حصہ 1|جینیاتی تغیرات گردے کی شدید چوٹ کے ذیلی فینوٹائپس کی نشوونما میں پلازما انجیوپوائٹین-2 کو متاثر کرتا ہے۔

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1، Sina A. Gharib1، W. Conrad Liles8، Ying Zheng3,4، David C. Christiani9,10، Jonathan Himmelfarb2 اور Mark M. Wurfel1,2

خلاصہ

پس منظر:ہم نے پہلے دو کی نشاندہی کی تھی۔شدیدگردہچوٹ(AKI) ذیلی فینوٹائپس (AKI-SP1 اور AKI-SP2) خراب طبی نتائج اور واسوپریسر تھراپی کے ردعمل کے مختلف خطرات کے ساتھ۔ اینڈوتھیلیل dysfunction کے پلازما بائیو مارکر (ٹیومر نیکروسس فیکٹر ریسیپٹر-1، انجیوپوائٹین-1، اور 2) نے AKI ذیلی فینوٹائپس میں فرق کیا۔

تاہم، یہ معلوم نہیں ہے کہ آیا یہ بائیو مارکر صرف مارکر ہیں یا AKI ذیلی فینوٹائپس کی نشوونما میں کازل ثالث ہیں۔

طریقے:ہم نے سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفیزم کے مابین ایسوسی ایشن کے لئے تجربہ کیا۔انجیوپوائٹین-1، انجیوپوائٹین-2،اورٹیومر نیکروسس فیکٹر ریسیپٹر 1Aیورپی نسب کے 421 شدید بیمار مضامین میں جینز اور AKI-SP2۔ اعلی کارکردگی کا مظاہرہ کرنے والے سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفزم (FDR < 0.05)="" کو="" cis-biomarker="" اظہار="" کے="" لیے="" جانچا="" گیا="" اور="" آیا="" aki-sp2="" کے="" لیے="" جینیاتی="" خطرے="" کو="" گردش="" کرنے="" والے="" بائیو="" مارکر="" کے="" ذریعے="" ثالثی="" کیا="" گیا="" ہے۔="" ہم="" نے="" انسانی="" گردے="" کے="" مائکرو="" واسکولر="" اینڈوتھیلیل="" سیلز="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" وٹرو="" اسٹڈیز="" میں="" بھی="" مکمل="" کیا۔="" آخر="" میں،="" ہم="" نے="" 20="" مختلف="" وقتی="" پیشاب="" کے="" مجموعوں="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" پلازما="" بائیو="" مارکر="" کی="" رینل="" کلیئرنس="" کا="" حساب="">

نتائج:ایک جینیاتی تغیر، rs2920656C > T، قریباے این جی پی ٹی 2AKI-SP2 کے کم خطرے سے وابستہ تھا (مشکلات کا تناسب، 0.45؛ 95 فیصد CI، 0.31–0.66؛ ایڈجسٹ FDR=0.003 ) اور پلازما انجیوپوائٹین میں کمی-2 (p = 0.002)۔ کازل انفرنس تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ ہر ایک معمولی ایلیل (T) کے لیے AKI-SP2 کی نشوونما کا خطرہ 16 فیصد کم ہو جاتا ہے۔ پلازما انجیوپوائٹین-2 نے AKI-SP2 کے لیے rs2920656 سے متعلقہ خطرے کا 41.5 فیصد ثالثی کیا۔ RSS2920656 کے T ایلیل کو لے جانے والے انسانی گردے کے مائیکرو واسکولر اینڈوتھیلیل سیلز نے عددی طور پر انجیوپوائٹین کی نچلی سطح تیار کی-2 حالانکہ یہ اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھا (p = 0.07)۔ آخر میں، تجزیوں نے ثابت کیا کہ انجیوپوائٹین-2 شدید بیمار مضامین میں واقعی کم سے کم صاف ہوتا ہے۔

نتیجہ:جینیاتی ثالثی کا تجزیہ معاون ثبوت فراہم کرتا ہے کہ انجیوپوائٹین-2 AKI-SP2 کے خطرے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: گردے کی شدید چوٹ، جینیات، اینڈوتھیلیم

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:emily.li@wecistanche.com

Cistanche deserticola گردے کی بیماری سے بچاتا ہے، نمونہ حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

