ڈینڈروبیئم لوڈیجیسی رولف سے اینٹی آکسیڈیٹیو، ٹائروسینیز انحیبیٹری اور عمر بڑھنے کے خلاف سرگرمیوں کے ساتھ فینولک اجزاء
Apr 07, 2023
خلاصہ
ڈینڈروبیئم لوڈیجیسی کے پاؤڈرڈ تنوں کے آبی ایتھنول کے عرق نے تین نئے فینولک فراہم کیے جن میں تین-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl)propionyl -diacylglycerol (1), (R){{ 7}},5,4ʹ-trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) اور (S)-5,5′,7-trihydroxy-3′,4′ -dimethoxyfavanone (3)، گیارہ معروف اینالاگ کے ساتھ۔ ان کے ڈھانچے کا تعین وسیع سپیکٹروسکوپک تجزیہ سے کیا گیا تھا۔ قدرتی اینٹی آکسیڈنٹس، سفید کرنے اور عمر بڑھانے والے ایجنٹوں کی شناخت کرنے کے لیے، ان فینولکس کی صلاحیتوں کا اندازہ لگایا گیا کہ وہ 1،2-ڈفینائل-2-پکریل ہائیڈرزائل (DPPH) ریڈیکل، ٹائروسینیز کی پیداوار کو روکنے کی صلاحیتیں، اور انسانی dermal fibroblasts-adult (HDFa) پرکھ کے ذریعے کولیجن کی پیداوار کو متحرک کرنے کی ان کی صلاحیتیں۔ یہ پایا گیا کہ مرکبات 1، 4–8، 13، اور 14 نے اہم ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمیوں کی نمائش کی، کمپاؤنڈ 10 نے ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی (IC50 37.904 ug/mL) کی نمائش کی، اور مرکب 9 نے نمایاں کولیجن کی پیداوار کو ظاہر کیا۔ EC50 قدر 3.182 ug/mL۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ D. loddigesii کے فینولک اجزاء امیدوار اینٹی آکسیڈنٹس، جلد کو سفید کرنے والے، اور/یا بڑھاپے کو روکنے والے ایجنٹ ہو سکتے ہیں۔
متعلقہ مطالعات کے مطابق،cistancheایک عام ہےجڑی بوٹیجسے "معجزہ جڑی بوٹی جو زندگی کو طول دیتی ہے" کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اس کا بنیادی جزو ہے۔cistanoside، جس کے مختلف اثرات ہوتے ہیں جیسےاینٹی آکسیڈینٹ, غیر سوزشی، اورمدافعتی فنکشن کو فروغ دینا. cistanche اور کے درمیان میکانزمجلد کی سفیدیکے اینٹی آکسیڈینٹ اثر میں مضمر ہے۔cistanche glycosides. انسانی جلد میں میلانین کے آکسیکرن سے پیدا ہوتا ہے۔ٹائروسینtyrosinase کی طرف سے اتپریرک، اور آکسائڈریشن کے ردعمل میں آکسیجن کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، لہذا جسم میں آکسیجن فری ریڈیکلز میلانین کی پیداوار کو متاثر کرنے والے ایک اہم عنصر بن جاتے ہیں. Cistanche میں cistanoside ہوتا ہے، جو کہ ایک اینٹی آکسیڈنٹ ہے اور جسم میں آزاد ریڈیکلز کی پیداوار کو کم کر سکتا ہے، اس طرحمیلانین کی پیداوار کو روکتا ہے۔
Cistanche Tubulosa Supplement پر کلک کریں۔
مزید معلومات کے لیے:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
گرافک خلاصہ
1. تعارف
