حصہ 1 ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتقات کا اینٹی آکسیڈیشن اور سائٹو پروٹیکشن: موازنہ اور میکانکی کیمسٹری

Xican Li 1,2,*,† ID, Yulu Xie 1,2,†, Ke Li 3,4, Aichi Wu 1,2,*, Hong Xie 1,2, Qian Guo 1,5, Penghui Xue 1, Yerkingul ملیشی بیک 1، وی ژاؤ 6، جیا سونگ گو 7 اور ڈونگ فینگ چن 3,4

1 سکول آف چائنیز ہربل میڈیسن، گوانگژو یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، گوانگزو 510006، چین؛

2 TCM کی جدید تحقیق اور ترقی کی لیبارٹری، گوانگژو یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، گوانگزو 510006، چین

3 اسکول آف بیسک میڈیکل سائنس، گوانگژو یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، گوانگزو 510006، چین؛

4 دی ریسرچ سینٹر آف بیسک انٹیگریٹیو میڈیسن، گوانگژو یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن، گوانگزو 510006، چین

5 سکول آف بیسک میڈیکل سائنس، گوانگ ڈونگ فارماسیوٹیکل یونیورسٹی، گوانگزو 510007، چین

6 زونگشن سکول آف میڈیسن، سن یات سین یونیورسٹی، نمبر 74 ژونگشن روڈ۔ 2، گوانگزو 510080، چین؛

7 شعبہ ہسٹولوجی اور ایمبریالوجی، سدرن میڈیکل یونیورسٹی، گوانگزو 510515، چین؛

موصول ہوا: 24 جنوری 2018؛ قبول شدہ: 20 فروری 2018؛ اشاعت: 23 فروری 2018

خلاصہ:مطالعہ نے شوگر کی باقیات کے کردار اور فینولک فینیلپروپینائڈ اینٹی آکسیڈینٹ کے طریقہ کار کو تلاش کرنے کی کوشش کی۔ایکٹیوسائیڈاس کے مخالف forsythoside B اور rhamnoside پوڈیم سائیڈ کے ساتھ، مختلف اینٹی آکسیڈینٹ اسسیس کا استعمال کرتے ہوئے تقابلی طور پر چھان بین کی گئی۔ تین الیکٹران ٹرانسفر (ET) پر مبنی اسسیس (FRAP، CUPRAC، PTIO*-pH 4.5 پر سکیوینگ) میں، نسبتاً اینٹی آکسیڈینٹ کی سطح تقریباً اس طرح حکمرانی کرتی ہے۔ایکٹیوسائیڈ>forsythoside B > poliumoside. ایسا حکم ایچ میں بھی دیکھا گیا تھا۔^پلس-منتقلی میں شامل پی ٹی آئی او*-پی ​​ایچ 7.4 پر اسکیوینجنگ پرکھ، اور تین متعدد-پاتھ وے میں شامل ریڈیکل اسکیوینجنگ اسیسز، یعنی، ABTS پلس •-سکاوینگنگ، DPPH• -سکاوینگ، اور • O2 - -سکاونگنگ۔ UV-vis اسپیکٹرا میں، ان میں سے ہر ایک نے 335-364 nm اور دو کمزور چوٹیوں (480 اور 719 nm) پر ایک سرخ شفٹ دکھایا، جب Fe کے ساتھ ملایا گیا۔^{2 پلس}; البتہ،ایکٹیوسائیڈسب سے کمزور جذب دیا. الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی میں الیکٹرو اسپرے آئنائزیشن کواڈروپول ٹائم آف فلائٹ ٹینڈم ماس سپیکٹرو میٹری (UPLC—ESI—Q-TOF—MS/MS) کے تجزیہ کے ساتھ، کوئی ریڈیکل ایڈکٹ فارمیشن (RAF) چوٹی نہیں ملی۔ MTT پرکھ نے انکشاف کیا کہ پولیموسائڈ نے آکسیڈیٹیو تناؤ والے بون میرو سے حاصل کردہ mesenchymal اسٹیم سیلز کی سب سے زیادہ قابل عملیت کی نمائش کی۔ آخر میں،ایکٹیوسائیڈ، فارسیتھوسائڈ بی، اور پولیموسائڈ اینٹی آکسیڈینٹ کے عمل کو انجام دینے کے متعدد راستوں میں شامل ہو سکتے ہیں، بشمول ET، H^پلس- منتقلی، یا Fe^{2 پلس}چیلاٹنگ، لیکن RAF نہیں۔ ای ٹی اور ایچ پلس ٹرانسفرrhamnosyl اور apiosyl moieties کی طرف سے رکاوٹ ہو سکتی ہے؛ تاہم، Fe^{2 پلس}چینی کی دو باقیات (خاص طور پر rhamnosyl moiety) کے ذریعے چیلیٹنگ کی صلاحیت کو بڑھایا جا سکتا ہے۔ rhamnosyl اور apiosyl moieties کا عمومی اثر اینٹی آکسیڈینٹ یا cytoprotective اثرات کو بہتر بنانا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:ایکٹیوسائیڈ; apiosyl forsythoside B؛ phenylpropanoid glycosides؛ پولیموسائڈ؛ rhamnosyl