پس منظر

شدیدگردہچوٹ(AKI) انتہائی نگہداشت یونٹ (ICU) میں داخل مریضوں میں سے 40-60 فیصد کو متاثر کرتا ہے اور ناقص مختصر اور طویل مدتی نتائج میں حصہ ڈالتا ہے۔ آج تک کے جینیاتی مطالعات میں جینیاتی تغیرات اور AKI کا موازنہ کرنے والے کیسز (AKI) کے کنٹرولز (کوئی AKI) کے خطرے کے درمیان تعلق پر توجہ مرکوز کی گئی ہے۔ تاہم، یہ فریم ورک محدود ہوسکتا ہے کیونکہ کیسزشدیدگردہچوٹمختلف precipitants اور بائیو لاجیکل پروفائلز کے ساتھ انتہائی متضاد ہیں۔ نمونے کے سائز کو زیادہ سے زیادہ کرنے کے لیے اس طرح کے AKI مریضوں کو ملانے کے نتیجے میں جینیاتی شماریاتی سگنلز میں کمی واقع ہو سکتی ہے جو کہ AKI آبادی کے صرف ایک پیتھو فزیولوجیکل طور پر الگ الگ سب سیٹ میں موجود ہو سکتے ہیں۔ ایک اور حد یہ ہے کہ شدید بیمار آبادی میں AKI اکثر سنگین توہین کی پیچیدگی ہے، جیسے سیپسس، سرجری، جھٹکا، نمونیا، اور صدمہ۔ کی ترقی کے بغیر کنٹرول کا استعمالشدیدگردہچوٹمسئلہ ہو سکتا ہے. زیادہ خطرہ والے جینیاتی تغیرات کو لے جانے والے کنٹرولز AKI تیار نہیں کرسکتے ہیں اگر وہ بھی کیسز کی طرح شدید توہین کا تجربہ نہیں کرتے ہیں، اور اس طرح کسی بھی ممکنہ ایسوسی ایشن سگنل کو کم کرتے ہوئے، غیر کیسز کے طور پر درجہ بندی کیا جائے گا۔ جینیاتی ایسوسی ایشن اسٹڈیز میں حیاتیاتی طور پر الگ AKI ذیلی فینوٹائپس کا استعمال خاص طور پر AKI آبادی پر توجہ مرکوز کرکے اور دو حیاتیاتی طور پر الگ الگ ذیلی فینوٹائپس کا موازنہ کرکے AKI کی فینوٹائپنگ میں پیشگی حدود کو دور کرتا ہے۔

ہم نے حال ہی میں دو AKI ذیلی فینوٹائپس (AKI-SP1 اور AKI-SP2) کی شناخت 29 کلینیکل اور بائیو مارکر متغیرات کے پینل پر لیٹنٹ کلاس تجزیہ کے طریقہ کار کو لاگو کرکے دو آزاد شدید بیمار AKI آبادیوں میں کی۔ خاص طور پر، AKI-SP2 کا تعلق AKI-SP1 کے مقابلے ہسپتال کے بدتر نتائج (مثلاً شرح اموات، نیا ڈائیلاسز، اور 7- دن کے گردوں کی عدم بحالی) سے تھا۔ اس کے بعد ہم نے ان AKI ذیلی فینوٹائپس کی شناخت پہلے سے مکمل شدہ ملٹی سینٹر رینڈمائزڈ کنٹرول ٹرائل میں کی، واسوپریسین بمقابلہ نوریپینفرین انفیوژن ان مریضوں میں سیپٹک شاک (VASST)۔ VASST ٹرائل نے مطالعہ کیا کہ آیا واسوپریسر تھراپی کا انتخاب سیپٹک جھٹکا والے مضامین میں اموات کو بہتر بناتا ہے۔ اگرچہ کلینیکل ٹرائل میں AKI کی آبادی میں واسوپریسر تھراپی سے اموات میں کوئی فرق نہیں تھا، AKI-SP1 کو AKI-SP2 کے مقابلے میں واسوپریسن کے ساتھ اموات میں کوئی فرق نہیں تھا۔ ہمارے علم کے مطابق، یہ شدید بیماروں میں علاج کے جوابی AKI ذیلی گروپوں کی شناخت کی پہلی مثال ہے۔

خاص طور پر، AKI-SP2 (ٹیبل 1) کی شناخت کے لیے کوئی ایک متغیر اعداد و شمار کے لحاظ سے دوسرے متغیرات سے بہتر نہیں تھا۔ اس کے برعکس، تین متغیر ماڈل، پلازما انجیوپوائٹین-2 (ANG-2)، انجیوپوائٹین-1 (ANG-1)، اور حل پذیر ٹیومر نیکروسس فیکٹر ریسیپٹر{{8} کا استعمال کرتے ہوئے }} (sTNFR-1)، میں فرق کرنے کے لیے بہترین پیشن گوئی کی کارکردگی تھیشدیدگردہچوٹذیلی فینوٹائپس (C-statistic 0.93)۔ کم ANG-2، کم sTNFR-1، اور اعلی ANG-1 AKI-SP2 کے کم خطرے سے وابستہ تھے۔ اے کے آئی کے جانوروں کے ماڈلز کے مطالعے سے معلوم ہوا ہے کہ یہ پلازما بائیو مارکر اس میں شامل ہیں۔

