Phenylethanoid Glycosides: Phenethyl الکحل کے کل Glycosides کو الگ کرنے کا طریقہ اور Monoamine Oxidase-A پر اس کے روکنے والے اثرات

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com

الوسیا پولیسٹاچیا سے فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز کی تنہائی اور شناخت اور مونوامین آکسیڈیز-اے کے روکنے والوں کے طور پر اس کی سرگرمی

مصنفین

Ana Maria S. Pereira1, Camila C. Guimarães1, Sarazete IV Pereira1, Eduardo J. Crevelin2, Gustavo HT Pinto1, Lucas JF Morel1, Bianca W. Bertoni1, Suzelei C. França1, Silvia H. Taleb-Contini1

وابستگی

1 Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais, Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Ribeirão Preto, SP, Brazil

2 Departamento de Química, Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de

ساؤ پالو (USP)، Monte Alegre، Ribeirão Preto، SP، Brazil

کلیدی الفاظ:الوسیا پولیسٹاچیا، وربیناسی، اینٹی ڈپریسنٹ سرگرمی، فینی لیتھانوائڈز، مونوامین آکسیڈیز انحیبیٹرز، ایکٹیوسائیڈ

خلاصہ

Aloysia polystachya کو ارجنٹائن اور پیراگوئے کی مقامی آبادی ایک سکون آور اور antidepressant کے طور پر استعمال کرتی ہے، لیکن ان سرگرمیوں سے وابستہ مرکبات کا تعین نہیں کیا گیا ہے۔ ہم نے الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹومیٹری کے ذریعہ A. پولیسٹاچیا کے ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ کے اہم اجزاء کو الگ اور شناخت کیا ہے اور ایکٹیوسائیڈ، آئسو ایکٹیوسائیڈ، 6'-ایسٹیلیکٹیو سائیڈ، اور 4',4'''، 5، کی موجودگی کی تصدیق کی ہے۔ 5''-ٹیٹراہائیڈروکسی-6,6'',3''''-ٹرائیمتھوکسی-[C7– O–C7'']-بائفلاون بذریعہ NMR سپیکٹروسکوپی۔ ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ اور پیوریفائیڈ کی روک تھام کی سرگرمیاںphenylethanoid glycosidesmonoamine oxidase-A کے خلاف ایک معیاری فلورومیٹرک پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے اندازہ کیا گیا۔ ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ نے خوراک پر منحصر monoamine oxidase-A سرگرمی کو 9.2 µg/mL کے IC50 کے ساتھ روکا، جب کہ سلیکٹیو مونوامین آکسیڈیز انحیبیٹر کلورجی لائن نے 0.06 (µlg/mL) کے IC50 کی نمائش کی۔ 0.22 µM)۔ایکٹیوسائیڈmonoamine oxidase-A (IC50 ویلیو 5 µM) کا سب سے مضبوط روکنے والا تھا، جبکہ isoacteoside اور 6'-acetylacteoside نے 10 µM کے لگ بھگ IC50 قدریں ظاہر کیں۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ A. polystachya کے ہائیڈرو ایتھانولک نچوڑ سے phenylethanoids میں monoamine oxidase-A کے خلاف روکنے والی سرگرمی پائی گئی ہے۔ اس بات کا امکان ہے کہ ایکٹیوسائڈز کے عمل کا طریقہ کثیر اہدافی ہے، جس میں سوزش کے مالیکیولز کی کمی اور آکسیڈیشن کے رد عمل کو بے اثر کرنے کے ساتھ ساتھ مونوامین آکسیڈیز-اے کو روکنا شامل ہے۔

تعارف

ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن کی ایک حالیہ رپورٹ کے مطابق، 320 ملین سے زیادہ لوگ (دنیا کی آبادی کا 4.4 فیصد) ڈپریشن اور اضطراب کے عوارض کا شکار ہیں، ان ذہنی مسائل کے نتیجے میں سالانہ تقریباً 800 ہزار خودکشیاں ہوتی ہیں۔ . اگرچہ مصنوعی antidepressants کے ساتھ علاج

دستیاب ہے، بہت سے مریض ضمنی اثرات کا شکار ہوتے ہیں جیسے خشک منہ، قبض، چکر آنا، دھندلا پن، بھوک میں اضافہ، وزن میں اضافہ، بے خوابی، اور گردے کے مسائل [2]۔ اس وجہ سے، تکمیلی اور متبادل ادویات کے استعمال کے طریقے، بشمول فائٹو تھراپی، کئی قسم کے ذہنی امراض کے علاج میں استعمال کیے گئے ہیں [3]۔