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. تعارف

حال ہی میں،ایکٹیوسائیڈ(verbascoside، Figure1، ایک phenolic phenylpropanoid glycoside vervain اور دیگر پودوں میں پایا جاتا ہے، جو کتے کی کلوننگ کے عمل کے دوران کینائن سومٹک سیل نیوکلیئر ٹرانسفر (SCNT) کی کارکردگی کو بہتر کرتا ہے۔ اس کے علاوہ،ایکٹیوسائیڈانسانی نیوروبلاسٹوما SH-SY5Y خلیوں کو p-amyloid-حوصلہ افزائی نقصان اور انسانی جلد کے فائبرو بلاسٹس کو ایکس رے کی حوصلہ افزائی سے ہونے والے نقصان سے بچا سکتا ہے۔ اس کا متعین forsythoside B (شکل 1) پودوں میں بھی تقسیم کیا جاتا ہے اور یہ مشاہدہ کیا گیا ہے کہ یہ ایک سازگار علاج کے وقت کے ساتھ طاقتور نیورو پروٹیکٹو اثرات مرتب کرتا ہے۔ خلیات اور بافتوں پر یہ فائدہ مند اثرات کچھ بائیو مالیکیولز جیسے لپڈس اور ڈی این اے کے تحفظ سے وابستہ ہیں۔ حقیقت میں،ایکٹیوسائیڈاور اس کے مطابقczstanosideFچوہوں میں مائٹوکونڈریل لپڈ پیرو آکسائڈریشن کو روکنے کا مظاہرہ کیا گیا ہے۔ لپڈ پیرو آکسائڈریشن سیلولر آکسیڈیٹیو تناؤ اور بالآخر رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کے نتیجے میں جانا جاتا ہے۔

ڈی این اے کے تحفظ کے پہلو سے،ایکٹیوسائیڈاور اس کے مشتق DNA ریڈیکلز کی تیزی سے مرمت کر سکتے ہیں، جیسے 2'-deoxyadenosine-5'-monophosphate (dAMP) اور 2'-deoxyguanosine-5'-monophosphate (dGMP) [8]۔ یہ ثانوی deoxynucleotide ریڈیکلز مزید آکسیڈیٹیو خلیوں کو نقصان پہنچا سکتے ہیں جو mutagenesis اور carcinogenesis کا باعث بنتے ہیں [9]۔ بائیو فزیکل مطالعہ نے اس بات کا اشارہ کیا۔ایکٹیوسائیڈاور اس کے مشتق ڈی این اے کی معمولی نالیوں میں ڈوب سکتے ہیں اور ایسے آکسیڈیٹیو ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان کو تیزی سے ٹھیک کر سکتے ہیں [10]۔ ترجیحی تشکیل پر مبنی بال اسٹک ماڈل تجویز کرتا ہے (شکل 1,صحیح) کہ یہ مالیکیول پرولیٹ ہوتے ہیں اور آسانی سے ڈی این اے کے لوپ تک پہنچ سکتے ہیں، اور اس طرح، وہ ڈی این اے ریڈیکلز کے نقصان کو تیزی سے ٹھیک کرنے کے قابل ہوتے ہیں [8]۔

تاہم، بائیو کیمسٹری کے نقطہ نظر سے، مرمت بنیادی طور پر ROS-scavenging (یعنی، اینٹی آکسیڈینٹ) راستے کے ذریعے پوری ہوتی ہے۔ جیسا کہ پہلے ذکر کیا گیا ہے، deoxynucleotide ریڈیکل قوموں کی نسل بالآخر ROS کے حملے سے ہے، بشمول آزاد ریڈیکلز (مثال کے طور پر، OH ریڈیکل 11) اور آکسیڈینٹ مالیکیولز (مثال کے طور پر، H2O2 [12])۔ خیال کیا جاتا ہے کہ ROS-scavenging سیلولر آکسیڈیٹیو سٹیٹس کو مؤثر طریقے سے کم کرتا ہے [13,14] اور اسٹیم سیلز [12,15] کے معیار کو بہتر بناتا ہے۔ لہذا، ان کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا مطالعہ کرنا اور ممکنہ میکانزم پر مزید بحث کرنا ضروری ہے۔