پیتھوفیسولوجی اور AKI کی شدت۔ تاہم، یہ معلوم نہیں ہے کہ آیا یہ پلازما بائیو مارکر کلینکل کی نشوونما میں ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں۔شدیدگردہچوٹذیلی فینوٹائپس causal مارکروں کی شناخت منشیات کی نشوونما کے اہداف کو بتا سکتی ہے تاکہ اس کی نشوونما کو روکا جا سکے یا علاج کیا جا سکے۔شدیدگردہچوٹشدید بیمار میں اور مریض کے خطرے کی سطح بندی میں مدد کر سکتا ہے۔

جینیاتی ثالثی کا تجزیہ کئی کارآمد قیاس طریقوں میں سے ایک ہے جو ممکنہ طریقہ کار کی نشاندہی کر سکتا ہے جس کے ذریعے ایک آزاد متغیر (مثلاً، جینیاتی متغیر) ایک وضاحتی ثالث (مثلاً، endothelial dysfunction کے بائیو مارکر) کے ذریعے نتیجہ (جیسے، AKI ذیلی فینوٹائپس) کو متاثر کرتا ہے۔ . اس نقطہ نظر کو طبی اعداد و شمار میں بڑے پیمانے پر لاگو کیا گیا ہے تاکہ بیماری کی وجہ سے ہونے والے میکانزم کو سمجھا جا سکے۔ ہم نے قیاس کیا کہ cis-quantitative trait loci (QTLs) میںANGPT1، ANGPT2، اور TNFRSF1Aجین اپنے متعلقہ بائیو مارکر (ANG-1، ANG-2، یا sTNFR-1) کی گردشی سطحوں کو منظم کرکے AKI ذیلی فینوٹائپس کی نشوونما کو متاثر کرتے ہیں۔

طریقے

آبادی کا مطالعہ کریں۔

ہم نے پہلے ممکنہ طور پر جمع کردہ آئی سی یو کوہورٹ کا استعمال کرتے ہوئے AKI ذیلی فینوٹائپس کی شناخت کی اطلاع دی تھی: سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفیزم (SNPs) کی شناخت تبدیل شدہ شدید پھیپھڑوں کی چوٹ کے خطرے (iSPAAR) کا پیش خیمہ۔ iSPAAR آبادی ایکیوٹ ریسپریٹری ڈسٹریس سنڈروم (ARDS) کے خطرے کا جینوم وسیع کیس کنٹرول اسٹڈی ہے جس میں ARDS والے اور اس کے بغیر مریض شامل ہیں۔ iSPAAR آبادی میں پہلے سے مکمل شدہ بے ترتیب کنٹرول ٹرائلز اور ممکنہ طور پر اندراج شدہ ICU کوہورٹ کے مضامین شامل تھے۔ iSPAAR میں اندراج شدہ ہر آبادی کے مطالعہ کے ڈیزائن کی تفصیلات پہلے بیان کی جا چکی ہیں۔ پھیپھڑوں کی شدید چوٹ (ALTA)، سیال اور کیتھیٹر ٹریٹمنٹ ٹرائل (FACTT)، انٹرل اومیگا-3 فیٹی ایسڈ، گاما-لینولینک ایسڈ، اور پھیپھڑوں کی شدید چوٹ (اومیگا) میں اینٹی آکسیڈنٹ سپلیمنٹیشن کے لیے البرٹیرول

اور میساچوسٹس جنرل ہسپتال میں ایکیوٹ ریسپیریٹری ڈسٹریس (MEA) کی مالیکیولر ایپیڈیمولوجی۔ iSPAAR کے اندر، مطالعہ کا اندراج ICU میں داخلے کے 48 گھنٹے بعد ہوا۔ مطالعہ کے اندراج میں ڈی این اے اور پلازما کو جین ٹائپنگ اور بائیو مارکر کے تجزیہ کے لیے جمع کیا گیا جس کے بعدشدیدگردہچوٹتصدیق AKI کی تعریف سیرم کریٹینائن (SCr) میں 0.3 mg/dl سے زیادہ یا اس کے برابر یا "بیس لائن" SCr سے 50 فیصد کے طور پر کی گئی تھی۔ بیس لائن ایس سی آر کو مطالعہ کے اندراج سے پہلے سب سے کم قیمت کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ AKI کو پیشاب کی پیداوار کے ترمیم شدہ معیار (ہر 6 گھنٹے کی بجائے روزانہ آؤٹ پٹ) کا استعمال کرتے ہوئے بھی بیان کیا گیا تھا۔

