حصہ 1 Echinacoside NO-cGMP-PKG-BKCa چینلز کھول کر اور انٹرا سیلولر Ca2 پلس لیولز کو کم کرکے چوہے کی پلمونری آرٹری ویسورلیکسیشن کو اکساتا ہے۔

echinacoside کس طرح venous میں نرمی پیدا کرتا ہے؟

Xiang-Yun GAI1, 2, 3, Yu-hai WEI4, Wei ZHANG2, Ta-na WUREN2, Ya-ping WANG2, Zhan-Qiang LI2, Shou LIU2, Lan MA2, Dian-Xiang LU2, Yi ZHOU1, 2, Ri- li GE1, 2, * 1 شعبہ فارماکولوجی، سکول آف لائف سائنس اینڈ بائیو فارماسیوٹکس، شینیانگ فارماسیوٹیکل یونیورسٹی، شینیانگ 110016، چین؛ 2 ریسرچ سینٹر فار ہائی اونچائی میڈیسن، میڈیکل کالج آف چنگھائی یونیورسٹی، زننگ 810001، چین؛ 3 سکول آف فارمیسی، چنگھائی یونیورسٹی فار نیشنلٹیز، زننگ 810007، چین؛ 4 چنگھائی انٹری-ایگزٹ انسپکشن اور قرنطینہ بیورو، زننگ 810001، چین

مقصد:مسلسل پلمونری vasoconstriction جیسا کہ اونچائی پر تجربہ ہوتا ہے پلمونری ہائی بلڈ پریشر (PH) کا باعث بن سکتا ہے۔ اس مطالعہ کا بنیادی مقصد کے vasorelaxant اثر کی تحقیقات کرنا ہےechinacoside(ECH)، تبتی جڑی بوٹی Lagotis brevituba Maxim سے ایک phenylethanoid glycoside اورCistanche tubulosaپلمونری شریان اور اس کے ممکنہ طریقہ کار پر۔

طریقے:نر ویسٹار چوہوں سے حاصل کردہ پلمونری آرٹیریل رِنگز کو کربس ہینسلیٹ محلول سے بھرے اعضاء کے چیمبروں میں معطل کر دیا گیا تھا، اور آئیسومیٹرک تناؤ کو فورس ٹرانسڈیوسر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ انٹرا سیلولر Ca2 پلس لیولز کو کلچرڈ چوہا پلمونری آرٹیریل ہموار پٹھوں کے خلیات (PASMCs) میں Fluo 4-AM کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

نتائج: ای سی ایچ(30–300 μmol/L) آرام دہ چوہے کی پلمونری شریانیں جو نوراڈرینالین (NE) کے ذریعے ارتکاز پر منحصر انداز میں پہلے سے معاہدہ کرتی ہیں، اور اس اثر کو برقرار اینڈوتھیلیم اور اینڈوتھیلیم سے محروم حلقوں دونوں میں دیکھا جا سکتا ہے، لیکن نمایاں طور پر کم زیادہ سے زیادہ ردعمل اور ایک کے ساتھ۔ اینڈوتھیلیم سے محروم حلقوں میں اعلی EC50۔ اس اثر کو L-NAME، TEA، اور BaCl2 نے نمایاں طور پر روک دیا تھا۔ تاہم، IMT، 4-AP، اور Gli نے روکا نہیں۔ای سی ایچ- حوصلہ افزائی کی نرمی. ایکسٹرا سیلولر Ca2 پلس فری حالات کے تحت، بالترتیب ECH کے 100 اور 300 μmol/L کے ساتھ علاج کیے جانے والے حلقوں میں زیادہ سے زیادہ سنکچن کو 24.54 فیصد ±2.97 فیصد اور 10.60 فیصد ±2.07 فیصد تک کم کر دیا گیا۔ ایکسٹرا سیلولر کیلشیم کی آمد کے حالات میں، زیادہ سے زیادہ سنکچن کو کم کر کے 112.42 فیصد ±7.30 فیصد، 100.29 فیصد ±8.66 فیصد، اور 74.74 فیصد ±4.95 فیصد 30، 100، اور 300 μCH، بالترتیب ECH کے ساتھ علاج کیا گیا۔ سیلوں کو فلو 4-AM کے ساتھ لوڈ کرنے کے بعد، اوسط فلوروسینس کی شدت کم تھیای سی ایچ(100 μmol/L) NE کے مقابلے میں۔