ڈینڈروبیئم (Orchidaceae) کی نسل عالمی سطح پر تقریباً 1500 پرجاتیوں پر مشتمل ہے، جن میں سے تقریباً 80 انواع چین میں اگتی ہیں [1]۔ اس جینس کے متعدد پودوں کے تنوں کو "شی-ہو" کے نام سے جانا جاتا ہے، جو ہزاروں سالوں سے روایتی چینی طب اور دائمی ایٹروفک گیسٹرائٹس، جلد کی عمر بڑھنے، بخار، قلبی بیماری، اور اس کے علاج کے لیے لوک علاج کے طور پر استعمال ہو رہے ہیں۔ جسمانی رطوبتوں کی پیداوار کو فروغ دینے کے لیے ایک ٹانک [2]۔ اس جینس پر پچھلے مطالعات نے پولی سیکرائڈز، فینولک مرکبات، الکلائڈز، اور سیسکوٹرپینائڈز کی ایک سیریز کو الگ تھلگ کرنے کا باعث بنا [1، 3-5]، جن میں سے کچھ مختلف بایو ایکٹیویٹیز کے حامل ہیں جن میں اینٹی سوزش [6]، اینٹی مائکروبیل [2]، اینٹی آکسیڈینٹ شامل ہیں۔ [7]، antitumor [8]، antiplatelet aggregation [9]، immunomodulatory [10]، اور انفلوئنزا A کے خلاف سرگرمیاں [11]۔
ڈینڈروبیم لوڈیجیسی، ایک بارہماسی ایپی فیٹک جڑی بوٹی، چین کے جنوب مغربی علاقے، جیسے گوانگسی، گیزہو، اور یوننان صوبوں میں وسیع پیمانے پر تقسیم کی جاتی ہے [12]۔ اس کے تنے کو گیسٹرائٹس، بخار اور چکر آنے کے علاج کے لیے لوک طب میں استعمال کیا گیا ہے [13]۔ اس جینس [1, 5, 14-17] سے ساختی طور پر متنوع اور حیاتیاتی طور پر فعال قدرتی مصنوعات کی تلاش کو جاری رکھتے ہوئے، اس پودوں کی نوع کے فارماسولوجیکل طور پر فعال اجزاء کی ایک گہرائی سے تفتیش یہاں کی گئی۔ نتیجے کے طور پر، تین نئے فینولک مرکبات (1–3) کے ساتھ ساتھ گیارہ معلوم مرکبات (تصویر 1) کو D. loddigesii کے تنے کے 80 فیصد ایتھانولک عرق سے الگ تھلگ کر دیا گیا۔ ان مرکبات کی تنہائی، ساخت کی وضاحت، اور حیاتیاتی تشخیص یہاں پیش کی گئی ہے۔
2 نتائج اور بحث
مرکب 1، ایک سفید ٹھوس کے طور پر حاصل کیا گیا، C21H26O7 کا سالماتی فارمولہ دیا جیسا کہ (−)-HRESIMS آئن کے ذریعے m/z 389.1602 [M−H]− (C21H25O7، 389.16 کے لیے calcd 28}}6) نو ڈگری غیر سنترپتی کے ساتھ۔ 1 کے 1 H NMR سپیکٹرم میں δH 6.85 (1H, d, J=1.7 Hz), 6.75 (1H, d, J=8.0 Hz), 6.68 (1H) پر سات خوشبودار پروٹون ہوتے ہیں۔ ، dd, J = 8.0, 1.7 Hz), 7.01 (2H, d, J = 8.5 Hz) اور 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), ایک 1,3،4-متبادل بینزین کی انگوٹھی اور 1،4-منتقل شدہ بینزین کی انگوٹھی کی موجودگی کا مشورہ۔ اس کے 13C NMR سپیکٹرم نے 21 کاربن گونجوں کی نمائش کی جس میں دو میتھائل (ایک میتھوکسی)، چار الیفاٹک میتھیلین، نو میتھین (دو sp3، سات sp2)، اور چھ کواٹرنری کاربن (ایک کاربونیل، پانچ اولیفینک بشمول تین آکسیجن)۔ H-7/C-1 (δC 131.6), C-2 (δC 111.7), C-6 (δC 121.4), C کے HMBC ارتباط (تصویر 2) -8 (δC 74.2)، اور C-10 (δC 65.3)؛ H-9/C-7 (δC 83.8) اور C-8 (δC 74.2)؛ H-10/C-11 (δC 15.6)؛ 3-OMe (δH 3.81)/C-3 (δC 149.1)، H-7/H-8/H2-9 اور H{{ کے ارتباط کے ساتھ 1 H–1 H COZY سپیکٹرم (تصویر 2) سے 87}}/H3-11 نے 7-O-ethylguaiacylglycerol [18] کی موجودگی کی نشاندہی کی۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ J7,8 erythro isomer کے لیے تقریباً 5 Hz اور سرنج-glycerols اور diacylglycerol derivatives کے معاملات میں تینوں isomers کے لیے 7 Hz تھا۔ اس طرح، کمپاؤنڈ 1 کو J7,8 (6.5 Hz) [18] کے ساتھ تین آئیسومر سمجھا جاتا تھا۔ H-7ʹ (δH 2.79, t, J = 7.5 Hz)/C-8ʹ (δC 37.1)، C-1ʹ (δC 132.7)، C-2ʹ، 6ʹ (δC 130.2) اور C-9ʹ (δC) کے HMBC ارتباط 174.6)، H-8ʹ (δH 2.59, t, J = 7.5 Hz)/C-7ʹ (δC 31.0), C-1ʹ، اور C-9ʹ کے ساتھ ساتھ H-8ʹ/H-7ʹ کی COZY کراس چوٹیوں کا اشارہ کیا گیا ہے۔ p-hydroxycoumaric acid کی موجودگی [19]۔ اوپر بیان کردہ شواہد کی بنیاد پر، 1 کو ایسٹر لنکیج کے ذریعے 7-O-ethylguaiacylglycerol moiety اور p-hydroxy-coumaric ایسڈ رکھنے کی تجویز دی گئی تھی۔ H-9 سے C-9ʹ سے HMBC کے ارتباط نے تجویز کیا کہ ایسٹر کا تعلق C-9 اور C-9ʹ کے درمیان تھا۔ اس طرح، 1 کی ساخت کا تعین کیا گیا جیسا کہ دکھایا گیا ہے۔
(R){{0}},5,4ʹ-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) سفید ٹھوس کے طور پر حاصل کیا گیا تھا۔ 2 کے HRESIMS سپیکٹرم نے m/z 319.1180 [M−H]− (calcd. for C17H19O6, 319.1187) پر 8 ڈگری غیر سنترپتی کے ساتھ ایک quasimolecular آئن چوٹی ظاہر کی۔ 2 کے 1 H NMR سپیکٹرم نے δH 3.75 (3H, s), 3.70 (3H, s) اور 3.17 (3H, s) پر تین میتھوکسیل گروپ دکھائے۔ ایک آکسیجن میتھین پروٹون δH 4.13 (1H, t, J=6.8 Hz, H-) پر δH 2.73 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz) اور 2.96 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz) پر دو میتھیلین سگنلز؛ اور پانچ خوشبودار پروٹون، 1,3,4 کے طور پر ظاہر ہوتے ہیں،5-ٹیٹرا متبادل خوشبو والی انگوٹھی δH 6.28 (1H, d, J=1.8 Hz) اور 6.34 (1H, d, J{{) ۶ d, J=8.0 Hz) اور 6.52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz)۔ 2 کے 13CNMR اور DEPT سپیکٹرا میں تین آکسی میتھیلین، ایک میتھیلین، ایک آکسیجن میتھین، اور 12 خوشبو دار کاربن (پانچ آکسیجن والے) دکھائے گئے۔ اس کے این ایم آر ڈیٹا (ٹیبل 1) کا ڈینڈروکنڈن سی [20] کے ساتھ موازنہ نے بڑی مماثلتیں ظاہر کیں سوائے ایک اور میتھوکسیل گروپ کی موجودگی کے، جو 3ʹ-OMe اور H-5ʹ سے HMBC کے ارتباط کے ذریعے C-3ʹ پر واقع تھا۔ C-3ʹ (δC 148.4)۔ اس کے علاوہ، 3-OMe اور H-2/C-3 (δC 149.5) کے متعدد HMBC تعاملات (تصویر 2)؛ -OMe/C- (δC 86.9) نے بالترتیب C-3، اور C- پر دوسرے میتھوکسیل گروپوں کی تجویز دی۔ C- میں مطلق ترتیب کو منفی آپٹیکل گردش ([훼] 26 D -12.46) کی بنیاد پر R کے طور پر متعین کیا گیا تھا، اسی طرح aphyllous D [훼] 20 D -20.3، MeOH) [15]۔ اس کے مطابق، 2 کی ساخت کا تعین کیا گیا جیسا کہ دکھایا گیا ہے۔
