اومیگا-3 فیٹی ایسڈز SIRT1/3 کو اپریگولیٹ کرتے ہیں، ڈیسیٹیلیشن کے ذریعے PGC-1 کو چالو کرتے ہیں، اور 5/6 Nephrectomy Rat ماڈل میں Nrf1 کی پیداوار کو دلاتے ہیں۔
Mar 10, 2022
تعارف
گردےمتعدد افعال کو منظم کرنے میں ملوث ہیں، بشمول مختلف میٹابولک راستے، پانی اور الیکٹرولائٹ توازن، بلڈ پریشر کنٹرول، اور کئی ہارمونز کی پیداوار۔ چونکہ یہ افعال بہت زیادہ توانائی استعمال کرتے ہیں،گردےمائٹوکونڈریا سے بھرپور ہوتے ہیں [1]۔ مائٹوکونڈریا صحت مند مائٹوکونڈریل آبادی کو برقرار رکھنے کے لیے ریپامائسن (ایم ٹی او آر) اور اے ایم پی ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (اے ایم پی کے) کے ذریعے غذائیت سے متعلق سینسنگ راستوں کو منظم کرنے کے ذریعے مختلف میٹابولک حالات کے مطابق ڈھال سکتا ہے۔ مائٹوکونڈریا پر ہونے والے مطالعات میں، آج تک، مائٹوکونڈریل بایوجنسیس پر صرف چند مطالعات ہیں۔ مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس سے متعلق زیادہ تر مطالعات غیر پر مبنی ہیں۔گردوںٹشو [3,4]، اور مطالعہگردےبنیادی طور پر شدید سے متعلق ہیںگردے کی چوٹ(AKI) جانوروں کے ماڈل، قریبی نلی نما خلیات، اور ذیابیطس نیفروپیتھی [5–7]۔ اگرچہ mitochondrial biogenesis غیر ذیابیطس دائمی میں mitochondrial dysfunction کے روگجنن سے منسلک ہو سکتا ہےگردے کی بیماری (CKD)، اس موضوع پر تحقیق بھی بہت محدود ہے۔ CKD اور mitochondrial biogenesis کا تعلق قلبی بیماری [8,9] سے ہے۔ mitochondrial biogenesis کو بہتر بنانا CKD میں کارڈیو پروٹیکشن کے لیے فائدہ مند ہو سکتا ہے۔ ایک مطالعہ جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ اومیگا-3 فیٹی ایسڈز (FAs) مائٹوکونڈریا کے بائیو جینیسس کو آسان بناتے ہیں غیرگردہٹشوز [3,10]۔ ایک حالیہ مطالعہ نے قلبی اور نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں والے جانوروں کے ماڈلز میں مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس میں اومیگا-3 FAs کے امید افزا کردار کو ظاہر کیا ہے [11]۔ لہذا، موجودہ مطالعہ میں، ہم نے مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس کی تحقیقات کرنا ہےگردے5/6 nephrectomy (Nx) چوہوں کا۔ مزید برآں، ہم نے اس ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے مائٹوکونڈریل بایوجنسیس پر اومیگا-3 FAs کے اثر کا جائزہ لیا۔
مطلوبہ الفاظ:جوہری سانس کا عنصر 1؛ جوہری عنصر erythroid 2-متعلقہ عنصر 2؛ sirtuin 1; sirtuin 3; اومیگا-3 فیٹی ایسڈ؛ گردے، گردوں
CISTANCHE گردے/ گردوں کی بیماری کو بہتر کرے گا۔
2. نتائج
2.1 گردے کے فنکشن اور ہسٹولوجیکل نتائج میں تبدیلیاں