پلازما بائیو مارکرز کی رینل کلیئرنس کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے ہاربر ویو میڈیکل اور سرجیکل انتہائی نگہداشت کے یونٹس، شدید بیماری میں ایک ممکنہ گروہ کا اندراج کیا۔شدیدگردہچوٹکوہورٹ (سی آئی اے)۔ مضامین اندراج کے لیے اہل تھے اگر وہ 4 میں سے 2 سیسٹیمیٹک انفلامیٹری رسپانس سنڈروم کے معیار پر پورا اترتے ہیں جن میں طبی طور پر مشتبہ انفیکشن تھا اور ان کی جگہ پر موجود پیشاب کیتھیٹر موجود تھا۔ پیشاب کا ایک مقررہ وقت پر جمع کرنا مکمل کیا گیا جو کم از کم 2–4 گھنٹے تک جاری رہا اور EDTA پلازما کے نمونے وقتی پیشاب جمع کرنے کے شروع اور اختتام پر جمع کیے گئے۔ کلیئرنس فارمولہ کلیئرنس کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا(X) = U(X) * V/ P(X)، کہاںU(X) محلول کی پیشاب کی حراستی کی نمائندگی کرتا ہے۔X, V 2–4-گھنٹہ جمع کرنے کی مدت میں پیشاب کی مقدار کی نشاندہی کرتا ہے، اورP (X) محلول کی اوسط پلازما ارتکاز کی نمائندگی کرتا ہے۔X ابتدائی اور آخری خون کے مجموعوں سے۔

جین ٹائپنگ کی حکمت عملی

Illumina 660 پلیٹ فارم (Illumina, San Diego, CA) کا استعمال کرتے ہوئے یورپی نسب کے 421 مریضوں میں جین ٹائپنگ کی گئی۔ جین ٹائپ شدہ ڈیٹا کو نمونہ کال ریٹ فلٹر > 0.97، معمولی ایلیل فریکوئنسی (MAF) > 0.01 اور SNP کال ریٹ > 0.95 کا استعمال کرتے ہوئے کوالٹی کنٹرول کیا گیا تھا۔ کوالٹی کنٹرول کے بعد، 238 SNPs ±50 کلوبیسزANGPT1، ANGPT2،اورTNFRSF1Aپائے گئے. ربط کے عدم توازن (LD) کے بعد ایک r کی کٹائی²{{0}}.8 میں سے، 48 SNPs کو ہٹا دیا گیا جس کے نتیجے میں ایسوسی ایشن ٹیسٹوں میں کل 190 SNPs استعمال ہوئے۔ IMPUTE2 v2.3.0 کا استعمال کرتے ہوئے 1000 جینوم پروجیکٹ ریفرنس پینل کا استعمال کرتے ہوئے امپیوٹیشن کا انعقاد کیا گیا۔

پلازما پروٹین کی تشخیص

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے، پلازما اور پیشاب کے بائیو مارکر کی پیمائش الیکٹرو کیمیلومینیسینٹ امیونوساز (میسو اسکیل ڈسکوری (ایم ایس ڈی)، راک ویل، ایم ڈی) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ خون کو EDTA سے علاج شدہ جراثیم سے پاک ٹیوبوں میں جمع کیا گیا تھا، پیشاب کو جراثیم سے پاک کنٹینرز میں جمع کیا گیا تھا اور دونوں کو فوری طور پر سینٹری فیوج کیا گیا تھا۔ اس کے بعد پلازما اور پیشاب کو −80 ڈگری پر الگ کر کے منجمد کر دیا گیا تھا۔ نمونے مختلف مدتوں کے لیے محفوظ کیے گئے تھے لیکن انھیں ایک ہی بیچ میں پگھلا دیا گیا اور اس مطالعے کے لیے بائیو مارکر پیمائش چلانے کے لیے صرف ایک بار۔ تمام بائیو مارکر پیمائش ہاربر ویو پلمونری ریسرچ لیبارٹریز میں نقلوں میں کی گئیں۔

سلیکو تجزیہ میں

QTL اثرات کے اظہار کے لیے SNPs کی جانچ کرنے کے لیے، ہم نے جینوٹائپ ٹشو ایکسپریشن (GTEx) پورٹل سے استفسار کیا۔

