جلد کی سفیدی کے لیے بغیر بو کے گلوٹاتھیون مائیکرونیڈل پیچ

خلاصہ:

Glutathione ایک قدرتی اینٹی ایجنگ مادہ ہے جو ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں سے پروٹین تھیولز کے آکسیکرن کو روکتا ہے۔ دواسازی کی صنعت میں، ٹائروسینیز کو روکنے کی صلاحیت کی وجہ سے کم گلوٹاتھیون (GSH) کو جلد کی سفیدی کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔

تاہم، اس کی ناقص پارگمیتا اور بدبو جلد کے استعمال میں اس کے استعمال کو محدود کرتی ہے۔ اس کے ساتھ، ہم ہائیلورونک ایسڈ (HA) کے ساتھ تیار کردہ GSH سے بھری ہوئی تحلیل کرنے والے مائیکرونیڈل (MN) پیچ کی اطلاع دیتے ہیں جو پوری جلد میں پھیلاؤ کو بہتر بناتا ہے اور GSH کی بدبو کو کم کرتا ہے۔ HA کو بغیر بو کے GSH حل تیار کرنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا اور GSH کے کیریئر کے طور پر MN فیبریکیشنز کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ GSH سے بھری ہوئی MN (GSH-MN) صفوں میں MN تشکیل دینے والے محلول سے تیار کیا گیا جس میں 10 فیصد تک GSH شامل ہے اچھی پیٹرن کی یکسانیت اور جلد میں داخل کرنے کے لیے مناسب میکانی خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے۔ 17.4 فیصد کی لوڈنگ کی صلاحیت کے ساتھ GSH-MNs پورسائن کی جلد میں داخل ہونے کے بعد 10 منٹ کے اندر تحلیل ہو جاتے ہیں اور بھری ہوئی GSH کو بغیر آکسیڈائز کیے چھوڑ دیتے ہیں۔ یہ نیا نقطہ نظر خصوصیت GSH بدبو کو کم کرنے اور MN ٹیکنالوجی پر مبنی جدید ٹرانسڈرمل ڈیلیوری کو کم کرنے کے لیے فنکشنل بائیو پولیمر کو یکجا کرتا ہے تاکہ بغیر درد کے جلد کے پھیلاؤ کو بڑھایا جا سکے۔ ہمیں یقین ہے کہ یہ تکنیک بہت سے کاسمیسیوٹیکل شعبوں میں GSH کے اطلاق کو بڑھا سکتی ہے۔

سفیدی کے لیے، ہم نے پایا کہ Cistanche کا سفید کرنے کا بہت اچھا اثر ہوتا ہے، اور Cistanche کے phenylethanol ٹوٹل glycosides کے نچوڑ کا ٹائروسینیز کی سرگرمی پر ایک اہم ڈاون ریگولیشن اثر پڑتا ہے، جو جلد کے میلانین کی ترکیب کے لیے بنیادی شرح کو محدود کرنے والا انزائم ہے۔ فعال اثر جلد میں میلانین گرینولز کے مواد کو کم کر سکتا ہے (یانگ جیانہوا، ایٹ ال. ویسٹ چائنا فارماسیوٹیکل جرنل، 2010، 25(05):533-535); Cistanche deserticola میں اہم پانچ phenylethanol glycoside monomers اور pureified Cistanche deserticola benzene کا مطالعہ کیا گیا بنیادی مہذب انسانی جلد کے melanocytes میں melanin granules کے مواد پر کل ایتھنول glycosides کا اثر melanin کی جلد کی ترکیب پر ایک اہم روکنے والا اثر پایا گیا۔ Cistanche deserticola سے phenylethanol glycosides کے الٹرا وائلٹ سپیکٹرم کو سکین کیا گیا اور یہ پایا گیا کہ یہ UVA اور UVB علاقوں میں الٹرا وائلٹ شعاع ریزی کو مؤثر طریقے سے جذب کر سکتا ہے (یانگ جیانہوا، وغیرہ ویسٹ چائنا فارماسیوٹیکل جرنل، 2011، 2011،{263) }}); Cistanche deserticola سے phenylethanol glycosides کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی تحقیق کی گئی، اور نتائج سے معلوم ہوا کہ ان سب میں مضبوط سکیوینگنگ فریڈم بیس فعال ہے، سفیدی کا اثر ہے۔

cistanche tubulosa خریدنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

مطلوبہ الفاظ:

گلوٹاتھیون؛ ٹرانسڈرمل منشیات کی ترسیل؛ hyaluronic ایسڈ؛ microneedle جلد کی سفیدی.

1. تعارف

Glutathione، -glutamyl-cysteinyl-glycine کا قدرتی طور پر پایا جانے والا thiol tripeptide، سیلولر ریڈوکس کے رد عمل میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور میلانین کی ترکیب کی روک تھام، ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں سے تحفظ، اور سیل detoxification [1,2] میں شامل ہے۔ جب کہ گلوٹاتھیون جسم کے اندر آکسائڈائزڈ اور کم دونوں شکلوں میں موجود ہے، کم شدہ گلوٹاتھیون (GSH) ایک مرکب ہے جس میں اعلیٰ درجے کی حیاتیاتی افادیت ہے [3,4]۔

مثال کے طور پر، ٹائروسینیز کی روک تھام کے ذریعے میلانین کی ترکیب کو دبانے کی اس کی صلاحیت اسے کاسمیسیوٹیکلز [5-7] میں جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال کرنے کی اجازت دیتی ہے۔ اس کے علاوہ، جی ایس ایچ کو قوت مدافعت بڑھانے والے، دھاتی زہر کے لیے تریاق، اور فبروسس، گلوکوما، اور گٹھیا جیسی بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے [8–11]۔ بدقسمتی سے، اس کی ناقص حیاتیاتی دستیابی اور ناخوشگوار بدبو اس کے بہت سے علاج کے استعمال کے باوجود کلینکس میں GSH کے استعمال کو محدود کرتی ہے۔

دواؤں کے پیپٹائڈس کو عام طور پر ہائپوڈرمک سوئیوں کا استعمال کرتے ہوئے پیرنٹریل راستوں کے ذریعے دیا جاتا ہے۔ تاہم، اس راستے کو ہر خوراک کی انتظامیہ کے لیے طبی توجہ کی ضرورت ہوتی ہے اور انجیکشن کے دوران ہونے والے درد کی وجہ سے مریض کی ناقص تعمیل ہوتی ہے [12,13]۔ اگرچہ ٹاپیکل ایپلی کیشنز کو پوری جلد میں جی ایس ایچ کی فراہمی کے لیے استعمال کیا گیا ہے، اس کی بدبو اور سٹریٹم کورنیئم (SC، جلد کی سب سے بیرونی رکاوٹ) سے گزرنے میں ناکامی اس کے استعمال کو محدود کرتی ہے [14]۔

حال ہی میں، مائیکرونیڈلز (MNs) کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسڈرمل ڈیلیوری کے ایک کم سے کم ناگوار نظام کو طبی ماہرین کی طرف سے خاصی توجہ ملی ہے، خاص طور پر بائیو ایکٹیو ایجنٹس جیسے پیپٹائڈس اور پروٹین کی ترسیل کے لیے جو معدے کے پی ایچ کے لیے لیبل ہیں اور انزیمیٹک انحطاط کے لیے حساس ہیں [15]۔