نتیجہ: ای سی ایچانٹرا سیلولر Ca2 پلس کی سطح کو کم کرنے کے ذریعے چوہے کی پلمونری شریان کے NE-حوصلہ افزائی کے سنکچن کو دباتا ہے، اور NO-cGMP پاتھ وے اور K پلس چینلز (BKCa اور KIR) کو کھولنے کے ذریعے اس میں نرمی پیدا کرتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:تبتی جڑی بوٹی؛echinacoside; پھیپھڑوں کا بیش فشار خون؛ زیادہ اونچائی؛ vasorelaxation؛ نہیں؛ بی کے سی اے؛ KIR; دمنی کی انگوٹھی؛ پلمونری آرٹیریل ہموار پٹھوں کے خلیات۔

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

تعارف

مسلسل پلمونری واسو کنسٹرکشن جیسا کہ اونچائی پر تجربہ کیا جاتا ہے پلمونری ہائی بلڈ پریشر (PH) اور میڈل ہائپر ٹرافی[1] کا باعث بن سکتا ہے، جن کی شناخت دائیں وینٹریکولر ہائپر ٹرافی اور دل کی ناکامی کی بنیادی وجہ کے طور پر کی گئی ہے[2]۔ اونچائی پر رہنے والے افراد، یا تو عارضی طور پر یا مستقل طور پر، ہلکے سے اعتدال پسند پلمونری ہائی بلڈ پریشر پیش کر سکتے ہیں، اور جو لوگ ہائپوکسیا کے لیے زیادہ حساسیت رکھتے ہیں ان میں مبالغہ آمیز پلمونری vasoconstriction ہو سکتا ہے، جس کی وجہ سے اونچائی پر رہنے والے مختلف امراض کا باعث بنتے ہیں جو اہم بیماری اور اموات سے منسلک ہوتے ہیں، جیسے اونچائی پر پلمونری ورم اور دل کی بیماریاں[3]۔Echinacoside(ECH) (شکل 1) ایک ہے۔phenylethanoid glycosideچینی جڑی بوٹیوں کی ایک قسم میں پایا جاتا ہے جیسے تبتی جڑی بوٹی Lagotis brevituba Maxim اورCistanche tubulosa[4، 5]۔ Lagos brevituba Maxim Lagotis spp کی ایک نوع ہے جو Scrophulariaceae سے تعلق رکھتی ہے اور چنگھائی تبت سطح مرتفع میں 3000 میٹر کی بلندی پر بڑے پیمانے پر بڑھتی ہے۔ای سی ایچاس میں متعدد مطلوبہ فارماسولوجیکل خصوصیات ہیں، جیسے کہ اینٹی آکسیڈیٹیو، اینٹی انفلامیٹری، نیورو پروٹیکٹو، ہیپاٹو پروٹیکٹیو، اور نائٹرک آکسائیڈ (NO) ریڈیکل اسکیوینجنگ خصوصیات[6]۔ یہ چوہے کی چھاتی کی شہ رگ کے حلقوں میں اینڈوتھیلیم پر منحصر نرمی اور دل کی بیماریوں کا علاج بھی کر سکتا ہے[7]۔ تاہم، ہمارے بہترین علم کے مطابق، پلمونری شریانوں میں ویسکولر ٹون پر اس کے اثرات کی تحقیقات کرنے والا کوئی مطالعہ نہیں ہوا ہے۔ اس مطالعے کے مقاصد مندرجہ ذیل ہیں: (1) یہ دریافت کرنے کے لیے کہ آیا ECH چوہے کی پلمونری شریانوں میں جو noradrenaline (NE) کے ساتھ پہلے سے معاہدہ کیا گیا ہے میں وٹرو ویسورلیکسیشن کو دلاتا ہے، اور کیا یہ اثر، اگر کوئی ہے، اینڈوتھیلیم پر منحصر ہے یا براہ راست عروقی ہموار پٹھوں پر کام کرتا ہے۔ ; (2) چوہے کے پلمونری آرٹیریل ہموار پٹھوں کے خلیوں (PASMCs) میں ایکسٹرا سیلولر کیلشیم کی آمد اور انٹرا سیلولر کیلشیم کے اخراج پر ECH کے اثر کی چھان بین کرنا؛ اور (3) ممکنہ راستوں اور کے پلس چینلز کی نشاندہی کرنا جو ECH کی حوصلہ افزائی میں نرمی میں شامل ہیں۔