اس مطالعہ میں، تین فینولک فینیلپروپینائڈ گلائکوسائیڈز (ایکٹیوسائیڈ، فارسیتھوسائیڈ بی، اور پولیموسائڈ) کا موازنہ مختلف اینٹی آکسیڈینٹ اسیسز کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، بشمول 2-فینائل-4,4,5،5-ٹیٹرامیتھیلیمیڈازولائن5- {5}}آکسیل-3-آکسائیڈ ریڈیکل (PTIO・) سکیوینگ پرکھ، فیرک آئن کم کرنے والی اینٹی آکسیڈینٹ پاور (FRAP) پرکھ، کپرک ریوڈسنگ اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (CUPRAC) پرکھ، 2,2'-کیسینو-بیس ({{11) }}ایتھیل بینزین-تھیازولین-6-سلفونک ایسڈ ریڈیکل (ABTS پلس •) سکیوینگنگ پرکھ، 1،1-ڈفینائل-2-پکریل-ہائیڈرازین (DPPH・) پرکھ، اور ・۔{18} } scavenging پرکھ کے ساتھ ساتھ Fe^{2 پلس}چیلاٹنگ یووی سپیکٹرا تجزیہ۔ اس کے بعد، DPPH کے ساتھ ان کے رد عمل کی مصنوعات کا تعین الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی اور الیکٹرو اسپرے آئنائزیشن کواڈروپول ٹائم آف فلائٹ ٹینڈم ماس سپیکٹرومیٹری (UPLC—ESI—Q-TOF—MS/MS) تجزیہ کے ساتھ کیا گیا۔ آخر میں، بون میرو سے ماخوذ mesenchymal اسٹیم سیلز (bmMSCs) پر ان کے سائٹو پروٹیکٹو اثر کا اندازہ 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2،{{12} کا استعمال کرتے ہوئے لگایا گیا تھا۔ ڈیفینائل (ایم ٹی ٹی) پرکھ۔ جیسا کہ شکل میں دیکھا گیا ہے۔ 1,تین فینولک فینیلپروپینائڈ گلائکوسائیڈز (یعنی ایکٹیوسائیڈ، فارسیتھوسائیڈ بی، اور پولیموسائیڈ) کے درمیان فرق گلائکوسائیڈ کی قسم ہے: فارسیتھوسائیڈ بی ایکٹیوسائیڈ کا ایک اپوزائٹ ہے، جبکہ پولیموسائڈ ایکٹیوسائیڈ کا ایک رمنوسائیڈ ہے۔ اس طرح، یہ تقابلی مطالعہ اینٹی آکسیڈینٹ اثرات میں apiosyl اور rhamnosyl کے کردار کو سمجھنے میں بھی مدد کرتا ہے۔

2. نتائج

2.1. دھات کو کم کرنے والے اسیس (FRAP اور CUPRAC)

مطالعہ میں، ہم نے دھات کو کم کرنے والے دو پرکھ کیے، یعنی FRAP پرکھ اور CUPRAC پرکھ۔ جیسا کہ Suppl میں واضح کیا گیا ہے۔ 1، ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتقات نے متعلقہ FRAP (یا Cu^{2 پلس}-کم کرنے والی طاقت) خوراک پر منحصر انداز میں 0-10 昭/L پر فیصد۔ ایکٹیوسائیڈ > فارسیتھوسائڈ بی > پولیموسائڈ (ٹیبل 1).

2.2. پی ٹی آئی او・-ScavengingAssay

پی ٹی آئی او* - اسکیوینگ پرکھ کو حال ہی میں ہماری لیبارٹری نے تیار کیا تھا [16]۔ اسے اینٹی آکسیڈینٹ کی سطح کا اندازہ کرنے اور اینٹی آکسیڈینٹ کے راستوں کو تلاش کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ جیسا کہ Suppl میں دکھایا گیا ہے۔ 1، ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتق پی ایچ 4.5 اور پی ایچ 7.4 پر پی ٹی آئی او* کو کامیابی سے ختم کر سکتے ہیں۔ تاہم، جدول 1 میں موجود IC50 اقدار کے مطابق، ان کی متعلقہ PTIO*-ایک ہی pH ویلیو پر اسکیوینگ لیولز ایک دوسرے سے مختلف تھیں۔ اس کے علاوہ، ہر ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتق نے پی ایچ 4.5 اور پی ایچ 7.4 کے درمیان مختلف پی ٹی آئی او • - اسکیوینگ لیولز کی نمائش کی۔ عام طور پر، 7.4 پر PTIO^-scavenging کی سطح pH 4.5 سے زیادہ تھی۔