GSH ڈیلیوری کے موجودہ طریقوں سے وابستہ حدود کو دور کرنے کے لیے، ہم نے GSH کی افادیت اور مریض کی تعمیل کو بہتر بنانے کے لیے بائیو پولیمر کو ڈیوڈورائز کر کے تیار کردہ تیزی سے تحلیل ہونے والے MN پیچ کا تصور کیا۔ بائیو پولیمر کی اعلیٰ بایو کمپیٹیبلٹی اور ٹیون ایبل فزیکو کیمیکل خصوصیات جیسے کہ ہائیلورونک ایسڈ (HA) انہیں MN مواد [16,17] کے طور پر موزوں امیدوار پیش کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، ملٹی فنکشنل گروپس والے بائیو پولیمر ریورس ایبل آئنک تعاملات، ہائیڈروجن بانڈنگ، اور وین ڈیر وال فورسز کے ذریعے مالیکیولز کے ساتھ تعامل کرسکتے ہیں، اس طرح ان کی اعلیٰ لوڈنگ کی صلاحیت اور اچھی جذب کرنے والی خصوصیات میں حصہ ڈالتے ہیں [18]۔ چونکہ MNs میں بھری ہوئی دوائیوں کی رہائی کے حرکیات کو تحلیل یا استعمال شدہ پولیمر کے انحطاط کی شرح کے ذریعے کنٹرول کیا جا سکتا ہے، MN پلیٹ فارم کو تحلیل کرنے کا اطلاق ٹرانسڈرمل راستوں [19-22] کے ذریعے منشیات کی مستقل اور طویل مدتی رہائی کے لیے کیا جا سکتا ہے۔

یہاں، ہم ڈیوڈورائزڈ بائیو پولیمر سے تیار کردہ تحلیل کرنے والے MN پیچ کا استعمال کرتے ہوئے GSH کی موثر اور بو کے بغیر ٹرانسڈرمل ترسیل کے لیے ایک نئے نقطہ نظر کی اطلاع دیتے ہیں۔ بو کے بغیر GSH فارمولیشنز کے لیے کئی بائیو پولیمر کی اسکریننگ کے بعد، HA کو MN کے لیے ایک مواد کے طور پر منتخب کیا گیا تھا اور GSH سے بھرے MN پیچ کی تعمیر کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ HA MNs میں بھری ہوئی GSH کی مقدار کو زیادہ سے زیادہ اینٹی میلانوجینک اثرات اور کم سائٹوٹوکسیٹی کے لیے طے کیا گیا تھا، جیسا کہ سائٹوٹوکسیٹی اور ٹائروسینیز انحبیشن اسٹڈیز سے تصدیق ہوتی ہے۔ GSH سے بھری ہوئی HA MN (GSH-HA MN) صفوں کا ان کی یکساں ساخت، جیومیٹری، مطلوبہ مکینیکل طاقت، اور جلد میں گھسنے کی صلاحیتوں کے لیے جائزہ لیا گیا۔ جانوروں کی جلد کے بافتوں پر GSH-HA MN پیچ کے اطلاق کے بعد، ان کی تحلیل کرنے کی صلاحیتوں اور منشیات کو جاری کرنے کے نمونوں کا مطالعہ کیا گیا۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 مواد

کم شدہ گلوٹاتھیون (GSH)، جیلیٹن (سور کی جلد سے)، 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) ، اور کوجک ایسڈ (KA) Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) سے خریدا گیا تھا، سوڈیم hyaluronate (100 k, HA) SNVIA (Busan, Korea) سے خریدا گیا تھا۔ Chondroitin سلفیٹ (CS) واکو کیمیکلز (اوساکا، جاپان) سے خریدا گیا تھا۔ -Melanocyte stimulating hormone (-MSH) TOCRIS (Bristol, UK) سے خریدا گیا تھا، اور FITC (fluorescein isothiocyanate) کا استعمال کرتے ہوئے apoptosis کا پتہ لگانے والی کٹ BD Biosciences (Bedford, MA, USA) سے annexin V خریدی گئی تھی۔ ایک مائع پری پولیمر (Sylgard 184A) اور پولیڈیمیتھائلسلوکسین (PDMS) مولڈنگ کے لیے ایک کیورنگ ایجنٹ (Sylgard 184B) ڈاؤ کارننگ (مڈلینڈ، MI، USA) سے خریدا گیا تھا۔ تمام کیمیکل مزید صاف کیے بغیر استعمال کیے گئے۔ پورسین کی جلد (بالوں کو ہٹا دیا گیا) مقامی قصائی کی دکان سے منگوایا گیا اور اسے تجربات میں استعمال ہونے تک −20 ◦C پر رکھا گیا۔

2.2 سیل کلچر

ہیومن keratinocytes (HaCaT خلیات) اور ماؤس سے ماخوذ میلانوما سیل لائنز (B16F10)، جو وٹرو اسٹڈیز میں استعمال ہوتے تھے، ATCC (ماناساس، VA، USA) سے حاصل کیے گئے تھے۔ سیلز GSH سے پاک DMEM میڈیم (Hyclone, Logan, UT, USA) میں اگائے گئے، جن کی تکمیل 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS، Hyclone)، 2 mM گلوٹامین (Sigma-Aldrich)، 100 U/mL پینسلن (Hyclone)، اور 100 ug/mL streptomycin (GenDEPOT, Barker, TX, USA) 37 ◦C پر مرطوب ماحول میں 5 فیصد CO2 کے ساتھ۔

2.3 بدبو کے ٹیسٹ

GSH بدبو [4] پر بائیو پولیمر کے کم کرنے والے اثر کا اندازہ کرنے کے لئے بو اسکورنگ کا طریقہ انجام دیا گیا تھا۔ بائیو پولیمر کی مقدار (سوڈیم ہائیلورونیٹ، جیلیٹن، اور کونڈروٹین سلفیٹ) کل محلول میں وزن کے لحاظ سے 10 فیصد مقرر کی گئی تھی اور جی ایس ایچ کو مختلف ارتکاز پر ملایا گیا تھا (10 فیصد، 2۔ {9}} فیصد، 2.5 فیصد، اور 5.0 فیصد وزن کے لحاظ سے) دیونائزڈ (Di) پانی میں۔ 30 منٹ کے اختلاط کے بعد، 10 رضاکاروں کے ایک ٹیسٹ پینل نے ایک محلول کو سونگھ لیا جس میں بائیو پولیمر اور جی ایس ایچ کا مرکب تھا۔ مخلوط نمونوں کی گندھک کی بدبو کا موازنہ کرنے کے لیے بائیو پولیمر کے بغیر GSH حل کو بطور حوالہ استعمال کیا گیا تھا۔

ہر رضاکار سے کہا گیا کہ وہ درج ذیل 5-پوائنٹ اسکیل کا استعمال کرتے ہوئے مخلوط محلول کی بدبو کے بارے میں اپنے تاثرات کی نشاندہی کرے: 1: کوئی بدبو نہیں، 2: پہچانی جانے والی بدبو، 3: آسانی سے نظر آنے والی بدبو، 4: شدید بو، اور 5: شدید بدبو .

2.4 گیس کرومیٹوگرافی (GC) پیمائش

اسکورنگ کے نتائج کی بنیاد پر، جاری کردہ H2S کی مقدار تمام GSH-HA فارمولیشنز کے لیے گیس کرومیٹوگرافی (Shimadzu, Tokyo, Japan) کے ذریعے پلسڈ فریم فوٹو میٹرک ڈیٹیکٹر (PFPD) [23,24] کے ذریعے طے کی گئی۔ GSH کے 1 فیصد، 2.5 فیصد، اور 5 فیصد (وزن کے لحاظ سے) کے حل کو 10 فیصد (وزن کے لحاظ سے) HA کے ساتھ ملایا گیا، اور 1 mL کو 10 mL براؤن ویکیوم شیشی میں انجکشن لگایا گیا۔ شیشی کو تندور میں 40 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے محفوظ کیا گیا اور پھر باہر نکالا گیا۔ پیدا ہونے والی گیس (100 µL) کو ایک سرنج کا استعمال کرتے ہوئے جمع کیا گیا اور PFPD سے لیس Shimadzu GC میں انجکشن لگایا گیا۔ بڑے سلفرس مرکبات کی علیحدگی 30 m × 0.25 mm id گلاس کالم (DB-1, J&W) پر 90 ◦C پر اور 1 mL/min کے کیریئر فلو (نائٹروجن) پر حاصل کی گئی۔ پتہ لگانے اور انجیکشن کا درجہ حرارت بالترتیب 250 اور 150 ◦C تھا۔ معیاری نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے H2S کی مقدار کی پیمائش کی گئی۔ H2S کے لیے PFPD کی حساسیت 10 ppb تھی۔ تمام نمونوں کا ڈیٹا معیاری وکر کی حد میں ہونے کی تصدیق کی گئی۔