سیل کلچر

حاملہ ہونے کے بعد 100 اور 135 دنوں کے درمیان رضاکارانہ حمل کی رکاوٹوں کے بعد انسانی گردے کے مائیکرو واسکولر اینڈوتھیلیل سیل (HKME Cs) کو جنین کے گردوں سے پاک کیا گیا تھا۔ جنین کے ٹشوز کے استعمال کے لیے باخبر رضامندی مریضوں سے حاصل کی گئی تھی۔ اس کے بعد ہم نے تصادفی طور پر 9 مختلف عطیہ دہندگان HKMECs کا انتخاب کیا، T25 فلاسکس میں 0.2 فیصد جلیٹن کے ساتھ مل کر اور EBM-2 بیسل میڈیم میں 1 فیصد اینٹی بائیوٹک-اینٹیمائکوٹک (لائف ٹیکنالوجیز)، 10 فیصد ایف بی ایس، پر مشتمل نصف ملین سیلز کو پگھلا اور چڑھایا۔ 100 ug/mL ECGS، 50 ug/mL Heparin، اور 20 ng/mL VEGF (R&D)، سنگم تک 48 گھنٹے تک۔ 48 گھنٹے پر، ہم نے HKMECs سے جینومک DNA کو پاک کیا اور سیل سپرنٹنٹس کو جمع کیا گیا۔ ہم نے 8 عطیہ دہندگان کے خلیات کو کامیابی کے ساتھ جین ٹائپ کیا۔

شماریاتی تجزیہ

مریض کے آبادیاتی متغیرات کو یا تو اوسط جمع /-معیاری انحراف یا درمیانی اور چوتھائی کے طور پر رپورٹ کیا جاتا ہے۔ سب سے پہلے، ہم نے ایک اضافی جینیاتی ماڈل (گولڈن ہیلکس، MT) کا استعمال کرتے ہوئے AKI-SP1 کے مقابلے 190 SNPs اور AKI-SP2 کی ترقی کے درمیان ایسوسی ایشن کی جانچ کرنے کے لیے لاجسٹک ریگریشن کا استعمال کیا۔ ہمارے ماڈل کو مندرجہ ذیل کوواریٹس کے لیے استعمال کیا گیا تھا: عمر، جنس، سیپسس، اور پہلے پانچ پرنسپل اجزاء۔ Eigenstrat طریقہ v4.2 کو بنیادی اجزاء کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا اور سب سے اوپر پانچ کوویریٹس کے طور پر شامل کیا گیا تھا۔ اوڈس ریشوز (ORs) کو 95 فیصد اعتماد کے وقفوں کے ساتھ رپورٹ کیا جاتا ہے۔ جینیاتی متغیرات اور AKI ذیلی فینوٹائپس کے درمیان تجزیے کے لیے، ہم نے بینجمینی-ہچبرگ فالس ڈسکوری ریٹ (FDR) حد <0.10 کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" متعدد="" موازنہ="" کے="" لیے="" درست="" کیا،="" جس="" کا="" اندازہ="" ہے="" کہ="" fdr="" ویلیو="" کے="" ساتھ="" 10="" فیصد="" سے="" بھی="" کم="" ایسوسی="" ایشنز="" یہ="" سطح="" غلط="" مثبت="" ہیں="" [31]۔="" حساسیت="" کے="" تجزیے="" میں،="" aki-sp2="" سے="" وابستہ="" اضافی="" snps="" کی="" شناخت="" کے="" لیے="" ایک="" ممنوعہ="" جین="" ٹائپ="" استعمال="" کیا="" گیا="">

دوسرا، ہم نے اعلی کارکردگی کا مظاہرہ کرنے والے SNPs اور لاگ کے درمیان تعلق کا تعین کرنے کے لیے عمر، جنس اور سیپسس کے لیے لکیری ریگریشن ایڈجسٹنگ کا استعمال کیا۔₂تبدیل شدہ بائیو مارکر ارتکاز۔ تیسرا، ہم نے جینیاتی متغیرات اور AKI-SP2 کے درمیان ایسوسی ایشن اور پلازما بائیو مارکر کے ارتکاز کے ذریعے ایسوسی ایشن کی ممکنہ ثالثی کی جانچ کرنے کے لیے ایک کازل انفرنس تجزیہ مکمل کیا۔ ثالثی کا تجزیہ STATA [32، 33] کے لیے ثالثی پیکیج میں نافذ کردہ ساختی مساوات ماڈلنگ کے غیر خطی نفاذ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ آن لائن ضمیمہ میں causal inference analysis کی اضافی تفصیلات فراہم کی گئی ہیں۔ چوتھا، ہم نے جینیاتی متغیرات اور AKI کی شدت کے درمیان ایسوسی ایشن کا تعین کیا، جس کی پیمائش زیادہ سے زیادہ سیرم کریٹینائن سے کی جاتی ہے، لاجسٹک ریگریشن کے ذریعے۔ مواد اور طریقوں کی اضافی تفصیلات آن لائن ضمیمہ میں فراہم کی گئی ہیں۔ تجزیہ میں، ہم نے 190 SNPs کا اندازہ کیا اور ایک قدامت پسند استعمال کیا۔p-valueاز 0.05/190 =2.6 × 10^{− 4}. یہ دیکھتے ہوئے کہ تقریباً 40 فیصد ICU مریضوں میں AKI تیار ہوتا ہے، اور متوقع کنٹرول (AKI-SP1) ٹو کیس (AKI-SP2) تناسب 1.5، 421 کا متوقع نمونہ سائز، اور MAF کم از کم { {16}}.30، ہمارے پاس 1.5 یا اس سے زیادہ کے رشتہ دار خطرے کا پتہ لگانے کی 81 فیصد طاقت ہوگی [34]۔ STATA (ورژن 15) اور گولڈن ہیلکس (ورژن 4.0) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیے مکمل کیے گئے۔ تمام مطالعات کو واشنگٹن یونیورسٹی میں انسانی مضامین کے ڈویژن نے منظور کیا تھا۔ اندراج شدہ تمام مضامین سے تحریری باخبر رضامندی حاصل کی گئی تھی۔