Cistanche deserticola کے بہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

مختلف طبی اور طبی مطالعات نے عام اور مخصوص اضطراب کی خرابیوں کے علاج میں پودوں پر مبنی دوائیوں کے فوائد کی حمایت میں ثبوت فراہم کیے ہیں [4، 5]۔ خاص طور پر ارجنٹائن اور پیراگوئے میں پائی جانے والی ایک خوشبودار نوع الوسیا پولیسٹاچیا (گریسیب) مولڈنکے (وربیناسی) کی اضطرابی خصوصیات کی تحقیقات خاص طور پر دلچسپی کا باعث ہیں۔ ethnopharmacological مطالعہ کے مطابق، مقامی آبادی اس پودے کو استعمال کرتی ہے، جسے عام طور پر burrito کے نام سے جانا جاتا ہے، ایک ہاضمہ، سکون آور اور antidepressant ٹانک کے طور پر [6, 7]۔ اگرچہ A. polystachya سے hydroethanolic extracts کے anxiolytic اور antidepressant prop-parties کی تصدیق preclinical study [8-10] سے ہوئی ہے، لیکن ان سرگرمیوں سے وابستہ مرکبات کی شناخت کے مقصد سے کوئی فائٹو کیمیکل تحقیقات نہیں کی گئی ہیں۔

یہ پہلے بھی دکھایا گیا ہے کہ کچھ دواؤں کے پودوں کی اینٹی ڈپریسنٹ سرگرمیاں، مثال کے طور پر، Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) اور Peganum harmala L. (Nitrariaceae)، monoamine oxidase-A (MAO-A) کی روک تھام سے وابستہ ہیں۔ -13]۔ MAO خاندان مرکزی اور پردیی اعصابی نظاموں میں تقسیم کیا جاتا ہے اور ان انزائمز کا زیادہ اظہار monoamines کے آکسیڈیٹیو ڈیمینیشن کو فروغ دیتا ہے جس میں نیورو ٹرانسمیٹر سیروٹونن، نوریپینفرین اور ڈوپامائن کی سطح میں کمی آتی ہے، جس کے نتیجے میں نفسیاتی امراض شروع ہوتے ہیں۔ اس طرح کے ڈیمینیشن کے عمل سے ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ، آکسیجن فری ریڈیکلز اور الڈیہائیڈز جیسے مادے بھی پیدا ہوتے ہیں جو خلیوں کے آکسیڈیٹیو تناؤ کے لیے ذمہ دار ہوتے ہیں۔ MAOs دو بڑے آئسفارمز میں موجود ہیں جو تقسیم، سبسٹریٹ کی مخصوصیت، اور روکنے والوں کے لیے حساسیت کے حوالے سے مختلف ہیں۔ MAO-A isoform ڈپریشن اور اضطراب کے عوارض میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے، جبکہ MAO-B نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں میں ملوث ہے [13-17]۔

مندرجہ بالا کی روشنی میں، ہم نے قیاس کیا کہ A. polystachya کی anxiolytic اور antidepressant خصوصیات، کم از کم جزوی طور پر، MAO-A کے روکنے والوں کی موجودگی سے حاصل ہوتی ہیں۔ اس مفروضے کو جانچنے کے لیے، ہم نے A. polystachya کے پتوں سے hydro-ethanolic اقتباس میں موجود فعال اصولوں کی نشاندہی کی اور MAO-A کی سرگرمی پر خام نچوڑ کے اثرات اور اس سے الگ تھلگ اہم اجزاء کا جائزہ لیا۔

نتائج اور مباحثہ

A. پولیسٹاچیا کے پتوں سے ہائیڈرو ایتھانولک عرق الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹومیٹری (UPLC-MS) میں جمع کیا گیا تھا، اور اس طرح حاصل کیا گیا کرومیٹوگرام ▶تصویر میں پہلے سے خوشبو والا ہے۔ 1a نچوڑ کے اہم اجزاء کو کالم کرومیٹوگرافی اور ریورسڈ فیز ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (RP-HPLC) کے ذریعے صاف کیا گیا تھا، اور ان کی شناختایکٹیوسائیڈ(syn verbascoside)، isoacteoside، 6'-acetylacteoside، اور 4',4'''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''-trimethoxy-[C7–O– ان کے 1H- اور 13C-NMR، HSQC، HMBC (▶ٹیبل 1S، 2S، معاون معلومات)، اور MS ڈیٹا (▶تصویر 1b-e) کے ادب میں رپورٹ کردہ اقدار کے ساتھ موازنہ کرتے ہوئے C7''] -بائفلاون -20]۔ کا ارتکازایکٹیوسائیڈہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ میں، جیسا کہ HPLC کے ذریعہ طے کیا گیا ہے، خشک عرق کا 108.65 ± 1.3 µg/mg تھا۔ یہ A. پولیسٹاچیا سے پتیوں کے نچوڑ کے اجزاء کے پہلے ریکارڈ کی نمائندگی کرتا ہے، حالانکہ پودے کے ضروری تیل کا پہلے تجزیہ کیا جا چکا ہے اور اس میں مونوٹرپینز کارون اور لیمونین بڑے اجزاء کے طور پر پائے جاتے ہیں [21]۔