2.5 سائٹوٹوکسیٹی ٹیسٹ

GSH کی سائٹوٹوکسیٹی کا اندازہ MTT پرکھ اور annexin V-FITC سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ مختصراً، HaCaT خلیات (سیل نمبر: 1 × 104 ) کا علاج 0.1، 0.25، {{10}} کے ساتھ کیا گیا تھا۔ ، اور DMEM میڈیا میں 1۔{23}} mg/mL GSH۔ 24، 48، اور 72 گھنٹے کے علاج کے بعد، 50 µL MTT محلول سیل میں شامل کیا گیا اور میڈیم کی خواہش کرنے سے پہلے 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، 100 µL ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) کو شامل کیا گیا اور ملٹیسکن GO ریڈر (تھرمو سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، USA) کا استعمال کرتے ہوئے 540 nm کی جاذبیت کی پیمائش کر کے قابل عمل خلیوں کی فیصد کا حساب لگایا گیا۔ اپوپٹوس کو اینیکسن V-FITC اور پروپیڈیم آئوڈائڈ (PI) کے ساتھ بیک وقت داغ لگا کر ماپا گیا تھا۔ HaCaT خلیات (1 × 106 ) کا علاج GSH کے 0.1، 0.25، 0.5، اور 1.0 mg/mL کے ساتھ کیا گیا۔ 72 گھنٹے کے علاج کے بعد، خلیوں کی کٹائی کی گئی، ٹرپسنائز کیا گیا، ٹھنڈے PBS سے دھویا گیا، اور 1X بائنڈنگ بفر کے ساتھ داغ دیا گیا جس میں annexin V-FITC محلول اور PI تھا۔ اس کے بعد ، خلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ داغدار خلیوں کا تجزیہ بہاؤ سائٹوومیٹری کے ذریعہ 1 گھنٹے کے اندر کیا گیا۔ بیکٹن ڈکنسن ایف اے سی ایس اسکین فلو سائٹو میٹر اور بی ڈی ایف اے سی ایس ڈیوا سافٹ ویئر (بی ڈی بایوسینس، سان جوس، سی اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے اپوپٹوٹک اور لائیو سیل دونوں کا تجزیہ کیا گیا۔

2.6۔ سیلولر میلانین مواد اور ٹائروسینیز سرگرمی کا تعین

جی ایس ایچ کے مجوزہ سفیدی اثر کا اندازہ ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روکنے کی اس کی صلاحیت کی پیمائش کرکے کیا گیا۔ مختصراً، ماؤس سے ماخوذ B16F10 میلانوما سیلز کو ایک 6-کنوین کلچر پلیٹ میں 5 کے ارتکاز پر سیڈ کیا گیا تھا۔ راتوں رات منسلک کرنے کے لئے. خلیوں کا علاج {{10}} (خالی)، 0.1، 0.25، 0.5، اور 1.0 mg/mL GSH اور 10 µM کوجک ایسڈ ( KA) 4 گھنٹے کے لیے ایک مثبت کنٹرول کے طور پر، اور اس کے بعد 72 گھنٹے کے لیے -MSH (1 µM) کے ساتھ ٹائروسینیز سرگرمی کی حوصلہ افزائی کی۔ میڈیا کو ہٹانے کے بعد، خلیوں کو 1N NaOH کے 500 µL میں تحلیل کیا گیا اور میلانین کو گھلنشیل کرنے کے لیے 60 ◦C پر 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ میلانین کے مواد کا تعین 405 nm پر جذب کی پیمائش سے کیا گیا تھا۔ ٹائروسینیز کی سرگرمی کے لیے، خلیات کو 100 µL 50 mM سوڈیم فاسفیٹ بفر (pH 6.5) میں لیس کیا گیا تھا جس میں 5 µL 1 فیصد Triton X-100 اور 5 µL 0.1 mM phenylmethylsulfonylfluoride تھا۔ 10،000 g (30 منٹ، 4 ◦C) پر سینٹرفیوگریشن کے بعد، 20 µL کے l-3،4-ڈائی ہائیڈروکسی فینیلالینین (l-DOPA) والے سپرنٹنٹس کو {{ پر لوڈ کیا گیا تھا۔ 44}} اچھی طرح سے پلیٹ، اور جاذبیت 492 nm 37 ◦C پر ناپی گئی۔

2.7۔ GSH-MN پیچ کی تعمیر

گولی کی شکل والی GSH-MN اریوں (10 × 10 MNs/cm2 ) کو 10 فیصد HA کے آبی محلول کی سالوینٹ کاسٹنگ کے ذریعے دوبارہ قابل استعمال PDMS مولڈ کے ساتھ گھڑا گیا تھا۔ مختلف GSH ارتکاز کے ساتھ حل (0 فیصد، 1.0 فیصد، 2.5 فیصد، اور 5.0 فیصد وزن کے لحاظ سے)۔ گولی کے سائز کے گہاوں والے منفی PDMS سانچوں کو مائکرو مشیننگ [16] کے ذریعہ تیار کردہ دھاتی MN صفوں سے نقل کیا گیا تھا۔ MN تشکیل دینے والے حل (HA یا HA/GSH حل کے 350 µL) کو PDMS مولڈ میں پائپ کیا گیا تھا اور ویکیوم کے نیچے ڈیگاسنگ کے بعد 12 گھنٹے کے لئے 40 ◦C پر خشک کیا گیا تھا۔ خشک MN صفوں کو آہستہ سے سڑنا سے چھلکا دیا گیا تھا۔ من گھڑت MN صفوں کی شکل کو ڈیجیٹل (AM413ZT، Dino-Lite، Taiwan) اور آپٹیکل (Eclipse TS100، Nikon، Japan) مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے نمایاں کیا گیا تھا۔ HA MNs جن میں 0, 1, 2.5, اور 5 mg/mL GSH شامل ہیں GSH0-HA MN, GSH1-HA MN, GSH2۔{30}}HA MN، اور بالترتیب GSH5-HA MN۔

2.8۔ فریکچر ٹیسٹ

ایک سنگل HA MN اور GSH سے بھرے HA MNs (GSH0-HA MN، GSH1-HA MN، اور GSH2۔{4}}HA MN) کو cyanoacrylate گلو (Loctite 4{{) کا استعمال کرتے ہوئے طے کیا گیا تھا۔ 7}}1, Loctite Corp, Dublin, Ireland) یونیورسل ٹیسٹنگ مشین (UTM, A&D 5000H, A&D Sales Corp, Daegu, Korea) کی نچلی گرفت پر رکھے ہوئے ماؤنٹنگ اسٹب کو پن کرنے کے لیے۔ مکینیکل ٹیسٹر کی اوپری گرفت کو محوری طور پر MN ٹپ کی طرف 0.1 ملی میٹر/منٹ کی شرح سے نیچے لے جایا گیا تھا۔ پیداوار کی قوت کو تحقیقات کی نقل مکانی کی شرح کے ایک فنکشن کے طور پر ماپا گیا تھا اور اس کا اظہار نیوٹن (N) میں کیا گیا تھا۔

2.9 جلد داخل کرنے کا ٹیسٹ

جلد کے اندراج کا ٹیسٹ MNs کی گھسنے کی صلاحیت، مسخ کی ممکنہ حد، اور اس کے اندراج کے دوران ٹشو کے ممکنہ انحراف کو جانچنے کے لیے کیا گیا تھا۔ GSH0-HA MN، GSH1-HA MN، اور GSH2۔{3}}HA MNs کو cyanoacrylate گلو کے ساتھ دھاتی سطح پر UTM کی اوپری گرفت کے ساتھ اٹیچمنٹ کے ذریعے فکس کیا گیا تھا اور اس کے ساتھ داخل کیا گیا تھا۔ مکینیکل ٹیسٹر کی بنیاد پر 10 ملی میٹر فی منٹ کی قوت کو ایکسائزڈ پورسین جلد (3 × 3 سینٹی میٹر 2، ~ 2 ملی میٹر موٹی) میں رکھا گیا ہے [25]۔ خنزیر کی جلد کو اسکیلپل کا استعمال کرتے ہوئے ذیلی سطح کی فیٹی پرت کو ہٹانے کے بعد استعمال کیا گیا تھا۔