مواد اور طریقے

ری ایجنٹس

ECH برائے مہربانی پیکنگ یونیورسٹی (بیجنگ، چین) کے ڈاکٹر پینگ فی ٹی یو کی طرف سے فراہم کی گئی تھی، جس کی پاکیزگی 98 فیصد سے زیادہ ہے جیسا کہ اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعے طے کیا گیا ہے۔ Dimethyl سلفوکسائیڈ (DMSO) Solar Science & Technology Co, Ltd (Beijing, China) سے خریدی گئی تھی۔ NE، acetylcholine (ACh، 99 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر)، indomethacin (IMT)، Nω -Nitro-L-arginine میتھائل ایسٹر ہائیڈروکلورائڈ (L-NAME)، ٹیٹراتھیلمونیم کلورائیڈ (TEA)، بیریم کلورائیڈ (BaCl2)، {{ 9}}امینوپائرڈائن ({{10}}AP)، اور سگما کیمیکل کمپنی (سینٹ لوئس، MO، USA) سے گلیبین کلیمائڈ (Gli)؛ Gibco BRL Co, Ltd (Gaithersburg, MD, USA) سے ہائی گلوکوز Dulbecco's modified Eagles میڈیم (DMEM)، فیٹل بووائن سیرم (FBS)، اور ٹرپسن؛ بوشائیڈ بائیوٹیک کمپنی لمیٹڈ (ووہان، چین) سے ماؤس اینٹی چوہا پرائمری ہموار پٹھوں کی ایکٹین (-SMA) اینٹی باڈی اور بکری اینٹی ماؤس سیکنڈری اینٹی باڈی؛ Invitrogen Corp (Carlsbad, CA, USA) سے فلو کیلشیم انڈیکیٹرز (فلو 4-AM)؛ اور بیجنگ کیمیکل ریجنٹ کمپنی لمیٹڈ (بیجنگ، چین) سے تمام غیر نامیاتی نمکیات۔ IMT کو DMSO میں تحلیل کر دیا گیا تھا اور 5 فیصد NaH2PO4، Gli، Fluo 4-AM، اور ECH کو DMSO میں تحلیل کر دیا گیا تھا، اور دیگر تمام ریجنٹس کو Krebs-Henseleit (KH) یا PBS محلول میں تحلیل کر دیا گیا تھا۔ ابتدائی تجربات سے معلوم ہوا کہ DMSO کا 0.1 فیصد سے کم (v/v) الگ تھلگ پلمونری آرٹیریل رِنگز کے تناؤ کی نشوونما پر کوئی اثر نہیں ہوا۔

تجرباتی جانور

تمام طریقہ کار اور پروٹوکول کو چنگھائی یونیورسٹی کے میڈیکل کالج کی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ نر وِسٹار چوہے، 6-8 ہفتے پرانے، 250-300 گرام جسمانی وزن، لانژو یونیورسٹی کے اینیمل سینٹر (لانزو، چین) سے خریدے گئے تھے اور 22 ± کے محیطی درجہ حرارت پر معیاری لیبارٹری خوراک اور نلکے کے پانی کے ایڈ لیبٹم پر برقرار رکھا گیا تھا۔ 2 ڈگری اور نسبتاً نمی 45 فیصد -55 فیصد پورے تجربات میں۔

وٹرو پلمونری آرٹری پرفیوژن میں

چوہے کے پلمونری آرٹیریل رِنگز کی تیاری

250–300 گرام وزن والے چوہوں کو سوڈیم پینٹوباربیٹل (40 ملی گرام/کلوگرام) کے انٹراپریٹونیل انجیکشن کے ذریعے بے ہوشی کی گئی، اور پھر ان کے دل اور پھیپھڑوں کو فوری طور پر برف کے ٹھنڈے KH محلول میں ڈبو دیا گیا جس میں (mmol/L میں) : 118 NaCl، 4.7 KCl، 2.5 CaCl2، 1.2 MgSO4·7H2O، 1.2 KH2PO4، 25 NaHCO3، اور 11.1 گلوکوز (pH 7.4)۔ انٹرا پلمونری شریانیں (قطر میں 0.7–1.5 ملی میٹر) ارد گرد کے مربوط بافتوں اور ایڈونٹیٹیا سے پاک تھیں اور پھر تقریباً 2–3 ملی میٹر لمبائی کے حلقوں میں کاٹ دی گئیں۔ انگوٹھیوں کو 10 ملی لیٹر KH محلول سے بھرے اعضاء کے چیمبروں میں 37 ڈگری پر معطل کیا گیا تھا اور 95 فیصد O2–5 فیصد CO2 [8] کے ساتھ گیس کیا گیا تھا، اور قوت ٹرانسڈیوسر (JH-2، Space Medico) کا استعمال کرتے ہوئے آئسومیٹرک تناؤ کی پیمائش کی گئی تھی۔ -انجینئرنگ انسٹی ٹیوٹ، بیجنگ، چین)