نتائج

آبادی کی خصوصیات ہمارے پچھلے کام میں توثیق کرنے والے گروپ کے 425 مریضوں میں سے، 421 کے پاس جین ٹائپنگ ڈیٹا دستیاب تھا۔ ڈیموگرافکس اور بنیادی طبی خصوصیات کو جدول 1 میں بیان کیا گیا ہے۔ تمام مضامین یورپی نسل کے تھے۔ کل 267 (63 فیصد) کو AKI-SP1 اور 154 (37 فیصد) کو AKI-SP2 کے طور پر درجہ بندی کیا گیا۔ جن مضامین نے AKI-SP2 تیار کیا ان میں پریزنٹیشن پر بیماری کی شدت زیادہ تھی (مطلب شدید فزیالوجی اور دائمی صحت کی تشخیص (APACHE) III سکور، 111 ± 26 بمقابلہ 74 ± 24)، سیپسس ہونے کا زیادہ امکان تھا (84 فیصد بمقابلہ 66 فیصد)، اور AKI-SP1 کے مقابلے میں واسوپریسرز (79 فیصد بمقابلہ 42 فیصد) کے ساتھ علاج کیے جانے کا زیادہ امکان تھا۔

ANGPT2 کے قریب جینیاتی تغیر، rs2920656، AKI-SP2 سے وابستہ ہے

جین کے 190 SNPs ±50 کلو بیس میں سے، 72 ANGPT1 کے قریب تھے، 100 ANGPT2 کے قریب تھے، اور 18 TNFRSF1A جین کے قریب تھے۔ ہم نے FDR <0.05 سے="" ملنے="" والے="" ایک="" snp="" کی="" نشاندہی="" کی="" جو="" aki-sp1="" (ٹیبل="" 2="" اور="" تصویر="" 1)="" کے="" مقابلے="" aki-sp2="" کے="" ساتھ="" وابستہ="" تھی۔="" angpt1="" یا="" tnfrsf1a="" (ٹیبل="" s2="" اور="" s3)="" میں="" یا="" اس="" کے="" آس="" پاس="" snps="" کے="" ساتھ="" کوئی="" اہم="" ایسوسی="" ایشن="" نہیں="" دیکھی="" گئی۔="" aki-sp2="" کے="" خطرے="" کے="" ساتھ="" مضبوط="" ترین="" تعلق="" کا="" مظاہرہ="" کرنے="" والا="" snp="" rs2920656="" تھا="" (یا،="" 0.45؛="" 95="" فیصد="" ci،="" 0.31–0.66؛="" p=""><1.4 ×="" 10−="" 5؛="" fdr="0.003)۔" یہ="" انٹرنک="" snp="" angp="" t2="" کی="" 3′="" پوزیشن="" پر="" ≈="" 30="" kb="" بہاو="" ہے="" اور="" اس="" میں="" تقریباً="" 3="" فیصد="" تغیرات="" کی="" وضاحت="" کی="" گئی="">