2.10 تحلیل ٹیسٹ

GSH2۔{1}}HA MN کئی پہلے سے متعین وقت پوائنٹس (3، 5، 7، اور 10 منٹ) پر پورسائن جلد (3 × 3 cm2 ) پر لاگو کیا گیا تھا۔ MN پیچ کو ہٹانے کے بعد، MN ٹپس کی تحلیل شدہ اونچائی کو آپٹیکل مائکروسکوپ (Eclipse TS100, Nikon, Tokyo, Japan) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

جی ایس ایچ 2 کے پنچ مارک کی تصدیق کرنے کے لیے۔ . اس کے بعد، اوپر بیان کردہ اسی طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے ڈائی کے ساتھ ملا ہوا محلول استعمال کرتے ہوئے MN اری فیبریکیشن تیار کی گئی۔ MN صفوں سے بننے والے پنچ مارک، پورسین کی جلد میں ترجمے کے دوران ان کی پوزیشن، اور ٹشو ڈیفلیکشن کی ڈگری کا ڈیجیٹل مائکروسکوپ (AM413ZT، Dino-Lite، Taiwan) کے تحت تجزیہ کیا گیا۔ اندراج کے بعد MN کی مورفولوجی میں کسی بھی تبدیلی کو آپٹیکل مائکروسکوپ کے تحت جانچا گیا۔

2.11۔ لوڈنگ کی صلاحیت اور Encapsulation کی کارکردگی

HA MNs میں بھری ہوئی GSH کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے، GSH{{0}}HA MN اور GSH2 سے MN ٹپس۔ 24 گھنٹے کے لیے۔ MN ٹپس میں GSH رقم کی مقدار کا تعین سن فائر C18 کالم (100Å, 5 µm, 4.6) پر اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC, e2695, Waters, USA) کا استعمال کرتے ہوئے 10 µL نمونہ حل کا تجزیہ کرکے کیا گیا تھا۔ × 250 ملی میٹر، پانی)۔ HPLC کو acetonitrile water (5:95) اور 0.1 فیصد trifluoroacetic acid (TFA) کا استعمال کرتے ہوئے موبائل فیز کے طور پر 0.8 mL/min کی بہاؤ کی شرح کے ساتھ آپریشن کیا گیا تھا۔ HPLC ڈیٹا کی بنیاد پر، لوڈنگ کی گنجائش (LC) اور encapsulation efficiency (EE) کا حساب درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا: لوڈنگ کی گنجائش ( فیصد )=men mtot × 100 (1)۔ Encapsulation Efficiency (فیصد)=مرد کم از کم × 100 (2)

جہاں مرد ایم این ٹپس میں انکیپسلیٹڈ دوائی کی مقدار کی نمائندگی کرتے ہیں، زیادہ تر ایم این ٹپس کا کل ماس ہے، اور منٹ ایم این بنانے والے حلوں میں منشیات کی مقدار کی نمائندگی کرتا ہے [26]۔

2.12۔ وٹرو جی ایس ایچ سکن پرمییشن ٹیسٹ میں

جی ایس ایچ 2 سے جاری کردہ کم-جی ایس ایچ کی جلد پر ایکس ویوو پرمییشن کینیٹکس کی چھان بین کرنے کے لیے۔{2} HA MN پیچ، جامد بازی فرانز سیل ٹیسٹ GSH2 کے ذریعے وقت پر منحصر GSH ریلیز کی شرح کا حساب لگانے کے لیے کیے گئے۔ {5}HA MNs اور جلد کے ذریعے اس کا پھیلاؤ ایک حوالہ GSH-HA حل کے ساتھ۔ جی ایس ایچ 2۔ فرانز ڈفیوژن سیل میں ڈونر اور رسیپٹر چیمبر کے درمیان بالترتیب رکھا جاتا ہے۔ جی ایس ایچ 2 کو داخل کرنے کے بعد۔ سائیڈ بازو والا رسیپٹر چیمبر 22 ملی لیٹر تازہ پی بی ایس بفر (پی ایچ 7.4) سے بھرا ہوا تھا اور اسے 37 ◦C [27] پر برقرار رکھا گیا تھا۔ فرانز سیل ریسیپٹر چیمبر سے ہر ٹائم پوائنٹ (0.5، 1، 2، 4، 8، 12، 24، 36، اور 48 h) پر نمونے کا ایک ملی لیٹر نکالا گیا اور تازہ پی بی ایس (پی ایچ 7.4) کی مساوی مقدار کے ساتھ دوبارہ بھرا گیا۔ )۔ GSH2۔{34}}HA MN پیچ 1 گھنٹے کے بعد چوہے کی کھال سے ہٹا دیے گئے۔ GSH کی مقدار جو MN ٹپ سے جاری ہوئی تھی اور چوہے کی جلد کے ذریعے پھیلی ہوئی تھی اس کا تجزیہ HPLC نے اوپر بیان کردہ پروٹوکول کا استعمال کرتے ہوئے کیا۔ GSH کا پتہ 385 nm پر جاذبیت کی پیمائش سے لگایا گیا تھا اور منشیات کی حراستی کا اظہار mg میں کیا گیا تھا۔

2.13۔ شماریاتی تجزیہ

تمام نتائج کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے اور طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا جاتا ہے۔ اہمیت کی سطح p < 0.05 پر سیٹ کی گئی تھی۔

3. نتائج اور مباحثہ

3.1 ڈیوڈریز ایبل پولیمر کو منتخب کرنے کے لیے اسکریننگ ٹیسٹ

بدبو کی شدت کی بنیاد پر، مفت GSH اور GSH-biopolymer فارمولیشنوں کے خودکار انحطاط سے H2S کی رہائی کا اندازہ کرنے کے لیے اسکورنگ تجزیہ 1–5 کے پیمانے کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ یہ تجربہ کسی بھی جنس کے 10 تصادفی طور پر منتخب صحت مند رضاکاروں کو شامل کرکے انجام دیا گیا۔ ایک شدید بدبو کا تعلق H2S کی زیادہ مقدار اور اس کے برعکس تھا۔ جیلیٹن (4.75 ± 0.2) اور CS-GSH (3.25 ± 0.95) کی تمام ارتکاز (10–50 فیصد وزن کے لحاظ سے) فارمولیشنز نے زیادہ اسکور کیا ہے جبکہ HA-GSH (1.5 ± 0.35) نے اکیلے GSH سے کم اسکور کیا ہے (2.75 ± 0.61؛ شکل 1a)۔ جیلیٹن-GSH اور CS-GSH فارمولیشنز کے لیے اکیلے GSH کے مقابلے میں اعلی اسکور ان کی خصوصیت کی بدبو کے علاوہ جاری کیے گئے H2S کی بدبو کی وجہ سے تھے۔

