوکی، ایس. Kiyosue, K.; Hazama, S.; اوگورا، اے. کاشیہارا، ایم. ہارا، ٹی. کوشیمیزو، ایچ. کوجیما، ایم. دماغ سے ماخوذ نیوروٹروفک عنصر Synapse کی نشوونما کے لیے کولیسٹرول میٹابولزم کو منظم کرتا ہے۔ J. Neurosci. 2007، 27، 6417–6427۔ [کراس ریف]
7. Segatto، M.؛ لیبوفے، ایل۔ ٹراپانی، ایل۔ Pallottini، V. دماغ میں کولیسٹرول ہومیوسٹاسس کی ناکامی: Synaptic dysfunction اور cognitive decline کے مضمرات۔ کرر میڈ. کیم 2014، 21، 2788–2802۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
8. جیسکے، ڈی جے؛ Dietschy، JM جگر میں کولیسٹرول کی ترکیب کی شرح کا ضابطہ اور چوہے کی لاش کی پیمائش [3H] پانی کا استعمال کرتے ہوئے۔ J. Lipid Res. 1980، 21، 364–376۔ [کراس ریف]
9. پیفریجر، ایف ڈبلیو؛ Ungerer، N. نیوران اور ایسٹروائٹس میں کولیسٹرول میٹابولزم۔ پروگرام لپڈ ریس 2011، 50، 357–371۔ [کراس ریف]
10. نیویگ، K.؛ شالر، ایچ. پیفریجر، ایف ڈبلیو نے بعد از پیدائش چوہوں کے نیوران اور گلیل سیلز کے درمیان کولیسٹرول کی ترکیب میں فرق کو نشان زد کیا۔ J. نیورو کیم۔ 2009، 109، 125–134۔ [کراس ریف]
11. اورم، جے ایف؛ Heinecke، JW ATP بائنڈنگ کیسٹ ٹرانسپورٹر A1: ایک سیل کولیسٹرول برآمد کنندہ جو دل کی بیماری سے بچاتا ہے۔ فزیول Rev. 2005, 85, 1343–1372. [کراس ریف]
12. Pfrieger، FW دماغ میں آؤٹ سورسنگ: کیا نیوران ایسٹروسائٹس کے ذریعے کولیسٹرول کی ترسیل پر منحصر ہیں؟ بائیو ایسز 2003، 25، 72-78۔ [کراس ریف]
13. کرسٹوفرسن، کے ایس؛ Ullian, EM; سٹوکس، سی سی اے؛ مولونی، عیسوی؛ جہنم، JW؛ آگہ، اے. Lawler, J.; موشر، ڈی ایف؛ بورنسٹین، پی. بیریس، بی اے تھرومبوسپنڈنز ایسٹروسائٹ سے چھپے ہوئے پروٹین ہیں جو سی این ایس کے synaptogenesis کو فروغ دیتے ہیں۔ سیل 2005، 120، 421–433۔ [کراس ریف]
For more information:1950477648nn@gmail.com