کنٹرول گروپ کے مقابلے، اومیگا{{0}} ایف اے گروپوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx اور Nx میں یوریا نائٹروجن (BUN) کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا (کنٹرول گروپ 17.7 ±1.5، Nx گروپ 77.7 土 28.4، اور ٹائٹ omega-3 FA گروپ 63.9 土 17 کے ساتھ۔{18}} mg/dL، p = 0۔ اگرچہ اومیگا-3 FA گروپوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx اور Nx کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا، لیکن Omega-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں BUN کی سطح عددی طور پر کم تھی۔ تین گروپوں میں سیرم کریٹینائن (sCr) کی سطح BUN (کنٹرول گروپ، 0.4 ویں 0.U؛ Nx گروپ، 1.3 土 0.6؛ اومیگا-3 FA، 1.0 ± کی طرح تھی۔ 0.3 mg/dL؛ y=0.008)۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، Nx گروپ (ضمنی اعداد و شمار S1) میں پی اے ایس سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے شدید نلی نما بازی اور ایٹروفی دیکھی گئی۔ مزید برآں، نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اومیگا-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں Nx گروپ کے مقابلے میں کم ٹیوبلوانٹرسٹیٹل تبدیلیاں دکھائی دیتی ہیں۔ دیگردوں کی تقریباور تینوں گروہوں میں ہسٹولوجیکل تبدیلیاں پہلے ہی پچھلے مطالعہ میں رپورٹ کی جا چکی ہیں [12]۔
Mitochondrial Biogenesis سے متعلق عوامل میں 22 تبدیلیاں
2.2.1 Nrf1 اور Nrf2 اظہار۔کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، Nx گروپ نے جوہری تنفس کے عنصر 1 (Nefl) اور جوہری عنصر erythroid 2- متعلقہ عنصر 2 (Nrf2) کے اظہار کی سطح میں نمایاں کمی ظاہر کی۔ تاہم، اومیگا-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں، Nx گروپ کے مقابلے Nrf1 اور Nrf2 کے اظہار کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا، لیکن کنٹرول گروپ کی سطح تک نہیں پہنچا (Oigure P، سپلیمنٹری فگر St) . یہ نتائج cn Nrf1 mRNA مقداری ریئل ٹائم PCR تجزیہ (ضمنی اعداد و شمار S3) بھی پائے گئے۔
2.2.3 PGC-1 سرگرمی سے متعلق عوامل کا اظہار: pAMPK, SIRT1/3۔کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، اومیگا-3 گروپوں کے ساتھ علاج کیے گئے Nx اور Nx میں فاسفوریلیٹڈ AMPK (کدو کا AMPK کا تناسب) (شکل 3A) کی نمایاں طور پر نچلی سطح کی نمائش ہوئی۔ مزید یہ کہ، Nx گروپ نے کنٹرول گروپ (شکل 3B، ضمنی اعداد و شمار S6) کے مقابلے میں نمایاں طور پر sirtuin 1 (SIRT1) اظہار کی نچلی سطح کی نمائش کی۔ تاہم، omega-3 FA کے اضافے کے بعد، SIRT1 اظہار میں نسبتاً اضافہ ہوا، لیکن یہ فرق اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھا۔ یہ نتائج SIRT1 mRNA مقداری ریئل ٹائم PCR تجزیہ (ضمنی اعداد و شمار S7) میں پائے گئے۔ اس کے برعکس، کنٹرول گروپ کے مقابلے Nx گروپ میں sirtuin 3 (SIRT3) کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی، جسے Omega-3 FA گروپ (شکل 3C) کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں نمایاں طور پر بچایا گیا۔