A. پولیسٹاچیا کے پتوں سے خام ہائیڈرو ایتھانولک نچوڑ نے MAO-A کی سرگرمی کو خوراک پر منحصر انداز میں روکا (▶تصویر 2a) IC50 کے 9.2 µg/mL کے ساتھ، جبکہ منتخب MAO روکنے والے کلورجی لائن نے IC5 کی نمائش کی۔ 0 از 0.06 µg/mL (0.22 µM)۔ پاک کرنے والاایکٹیوسائیڈزMAO-A (▶تصویر 2b) کے خلاف روک تھام کی سرگرمیوں کی بھی نمائش کی، جس میں ایکٹیوسائیڈ 5 µM (3.1 µg/mL) کی سب سے کم IC50 ویلیو پیش کرتا ہے اور اس کے بعد 10.1 µM (6.3 µg/mL) کے IC50 کے ساتھ ایکٹیوسائیڈ اور 9.5 µM (6.3 µg/mL) کے IC50 کے ساتھ acetylacteoside۔ MAO-A کی روک تھام سیروٹونن، نوریپائنفرین، ڈوپامائن اور ٹائرامین کی سطحوں کو دوبارہ قائم کرنے کا باعث بنتی ہے، جو کہ اضطراب اور افسردگی کے کنٹرول میں کلیدی نیورو ٹرانسمیٹر ہیں [16]۔ اس طرح، A. پولیسٹاچیا کے پتوں میں متنوع MAO-A روکنے والوں کی موجودگی، کم از کم جزوی طور پر، پرجاتیوں [8-10] کی پہلے سے اطلاع دی گئی اینٹی ڈپریسنٹ اور اینزیولوٹک سرگرمی کی وضاحت کرتی ہے۔

کثیر اجزاء والے پودوں کے مرکب کا استعمال پیچیدہ ایٹولوجی کی بیماریوں جیسے کہ بے چینی، ڈپریشن اور دیگر اعصابی حالات کے علاج میں فائدہ مند ہو سکتا ہے۔ فی الحال، اعصابی نظام کو متاثر کرنے والی بیماریوں کے علاج میں فائٹو میڈیسن کا استعمال ملٹی ٹارگٹ ڈائریکٹڈ ligands کے نمونے پر مبنی ہے،

یعنی، دواسازی جن میں کثیر اہداف کی سرگرمیاں ہوتی ہیں جن کے نتیجے میں مادوں کی موجودگی کا نتیجہ ہوتا ہے جیسے کہ پولی فینولکس اینٹی سوزش، اینٹی آکسیڈینٹ، اور MAO روکنے والی خصوصیات جو نیورو پروٹیکشن [20، 22-25] دینے کی صلاحیت رکھتی ہیں۔

تاہم، یہ بات قابل غور ہے کہ پولی فینولک مادوں کا قطبی کردار ان کے سالماتی اہداف کے ساتھ تعامل میں رکاوٹ بن سکتا ہے۔ اس کے باوجود، طبی مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ نچوڑ میں موجود پولی فینولک اور غیر قطبی ثانوی میٹابولائٹس کے درمیان رابطہ خلیے کی جھلیوں کی پارگمیتا کو تبدیل کر سکتا ہے اور قطبی مرکبات کے اخراج کو آسان بنا سکتا ہے [23]۔ اس طرح، پیچیدہ پودوں کے نچوڑ جن میں ملٹی ٹارگٹ ایجنٹ ہوتے ہیں جو اپنے ریسیپٹرز کے ساتھ پیلیوٹروپک انداز میں تعامل کرتے ہیں، ایک فارماسولوجیکل ہم آہنگی پیدا کرتے ہیں جو متعدد عملوں کو متاثر کرتا ہے، بشمول خلیے کی جھلیوں میں قطبی میٹابولائٹس کی نقل و حرکت۔ اس تناظر میں، لی وغیرہ۔ [26] اس کو ظاہر کرنے کے لیے زیبرا فش ماڈل استعمال کیا۔ایکٹیوسائیڈخون دماغی رکاوٹ کو گھس سکتا ہے، اور تجویز پیش کی کہ phenylethanoid glycoside پارکنسنز کی بیماری میں ممکنہ علاج کا اثر ڈال سکتی ہے۔