بعد میں، گند کے اسکور کی بنیاد پر، جاری کردہ H2S (ppm میں) کا مقداری تخمینہ جی سی کے ذریعے مختلف ارتکاز میں GSH-HA تشکیل کے لیے کیا گیا۔ جاری کردہ H2S کی مقدار کم از کم 1۔{4}} فیصد اور 2.5 فیصد پائی گئی (0.55 ± 0۔{11}}1 اور {{13} }.49 ± 0۔{19}}3 پی پی ایم) اور زیادہ سے زیادہ 5۔{21}} فیصد (1۔{23}}3 ± 0۔{27} فارمولیشن میں GSH کا }1 ppm)۔ تمام ارتکاز میں، قدریں اکیلے GSH (0.59 ± 0 سے کم پائی گئیں۔{46}}3، 0.75 ± 0.04، اور 1.15 ± 0.05 برائے 1.0 فیصد، 2.5 فیصد، اور 5 فیصد جی ایس ایچ، بالترتیب؛ شکل 1b)۔ اس نتیجے کی وجہ یہ تھی کہ HA میں متبادل Na Plus GSH کے thiol گروپ کے ساتھ ضمنی شکل S1 میں دکھائے گئے رد عمل کے فارمولے کے ذریعے رد عمل ظاہر کرتا ہے۔ اس بات کی تصدیق کی گئی کہ بدبو میں کمی H2S (ضمنی اعداد و شمار S1) کی پیداوار میں کمی کی وجہ سے ہوئی ہے [28,29]۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ جیلیٹن اور سی ایس کے مقابلے HA کا بہتر ڈیوڈورنٹ اثر ہے، یہی وجہ ہے کہ اسے موجودہ مطالعے میں MNs کی من گھڑت بنانے کے لیے منتخب کیا گیا ہے۔ چونکہ جاری کردہ H2S کے لیے HA کی زیادہ سے زیادہ ڈیوڈورائزنگ کی صلاحیت 1.0 فیصد، 2.5 فیصد، اور 5.0 فیصد GSH-HA فارمولیشنز (شکل 1b) کے ساتھ دیکھی گئی تھی، ان تینوں ارتکاز کو MNs بنانے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔

3.2 Cytotoxicity اور Tyrosinase سرگرمی پر GSH کا اثر

MTT پرکھ کا استعمال اس بات کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا کہ آیا GSH HaCal کے لیے سائٹوٹوکسک ہے۔ ایک فلوروسینس ایکٹیویٹڈ سیل سارٹر (FACS) تجزیہ اینیکسن V کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، جو خاص طور پر سیل کی سطح PI پر تیز ہوا چلاتا ہے تاکہ اس بات کی تصدیق کی جا سکے کہ آیا اپوپٹوٹک یا نیکروٹک سیل کی موت دیکھی گئی ہے (30GSH کے ساتھ غصہ0 . annexin V کا استعمال کرتے ہوئے cytometry تجزیہ۔ HaCaT خلیوں کے 0, 0.1, 0.25, 0.5 یا 1 mgmL GSH میں 72 گھنٹے کے لیے نمائش کے نتیجے میں apoptosis کے ارتکاز پر منحصر انڈکشن (شکل 2b,c) GSH کی نمائش اپوپٹوٹک خلیات (7.90 جمع 102-13.99 جمع 0.37 فیصد میں نمایاں اضافہ کا سبب نہیں بنی۔ ) اور زندہ خلیوں کے تناسب میں کمی (88.38 جمع 1۔{29}}.81 جمع 0.67 فیصد ) گاڑیوں سے علاج کیے جانے والے خلیوں کے مقابلے (4.85 جمع 0.72 فیصد اور 90.47 جمع 0.93 فیصد apoptotic اور بالترتیب زندہ خلیات؛ شکل 2b،c) یہ نتائج بتاتے ہیں کہ GSH انسانی کیراٹینوسائٹس کے لیے زہریلا نہیں ہے اور اسے انسانی جلد پر محفوظ طریقے سے استعمال کیا جا سکتا ہے۔

ٹائروسینیز ایک انزائم ہے جو میلانین کی ترکیب کے لیے ذمہ دار ہے۔ GSH کے سفید ہونے والے اثرات کا اندازہ میلانین کی پیداوار دونوں کی روک تھام کی شرح اور melanogenesis میں ٹائروسینیز کی شرح کو محدود کرنے والے انزائم کی سرگرمی کی پیمائش کرکے کیا گیا۔ B16F10 خلیوں کو 10 uM KA اور GSH (0.1–1.0 mg/mL) کے ساتھ 4 گھنٹے کے لیے پہلے سے علاج کیا گیا اور پھر 72 گھنٹے کے لیے -MSH (1 µM) کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی۔ جی ایس ایچ کے علاج نے میلانین کی پیداوار کو نمایاں طور پر روکا جو -ایم ایس ایچ (شکل 3a) کے ذریعہ حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ اس تلاش سے، -MSH کی حوصلہ افزائی ٹائروسینیز سرگرمی (345.60 ± 18.29 فیصد GSH علاج نہیں) نمایاں طور پر 1 mg/mL GSH (شکل 3b) کے علاج میں فارماسیوٹکس کو 207 تک کم کر دیا گیا۔

3.3 GSH سے بھرے HA MNs اور ان کی مکینیکل پراپرٹیز کی تشکیل

GSH کو کم سے کم ناگوار طریقے سے پوری جلد میں پہنچانے کے لیے، ہم نے H2S کو کم کرنے کی صلاحیت کی بنیاد پر HA کو MN مواد کے طور پر منتخب کیا جس کی تصدیق ٹیسٹ اور گیس کرومیٹوگرافک ڈیٹا (شکل 1) سے ہوئی۔ HA اور GSH پر مشتمل MN تشکیل دینے والے حل GSH سے بھرے HA MN (GSH-HA MN) صفوں کی تیاری کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ صفوں کو گولی کے سائز کے گہاوں والے PDMS مولڈ کا استعمال کرتے ہوئے سالوینٹ کاسٹنگ طریقہ کے ذریعے تیار کیا گیا تھا۔ GSH-MN arrays (100 MNs/cm2 ) نے 770 ± 5 µm کی اونچائی کے ساتھ ایک یکساں پیٹرن کی نمائش کی، جس کا بنیادی قطر 172.25 ± 2.5 µm، اور ایک ٹپ قطر 7.8 ± 2.5 µm کے ایک ±4±4 کے ساتھ۔ (شکل 4a)۔ MN کی جیومیٹری کا تعین ایس سی پرت کے دخول کو یقینی بنانے اور GSH کی ٹرانسڈرمل ڈیلیوری کو کم سے کم ویسکولر یا نیورونل نقصان کے ساتھ کرنے کے لیے کیا گیا تھا تاکہ درخواست کی جگہ پر درد اور کیپلیری سے خون بہنے سے بچا جا سکے۔ GSH-HA MNs کی یکساں خصوصیات اس وقت حاصل کی گئیں جب 2.5 فیصد GSH پر مشتمل MN تشکیل دینے والے حل کا استعمال کرتے ہوئے MNs کو تیار کیا گیا تھا، لیکن کچھ جھکے ہوئے MNs کا مشاہدہ کیا گیا جب GSH (ضمنی اعداد و شمار S2) کے اعلی ارتکاز (5 فیصد) کے ساتھ تیار کیا گیا۔

GSH-HA MNs کی مکینیکل خصوصیات کو کمپریشن موڈ میں جانچا گیا۔ UTM کی نچلی سطح پر cyanoacrylate گلو کے ساتھ چسپاں ایک واحد MN کو مشین کی اوپری گرفت کا استعمال کرتے ہوئے 0.1 ملی میٹر فی منٹ کی شرح سے منسلک فلیٹ میٹل پلیٹ کے ذریعے محوری طور پر کمپریس کیا گیا تھا (شکل 4a–c) . پیداواری قوت، یا کسی مادے کو اپنی لچک کھونے کے لیے درکار قوت، 0.25، 0.39، اور 0.4{{1{{17} کا تعین کیا گیا تھا۔ }}}} N ±0 کے انحراف کے ساتھ۔ MNs، بالترتیب (شکل 4d)۔ اندراج کی قوت 0.36 ± 0 پائی گئی تھی۔ }}HA MNs، اور GSH2۔{32}}HA MNs، بالترتیب۔ پیداواری قوت اور اندراج کی قوت دونوں بغیر کسی فریکچر، مسخ، یا بافتوں کے انحطاط کے بغیر پورسین جلد میں MNs کے داخل کرنے کے لیے کافی پائی گئیں۔