2.2.4 کیپ 1، ایم ٹی او آر، فاکس او 1، اور فوکس او 3 ایکسپریشن، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، کیلچ نما ای سی ایچ سے وابستہ پروٹین 1 (کیپ1) اور فورک ہیڈ باکس پروٹین O1 اور O3 (FoxO1/3) کے اظہار میں Nx گروپ میں نمایاں اضافہ ہوا تھا۔ . اومیگا-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں، Keap1 اور FoxO1/3 کے اظہار کی سطح Nx گروپ (شکل 4C,E,F) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوئی تھی۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، Nx گروپ میں ایم ٹی او آر کے اظہار میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ تاہم، اومیگا-3 ایف اے گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں، ایم ٹی او آر اظہار کو بچایا گیا تھا لیکن کنٹرول گروپ میں سطح تک نہیں پہنچا تھا (شکل 4B)
2.2.5 Mitochondrial DNA (mtDNA) کا مواد، کنٹرول گروپ کے مقابلے Nx گروپ میں mtDNA کی نمایاں کمی دیکھی گئی۔ تاہم، MtDNA کی کمی کی مقدار Nx-treated omega-3 Nx گروپ (ضمنی شکل S9) میں نمایاں طور پر برآمد ہوئی۔
3. بحث
PGC-1، جو فاسفوریلیشن اور ڈیسیٹیلیشن کے ذریعے فعال ہوتا ہے، مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس اور توانائی کی پیداوار کا ماسٹر ریگولیٹر ہے۔ ہم نے CKD ماڈل میں PGC-1 کے اظہار اور deacetylation میں کمی دیکھی۔ یہ قابل ذکر ہے کہ PGC-1 ڈیسیٹیلیشن میں کمی ایک اہم طریقہ کار ہے جو غیر فعال مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس اور CKD میں توانائی کی پیداوار میں کمی کا باعث ہے۔ AMPK PGC-1 کو فاسفوریلیٹ کرنے کے ذریعے اس کے تھرونائن یا سیرین کی باقیات کو چالو کرتا ہے [13,14]۔ جب AMP/ATP تناسب زیادہ ہوتا ہے تو AMPK فاسفوریلیشن پر بھی چالو ہوتا ہے۔ تاہم، AMPK کو CKD میں غیر فعال ہونے کے لیے جانا جاتا ہے کیونکہ اس کی وجہ اعلی AMP لیولز [15,16] کی خراب سینسنگ ہے۔ پچھلے مطالعات کی طرح، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ AMPK فاسفوریلیشن میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی تھی۔گردہNx گروپ کے ٹشو۔ اگرچہ Nx گروپ میں pPGC-1/PGC-1 ایک خاص حد تک بڑھتا ہوا دکھائی دیتا ہے، لیکن اس بات کا امکان نہیں ہے کہ PGC-1 فاسفوریلیشن کی سطح PGC میں کمی کی وجہ سے بڑھی ہو{{3} }} اظہار. مزید برآں، اومیگا-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx نے بھی Nx گروپ کی طرح کے نتائج دکھائے، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ اومیگا-3 FA انتظامیہ نے AMPK اور PGC کے فاسفوریلیشن کو متاثر نہیں کیا{{6} } ڈیسیٹیلیشن PGC-1 کے پورے تسلسل میں ہو سکتا ہے، اور SIRT1 اور 3 ڈیسیٹیلیشن کے عمل میں اہم کردار ادا کرتے ہیں [13,14]۔ اومیگا-3 ایف اے ایڈمنسٹریشن کے بعد، PGC-1، SIRT1، اور 3 کے اظہار کی سطح میں اضافہ ہوا، جس کے نتیجے میں deacetylated PGC-1 کو عام کنٹرول گروپ کی سطح پر بچایا گیا۔ . Nrf1 اور Nrf2 کی ایکسپریشن لیول میں بچاؤ، جو کہ اومیگا-3 FA گروپ کے ساتھ علاج کیے جانے والے Nx میں ظاہر ہوتا ہے، اس کا براہ راست تعلق SIRT1 اور 3 ایکسپریشن لیول میں اضافے سے ہے، جس کی وجہ سے PGC کی مزید خرابی ہوئی۔ {22}}
CISTANCHE کڈنی/رینل فنکشن کو بہتر کرے گا۔