Monoaminergic neurotransmitters جدید اینٹی ڈپریسنٹس کا بنیادی ہدف ہیں کیونکہ ان کی کمی ڈپریشن کی کمزور علامات کے لیے ذمہ دار ہے۔ Vivo میں ایک حالیہ مطالعہ نے یہ ظاہر کیا ہے کہ Lippia citriodora (Verbenaceae) کے ایتھانولک اور آبی نچوڑ اور ان کا بنیادی جزوایکٹیوسائیڈاضطرابی، ہپنوٹک، اور پٹھوں میں آرام دہ اثرات کی نمائش کی اور ان خصوصیات کو جزوی طور پر، قسم A گاما-امینوبٹیرک ایسڈ (GABAA) رسیپٹر [27] کے ساتھ تعامل سے منسوب کیا گیا۔

طبی مطالعات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ سوزش والی سائٹوکائنز کو روکنے کی صلاحیت رکھنے والی ادویات، جیسے TNF-، یا سوزش کے سگنلنگ پاتھ وے کے دیگر اجزاء، مثال کے طور پر، cyclooxygenase-2 (COX-2)، کو کم کرنے میں موثر ہیں۔ ریمیٹائڈ گٹھائی، چنبل، اور کینسر کے ساتھ ساتھ بڑے نفسیاتی عوارض میں مبتلا مریضوں میں افسردگی کی علامات [28]۔ اس تناظر میں بتایا گیا ہے کہ ۔ایکٹیوسائیڈاشتعال انگیز مالیکیولز کی پیداوار اور اخراج کو کم کر سکتا ہے، جیسے نائٹرک آکسائیڈ (NO)، TNF-، اور interleukin 12 (IL-12) lipopolysaccharide/interferon-gamma (LPS/IFN-) - محرک میکروفیجز [29] ، نیز RBL-2H3 مستول خلیات میں ہسٹامین اور آرکیڈونک ایسڈ [30]۔ اس کے علاوہ،ایکٹیوسائیڈTNF-، IL-1، IL-8، IL-6، اور NO کی سطح کو کم کرنے کے قابل ہے، اور کیسپیس-1، جوہری عنصر-کپا-B کو چالو کرنے کے قابل ہے۔

(NF-κB)، TH-1 خلیات اور میکروفیجز [32] میں IL-32 اور/یا LPS کے ذریعہ NO سنتھیس اور ایکٹیویٹر پروٹین-1 [31]۔

ان میں سے کچھ سوزش کے ثالث، جیسے IFNs، IL-6، IL-8، اور IL-1، افسردہ افراد کے پردیی اور پوسٹ مارٹم ٹشو کے نمونوں میں غیر معمولی سطح پر پائے گئے ہیں۔ ، اور ڈپریشن کی علامات سے متعلق ہیں [33]۔ نفسیاتی تناؤ کے ذریعہ ان مالیکیولز کا فعال ہونا دماغ میں اہم فعال تبدیلیوں کو فروغ دے سکتا ہے، جس کے نتیجے میں افسردہ رویے اور دیگر نفسیاتی عوارض پیدا ہوتے ہیں۔ IFNs، IL-1، اور TNF-، مثال کے طور پر، serotonin، noradrenaline، اور dopamine ریسیپٹر پمپ کے اظہار اور افعال کو بڑھا سکتے ہیں، اس طرح Synaptic cleft میں ان نیورو ٹرانسمیٹر کی دستیابی کو کم کر سکتے ہیں [28]۔ اس کے علاوہ، IFN-، IL-6، TNF-، اور آکسیڈیٹیو تناؤ انڈولیمائن 2,3 ڈائی آکسیجنز (IDO) کو چالو کر سکتے ہیں، جو ایک انزائم ہے جو ٹرپٹوفن کے انحطاط کے لیے ذمہ دار ہے اور اس طرح، اس کے بنیادی پیشرو کی حراستی کو کم کرتا ہے۔ سیروٹونن کی ترکیب [34]۔

ایکٹیوسائیڈ، isoacteoside، اور 6'-acetylacteoside میں hydroxy-phenylethyl اور caffeoyl moieties ہوتے ہیں جو کہ اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات سے وابستہ ہیں [35, 36]، اور ایکٹیوسائیڈ خود کافی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے [37]۔ مطالعات نے یہ دکھایا ہے۔ایکٹیوسائیڈخوراک پر منحصر انداز میں -amyloid پیپٹائڈ (A) کے جمع کو روکتا ہے، نیورو پروٹیکٹو ایجنٹ کے طور پر کام کرتا ہے، اور یادداشت کو بڑھاتا ہے، اور ان خصوصیات کو ایجنٹ کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی سے منسوب کیا گیا ہے [38، 39]۔ اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کے ساتھ متعدد فینولک سے بھرپور پرجاتیوں کو اعصابی عوارض کے علاج میں استعمال کیا جاتا ہے [15]، یہ تجویز کیا گیا ہے کہ اینٹی ڈپریسنٹ اور اضطرابی اثراتphenylethanoid glycosidesA. polystachya سے الگ تھلگ ان کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کا نتیجہ بھی ہو سکتا ہے۔ اس قیاس کی تائید Xu et al نے کی۔ [40]، جنہوں نے بڑھتے ہوئے آکسیڈیٹیو تناؤ اور ڈپریشن/اضطراب کے درمیان تعلق سے متعلق ثبوت پیش کیا۔