3.4 GSH-HA MNs کے وٹرو تحلیل ٹیسٹ میں

بائیو پولیمر کی تحلیل کا وقت منشیات کی رہائی کے انداز اور کسی بھی تشکیل کے لیے کارروائی کے آغاز کا تعین کرتا ہے۔ GSH کی رہائی کے لیے درکار وقت کی پیشین گوئی کرنے کے لیے، ایک واحد MN (GSH, 5-HA) خنزیر کی جلد میں داخل کیا گیا تھا، جو ساختی طور پر انسانی جلد سے ملتی جلتی ہے۔ مائکروسکوپک تجزیہ نے MNs کی وقت پر منحصر تحلیل کو ظاہر کیا۔ GSH-MNs کو جلد پر 12 منٹ تک لگانے کے بعد، MN کے اشارے مکمل طور پر تحلیل ہو گئے، جس نے اس کی تیزی سے رہائی کا نمونہ شروع کیا (شکل 5a، b)۔ GSH 5-HA MN پیچ کی جلد میں دخول کی تصدیق کرنے کے لیے، روڈامین ڈائی سے لدے MN پیچ (1.5 x 1.5 سینٹی میٹر) 1 منٹ کے لیے 20 N کے اندراج کی قوت کے ساتھ پورکین جلد پر لگائے گئے۔ ڈائی سے بھرے ہوئے MN پیچ کو ہٹانے کے بعد، ہم نے ہر سوئی کے مطابق رنگ کے دھبوں کی ایک صف کا مشاہدہ کیا، جس سے جلد میں GSH 5-HA MNs کے داخل ہونے کی تصدیق ہوتی ہے (شکل 5c)۔

لوڈنگ کی گنجائش سے مراد منشیات کی زیادہ سے زیادہ مقدار ہے جو ڈیلیوری کیریئر کے تابع ہوسکتی ہے اور اس کی لوڈنگ کی کارکردگی کا تعین کرتی ہے۔ GSH-HA MN پیچ کی لوڈنگ کی صلاحیت کو MN ٹپس میں لوڈڈ ڈرگ (GSH) کے بڑے پیمانے پر GSH-HA MN ٹپس کے کل ماس سے تقسیم کیا جاتا ہے۔ لوڈنگ کی کارکردگی کو جانچنے کے لیے، GSH سے بھری ہوئی MN ٹپس کو PBS (pH 7.4) میں کاٹ کر تحلیل کر دیا گیا، اور HPLC کے ذریعے ٹپس میں لوڈ GSH کی مقدار کا تجزیہ کیا گیا۔ 100 MN ٹپس میں GSH کی لوڈنگ کی مقدار {{10}.29 ± {{20}} تھی۔{36}}3۔ mg اور 0.56 ± 0.03 mg برائے GSH1-HA MN پیچ اور GSH2۔{16}HA MN پیچ، بالترتیب۔ GSH-MN ٹپس (100 MNs, 2 ± 0.2 mg) کے کل ماس کو دیکھتے ہوئے، لوڈنگ کی گنجائش 11.26 ± 1.24 فیصد اور 21.33 ± 1.13 فیصد تھی جبکہ encapsulation کی کارکردگی 8.36 ± 0.92 فیصد اور .60 ± 0.92 فیصد پائی گئی۔ GSH1-HA MN اور GSH2۔{40}}HA MNs، بالترتیب (ٹیبل 1)۔ MN بنانے والے حل میں HA: GSH وزن کا تناسب (10:1 یا 10:2.5) اور MN پیچ میں GSH کی لوڈنگ کی گنجائش کے درمیان ایک جیسی قدریں MN پیچ میں GSH کی یکساں تقسیم کی تجویز کرتی ہیں۔

3.5 GSH-HA MN پیچ کا Ex Vivo Skin Permeation ٹیسٹ

GSH،5-HA MNs سے GSH کی رہائی کی مدت کے ساتھ ساتھ آغاز کا اندازہ لگانے کے لیے، فرانز سیل کا مطالعہ 48 گھنٹے کے لیے ایس ڈی چوہے کی جلد کو مصنوعی جسمانی حالات کے تحت رکھ کر کیا گیا تھا (شکل 6)۔ GSH 5-HA MNs نے ابتدائی کے لیے نسبتاً تیز لکیری ریلیز کینیٹکس دکھایا12 گھنٹے بعد وقت کے ساتھ ریلیز کی سست رفتار۔

MN کی درخواست کے بعد جلد پر پھیلی ہوئی GSH مقدار تجربے کے ابتدائی 12 گھنٹے کے لیے ~ 1.4 ملی گرام تھی اور 48 گھنٹے کے لیے 1.6 ملی گرام تک پہنچ گئی۔ MN ٹپس میں بھری ہوئی رقم سے زیادہ GSH کی مقدار ڈیلیور کی گئی۔ اس رقم میں نہ صرف GSH2 میں بھری ہوئی GSH شامل ہے۔{7}}HA MN ٹپس بلکہ GSH کو بھی منشیات کے ذخائر کے طور پر بنیادی تہہ میں شامل کیا گیا ہے۔ اس کے برعکس، GSH-HA محلول آہستہ آہستہ کم مقدار میں پہنچایا گیا (~0.2 ملی گرام) جی ایس ایچ کی جلد کی خرابی کی وجہ سے۔ جیسا کہ carboxymethylcellulose اور trehalose کے ذریعے تیار کردہ MNs کا استعمال کرتے ہوئے انسانی نمو کے ہارمون کی ٹرانسڈرمل ڈیلیوری نے MN ایپلی کیشن کے بعد ایک مختصر tmax (~ 30 منٹ) کا مظاہرہ کیا اور SC انجیکشن [19] کے ساتھ ملتے جلتے فارماکوکینیٹک پروفائلز کی نمائش کی، GSH-HA پیچ تیز پانی کے ساتھ۔ سیسٹیمیٹک GSH ڈیلیوری کے لیے جذب خصوصیات لاگو ہوں گی۔ وٹرو اسٹڈی کی بنیاد پر، 1 mg/mL GSH کے علاج نے میلانین کی پیداوار اور ٹائروسینیز کی سرگرمی کو نمایاں طور پر روک دیا۔ جلد میں بیچوالا سیال کے چھوٹے حجم (~ 150 µL/cm2 ) کو مدنظر رکھتے ہوئے [31]، HA MN پیچ (1.6 mg GSH/1 cm2 MN پیچ) کے ذریعے مقامی طور پر فراہم کردہ GSH MN تحلیل کے عمل کے دوران ایک اینٹی آکسیڈینٹ ایجنٹ کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ چونکہ MNs میں بھری ہوئی GSH کے ریلیز کینیٹکس کو MN مواد [32,33] کے کراس لنکنگ کثافت سے کنٹرول کیا جا سکتا ہے، اس لیے ایک سوجن والا MN پلیٹ فارم کم سے کم ضمنی اثرات کے ساتھ GSH کی موثر ترسیل کے لیے فائدہ مند ہوگا۔

4. نتائج

ڈیوڈورائزنگ صلاحیت (اسکور ویلیو) اور GC کے نتائج کی بنیاد پر، ہم نے GSH کی بو کے بغیر ٹرانسڈرمل ڈیلیوری کے لیے بائیوڈیگریڈیبل MN پیچ تیار کرنے کے لیے HA کا انتخاب کیا۔ HA نے GSH کی بدبو کو جیلیٹن اور CS سے زیادہ مؤثر طریقے سے چھپا لیا۔ HA-MNs پیچ (GSH2۔{2}}HA) میں اتنی پائیداری تھی کہ وہ بغیر کسی نقصان کے جلد میں داخل ہو سکے۔ HA-MNs پیچ (GSH1-HA اور GSH2۔{6}}HA) سے GSH کی رہائی ایک مقررہ مدت میں یکساں پائی گئی، جیسا کہ متعلقہ تجربات سے دکھایا گیا ہے۔ سائٹوٹوکسک اور ٹائروسینیز انحیبیٹری اسٹڈیز نے ظاہر کیا کہ جی ایس ایچ کی 1 ملی گرام/ ایم ایل کی حراستی جلد کو سفید کرنے کے مقاصد کے لیے محفوظ اور موثر ہے۔ مجموعی طور پر، GSH کی ٹرانسڈرمل ڈیلیوری کے لیے ایک امید افزا پلیٹ فارم کے طور پر تیار کردہ HA MN پیچ کی فزیبلٹی کو اس تحقیق میں دعویٰ کیے گئے تجرباتی اعداد و شمار کی بنیاد پر ظاہر کیا گیا ہے جن میں خطرناک یا ناقابل قبول آرگنولیپٹک خصوصیات ہیں۔