میں مائٹوکونڈریا پر حالیہ مطالعاتگردے کی بیمارینے دکھایا ہے کہ جینیاتی یا فارماسولوجیکل مداخلتوں کے ذریعے PGC- 1 یا SIRT اظہار کی سطح میں اضافہ بہتر ہواگردے کا نقصانAKI جانوروں کے ماڈلز میں [5–7,17,18]۔ بنیادی میکانزم میں ایف اے آکسیڈیشن یا اینٹی آکسیڈیٹیو ردعمل میں بہتری کا اثر شامل ہے۔ پچھلے مطالعے میں بتایا گیا ہے کہ اومیگا-3 ایف اے انتظامیہ نے مائٹوکونڈریل ایف اے بیٹا آکسیڈیشن کو بہتر بنایا اور 5/6 Nx چوہا ماڈل میں اینٹی آکسیڈینٹ اثرات کی نمائش کی [19]۔ ایسی رپورٹیں بھی ہیں جو تجویز کرتی ہیں کہ اومیگا-3 FA پٹھوں کے خلیوں، میکروفیجز، اور اعصابی خلیوں میں PGC-1، Nrf1، اور SIRT1 کے اظہار کو بڑھاتا ہے [3,10,11]۔ چونکہ CKD ماڈل میں مائٹوکونڈریا پر اومیگا-3 FAs کے اثرات کی ابھی تک اطلاع نہیں دی گئی ہے، اس لیے ہم نے یہ ظاہر کیا ہے کہ اومیگا-3 FA اس میں CKD ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس سے متعلق مالیکیولز اور mtDNA کی بازیافت میں موثر ہے۔ مطالعہ
ایم ٹی او آر اور اے ایم پی کے دونوں مائٹوکونڈریل بایوجنسیس میں شامل ہیں، لیکن ان کے کردار غذائیت کی حیثیت کے لحاظ سے مختلف ہوتے ہیں۔ mTOR، rapamycin کمپلیکس 1 (mTOC1) کا ہدف، توانائی کے محرکات، جیسے امینو ایسڈ یا گلوکوز کے ذریعے چالو کیا جا سکتا ہے، اور ایسے راستوں کو متحرک کر سکتا ہے جو anabolic عمل اور mitochondrial biogenesis کا باعث بنتے ہیں۔ اس کے برعکس، اے ایم پی کے کو ہائپوکسیا اور غذائی کمی کے ذریعے چالو کیا جا سکتا ہے، جو کیٹابولک عمل اور مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس کو چالو کرنے کا باعث بنتا ہے، اور ایم ٹی او سی 1 [2] کے ذریعے توانائی کی کھپت کو روکتا ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے نہ صرف pAMPK/AMPK میں کمی کا مظاہرہ کیا بلکہ CKD ماڈل میں mTOR میں بھی کمی کا مظاہرہ کیا۔ مزید برآں، اومیگا-3 ایف اے انتظامیہ نے ایم ٹی او آر اظہار کی قریب قریب بحالی کا باعث بنا لیکن پی اے ایم پی کے/ اے ایم پی کے میں کمی کی کوئی بحالی نہیں ہوئی۔ لہذا، اومیگا-3 FAs میں ایم ٹی او آر اظہار میں اضافہ کرکے مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس میں کمی کو کم کر سکتے ہیں۔گردےCKD جانوروں کے ماڈل کا۔ تاہم، یہ واضح کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے کہ آیا CKD کے مریضوں میں mTOR میں کمی واقع ہوئی ہے، اور اومیگا-3 FA علاج کے ذریعے mTOR اظہار میں اضافہ مائٹوکونڈریل صحت اور CKD کی ترقی کو کیسے متاثر کرے گا۔
FoxO1 اور 3 PGC-1 پروموٹر سے منسلک ہیں اور اس کی نقل کو بہتر بناتے ہیں [20,21]۔ تاہم، اس مطالعہ میں، Nx گروپ میں FoxO1 اور 3 میں اضافہ پایا گیا اور کنٹرول میں کمی واقع ہوئی اور Nx کا علاج اومیگا-3 FA گروپس کے ساتھ کیا گیا۔ لہذا، یہ فرض کیا جاتا ہے کہ FoxO1 اور 3 کا اظہار CKD میں PGC-1 کو کم کرنے یا اومیگا-3 FA ایڈمنسٹریشن کے ذریعے PGC-1 کو بڑھانے کے معاوضہ کے جواب کے لیے متعلقہ ہے۔ Nrf2 سیلولر ریڈوکس ہومیوسٹاسس اور مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ Nrf2 انحطاط سے متعلق تین ubiquitin ligase نظام ہیں (Keap1، -transducin ریپیٹس پر مشتمل پروٹین، اور E3 ubiquitin ligase synovial) [22]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے Nrf2 میں نمایاں کمی اور Nx گروپ میں Keap1 میں کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں اضافہ دکھایا۔ کم کیا جائے گا اور Nrf2 بڑھا دیا گیا ہے۔ نتائج بتاتے ہیں کہ CKD چوہے کے ماڈل میں اومیگا-3 ایف اے ایڈمنسٹریشن کے بہتر اینٹی آکسیڈیٹیو اثر کا تعلق Keap1 اظہار میں کمی اور Nrf2 انحطاط سے ہو سکتا ہے، جو مائٹوکونڈریل بائیو جینیسس کو بڑھا سکتا ہے۔ اس مطالعے میں حاصل کردہ نتائج کی بنیاد پر، CKD ماحول میں FoxO1/3 اور Nrf2 کے درمیان کارگزاری تعلق اور اومیگا-3 FA انتظامیہ کے اثر کو واضح کرنے کے لیے مزید تحقیق کی ضرورت ہے۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے انفیکشن کو بہتر بنائے گا۔
اس مطالعہ اور دیگر حالیہ مطالعات میں Nrf2 کا مالیکیولر وزن 68 کلوڈالٹن (kDa) ایریا پر پایا گیا [23,24]۔ تاہم، پچھلے مطالعات نے اشارہ کیا کہ Nrf2 کا حیاتیاتی لحاظ سے متعلقہ مالیکیولر وزن 95-110 kDa ہے ثبوت کے ساتھ [25,26]۔ ہمیں ایسے بینڈ بھی ملے جن کے بارے میں شبہ تھا کہ وہ حیاتیاتی لحاظ سے متعلقہ Nrf2 (ضمنی اعداد و شمار S8) ہیں۔ حیاتیاتی لحاظ سے اہم Nrf2 کے مالیکیولر وزن کو تلاش کرنے کے لیے مزید مطالعات ضروری ہیں۔ پچھلے مطالعات میں، 5/6 Nx کے بعد 28 ویں دن مائٹوکونڈریا میں تبدیلیوں کی اطلاع دی گئی ہے، جس نے بیٹا آکسیڈیشن، آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن، اور اندرونی جھلی کے ساختی پروٹین سے منسلک جین یا پروٹین کے اظہار میں کمی کی نشاندہی کی، لیکن کوئی نتیجہ نہیں نکلا۔ PGC-1 اظہار سے متعلق [27,28]۔ اس مطالعے میں، ہم نے تصدیق کی کہ مائٹوکونڈریل بایوجنسیس سے متعلق مالیکیولز اور ایم ٹی ڈی این اے مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس کی عکاسی کرنے والے دائمی مرحلے کے دوران ماڈیول کیے گئے تھے، کیونکہ تبدیلیاں چوہوں میں 5/6 Nx کے بعد 45 ویں دن دیکھی گئیں۔ ہسٹولوجیکل اور بائیولوجیکل بہتری کے باوجود، اومیگا-3 ایف اے کے علاج کا نتیجہ فعال طور پر بحال نہیں ہوا۔گردےNx ماڈل کے مقابلے میں۔ لہذا، یہ تعین کرنے کے لیے مزید تحقیق کی ضرورت ہے کہ آیا اومیگا-3 ایف اے بحال کرنے میں موثر ہیں۔گردے کی تقریباثرات پیدا کر کے جو مائٹوکونڈریل فنکشن کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ اس مطالعہ میں کئی حدود ہیں۔ سب سے پہلے، ہم نے مائٹوکونڈریل سانس کی زنجیر میں سائٹریٹ سنتھیس سرگرمی اور سپر آکسائیڈ کی تشکیل کا اندازہ نہیں کیا۔ دوسرا، ہم نے یہ تجربہ نہیں کیا کہ Omacor کے FA اجزاء بنیادی طور پر mitochondrial biogenesis سے متعلق مالیکیولز پر متاثر ہوتے ہیں۔ تیسرا، ہم نے مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس سے متعلق مالیکیولز کو بہتر بنانے کے لیے واضح طریقہ کار کا مظاہرہ نہیں کیا۔ ہم صرف یہ تجویز کرتے ہیں کہ سوزش مخالف اثر، آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے اور اومیگا-3 فیٹی ایسڈ بحیثیت میٹابولک مرکبات کا تعلق میکانزم سے ہوسکتا ہے۔