(S){{0}},7,5′-Trihydroxy-3′,4′-dimethoxyfavanone (3) زرد بے رنگ پاؤڈر کے طور پر حاصل کیا گیا تھا اور اس میں مالیکیولر C17H16O7 تھا (1{{69} } ہائیڈروجن کی کمی کے اشارے) (−)-HRESIMS آئن کے مطابق m/z 331.0819 [M – H]− (calcd 331.0823)۔ 206 اور 294 nm پر UV جذب میکسما نے فلاوانون کی موجودگی کی نشاندہی کی [21]۔ 1 H NMR سپیکٹرم (ٹیبل 1) نے غیر خوشبو والے خطے میں δH 5.29 (1H, dd, J=12.7, 3.1, H-2), 3.04 (1H, dd, J=17.1, 12.7, H-3ax), اور 2.71 (1H, dd, J=17.1, 3.1, H-3 eq), چار خوشبودار پروٹون δH 5.87 (1H, d, J=2.2, H-6), 5.91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6.62 (1H, d, J=2.0, H-2ʹ) اور 6.61 (1H, d, J=2.0, H-6ʹ), دو میتھوکسیل گروپ δH 3.83 (3H, s) اور 3.77 (3H, s)۔ 13C NMR اور DEPT سپیکٹرا (ٹیبل 1) میں 17 کاربن کے لیے گونجیں ہیں جن میں دو میتھوکس، ایک میتھیلین، ایک میتھین، ایک کاربونیل کاربن، اور 12 خوشبودار کاربن شامل ہیں۔ اس کے NMR ڈیٹا کے جامع تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ اس کا پلانر ڈھانچہ ڈائی ہائیڈرو ٹرائیسن [22] سے گہرا تعلق رکھتا ہے، سوائے OH-4ʹ اور OCH3-5ʹ dihydro tricin میں 3 میں ٹرانسپوز کیے گئے تھے۔ اس کی تصدیق HMBC کراس- چوٹیاں (تصویر 2) H-2ʹ، H-6ʹ، اور OCH3-4ʹ سے C-4ʹ (δC 137.7)، H-6ʹ سے C-5ʹ (δC 151.8) تک۔ C-2 پر مطلق ترتیب کو اس کی نظری گردش میں منفی مخصوص گردش کی قدر (– 46.64, MeOH) کی بنیاد پر S-فارم میں ہونے کے طور پر پیش کیا گیا تھا [23]۔ لہذا، کمپاؤنڈ 3 کی ساخت اس طرح واضح طور پر تفویض کی گئی تھی جیسا کہ دکھایا گیا ہے۔
گیارہ معروف مرکبات کی شناخت ٹریپیڈیشن 4 [24]، mescalin 5 [25]، 4,5,4′-trihydroxy- 3,3′-dimethoxybibenzyl 6 [26], 4′,5- کے طور پر کی گئی تھی۔ dihydroxy-3,3′- dimethoxybibenzyl 7 [27], Tristin 8 [28], batatas in III 9 [27], 3,5,3′-hydroxybibenzyl 10 [29], aphyllous C 11 [15], ڈینٹیفارم A 12 [30]، dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate 13 [31]، p-hydroxyphenyl trans-ferulate 14 [32] سپیکٹروسکوپک تجزیہ اور ادب کے ساتھ ان کے سپیکٹرل ڈیٹا کا موازنہ کرکے۔