برتن کی انگوٹی کی سرگرمی کی تشخیص اور اینڈوتھیلیل فنکشن کی تشخیص

برتن کی انگوٹھیوں کو 400 ملی گرام کے بنیادی تناؤ کے تحت 2 گھنٹے کے لیے متوازن رہنے کی اجازت دی گئی تھی، اس دوران KH محلول ہر 15 منٹ میں تبدیل کیا جاتا تھا۔ پھر سنکچن فیصد کا پتہ لگا کر ہر انگوٹی کی سرگرمی کا اندازہ کرنے کے لئے NE کا 1 μmol/L چیمبر میں شامل کیا گیا۔ تجرباتی پروٹوکول سے پہلے اور بعد میں، سنکچن فیصد ماپا گیا تھا (شکل 2A اور 2B)۔ اینڈوتھیلیم کو کچھ انگوٹھیوں میں جین ٹیلی طور پر ایک باریک سٹیل کے تار کے ساتھ اندرونی سطح کو رگڑ کر ہٹا دیا گیا تھا، اور سالمیت کا اندازہ NE (10 μmol/L) کی وجہ سے ہونے والی نرمی کی ڈگری سے NE (1) کی طرف سے متاثر کنٹریکٹائل ٹون کے فیصد میں کیا گیا تھا۔ μmol/L)۔ اگر AC کے ساتھ نرمی 80 فیصد سے زیادہ تھی، تو اینڈوتھیلیم اچھی حالت میں رہتا ہے۔ اگر نرمی 30 فیصد سے کم تھی، تو اینڈوتھیلیم تباہ ہو گیا تھا (شکل 2A اور 2B)[9]۔

چوہے PASMCs کی تنہائی اور ثقافت

ڈسٹل پلمونری شریانوں کو چوہوں کے پلمونری لابس سے الگ تھلگ کیا گیا تھا، اور اینڈوتھیلیم اور ایڈونٹیشیا کو احتیاط سے ہٹا دیا گیا تھا۔ ٹشوز کو {{0}} ملی میٹر کے ٹکڑوں میں باریک کرنے کے بعد، انہیں فوری طور پر فلاسکس میں شامل کیا گیا، تقریباً چار گھنٹے تک نمی والے انکیوبیٹر میں 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 پر برقرار رکھا گیا، اور پھر ہائی گلوکوز ڈی ایم ای ایم کے ساتھ کلچر کیا گیا۔ تقریباً پانچ دنوں کے لیے 20 فیصد FBS، 100 U/mL پینسلن، اور 100 U/mL سٹریپٹومائسن کے ساتھ ضمیمہ۔ جب خلیات ابھرے تو کلچر میڈیا کا آدھا حصہ تازہ میڈیا سے بدل گیا۔ جب خلیے 80 فیصد سنگم پر پہنچ گئے، تو انہیں 0.125 فیصد ٹرپسن کے ساتھ کاٹا گیا اور فلاسکس (1:2 تناسب) میں بیج دیا گیا جس میں ہائی گلوکوز DMEM 10 فیصد FBS، 100 U/mL پینسلن، اور 100 U/mL اسٹریپٹومی شامل ہے۔ . تمام تجربات کے لیے تین سے آٹھ حصئوں والے خلیے استعمال کیے گئے تھے۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعہ PASMCs کی شناخت