4. مواد اور طریقے Mitochondrial Biogenesis
4.1 جانور اور تجرباتی ڈیزائنجاپان SLC, Inc. (Shizuoka, Japan) سے خریدے گئے نر Sprague-Dawley چوہوں (9-ہفتے پرانے) پر مطالعات کی گئیں۔ تمام چوہوں کو یا تو شیم کنٹرول یا 5/6 Nx کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ جانوروں سے متعلق تمام طریقہ کار Dong-A یونیورسٹی کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال کمیٹی (DIACUC-14-4) کی منظوری کے مطابق انجام دیے گئے تھے۔ چوہوں کو معیاری حالات میں رکھا گیا اور نلکے کے پانی اور معیاری خوراک تک مفت رسائی کی اجازت دی گئی۔ تمام چوہوں کو مندرجہ ذیل گروپوں کو تفویض کیا گیا تھا: گروپ 1 (شیم کنٹرول، n=6)، کنٹرول چوہوں کو نمکین پر رکھا گیا (گیسٹرک لیویج کے ذریعے 1 ملی لیٹر/کلوگرام/دن)؛ گروپ 2 (Nx گروپ، n=6)، Nx چوہوں کو نمکین پر رکھا گیا (گیسٹرک لیویج کے ذریعے 1 ملی لیٹر/کلوگرام فی دن)؛ گروپ 3 (اومیگا-3 ایف اے گروپ)، این ایکس چوہوں کا علاج اومیگا-3 ایف اے کے ساتھ کیا جاتا ہے۔ اومیگا-3 FAs کی خوراک اور انتظامیہ کا راستہ (Omacor, 300 mg/kg/day by gastric gavage, Pronova Biocare, Sandefjord, Norway) پچھلے مطالعات کی بنیاد پر طے کیا گیا تھا [19]۔ Omacor سمندری اومیگا-3 FA ہے اور 460 mg eicosapentaenoic acid (EPA) اور 1 g Omacor میں 380 mg docosahexaenoic acid (DHA) سے بنا ہے۔ Omacor عام طور پر myocardial infarction اور hypertriglyceridemia علاج [29] کے بعد ثانوی روک تھام کے لیے تجویز کیا جاتا ہے۔ دو اومیگا-3 ایف اے (ای پی اے پلس ڈی ایچ اے) بڑے (84 فیصد) اور اوماکور کے فعال اجزاء ہیں، جو دواسازی کے طور پر تیار کیے جاتے ہیں
معمولی اجزاء پر قابو پانے والی ترکیبیں (16 فیصد)۔ ہم نے اومیگا-3 ایف اے کی اضافی سوزش اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنے کے لیے اوماکور کا انتخاب کیا کیونکہ اس نے طبی مطالعات میں قلبی امراض کے خطرے کو کم کیا ہے [30]۔ چوہوں کو یکساں طور پر کھانا کھلایا گیا اور ان کا وزن روزانہ دیکھا گیا۔ چوہوں کو سرجری کے بعد 15 ہفتوں تک نلکے کے پانی تک مفت رسائی کی اجازت دی گئی، اور پھر ڈائیتھائل ایتھر اینستھیزیا کے تحت euthanized کیا گیا۔ موت کے وقت، aortic خون کا نمونہ اکٹھا کیا گیا اور پھر 10 منٹ کے لیے 3000 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ میں تبدیلیوں کی نشاندہی کرنے کے لیےگردے کی تقریب، BUN اور sCr کی سطحوں کو ایک خودکار تجزیہ کار (روچے، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔
4.2 ہسٹوپیتھولوجک امتحان۔فارملین فکسڈگردہٹشوز کو پیرافین میں سرایت کیا گیا تھا، ٹکڑوں میں کاٹا گیا تھا (4 µm)، اور متواتر تیزاب-Schiff سے داغے ہوئے تھے۔ Aperio ScanScope (Aperio Technologies, Vista, CA, USA) کے ساتھ ہسٹوپیتھولوجک تبدیلیاں دیکھی گئیں۔