فینولک مرکبات، انسانی خوراک کا ایک لازمی حصہ ہیں اور انہیں طاقتور اینٹی آکسیڈنٹس کے طور پر جانا جاتا ہے کیونکہ ان کی زنجیر کو توڑنے والی طاقتور کارروائی ہوتی ہے اور وہ براہ راست اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمی میں حصہ ڈال سکتے ہیں [33]۔ ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینگنگ پرکھ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا جائزہ لینے کے لیے استعمال ہونے والے سب سے عام اور نسبتاً تیز طریقوں میں سے ایک ہے۔ وہ مرکبات جو DPPH ریڈیکل کو ہائیڈروجن ایٹم عطیہ کر سکتے ہیں، اور پھر DPPH کی کم شکل کو جنم دیتے ہیں، ممکنہ اینٹی آکسیڈنٹ ایجنٹ سمجھے جائیں گے۔ تمام مرکبات کا ان کی ڈی پی پی ایچ ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمیوں کے لیے جائزہ لیا گیا۔ موجودہ نتائج (ٹیبل 2) نے ظاہر کیا ہے کہ فینولک مرکبات کی اکثریت (1، 4–8، 13، اور 14) نے 100 ug/mL پر 89.411 سے 94.278 فیصد تک سکیوینجنگ صلاحیتوں کے ساتھ اہم سرگرمیاں دکھائیں۔
دوسری طرف، ٹائروسینیز ایک تانبے پر مشتمل انزائم ہے اور میلانوسائٹس [34] میں میلانن بائیو سنتھیس کے راستے کو کنٹرول کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ لہذا، ٹائروسینیز روکنے والے کاسمیٹکس یا دواؤں کی مصنوعات کے ہائیپر پگمنٹیشن اور جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹوں کے اہم اجزاء بن گئے۔ موجودہ مطالعے میں ، تمام الگ تھلگوں کا ان کی ٹائروسینیز روکنے والی سرگرمی (ٹیبل 2) کے لئے جائزہ لیا گیا تھا۔ کوجک ایسڈ، ایک مطلوبہ جلد کو ہلکا کرنے والا ایجنٹ، ایک مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ 3,5,3′-hydroxybibenzyl (10) نے 37.904 ug/mL کی IC50 قدر کے ساتھ ایک اہم روک تھام کی سرگرمی کا انکشاف کیا۔ Aphyllals C (11) نے اعتدال پسند روکنا (IC50, 152.56 ug/mL) دکھایا۔ باقی تمام مرکبات 200 ug/mL تک ارتکاز میں غیر فعال تھے۔ اس تحقیق میں، یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ مرکبات 10 اور 11 میلانین بائیو سنتھیسس سے متعلقہ جلد کی بیماریوں کے علاج کے لیے ممکنہ امیدوار ہو سکتے ہیں۔
اس بات کو مدنظر رکھتے ہوئے کہ یہ نوع طبی طور پر جلد کی عمر بڑھانے کے لیے استعمال ہوتی ہے، کیونکہ، کولیجن جلد کی مضبوطی اور لچک کے لیے اہم ہے، اور اس کی تنزلی سے جھریاں پڑتی ہیں جو عمر بڑھنے کے ساتھ ہوتی ہیں [35]۔ لہذا، HDFa میں کولیجن کی پیداوار پر ان کے اثرات کے لیے تمام مرکبات کا بھی جان بوجھ کر جائزہ لیا گیا۔ نتائج (ٹیبل 2) نے دکھایا کہ کمپاؤنڈ 9 نمایاں طور پر محرک HDFa کولیجن کی پیداواری سرگرمی (EC50 3.182 ug/mL)۔ مرکبات 6 اور 7 نے کمزور سرگرمیاں ظاہر کیں، بالترتیب 10 ug/mL پر 33.062 فیصد اور 29.157 فیصد کولیجن کی پیداوار۔ موجودہ نتائج نے نہ صرف D. loddigesii کے نسلی فارماکولوجیکل استعمال کی حمایت کی بلکہ کولیجن کی کمی سے وابستہ بیماریوں جیسے جلنے اور السر کی نشوونما کے لیے ایک قابل اعتماد ساخت کا نمونہ بھی فراہم کیا۔