AKI-SP2 (R2) کی ترقی۔ چونکہ مضامین کی صرف ایک چھوٹی سی تعداد ہیموزیگس rs2920656 (n=26) تھی، ہم نے ایک غالب جینیاتی ماڈل میں rs2920656 اور AKI-SP2 کے درمیان ایسوسی ایشنز کا بھی تجربہ کیا، جس نے مستقل مزاجی فراہم کی۔ نتائج (یا، 0.42؛ 95 فیصد CI، 0.28–0.64؛ p <1.4 ×="" 10−="" 6)۔="" ہم="" نے="" angpt2="" لوکس="" کے="" اندر="" اضافی،="" ممکنہ="" طور="" پر="" مضبوط،="" انجمنوں="" کے="" لیے="" بھی="" تجربہ="" کیا="" جن="" کا="" استعمال="" کیا="" گیا="" تھا="" لیکن="" ہمیں="" rs2920656="" (ٹیبل="" s4)="" کے="" ساتھ="" مشاہدہ="" کردہ="" اس="" سے="" زیادہ="" مضبوط="" ایسوسی="" ایشن="" نہیں="" ملی۔="" حساسیت="" کے="" تجزیے="" میں،="" ہم="" نے="" جانچ="" کیا="" کہ="" آیا="" شدید="" بیمار="" مریضوں="" کو="" بغیر="" کسی="" کے="" شامل="" کیا="">شدیدگردہچوٹجینیاتی ایسوسی ایشن کو متاثر کرے گا. ہم نے بغیر AKI اور AKI-SP1 والے مریضوں کو ایک ساتھ گروپ کیا اور طے کیا کہ آیا rs2920656 اب بھی AKI-SP2 کے کم ہونے والے خطرے سے مضبوطی سے وابستہ ہے۔ اس تجزیے میں، 839 مریضوں کے پاس AKI یا AKI-SP1 نہیں تھا اور 154 میں AKI-SP2 تھا۔ RSS2920656 (یا 0.31؛ 95 فیصد CI، 0.19–0.52; p <0.001) (ٹیبل="" s5)۔="" ایک="" اور="" حساسیت="" کے="" تجزیے="" میں،="" ہم="" نے="" جانچ="" کیا="" کہ="" آیا="" rs2920656="" کا="" تعلق="" ispaar="" میں="" شامل="" چار="" مختلف="" مطالعات="" میں="" سے="" ہر="" ایک="" کے="" اندر="" aki-sp2="" کے="" خطرے="" میں="" کمی="" سے="" تھا۔="" تین="" بے="" ترتیب="" کنٹرول="" ٹرائلز="" (alta،="" factt،="" اور="" omega)="" اور="" icu="" ممکنہ="" کوہورٹ="" (mea)="" میں="" سے="" ہر="" ایک="" کے="" اندر،="" نقطہ="" تخمینہ="" rs2920656="" کے="" معمولی="" ایلیل="" سے="" مطابقت="" رکھتا="" تھا="" جو="" aki-sp2="" (ٹیبل="" s6)="" کی="" ترقی="" کے="" خطرے="" کو="" کم="" کرتا="" ہے۔="" )۔="" اس="" طرح،="" rs2920656="" کا="" پلازما="" بائیو="" مارکر="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" وابستگی="" کا="" تعین="" کرنے="" کے="" لیے="" مزید="" تجزیہ="" کیا="">

RSS2920656 کا T ایلیل پلازما ANG میں کمی سے وابستہ ہے-2

اس کے بعد ہم نے rs2920656 اور پلازما ANG-2 ارتکاز کے درمیان تعلق کا تجزیہ کیا۔ rs2920656 کے T ایلیل کی ہر ایک کاپی عمر، جنس اور سیپسس کو ایڈجسٹ کرنا لاگ 2 پلازما ANG-2 ارتکاز (= − 0.09؛ 95 فیصد CI {{9}) سے وابستہ تھا۔ }.15، −0.04؛ P=0.002)۔ C ایلیل کے لیے ہوموزائگس مضامین نے پلازما ANG کی سب سے زیادہ تعداد ظاہر کی پلازما ANG-2 ارتکاز (28,308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944)۔ اس کے علاوہ، ANGP T2 جین کے علاقے کے قریب ٹیسٹ کیے گئے 100 SNPs میں سے، rs29206565 پلازما ANG کے ساتھ سب سے زیادہ مضبوطی سے وابستہ تھا۔ -2 ارتکاز (تصویر 2)۔

ثالثی کا تجزیہ بتاتا ہے کہ ANG-2 AKI-SP2 کی نشوونما کا سبب ہے

ہم نے ثبوت کے لیے جانچ کی کہ RSS2920656 اور AKI-SP2 کے لیے خطرے کے درمیان تعلق پلازما ANG-2 ارتکاز (تصویر 3) کے ذریعے ہوتا ہے۔ AKI-SP2 پر rs2920656 کا کل اثر کل=− 0.16 فی ایلیل تھا (95 فیصد CI -0.24, − 0 .10, p=1.0 × 10− 4 )، جس سے پتہ چلتا ہے کہ جینیاتی قسم کے ہر ایک چھوٹے ایلیل (T ایلیل) کے لیے AKI-SP2 کے پیدا ہونے کا خطرہ 16 فیصد کم ہو جاتا ہے۔ ثالثی ثالثی کے تجزیہ نے AKI-SP2 پر rs2920656 کے لیے ایک اہم بالواسطہ اثر کا پتہ لگایا جو پلازما ANG-2 ارتکاز (بالواسطہ، −0.07 فی ایلیل؛ 95 فیصد CI -0.11, − 0.03; p { {34}}.001)، جس کا مطلب ہے rs2920656 اور AKI-SP2 کے درمیان اثر کا تناسب جو ANG-2 کے ارتکاز کے ذریعے ثالثی کیا جاتا ہے 41.5 فیصد ہے۔