4.3 آر این اے تنہائی اور مقداری ریئل ٹائم پی سی آر تجزیہ۔سے کل آر این اے نکالا گیا تھا۔گردہTRIzol ری ایجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے ٹشوز۔ اس کے بعد، M-MLV cDNA ترکیب کٹ (Enzynomics, Daejeon, Korea) کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA کا 1 µg واحد پھنسے ہوئے cDNA میں تبدیل کیا گیا۔ پرائمر کو پرائمر 3 اور ایم فولڈ سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ جین کی ترتیب سے ڈیزائن کیا گیا تھا۔ مقداری ریئل ٹائم پی سی آر تجزیہ کے لیے، سی ڈی این اے کو جین کے مخصوص پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے پی سی آر ایمپلیفیکیشن کا نشانہ بنایا گیا: چوہا PGC1 50- CCG AGA ATT CAT GGA GCA AT-30(sense), 50- GTG TGA GGA GGG TCA TCG TT-30(اینٹی سینس)؛ rat Nrf1 50- GTT TCA TGG ACC CAA GCA TT-30(sense), 50- GGT GGC CTG AGT TTG TGT CT-30 (اینٹی سینس)؛ چوہا SIRT3، 50- GAG ACT TGG TGG GGT CCT TT -30(sense), 50- ATC CTG CAG CTC TTG TGT CC -30 (اینٹی سینس)؛ چوہا SIRT1، 50- CAG GTT GCA GGA ATC CAA AG -30(sense), 50- CTC CAC GAA CAG CTT CAC AA -30 (اینٹی سینس)؛ rat -actin, 50- GCG CAA GTA CTC TGT GTG GA -30(sense), 50- CAT CGT ACT CCT GCT TGC TG -30 (اینٹی سینس)۔ ریئل ٹائم پی سی آر ایس وائی بی آر گرین پی سی آر ماسٹر مکس (اپلائیڈ بایو سسٹم، فوسٹر سٹی، سی اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ABI 7500 انسٹرومنٹ (اپلائیڈ بایو سسٹم، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کے ساتھ کیا گیا۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے درد کو بہتر کرے گا۔
4.4 ویسٹرن بلوٹنگ اور امیونوپریسیپیٹیشن۔مغربی بلوٹنگ کا تجزیہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا معمولی ترمیم کے ساتھ [10]۔گردہٹشوز کو لیسز بفر (PRO-PREP پروٹین نکالنے کا حل)، انکیوبیٹڈ (4 ◦C پر 30 منٹ)، اور سینٹری فیوجڈ (14،000 rpm 4 ◦C پر 20 منٹ کے لیے) کے ذریعے ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ پروٹین کے ارتکاز کا تعین بریڈ فورڈ پروٹین پرکھ ری ایجنٹ (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ مساوی پروٹین کا نمونہ 7.5-15 فیصد SDS-PAGE پر لوڈ کیا گیا تھا اور اسے نائٹروسیلوز جھلی (Amersham Pharmacia Biotech، Piscataway، NJ، USA) میں منتقل کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہر اینٹی باڈی کے ساتھ پروٹین کو امیونو بلوٹ کیا گیا تھا۔ PGC-1 اور SIRT1 کے خلاف اینٹی باڈیز سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی (سانتا کروز، CA، USA) سے حاصل کی گئیں۔ AMPK، pAMPK، Nrf1، SIRT3، FoxO1، FoxO3a، اور mTOR کے خلاف اینٹی باڈیز سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی (ڈینورس، ایم اے، یو ایس اے) سے خریدی گئیں۔ Nrf2، Keap1 (monomer)، اور -actin کے خلاف اینٹی باڈیز Abcam (Cambridge, MA, USA) اور سگما (St. Louis, MO, USA) سے خریدی گئیں۔ امیونوپریسیپیٹیشن کے لیے، کل 500 µg پروٹین کو PGC-1 اینٹی باڈیز (سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی، سانتا کروز، CA، USA) اور پروٹین A/G پلس-ایگرز موتیوں (سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی، سانتا کروز، CA، USA)، اور رات بھر 4 ◦C پر مکس ہونے کی اجازت ہے۔ اس کے بعد امیونوپریسیپیٹیٹس کو SDS-PAG الیکٹروفورسس کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیا گیا اور ایسیٹیل لائسین (سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، بیورلی، ایم اے، یو ایس اے) اور فاسفوسیرین (مرک ملی پور، برلنگٹن، ایم اے، یو ایس اے) اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے امیونو بلوٹ کیا گیا۔ اس کے بعد جھلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 60 منٹ کے لئے ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس کنججٹیڈ سیکنڈری اینٹی باڈی کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ پروٹین کی سطح کو ایکٹین (ImageJ ورژن 1.48q) کے ذریعہ معیاری بنایا گیا تھا۔ اینٹی باڈیز کے ساتھ ویسٹرن بلوٹنگ اور امیونوپریسیپیٹیشن تجزیہ سپر سگنل ویسٹ پیکو اینہنسڈ کیمیلومینیسینس سبسٹریٹ (تھرمو سائنٹیفک، ہڈسن، NH، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا اور LAS-3000 Plus (Fuji Photo Film, Tokyo, Japan) کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا۔
4.5 mtDNA مواد کی پیمائشکیو پی سی آر کا استعمال ایم ٹی ڈی این اے کے متعلقہ مواد کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ یہ رد عمل SYBR گرین کیمسٹری کے ذریعے کل ڈی این اے کے 3 این جی کو بطور ٹیمپلیٹ اور درج ذیل پرائمر استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا: چوہا mtDNA 5'-GGTTCTTACTTCAGGGCCATCA-3' (سنس), 5,-TGATTAGACCCGTTACCA TCGA-3' ( اینٹی سینس) چوہا پی ایکٹین، 5'- CCCAGCCATGTACGTAGCCA (احساس)، C- CGTCTC- CGGAGTCCATCAC f (اینٹی سینس)۔ جوہری ڈی این اے سے متعلق mtDNA مواد [31] میں رپورٹ کیا گیا تھا۔
4.6 شماریاتی تجزیہشماریاتی تجزیے SPSS 18{1}} سافٹ ویئر (IBM Corp., Armonk, NYP USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔ نتائج کو اوسط 土 SD کے طور پر ظاہر کیا گیا ہے۔ گروپوں کے ذرائع کا موازنہ تغیر کے تجزیے سے کیا گیا جس کے بعد ٹوکی کے متعدد موازنہ کیے گئے۔ p e 0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔
5. نتائج
مجموعی طور پر، مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس سے متعلق ثالثوں کے اظہار میں اہم ماڈیولز کو CKD چوہا ماڈل میں دیکھا گیا۔ اومیگا-3 FA Nrf1 اور Nrf2 کو اپ ریگولیٹ کرکے مائٹوکونڈریل بایوجنسیس کو بہتر بنا سکتا ہے۔ یہ حفاظتی طریقہ کار PGC-1 اظہار میں اضافے اور PGC-1 کے deacetylation کے ذریعے شروع کیا جا سکتا ہے، جو کہ SIRT1/3 کی پیداوار میں اضافہ (شکل 5) سے شروع ہوا تھا۔ شکل 5. CKD میں mitochondrial biogenesis پر omega-3 FA کا اثر۔ بولڈ سیاہ تیر CKD چوہے کے ماڈل میں مائٹوکونڈریل بائیوجنسیس سے متعلق ثالثوں کے اظہار کی نشاندہی کرتے ہیں۔ سرخ تیر اومیگا-3 ایف اے ایڈمنسٹریشن کے بعد ثالثوں کے اظہار کی نشاندہی کرتے ہیں۔ اوپر/نیچے تیر ثالثوں کے اظہار میں اضافہ اور کمی کی نشاندہی کرتے ہیں۔