مندرجہ بالا کی بنیاد پر، ہم یہ نتیجہ اخذ کرتے ہیں کہ A. پولیسٹاچیا کے پتوں کے ہائیڈرو ایتھانولک نچوڑ کی اینٹی ڈپریسنٹ خصوصیات، اور اس سے الگ تھلگ پیوریفائیڈ فینی لیتھانائڈز کی، MAO-A کی روک تھام پر مشتمل عمل کے کثیر اہداف کے طریقوں سے وضاحت کی جا سکتی ہے۔ اشتعال انگیز مالیکیولز، اور آکسیکرن رد عمل کو بے اثر کرنا۔ اس لیے، یہاں پیش کیے گئے نتائج ہمارے اصل مفروضے کی تائید کرتے ہیں کہ A. پولیسٹاچیا کے ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ کی اضطرابی اور اینٹی ڈپریسنٹ سرگرمیاں، کم از کم جزوی طور پر، MAO-A کی روک تھام کا نتیجہ ہوتی ہیں۔ تاہم، ساخت اور سرگرمی کا رشتہphenylethanoid glycosidesاس مطالعے میں شناخت کی گئی مزید توجہ کی ضرورت ہے تاکہ مخصوص اعصابی عوارض کے علاج کے لیے نئے مالیکیولز کو ڈیزائن کیا جا سکے۔

مواد اور طریقے

پلانٹ مواد

A. polystachya کی پتیوں کی کاشت جنوری 2016 میں Farmácia da Natureza da Terra de Ismael (Jardinópolis, SP, Brazil) میں کی گئی تھی۔ پودوں کے مواد کی شناخت ڈاکٹر لوسیا Rossi (Instituto Botânico, São Paulo, SP, Brazil) نے کی تھی۔ اور واؤچر کا نمونہ UNAERP کے ہربیریم آف میڈیسنل پلانٹس میں واؤچر نمبر کے ساتھ جمع کیا گیا تھا۔

HPM-1213۔

HPM-1213۔ برازیلی پودوں کے نچوڑوں کی حیاتیاتی سرگرمیوں کا جائزہ لینے کی اجازت Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis ​​(نمبر 02001.005074/ 2011-19) نے دی تھی۔

Aloysia polystachya کے hydroethanolic عرق کی تیاری

پتے (1000 گرام) کو 45 ڈگری پر گردش کرنے والے ہوا کے تندور میں 72 گھنٹے کے لیے خشک کیا جاتا تھا، pulverized کیا جاتا تھا، اور ایک 40-جالی کی چھلنی سے گزارا جاتا تھا۔ پاؤڈر شدہ مواد کو پانی میں ڈالا گیا تھا: ایتھنول (20:80؛ v/v) 7 دنوں کے لیے اور اس کے بعد واٹ مین نمبر 41 فلٹر پیپر کے ذریعے فلٹر کیا گیا۔ فلٹریٹ کو روٹری ایوپوریٹر پر خشکی تک کم کر دیا گیا اور پیداوار کے لیے لائوفائلائز کر دیا گیا۔

130.2 جی خشک خام عرق، جس کے نتیجے میں منشیات کے عرق کا تناسب 7.6:1 ہے۔

الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-ماس سپیکٹرومیٹری کے ذریعے اجزاء کی علیحدگی اور شناخت