RSS2920656 کا T ایلیل 7 دنوں میں AKI کی شدت میں کمی سے وابستہ ہے۔

اس کے بعد، ہم نے AKI کی شدت کے روایتی معیار کے ساتھ rs2920656 کے ایسوسی ایشن کا تجربہ کیا، جیسے کہ زیادہ سے زیادہ سیرم کریٹینائن اور مطالعہ کے اندراج کے بعد 7 دنوں کے اندر سیرم کریٹینائن میں اضافہ۔ ایک غالب جینیاتی ماڈل میں، rs2920656 کا T ایلیل − 0.44 mg/dL (95 فیصد CI، − 0.77) کے سیرم کریٹینائن میں کمی سے وابستہ تھا۔ , − 0.10), p=0.01) عمر، جنس، باڈی ماس انڈیکس اور سیپسس اسٹیٹس کو ایڈجسٹ کرنے کے بعد۔ RSS2920656 کا معمولی ایلیل بھی بیس لائن اور دن 7 (=− 0.25, 95 فیصد CI, − 0.46, − 0.03; p=0.03) کے درمیان سیرم کریٹینائن میں اضافے میں کمی سے وابستہ تھا۔

RSS2920656 کا T ایلیل سیل کلچر میں نچلے ANG-2 سے وابستہ ہے۔

ہم نے وٹرو تجربات اور سلیکو تجزیوں میں rs2920656 کی عملی اہمیت کا تعین کیا۔ 8 مختلف انسانی جنین میں سےگردہٹشونمونے، 2 CC تھے، 5 CT تھے، اور 1 TT تھے rs2920656 کے لیے۔ ایک غالب جینیاتی ماڈل میں، ANG-2 کا ارتکاز عددی طور پر سی ایلیل کے لیے ہم جنس پرست عطیہ دہندگان کے اینڈوتھیلیل خلیوں میں سب سے زیادہ تھا اور ٹی ایلیل کے کیریئرز میں کم تھا، p=0.07 (تصویر 4)۔ GTEx پروجیکٹ ڈیٹا بیس میں، rs2920656 ANGPT2 جین اظہار سے وابستہ نہیں تھا۔ تاہم، دو دیگر SNPs (rs41311412 اور rs2515591) جو rs2920656 کے ساتھ درمیانے درجے کے LD (r2=0.23 اور D'=0.86) میں ہیں ANGPT2 جین کے کم اظہار (p) سے وابستہ تھے۔=4.1 × 10− 5 ) tibial artery میں، ایک ٹشو جو endothelial خلیات (ٹیبل S7) کے لیے انتہائی افزودہ ہوتا ہے۔

پلازما ANG-2 کو گردوں کے ذریعے کم سے کم صاف کیا جاتا ہے اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا میں فرق ہےگردہفنکشنپلازما ANG{{0}} ارتکاز کو متاثر کر سکتا ہے، ہم نے AKI کے ساتھ اور اس کے بغیر شدید بیمار مضامین میں ANG-2 رینل کلیئرنس کی پیمائش کی۔ بک اینڈڈ پلازما کے نمونوں کے ساتھ 20 مختلف وقت پر پیشاب کے نمونوں کے مجموعوں میں، میڈین سیرم کریٹینائن 086 mg/dL تھا جس کی انٹرکوارٹائل رینج (IQR) 0.69 سے 1.45 mg/dL تھی۔ میڈین پلازما ANG-2 کا ارتکاز 10,261 pg/mL (IQR 6210–19,115 pg/mL) تھا۔ اس کے برعکس، 206 pg/mL (IQR 11–839 pg/mL) کے درمیان پیشاب کی ANG-2 ارتکاز 50-گنا کم تھی۔ ANG-2 کا حساب شدہ رینل کلیئرنس ہر وقت پیشاب کے جمع کرنے کے لیے < 1="" ml/min="" تھا،="" جس="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" پلازما="" ang-2="" کی="" ارتکاز="" صرف="" aki="" کو="" خراب="" کرنے="" کے="" کام="" کے="" طور="" پر="" نہیں="" بڑھایا="" جاتا="" ہے="" (ٹیبل="">