PASMCs امیونو کیمیکل داغ کے لئے مثبت تھے جب عام "پہاڑی اور وادی" خصوصیات کا مشاہدہ کیا گیا تھا۔ سیلوں کو شیشے کی کور سلپس والی کنویں پلیٹوں میں 6-بیڈ کیا گیا تھا۔ جب خلیے 80 فیصد سنگم پر پہنچ گئے تو انہیں 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ میں طے کیا گیا، 3 فیصد ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کے ساتھ 15 منٹ کے لیے بلاک کیا گیا، اور پھر ماؤس اینٹی چوہا پرائمری -SMA اینٹی باڈی کے ساتھ راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ پی بی ایس میں 10 منٹ تک تین بار دھونے کے بعد، خلیات کو بکری کے اینٹی ماؤس سیکنڈری اینٹی باڈی کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 45 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، پی بی ایس میں 10 منٹ تک تین بار دوبارہ دھویا گیا، اور ڈائمینوبینزائڈائن کے ساتھ تصور کیا گیا۔

چوہے PASMCs میں انٹرا سیلولر کیلشیم کی حراستی کا پتہ لگانا

پی اے ایس ایم سی کو شیشے کی کور سلپس کے ساتھ {{0}} کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ جب خلیے 80 فیصد سنگم تک پہنچ گئے تو کلچر میڈیا کو سیرم فری DMEM سے تبدیل کر دیا گیا۔ چوبیس گھنٹے بعد، سیلز کو 7 μmol/L Fluo 4-AM پر 37 ڈگری پر 30 منٹ کے لیے 5 فیصد CO2 کی نمی والی فضا میں لوڈ کیا گیا۔ بقایا رنگ کو ہینکس کے بیلنسڈ سالٹ سلوشن (HBSS) محلول سے دھویا گیا جس میں درج ذیل (mmol/L میں): 1.26 CaCl2، 0.49 MgCl2·6H2O، 0.41 MgSO4·7H2O، 5.33 KCl، 0.44 KH2PO4، 4.17 NaHCO3، 137.93 NaCl، 0.34 Na2HPO4، اور 5.56 D-گلوکوز، بغیر فینول ریڈ کے۔ Fluo 4-AM سے بھرے ہوئے خلیے علاج کی تین شرائط میں سے ایک کے سامنے آئے: (1) کنٹرول گروپ (کون گروپ)، جس میں خلیات سیرم فری DMEM کے ساتھ انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ (2) NE گروپ، جس میں خلیات کو 10 منٹ کے لیے NE کے 1 μmol/L کے ساتھ سیرم فری DMEM کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اور (3) NE پلس ECH (100 μmol/L) گروپ (NE پلس ECH100 گروپ)، جس میں خلیات کو سیرم فری DMEM کے ساتھ 10 منٹ کے لیے NE کے 1 μmol/L اور ECH کے 100 μmol/L کے ساتھ مکمل کیا گیا تھا۔ 20 منٹ کے لیے فلوروسینس کی شدت کا مشاہدہ کیا گیا اور فلوروسینس مائکروسکوپی (IX71، اولمپس، ٹوکیو، جاپان)[11] کے ذریعے تصویر کشی کی گئی۔ ہر نمونے کے لیے وژن کے چھ فیلڈز (200×) اکٹھے کیے گئے تھے۔ امیج پرو پلس 6.0 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے اوسط فلوروسینس کی شدت کی پیمائش کرکے انٹرا سیلولر کیلشیم حراستی کی مقدار درست کی گئی۔

شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کو اوسط ± SD کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ جب متغیر کے یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) کے بعد متعدد موازنہ کے لیے Dunnett کے ٹیسٹ یا Student-Newman-Keuls ٹیسٹ کے ذریعے مناسب، اہم فرق کا اندازہ لگایا گیا۔ P کی امکانی سطح<0.05 was="" considered="">

الگ تھلگ پلمونری شریانوں پر ECH کے Vasorelaxant اثرات کے نتائج

تجربے کے آغاز میں، 30 سے ​​300 μmol/L تک ECH کے مجموعی اضافے کا پلمونری شریان کے بنیادی تناؤ پر کوئی خاص اثر نہیں ہوا۔ NE-حوصلہ افزائی vasoconstriction کے ایک سطح مرتفع تک پہنچنے کے بعد، ECH کو مجموعی طور پر (30–300 μmol/L) برقرار اینڈوتھیلیم (E پلس، فگر 2C) یا اینڈوتھیلیم سے منسلک حلقے (E–، Figure 2C) میں شامل کیا گیا۔ برقرار اینڈوتھیلیم حلقوں میں، ECH کے مجموعی اضافے نے زیادہ سے زیادہ کے ساتھ، ارتکاز پر منحصر انداز میں برتنوں کو پھیلا دیا۔