اضافی مواد:

شکل S1: بدبو میں کمی پر سوڈیم ہائیلورونیٹ کا اثر، شکل S2: GSH5 -HA MN اری امیجز۔

مصنف کی شراکتیں:

تصوراتی، YL، Y.-SJ، اور SYY؛ طریقہ کار، YL، SHK، K.-YS، اور SK؛ ڈیٹا کیوریشن، سی کے، اور ایچ ایل؛ تحریر—اصل مسودہ، YL، SK، SYY؛ جائزہ اور ترمیم، SK، Y.-SJ، K.-YS، اور SYY؛ نگرانی، SYY تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔

فنڈنگ:

اس تحقیق کو نیشنل ریسرچ فاؤنڈیشن آف کوریا (NRF) کے ذریعے تعاون کیا گیا جس کی مالی اعانت وزارت سائنس اور ICT (NRF-2018R1A4A1025623)، اور نیشنل کریٹیو ریسرچ انیشیٹو پروگرام کے ذریعے نیشنل ریسرچ فاؤنڈیشن آف کوریا (NRF) کے ذریعے کی گئی۔ وزارت سائنس، آئی سی ٹی اور مستقبل کی منصوبہ بندی (NRF-2017R1D1A3B03035360) کے ذریعے مالی اعانت فراہم کی گئی۔

مفادات میں تضاد:

SYY بغیر بو کے GSH کاسمیٹک مصنوعات تیار کرنے والی کمپنی (SNVIA) کو لائسنس یافتہ پیٹنٹ کا موجد ہے۔ مفادات کے اس ممکنہ ٹکراؤ کا انتظام پوسن نیشنل یونیورسٹی کرتی ہے۔

حوالہ جات

1. Forman, HJ; ژانگ، ایچ. Rinna, A. Glutathione: اس کے حفاظتی کرداروں، پیمائش اور حیاتیاتی ترکیب کا جائزہ۔ مول ایس پی میڈ. 2009، 30، 1-12۔ [کراس ریف]۔

2. ہیز، جے ڈی؛ میک لیلن، LI Glutathione اور glutathione پر منحصر انزائمز آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مربوط طور پر منظم دفاع کی نمائندگی کرتے ہیں۔ فری ریڈک۔ Res. 1999، 31، 273–300۔ [کراس ریف]۔

3. رحمان، I.؛ کوڈ، اے. بسواس، انزیمیٹک ری سائیکلنگ کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے گلوٹاتھیون اور گلوٹاتھیون ڈسلفائیڈ لیول کے مقداری تعین کے لیے ایس کے پرکھ۔ نیٹ پروٹوک 2006، 1، 3159۔ [کراس ریف]۔

4. Yano, H. چاول کے بیٹر کی روٹی بنانے کی خوبیوں میں آکسائڈائزڈ اور کم شدہ گلوٹاتھیون کا موازنہ۔ جے فوڈ سائنس 2012، 77، C182–C188۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

5. Weschawalit, S.; Thongthip, S.; پھترکول، پی. آسوانونڈا، پی گلوٹاتھیون اور اس کے اینٹی ایجنگ اور اینٹی میلانوجینک اثرات۔ کلین کاسمیٹ۔ تفتیش کریں۔ ڈرمیٹول 2017، 10، 147۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

6. ولاراما، سی ڈی؛ مائبچ، ایچ آئی گلوٹاتھیون بطور ڈیپگمنٹنگ ایجنٹ: ایک جائزہ۔ انٹر جے کاسمیٹ۔ سائنس 2005، 27، 147–153۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

7. ارجن پٹھانا، این۔ اساوونڈا، پی گلوٹاتھیون بطور زبانی سفید کرنے والے ایجنٹ: ایک بے ترتیب، ڈبل بلائنڈ، پلیسبو کنٹرول شدہ مطالعہ۔ J. ڈرمیٹول علاج کریں۔ 2012، 23، 97–102۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

8. ڈروج، ڈبلیو. Breitkreutz، R. Glutathione اور مدافعتی فعل۔ پروک نٹر Soc 2000، 59، 595–600۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

9. پیٹرک، ایل مرکری زہریلا اور اینٹی آکسیڈینٹ: حصہ 1: مرکری زہریلا کے علاج میں گلوٹاتھیون اور الفا لیپوک ایسڈ کا کردار۔ متبادل میڈ. Rev. 2002, 7, 456–472.

10. چن، جے زیڈ؛ کدلبر، ایف ایف گلوکوما روگجنن کا ایک نیا اشارہ۔ ایم۔ جے میڈ 2003، 114، 697–698۔ [کراس ریف]۔

11. حسن، MQ؛ ہادی، رضی اللہ عنہ؛ الراوی، زیڈ ایس؛ پیڈرون، VA؛ Stohs, SJ رمیٹی سندشوت کے روگجنن میں گلوٹاتھیون دفاعی نظام۔ J. Appl ٹاکسیکول۔ 2001، 21، 69-73۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

12. سیونگ، کے وائی؛ SEO، MS؛ ہوانگ، ڈی وائی؛ O'Cearbhaill, ED; سرینن، ایس. کارپ، جے ایم؛ یانگ، ایس وائی انسولین کی کنٹرول شدہ ٹرانسڈرمل ترسیل کے لیے خود کو ماننے والا، گولی کے سائز کا مائکروونیڈل پیچ۔ جے کنٹرول۔ ریلیز 2017، 265، 48–56۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

13. جن، جے؛ Zhu, LL; چن، ایم. Xu, HM; وانگ، ایچ ایف؛ فینگ، ایکس کیو؛ Zhu, XP; Zhou, Q. انٹراوینس، انٹرا مسکیولر، اور سبکیوٹینیئس انجیکشن کے حوالے سے ادویات کے انتظام کے راستے کا بہترین انتخاب۔ مریض کو ترجیح دیتے ہیں۔ تعمیل 2015، 9، 923–942۔ [پب میڈ]۔

14. Bouwstra, JA; ہنی ویل-نگوین، پی ایل؛ گورس، جی ایس؛ Ponec, M. جلد کی رکاوٹ کا ڈھانچہ اور اس کی ماڈیولیشن بذریعہ ویسکولر فارمولیشن۔ پروگرام لپڈ ریس 2003، 42، 1–36۔ [کراس ریف]۔

15. جسکوٹ، ڈبلیو. رینڈولف، ٹی ڈبلیو؛ وولکن، ڈی بی؛ Middaugh, CR; Schöneich، C.؛ موسم سرما، جی؛ فرائز، ڈبلیو. Crommelin, DJ; کارپینٹر، جے ایف پروٹین کی عدم استحکام اور امیونوجنیسیٹی: مستقل رہائی کے لیے انجیکشن ایبل پروٹین ڈیلیوری سسٹم کے کلینیکل استعمال میں رکاوٹ۔ جے فارم۔ سائنس 2002، 101، 946-954۔ [کراس ریف]۔

16. لیو، ایس. جن، ایم این؛ کوان، وائی ایس؛ کامیاما، ایف۔ Katsumi، H.؛ ساکن، ٹی. یاماموتو، اے۔ ہائیلورونک ایسڈ سے من گھڑت ناول مائیکرونیڈل صفوں کی نشوونما اور خصوصیات، اور انسولین کی ٹرانسڈرمل ترسیل میں ان کا اطلاق۔ جے کنٹرول۔ ریلیز 2012، 161، 933–941۔ [کراس ریف]۔