3 تجرباتی
3.1 عام تجرباتی طریقہ کار
3.2 پودوں کا مواد
D. loddigesii کے تنوں کو ستمبر 2014 میں عوامی جمہوریہ چین کے صوبہ یونان کے شہر وینشن شہر سے اکٹھا کیا گیا تھا اور پروفیسر ہانگ یو (یوننان یونیورسٹی، کنمنگ، عوامی جمہوریہ چین) نے ان کی شناخت کی تھی۔ واؤچر کا نمونہ (نمبر 20,140,829) مغربی چین میں فائٹو کیمسٹری اور پلانٹ ریسورس کی سٹیٹ کی لیبارٹری، کنمنگ انسٹی ٹیوٹ آف باٹنی، چائنیز اکیڈمی آف سائنسز میں جمع کرایا گیا ہے۔
3.3 نکالنا اور الگ تھلگ کرنا
D. loddigesii کے خشک اور پاؤڈر تنوں (10.2 کلوگرام) کو کمرے کے درجہ حرارت میں 80 فیصد ایتھنول کے ساتھ تین بار نکالا گیا اور کم دباؤ میں مرتکز کیا گیا۔ اس کے بعد، باقیات کو H2O میں معطل کر دیا گیا اور EtOAc فریکشن (220 g) حاصل کرنے کے لیے EtOAc کے ساتھ تقسیم کیا گیا، جسے پیٹرولیم ایتھر/ایسیٹون (15:1 سے {15:1) کے گریڈینٹ کے ساتھ سلیکا جیل کالم کرومیٹوگرافی کا نشانہ بنایا گیا۔ {110}}:1) 22 فریکشنز (Fr.1–22) کے لیے۔ Fr.11 (6 جی) کو CHCl3/MeOH (300:1) کے ساتھ سلیکا جیل CC کا نشانہ بنایا گیا، پھر اس کے بعد MCI کالم (MeOH/H2O گریڈینٹ، 60:40–95:5) اور سلیکا جیل CC (CHCl3/ MeOH، 200:1) 12 (4 ملی گرام) حاصل کرنے کے لیے۔ Fr.13 (850 mg) کو MCI (MeOH/ H2O، 60:40 سے 95:5) کے کالم پر پانچ حصوں (Fr.13.1–Fr.13.5) دینے کے لیے الگ کیا گیا تھا۔ Fr.13.4 (150 mg) afforded compounds 4 (3 mg) اور 5 (5 mg) by HPLC تیاری (MeOH/H2O, 60:40)۔ Fr.16 (19 g) کو CHCl3/MeOH (100:1 سے 20:1) کے ساتھ 6 ذیلی حصوں (Fr.16.1–Fr.16.6) کے متحمل ہونے کے لیے سیلیکا جیل کالم پر کرومیٹوگراف کیا گیا تھا۔ Fr.16.4 (2.3 g) MCI کالم کو MeOH/H2O (50:50–100:0) کے ساتھ لاگو کیا گیا اور پھر Sephadex LH-20 (MeOH/ H2O، 90:10) کے کالم پر مزید تقسیم کیا گیا۔ پیداوار 7 (716 ملی گرام) اور 13 (39 ملی گرام)۔ Fr.16.4، Fr.16.6 (240 mg) afforded compound 9 (7 mg) کی انہی شرائط کو استعمال کرتے ہوئے Fr.18 (10 g) کو سلیکا جیل CC (CHCl3/MeOH، 100:1–20:1) کے ذریعے الگ کیا گیا، پھر MCI (MeOH/H2O گریڈینٹ، 50:50–100:0) اور Sephadex LH{{ سے گزرا۔ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) 3 (25 mg) اور 11 (4 mg) حاصل کرنے والے کالم۔ Fr.19 (20 g) کو سات فریکشن (Fr.19.1–Fr.19.7) حاصل کرنے کے لیے MeOH/H2O (30:70–100:0) کے ساتھ ایک MCI کالم کا نشانہ بنایا گیا۔ Fr.19.5 (2.3 g) کو بار بار سلکا جیل کالم (CHCl3/MeOH، 30:1) سے 8 (15 mg) اور 10 (7 mg) کے متحمل کرنے کے لیے الگ کیا گیا تھا۔ Fr.19.6 (4.3 g) کو سیلیکا جیل (CHCl3/MeOH، 30:1) کے کالم پر 5 فریکشن (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5) دینے کے لیے الگ کیا گیا تھا۔ Fr.19.6.1 (1.2 جی) کو سیلیکا جیل کالم (CHCl3/MeOH، 30:1) کا نشانہ بنایا گیا تھا اور HPLC (MeOH/H2O، 45:55) کے ذریعے صاف کرنے کے بعد، 1 (15 ملی گرام) فراہم کیا گیا تھا۔ Fr.19.6.3 (540 mg) Sephadex LH-20 کالم کے ایک کالم پر لاگو کیا گیا تھا جس میں MeOH/H2O (90:10) کے ساتھ شامل کیا گیا تھا، اور پھر سیمی پریپریریٹو HPLC (MeOH/H2O، 45:55) سے مزید پاک کیا گیا تھا۔ 2 (6 ملی گرام) اور 6 (5 ملی گرام) پیش کرنا۔ Fr.20 (12 g) کو MCI جیل (MeOH/H2O, 30:70–100:0) کرومیٹوگرافک قدم پر لاگو کیا گیا تھا اور پھر اسے 14 (21) دینے کے لیے سیلیکا جیل CC (CHCl3/MeOH، 30:1) کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ ملی گرام)۔3 D 26 - 3.72 (c 0.51, MeOH)؛ UV (MeOH) λmax (log ε) 203 (4.53), 225 (4.17), 280 (3.66) nm; IR (KBr) νmax 3426, 1727, 1516, 829 cm−1; 1 H اور 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 دیکھیں؛ ESIMS m/z 389 [M−H]−, HRESIMS m/z 389.1602 [M−H]− (calcd. for C21H25O7, 389.1606)۔
(R)-4,5,4′-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2): سفید بے ساختہ پاؤڈر؛ D 26 –12.46 (c 1.07, MeOH)؛ UV (MeOH) λmax (log ε) 204 (4.59)، 286 (3.75) nm؛ IR (KBr) νmax 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm−1; 1 H اور 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 دیکھیں؛ ESIMS m/z 319 [M−H]−, HRESIMS m/z 319.1180 [M−H]− (calcd. for C17H19O6، 319.1187)۔
(2S)-5,7,3ʹ-Trihydroxy-6,4,5-trimethoxyfavone (3): پیلا بے رنگ پاؤڈر؛ [ ]D 26 – 46.64 (c 0.46, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 206 (4.70), 294 (4.17) nm؛ IR (KBr) νmax 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm−1; 1 H اور 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 دیکھیں؛ ESIMS m/z 331 [M−H]−, HRESIMS m/z 331.0819 [M−H]− (calcd. for C17H15O7, 331.0823)۔
3.4 DPPH ریڈیکل اسکیوینگنگ ایکٹیویٹی پرکھ