300 μmol/L پر 89.22 فیصد ±0.32 فیصد کی ماں میں نرمی کا فیصد اور 51.60±0.57 μmol/L کا EC50 (شکل 2A اور 2C)۔ اسی طرح، اینڈوتھیلیم سے محروم حلقوں میں، ECH نے ارتکاز پر منحصر انداز میں برتنوں کو بھی پھیلا دیا، لیکن نمایاں طور پر کم زیادہ سے زیادہ ردعمل 67.72 فیصد ±1.69 فیصد (P<0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings)="" and="" a="" higher="" ec50="" of="" 108.51±2.8="" μmol/l=""><0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings,="" figure="" 2b="" and="" 2c).="" the="" sustained="" plateau="" of="" the="" high-contraction="" percentage="" induced="" by="" ne="" (1="" μmol/l)="" after="" the="" experimental="" protocol="" indicated="" that="" the="" rings="" pretreated="" with="" ech="" (30–300="" μmol/l)="" had="" good="" activity="" (figure="" 2a="" and="">

انٹرا سیلولر کیلشیم کی رہائی اور ایکسٹرا سیلولر کیلشیم کی آمد پر ECH کے اثرات

زیادہ سے زیادہ سنکچن حاصل ہونے تک اینڈوتھیلیم سے انکار شدہ حلقے NE کے 1 μmol/L کے سامنے آئے۔ ایکسٹرا سیلولر Ca2 پلس فری حالات کے تحت، تجربات کے آغاز سے پہلے حلقوں کو Ca2 پلس فری KH سلوشن میں متوازن کیا گیا تھا جس میں EGTA کا 0.2 mmol/L شامل تھا۔ Ca2 پلس - اور EGTA سے پاک KH سلوشن کے ساتھ تین دھونے کے بعد، انگوٹھیوں کو ECH (30، 100، اور 300 μmol/L) کے ساتھ 20 منٹ کے لیے پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا اور پھر NE ​​کے 1 μmol/L میں دوبارہ ظاہر کیا گیا تھا۔ انگوٹھیاں پیدا ہوئیں

غیر مستحکم سنکچن جو تیزی سے بیس لائن پر واپس آئے، NE کی طرف سے حوصلہ افزائی کے ابتدائی سنکچن کے مقابلے، جس نے حوالہ کے طور پر کام کیا۔ کنٹرول کا زیادہ سے زیادہ سنکچن 33.27 فیصد ±2.94 فیصد تھا (شکل 3A اور 3E) لیکن نمایاں طور پر کم ہو کر 24.54 فیصد ±2.97 فیصد اور 10.60 فیصد ±2.07 فیصد کر دیا گیا جو پہلے سے 100 اور 300 μmol/L کے ECH کے ساتھ پہلے سے تیار کیا گیا تھا۔<0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3c–3e).="" under="" extracellular="" calcium="" influx="" conditions,="" 2.5="" mmol/l="" cacl2="" was="" added="" to="" the="" chamber="" when="" the="" curve="" reached="" a="" plateau.="" the="" control="" group="" produced="" sustained="" contractions,="" with="" a="" maximum="" contraction="" of="" 139.89%±7.38%="" (figure="" 3a="" and="" 3e);="" but="" the="" maximum="" contraction="" was="" significantly="" reduced="" to="" 112.42%±7.30%,="" 100.29%±8.66%,="" and="" 74.74%±4.95%="" in="" rings="" pretreated="" with="" 30,="" 100,="" and="" 300="" μmol/l="" of="" ech,="" respectively=""><0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3b–3e).="" under="" these="" conditions,="" the="" maximal="" effect="" caused="" by="" ech="" was="" more="" pronounced="" with="" 300="" μmol/l="" than="" with="" 100="" or="" 30="" μmol/l=""><0.01 vs="" 30="" or="" 100="" μmol/l="" ech="" group).="" different="" concentrations="" of="" ech="" all="" shortened="" the="" platform="" of="" sustained="" contraction,="" which="" was="" induced="" by="" extracellular="" calcium="" influx="" at="" different="" levels="" (figure="">

ECH کی حوصلہ افزائی چوہا پلمونری شریان ویسورلیکسیشن میں مختلف روکنے والوں کے کردار