کرومیٹوگرافک تجزیے واٹرس ایکویٹی UPLC H-Class سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے جو ایک diode array detector (DAD) سے لیس ہے اور ایک Waters Xevo TQ-S ٹینڈم کواڈروپول ماس سپیکٹرومیٹر کے ساتھ Z-spray سورس منفی آئن موڈ میں کام کرتا ہے۔ سٹاک سلوشنز جس میں 1۔{4}} mg/mL اقتباس یا معیارات ہوں۔ایکٹیوسائیڈ, isoacteoside, 6'-acetylacteoside, and 4',4''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''- trimethoxy-[C7–O–C7''] -ایل سی گریڈ میتھانول میں فلاوون کو الگ سے پہلے سے تیار کیا گیا تھا، جب ضروری ہو تو ہر ایک کو 30 منٹ کے لیے سونیکیشن کے ساتھ، اور 0.45 μm ملی پور فلٹرز (مرک ملی پور) کے ذریعے فلٹر کیا گیا تھا۔ محلولوں کو میتھانول کے ساتھ 10 µg/mL تک پتلا کیا گیا، اور aliquots (5 μL) کو سگما-Aldrich Ascentis Express C18 کالم (100 × 4.6 mm id; 2.7 µm ذرہ سائز)۔ موبائل فیز پانی پر مشتمل تھا جس میں 0.1 فیصد فارمک ایسڈ (سالوینٹ اے) اور میتھانول 0.1 فیصد فارمک ایسڈ (سالوینٹ بی) پر مشتمل ہوتا ہے جو ایلیوشن پروفائل کے مطابق 0.5 ملی لیٹر/منٹ کی بہاؤ کی شرح پر فراہم کیا جاتا ہے: آئسکریٹک 0 اور 0 کے درمیان 3 فیصد B کے ساتھ۔ 4 منٹ، اس کے بعد 4 اور 19 منٹ کے درمیان 3 سے 60 فیصد B تک لکیری میلان اور 19 اور 23 منٹ کے درمیان 60 سے 90 فیصد B تک، اور آخر میں 23 اور 28 منٹ کے درمیان 3 فیصد B پر واپس آ گئے۔ DAD کی طرف سے 210 سے 720 nm کی رینج میں اور MS کے ذریعے اخراج کی نگرانی کی گئی تھی اور آپریٹنگ پیرامیٹرز حسب ذیل ہیں: کیپلیری وولٹ-

عمر 2.50 kV، Z-spray سورس کا درجہ حرارت 150 ڈگری، ڈیسولویشن ٹمپریچر (N2) 350 ڈگری، ڈیسولویشن گیس فلو 600 L/h، اور مکمل اسکین موڈ میں m/z 150 سے 600 کی ماس رینج۔

شناخت شدہ اجزاء کی صفائی

خام ہائیڈرو ایتھانولک نچوڑ (10 جی) پانی میں تحلیل کیا گیا تھا: ایتھنول (50:50؛ v/v) اور ہیکسین، ایتھائل ایسیٹیٹ، اور این-بوتانول کے خلاف لگاتار تقسیم کیا گیا۔ بٹانول فریکشن کو روٹری ایوپوریٹر پر مرتکز کیا گیا تھا اور فریکشن شدہ ایکسٹریکٹ کا 3 جی نمونہ شیشے کے کالم (10 × 3 سینٹی میٹر od) پر لگایا گیا تھا جس میں C-18 RP سلکا جیل (230-400 میش؛ سگما) بھرا ہوا تھا۔ -الڈرچ) اور پانی کے ساتھ ایلوٹڈ، اس کے بعد پانی کے یکے بعد دیگرے مرکب: میتھانول (90:10، 50:50، اور 10:90؛ v/v)۔ پانی کے ساتھ اخراج کے ذریعے حاصل کیا گیا ذیلی حصہ: میتھانول (90:10؛ v/v) کو RP-HPLC نے Shimadzu LC-20AP سسٹم کے ساتھ ایک SPD-20UV/Vis ڈیٹیکٹر کا استعمال کرتے ہوئے مزید صاف کیا اور Phenomenex Luna® C-18 کالم (250 × 10 ملی میٹر id؛ 5 μm پارٹیکل سائز) سے لیس ہے۔ موبائل مرحلہ پانی کا تھا: میتھانول 90:10 (v/v) سے شروع ہوتا ہے اور 100 منٹ میں 30:70 (v/v) میں تبدیل ہوتا ہے تاکہ چار معلوم مرکبات حاصل کیے جاسکیں۔ایکٹیوسائیڈ(750 mg)، isoacteoside (430 mg)، 6'-acetylacteoside (42 mg)، اور 4',4''',5,5''-tetradroxy-6,6'',3''' trimethoxy-[C7–O–C7'']-فلاوون (13 ملی گرام)۔ موبائل فیز کی بہاؤ کی شرح 1 mL/min تھی، انجیکشن کا حجم 500 μL تھا، کرومیٹوگرام 340 nm پر ریکارڈ کیا گیا تھا، اور UV سپیکٹرا 240 سے 400 nm کی حد میں حاصل کیا گیا تھا۔ پیوریفائیڈ اجزاء کی شناخت کی تصدیق ان کے 1H- (500 MHz) اور 13C-NMR (125 MHz) سپیکٹرا سے کی گئی تھی جو بروکر ماڈل DPX 500 سپیکٹرو میٹر پر ریکارڈ کی گئی تھی، اور لٹریچر میں دستیاب اعداد و شمار کے ساتھ موازنہ [18, 19, 41]۔ الگ تھلگ مرکبات کی پاکیزگی کی تصدیق UPLC-DAD-MS (▶Fig. 1b–d) اور NMR (▶Fig. S1–S12، معاون معلومات) کے ذریعے کی گئی۔