مفت ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی پرکھ کچھ ترمیم کے ساتھ پچھلے طریقہ [36] کے مطابق کی گئی تھی۔ مختصراً، 30 μL نمونے (1000 ug/mL، ایتھنول میں تحلیل شدہ) اور Trolox (1 mM) کو 270 μL DPPH محلول (100 μM، میں تحلیل کیا گیا میتھانول)، بالترتیب۔ یہ رد عمل 1 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر 96- کنویں کی مائکروپلیٹ پر جاری رہا۔ اس کے بعد جاذبیت کو 515 nm پر پڑھا گیا اور درج ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے کل ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کا فیصد شمار کیا گیا: روکنا فیصد =[(A0− A1)/A0]×100 فیصد، جہاں A0 ہے جذب DPPH بغیر نمونوں کے (کنٹرول ری ایکشن) اور A1 نمونوں کے ساتھ DPPH کا جذب ہے۔ تمام ٹیسٹ سہ رخی میں کیے گئے تھے اور ٹرالوکس کو ایک مثبت کنٹرول ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔
3.5 مشروم ٹائروسینیز انحیبیٹری پرکھ
Tyrosinase سرگرمی کی روک تھام کا تعین spectrophotometrically طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا جو پہلے بیان کیا گیا تھا [36] کچھ ترمیم کے ساتھ۔ مختصراً، ٹیسٹ مرکبات کے مختلف ارتکاز کو 10 فیصد DMSO میں تیار کیا گیا تھا۔ ہر نمونہ محلول (20 μM) کو L-Dopa (1.25 mM) کے ساتھ ملایا گیا، اور 970 μL کے 0.05 mM سوڈیم فاسفیٹ بفر (PBS، پی ایچ 6.8) ٹیسٹ ٹیوب میں۔ رد عمل مشروم ٹائروسینیز (25 U/mL) شامل کرکے شروع کیا گیا تھا۔ رد عمل کا مرکب کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ مرکب میں ڈوپاکروم کی مقدار کا تعین 490 nm پر ہر کنویں کے جذب کی پیمائش سے کیا گیا تھا۔ کوجک ایسڈ کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ٹائروسینیز کی روک تھام کا فیصد درج ذیل مساوات کے مطابق شمار کیا گیا: فیصد روکنا=[(A0− A1)/A0] × 100 فیصد، جہاں A0 ٹیسٹ مرکبات کے بغیر ڈوپاکروم کا جذب ہے (کنٹرول ری ایکشن) اور A1 ٹیسٹ مرکبات کے ساتھ انکیوبیٹڈ ڈوپاکروم کا جذب ہے۔
3.6 HDFa Assay کے ذریعے کولیجن کی پیداوار
اعترافات اس منصوبے کو یونان کے صوبائی سائنس اور ٹیکنالوجی ڈیپارٹمنٹ (نمبر 2017ZF003-04، 2015HB093، اور 2019HA001) کے ذریعے مالی طور پر سپورٹ کیا گیا تھا۔ تمام اسپیکٹرا کی پیمائش کے لیے مصنفین ریاستی کلیدی لیبارٹری آف فائٹو کیمسٹری اینڈ پلانٹ ریسورسز، کنمنگ انسٹی ٹیوٹ آف باٹنی، چائنیز اکیڈمی آف سائنسز کے تجزیاتی گروپ کے عملے کے مشکور ہیں۔
اخلاقی معیارات کی تعمیل
رسائی کھولیں۔یہ مضمون Creative Commons انتساب 4 کی شرائط کے تحت تقسیم کیا گیا ہے۔{1}} بین الاقوامی لائسنس، جو کسی بھی میڈیم میں غیر محدود استعمال، تقسیم اور تولید کی اجازت دیتا ہے، بشرطیکہ آپ اصل مصنف (مصنفین) اور ماخذ کو مناسب کریڈٹ دیں۔ , Creative Commons لائسنس کا لنک فراہم کریں، اور نشاندہی کریں کہ آیا تبدیلیاں کی گئی ہیں۔
حوالہ جات
مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