ای سی ایچ کی حوصلہ افزائی شدہ چوہا پلمونری آرٹری ویسورلیکسیشن کی جانچ درج ذیل روکنے والوں کی موجودگی یا غیر موجودگی میں کی گئی تھی: L-NAME (eNOS inhibitor)، IMT (cyclooxygenase inhibitor)، TEA (بڑے کنڈکٹنس Ca2 پلس-ایکٹیویٹڈ K پلس چینل انہیبیٹر)، BaCl2 ( انورڈ ریکٹیفائر K پلس چینل انحیبیٹر، 4-AP (وولٹیج پر منحصر K پلس چینل انحیبیٹر)، اور Gli (ATP-حساس K پلس چینل روکنے والا)۔ انگوٹھیوں کو زیادہ سے زیادہ 1 μmol/L NE کے ساتھ معاہدہ کیا گیا تھا، اور پھر L-NAME (100 μmol/L)، IMT (10 μmol/L)، TEA (1 mmol/L) ، BaCl2 (1 mmol/L)، 4-AP (1 mmol/L)، یا Gli (10 μmol/L) بالترتیب شامل کیے گئے۔ ایک بار جب ایک نئی سطح مرتفع پہنچ گئی، ECH کو 30 سے ​​300 μmol/L تک مجموعی طور پر شامل کیا گیا۔ مختلف روک تھام کرنے والوں کی موجودگی میں ارتکاز ردعمل کے منحنی خطوط کو شکل 4 میں دکھایا گیا ہے۔ NE کے 1 μmol/L کے ساتھ سکڑنے والے پلمونری آرٹیریل رِنگز پر ECH کا vasorelaxant اثر نمایاں طور پر L-NAME (100 μmol/L)، TEA ( 1 mmol/L)، اور BaCl2 (1 mmol/L)، بالترتیب 64.41 فیصد ±3.20 فیصد، 84.38 فیصد ±0.70 فیصد، اور 75.27 فیصد ±0.93 فیصد کی زیادہ سے زیادہ نرمی کے ساتھ (P<0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 89.22%±0.32%),="" and="" the="" values="" of="" ec50="" were="" increased="" to="" 197.32±2.75="" μmol/l,="" 91.42±2.11="" μmol/l,="" and="" 115.49±1.75="" μmol/l,="" respectively=""><0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 51.60±0.57="" μmol/l)="" (table="" 1).="" however,="" imt="" (10="" μmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l)="" did="" not="" inhibit="" the="" ech-induced="" relaxation="" (figure="" 4="" and="" table="" 1).="" to="" validate="" the="" effects="" of="" these="" inhibitors="" on="" ech-induced="" relaxation,="" the="" rings="" precontracted="" with="" 1="" μmol/l="" of="" ne="" were="" treated="" with="" l-name="" (100="" μmol/l),="" imt="" (10="" μmol/l),="" tea="" (1="" mmol/l),="" bacl2="" (1="" mmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l).="" after="" a="" new="" plateau="" was="" reached,="" ech="" was="" added="" to="" the="" chamber="" at="" a="" single="" concentration="" of="" 300="" μmol/l="" rather="" than="" in="" a="" cumulative="" manner.="" the="" maximum="" relaxation="" was="" reduced="" to="" 56.33%±0.90%,="" 82.21%±0.92%,="" and="" 72.16%±0.76%="" following="" the="" addition="" of="" l-name,="" tea,="" and="" bacl2,="">

چوہے PASMCs کی شناخت

At low magnification, spindle cells were densely packed, and almost all the cells were stained positively for PASMCs (the PASMC purity was >95 فیصد) (شکل 6A)۔ بھوری رنگ کے داغ والے myofilaments کو اعلی میگنیفیکیشن (شکل 6B) پر سائٹوپلازم میں واضح طور پر دیکھا گیا۔

Cistancheechinacosideمزاحمت کر سکتے ہیںapoptosis

چوہا PASMCs میں انٹرا سیلولر کیلشیم کی حراستی پر ECH کا اثر

NE (1 μmol/L) نے انٹرا سیلولر کیلشیم کے ارتکاز میں نمایاں اضافہ کیا (n=6, P<0.01 vs="" the="" control="" group)="" in="" rat="" pasmcs,="" and="" ech="" could="" decrease="" the="" mean="" fluorescence="" intensity="" (n="6,"><0.01 vs="" the="" ne="" group)="" (figure="">