2.3. اے بی ٹی ایسپلس9-اسکاونging اور DPپی ایچ・-Scavenging Assays

اے بی ٹی ایس^پلس-سکاوینگ، اور ڈی پی پی ایچ - صفائی اب بڑے پیمانے پر خالص مرکبات یا عرقوں کے اینٹی آکسیڈینٹ مطالعہ کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ جیسا کہ سپپل میں دیکھا گیا ہے۔ 1، ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتقات کا ارتکاز - انحصار کے ساتھ ABTS پلس - scavenging or DPPH・ - scavenging فیصد میں اضافہ ہوا۔ تاہم، جدول 1 میں IC50 اقدار کے لحاظ سے، ان کے رشتہ دار ABTS پلس ^-scavenging لیول ایکٹیوسائیڈ > forsythoside B > poliumoside > Trolox کی ترتیب میں پائے گئے۔ اسی طرح کا حکم DPPH میں بھی دیکھا جا سکتا ہے۔

2.4. یو پی ایل سی-ای ایس آئی—Q-TOF—MS/MS DPP H Rea کا تجزیہction مصنوعات

DPPH کے رد عمل کی مصنوعات کو UPLC—ESI—Q-TOF—MS/MS تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے تین میں سے ہر ایک phenylpropanoid glycosides کے ساتھ دریافت کیا گیا تھا۔ تجزیہ میں (Suppl. 2)، تینوں میں سے کوئی بھی phenylpropanoid glycosides نے RAF پروڈکٹ کی چوٹی پیدا نہیں کی۔ اس کے مقابلے میں، کیفیک ایسڈ ایک ڈائمر پروڈکٹ پیدا کرنے کے لیے پایا گیا۔(m/z359-360، سپلائی۔ 2)۔

2.5. UV-Vis-Spectra Analysis ofFe^{2 پلس}چیلیٹنگ مصنوعات

چونکہ UV-vis-spectra دھاتی کمپلیکس کی خصوصیت کر سکتا ہے، اس طرح مطالعہ نے ممکنہ Fe کا تجزیہ کرنے کے لیے UV-vis-spectra کا استعمال کیا۔^{2 پلس}-تین فینیلپروپینائڈ گلائکوسائڈز کے ساتھ چیلیٹنگ رد عمل۔ جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔,ان میں سے ہر ایک UV سپیکٹرا میں باتھ کرومک شفٹ (335 nmT364 nm) پیدا کر سکتا ہے۔ دریں اثنا، ان میں سے ہر ایک مرئی سپیکٹرا (480 nm اور 719 nm)اور ہلکے سبز ظہور کی طرف لے جاتے ہیں۔ تاہم، چوٹی کی شدت پولیموسائڈ > فارسیتھوسائڈ بی > ایکٹیوسائیڈ کی نزولی ترتیب میں تھی۔

ایکٹیوسائیڈمیںcistancheکر سکتے ہیںیادداشت کو بڑھانا

2.6. پیروگالول آٹو آکسیڈیشن پرکھ برائے سپر آکسائیڈ اینون (•O2~) صفائی کرنا

2012 میں ہماری لیبارٹری کے ذریعہ پائروگالول آٹو آکسیڈیشن پرکھ کو بہتر بنایا گیا تھا [17]۔ اس کا استعمال موجودہ مطالعہ میں ・O2--کی صفائی کی صلاحیت کا اندازہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ سپپل میں دیکھا گیا ہے۔ 1، تمام ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتق خوراک پر منحصر طور پر --سکاوینگ فیصد کو بڑھا سکتے ہیں۔ تاہم، جدول 1 میں آئی سی 50 اقدار کے مطابق، پولیموسائڈ > فارسیتھوسائڈ بی > ایکٹیوسائیڈ کی ترتیب سے متعلقہ بایو ایکٹیویٹی میں کمی واقع ہوئی۔

cistanchedeserticolaایکٹیوسائیڈفوائد

2.7. آکسیڈیٹیو اسٹریسڈ بی ایم ایم ایس سی (ایم ٹی ٹی پرکھ) کی طرف سائٹو پروٹیکٹو اثر

ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتقات کے سائٹو پروٹیکٹو اثرات کا اندازہ لگانے کے لیے، ہم نے ایم ٹی ٹی پرکھ کی۔ پرکھ میں، bmMSCs کو آکسیڈیٹیو ریجنٹ H سے نقصان پہنچا₂O₂، تباہ شدہ بی ایم ایم ایس سی کا علاج پھر ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتقات سے کیا گیا۔ اے_490nmقدروں کا استعمال متعلقہ سائٹو پروٹیکٹو اثرات کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ جدول 2 میں دیکھا گیا ہے، ہر ایکٹیوسائیڈ اور اس کے مشتق خوراک پر انحصار کرتے ہوئے A میں اضافہ ہوا ہے۔_490nmاقدار تاہم، اسی ارتکاز میں، پولیموسائڈ نے سب سے زیادہ A490nm قدریں دیں۔