ایک HPLC- diode سرنی کے ذریعہ ایکٹیوسائڈ کی مقدارپکڑنے والا

اس حل کا تجزیہ Shimadzu LC پر کیا گیا تھا id، 5 µm) Phenomenex C18 precolumn (4.0 × 3.0 mm id، 5 µm) کے ذریعے محفوظ ہے۔ علیحدگی کمرے کے درجہ حرارت (22 ± 1 ڈگری) پر ایک موبائل مرحلے کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی جس میں پانی (سالوینٹ A) اور میتھانول (سالوینٹ بی) میں ایسٹک ایسڈ 0.1 فیصد شامل تھا۔

JT Baker HPLC گریڈ) 1 کی مستقل بہاؤ کی شرح پر فراہم کی گئی ہے۔ 32 اور 35 منٹ کے درمیان فیصد B، اور 35 اور 40 منٹ کے درمیان 10 فیصد B کے ساتھ ایک حتمی آئسوکریٹک اخراج۔ پتہ لگانے کی طول موج 330 nm پر رکھی گئی تھی۔

نچوڑ میں ایکٹیوسائڈ کے مواد کا استعمال کرتے ہوئے اندازہ لگایا گیا تھا۔ایکٹیوسائیڈ(Sigma-Aldrich؛ CAS نمبر 61276-17-3) بیرونی معیار کے طور پر۔ حوالہ معیار کے 500، 250، 125، 62.5، 31.2، اور 15.6 ug/mL پر مشتمل حل تیار کیے گئے تھے، اور انشانکن منحنی خطوط ہر حل کو سہ رخی میں HPLC تجزیہ سے مشروط کر کے بنائے گئے تھے [42 ] معیاری ایکٹیوسائیڈ کے چوٹی کے رقبے کا تناسب تجزیہ کار کے متعلقہ ارتکاز کے ساتھ معیاری منحنی خطوط (▶تصویر S13، معاون معلومات) کے لکیری رجعت کے ذریعے قائم کیا گیا تھا۔ Agencia Nacional de Vigilância Sanitária [42] کی طرف سے جاری کردہ رہنما خطوط کے مطابق تجزیاتی ڈیٹا کی توثیق خطی، درستگی اور درستگی کے حوالے سے کی گئی۔ ایکٹیوسائیڈ کی کھوج کی حدود (LoD) اور مقدار (LoQ) بالترتیب 0.30 اور 0.92 µg/mL تھیں۔

Monoamine oxidase-A روکنا اسیس

Recombinant انسانی MAO-A، tyramine، clorgyline، vanillic acid، 4-amino antipyrine، اور horseradish peroxidase Sigma-Aldrich سے خریدے گئے تھے۔ لوپیز ایٹ ال کے بیان کردہ طریقہ کار کے ترمیم شدہ ورژن کے بعد MAO-A کی روک تھام کی جانچ 96-اچھی پلیٹوں کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔ [43]۔ ہر کنویں پر 50 μL کروموجینک محلول (0.8 mM وینیلک ایسڈ، 2.5 mM 4-امائنو اینٹی پائرین، اور pH 7.6 پر فاسفیٹ بفر میں 4 U/mL ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز)، 100 μL33 mM tyramine، اور خام ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ کا ایک 50-μL ایلی کوٹ یا میتھانول میں تحلیل شدہ پیوریفائیڈ فینی لیتھانوائڈز میں سے ایک۔ آخر میں، 8 U/mL MAO-A کے 50 μL ایلی کوٹس کو ہر ایک کنویں میں شامل کیا گیا اور پلیٹ کو 30 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا، اس دوران مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ہر 5 منٹ میں جذب کو ریکارڈ کیا گیا۔ کلورجی لائن (97 فیصد GC سے زیادہ یا اس کے برابر؛ سگما-الڈرچ) اور میتھانول کو بالترتیب مثبت اور منفی کنٹرول کے طور پر، ہر پرکھ کی پلیٹ پر شامل کیا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

MAO-A روکنے والی سرگرمیوں کے تین آزاد تجزیے کیے گئے اور گراف پیڈ پرزم سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کردہ ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ ہائیڈرو ایتھانولک ایکسٹریکٹ کی IC50 قدریں، پیوریفائیڈ فینی لیتھانائڈز، اور مثبت کنٹرول کا حساب نان لائنر ریگریشن کے ذریعے لگایا گیا، لاگ کے پلاٹوں (انحیبیٹر ارتکاز) بمقابلہ نارملائزڈ فیصد انحبیشن۔