17. وانگ، سی. ہاں، وائی۔ ہوچو، جی ایم؛ صادق غفار، ایچ. Gu, Z. اینٹی PD1 اینٹی باڈی کی مائیکرونیڈل پیچ کی مدد سے ڈیلیوری کے ذریعے بہتر کینسر امیونو تھراپی۔ نینو لیٹ۔ 2016، 16، 2334–2340۔ [کراس ریف]۔

18. Dassanayake، RS؛ آچاریہ، ایس. عابدی، N. پولی سیکرائڈز سے بایوپولیمر پر مبنی مواد: خواص، پروسیسنگ، خصوصیت، اور چھانٹنے کی ایپلی کیشنز۔ ایڈوانسڈ سورپشن پروسیس ایپلی کیشنز میں؛ Edebali, S., Ed.; IntechOpen: لندن، برطانیہ، 2018؛ صفحہ 1-24۔

19. لی، جے ڈبلیو؛ چوئی، ایس او؛ فیلنر، ای آئی؛ پراسنِٹز، انسانی نمو کے ہارمون کی ٹرانسڈرمل ترسیل کے لیے MR تحلیل کرنے والا مائیکرونیڈل پیچ۔ چھوٹا 2011، 7، 531–539۔ [کراس ریف]۔

20. ڈونیلی، آر ایف؛ سنگھ، ٹی آر آر؛ گارلینڈ، ایم جے؛ Migalska, K.; مجیٹھیا، آر۔ McCrudden, CM; کول، پی ایل؛ محمود، ٹی ایم ٹی؛ McCarthy، HO؛ وولفسن، AD ہائیڈروجیل بنانے والی مائیکرونیڈل صفوں کو بہتر ٹرانسڈرمل منشیات کی ترسیل کے لیے۔ Adv. فنکشن میٹر 2012، 22، 4879–4890۔ [کراس ریف]۔

21. کم، جے ڈی؛ کم، ایم؛ یانگ، ایچ. لی، کے؛ جنگ، H. بوند بوند سے پیدا ہوا ہوا اڑانا: ناول تحلیل کرنے والا مائکروونیڈل فیبریکیشن۔ جے کنٹرول۔ ریلیز 2013، 170، 430–436۔ [کراس ریف]۔

22. کم، ایچ. سیونگ، کے وائی؛ لی، جے ایچ؛ پارک، ڈبلیو. یانگ، SY؛ ہان، ایس کے بائیوڈیگریڈیبل مائیکرونیڈل پیچ جو کینسر کے امیونو تھراپی کے لیے اینٹی جینک پیپٹائڈ-ہائیلورونیٹ کنجوگیٹ فراہم کرتا ہے۔ ACS بائیو میٹر۔ سائنس انج. 2019، 5، 5150–5158۔ [کراس ریف]۔

23. ڈو، ایکس۔ گانا، ایم. Rouseff, R. نئے اسٹرابیری سلفر کے اتار چڑھاؤ اور پختگی کے دوران تبدیلیوں کی شناخت۔ جے ایگرک فوڈ کیم۔ 2011، 59، 1293–1300۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

24. Boczkaj, G.; کامنسکی، ایم؛ Przyjazny, A. pulsed flame photometric detection (GC-PFPD) کے ساتھ گیس کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے پوسٹ آکسیڈیٹیو فلوینٹس کے آکسیڈیشن کائینیٹکس کا کنٹرول اور تفتیش۔ Ind. Eng. کیم Res. 2010، 49، 12654–12662۔ [کراس ریف]۔

25. ڈیوس، ایس پی؛ لینڈیس، بی جے؛ ایڈمز، زیڈ ایچ؛ ایلن، ایم جی؛ پراسنٹز، ایم آر جلد میں مائیکرونیڈلز کا اندراج: اندراج کی قوت اور سوئی کے فریکچر فورس کی پیمائش اور پیش گوئی۔ J. Biomech. 2004، 37، 1155–1163۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

26. چندر شیکھرن، اے. ہوانگ، وائی جے؛ سیونگ، کے وائی؛ پارک، ایس. کم، ایس. یانگ، ایس وائی ایسڈ سے علاج شدہ پانی میں گھلنشیل چائٹوسن مائکروونیڈل کی مدد سے انٹرا کیوٹینیئس دوائیوں کی ترسیل کے لیے موزوں ہے۔ فارماسیوٹکس 2019, 11, 209۔ [CrossRef] [PubMed]۔

27. کم، بی. سیونگ، کے وائی؛ آپ، میں؛ سیلواراج، وی. یم، ایس جی؛ O'Cearbhaill, ED; جیونگ، یو۔ یانگ، SY ٹچ ایکٹیویٹڈ ٹرانسڈرمل ڈیلیوری پیچ مقداری جلد کے پرمیشن کنٹرول کے لیے۔ سینس ایکچیوٹرز بی کیم۔ 2018، 256، 18-26۔ [کراس ریف]۔

28. جینسن، GA؛ ایڈمز، ڈی ایف؛ سٹرن، ایچ۔ ہائیڈروجن سلفائیڈ اور میتھائل مرکاپٹن کو کمزور گیس کے مرکب سے جذب کرنا۔ J. فضائی آلودگی۔ کنٹرول ایسوسی ایشن 1966، 16، 248–253۔ [کراس ریف]۔

29. اوندا، K.؛ ٹیکوچی، ایچ. کوبایشی، ٹی. یوکوٹا، K. آبی سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ حل میں ہائیڈروجن سلفائیڈ اور کاربن ڈائی آکسائیڈ کا بیک وقت جذب۔ جے کیم انج. جے پی این۔ 1972، 5، 27-33۔ [کراس ریف]۔

30. کباکوف، اے ای؛ گاوائی، وی ایل سیل کی موت اور بقا کے اسیس۔ Chaperones میں؛ Humana پریس: نیویارک، نیویارک، امریکہ، 2018؛ صفحہ 107-127۔

31. سامت، پی پی؛ پراسنِٹز، MR میکانزم مائیکرونیڈل پیچ کا استعمال کرتے ہوئے جلد سے بیچوالا سیال کے نمونے لینے کا۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 2018, 115, 4583–4588۔ [کراس ریف]۔

32. یانگ، SY؛ O'Cearbhaill, ED; سِسک، جی سی؛ پارک، کلومیٹر؛ چو، ڈبلیو کے؛ ولیگر، ایم؛ بوما، بی ای؛ Pomahac، B.؛ کارپ، جے ایم بایو سے الہام شدہ سوجن ایبل مائکروونیڈل چپکنے والی ٹشو کے ساتھ مکینیکل انٹرلاکنگ کے لیے۔ نیٹ کمیون 2013، 4، 1702۔ [کراس ریف]۔

33. مجددی، ای ایم؛ کورٹینی، اے جے؛ ٹیککو، آئی اے؛ McCrudden, MT; کیرنی، ایم سی؛ McAlister, E.; McCarthy، HO؛ ڈونیلی، آر ایف ہائیڈروجیل بنانے والے مائیکرونیڈلز میٹفارمین ہائیڈروکلورائیڈ کی ٹرانسڈرمل ترسیل کو بڑھاتے ہیں۔ جے کنٹرول۔ ریلیز 2018، 285، 142–151۔ [کراس ریف] [پب میڈ]۔

یچن لی 1، سوجیت کمار 1، سو ہیون کم 2، کیوم یونگ سیونگ 1، ہیسیون لی 1، چیرین کم 1، ینگ سک جنگ 2،* اور سیونگ یون یانگ 1،*

1 ڈیپارٹمنٹ آف بائیو میٹریل سائنس، لائف اینڈ انڈسٹری کنورجینس انسٹی ٹیوٹ، پوسن نیشنل یونیورسٹی، میریانگ 50463، کوریا۔

2 کالج آف فارمیسی، پوسن نیشنل یونیورسٹی، بوسان 46241، کوریا۔

موصول ہوا: 31 دسمبر 2019؛ منظور شدہ: 22 جنوری 2020؛ اشاعت: 27 جنوری 2020

For more information:1950477648nn@gmail.com