امدادی معلومات

H- اور 13C-NMR سپیکٹرا کاایکٹیوسائیڈ, isoacteoside, 6'-acetylacteoside, and 4',4''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''-trimethoxy-[C7–O–C7''] تین فینی لیتھانائڈز کے لیے فلاوون اور HSQC/HMBC ارتباط کے تجزیے معاون معلومات کے طور پر دستیاب ہیں۔

04.06.2018 کو موصول ہوا۔

نظر ثانی شدہ 19.10.2018

24.10.2018 کو قبول کیا گیا۔

کتابیات

DOI https://doi.org/10.1055/a-0787-1665

پلانٹا میڈ انٹ اوپن 2019؛ 6: e1–e6

© Georg Thiem Verlag KG Stuttgart · New York ISSN 2509-9264

خط و کتابت

اینا ماریا ایس پریرا

Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais

Universidade de Ribeirão Preto Av. Costábile Romano 2201 14096-900 Ribeirânia

Ribeirão Preto، SP

برازیل

حوالہ جات

[1] عالمی ادارہ صحت۔ ڈپریشن اور دیگر عام دماغی عوارض: عالمی صحت کا تخمینہ۔ جنیوا: ڈبلیو ایچ او 2017

[2] فرگوسن جے ایم۔ SSRI اینٹی ڈپریسنٹ دوائیں: منفی اثرات اور رواداری۔ پرائم کیئر کمپینین جے کلین سائیکاٹری 2001؛ 3: 22-27

[3] وین ڈیر واٹ جی، لاؤگرن جے، جانکا اے۔ اضطراب اور افسردگی کے علاج میں تکمیلی اور متبادل دوا۔ کرر اوپین سائیکاٹری 2008؛ 21:37–42

[4] سارس جے، میکانٹائر ای، کیمفیلڈ ڈی اے۔ اضطراب کے عوارض کے لیے پودوں پر مبنی ادویات، حصہ 1: طبی مطالعات کا جائزہ۔ CNS منشیات 2013؛ 27: 207–219

[5] سارس جے، میکانٹائر ای، کیمفیلڈ ڈی اے۔ اضطراب کے عوارض کے لیے پلانٹ پر مبنی دوائیں، حصہ 2: کلینکل اسٹڈیز کا ایک جائزہ جس میں طبی ثبوت کی حمایت کرتے ہیں۔ CNS منشیات 2013؛ 27: 301–319

[6] Del Vitto LA، Petenatti EM، Petenatti ME. Recursos herbolarios de San Luis (República Argentina)۔ پرائمرا پارٹ: پلانٹاس ناٹیواس۔ Multequina 1997; 6: 49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito"، Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben-aceae)، cultivado en Paraguay. روزاسیانہ 2014; 13: 31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellión-Ibarrola MC. چوہوں میں الوسیا پولیسٹاچیا سے ہائیڈرو الکوحل کے عرق کے اینکسیولائٹک اور اینٹی ڈپریسنٹ جیسے اثرات۔ فارماکول بائیو کیم سلوک 2005؛ 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. The anxiolytic-like effects of Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) چوہوں میں۔ J Ethnopharma-col 2006; 105: 400–408

[10] Hellion-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J, De Lima TCM, Mora S. Aloysia polystachya (Griseb) کے اینٹی ڈپریسنٹ جیسے اثرات۔ ) Moldenke (Verbenaceae) چوہوں میں۔ Phytomedicine 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H. - Peganum harmala میں Carboline alkaloids and inhibition of human monoamine oxidase (MAO). فوڈ کیم ٹاکسیکول 2010؛ 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Peganum harmala میں quinazoline alkaloids کی شناخت، موجودگی اور سرگرمی۔ فوڈ کیم ٹاکسیکول 2017؛ 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Monoamine oxidase-A روکنا اور ممکنہ اینٹی ڈپریسنٹ کارروائیوں کے ساتھ پودوں کے نچوڑ میں متعلقہ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔ Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394 ۔

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. سلیکٹیو MAO-B inhibitors: قدرتی مصنوعات سے ایک سبق۔ Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. اضطراب اور افسردگی کا علاج: ماضی میں دواؤں کے پودے۔ Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. منشیات کا تعلق مونوامین آکسیڈیز کی سرگرمی سے ہے۔ Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. Type A monoamine oxidase اور serotonin ہم آہنگی سے افسردگی کے عوارض میں شامل ہیں: نیورو ٹرانسمیٹر کے عدم توازن سے لے کر کمزور نیوروجنسیس تک۔ جے نیورل ٹرانسم 2017; 125: 53–66